RU2561673C2 - Способы и композиции для вакцинации домашней птицы - Google Patents
Способы и композиции для вакцинации домашней птицы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2561673C2 RU2561673C2 RU2010136629/15A RU2010136629A RU2561673C2 RU 2561673 C2 RU2561673 C2 RU 2561673C2 RU 2010136629/15 A RU2010136629/15 A RU 2010136629/15A RU 2010136629 A RU2010136629 A RU 2010136629A RU 2561673 C2 RU2561673 C2 RU 2561673C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- embryo
- ovo
- birds
- bird
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 208
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 134
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 title description 46
- 244000144977 poultry Species 0.000 title description 26
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract description 139
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 94
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 73
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 51
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 106
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 106
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 79
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 56
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 48
- 230000012447 hatching Effects 0.000 claims description 46
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 42
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 34
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 30
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 21
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 19
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 claims description 18
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 claims description 16
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 16
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 16
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 14
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 13
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 claims description 11
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 7
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 5
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 4
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 4
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims description 3
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 claims description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 169
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 157
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 100
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 79
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 78
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 75
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 70
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 70
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 66
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 63
- 101710124951 Phospholipase C Proteins 0.000 description 51
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 49
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 41
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 41
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 36
- 239000002776 alpha toxin Substances 0.000 description 34
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 34
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 34
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 34
- 101710092462 Alpha-hemolysin Proteins 0.000 description 33
- 101710197219 Alpha-toxin Proteins 0.000 description 33
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 32
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 31
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 29
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 28
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 28
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 24
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 20
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 20
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 19
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 18
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 18
- -1 Quil-A Chemical class 0.000 description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 16
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 15
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 14
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 13
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 13
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 12
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 12
- 244000309714 Clostridium perfringens type C Species 0.000 description 11
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 11
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 206010006811 Bursitis Diseases 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 10
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 9
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 9
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 9
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 8
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 description 8
- 208000006758 Marek Disease Diseases 0.000 description 8
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 8
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 8
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 8
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 description 8
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 7
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 7
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 7
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 7
- 239000002569 water oil cream Substances 0.000 description 7
- 241000186581 Clostridium novyi Species 0.000 description 6
- 108050004280 Epsilon toxin Proteins 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 6
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 6
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 6
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 6
- XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N Aspergillomarasmine A Chemical compound OC(=O)C(N)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 5
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 5
- 241000193466 Clostridium septicum Species 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 5
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 5
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 5
- 241001644525 Nastus productus Species 0.000 description 5
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 5
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 5
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 241001516406 Avian orthoreovirus Species 0.000 description 4
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 4
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 4
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 4
- 101710103914 Perfringolysin O Proteins 0.000 description 4
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 4
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 4
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 4
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 4
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 4
- 239000003970 toll like receptor agonist Substances 0.000 description 4
- 229940031572 toxoid vaccine Drugs 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 3
- 241000288049 Perdix perdix Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 description 3
- 210000001643 allantois Anatomy 0.000 description 3
- NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N almurtide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CO[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@@H](NC(C)=O)C=O NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N 0.000 description 3
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 3
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000003948 anatoxin Substances 0.000 description 3
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 3
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 3
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 3
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 244000144992 flock Species 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 3
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 229920002627 poly(phosphazenes) Chemical class 0.000 description 3
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 3
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical class [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 1-[(1r,6r)-9-azabicyclo[4.2.1]non-4-en-5-yl]ethanone Chemical compound CC(=O)C1=CCC[C@@H]2CC[C@H]1N2 SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 2
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 2
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 2
- 206010003573 Astroviral infections Diseases 0.000 description 2
- 241001519465 Avian metapneumovirus Species 0.000 description 2
- 208000003508 Botulism Diseases 0.000 description 2
- 206010007882 Cellulitis Diseases 0.000 description 2
- 208000037384 Clostridium Infections Diseases 0.000 description 2
- 241000206044 Clostridium chauvoei Species 0.000 description 2
- 241000186571 Clostridium fallax Species 0.000 description 2
- 241001140928 Clostridium sordelli Species 0.000 description 2
- 241000193470 Clostridium sporogenes Species 0.000 description 2
- 241000224483 Coccidia Species 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 241000186811 Erysipelothrix Species 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- 241000692870 Inachis io Species 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 2
- 108700015872 N-acetyl-nor-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- 241000272458 Numididae Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 2
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 2
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 2
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 2
- 101710084578 Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000272534 Struthio camelus Species 0.000 description 2
- 101710182223 Toxin B Proteins 0.000 description 2
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001509494 [Clostridium] colinum Species 0.000 description 2
- 241000193460 [Clostridium] piliforme Species 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 229920001586 anionic polysaccharide Chemical class 0.000 description 2
- 150000004836 anionic polysaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 241000701792 avian adenovirus Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 208000029182 enterotoxemia Diseases 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L magnesium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Mg+2] VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000347 magnesium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 229910001862 magnesium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 238000009374 poultry farming Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JDRAOGVAQOVDEB-KTKRTIGZSA-N (3-hydroxy-2,3,3a,5,6,6a-hexahydrofuro[3,2-b]furan-6-yl) (z)-octadec-9-enoate Chemical compound OC1COC2C(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC21 JDRAOGVAQOVDEB-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N (4R)-4-[[(2S,3R)-2-[acetyl-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-4-[(1R)-1-carboxyethoxy]-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound C(C)(=O)N([C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](CCC(=O)O)C(N)=O)C1[C@H](N)[C@@H](O[C@@H](C(=O)O)C)[C@H](O)[C@H](O1)CO YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N 0.000 description 1
- VDCRFBBZFHHYGT-IOSLPCCCSA-N 2-amino-9-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-enyl-3h-purine-6,8-dione Chemical compound O=C1N(CC=C)C=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VDCRFBBZFHHYGT-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 2-bromophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1Br VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001258 Adenoviral infections Diseases 0.000 description 1
- 208000010370 Adenoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010060931 Adenovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 241000224482 Apicomplexa Species 0.000 description 1
- 241000726096 Aratinga Species 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 108090000616 Atrolysin C Proteins 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 241000272834 Cairina moschata Species 0.000 description 1
- 208000035484 Cellulite Diseases 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 241000725585 Chicken anemia virus Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 108010081427 Clostridium perfringens alpha toxin Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000334119 Coturnix japonica Species 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- 241001464975 Cutibacterium granulosum Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000271559 Dromaiidae Species 0.000 description 1
- 241000271571 Dromaius novaehollandiae Species 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 208000030814 Eating disease Diseases 0.000 description 1
- 241000223932 Eimeria tenella Species 0.000 description 1
- 206010061126 Escherichia infection Diseases 0.000 description 1
- 208000019454 Feeding and Eating disease Diseases 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 1
- 206010017982 Gastrointestinal necrosis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000957351 Homo sapiens Myc-associated zinc finger protein Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000963974 Hydrophis stokesii Alpha-elapitoxin-Ast2b Proteins 0.000 description 1
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 description 1
- 241000702626 Infectious bursal disease virus Species 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 241000288147 Meleagris gallopavo Species 0.000 description 1
- 241000351643 Metapneumovirus Species 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 101100481584 Mus musculus Tlr1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100038750 Myc-associated zinc finger protein Human genes 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 101000964025 Naja naja Long neurotoxin 3 Proteins 0.000 description 1
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000193465 Paeniclostridium sordellii Species 0.000 description 1
- 206010049752 Peau d'orange Diseases 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 241000665182 Pezoporus occidentalis Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287531 Psittacidae Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000008104 Reoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000271567 Struthioniformes Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940124614 TLR 8 agonist Drugs 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010074506 Transfer Factor Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000011589 adenoviridae infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 244000309743 astrovirus Species 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 210000000746 body region Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000036232 cellulite Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 235000014632 disordered eating Nutrition 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000005686 eating Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 208000020612 escherichia coli infection Diseases 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N ketorolac tromethamine Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229950005634 loxoribine Drugs 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 229960005225 mifamurtide Drugs 0.000 description 1
- JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N mifamurtide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCCNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N 0.000 description 1
- 108700007621 mifamurtide Proteins 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 1
- 210000004237 neck muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003170 nutritional factors Nutrition 0.000 description 1
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 1
- 235000021400 peanut butter Nutrition 0.000 description 1
- 210000002976 pectoralis muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012913 prioritisation Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 229940044616 toll-like receptor 7 agonist Drugs 0.000 description 1
- 229940044655 toll-like receptor 9 agonist Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
- A61K39/17—Newcastle disease virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18111—Avulavirus, e.g. Newcastle disease virus
- C12N2760/18134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для защиты птиц от болезни Ньюкастла. Способ включает введение in ovo во время последней четверти периода инкубации эффективной иммунизирующей дозы иммуногенной композиции непосредственно в эмбрион. Использование изобретения позволяет усилить иммунный ответ за счет более эффективного пути введения. 21 з.п. ф-лы, 17 табл., 7 пр.
Description
Установление приоритета
В настоящей заявке согласно § 119(e)35 U.S.C. заявлен приоритет предварительной заявки No. 60/787567 от 30.03.2006, содержание которой полностью введено сюда ссылкой.
Область техники
В настоящем изобретении предлагаются композиции и способы получения иммунного ответа у птиц с помощью доставки иммунизирующей композиции in ovo непосредственно эмбриону птицы. В настоящем изобретении дополнительно предлагаются композиции и способы получения иммунного ответа на бактерии вида Clostridium у птиц для защиты птиц от инфекции бактериями Clostridium, и для защиты птиц от родственных нарушений, таких как некротический энтерит.
Уровень техники
In ovo вакцинация предлагает некоторые преимущества для птицеводства, охватывающие текущие способы контроля и возможность вакцинации птиц в период после выведения птицы из яйца, включая возможность для универсальной автоматизированной доставки вакцины; совместное введение с другими вакцинами in ovo, посредством чего уменьшается период выхаживания птиц в период после выведения птицы из яйца; и уменьшается использование антибиотиков.
Открытие того, что определенные вакцины (например, инактивированные или нереплицирующиеся вакцины) могут быть введены в тело эмбриона с получением сильного иммунного ответа (подобного тому или лучшего, какой ожидается при вакцинации птиц в день выведения птицы из яйца), дает возможность разработки автоматизированного устройства, которое может во время применения таких вакцин in ovo целенаправленно вводить их в тело эмбриона (специфично избегая амниотической жидкости, окружающей тело эмбриона). Кроме того, данные о том, что инактивированные вакцины являются предпочтительными для введения в тело эмбриона, дают возможность специалисту разрабатывать композиции вакцин, которые более совместимы с инъекцией в тело эмбриона. Перед этим открытием не было известно и не ожидалось, что введение инактивированной вакцины в тело эмбриона будет необходимым предпочтительным условием для получения сильного иммунного ответа.
Таким образом, настоящее изобретение представляет собой улучшение, охватывающее уровень техники по части предложения более эффективного пути введения инактивированных (убитых) вакцин in ovo. Перед этим изобретением не было указаний на то, что введение инактивированной вакцины в эмбриональную жидкость, окружающую тело эмбриона (амниотическая жидкость), имеет какое-то отличие от введения инактивированной вакцины в тело эмбриона. В настоящем изобретении продемонстрировано, что более правильной является введение инактивированных вакцин in ovo в тело эмбриона, а не в воды, окружающие тело эмбриона. Данные о том, что тело эмбриона является подходящей мишенью для оптимальной эффективности, дают возможность для разработки инактивированных вакцин и способов доставки путем in ovo. В изобретении охватывается введение иммуногенных композиций домашней птице и другим птицам.
Соответственно, настоящее изобретение охватывает технологическую необходимость улучшения иммуногенных композиций для введения in ovo эмбриону и способы индуцирования иммунного ответа у птиц для защиты птиц от инфекции и/или заражения птичьими и другими патогенами и для защиты птиц от родственных нарушений.
Инфекция бактериями Clostridium perfringens ассоциирована с несколькими заболеваниями домашней птицы, наиболее заметным из них является некротический энтерит (C. perfringens тип A и тип C), но также включает холангиогепатит, целлюлит, эрозии второго желудка и пупочные инфекции. Поскольку эти бактерии представляют компонент нормальной кишечной флоры, разнообразные факторы могут предрасполагать птиц к развитию заболевания. Такие факторы включают питание, имеющее высокий уровень рыбной муки, пшеницы, ячменя или ржи; очень влажную подстилку; или воздействие Coccidia. Клинические признаки заболевания, как правило, включают диарею, снижение аппетита, кишечные нарушения, депрессию и смертность. Традиционно эти заболевания контролируются с помощью добавления антибиотиков в корм; однако чрезмерное употребление антибиотиков ведет к развитию штаммов бактерий, устойчивых к антибиотикам, которые представляют существенный риск для здоровья людей и животных. Кроме того, при некоторых обстоятельствах применение антибиотиков является очень нежелательным или даже запрещенным.
Другие способы контроля бактерий Clostridium включают питание, которое избегает ингредиентов, которые раздражают кишечную слизистую оболочку, например соево-зерновой рацион; использование подстилки с низкой влажностью, имеющей абсорбирующий материал, такой как древесная стружка или рисовая шелуха; использование продукта конкурентного исключения для поддержания здорового баланса кишечной микрофлоры, например Прималак (Primalac) (Star-Labs/Forage Research, Inc., Clarksdale, MO)1 AVIGUARD(TM) (Bayer Corporation, Kansas City, MO), и BIO-MOS(R) (Alltech, Inc., Nicholasville, KY); и интенсивное превентивное окисление или дезинфекция воды для минимизации потерь во время периода заболевания. Вакцинацию использовали для контроля заболеваний, вызванных бактериями Clostridium у других видов, включающих крупный рогатый скот, овец, коз и свиней. Два главных типа вакцин против C. perfringens были разработаны для видов, отличных от видов домашней птицы: анатоксины (инактивированные токсины) и бактерин-анатоксины (инактивированные ["убитые"] бактериальные культуры и инактивированные токсины). Антитоксины (антитела, специфичные к токсину(ам)) также использовались для предотвращения и лечения заболеваний, вызванных бактериями Clostridium у видов, отличных от видов домашней птицы.
Поскольку заявители настоящего изобретения осознают, что ранее не было публикаций, описывающих in ovo введение (например, в яйцо, содержащее развивающийся птичий эмбрион) вакцины против C. perfringens. Применение существующих анатоксиновых или анатоксин-бактериновых вакцин in ovo является сомнительным, поскольку такие вакцины, как правило, требуют применения адъювантов, которые могут быть вредными для эмбриона, могут инактивировать живые вакцины против других организмов, которые обычно вводятся во время периода in ovo (например, при вакцинации против болезни Марека) и/или могут быть не совместимы с существующим оборудованием для инъекции in ovo. In ovo вакцинация предлагает некоторые преимущества для птицеводства, охватывающие текущие способы контроля и возможность вакцинации птиц в период после выведения птицы из яйца, включая возможность для универсальной автоматизированной доставки вакцины; совместное введение с другими вакцинами in ovo, посредством чего уменьшается период выхаживания птиц в период после выведения птицы из яйца; и уменьшается использование антибиотиков.
Соответственно, существует технологическая необходимость улучшения иммуногенных композиций и способов для индуцирования иммунного ответа против бактерий Clostridium у птиц для защиты птиц от инфекции Clostridium и для защиты птиц от родственных нарушений, таких как некротический энтерит.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В некоторых воплощениях в настоящем изобретении предлагается способ иммунизации птицы против патогена (например, птичьего патогена или не птичьего патогена, который переносит птица), причем способ включает введение in ovo во время последней четверти периода инкубации эффективной иммунизирующей дозы композиции, которая индуцирует иммунный ответ против патогена, где иммуногенная композиция вводится с помощью in ovo инъекции в тело эмбриона.
В дополнительных воплощениях изобретения композиция индуцирует иммунный ответ для лечения и/или предотвращения инфекции и/или заражения птицы, полученного в результате воздействия или контакта с патогенами, которые вызывают следующие не ограничивающие примеры заболеваний, инфекций и/или нарушений: кокцидиоза, болезни Марека, инфекционного бурсита, болезни Ньюкастла, инфекции птичьей оспы, инфекции бактериями вида Clostridium, птичьего гриппа, инфекционного бронхита, инфекции вируса куриной анемии, птичьего ларинготрахеита, инфекции птичьего метапневмовируса, инфекции птичьего реовируса, инфекции птичьего аденовируса, ротавирусной инфекции, астровирусной инфекции, инфекционной гепатомиелопоэтической болезни, синдрома снижения несучести, инфекции Escherichia coli, инфекции бактериями вида Mycoplasma, инфекции бактериями вида Salmonella, инфекции бактериями вида Campylobacter, инфекции бактериями вида Haemophilus, инфекции бактериями вида Listeria, инфекции бактериями вида Pasteurella и их комбинации.
В других дополнительных воплощениях изобретения композиция может включать, состоять по существу из и/или состоять из не репликативного агента, который индуцирует иммунный ответ против птичьего патогена и/или патогена, который вызывает пищевые расстройства, такие как инфекция бактериями видами Salmonella, инфекция бактериями видами Campylobacter, инфекция бактериями видами Listeria, инфекция Escherichia coli и т.д., которые известны из уровня техники.
Настоящее изобретение дополнительно включает способы, где эмбриону вводится in ovo эффективная иммунизирующая доза двух или более композиций, которые индуцируют иммунный ответ против птичьего патогена, где две или более композиций вводятся одновременно или последовательно в любом порядке.
Дополнительно здесь предлагаются способы, где эффективная иммунизирующая доза двух или более композиций, которые индуцируют иммунный ответ против птичьего патогена, вводится in ovo, и по меньшей мере одна композиция вводится эмбриону, где две или более композиций вводятся одновременно или последовательно в любом порядке.
В настоящем изобретении предлагаются способы индукции иммунного ответа против бактерий вида Clostridium (например, Clostridium perfringens) у птиц для защиты птиц от инфекции бактериями Clostridium и/или для защиты птиц от родственных нарушений, таких как некротический энтерит. Способы могут применяться in ovo и/или в период после выведения птицы из яйца. В настоящем изобретении дополнительно предлагаются иммуногенные композиции для индукции иммунного ответа против бактерий вида Clostridium у птиц для защиты птиц от инфекции Clostridium и/или для защиты птиц от родственных нарушений, таких как некротический энтерит.
Соответственно, в одном аспекте настоящего изобретения предлагается способ иммунизации птицы (например, цыпленка) против некротического энтерита, включающий введение in ovo (например, во время последней четверти периода инкубации) эффективной иммунизирующей дозы иммуногенной композиции, которая индуцирует иммунный ответ против бактерий Clostridium perfringens, где иммуногенная композиция вводится путем in ovo инъекции. В определенных воплощениях иммуногенная композиция вводится амниону или эмбриону. Способ необязательно может применяться в комбинации с другими режимами иммунизации (например, с вакцинацией против заболевания инфекционного бурсита, болезни Марека, болезни Ньюкастла и/или кокцидиоза) и/или с введением питания in ovo в виде композиции питательных веществ и/или кишечного модулятора.
В другом аспекте в изобретении предлагается иммуногенная композиция, включающая эффективную иммунизирующую дозу ослабленных бактерий вида Clostridium в фармацевтически приемлемом носителе. В определенных воплощениях иммуногенная композиция дополнительно включает адъювант, который может представлять собой, например, депо-адъювант. Характерные адъюванты по этому изобретению включают, но не ограничены ими, соль алюминия, такую как гель гидроксида алюминия (квасцы), фосфат алюминия или алганнмулин и/или также может представлять собой соль или минеральные гели кальция, магния, железа, и/или цинка, и/или может представлять собой нерастворимую суспензию ацилированного тирозина или ацилированных сахаров, катионных или анионных производных полисахаридов, или полифосфазены, и/или сапонины, такие как Quil-A, и/или эмульсии, такие как вода-масло и вода-масло-вода и/или неполный адъювант Фрейнда или адъювант может представлять собой любую их комбинацию. В характерных воплощениях иммуногенная композиция включает эмульсию вода-масло-вода. Необязательно иммуногенная композиция может дополнительно включать один или более дополнительных агентов, которые индуцируют иммунный ответ против других птичьих патогенов (например, агент, который индуцирует иммунный ответ против Eimeria, против вируса инфекционного бурсита, вируса болезни Марека и/или вируса болезни Ньюкастла), и/или композицию питательных веществ и/или кишечный модулятор. Один или более дополнительных агентов могут представлять собой иммунизирующие агенты, которые производят защитный иммунный ответ против Eimeria, вируса инфекционного бурсита, вируса болезни Марека и/или вируса болезни Ньюкастла.
В следующем аспекте в изобретении предлагается иммуногенная композиция, включающая в фармацевтически приемлемом носителе:
(a) эффективную иммунизирующую дозу анатоксина Clostridium, бактерина Clostridium, токсина Clostridium или любую их комбинацию; и
(b) эффективную иммунизирующую дозу вакцины против кокцидиоза, вакцины против болезни Марека, вакцины против инфекционного бурсита, вакцины против болезни Ньюкастла, вакцины против птичьей оспы или любую их комбинацию.
В изобретении также предлагается иммуногенная композиция, включающая в фармацевтически приемлемом носителе:
(a) эффективную иммунизирующую дозу анатоксина Clostridium, бактерина Clostridium, токсина Clostridium или любую их комбинацию; и
(b) масляную эмульсию.
Еще в одном аспекте в изобретении предлагается иммуногенная композиция, включающая в фармацевтически приемлемом носителе:
(a) эффективную иммунизирующую дозу анатоксина Clostridium, бактерина Clostridium, токсина Clostridium или любую их комбинацию; и
(b) адъювант, включающий производное алюминия, сапонин, масло или любую их комбинацию.
В следующих воплощениях в настоящем изобретении предлагается способ иммунизации птицы против инфекции видом Clostridium, включающий введение птице эффективной иммунизирующей дозы композиции бактерина-анатоксина Clostridium путем in ovo инъекции во время последней четверти периода инкубации. В некоторых воплощениях бактерии вида Clostridium могут представлять собой бактерии Clostridium perfringens.
В настоящем изобретении также предлагается способ иммунизации птицы против инфекции бактериями вида Clostridium, включающий введение птице эффективной иммунизирующей дозы рекомбинантного токсина или его иммуногенного фрагмента из бактерий вида Clostridium путем in ovo инъекции во время последней четверти периода инкубации. В некоторых воплощениях токсин или его иммуногенный фрагмент представляют собой токсин Clostridium perfringens или его иммуногенный фрагмент.
Эти и другие аспекты изобретения представлены более подробно в описании изобретения, приведенном ниже.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Определенные аспекты настоящего изобретения основаны на неожиданном открытии того, что определенные антигенные или иммуногенные композиции дают возможность более эффективного иммунного ответа у птиц при введении композиции in ovo непосредственно в тело эмбриона.
Таким образом, в настоящем изобретении предлагается способ иммунизации птицы против патогена, который может представлять собой птичий патоген и/или не птичий патоген, переносимый птицей (например, человеческий патоген, передающийся через пищеварительный тракт), причем способ включает введение in ovo во время последней четверти периода инкубации эффективной иммунизирующей дозы композиции, которая индуцирует иммунный ответ против птичьего патогена, где иммуногенная композиция вводится путем in ovo инъекции непосредственно в тело эмбриона. В способах этого изобретения композиция может вводиться непосредственно в ткань скелетной мышцы эмбриона, и ткань скелетной мышцы может представлять собой, но не ограничена ими, ткань мышцы груди и ткани мышцы задней части шеи. В следующих воплощениях композиция может вводиться непосредственно в голову, шею, плечо, крыло, спину, грудь, лапу или в любую их комбинацию.
Кроме того, в способах по этому изобретению композиция может вводиться подкожно в тело эмбриона. В следующих воплощениях композиция может вводиться подкожно в голову, шею, плечо, крыло, спину, грудь, лапу или в любую их комбинацию.
Любой подходящий путь введения композиции эмбриону является подходящим для применения в способах по изобретению. Например, композиция может вводиться эмбриону подкожно, интрадермально, внутривенно, внутримышечно, внутрибрюшинно или путем любой их комбинации.
Птица по этому изобретению может представлять собой любую птицу, и в определенных воплощениях субъект может представлять собой цыпленка, индейку, утку, гуся, фазана, перепела, куропатку, цесарку, страуса, эму или павлина, а также любую другую коммерчески используемую птицу и/или птицу, яйца которой являются доступными для применения в способах по этому изобретению.
В воплощениях, где субъектом является цыпленок, желательно вводить композицию по этому изобретению in ovo во время периода, соответствующего 15-20 дню инкубации, и в конкретных воплощениях композиция может вводиться на 18 или 19 день инкубации. Когда субъектом является индейка, композиция по этому изобретению может вводиться во время периода времени с 21 по 28 день инкубации, и в конкретных воплощениях композиция может вводиться на 24 или 25 день инкубации. В других воплощениях, где субъектом является гусь, композиция по этому изобретению может вводиться во время периода времени с 23 по 31 день инкубации, и в конкретных воплощениях композиция может вводиться на 28 или 29 день инкубации. В следующих воплощениях, где субъектом является утка, композиция по этому изобретению может вводиться во время периода времени с 21 по 28 день инкубации, и в конкретных воплощениях композиция может вводиться на 25 или 26 день инкубации.
Для других птиц последняя четверть периода инкубации и, таким образом, оптимальный предел по дням для in ovo введения композиции по этому изобретению может быть определен согласно способам, хорошо известным из уровня техники. Например, мускусная утка имеет период инкубации в пределе 33-35 дней, фазан имеет период инкубации 23-24 дня, Японский перепел имеет период инкубации 17-18 дней, виргинская куропатка имеет период инкубации 23 дня, азиатская каменная куропатка имеет период инкубации 22-23 дня, цесарка имеет период инкубации 26-28 дней и павлин имеет период инкубации 28 дней.
В конкретных воплощениях этого изобретения композиция может включать, по существу состоять и/или состоять из иммуногенной композиции и адъюванта. Не ограничивающие примеры адъювантов по этому изобретению включают производное алюминия, сапонин, минеральные гели, полианионы, плюрониловые полиолы, производные сапонина, лизолецитин и другие подобные поверхностно-активные вещества, гликозиды, все типы масел и любую их комбинацию. В конкретных воплощениях этого изобретения композиция может включать эмульсию вода-масло-вода.
Как предполагается здесь, в некоторых воплощениях настоящего изобретения композиция по этому изобретению может включать адъювант, который в конкретных воплощениях может представлять собой такой адъювант, как производное алюминия (например, гидроксид алюминия), сапонин (например, Quil-A, включающий QuilA QS21), или масло (такое как полный или неполный адъювант Фрейнда), в любой комбинации.
Следующие не ограничивающие примеры адъюванта по этому изобретению включают минеральные соли (например, гидроксид алюминия; фосфат алюминия; фосфат кальция), масляные эмульсии и композиции на основе поверхностно активных веществ (например, эмульгированные масляные адъюванты Фрейнда; Arlacel A; минеральное масло; адъювант на основе эмульгированного арахисового масла (адъювант 65); MF59 (микрофлюидизированный детергент, стабилизированный эмульсией масло-вода); QS21 (очищенный сапонин); AS02 [SBAS2] (масло-вода + MPL + QS21); Montanide ISA-51; ISA-720 (стабилизированная эмульсия вода-масло), бактериальные продукты и производные [например, Bordatella pertussis; компонент P40, выделенный из Corynebacterium granulosum; липополисахарид (адъювант для обоих типов иммунитета - гуморального и клеточно-опосредованного); Микобактерии и их компоненты (MDP, неприемлемые адъюванты для людей); холерный токсин (мукозальный адъювант)], микробные производные (природные и синтетические) [например, монофосфорил липид A (MPL); Detox (MPL + каркас клеточной стенки M. phlei); AGP [RC-529] (синтетический ацилированный моносахарид); DC-Choi (липоидные иммуностимуляторы, способные к самоорганизации в липосомы); OM-174 (производное липида A); CpG-мотивы (синтетические олигонуклеотиды, содержащие иммуностимулирующие CpG-мотивы); модифицированные LT и CT (генетически модифицированные бактериальные токсины для обеспечения не токсических эффектов от адъювантов)], эндогенные куриные иммуномодуляторы [цитокины; антитела; hGM-CSF или hlL-12 (цитокины, которые могут вводиться в виде белка или кодирующей его плазмиды); иммудаптин (C3d тандемный биочип); сквален], адъюванты на основе частиц [вирусомы (однослойные липосомные носители с инкорпорированным антигеном); AS04 ([SBAS4] Al соль с MPL); ISCOM (структурированный комплекс сапонинов и липидов); полилактид ко-гликолид (PLG), и инертные носители (частицы золота; частицы серебра)].
Дополнительные адъюванты по этому изобретению могут включать минеральные гели, полианионы, плюрониловые полиолы, производные сапонина, лизолецитин и другие подобные поверхностно-активные вещества. Дополнительные адъюванты могут включать агонисты toll-подобного рецептора (TLR), включающие, например, агонисты TLR- 1 (например, триацил липопептиды); агонисты TLR-2 [например, пептидогликан грамположительных бактерий, подобных стрептококкам и стафилококкам; липотейхоевую кислоту]; агонисты TLR-3 (например, двухцепочечная РНК и ее аналоги, такие как поли 1:C); агонисты TLR-4 [например, липополисахарид (эндоксин) грамотрицательных бактерий, подобных Salmonella и E. coli; агонисты TLR-5 (например, флагеллин подвижных бактерий, подобных Listeria); агонисты TLR-6 [например, с TLR-2 пептидогликаном и определенные липиды (диациллипопептиды)]; агонисты TLR-7 [например, геномы одноцепочечной РНК (ssRNA) таких вирусов как грипп, корь и свинка; и малые синтетические антивирусные молекулы на основе гуанозина, подобные локсорибину и ssRNA, и их аналоги]; агонисты TLR-8 (например связывают ssRNA); агонисты TLR-9 (например, неметилированные CpG из ДНК патогена и их аналоги; агонисты TLR-10 (функция не определена) и TLR-11-агонисты (например, связывают белки, экспрессирующиеся в некоторых инфекционных простейших (Apicomplexa). Цыплята имеют хорошо развитую систему TLR, содержащую приблизительно 10 TLR, которые в общих чертах подобны тем TLR, что детектировали у млекопитающих.
Большинство примеров адъювантов по этому изобретению включают рецепторы комплимента (секретированные PRR), где компонент комплимента C3d активируется микробным CHO. Путь комплимента ведет к опсонизации патогена и быстрому фагоцитозу.
В следующих воплощениях адъювант по этому изобретению может представлять собой аминокислотную последовательность, которая является пептидом, белковым фрагментом или цельным белком, который функционирует в качестве адъюванта, или адъювант может представлять собой нуклеиновую кислоту, кодирующую пептид, белковый фрагмент или цельный белок, который функционирует в качестве адъюванта. При использовании здесь термин "адъювант" описывает вещество, которое может представлять собой любое иммуномодулирующее вещество, способное соединяться с полипептидной вакциной или с вакциной на основе нуклеиновой кислоты для усиления, улучшения или модулирования иным образом иммунного ответа у субъекта без оказания вредного влияния на субъект.
Адъювант по этому изобретению может представлять собой, но не ограничен ими, например, иммуностимулирующий цитокин (включая, но не ограничиваясь ими, GM/CSF, интерлейкин-2, интерлейкин-12, интерферон-гамма, интерлейкин-4, фактор некроза опухоли-альфа, интерлейкин-1, гемопоэтический фактор flt3L, CD40L, ко-стимулирующие молекулы B7.1 и ко-стимулирующие молекулы B7.2), адъювантный состав 1 SYNTEX (SAF-1), состоящий из 5 процентов (вес/об.) сквалена (DASF, Parsippany, N. J.), 2,5 процента плюронилового геля, L121 полимер (Aldrich Chemical, Milwaukee), и 0,2 процента полисорбата (Tween 80, Sigma) в солевом растворе с фосфатным буфером. Подходящие адъюванты также включают соль алюминия, такую как гель гидроксида алюминия (квасцы), фосфат алюминия или алганнмулин, но также адъювант может представлять собой соль кальция, железа или цинка или может представлять собой нерастворимую суспензию ацилированного тирозина или ацилированных сахаров, катионных или анионных производных полисахаридов, или полифосфазены.
Другие адъюванты хорошо известны из уровня техники и включают N-ацетилмурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетилнормурамил-L-аланил-D-изоглутамин (CGP 11637, обозначенный как нор-MDP), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил-L-аланин-2-(1'-2'-дипальмитоил-sn-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)этиламин (CGP 19835A, обозначенный как MTP-PE) и RIBI, который содержит три компонента, выделенные из бактерий, монофосфорил липид A, трегалозы димиколат и каркас клеточной стенки (MPL+TDM+CWS) в 2% растворе эмульсии сквален/Tween 80.
Дополнительные адъюванты могут включать, например, комбинацию монофосфорил липида A, предпочтительно, 3-de-O-ацилированного монофосфорил липида A (3D-MPL) вместе с солью алюминия. Усиленная система адъюванта включает комбинацию монофосфорил липида A и производного сапонина, конкретно, комбинацию QS21 и 3D-MPL, как описано в публикации PCT WO 94/00153 (полное содержание которой введено сюда ссылкой), или менее реактогенную композицию, где QS21 блокируется холестерином, как описано в публикации PCT WO 96/33739 (полное содержание которой введено сюда ссылкой). Конкретно, возможный состав адъюванта, включающего QS21 3D-MPL & токоферол в эмульсии масло-вода, описан в публикации PCT WO 95/17210 (полное содержание которой введено сюда ссылкой).
Композиции и способы по настоящему изобретению могут применяться для индукции иммунного ответа для лечения и/или предотвращения таких заболеваний и нарушений, как кокцидиоз, болезнь Марека, инфекционный бурсит, болезнь Ньюкастла, птичья оспа, инфекция видами Clostridium (например, некротический энтерит, гангренозный дерматит, холангиогепатит, целлюлит, язвенный энтерит, ботулизм, болезнь Тилера), птичий грипп, инфекционный бронхит, вирусная инфекция куриной анемии, птичий ларинготрахеит, птичий метапневмовирус, птичья реовирусная инфекция, птичья аденовирусная инфекция, ротавирусная инфекция, астровирусная инфекция, инфекционная гепатомиелопоэтическая болезнь, синдром снижения несучести, инфекция Escherichia coli, инфекция бактериями вида Mycoplasma, инфекции бактериями вида Salmonella, инфекции бактериями вида Campylobacter, инфекции бактериями вида Haemophilus, инфекции бактериями вида Listeria, инфекции бактериями вида Pasteurella, Bordetella, Staphylococcus, Streptococcus, Mycobacterium, Erysipelothrix и любая их комбинация.
Таким образом, в определенных воплощениях композиция по изобретению может включать, по существу состоять, из и/или антигена или иммуногена из вируса болезни Марека, инфекционного вируса бронхита, из бактерий вида Mycoplasma, из птичьего вируса лейкоза, реовируса, из бактерий вида Pasteurella, из птичьего вируса гриппа, вируса болезни Ньюкастла (NDV), вируса инфекционного бурсита (IBDV), вируса саркомы Рауса, Escherichia coli, видов Eimeria, таких как Eimeria tenella (вызывающего кокцидиоз), бактерий вида Haemophilus, Mycoplasma, Listeria, Salmonella, Campylobacter, Clostridium (например, C. perfringens, C. septicum, C. sordellii, C. difficile, C. novyi, C. botulinum, C. colinum, C. chauvoei, C. fallax, C. sporogenes, и C. piliforme) и из любой их комбинации.
Подразумевается, что настоящее изобретение охватывает способы и композиции для иммунизации птиц против патогенов, которые могут представлять собой патогены, которые вызывают заболевания у птиц, и/или могут представлять собой патогены, которые переносятся птицами (зараженные птицы) и переходят к людям и другим животным, кто прикасается или ест такую зараженную птицу. Таким образом, в настоящем изобретении предлагаются композиции, включающие, по существу состоящие из и/или состоящие из не репликативного агента, который индуцирует иммунный ответ против птичьего патогена или против патогена, который вызывает заболевание у других животных при контактировании с или при поедании яиц, или мяса, или других частей тела зараженной птицы. Такие патогены могут включать, но не ограничены ими, виды Salmonella, Campylobacter, Listeria, Escherichia coli, Erysipelothrix, Mycobacterium, Clostridium, и т.д.
В некоторых воплощениях способы по изобретению, описанные здесь, могут дополнительно включать стадию введения бустерной дозы композиции по этому изобретению птице в период после выведения из яйца.
В следующих воплощениях способов по изобретению эффективная иммунизирующая доза двух или более композиций, которые индуцируют иммунный ответ против птичьего патогена, вводится in ovo эмбриону, где две или более композиций вводятся одновременно или последовательно в любом порядке. Таким образом, композиции и способы по этому изобретению могут применяться с использованием оборудования и технологии, которые включают введение множественных композиций в одну область, множественных композиций во множественные области и/или одной композиции во множественные области. Такие способы могут применять одну область входа в яйцо или множество областей входа в яйцо. Не ограничивающие примеры такого оборудования и технологии описаны в Патенте США No. 4903635, Патенте США No. 5136979, Патенте США No. RE 35973, Патенте США No. 5339766, Патенте США No. 6032612, Патенте США No. 6286455, Патенте США No. 5158038, Патенте США No. 6601534 и Патенте США No. 6981470, полное содержание каждого из которых введено сюда ссылкой.
Также сюда включены способы, где эффективная иммунизирующая доза двух или более композиций, которые индуцируют иммунный ответ против птичьего патогена, вводится in ovo и по меньшей мере одна композиция вводится эмбриону, где две или более композиций вводятся одновременно или последовательно в любом порядке. В некоторых воплощениях этих способов по меньшей мере одна композиция может вводиться амниону, который включает амниотическую жидкость, тело эмбриона и желточный мешок и/или по меньшей мере одна композиция может вводиться непосредственно в амниотическую жидкость, тело эмбриона и желточный мешок индивидуально или в любой комбинации.
В некоторых воплощениях этого изобретения способы могут дополнительно включать введение in ovo иммунного стимулятора в любой момент времени в период инкубации, где иммунный стимулятор и композиция вводятся одновременно или последовательно в любом порядке. Способы по этому изобретению также могут дополнительно включать введение in ovo композиции питательных веществ, кишечного модулятора или их комбинации в любой момент времени в период инкубации, где композиция питательных веществ, кишечный модулятор или их комбинация и композиция вводятся одновременно или последовательно в любом порядке.
Существуют некоторые аспекты развития эмбриона птицы, которые делают эмбрион привлекательной мишенью для иммунизации. Во-первых, поскольку наибольший период времени развития эмбриона происходит в яйце вне материнского репродуктивного тракта, то эмбрион может быть легко доступен для введения композиций, таких как иммуногенные композиции по этому изобретению.
Во-вторых, факт, что яйцо представляет собой единицу со множеством компартментов, может быть использован для доставки биологических материалов к определенным участком и областям эмбриона. Например, желточный мешок на ранней стадии развития эмбриона функционирует для производства крови. Непосредственно в период перед выведением птицы из яйца желточный мешок выполняет основную питательную функцию и частично вовлечен в кишечный тракт и, таким образом, переносится в цекальные сегменты после вылупливания. Таким образом, введение материалов в желточный мешок может приводить к осуществлению обоих систем доставки - цекальной или васкулярной. Кроме того, введение композиции по этому изобретению может эффективно проводиться путем инъекции в хорио-алантоисную мембрану или путем инъекции в мембрану воздушной камеры. Наконец, доступ к мышечному компартменту эмбриона может достигаться путем прямой эмбриональной инъекции, переносимой в последнюю четверть периода инкубации, и для цыплят инъекцию проводят, как правило, в период от 17 до 19 дня инкубации.
Иммуногенная композиция может вводиться в любую область яйца, включая воздушную камеру, белок, хорио-аллантоисную мембрану, желточный мешок, желток, аллантоис, амнион или непосредственно в эмбрион птицы. В конкретном воплощении изобретения композиция вводится в мышечную ткань эмбриона птицы, и в других воплощениях композиция вводится в ткань скелетной мышцы. В определенных воплощениях может использоваться введение молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, который остается в клетке мышечной ткани, для введения иммуногенного белка непосредственно и специфично в клетки мышечной ткани. Альтернативно, может вводиться молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок, который будет секретироваться из клетки мышечной ткани, и этот способ может использоваться для доставки белка во все части тела эмбриона птицы посредством контакта мышечной ткани и плазмы. Типичные области введения для ткани скелетной мышцы представляют собой мышцу груди и мышечную ткань задней части шеи, причем области локализованы рядом со скорлупой и, таким образом, относительно легко достигаются с помощью оборудования для инъекции без повреждения других эмбриональных структур.
Для введения in ovo композиции по изобретению могут использоваться любые подходящие способы, включающие in ovo инъекцию, впрыскивание под высоким давлением сквозь скорлупу яйца и баллистическую бомбардировку яйца микрочастицами, несущими композицию. В некоторых воплощениях композиция вводится путем введения водного фармацевтически приемлемого раствора в мышечную ткань, причем раствор содержит вводимую композицию.
В случае применения in ovo инъекции, механизм инъекции не является критическим моментом, но предпочтительно, чтобы способ чрезмерно не нарушал тканей и органов эмбриона или внешних эмбриональных мембран, которые окружают эмбрион, так чтобы обработка не уменьшила коэффициент выведения птиц из яйца. Предпочтительные области инъекции являются внутримышечными и подкожными. Предпочтительные области инъекции мышечной ткани представляют собой скелетную мышцу и, более конкретно, мышцу груди и мышечную ткань мышц задней части шеи, причем области локализованы рядом со скорлупой и, таким образом, относительно легко достигаются с помощью оборудования для инъекции без повреждения других эмбриональных структур и без нарушения защиты, которую дает скорлупа. Шприц, снабженный иглой с калибром примерно 18-26 является подходящим для этой цели. В зависимости от точной стадии развития и положения эмбриона игла от ¾ до 4 дюймов при введении может заканчиваться в жидкости выше цыпленка или в самом цыпленке. Направляющее отверстие может быть пробито или просверлено в скорлупе перед вставкой иглы для предотвращения нарушения или притупления иглы. Если желательно, яйцо может быть сделано герметичным с помощью герметичного, по существу непроницаемого для бактерий материала, такого как воск или подобного, для предотвращения последующего попадания нежелательных бактерий.
В разнообразных воплощениях этого изобретения композиция вводится в тело эмбриона с помощью иглы, имеющей размер от примерно ¾ дюйма до примерно 4 дюймов (например, 1 дюйм, 1,25 дюйма, 1,5 дюйма, 1,75 дюйма, 2,0 дюйма, 2,25 дюйма, 2,5 дюйма, 2,75 дюйма, 3,0 дюйма, 3,25 дюйма, 3,5 дюйма, 3,75 дюйма, или 4,0 дюйма). Кроме того, игла по этому изобретению может иметь калибр в пределе от 15g до 28g (например, 15g, 16g, 17g, 18g, 19g, 20g, 21g, 22g, 23g, 24g, 25g, 26g, 27g или 28g). В некоторых воплощениях игла может иметь тупой конец, в некоторых воплощениях игла может иметь на конце фаску с углом от примерно 10° до примерно 45° (например, 11°, 12°, 13°, 14°, 15°, 16°, 17°, 18°, 19°, 20°, 21°, 22°, 23°, 24°, 25°, 26°, 27°, 28°, 29°, 30°, 31°, 32°, 33°, 34°, 35°, 36°, 37°, 38°, 39°, 40°, 41°, 42°, 43°, 44° или 45°.
В конкретных воплощениях этого изобретения в способах введения композиции с помощью этой in ovo инъекции, игла может проходить сквозь скорлупу большого конца яйца под углом наклона примерно 1°-20° (например, 1°, 2°, 3°, 4°, 5°, 6°, 7°, 8°, 9°, 10°, 11°, 12°, 13°, 14°, 15°, 16°, 17°, 18°, 19° или 20°) от длинной оси яйца.
В настоящем изобретении также предлагаются способы, где композиция по этому изобретению вводится in ovo с помощью оборудования для автоматизированной инъекции.
Очевидно, что высокоскоростная система автоматизированной инъекции будет практически подходящей для птичьих эмбрионов для применения на практике настоящего изобретения. Такое оборудование является доступным в большом количестве, типичным примером является система EMBREX INOVOJECT(TM) (описанная в Патенте США No. 4681063 от Hebrank), и в Патентах США No. 4040388, 4469047, и 4593646 от Miller. Описание этих ссылок и всех ссылок, цитированных здесь, введены ссылкой. Все такое оборудование, в адаптированном виде для практического применения в настоящем изобретении, включает инжектор, содержащий ДНК, как описано здесь, вместе с инжектором, помещенным для инъекции яйца, проводимой оборудованием с ДНК. Кроме того, может предлагаться герметизирующее оборудование, функционально связанное с оборудованием для инъекции, для герметизации отверстия в яйце после его инъекции.
В настоящий момент предпочтительное оборудование для практического применения настоящего изобретения описано в Патенте США No. 4681063 от Hebrank и в Патенте США No. 4903625 от Hebrank, описание которых введено сюда ссылкой. Это оборудование включает инжекторное оборудование для доставки жидких веществ в большое количество яиц и всасывающее оборудование, которое одновременно забирает и поднимает большое количество индивидуальных яиц от их расположенных сверху участков и взаимодействует с инжектором для инъекции яиц, в то время как яйца забирает всасывающее оборудование. Свойства этого оборудования могут быть объединены со свойствами оборудования, описанного выше, для практического применения настоящего изобретения. Специалистам в данной области было бы удобно, если бы это оборудование могло быть адаптировано для инъекции в любую часть яйца путем регулировки глубины проникновения инжектора, как обсуждается со множеством подробностей ниже.
Воплощения способа инъекции и оборудования, которые могут применяться в настоящем изобретении, описаны в Патенте США No. 6032612 (оборудование для инъекции во множество областей), Патенте США No. 6244214 (оборудование для in ovo инъекции и детекции информации, рассматривающей внутреннюю часть яйца), Патентах США No 6176199, 6510811 и 6834615 (способы локализации аллантоисной жидкости в яйце), Патенте США No. 7089879 (способы для манипуляции с воздушными камерами внутри птичьих яиц) и в Патенте США No. 7165507 (способы и оборудование для точного помещения оборудования внутри субгерминальной полости в яйце), полное содержание каждого из патентов введено сюда ссылкой.
Таким образом, в некоторых воплощениях способ и оборудование являются существенными, как описано в одном или более патентов, приведенных выше, и включают помещение удлиненного инжектора или инжекторной иглы со стороны большого конца яйца под углом (A) наклона относительно длинной оси указанного яйца, причем угол выбирают так, чтобы игла направлялась прямо в плечо или грудь указанного эмбриона. Иглу затем вставляют через скорлупу яйца вдоль, по существу, линейной траектории на глубину, достаточную для прохождения в плечо или грудь эмбриона. Затем инъецируют через иглу вещество, которое должно быть помещено в яйцо, причем вещество может быть или жидким, или удобным для спринцевания (например, инъецируемым), твердым (но, как правило, представляющим собой водный раствор, содержащий композицию по этому изобретению, как описано здесь). В некоторых воплощениях иглу удаляют вдоль, по существу, линейной траектории и проводят стадию инъекции вещества одновременно со стадией удаления иглы, так чтобы вещество вводилось вдоль траектории внутрь яйца. Угол наклона (A) является достаточным для усиления возможности инъекции в мышцу плеча или груди. Обычно угол составляет 1-20 градусов и, предпочтительно, составляет от 2 до 3 градусов. В качестве примера, игла может быть вставлена на глубину, достаточную для доступа к нижней точки скорлупы яйца для прохождения внутрь или прохождения внутрь и сквозь плечо или грудь эмбриона. Оборудование может быть модифицировано для включения способов, функционально ассоциированных с оборудованием для помещения яйца под углом по отношению к игле, чтобы достичь указанного угла (A), таких способов, как подъем и помещение иглы под углом по отношению к всасывающему оборудованию.
В конкретном примере способы по настоящему изобретению могут быть применены на практике с помощью оборудования, описанного в Патенте США No. 6244214 от Hebrank (полное содержание которого введено сюда ссылкой), где оборудование (например, "смарт-зонд") для идентификации специфичной структуры и или компартмента внутри яйца, который контактирует с иглой, которая проникает сквозь скорлупу яйца, и с помощью описанных способов применения оборудования для доставки композиций в специфичные структуры и/или компартменты внутри яйца.
Таким образом, в определенных воплощениях в настоящем изобретении предлагается способ введения вещества в мышцу цыпленка in ovo, включающий: a) получение куриного яйца, где указанное яйцо содержит куриный эмбрион в его последней четверти периода инкубации перед выведением птицы из яйца; b) помещение удлиненной иглы для инъекции со стороны большого конца яйца под углом наклона, составляющим примерно 1-5 градусов относительно длинной оси указанного яйца, причем угол выбирают так, чтобы игла направлялась прямо в плечо или грудь указанного эмбриона; c) вставка иглы через скорлупу яйца вдоль, по существу, линейной траектории на глубину, составляющую примерно 7/8 - 1,5 дюйма, в плечо или грудь указанного эмбриона; и d) инъекция указанного вещества в яйцо через указанную иглу.
Еще в других воплощениях здесь предлагается способ для введения вещества в мышцу цыпленка in ovo, включающий: a) получение куриного яйца, где указанное яйцо содержит куриный эмбрион с периодом инкубации 17-19 дней; b) помещение удлиненной иглы для инъекции со стороны большого конца яйца под углом наклона, составляющим примерно 1-5 градусов относительно длинной оси указанного яйца, причем угол выбирают так, чтобы игла направлялась прямо в плечо или грудь указанного эмбриона; c) вставка указанной иглы через скорлупу указанного яйца вдоль, по существу, линейной траектории на глубину, составляющую примерно 7/8 - 1,5 дюйма, в плечо или грудь указанного эмбриона; и d) инъекция указанного вещества в яйцо через указанную иглу.
В таких способах игла может быть вставлена на глубину, достаточную для прохождения внутрь и сквозь плечо или грудь указанного эмбриона.
Также здесь предлагается оборудование для одновременной инъекции в мышечную ткань куриных эмбрионов во множестве яиц с периодом инкубации, составляющим 17-19 дней, причем указанное оборудование включает: способы забора яиц для забора указанного множества яиц; способы инъекции, взаимодействующие с указанными способами забора яиц, для вставки удлиненной иглы сквозь скорлупу указанных яиц вдоль, по существу, линейной траектории на глубину, составляющую примерно 7/8 - 1,5 дюйма, в плечо или грудь указанного эмбриона; и способы помещения иглы для помещения указанной удлиненной иглы для инъекции со стороны большого конца указанного яйца под углом наклона, составляющим примерно 1-5 градусов относительно длинной оси указанного яйца, так чтобы указанная игла направлялась прямо в плечо или грудь указанного эмбриона. В таком оборудовании способы забора яиц могут заменять способы всасывания для одновременного подъема множества индивидуальных яиц.
В следующих воплощениях этого изобретения предлагаются композиции и способы для индукции иммунного ответа на бактерии вида Clostridium у птицы. В качестве примера, острая энтеротоксемия, называемая некротическим энтеритом, вызывается бактериями Clostridium perfringens (типы A и C ассоциированы с птичьими заболеваниями). Некротический энтерит может встречаться, когда зараженная бактериями Clostridia пища или частицы подстилки проглатываются птицами, и микроорганизм растет в кишечнике и затем образует споры. Этот процесс споруляции вызывает высвобождение альфа- и бета-токсинов, ответственных за кишечный некроз (конкретно в тощей кишке и в подвздошной кишке). Клинические признаки включают депрессию, снижение аппетита и диарею. Может встречаться внезапная смертность. Факторы, предрасполагающие к инфекции бактериями C. perfringens и к некротическому энтериту, включают питание и нарушение слизистой кишечника. В контексте коммерческого использования домашней птицы большинство случаев некротического энтерита встречается у бройлерных цыплят в возрасте от двух до пяти недель. Таким образом, конкретные воплощения настоящего изобретения относятся к иммуногенным композициям и способам, которые защищают птиц против инфекции бактериями Clostridium perfringens, и против некротического энтерита, например, путем снижения уровня заболеваемости и/или путем снижения серьезности инфекции и/или заболевания.
Настоящее изобретение описано со ссылкой на конкретные воплощения изобретения. Это изобретение может, однако, быть воплощено в различных формах, и воплощения, представленные здесь, не следует понимать как ограничения изобретения. Напротив, эти воплощения предлагаются для специалистов в данной области так, чтобы это описание было исчерпывающим и полным и полностью соответствовало границам изобретения.
Если не определено иным образом, то все технические и научные термины, используемые здесь, имеют то же значение, какое понимают специалисты в данной области, к которой принадлежит изобретение. Терминология используется здесь в описании только для целей описания конкретных воплощений и не рассматривается как ограничение изобретения.
Содержание всех публикаций, патентных заявок, патентов и других ссылок, указанных здесь, полностью введено ссылкой.
Терминология используется здесь в описании только для целей описания конкретных воплощений и не рассматривается как ограничение изобретения.
При использовании в описании изобретения и формулы изобретения подразумевается, что формы единственного числа также включают формы множественного числа, если в контексте ясно не указано иным образом.
При использовании здесь выражение "и/или" обозначает и охватывает любые и все возможные комбинации одного или более из ассоциированных перечисленных предметов, а также отсутствие комбинаций, когда описание интерпретируется альтернативно ("или").
Далее, термин "примерно", при использовании здесь, обозначает, что когда он имеет отношение к измеряемой величине, такой как количество соединения или агента по этому изобретению, дозы, времени, температуры и подобных, то охватываются вариации определенных количеств, включающие +-20%, +-10%, +-5%, +-1%, +-0,5%, или даже +-0,1%.
Подразумевается, что при использовании здесь термины "птичий" или "птица" включают самцов и самок любого вида птиц и, конкретно, охватывают домашнюю птицу, которые выращиваются на коммерческой основе для яиц, мяса или в качестве домашних питомцев. Соответственно, термины "птичий" и или "птица" и охватывают кур, индеек, уток, гусей, перепелов, фазанов, длиннохвостых попугаев, какаду, австралийских попугаев, страусов, эму и подобных. В конкретных воплощениях субъект представляет собой курицу или индейку. Коммерчески используемая домашняя птица включает бройлеров и несушек, которых выращивают для продукции мяса и яиц соответственно.
В конкретных воплощениях субъектом является субъект, подверженный риску инфекции или предрасположенный к инфекции или заболеванию, вызванному бактериями вида Clostridium (например, некротический энтерит, вызванный инфекцией бактериями Clostridium perfringens). Факторы риска для развития некротического энтерита известны из уровня техники и включают, но не ограничены ими, факторы питания (например, питания с высоким содержанием пшеницы, ячменя, ржи или рыбной муки), плохие условия подстилки и/или воздействие Eimeria (например, естественное воздействие живым вакцинам Eimeria). Таким образом, в конкретных воплощениях композиций и способов по изобретению могут преимущественно применяться для уменьшения серьезности и/или степени заболевания некротического энтерита среди птиц, которые были вакцинированы против кокцидиоза, или в стаях, перенесших вспышку кокцидиоза.
Другие заболевания и нарушения, вызванные инфекцией птиц бактериями вида Clostridium, включают, но не ограничены ими, некротический энтерит, гангренозный дерматит, холангиогепатит, целлюлит, язвенный энтерит, ботулизм и болезнь Тилера. Таким образом, в настоящем изобретении предлагаются композиции и способы их применения для защиты птиц против инфекции, вызванной, например, бактериями Clostridium perfringens, C. septicum, C. sordeilii, C. difficile, C. novyi, C. botulinum, C. colinum, C. chauvoei, C. fallax, C. sporogenes и/или C. piliforme.
Субъект "птица" по этому изобретению может представлять собой живой птичий эмбрион in ovo или может представлять собой птенца, включая только что выведенного птенца (т.е. примерно через один, два или три дня после выведения из яйца), молодую птицу и взрослых птиц.
В конкретных воплощениях птица представляет собой птицу в возрасте примерно шести, пяти, четырех, трех, двух недель или одной недели, или менее. В других характерных воплощениях птица представляет собой наивный субъект, т.е. ранее не подвергавшийся воздействию антигена, против которого желательно наличие иммунитета.
При использовании здесь термин "введение in ovo" или "in ovo введение", если не указано по-другому, обозначает введение иммуногенной композиции (например, вакцины) в яйцо птицы, содержащее живой развивающийся эмбрион с помощью любых способов проникновения сквозь скорлупу яйца и введения иммуногенной композиции. Такие способы введения включают, но не ограничены ими, инъекцию in ovo иммуногенной композиции.
В настоящем изобретении предлагаются способы введения иммуногенной композиции субъекту для индукции иммунного ответа против бактерий вида Clostridium, необязательно защитного иммунного ответа у субъекта. Иммуногенная композиция может вводиться в любой подходящий компартмент яйца (например, аллантоис, желточный мешок, амнион, воздушную камеру и/или в сам птичий эмбрион), что будет очевидно для специалиста в данной области. Способы введения в эмбрион включают без ограничения парентеральное введение, такое как, например, подкожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное и/или внутрисуставное введение. В конкретных воплощениях иммуногенная композиция вводится в амнион (например, путем аксиальной инъекции сквозь большой конец яйца).
Иммуногенная композиция может вводиться в яйцо любым подходящим способом. В конкретных воплощениях иммуногенная композиция вводится посредством инъекции. Механизм инъекции в яйцо не является критической стадией, но, как правило, выбирается так, чтобы способ не нарушал ткани и органы эмбриона или внешних мембран эмбриона, окружающих его, до такой степени, чтобы обработка чрезмерно не снизила степени выведения птиц из яйца. Шприц, снабженный иглой с калибром примерно 18g-23g, является, как правило, подходящим для этой цели. Примеры игл, подходящих для этого изобретения, включают иглы, имеющие следующие калибры: 18, 19, 20, 21, 22, или 23 калибр. Игла по этому изобретению может иметь длину, составляющую по меньшей мере ½ дюйма, 5/6 дюйма, ¾ дюйма, 7/8 дюйма, 1 дюйм, 1 и ¼ дюйма, 1 и 3/8 дюйма, 1 и ½ дюйма, 1 и 5/8 дюйма, 1 и ¾ дюйма, 1 и 7/8 дюйма или 2,0 дюйма. Примеры предела размеров фаски иглы по этому изобретению составляют от примерно 5 градусов до примерно 45 градусов (например, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 45, 56, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 или 45 градусов). В определенных воплощениях этого изобретения предел размеров фаски иглы по этому изобретению составляет от примерно 12 градусов до 20 градусов. Направляющее отверстие может быть пробито или просверлено в скорлупе перед вставкой иглы для предотвращения нарушения или притупления иглы. Если желательно, яйцо может быть сделано герметичным с помощью герметичного, по существу, непроницаемого для бактерий вещества, такого как воск или подобного, для предотвращения последующего попадания нежелательных бактерий.
Высокоскоростная система автоматизированной инъекции будет практически подходящей для птичьих эмбрионов для применения на практике настоящего изобретения. Такое оборудование в большом количестве является доступным, типичным примером является оборудование, описанное в Патентах США No. 4681063 и 4903635 от Hebrank, и в Патентах США No. 4040388, 4469047, и 4593646 от Miller, полное содержание каждого из которых введено ссылкой. Такое оборудование, в адаптированном виде для практического применения в настоящем изобретении, включает, как правило, инжектор, содержащий иммуногенную композицию, вместе с инжектором, помещенным для инъекции яйца, проводимой оборудованием с иммуногенной композицией. Кроме того, если желательно, может предлагаться герметизирующее оборудование, функционально связанное с оборудованием для инъекции, для герметизации отверстия в яйце после его инъекции.
В одном воплощении оборудование для практического применения настоящего изобретения может быть описано в Патенте США No. 4681063 от Hebrank и в Патенте США No. 4903625 от Hebrank, описание каждого из которых введено сюда ссылкой. Это оборудование включает инжекторное оборудование для доставки жидких веществ в большое количество яиц и всасывающее оборудование, которое одновременно забирает и поднимает большое количество индивидуальных яиц от их расположенных сверху участков и взаимодействует с инжектором для инъекции яиц, в то время как яйца забирает всасывающее оборудование. Специалистам в данной области было бы удобно, если бы это оборудование могло быть адаптировано для инъекции в любую часть яйца путем регулировки глубины проникновения инжектора, как известно из уровня техники.
Настоящее изобретение может быть также применено на практике с помощью оборудования и способов, описанных в Патенте США No. 6244214 от Hebrank (полное содержание которого введено сюда ссылкой), где оборудование для идентификации специфичной структуры и или компартмента внутри яйца, который контактирует с иглой, которая проникает сквозь скорлупу яйца, и с помощью описанных способов применения оборудования для доставки композиций в специфичные структуры и/или компартменты внутри яйца.
Подходящий объем вводимой иммуногенной композиции будет зависеть от размера яйца, которое подвергается обработке, обычно страусиные яйца способны принимать больший объем, чем куриные яйца. В конкретных воплощениях иммуногенная композиция вводится в объеме от примерно 10 до примерно 500, 1000 или 2000 мкл или более, включая любое значение величины объема между 10 и 2000, даже если здесь отсутствует точная ссылка, с типичным объемом, включающим 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 626, 650, 675, 700, 725, 752, 775, 800, 850, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900 или 2000 мкл. Другие подходящие объемы для введения иммуногенной композиции могут быть легко определены специалистами в данной области.
Согласно конкретным воплощениям настоящего изобретения в яйца (т.е. эмбрионы птиц) вводится иммуногенная композиция в последнюю половину или последнюю четверть периода in ovo инкубации (т.е. эмбрионального развития). Например, для куриных яиц последняя половина периода инкубации приходится на период примерно от двенадцатого до двадцатого дня инкубации (например, E12, E13, E14, E15, E16, E17, E17,5, E18, E18,5, E19, E19,5 и/или E20), и последняя четверть периода in ovo инкубации приходится на период примерно от пятнадцатого до двадцатого дня инкубации (например, E15, E15,5, E16, E16,5, E17, E17,5, E18, E18,5, E19 E19,5 и/или E20). В конкретных воплощениях в яйца вводится иммуногенная композиция примерно на восемнадцатый (E18 или E18,5) или девятнадцатый (E19 или E19,5) день in ovo инкубации. В других воплощениях в яйца индейки иммуногенная композиция вводится примерно на четырнадцатый - двадцать седьмой день инкубации (E14, E15, E16, E17, E18, E19, E20, E21, E21,5, E22, E22,5, E23, E23,5, E24, E24,5, E25, E25,5, E26 и/или E27), примерно на двадцать первый - двадцать седьмой день инкубации (например, E21, E21,5, E22, E22,5, E23, E23,5, E24, E24,5, E25, E25,2, E26, E26,5 и/или E27) или примерно на двадцать пятый день инкубации (E25 или E25,5). Специалистам в данной области было бы удобно, если бы способы по настоящему изобретению можно было проводить в любое определенное время in ovo, до тех пор пока введение не приведет в результате к желаемому иммунному ответу на иммуногенную композицию без чрезмерного уровня заболеваемости и/или смертности среди подвергнутых лечению субъектов.
Альтернативно или дополнительно изобретение может быть применено на практике для введения иммуногенной композиции птенцу, включая только что выведенных птенцов (т.е. птенцов в возрасте примерно одного, двух и/или трех дней после выведения из яйца), молодых и/или взрослых птиц. В определенных воплощениях введение осуществляется в период, соответствующий примерно первым шести, пяти, четырем, трем и/или двум неделям после выведения птицы из яйца, и/или даже в период, соответствующий примерно первой неделе после выведения птицы из яйца. Согласно одному аспекту введение осуществляется в период, примерно соответствующий первым трем неделям после выведения птицы из яйца. В других воплощениях иммуногенная композиция вводится in ovo (например, в последнюю четверть периода периода in ovo инкубации), и бустерная доза вводится в период после выведения птицы из яйца (например, в период, соответствующий примерно первым дням - одному, двум или трем дням, или одной, двум или трем неделям после выведения птицы из яйца).
Способы по изобретению могут отличаться от способов материнской вакцинации, в которых более старшие самки птиц (например, курицы в возрасте примерно 10-15 недель) вакцинируются с целью обеспечения пассивным иммунитетом их потомства. Такие птицы, вероятно, не являются интактными, т.е. они уже подвергались воздействию бактерий Clostridium (например, Clostridium perfringens) и не иммунизировались с целью защиты вакцинированной птицы, но вместо этого - для защиты потомства с помощью пассивной передачи антител.
Иммуногенные композиции по настоящему изобретению могут вводиться птицам с помощью подходящих способов после выведения птиц из яйца. Типичные способы представляют собой пероральное введение (например, с пищей или питьевой водой), внутримышечную инъекцию, подкожную инъекцию, внутривенную инъекцию, внутрибрюшинную инъекцию, введение с помощью глазных капель и/или с помощью назального спрея. Далее, птицам могут вводиться иммуногенные композиции в камере для распыления, т.е. в камере, в которую помещают птиц и подвергают воздействию аэрозоля, содержащего вакцину, или воздействию курса распыления.
Изобретение может быть применено на практике для защиты птицы от некротического энтерита. С помощью терминов "защищает" "защищающий" и "защита" и подобных обозначают любой уровень защиты от некротического энтерита, который приносит какую-то пользу популяции субъектов, такую как уменьшение степени и/или серьезности заболевания среди птиц, подвергнутых лечению, что проявляется либо в форме уменьшения смертности, уменьшения повреждений, повышения веса тела, повышения степени обмена веществ и/или в форме уменьшения любого другого вредного эффекта заболевания, не взирая на то, является ли защита частичной или полной. Специалистам в данной области будет понятно, что защиту можно оценить на основе сравнения множества подвергнутых лечению птиц с птицами, не подвергавшимися лечению, даже если в индивидуальных случаях подвергнутые лечению птицы не были защищены. В конкретных воплощениях в изобретении предлагается способ уменьшения степени заболевания некротического энтерита среди множества птиц, которым вводились иммуногенные композиции по изобретению. Также предлагается способ уменьшения заболеваемости и/или смертности среди множества птиц, подвергнутых лечению согласно настоящему изобретению.
При использовании здесь термины "инициировать", "инициированный" или "инициирование" (и их грамматические варианты) обозначают инициирование активного иммунного ответа, который слабее, чем защитный иммунный ответ до получения второй дозы (бустерной) в более поздний период времени после выведения птицы из яйца.
При использовании здесь термины "уменьшать" "уменьшенный" "уменьшающий" и "уменьшение" (и их грамматические варианты) обозначают уменьшение указанного параметра инфекции или заболевания (например, инфекции, заболеваемости, смертности, степени заболевания некротического энтерита, повреждений и подобных), которые имеют какое-то значение или приносят какую-то пользу для потребителя (например, коммерческое значение), например, уменьшение указанного параметра инфекции или заболевания, по меньшей мере, примерно на 20%, 25%, 35%, 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% или более по сравнению с соответствующим параметром у птиц, не подвергавшихся лечению.
В изобретении также предлагаются способы защиты птиц от инфекции бактериями вида Clostridium, которые приводят в результате к любому уровню защиты, который приносит какую-то пользу популяции субъектов, такую как уменьшение степени и/или серьезности инфекции бактериями Clostridium среди птиц, подвергнутых лечению.
Изобретение также может применяться на практике для индукции иммунного ответа на инфекцию бактериями Clostridium. При использовании здесь подразумевается, что термин "индуцирует (или его грамматические варианты) иммунный ответ против инфекции бактерий Clostridium" охватывает агенты, которые индуцируют иммунный ответ против самого организма, и/или токсины, продуцируемые организмом, с помощью способов пассивного переноса или активного иммунного ответа. Необязательно, иммунный ответ, который индуцируется, является защитным иммунным ответом, например, при способах вакцинации. Защита не требуется, если существуют какие-то другие цели для индукции иммунного ответа, например для исследовательских целей, или для получения антитела для пассивных иммунизаций, или для использования в качестве реагента (например, для детекции, выделения и/или идентификации бактерий вида Clostridium).
При использовании здесь, если не указано иным образом, подразумевается, что термин "C. perfringens" включает C. perfringens типа A и/или C. perfringens типа C и/или C. perfringens любого другого типа, который вовлечен в этиологию некротического энтерита у птиц. В конкретных воплощениях в изобретении предлагаются способы защиты птиц от инфекции бактериями вида C. perfringens типа A и/или C. perfringens типа C. В изобретении также предлагаются способы индукции иммунного ответа против бактерий вида C. perfringens типа A и/или C. perfringens типа C. Различные типы бактерий C. perfringens и их штаммы хорошо известны из уровня техники. Смотри, например, AMERICAN ASSOCIATION OF AVIAN PATHOLOGISTS, A LABORATORY MANUAL FORTHE ISOLATION AND IDENTIFICATION OF PATHOGENS (3d. ed. 1989).
При использовании здесь, если не указано иным образом, термин "эффективная иммунизирующая доза" обозначает дозу иммуногенной композиции, достаточную для индукции защитного иммунного ответа у птиц, подвергнутых лечению, который гораздо выше, чем наследственный иммунитет не иммунизированных птиц. В случае птиц, подвергнутых лечению in ovo, "эффективная иммунизирующая доза" указывает на дозу, достаточную для индукции защитного иммунного ответа у птиц, выведенных из яйца, которые были подвергнуты лечению in ovo, причем иммунитет гораздо выше, чем наследственный иммунитет птиц, не иммунизированных in ovo. Эффективная иммунизирующая доза в любом конкретном контексте обычно может быть определена с использованием способов, известных из уровня техники.
"Эффективная иммунизирующая доза" может включать одну или более (например, две или три) дозы иммуногенной композиции, так чтобы достичь желаемого уровня защиты. Индивидуальные дозы могут вводиться in ovo и/или в период после выведения птицы из яйца.
Как обсуждалось выше, для специалистов в данной области будет очевидно, что когда подвергается лечению множество птиц (так как при коммерческой продукции с использованием домашней птицы), эффективность дозы можно оценить путем определения эффектов вакцинации у стаи в целом. Другими словами, эффективная иммунизирующая доза или эффективная вакцина для стаи в целом могут все же не индуцировать иммунный ответ и/или не обеспечивать подходящую защиту против заболевания у индивидуальных птиц.
Термины "вакцинация" или "иммунизация" хорошо понятны из уровня техники и используются здесь взаимозаменяемо. Например, можно понимать, что под терминами вакцинация или иммунизация представляется процесс, который увеличивает иммунную реакцию субъекта на антиген (путем обеспечения активного иммунного ответа), и, таким образом, его способность сопротивляться, преодолевать и/или излечиваться от инфекции (т.е., путем обеспечения защитного иммунного ответа).
При использовании здесь подразумевается, что термины "защитный иммунитет" или "защитный иммунный ответ" обозначают, что у животного-хозяина увеличивается активный иммунитет на иммуногенную композицию и/или что иммуногенная композиция обеспечивает пассивный иммунитет, так что при последующем воздействии или введении иммуногенной композиции животное было способно сопротивляться или преодолевать инфекцию и/или заболевание. Таким образом, защитный иммунный ответ будет уменьшать степень заболеваемости и/или смертности от последующего воздействия патогенна среди птиц, подвергнутых лечению.
"Активный иммунный ответ" или "активный иммунитет" характеризуется "участием тканей и клеток организма-хозяина после столкновения с иммуногеном. Оно включает дифференцировку и пролиферацию иммунокомпетентных клеток в лимфоретикулярных тканях, что приводит в результате к синтезу антитела, или развитию клеточно-опосредованной реактивности, или к обоим эффектам". Herbert B. Herscowitz, Immunophysiology: Cell Function and Cellular Interactions in Antibody Formation, in IMMUNOLOGY: BASIC PROCESSES 117 (Joseph A. Bellanti ed., 1985). Альтернативно установлено, что активный иммунный ответ увеличивается у хозяина после воздействия иммуногенов при инфекции или вакцинации. Активный иммунитет может контрастировать с пассивным иммунитетом, который приобретается через "перенос заранее образованных веществ (антитела, фактора переноса, тимусного трансплантата, интерлейкина-2) из активно иммунизированного хозяина к не иммунизированному хозяину". Id.
Модели некротического энтерита (NE) для оценки вакцин и стратегий вакцинации известны из уровня техники. Например, в публикации Hofacre et al. (2003, J. Appl. Poult. Res. 12:60-64) описана модель, в которой цыплят кормили соево-зерновым рационом с содержанием 26% рыбной муки, начиная с дня 0 до дня 14 в период после выведения птенцов. Рыбную муку удаляли из питания на 14 день. Птицам вводили coccidia путем перорального принудительного введения на 14 день, затем ежедневно, начиная с дней 17-19, вводили C. perfringens путем перорального принудительного введения. Степень обмена веществ, вес тела и подсчет повреждений кишечника использовали для оценки присутствия и серьезности некротического энтерита у сенсибилизированных птиц. NE повреждения оценивали на 22 день или на 28 день с использованием шкалы 0=нет, 1=легкие, 2=средние и 3=значительные/серьезные. Другие способы могут применяться для оценки эффективности вакцины и режимов вакцины, как известно из уровня техники. В определенных воплощениях настоящего изобретения введение композиции по этому изобретению (например, эффективного количества композиции по этому изобретению) может привести в результате к уменьшению повреждений кишечника и/или изменений веса тела животных по этой модели или по другой известной модели примерно на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 75, 80, 90, или 100% по сравнению с не иммунизированными или контрольными животными.
В дополнительных воплощениях этого изобретения композиции и способы по этому изобретению могут применяться для индукции ответа антител у птиц, который, по меньшей мере, выше или равен примерно 0,5 единиц антитоксина/мл (например, по меньшей мере, примерно 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5 или 10 A.Е. антитела к токсину на 1 мл антисыворотки птицы).
В следующих воплощениях, где применяются композиции и способы по изобретению, где процент яиц в популяции яиц, в которых проводили доставку композиции по изобретению в тело эмбриона, может составлять от примерно 70% до примерно 100% (например, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%) от общего числа яиц в популяции яиц, в которые вводилась композиция.
Настоящее изобретение также охватывает иммуногенные композиции, которые индуцируют активный и/или пассивный иммунный ответ против бактерий C. perfringens (включая типы A и/или C) и которые необязательно могут использоваться для защиты птицы против инфекции бактериями C. perfringens и/или для защиты против некротического энтерита, как описано более подробно выше.
Иммуногенные композиции по изобретению включают, по существу состоят из и/или состоят из агента(ов), который индуцирует иммунный ответ против бактерий Clostridium. Иммунный агент из бактерий Clostridium может представлять собой репликативный антиген и/или нерепликативный антиген. Репликативный и нерепликативный антигены по этому изобретению могут быть введены in ovo в амнион, эмбрион и/или в оба - амнион и эмбрион.
Кроме того, иммуногенные композиции по изобретению включают, по существу состоят из и/или состоят из иммунизирующего агента из бактерий Clostridium в фармацевтически приемлемом носителе. В характерных воплощениях в состав иммуногенной композиции могут быть включены анатоксины и/или бактерины Clostridium. Согласно этому воплощению иммуногенная композиция необязательно дополнительно включает адъювант (смотри ниже). Анатоксины представляют собой инактивированные токсины и могут быть выделены из токсинов Clostridium, включая выделенные из C. perfringens, включающие альфа-токсин, бета-токсин, бета-2-токсин, энтеротоксин, эпсилон-токсин, йота-токсин, каппа-токсин, лямбда-токсин и/или тета-токсин; включая выделенные из C sordeilii, включающие геморрагический токсин и/или летальный токсин; включая выделенные из C. difficile, включающие A-токсин (энтеротоксин) и B-токсин (цитопатический токсин); включая выделенные из C. septicum, включающие альфа-токсин; включая выделенные из C. novyi, включающие альфа-токсин и/или бета-токсин; и/или включая выделенные из C. botulinum, включающие токсин типа C. Способы получения анатоксинов известны из уровня техники и включают, например, обработку токсина формальдегидом или термообработку (смотри, например, Walker, (1992) Vaccine 10:977-990). Бактерины представляют собой бактериальные клеточные компоненты и могут быть выделены из бактерий вида Clostridium, такого как, например, C. perfringens типов A и/или C. perfringens типа C. Анатоксиновые вакцины C. perfringens известны из уровня техники (смотри, например, Патент США No. 4292306 от Zemlyakova).
В других воплощениях иммуногенная композиция включает, по существу состоит из или состоит из убитых (т.е. не репликативных) бактерий Clostridium (т.е., бактерина), необязательно в виде эмульсии вода-масло-вода (смотри, например, Патент США No. 5817320 от Stone, описывающий иммунизацию in ovo птичьих эмбрионов с помощью вакцин в виде масляных эмульсий, полное содержание патента введено сюда ссылкой), и/или фармацевтически приемлемого носителя. В других воплощениях иммуногенная композиция включает, по существу состоит из или состоит из убитых бактерий Clostridium и адъюванта (например, адъюванта в виде производного алюминия, такого как гидроксид алюминия, сапонин, такой как Quil-A, включая QuilA QS21, или в виде масла, такого как полный или неполный адъювант Фрейнда), необязательно в виде эмульсии вода-масло-вода и/или в фармацевтически приемлемом носителе.
В качестве дополнительной альтернативы иммуногенная композиция включает, по существу состоит из или состоит из репликативного иммунного агента из бактерий Clostridium, например живых бактерий C. perfringens, которые, как правило, являются ослабленными (т.е. с уменьшенной вирулентностью) живыми бактериями C. perfringens. (Смотри, например, публикацию PCT WO 2005/053737, полное содержание которой введено сюда ссылкой, для руководства по получению живых ослабленных бактерий для применения в вакцинах). Способы получения ослабленных бактерий известны из уровня техники и включают без ограничения: облучение, химическую обработку, серийный пассаж в культуре и подобные. В определенных воплощениях изобретения вводятся живые бактерии Clostridium (например, C. perfringens) в присутствии агента, который защищает субъект от патологических эффектов организма, например, путем совместного введения нейтрализующего фактора, как описано в Патенте США No. 6440408 от Thoma et al., или введения интерферона, как описано в Патенте США No. 6506385 от Poston et al. Необязательно бактерии Clostridium и нейтрализующий фактор и/или интерферон вводятся в одну и ту же композицию.
Дополнительные примеры иммуногенных композиций, включающих, по существу состоящих из или состоящих из антитоксинов (т.е, антител, которые обеспечивают пассивный иммунитет против альфа и/или бета токсинов Clostridium; смотри, например, Патент США No. 5719267 от Carroll et al.), антигенных пептидов, которые индуцируют иммунный ответ против бактерий Clostridium (включая токсины C. Perfringens, смотри, например, Патенты США No.5817317 и 5851827 от Titball et al.; Патент США No. 6610300 от Segers et al.; Патент США No. 5695956 от McClane et al.), и рекомбинантных вакцин, которые включают нуклеиновую кислоту-носитель (например, плазмиду или вирус), которая доставляет нуклеиновую кислоту, кодирующую антигенный пептид(ы) или белок(и), которые индуцируют иммунный ответ против бактерий Clostridium.
В характерных воплощениях иммуногенная композиция включает, по существу состоит из или состоит из рекомбинантного альфа- и/или бета-токсина из бактерий Clostridium, например, из альфа-токсинов, имеющих аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:2 [полноразмерная последовательность из 370 аминокислот; GenBank номер доступа 1GYGB (Gl:21730290), кодирующая последовательность которой представлена здесь в виде SEQ ID NO:1], SEQ ID NO:4 (Cpa247-370; аминокислоты 247-370 из SEQ ID NO:2; кодирующая последовательность которой представлена здесь в виде SEQ ID NO:3), SEQ ID NO:6 (аминокислоты 1-278 из SEQ ID NO:2; кодирующая последовательность которой представлена здесь в виде SEQ ID NO:5), SEQ ID NO:8 (Cpa261-300; аминокислоты 261-300 из SEQ ID NO:2, кодирующая последовательность которой представлена здесь в виде SEQ ID NO:7), как описано здесь, и/или, например, в Патентах США No. 5817317 и 5851827 от Titball et al., или SEQ ID NO:10 [полноразмерная последовательность из 398 аминокислот, кодирующая последовательность которой представлена здесь в виде SEQ ID NO:9]. В некоторых воплощениях токсин по настоящему изобретению представляет собой иммуногенную композицию, включающую аминокислоты 1-278 (SEQ ID NO:6) из последовательности из 370 аминокислот (SEQ ID NO:2) альфа-токсина из C. perfringens.
Следующие примеры токсинов (включая их иммуногенные фрагменты), которые могут применяться в композициях и способах этого изобретения, включают, но не ограничены ими, токсины C. perfringens [например, альфа-токсин, номер доступа CAA35186 (Saint-Joanis et al. MoI. Gen. Genet. 219(3):453-460 (1989)]; бета-токсин, номер доступа CAA58246 (Steinthorsdottir et al. FEMS Microbiol. Lett. 130(2-3):273-278 (1995)); бета-2-токсин, номер доступа NP_150010 (Shimizu et al. Proc. Natl. Acad. Set. U.S.A. 99(2):996-1001 (2002)); энтеротоксин, номер доступа BAE79112 (Miyamoto et al. J. Bacteriol. 188(4): 1585-1598 (2006)); эпсилон-токсин, номер доступа 31 AAA23236 (Havard et al. FEMS Microbiol. Lett. 97:77-82 (1992); йота-токсин, номер доступа CAA51959 (Perelle et al. Infect Immun. 61(12):5147-5156 (1993)); каппа-токсин, номер доступа NP_561089, Shimizu et al. Proc. Natl. Acad. Sci. США 99(2):996-1001 (2002)); лямбда-токсин, номер доступа CAA35187 (Saint-Joanis et al. MoI. Gen. Genet. 219(3):453-460 (1989)); и тета-токсин, номер доступа NP_561079 (Shimizu et al. Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 99(2):9.96-1001 (2002))], токсины C. difficile [например, токсин A, номер доступа A37052 (Wren et al. FEMS Microbiol. Lett 70:1 -6(1990)); и токсин B, номер доступа CAA43299 (von Eichel-Streiber et al. MoI. Gen. Genet. 233(1-2): 260-268 (1992))], токсины C. septicum [например, альфа-токсин, номер доступа AAB32892 (Ballard et al. Infect. Immun. 63(1):340-344 (1995))] и токсины C. novyi [например, альфа-токсин, номер доступа AAB27213 (Ball et al. Infect. Immun. 61 (7):2912-2918 (1993))].
Термины "токсин", "альфа-токсин", "бета-токсин", "эпсилон-токсин" (или подобный термин) и т.д. при использовании здесь, включают полноразмерный токсин, а также антигенные или иммуногенные пептиды или их антигенные или иммуногенные варианты (например, ослабленные), которые индуцируют иммунный ответ у субъекта (необязательно защитный иммунный ответ) против бактерий Clostridium. В конкретных воплощениях антигенный пептид включает по меньшей мере примерно 6, 8, 10, 12, 15, 18, 20, 25, 30, 50, 75 или 100 или более последовательно расположенных аминокислот полноразмерного токсина (смотри, например, полноразмерную последовательность альфа токсина, показанную в SEQ ID NO:2 в Патентах США No. 5817317 и 5851827 и в SEQ ID NO:2, представленной здесь).
Также понятно, что иммуногенные фрагменты по этому изобретению могут быть объединены в любом порядке или количестве. Например, фрагмент 1-10 может быть объединен с фрагментом 10-20 с получением фрагмента из аминокислот 1-20. В качестве другого примера фрагмент 1-20 может быть объединен с фрагментом 50-60 с получением одного фрагмента по этому изобретению, имеющего последовательность из 31 аминокислоты (AA 10-20 и AA 50-60). Также фрагменты могут присутствовать в многочисленных количествах и в любой комбинации во фрагменте по этому изобретению. Таким образом, например, фрагмент 1-150 может быть объединен со вторым фрагментом 1-150 и/или объединен с фрагментом 400-500 с получением фрагмента по этому изобретению.
В некоторых воплощениях антигенный или иммуногенный фрагмент токсина Clostridium по этому изобретению может включать, по существу состоять из и/или состоять из аминоконцевого домена из альфа токсина C. perfringens (аминокислоты 1-246 из SEQ ID NO:2), карбоксиконцевого домена из альфа токсина C. perfringens (аминокислоты 256-370 из SEQ ID NO:2) и/или фрагмента между этими доменами (аминокислоты 247-255 из SEQ ID NO:2) в любой комбинации и с любым количеством перекрывающихся аминокислотных последовательностей, что приводит в результате к получению фрагмента, имеющего иммуногенную активность. Подразумевается, что эта фраза охватывает все возможные пептиды токсинов и фрагменты, как это очевидно представлено здесь (например, любой пептид или фрагмент, включающий, по меньшей мере, примерно 6, 8, 10, 12, 15, 18, 20, 25, 30, 50, 75 или 100 или более последовательно расположенных аминокислот полноразмерной последовательности альфа токсина, как показано в SEQ ID NO:2 в Патентах США No. 5817317 и 5851827 и в SEQ ID NO:2 и в SEQ ID NO:10, представленных здесь). В конкретных воплощениях антигенный пептид лишен аминокислотной последовательности, обладающей гидролизующей активностью фосфолипазы С и/или сфингомиелина (например, антигенный пептид альфа токсина может быть лишен аминокислот 1-240). Было определено расположение некоторых эпитопов альфа токсина C. perfringens (смотри, например, публикацию Logan et al., (1992) Infection and Immunity 59:4338-4382, полное содержание которой введено сюда ссылкой для руководства по эпитопам альфа токсина).
Дополнительные примеры рекомбинантных токсинов Clostridium, которые могут применяться в способах по этому изобретению, включают, но не ограничены ими, бета токсин Clostridium perfringens или его иммуногенный фрагмент, где бета токсин имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:11. Бета токсин из SEQ ID NO.11 может дополнительно включать мутацию аминокислоты 62, 182, 197 или мутацию в одной из областей между аминокислотами No. 80-103, 145-147, 281-291, 295-299 или ниже аминокислоты с положением 292 (как описано в Патенте США No. 6610300, полное содержание которого введено сюда ссылкой), посредством чего полученный в результате токсин или его фрагмент обладает иммуногенной активностью.
Нуклеотидные и аминокислотные последовательности альфа и бета токсинов из C. perfringens известны из уровня техники, смотри например GenBank номер доступа DQ202275; NP_560952; NCJ303366; AY823400; AY277724; AF204209; X17300; X13608; L43548; L43547; L77965 и L13198. Смотри также публикацию Sheedy et al., Highly Conserved Alpha-Toxin Sequences of Avian Isolates of Clostridium perfringens, J. Clin. Microbiol. 42:1345-1347 (2004), где представлен анализ последовательностей альфа токсина из штаммов C. perfringens, выделенных из цыплят.
В следующих воплощениях этого изобретения токсин Clostridium может представлять собой эпсилон (ε) токсин из C. perfringens, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:12 (328 аминокислот; или SEQ ID NO:13). В следующих воплощениях ε токсин может включать аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:13, где остаток 2 представляет собой пролин, как описано в Патенте США No. 6403094, полное содержание которого введено сюда ссылкой.
В определенных воплощениях в настоящем изобретении предлагается способ иммунизации птицы против инфекции бактериями Clostridium, включающий введение птице эффективной иммунизирующей дозы композиции бактерин-анатоксина из Clostridium путем in ovo инъекции в последнюю четверть периода инкубации. Способы по этому изобретению могут дополнительно включать стадию введения бустерной дозы композиции бактерин-анатоксина из Clostridium птице после выведения птицы из яйца. Бактерии вида Clostridium по этому изобретению могут включать, но не ограничены ими, Clostridium perfringens. В конкретных воплощениях этого изобретения композиция может включать вакцину Vision CD®. В конкретных воплощениях, где субъектом является цыпленок, композиция бактерин-анатоксина может вводиться в амниотическую жидкость посредством иглы с калибром 20g, 1,0 дюйм или с калибром 22g, 1,0 дюйм в течение 18 дня инкубации.
В дополнительных воплощениях этого изобретения предлагаются способы иммунизации птицы против инфекции бактериями Clostridium, включающий введение птице эффективной иммунизирующей дозы рекомбинантного токсина или его иммуногенного фрагмента из Clostridium путем in ovo инъекции в последнюю четверть периода инкубации. В некоторых воплощениях эти способы могут дополнительно включать стадию введения бустерной дозы рекомбинантного токсина или его иммуногенного фрагмента птице после выведения птицы из яйца. В конкретных воплощениях композиция, применяемая в этих способах, может включать адъювант, который может представлять собой Quil A и неполный адъювант Фрейнда. В воплощении, где субъектом является цыпленок, композиция бактерин-анатоксина может вводиться в тело эмбриона посредством иглы с калибром 23g, 1,25 дюйма в течение 19 дня инкубации.
Еще в следующих воплощениях, когда субъектом является цыпленок, токсин или его иммуногенный фрагмент по этому изобретению может вводиться в тело эмбриона посредством иглы с калибром 20g, 1,5 дюйма в течение 19 дня инкубации. Также предел дозировки токсина (например, альфа-токсина) или его иммуногенного фрагмента и/или другой субъединицы белка или гликопротеина или другого типа биологической молекулы, применяемой в качестве вакцины по этому изобретению, может находиться от примерно 1 мкг до примерно 1000 мкг на дозу с типичным пределом дозировки от примерно 55 мкг до примерно 60 мкг на дозу. Для композиций по этому изобретению, включающих инактивированный вирус, концентрация вируса на дозу может находиться в интервале от примерно 103 EID50/TCID50 до примерно 1012 EID50/TCID50 (EID = инфицирующая доза для яйца; TCID = инфицирующая доза для тканевой культуры). В воплощениях, включающих активированный вирус, концентрация на дозу может находиться в пределе от примерно 100,1 EID50/TCID50 до примерно 1012 EID50/TCID50. В конкретных воплощениях этого изобретения токсин по этому изобретению включает, по существу состоит из и/или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2, 4, 6, 8 или 10, включая любую их комбинацию.
Здесь предполагается, что в некоторых воплощениях настоящего изобретения композиция по этому изобретению дополнительно включает адъювант, который в конкретных воплощениях может представлять собой такой адъювант, как производное алюминия (например, гидроксид алюминия), сапонин (например, Quil-A включая QuilA QS21), или масло (такое как полный или неполный адъювант Фрейнда), в любой комбинации. Здесь предлагаются дополнительные примеры адъювантов, которые могут применяться в любых способах изобретения, описанных здесь.
В характерных воплощениях иммуногенная композиция по этому изобретению включает, состоит из, по существу состоит из энтеротоксина (CPE) C. Perfringens, бета-2-токсина, эпсилон-токсина, каппа-токсина, лямбда-токсина, тета-токсина и/или йота-токсина, необязательно в дополнении к альфа- и/или бета-токсину C. perfringens.
В других характерных воплощениях иммуногенная композиция включает, по существу состоит из или состоит из анатоксина или анатоксина/бактерина. Бактерин может представлять собой бактерин из C. perfringens типа А и/или С. Например, типичная иммуногенная композиция включает, по существу состоит из или состоит из альфа-анатоксина и бактерина из C. perfringens типа А. Необязательно иммуногенная композиция дополнительно включает адъювант, такой как производное алюминия (например, гидроксид алюминия), сапонин (например, Quil-A включая QuilA QS21) или масло (такое как полный или неполный адъювант Фрейнда).
Характерная иммуногенная композиция по изобретению включает, по существу состоит из или состоит из эффективной иммунизирующей дозы иммунизирующего агента C. perfringens в эмульсии вода-масло-вода (смотри, например, Патент США No. 5817320 от Stone), необязательно в фармацевтически приемлемом носителе.
Иммуногенная композиция может дополнительно включать два или более агентов, которые индуцируют иммунный ответ против бактерий C. perfringens (например, любую комбинацию из описанных выше агентов).
В конкретных воплощениях агент, который индуцирует иммунный ответ против бактерий C. perfringens (например, анатоксин, бактерин, ослабленные бактерии C. perfringens, и/или токсин и подобные), представляет собой выделенный из птиц, необязательно выделенный из цыплят, штамм C. perfringens.
При использовании здесь термин "по существу состоит из" (и грамматические варианты) обозначает, что иммуногенная композиция не включает другого вещества, в виде иммуногенного агента, отличного от указанных агентов. Термин "по существу состоит из" не исключает присутствия других компонентов, таких как адъюванты, иммуномодуляторы и подобные.
Термин "фармацевтически приемлемый" обозначает вещество, которое не является биологически или иным образом нежелательным, т.е. вещество может вводиться субъекту, не оказывая существенных нежелательных биологических эффектов. Таким образом, такая фармацевтическая композиция может применяться, например, для приготовления композиций для иммунизации. Физиологически и фармацевтически приемлемые носители могут содержать другие соединения, включающие, но не ограниченные ими, стабилизаторы, соли, буферы, адъюванты и/или консерванты (например, антибактериальные, противогрибковые и противовирусные агенты), как известно из уровня техники. Нет необходимости в том, чтобы фармацевтически приемлемый носитель был стерильным, хотя он предназначается, как правило, для введения in ovo птичьим эмбрионам.
В конкретных воплощениях иммуногенная композиция дополнительно включает иммунный стимулятор. Альтернативно, иммунный стимулятор не может вводиться субъекту в отдельной композиции. Иммунные стимуляторы, которые могут применяться в настоящих способах, включают, но не ограничены ими, цитокины, факторы роста, хемокины, супернатанты клеточных культур лимфоцитов, моноциты или клетки лимфоидных органов, клеточные препараты или клеточные экстракты (например, фиксированные препараты Staphylococcus aureus или препараты липополисахпридов), митогены или адъюванты, включая низкомолекулярные лекарственные средства. Иммунные стимуляторы могут вводиться in ovo в любой момент во время инкубации. Необязательно иммунный стимулятор и агент, который индуцирует иммунный ответ против бактерий C. Perfringens, вводятся одновременно, необязательно они вводятся в одной и той же композиции.
При использовании здесь слово "одновременно" обозначает достаточно близко по времени с получением комбинированного эффекта (который заключается в том, что одновременно может представлять собой совместно или может представлять собой два или более событий, происходящих внутри короткого периода времени до и/или после друг друга).
Любой подходящий вакцинный адъювант может применяться согласно настоящему изобретению, включая химические и полипептидные иммуностимуляторы, которые усиливают ответ иммунной системы на антигены. Адъюванты включают, но не ограничены ими, адъювант на основе производного алюминия (например, гидроксид алюминия), фосфат алюминия, растительные и животные масла (например, неполный или полный адъювант Фрейнда), сапонин (например, Quil-A, включающий QuilA QS21), Spur® (Intervet) и подобные. Характерные адъюванты по этому изобретению включают, но не ограничены ими, соль алюминия, такую как гель гидроксида алюминия (квасцы), фосфат алюминия или алганнмулин, но также адъювант может представлять собой соль или минеральные гели кальция, магния, железа или цинка, или может представлять собой нерастворимую суспензию ацилированного тирозина или ацилированных сахаров, катионных или анионных производных полисахаридов, или полифосфазены, или сапонины, такие как Quil-A, или эмульсии, такие как вода-масло и вода-масло-вода, или полный или неполный адъювант Фрейнда, или адъювант может представлять собой любую их комбинацию.
Иммуногенная композиция необязательно может содержать один или более стабилизаторов. Может применяться любой подходящий стабилизатор, включая углеводороды, такие как сорбит, маннит, крахмал, сахарозу, декстрин или глюкозу; белки, такие как альбумин или казеин; и буферы, такие как фосфат щелочного металла и подобные.
Часто является удобным иммунизировать птицу против множества заболеваний одним курсом лечения. Таким образом, в конкретных воплощениях иммуногенная композиция включает один или более дополнительных агентов, которые индуцируют иммунный ответ против других птичьих патогенов (например, вирусных, бактериальных или грибковых), необязательно иммунизирующих агентов, которые производят защитный иммунный ответ. Например, иммуногенная композиция может дополнительно включать иммунизирующий агент против кокцидиоза (такого как вызванного бактериями Eimeria), заболевания инфекционного бурсита, болезни Марека, болезни Ньюкастла, птичьего гриппа, птичьей оспы, птичьего реовируса, птичьего метапневмовируса, птичьего аденовируса, инфекционного бронхита, инфекционных заболеваний, вызванных бактериями видов Salmonella, Camplyobacter, Pasteurella, Hemophilus paragallinarum и/или Mycoplasma. Птичьи вакцины, подходящие для периода in ovo или после выведения птицы из яйца, хорошо известны из уровня техники и являются коммерчески доступными (например, вакцина BursaplexTM для заболевания бурсита; вакцина NewplexTM для болезни Ньюкастла, и вакцина InovocoxTM для кокцидиоза, все вакцины доступны от фирмы Embrex, Inc., и вакцина Марека HVT-SB-1 для болезни Марека, доступная от Merial). Иммуногенные композиции, включающие вакцинные агенты против обоих типов кокцидиоза (т.е. вызванного бактериями Eimeria) и некротического энтерита (т.е. вызванного бактериями C. perfengens) имеют конкретную пользу, так как известно, что воздействие бактерий Eimeria увеличивает восприимчивость птиц к некротическому энтериту путем нарушения желудочно-кишечной среды.
Таким образом, в качестве следующего аспекта изобретение охватывает способы совместного введения иммуногенной композиции, которая включает, по существу состоит из или состоит из эффективной иммунизирующей дозы иммунизирующего агента C. Perfringens и эффективной иммунизирующей дозы иммунизирующего агента, который обеспечивает защиту против одного или более других птичьих заболеваний (как описано выше). Множественные иммунизирующие агенты могут предлагаться в одном составе или могут вводиться одновременно или последовательно в любом порядке в отдельных композициях. Как обсуждалось выше, этот аспект изобретения конкретно применяется для совместного введения вакцин кокцидиоза и некротического энтерита.
В другом характерном воплощении сначала птицу иммунизируют против некротического энтерита и затем иммунизируют против кокцидиоза или наоборот. Обе иммунизации могут происходить in ovo, обе иммунизации могут происходить в период после выведения птицы из яйца или одна иммунизация может происходить в период после выведения птицы из яйца. Например, в одном иллюстративном воплощении птицу иммунизируют против кокцидиоза in ovo и затем иммунизируют против некротического энтерита в период после выведения птицы из яйца.
Изобретение также может быть применено на практике для введения иммунизирующего агента C. perfringens in ovo или в период после выведения птицы из яйца в соответствии с "in ovo питанием" птицы (смотри Патент США No. 6592878; полностью введенный сюда ссылкой). Например, согласно определенным воплощениям иммунизирующий агент C. perfringens и композиция питательных веществ и/или кишечный модулятор вводятся птице in ovo, необязательно введением в амнион. Необязательно вакцины против других инфекционных агентов вводятся in ovo и/или также в период после выведения птицы из яйца (как описано выше). Иммунизирующий агент C. perfringens и композиция питательных веществ и/или кишечный модулятор могут вводиться одновременно в одной или в отдельных композициях.
Следующие воплощения настоящего изобретения могут включать композицию, включающую антиген, выбранный из группы, состоящей из альфа-анатоксина C. Perfringens, антигенного фрагмента из альфа-анатоксина C. Perfringens, инактивированного антигенного фрагмента из альфа-токсина C. Perfringens и любой их комбинации; где одна или более дозировок, составляющая от примерно 0,1 до примерно 1,0 мл (например, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, или 1,0) на дозу композиции являются достаточными для индукции по меньшей мере 0,5 единиц антитоксина (A.U.) антитела к альфа-токсину на 1 мл антисыворотки птицы (например, цыпленка), вакцинированной с применением вакцины. В некоторых воплощениях композиция может индуцировать по меньшей мере примерно 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5 или 10 A.U. антитела к токсину на 1 мл антисыворотки птицы.
При использовании здесь термины "единица антитоксина" или "A.U." антитела к токсину на 1 мл антисыворотки (которые могут использоваться взаимозаменяемо с терминами единицы "теста нейтрализации антитоксина" или "TNT" единицы), определяются при помощи способности сыворотки нейтрализовать токсические эффекты токсина с использованием биотеста мыши. В этом тесте известное количество токсина, установленное с помощью международных стандартов, которые известны из уровня техники, смешивают с серийными разведениями сыворотки из вакцинированных животных. Смесь инкубируют один час при комнатной температуре и затем инъецируют внутривенно мышам. Мыши выживают, если токсин полностью нейтрализуется с помощью сыворотки, в противном случае они умирают. Единицы антитоксина или титр определяются как обратно пропорциональная величина наибольшего разведения сыворотки, при котором нейтрализуется токсин.
В следующих воплощениях композиция может включать антиген в виде бесклеточного препарата. В других воплощениях антиген может представлять собой альфа-анатоксин в виде супернатанта альфа-анатоксина C. perfringens. В определенных воплощениях композиция может включать, по существу состоять из и/или состоять из антигена, который может представлять собой альфа-анатоксин C. perfringens Типа A и/или альфа-анатоксин C. perfringens Типа C. В некоторых воплощениях композиция по этому изобретению может включать бета-токсин C. perfringens, бета-2-токсин C. perfringens, энтеротоксин C. perfringens, эпсилон-токсин C. perfringens, йота-токсин C. perfringens, каппа-токсин C. perfringens, лямбда-токсин C. Perfringens, тета-токсин C. perfringens, геморрагический токсин C. sordelli, летальный токсин C. sordelli, токсин A C. difficile, токсин В C. difficile, альфа-токсин C. septicum, альфа-токсин C. novyi, бета-токсин C. novyi и/или любой их комбинации. Такая композиция может дополнительно включать, по существу состоять из и/или состоять из одного или более вирусных антигенов, одного или более бактериальных антигенов, и/или одного или более паразитных антигенов, как описано здесь.
Настоящее изобретение далее объясняется в следующих не ограничивающих примерах. В этих Примерах "мкл" обозначает микролитры, "мкг" обозначает микрограммы, "мл" обозначает миллилитры, "кс" обозначает кубические сантиметры, "мм" обозначает миллиметры, "мМ" обозначает концентрацию в миллимолях, "мг" обозначает миллиграммы, "°C" обозначает градусы Цельсия и E18 и E19 обозначает эмбриональное развитие, соответствующее дням 18 и 19 соответственно.
ПРИМЕРЫ
Пример I. Иммунный ответ, следующий за in ovo вакцинацией с помощью коммерчески доступных вакцин Clostridium perfringens Типа C&D (Siteguard G & Vision CD).
План эксперимента
В бройлерные яйца инъецировали вручную in ovo коммерчески доступный анатоксин Clostridium perfringens (Siteguard® G) и бактерин-анатоксиновые вакцины (вакцина Vision® CD®). Выведенных из яйца птиц выращивали для измерения ответа антител. Осуществляли оценку области инъекции. В день 0 (выведение птицы из яйца) выбирают группы для обработки, получающие вакцинацию в период после выведения птицы из яйца. Всех птиц помещают в клетки (5 птиц/на клетку). Каждую клетку снабжают питанием обычного стартера для бройлеров. На 14 день птиц переключают на питание для роста бройлеров. Птиц умерщвляли с помощью кровоизвлечения, и сыворотку тестировали на ответ антител с помощью теста нейтрализации токсина сывороткой.
Материалы и методы
Материал для инъекции (Siteguard
®
G):
Siteguard® G (адъювант не известен) представляет собой анатоксиновую вакцину C. perfringens типа C & D, производимую фирмой Schering-Plough. Она защищает овец и крупный рогатый скот от заболеваний, вызванных токсинами типа C & D. Для вакцинации вводят подкожно (SQ) или внутримышечно (IM) 4,0 мл (крупный рогатый скот) или 2,0 мл (овцы) вакцины. Бустерные вакцинации водят через три-четыре недели после исходной вакцинации и затем вводят ежегодно.
Материал для инъекции (Vision
®
CD
®
):
Vision® CD® (с подходящим адъювантом 'Spur®') представляет собой бактерин-анатоксиновую вакцину C. perfringens типа C & D, производимую фирмой Intervet. Она защищает крупный рогатый скот, овец и коз от энтеротоксемии, вызванной бактериями C. perfringens типа C & D. Для вакцинации вводят подкожно животному (крупный рогатый скот, овцы или козы) 2,0 мл вакцины. Через три-четыре недели после исходной вакцинации животное получает дополнительные 2,0 мл (SQ) и затем ревакцинируется ежегодно.
Протокол инъекций
В день E19 в бройлерные яйца инъецируют тестовое вещество, направленное или в амниотическую жидкость, или в тело эмбриона в каждом яйце. Кроме того, в день 0 после выведения птицы из яйца некоторые группы для обработки, инъецированные in ovo и способом, отличным от in ovo, получали вакцинацию или бустерную иммунизацию тестируемыми материалами. Для вакцинации в период после выведения птицы из яйца или бустерной иммунизации вводили 0,5 мл вакцины путем подкожной инъекции в спину или шею.
Область инъекции
В момент инъекции яйца, распределенные для оценки области инъекции, инъецировали красителем. Яйца затем умерщвляли и вскрывали для оценки места инъекции. Область инъекции анализировали с помощью отношения правдоподобия по критерию хи-квадрат. (таблица 1)
Кровоизвлечение
В дни 7, 14, 21 и 28 в период после выведения птицы из яйца кровь собирали от каждой индивидуальной птицы и объединяли в индивидуальные контейнеры для сбора крови (на группу для обработки). На 7, 14 и 21 день собирали ≤0,5 мл крови или через крыло или через яремную вену. На 28 день собирали ≥0,5 мл крови посредством пункции сердца. Кровь затем инкубировали при комнатной температуре в течение одного часа. Затем образцы крови помещали в настольную центрифугу и центрифугировали при 2400 об/мин в течение 10 минут. Как только центрифугирование завершалось, удаляли сыворотку из каждого образца крови и хранили в 96-ти луночных планшетах (при 2-8°C или -70°C) для будущих оценок иммунного ответа.
Тест нейтрализации токсина (бета) Clostridium perfringens типа С у мышей: приготовление образца для инокуляции мышей
A. Материалы
1. Токсин (бета) Clostridium perfringens Типа С - CVBL, лот №. IRP513(04).
2. Антитоксин (бета) Clostridium perfringens Типа С - CVBL, лот №. IRP486.
3. Разбавитель (пропись) - 1% пептон, 0,25% NaCl pH 7,2, BBL лот №. 0510,06 (ссылка), NB - NB 140 p. 87.
4. Образцы сыворотки цыплят - EMHE1381, NB 140 p. 80 a. Образцы №. 7, 8, 9, 10A, 10B, 11A, 11B, 12A, 12B, 13A, 14A, 15A.
5. Стерильные пробирки на 3 мл и 1,8 мл.
B. Методы:
1. Разведение стандартного бета-антитоксина 1:50 в разбавителе, с общим объемом 10 мл.
a. Размораживают бета-антитоксин при комнатной температуре.
b. Смешивают 200 мкл бета-антитоксина и 9,8 мл разбавителя = 1:50.
c. Держат на льду.
2. Разведение бета-токсина 1:120 в разбавителе, с общим объемом 12 мл.
a. Размораживают бета-токсин при комнатной температуре.
b. Смешивают 200 мкл бета-токсина и 1,8 мл разбавителя = 1:10.
c. Смешивают 1 мл разведенного 1:10 бета-токсина с 11 мл разбавителя = 1:120.
d. Держат на льду.
3. Приготовление контрольного образца L0.
a. Смешивают 0,5 мл бета токсина (разведение 1:120) с 0,5 мл разбавителя.
b. Добавляют 1 мл бета антитоксина (разведение 1:50).
c. Смешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 часа.
d. Держат образцы на льду.
4. Приготовление контрольного образца L+.
a. Смешивают 0,8 мл бета токсина (разведение 1:120) с 0,2 мл разбавителя.
b. Добавляют 1 мл бета антитоксина (разведение 1:50).
c. Смешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 часа.
d. Держат образцы на льду.
5. Приготовление 12 тестовых образцов сыворотки.
a. Смешивают 3.25 мл бета токсина (разведение 1:120) с 3,25 мл разбавителя.
b. В каждую из двенадцати пробирок на 1,8 мл добавляют 0,5 мл токсина из образцов стадии 5.a.
c. Метят каждую пробирку с помощью No. образца и No. группы для обработки.
d. Добавляют 0,5 мл каждой неразведенной сыворотки цыпленка в помеченную соответствующим образом пробирку.
e. Смешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 часа.
f. Хранят образцы на льду.
6. Все не использованные образцы хранят при 2-7°C.
Активности по предварительному исследованию
Двадцать восемь самок швейцарских белых мышей (CD-1) (с весом тела 16-20 граммов) были приобретены для использования в этом исследовании. Мыши были отправлены поставщиком (Charles River Laboratories) и транспортированы в лабораторию для клинических испытаний.
Мышей помещали в клетки, размещая по 2 мыши на клетку для групп с использованием сыворотки цыплят и 4 клетки по 5 мышей на клетку для контрольных групп. Мышей держали в течение периода акклиматизации, составляющего 5 дней, перед началом исследования в день 0. Мышей размещали и следили за ними согласно стандартным плановым процедурам, и кормили с использованием стандартного лабораторного питания, и предлагали воду ad libitum.
День 0
Мышей обследовали на предмет нормального здоровья и внешнего вида, и выбирали для участия в тестах семьдесят шесть мышей. Две мыши не участвовали в исследовании и были умерщвлены. Каждой мыши инъецировали внутривенно (IV) с помощью иглы 26g × 3/8 в хвостовую вену согласно группам для обработки, описанным в Плане Исследования. Осуществляли мониторинг мышей дважды в день на предмет признаков шока, боли или мучений по очевидным следующим признакам:
Летаргия
Суета
Жесткий/взъерошенный волосяной покров
Искривленная поза
Атаксия
Анорексия или неспособность добраться до пищи или воды
Умирающих мышей умерщвляли посредством превышения дозы CO2 согласно стандартным плановым процедурам.
День 1 (приблизительно через 24 часа после инокуляции)
За мышами наблюдали и фиксировали количество случаев смертности.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Положительный специфичный ответ антител детектировался в сыворотке, полученной от птиц, вакцинированных in ovo (направленно в тело эмбриона) коммерческой вакциной бактерин-анатоксина C. Perfringens, с введением или в отсутствии бустерной дозы в период после выведения птицы из яйца с использованием теста нейтрализации токсина сывороткой. Эти данные указывают на то, что введение вакцины бактерин-анатоксина C. perfringens in ovo выявляет частичную защиту, и введение in ovo с последующим введением бустерной дозы в период после выведения птицы из яйца обеспечивает полную защиту против бактерий C. perfringens. (таблица 2).
ПРИМЕР II. Иммунный ответ, следующий за in ovo вакцинацией с помощью экспериментального препарата вакцины, содержащего рекомбинантный альфа токсин
План эксперимента
Вышеописанное исследование проводили для определения, может ли детектироваться гуморальный иммунный ответ (ответ антител) у бройлерных птиц после вакцинаций in ovo, in ovo + вакцинация после выведения птицы из яйца или вакцинаций после выведения птицы из яйца рекомбинантным альфа-токсином Clostridium perfringens (SEQ ID NO:6) (предоставленного Dr. Glenn Songer, Dept. of Veterinary Science and Microbiology, The University of Arizona), дополненным адъювантом, представляющим собой неполный адъювант Фрейнда и Quil-A. Стратегия иммунизации включала направленную в тело эмбриона вакцинацию in ovo в день E18, а также осуществляли вакцинацию на 7 день после выведения птицы из яйца. Ответ антител оценивали у птиц в возрасте 28 дней.
В день E18 в бройлерные яйца инъецировали in ovo вручную или контрольные вещества (Quil A; Accurate Chemical & Scientific Corporation, продукт # AP04991, класса адъювантов, лот # L77-238), эмульгированные с помощью неполного адъюванта Фрейнда (IFA; Rockland, лот # 16235), или рекомбинантный альфа-токсин C. perfringens (55 или 60 мкг/на дозу вместе с адъювантом Quil A + IFA (13 или 15 мкг/на дозу). Оценку области инъекции осуществляли с помощью инъекции красителя. В день 0 (выведение птицы из яйца) птиц помещают в клетки (5 птиц/на клетку). Птицы получают питание обычного стартера для бройлеров. Кроме того, некоторых птиц вакцинировали на 7 или 17 день согласно выбранному типу обработки (0,2 мл вакцины путем подкожной инъекции в спину или шею). Сыворотку птицы затем оценивали на специфичный ответ антител посредством вестерн-блот анализа.
Материалы и методы
Инъекция:
В день E18 в бройлерные яйца инъецировали тестовые вещества (альфа-токсин Clostridium perfringens + вакцинный адъювант), направленные в тело эмбриона в каждом яйце. Кроме того, на 7 или 17 день после выведения птицы из яйца некоторые группы для обработки, инъецированные in ovo и способом, отличным от in ovo, получали вакцинацию (таблица 3).
Область инъекции (SOI):
В момент инъекции яйца, распределенные для оценки SOI, инъецировали красителем. Яйца затем умерщвляли и вскрывали для оценки SOI (таблица 4).
Сбор сыворотки:
В дни 7, 14, 21 и 28 в период после выведения птицы из яйца, кровь собирали от каждой индивидуальной птицы и помещали в индивидуальные контейнеры для сбора крови. На 7, 14 и 21 день собирали ≤0,5 мл крови или через крыло, или через яремную вену. На 28 день собирали ≥0,5 мл крови посредством пункции сердца. Образцы крови затем инкубировали при комнатной температуре в течение одного часа. Затем образцы крови центрифугировали, и удаляли сыворотку, и хранили в 96-ти луночных планшетах (при 2-8°C или -70°C) для будущих оценок иммунного ответа.
Вестерн-блот тест:
SDS-электрофорез в блоке геля проводили согласно методу Laemmli (Nature 227:680-685 (1970)), как описано в публикации O'Farrell (J. Biol. Chem. 250:4007-4021 (1975), second dimension), с использованием 10% акриламидного блока геля (125 мм длиной × 150 мм шириной × 0,75 мм толщиной) с наложением 25 мм концентрирующего геля. Электрофорез проводили при 12 мА примерно 3,5 часов или до тех пор, пока фронт красителя бромфенолового не мигрирует к концу блока геля. После электрофореза в блоке геля, гель для проведения процедуры блотинга помещали в буфер для переноса (12,5 мМ Tris, pH 8,8, 96 мМ глицина, 20% MeOH) и осуществляли перенос на мембрану PVDF в течение ночи при 200 мА и приблизительно 100 вольт/на два геля. Мембрану PVDF окрашивали с помощью красителя Кумасси синего и сушили между листами фильтровальной бумаги.
Мембрану PVDF окрашивали с помощью красителя Куммасси бриллиантового синего R-250, сканировали на столе перед и после вырезания индивидуальных полос. Каждую полосу блота помещали в индивидуальный контейнер и блокировали в течение двух часов в присутствии 5% обезжиренного сухого молока в солевом растворе с буфером Tris Tween-20 (TTBS) и промывали в растворе TTBS.
Блоты затем инкубировали с первичными антителами (разведенными 1:100 в присутствии 2% обезжиренного сухого молока в TTBS) в течение ночи и промывали 3×10 минут в TTBS.
Полосу 1 блота (положительный контроль) затем помещали в раствор с вторичными антителами [кроличьи антикозьи IgG-HRP (Sigma Cat. # A-5420 и лот #034K4858), разведенными 1:5000 в 2% NFDM в TTBS] в течение двух часов, промывали 3×10 минут в TTBS, обрабатывали с помощью ECL и экспонировали с рентгеновской пленкой.
Оставшиеся полосы блота затем помещали индивидуально в раствор со вторичными антителами [кроличьи антикуриные IgG-HRP (Bethyl Cat. # A30-107P и лот # A30-107P-3), разведенными 1:2000 в 2% обезжиренном сухом молоке в TTBS] в течение двух часов, промывали 3×10 минут в TTBS, обрабатывали с помощью ECL и экспонировали с рентгеновской пленкой.
Результаты вестерн-блот исследования представлены в таблице 5.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Специфичный ответ антител детектировали у птиц, вакцинированных in ovo (направленно в тело эмбриона) рекомбинантным альфа-токсином, дополненным адъювантом Quil-A & IFA, с введением или в отсутствии бустерной дозы в период после выведения птицы из яйца. Эти данные демонстрируют, что in ovo вакцинация с помощью рекомбинантного альфа-токсина может выявить у бройлеров иммунный ответ против альфа токсина C. perfringens.
ПРИМЕР III
Коммерчески доступные инактивированные вакцины для болезни Ньюкастла в виде масляных эмульсий были приобретены у Maine Biological Laboratories. Вакцину вводили in ovo в день E18, используя путь введения через амниотическую жидкость, или вводили in ovo в день E19, используя путь введения через тело эмбриона. Направленное введение в область амниотической жидкости и в область тела эмбриона подтверждалось с помощью проведения анализа области инъекции с использованием красителя в день E18 или E19. Направленное введение в область амниотической жидкости выполняли с использованием тупой иглы (группа 2). Направленное введение в область тела эмбриона проводили с использованием острой 1,25-дюймовой иглы (группа 3). Сыворотку крови собирали у птиц в возрасте 14, 21 и 28 дней и анализировали с использованием ELISA (Idexx, Inc.) на антитела, специфичные к вирусу болезни Ньюкастла (NDV). Различных индивидуальных птиц умерщвляли путем кровоизвлечения в день сбора крови.
Анализ области инъекции группы E18 показал, что 22/24 яиц были инъецированы в амниотическую жидкость, 22/24 - в аллантоисную жидкость и 0/24 - в тело эмбриона. Анализ области инъекции группы E19 показал, что 7/10 яиц были инъецированы в тело эмбриона и 3/10 яиц были инъецированы в амниотическую жидкость.
В таблице 6 показан ответ антител на вирус болезни Ньюкастла, следующий за in ovo вакцинацией цыплят. В таблице 7 показаны данные по проценту выведения птиц из яйца.
Исследование демонстрирует, что иммунный ответ развивающегося эмбриона серьезно подвержен влиянию со стороны области введения in ovo инактивированной вакцины против болезни Ньюкастла в виде масляной эмульсии (таблица 6). Эмбрионы, вакцинированные в амниотическую жидкость, которая окружает тело эмбриона, не отвечали выработкой антител, специфичных для болезни Ньюкастла. С другой стороны, эмбрионы, вакцинированные непосредственно в тело эмбриона, давали сильный ответ антител, который увеличивался в возрасте 28 дней. В целом 34 птицы были умерщвлены путем обескровливания в ходе этого исследования, и 26/34 имели положительный ответ антитела к вирусу болезни Ньюкастла (таблица 6). 26/34 представляют собой 76,5%, что очень близко к результатам исследования области инъекции, где 70% эмбрионов, иммунизированных в день E19, были инъецированы в тело эмбриона. Процент выведения птицы из яйца находился в пределах нормы для групп, подвергнутых и не подвергавшихся обработке (таблица 7).
ПРИМЕР IV
Коммерчески доступные инактивированные вакцины для болезни Ньюкастла в виде масляных эмульсий были приобретены у Maine Biological Laboratories. Вакцину вводили in ovo в день E19, используя путь введения через тело эмбриона или путь подкожного введения после выведения птицы из яйца. Направленное введение в область тела эмбриона проводили с использованием острой 1,25-дюймовой иглы (группа 3). Вакцинацию птиц после выведения из яйца проводили путем инъекции вакцины подкожно в заднюю часть шеи только что выведенных цыплят (группа 2). Сыворотку крови собирали у птиц в возрасте 21 дня и анализировали с использованием ELISA (Idexx, Inc.) на антитела, специфичные к вирусу болезни Ньюкастла (NDV). Результаты показаны в таблице 8. Данные, представленные в таблице 8, показывают, что эмбрионы, вакцинированные в тело с помощью вакцины против болезни Ньюкастла в виде масляной эмульсии, дают такой же ответ, как и цыплята, вакцинированные с помощью стандартной процедуры вакцинации птиц после выведения из яйца. Процент выведения птиц из яйца находился в пределах нормы для групп, подвергнутых и не подвергавшихся обработке (таблица 9).
Данные, представленные в примерах III и IV выше, показывают, что направленное попадание в тело эмбриона является необходимым для стимулирования активного иммунного ответа на инактивированный антиген (в этом случае на вирус болезни Ньюкастла). Эти данные также указывают на то, что инъекция инактивированного антигена в масляной эмульсии адъюванта в тело эмбриона не оказывает негативного влияния на эмбрионы.
Инъекция in ovo (перед выведением птицы из яйца) в тело эмбриона может быть выполнена вручную с использованием шприца и иглы или с помощью автоматизированного оборудования, также использующего иглы. В примерах, приведенных здесь, шприц и игла использовались вручную для введения вакцины в тело эмбриона или в амниотическую жидкость (только пример III), окружающую тело эмбриона. Для выполнения инъекции в тело эмбриона иглу вставляли через отверстие в скорлупе яйца в воздушную камеру яйца. Вставленная игла проходила сквозь мембрану воздушной камеры, аллантоисные мембраны и жидкость, и, наконец, в полость амниона, где находится тело эмбриона. Затем игла проникала в тело эмбриона, и вводилась вакцина. Инъекции в тело эмбриона могут осуществляться в многочисленные области тела эмбриона и включают подкожное введение вакцины, интрадермальное, внутривенное, внутримышечное и внутрибрюшинное введение вакцины, а также любую комбинацию этих областей введения. Кроме того, инъекции в тело эмбриона могут осуществляться в голову, плечо, крыло, спину, грудь или лапу, включая любые комбинации. Инъекции в тело эмбриона не включают исключительные случаи введения вакцины в воздушную камеру, аллантоисную полость, амниотическую жидкость или в альбумин.
Инъекция в тело эмбриона in ovo может быть проведена с использованием иглы длиной в пределах от ¾ дюйма до 4 дюймов и с калибром в пределах от 15 до 28. Концы игл могут находиться в пределах от очень острых (подкожных) до острых.
В примерах III и IV вакцина против вируса болезни Ньюкастла применялась в качестве антигенной модели. Однако ожидается, что любой подходящий состав вакцины в виде масляной эмульсии с достаточной антигенной массой будет подобен тестированной вакцине против болезни Ньюкастла. Таким образом, согласно способам по настоящему изобретению, описанным здесь, могут быть введены in ovo непосредственно в тело эмбриона вакцины против инфекционного бурсита, птичьего гриппа, инфекционных бронхитов, инфекционного вируса куриной анемии, ларинготрахеита, птичьего реовируса, аденовируса, ротавируса, астровируса, инфекционной гепатомиелопоэтической болезни, синдрома снижения несучести, инфекции Escherichia coli, инфекции бактериями вида Mycoplasma, инфекции бактериями вида Salmonella, инфекции бактериями вида Campylobacter, инфекции бактериями вида Clostridium, инфекции бактериями вида Haemophilus, инфекции бактериями вида Pasteurella. Вакцины, полученные из этих агентов, могут представлять собой цельную клетку или субъединицу. Вакцины, полученные из этих агентов, могут быть получены традиционными способами в ростовой среде, яйцах или тканевых клеточных культурах и/или могут быть получены способами рекомбинантной ДНК согласно методам, хорошо известным из уровня техники. Кроме того, ожидается, что любой агент заболевания, который может быть получен с достаточной эффективной массой для эффективной вакцинации цыплят, при инактивации также будет эффективно вакцинировать эмбрионы in ovo, если будет введен непосредственно в тело эмбриона.
Адъювант, применяемый в тестируемой вакцине в этих примерах, представлял собой обычную коммерческую масляную эмульсию. Ожидается, что не масляные эмульсии инактивированных вакцин с адъювантами, отличными от масляных, производят активный иммунный ответ при введении непосредственно в тело эмбриона в период перед выведением птицы из яйца. Подходящие адъюванты включают, но не ограничены ими, минеральные гели, полианионы, плюрониловые полиолы, производные сапонина, лизолецитин и другие подобные поверхностно-активные вещества, гликозиды и все типы масел и их комбинацию.
ПРИМЕР V
Леггорны, свободные от специфичных патогенов (SPF), вакцинировались in ovo следующим образом - группа 1: фосфатно-солевой буфер (PBS); группы 2 и 3: 0,3×109 инактивированный NDV EID50/на дозу в PBS; группа 4: 0,3×109 инактивированный NDV EID50/на дозу с адъювантом квасцы-депо (Imject, Pierce; гидроксид алюминия и гидроксид магния); группа 5: коммерческая масляная эмульсия вакцины для NDV. В возрасте 11 дней субъекты группы 3 получали вторую дозу NDV в PBS с помощью подкожной инъекции. Вакцины, полученные in ovo, были направлены в тело эмбриона, и анализ области инъекции проводили на отдельной группе одинаковых яиц для оценки процента эмбрионов, инъецированных непосредственно в тело эмбриона. Вакцинацию in ovo проводили на 19 день инкубации с помощью 1,25-дюймовой иглы с калибром 23. Четырнадцать птиц на группу помещали в клетки и выращивали до возраста 21 день.
Образцы сыворотки собирали у птиц в возрасте 21 день и тестировали на IgG антитело к NDV с помощью ELISA (Idexx, Inc.). Образцы сыворотки из групп 2, 4 и 5 также тестировали на специфичное к NDV антитело с помощью ингибирования гемагглютинации (HI) с использованием четырех HA единиц. Количество образцов, тестированных с помощью HI, отличалось от количества тех образцов, которые тестировали с помощью ELISA, потому что нескольких сывороток из нескольких образцов было не достаточно для проведения теста HI. Предполагалось, что птицы показывали измеряемый ответ антител (т.е. сероконвертировались) по отношению к вакцинации, если образец сыворотки имел титр ELISA ≥200 или титр HI ≥3,0 Log2 (т.е. титр 1:8).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Анализ области инъекции показал, что инъекции в тело эмбриона соответствовали 78% всех инъекций (таблица 10).
Процент выведения птиц из яйца и степень сероконверсии по отношению к NDV по измерениям с помощью ELISA показаны в таблице 11. В таблице 12 показано количество птиц, которые были сероконвертированы с использованием теста HI.
Исходя из этих исследований были отмечены следующие ключевые моменты: 1) NDV-антиген в PBS не стимулировал измеряемой реакции антител с помощью NDV ELISA, даже когда инактивированный NDV-антиген субъекты получали дважды, как в группе 3 (один раз in ovo и снова в возрасте 11 дней); 2) NDV-Квасцы (группа 4) стимулировала сероконверсию у 8/14 птиц при измерении с помощью ELISA, в то время как коммерческая вакцина в виде масляной эмульсии (группа 5) стимулировала сероконверсию у 10/13 птиц при измерении с помощью ELISA; 3) NDV-квасцы (группа 4) стимулировала сероконверсию у 12/14, при измерении с помощью HI, в то время как вакцина в виде масляной эмульсии стимулировала сероконверсию у 11/11 птиц, при измерении с помощью HI; и 5) Коммерческая вакцина против болезни Ньюкастла в виде масляной эмульсии (группа 5) стимулировала более сильный ответ антител, чем вакцина NDV-Квасцы (группа 4). В примере III показано, что при введении in ovo антигена, присутствующего в масляной эмульсии депо-адъюванта, требуется, чтобы вакцина была введена в тело эмбриона для стимулирования измеряемой реакции антител с помощью ELISA. В настоящем примере анализ области in ovo инъекции показал, что 78% яиц получили вакцину непосредственно в тело эмбриона.
ПРИМЕР VI
Исследование проводили с использованием SPF леггорнов для определения того, стимулирует ли адъювант квасцы-депо иммунный ответ при введении in ovo. Тестируемые группы представляли собой следующие группы: группа 1: фосфатно-солевой буфер (PBS) in ovo; группы 2 и 3: 1,2×109 EID50 инактивированного β-пропиолактоном NDV/на дозу в PBS in ovo; группа 4: введение in ovo 1,2×109 EID50 инактивированного β-пропиолактоном NDV/на дозу с квасцами, в соотношении квасцов к антигену NDV 30%:70%. Используемые квасцы представляли собой коммерческий раствор гидроксида алюминия и гидроксида магния (Imject, Peirce). Группа 3 получила дополнительную дозу антигена NDV в PBS в возрасте 11 дней путем подкожной инъекции. Введение вакцины in ovo проводили на 19 день инкубации с использованием 1,25-дюймовой иглы с калибром 23. Вакцины вводили in ovo в тело эмбриона, и анализ области инъекции проводили на отдельной группе одинаковых яиц для оценки процента эмбрионов, инъецированных непосредственно в тело эмбриона. Образцы сыворотки собирали у птиц в возрасте 21 день и тестировали на IgG антитело к NDV с помощью ELISA (Idexx, Inc.). Предполагалось, что птицы показывали измеряемый ответ антител (т.е. сероконвертировались) по отношению к вакцинации, если образец сыворотки имел титр ELISA >200.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Анализ области инъекции показал, что инъекции в тело эмбриона соответствовали 81% всех инъекций (таблица 13).
Процент выведения птиц из яйца и степень, и величина сероконверсии против вируса болезни Ньюкастла показаны в таблице 14.
В этих исследованиях представлены следующие ключевые моменты: 1) Эмбрионов инъецировали в день E19, и данные анализа области инъекции показали, что 81% эмбрионов были инъецированы в тело эмбриона; и 2) В этом исследовании квасцы смешивали с инактивированным с помощью β-пропиолактона NDV в соотношении 30% к 70%, и в этом состояло отличие от исследования, описанного здесь в примере V, в котором инактивированный нагреванием NDV смешивали в соотношении 50% квасцов и 50% антигена NDV. Отличие в иммунных ответах в двух исследованиях может быть объяснено благодаря отличиям используемых антигенов NDV и/или благодаря отличию тестируемых соотношений квасцов к антигену, а также благодаря отличиям в анализе ELISA, используемом для измерения антител.
В примере III показано, что в случае антигена, присутствующего в масляной эмульсии депо-адъюванта, требуется, чтобы вакцина была введена в тело эмбриона для стимулирования измеряемого ответа антител с помощью ELISA. В этом исследовании анализ области инъекции показал, что 81% яиц были инъецированы в тело эмбриона, и на основе этих данных ожидается, что приблизительно 11 из 14 яиц, вакцинированных in ovo, будут давать ответ антител. Действительное количество яиц, которые давали ответ антител, составило девять из четырнадцати.
ПРИМЕР VII
Коммерческую вакцину болезни Ньюкастла в виде масляной эмульсии вводили способом in ovo бройлерам. Это исследование определяло способность бройлеров отвечать на инактивированные антигены вируса болезни Ньюкастла при введении способом in ovo в амниотическую жидкость и способом введения внутрь эмбриона. Птиц умерщвляли путем кровоизвлечения в возрасте 13, 21, 26 и 35 дней, и титр антител к NDV определяли с использованием ELISA (Idexx, Inc.). Анализ области инъекции проводили в дни E18 и E19 с использованием красителя.
Данные по выведению птиц из яйца показаны в таблице 16. Процент выведения птиц из яйца был в норме при введении вакцины в виде масляной эмульсии в тело эмбриона.
Область инъекции (таблица 15) была очень точной, более чем 90% эмбрионов были инъецированы способом, указанным для типа обработки (таблица 16).
Данные по реакции антител, специфичных для вируса болезни Ньюкастла, показаны в таблице 17. Можно видеть, что птицы отвечали на антиген болезни Ньюкастла при введении вакцины in ovo в тело эмбриона или подкожно птенцу. Когда вакцину NDV вводили in ovo в амниотическую жидкость, реакции антител не следовало, что указывало на то, что вакцину следует вводить в тело эмбриона для стимулирования подходящего иммунного ответа.
Указанные примеры иллюстрируют настоящее изобретение, и их не следует понимать как его ограничение. Изобретение определяется следующими пунктами формулы изобретения с эквивалентами пунктов формулы изобретения, включенными сюда.
Таблица 1 | ||||||
Процент выведения птицы из яиц и область инъекции | ||||||
Тип птиц: бройлеры # Инъецированных яиц/групп для обработки: 40 (100 для SOI) Возраст Эмбриона: Е19 Иглы: 22g 1,00" и 23g 1,25" Инъецируемый объем: 1 мл |
||||||
Тип инъекции | % выведения птицы из яиц | Область инъекции | ||||
Контроль Болезнь Марека, разбавитель |
Siteguard G Анатоксин крупный рогатый скот/овцы |
Vision CD Бактерин-анатоксин крупный рогатый скот/овцы/козы |
% выведения птицы из яиц в зависимости от типа инъекции | Амниотическая жидкость | Тело эмбриона | |
Отрицательный контроль (прокол без инъекции) | N/A | N/A | N/A | 100% | ||
BR-E19 23g 1,25" |
95,0% | 75,0% | 82,5% | 84,2% | 1,1% | 97,9%b |
Яйца, в которые вводили вакцины Vision CD или Siteguard G, продемонстрировали незначительное снижение процентов выведения птицы из яиц по сравнению с яйцами, которым вводили контрольный материал (82,5% и 75,0% против 95,0%, соответственно). |
Таблица 2 | ||||||
Результаты теста нейтрализации сывороткой токсина | ||||||
# исследования | Тип птицы | Доза | Леч. | Описание | # здоровых мышей | Результат |
1 | SPF | - | - | Д0 сыворотка, отр. контр. |
0/2 | Достоверный отрицательный контроль. Нет выживших мышей, как ожидалось, что указывает на отсутствие специфичных Ab |
2 | SPF | 1 мл | 4 | Д49 сыворотка, гипериммунизация, положит. контр. (вакцинация + 2 бустерных дозы) |
2/2 | Достоверный положительный контроль. Обе мыши выжили, как ожидалось, что указывает на присутствие специфичных Ab |
3 | BR | 1 мл | 7 | Д28 сыворотка, анатоксин (Siteguard G), тело эмбриона in ovo |
0/2 | Нет защиты |
1 мл | 8 | Д28 сыворотка, анатоксин (Siteguard G), тело эмбриона, in ovo + бустерная доза после выведения птиц из яиц |
0/2 | Нет защиты | ||
1 мл | 11 | Д28 сыворотка, бактерин-анатоксин (Vision CD), тело эмбриона, in ovo |
1/2 1/2 |
Частичная защита | ||
1 мл | 12 | Д28 сыворотка, бактерин-анатоксин (Vision CD), тело эмбриона, in ovo+ бустерная доза после выведения птицы из яиц |
2/2 | Полная защита - удовлетворительный результат | ||
Вся сыворотка объединялась (~5 птиц/на группу) - Специфичный положительный ответ детектировали у птиц, вакцинированных in ovo (введение в тело эмбриона) с помощью вакцины бактерин-анатоксина C. perfringens (Vision CD), с последующей бустерной дозой в период после выведения птицы из яиц. Результаты предполагают низкую величину ответа антител (частичная защита) у птиц, вакцинированных in ovo индивидуально (без бустерной дозы в период после выведения птицы из яиц). - Отсутствие защиты наблюдалось в сыворотке птиц, вакцинированных с помощью вакцины анатоксина C. perfringens (Siteguard). |
Таблица 3 | |||
Краткое описание исследования | |||
Птица | Бройлер | ||
День инъекции | Е18, Д7 и Д17 | ||
Тип инъекции | Эмбрион +/- бустерная доза в период после выведения птицы из яиц (Д7), вакцинация только в период после выведения птицы из яиц (Д7), бустерная доза (Д17) | ||
Контроль | Нет инъекции (прокол) | ||
Тестируемые материалы | Инактивированный рекомбинантный альфа-токсин (SEQ ID NO:6), дополненный адъювантом Quil A + неполный адъювант Фрейнда | ||
Доза токсина | 55,2-60 мкг/0,2 мл |
Таблица 4 | |||||
Процент выведения птицы из яиц и область инъекции | |||||
Тип птиц: бройлеры # Инъецированных яиц/групп для обработки: 15-25 (100 для SOI) Возраст эмбриона: Е18 Иглы: 20g 1,5" Инъецируемый объем: 0,2 мл |
|||||
Тип инъекции | % Выведения птицы из яиц | Область инъекции | |||
Нет инъекции | Quil-A + ICFA | Рекомбинантный альфа- токсин + Quil-A + ICFA |
Амниотическая жидкость | Тело эмбриона | |
Нет инъекции Отр. контроль |
100% | ||||
20g 1,5" 0,2 мл |
67% | 96% | 27,84% | 72,16% | |
Процент выведения птицы из яиц, составляющий 96%, был достигнут, следуя условиям вакцинации in ovo с рекомбинантным альфа-токсином. Попадание в эмбрион в случае 72,16% инъекций было достигнуто с использованием иглы 20g 1,5". |
Таблица 5 | |||
Детекция специфичного ответа антител посредством вестерн-блот анализа | |||
Полоса | ID Образца | Описание | Результат |
1 | Положительный контроль - козьи антитела к альфа-токсину | Положительный контроль, объединенная сыворотка | + |
2 | Отрицательный контроль - Д0 SPF | Отрицательный контроль RP-967, объединенная сыворотка | - |
Д28 сыворотка | |||
3 | #1 | Обр. 4А - отрицательный контроль in ovo в виде носителя, объединенная сыворотка от 3 птиц | - |
4 | #2 | Обр. 5А - in ovo вакцинация эмбриона, объединенная сыворотка от 3 птиц | + |
5 | #3 | Обр. 5А - in ovo вакцинация эмбриона, объединенная сыворотка от 3 птиц | + |
6 | #4 | Обр. 6А - in ovo вакцинация эмбриона + вакцинация в период после выведения птицы из яиц, объединенная сыворотка от 3 птиц | + |
7 | #5 | Обр. 6А - in ovo вакцинация эмбриона + вакцинация в период после выведения птицы из яиц, объединенная сыворотка от 3 птиц | + |
8 | #6 | Обр. 2А - положительный контроль вакцинации в период после выведения птицы из яиц, объединенная сыворотка от 3 птиц |
+ |
- Представленные положительные и отрицательные контроли, как ожидалось, демонстрируют достоверность теста. - Специфичный ответ антител детектировали у птиц, вакцинированных in ovo (направленно в тело эмбриона) с составом, содержащим рекомбинантный альфа-токсин, вместе с или в отсутствие бустерной дозы в период после выведения птицы из яиц. |
Таблица 6 | |||||||
Ответ антител цыплят на вирус болезни Ньюкастла после направленного в определенную область введения in ovo инактивированной вакцины против болезни Ньюкастла в виде масляной эмульсии | |||||||
Gp | Путь введения вакцины | Возраст 14 дней | Возраст 21 день | Возраст 28 дней | |||
Значение титра | # пол./# тест.1 | Значение титра | # пол./# тест.1 | Значение титра | # пол./# тест.1 | ||
1 | Не вакцинировались | 7 | 0/10 | 1 | 0/12 | 23 | 0/12 |
2 | NDV вакцина in ovo, амниотическая жидкость | 1 | 0/10 | 1 | 0/12 | 1 | 0/12 |
3 | NDV вакцина in ovo, тело эмбриона | 909 | 7/10 | 3262 | 8/12 | 7819 | 11/12 |
1Количество птиц с положительным ответом антител к вирусу болезни Ньюкастла/количество тестируемых птиц |
Таблица 8 | |||
Ответ антител цыплят на вирус болезни Ньюкастла после внутриэмбрионального введения in ovo или подкожного введения в день выведения птенцов инактивированной вакцины против болезни Ньюкастла в виде масляной эмульсии | |||
Группа | Путь введения вакцины | Возраст 21 день | |
Значение титра | пол./# тест.1 | ||
1 | Буфер in ovo, тело эмбриона | 1 | 0/12 |
2 | NDV вакцина, подкожно, в момент выведения птицы из яиц | 3785 | 10/12 |
3 | NDV вакцина, in ovo, тело эмбриона | 3261 | 12/12 |
1Количество птиц с положительным ответом антител к вирусу болезни Ньюкастла/количество тестируемых птиц |
Таблица 11 | |||||
Процент выведения птицы из яиц и результаты NDV ELISA для птиц, вакцинированных in ovo с NDV антигеном, NDV антигеном вместе с квасцами или с вакциной NDV в виде масляной эмульсии | |||||
Группа | Вакцина | Бустерная доза на 11 день | Процент выведения птицы из яиц от общего количества (%) | Количество сероконвертированных птиц/общее количество тестируемых птиц | Значение титра для сероконвертированных птиц, полученное с помощью ELISA (в возрасте 21 день) |
1 | нет | Нет | 96 | 0/13 | Неприменимо |
2 | NDV | Нет | 77 | 0/14 | Неприменимо |
3 | NDV | Да | 86 | 0/14 | Неприменимо |
4 | NDV-квасцы | Нет | 88 | 8/14 | 1272 |
5 | NDV-OE** | Нет | 87 | 10/13 | 3038 |
** NDV-OE = коммерческая вакцина NDV в виде масляной эмульсии (LAHI) |
Таблица 12 | |||
Результаты ингибирования NDV гемагглютинации у бройлеров, вакцинированных in ovo с NDV антигеном вместе с квасцами или с вакциной NDV в виде масляной эмульсии | |||
Группа | Обработка | HI тест (log2) Значение ± стандартное отклонение |
Количество птиц с титром HI≥3/количество тестируемых птиц (в возрасте 21 дня) |
2 | NDV | 1,8±0,4 | 0/13 |
4 | NDV-квасцы | 3,8±1,1 | 12/14 |
5 | NDV-OE** | 8,9±2,2 | 11/11 |
** NDV-OE = коммерческая вакцина NDV в виде масляной эмульсии (LAHI) |
Таблица 13 | ||||||
Результат анализа области инъекции | ||||||
Обработка | Воздушная камера | Аллантоисный мешок | Амниотическая жидкость | Тело эмбриона | Желточный мешок | N |
23G×1,25" | 0% | 2,1% | 16,7% | 81,3% | 0% | 48 |
Таблица 14 | |||||
Процент выведения цыплят и результаты анализа ELISA для бройлерных цыплят, вакцинированных in ovo с помощью NDV антигена или NDV-квасцы | |||||
Номер группы | Антиген-адъювант | Бустерная доза на 11 день | Процент выведения птицы из яиц от общего количества (%) | Количество сероконвертированных птиц/общее количество тестируемых птиц | Значение титра для сероконвертированных птиц, полученное с помощью ELISA (в возрасте 21 день) |
1 | Нет | Нет | 97 | 0/11 | Неприменимо |
2 | NDV | Нет | 94* | 0/14 | Неприменимо |
3 | NDV | Да | 1/14 | 200 | |
4 | NDV-квасцы | Нет | 96 | 9/14 | 411 |
*Обе обработки с помощью NDV были из одной группы выведенных из яиц птиц |
Таблица 17 | ||||||
Ответ антител на NDV у бройлеров, иммунизированных in ovo с помощью NDV-вакцины в виде масляной эмульсии | ||||||
# группы | Описание1 | Путь введения | Титр антител на NDV в день, соответствующий возрасту | |||
13 | 21 | 26 | 35 | |||
1 | Не вакцинировались | NA | 14 | 10 | 24 | 14 |
2 | NDV в виде масляной эмульсии | Амниотическая жидкость in ovo | 5 | 8 | 23 | 34 |
3 | NDV в виде масляной эмульсии | Тело эмбриона in ovo | 14 | 1646 | 1645 | 2370 |
4 | NDV в виде масляной эмульсии | Подкожно в момент выведения птицы из яиц | 16 | 1057 | 1346 | 1852 |
1NDV в виде масляной эмульсии - композиция зависит от возраста цыплят, 1 доза в 0,1 мл |
Claims (22)
1. Способ иммунизации птицы против патогена, включающий введение in ovo во время последней четверти периода инкубации эффективной иммунизирующей дозы иммуногенной композиции, которая индуцирует иммунный ответ против патогена, где иммуногенная композиция вводится с помощью in ovo инъекции непосредственно в эмбрион и где композиция индуцирует иммунный ответ для лечения и/или предотвращения болезни Ньюкастла.
2. Способ по п.1, где композиция вводится непосредственно в ткань скелетной мышцы эмбриона.
3. Способ по п.2, где ткань скелетной мышцы выбрана из группы, состоящей из ткани мышцы груди и ткани мышцы задней части шеи.
4. Способ по п.1, где композиция вводится непосредственно в эмбрион - в голову, шею, плечо, крыло, спину, грудь, лапу или их комбинацию.
5. Способ по п.1, где композиция вводится эмбриону подкожно, интрадермально, внутривенно, внутримышечно, внутрибрюшинно или с помощью комбинации этих введений.
6. Способ по п.5, где композиция вводится эмбриону подкожно.
7. Способ по п.5, где композиция вводится эмбриону внутрибрюшинно.
8. Способ по п.1, где птица представляет собой цыпленка.
9. Способ по п.8, где композиция вводится на 15-20 день инкубации.
10. Способ по п.8, где композиция вводится на 18 или 19 день инкубации.
11. Способ по п.1, где композиция включает эмульсию вода-масло-вода.
12. Способ по п.1, где композиция вводится иглой, имеющей длину от 3/4 дюйма до 4 дюймов.
13. Способ по п.12, где игла имеет калибр в пределе от 15g до 18g.
14. Способ по п.12, где игла имеет тупой конец.
15. Способ по п.12, где игла имеет острый конец.
16. Способ по п.15, где игла имеет фаску с углом, который находится в пределе от примерно 10° до примерно 45°.
17. Способ по п.12, где игла проходит сквозь скорлупу большого конца яйца под углом наклона от примерно 1° до примерно 20° относительно длинной оси яйца.
18. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию введения бустерной дозы композиции птице в период после выведения птицы из яйца.
19. Способ по п.1, где композиция включает адъювант.
20. Способ по п.19, где адъювант включает производное алюминия, сапонин, минеральные гели, полианионы, плюрониловые полиолы, производные сапонина, лизолецитин и другие подобные поверхностно-активные вещества, гликозиды, все типы масел и любую их комбинацию.
21. Способ по п.1, дополнительно включающий введение in ovo иммунного стимулятора в любой момент во время инкубации, где иммунный стимулятор и композиция вводятся одновременно или последовательно в любом порядке.
22. Способ по п.1, где композиция вводится in ovo с помощью устройства для автоматизированной инъекции.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US78756706P | 2006-03-30 | 2006-03-30 | |
US60/787,567 | 2006-03-30 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008138702/15A Division RU2409385C2 (ru) | 2006-03-30 | 2007-03-29 | Способ иммунизации птицы против инфекции, вызванной бактериями clostridium |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010136629A RU2010136629A (ru) | 2012-03-10 |
RU2561673C2 true RU2561673C2 (ru) | 2015-08-27 |
Family
ID=38656020
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010136629/15A RU2561673C2 (ru) | 2006-03-30 | 2007-03-29 | Способы и композиции для вакцинации домашней птицы |
RU2008138702/15A RU2409385C2 (ru) | 2006-03-30 | 2007-03-29 | Способ иммунизации птицы против инфекции, вызванной бактериями clostridium |
RU2010136627/15A RU2010136627A (ru) | 2006-03-30 | 2010-08-31 | Способы и композиции для вакцинации домашней птицы |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008138702/15A RU2409385C2 (ru) | 2006-03-30 | 2007-03-29 | Способ иммунизации птицы против инфекции, вызванной бактериями clostridium |
RU2010136627/15A RU2010136627A (ru) | 2006-03-30 | 2010-08-31 | Способы и композиции для вакцинации домашней птицы |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US20070243212A1 (ru) |
EP (1) | EP2004220B1 (ru) |
JP (2) | JP5014413B2 (ru) |
KR (2) | KR101149687B1 (ru) |
CN (1) | CN101460192A (ru) |
AU (3) | AU2007245198B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0710023A2 (ru) |
CA (1) | CA2647939A1 (ru) |
ES (1) | ES2545265T3 (ru) |
HU (1) | HUE027091T2 (ru) |
IL (1) | IL194387A0 (ru) |
MX (1) | MX2008012651A (ru) |
PL (1) | PL2004220T3 (ru) |
PT (1) | PT2004220E (ru) |
RU (3) | RU2561673C2 (ru) |
WO (1) | WO2007126816A2 (ru) |
Families Citing this family (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101460192A (zh) * | 2006-03-30 | 2009-06-17 | 恩布里克斯公司 | 家禽疫苗接种的方法和组合物 |
EP2164862B1 (en) * | 2007-06-08 | 2015-07-22 | Australian Poultry CRC Pty Ltd | Clostridial toxin netb |
US8956628B2 (en) * | 2007-12-13 | 2015-02-17 | Zoetis Products Llc | Bacteriophage preparations and method of use thereof |
RU2011141499A (ru) * | 2009-03-13 | 2013-04-20 | Ван Де Вен Бехер Б.В. | Способ определения пола птиц |
KR101073991B1 (ko) * | 2009-10-27 | 2011-10-21 | 대한민국 | 국내사육 닭에서 유행하는 신규한 b형 조류메타뉴모바이러스 sc1509주 및 이의 용도 |
US8524249B2 (en) | 2009-12-15 | 2013-09-03 | University Of Saskatchewan | Vaccines for inclusion body hepatitis |
FR2970863B1 (fr) * | 2011-02-01 | 2014-01-17 | Desvac | Dispositif pour proceder a une inoculation d'un produit veterinaire dans l'aile d'une volaille |
CN102174444B (zh) * | 2011-02-28 | 2012-09-12 | 江苏省农业科学院 | 一种鸡胚同时增殖h9亚型禽流感病毒及禽巴氏杆菌的方法 |
HRP20231631T1 (hr) * | 2011-04-22 | 2024-03-15 | Wyeth Llc | Pripravci koji se odnose na mutantni toksin iz bakterije clostridium difficile i odgovarajući postupci |
RU2469321C1 (ru) * | 2011-11-03 | 2012-12-10 | Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии) | Способ выявления специфических антител к вирусу геморрагического энтерита индеек |
RU2490883C1 (ru) * | 2011-12-20 | 2013-08-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина" | Способ коррекции эмбрионального и постэмбрионального развития птицы l-лизином |
RU2490882C1 (ru) * | 2011-12-20 | 2013-08-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина" | Способ коррекции эмбрионального и постэмбрионального развития птицы |
AR089797A1 (es) * | 2012-01-27 | 2014-09-17 | Merck Sharp & Dohme | Vacunas contra clostridum difficile que comprenden toxinas recombinantes |
CN103655887A (zh) * | 2012-09-01 | 2014-03-26 | 黄丽琴 | 中药归芪强体增免粉与疫苗配合养鸡技术 |
CN103142731B (zh) * | 2013-03-09 | 2014-08-06 | 河北工程大学 | 一种治疗鸡包涵体肝炎的中药口服液 |
HUE062798T2 (hu) | 2013-10-17 | 2023-12-28 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Szelektív embrionális struktúra célzó és anyagszállító készülék |
FR3012964A1 (fr) * | 2013-11-12 | 2015-05-15 | Seppic Sa | Vaccins adjuves pour vaccination aviaire in ovo |
RU2573313C2 (ru) * | 2013-12-26 | 2016-01-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина) | Способ стимуляции роста и развития эмбрионов яичных кур путем йодированного трансовариального питания |
MX2016016885A (es) | 2014-06-24 | 2017-04-27 | Biogaia Ab | Administracion in ovo de cultivos probioticos. |
CN104164410B (zh) * | 2014-08-07 | 2016-07-13 | 哈尔滨博翱生物医药技术开发有限公司 | 一种鸡新城疫病毒毒株及其在制备鸡新城疫病疫苗中的应用 |
BR102015019875A2 (pt) * | 2015-08-18 | 2017-02-21 | Da Silva Bastos Cesar | complexo vacinal nutritivo para utilização exclusiva intra ovo, processo de obtenção do complexo e processo de aplicação simultânea de imunização e nutrição intra ovo de espécies avícolas |
AU2017296200A1 (en) * | 2016-07-11 | 2019-01-17 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Poultry probiotic vaccine compositions and methods of use thereof |
KR102026790B1 (ko) * | 2017-11-24 | 2019-10-01 | 대한민국 | 이온화한 아연을 포함하는 종란 부화율 향상용 조성물 및 이의 사용 방법 |
CN109602898B (zh) * | 2018-12-28 | 2022-02-22 | 江苏省农业科学院 | 一种产气荚膜梭菌α毒素基因工程疫苗及其制备方法 |
EP4003411A1 (en) * | 2019-07-30 | 2022-06-01 | Phibro Animal Health Corporation | A composition for mucosal administration to avians |
CN112675299B (zh) * | 2021-01-06 | 2023-10-20 | 黑龙江省百洲生物工程有限公司 | 一种防控鹅星状病毒复合佐剂灭活疫苗的制备方法 |
CN112841133B (zh) * | 2021-02-01 | 2022-04-05 | 四川农业大学 | 一种蛋鸡小肠肠炎模型的构建方法 |
CN113717292B (zh) * | 2021-09-27 | 2023-04-21 | 华中农业大学 | 一种针对鸡坏死性肠炎的融合蛋白疫苗及其制备方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4458630A (en) * | 1982-06-22 | 1984-07-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Disease control in avian species by embryonal vaccination |
US5688513A (en) * | 1991-07-12 | 1997-11-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Coccidiosis vaccines |
US6495146B1 (en) * | 1995-06-07 | 2002-12-17 | Pfizer Incorporated | In ovo vaccination against coccidiosis |
Family Cites Families (59)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US668254A (en) * | 1900-12-05 | 1901-02-19 | Charles W Dickinson | Float for fish-lines. |
US4040388A (en) | 1976-02-27 | 1977-08-09 | Agrimatic Corporation | Method and apparatus for automatic egg injection |
SU627611A1 (ru) * | 1977-09-30 | 1980-02-05 | В.П. Землякова | Вакцинный препарат в.п. земл ковой против клостридиозов животных и птиц |
US4292306A (en) | 1978-12-28 | 1981-09-29 | Faunce Frank R | Dentifrice with topical and systemic phosphate fluoride system |
US4593646A (en) | 1982-06-01 | 1986-06-10 | Agrimatic Corporation | Egg injection method and apparatus |
US4469047A (en) | 1983-10-25 | 1984-09-04 | Miller Gary E | Apparatus and method for injecting eggs |
US4806350A (en) * | 1986-04-18 | 1989-02-21 | Norden Laboratories, Inc. | Vaccine formulation |
US4681063A (en) | 1986-07-02 | 1987-07-21 | Embrex Inc. | High speed automated injection system for avian embryos |
US4903635A (en) | 1986-07-02 | 1990-02-27 | Embrex, Inc. | High speed automated injection system for avian embryos |
US4903625A (en) | 1988-01-12 | 1990-02-27 | Card-Monroe Corporation | Apparatus and method for producing a cut loop overlay of a loop pile base fabric in a single pass of the base fabric through the tufting machine |
US5057314A (en) * | 1988-09-30 | 1991-10-15 | Whitfill Craig E | Low molecular weight antiviral factors |
US5719267A (en) | 1989-10-31 | 1998-02-17 | Ophidian Pharmaceuticals Inc. | Clostridial toxin disease therapy |
US5158038A (en) | 1990-06-06 | 1992-10-27 | Sheeks Oliver B | Egg injection method, apparatus and carrier solution for improving hatchability and disease control |
US5695956A (en) | 1990-11-26 | 1997-12-09 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Clostridium perfingens type a enterotoxin toxoid and methods of preparation and use as a vaccine and therapeutic agent |
US5136979A (en) | 1991-09-25 | 1992-08-11 | Embrex, Inc. | Modular injection system for avian embryos |
EP0625007A4 (en) * | 1992-01-27 | 1997-02-26 | Univ North Carolina State | Gene transfer in birds by introduction of dna into muscle in ovo. |
AU671838B2 (en) * | 1992-05-20 | 1996-09-12 | Secretary of State for Defence of the United Kingdom of Great Britain and Northern Ireland, The | Clostridium perfringens vaccines |
ES2108278T3 (es) | 1992-06-25 | 1997-12-16 | Smithkline Beecham Biolog | Composicion de vacuna con coadyuvantes. |
US5427791A (en) * | 1992-08-05 | 1995-06-27 | Regents Of The University Of Minnesota | Embryonal vaccine against Newcastle disease |
DK0626452T3 (da) * | 1993-05-17 | 2000-02-14 | Akzo Nobel Nv | Vaccine mod infektion af Streptococcus suis |
JPH07206705A (ja) * | 1993-11-03 | 1995-08-08 | American Cyanamid Co | 生インオボ(in ovo)ワクチン |
US5339766A (en) | 1993-11-03 | 1994-08-23 | Embrex, Inc. | Method of introducing material into eggs during early embryonic development |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
MX9700170A (es) * | 1994-06-20 | 1997-04-30 | Los Estados Unidos De America | Inmunizacion in ovo de embriones de aves con vacunas de emulsion en aceite. |
US5817320A (en) * | 1994-06-20 | 1998-10-06 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Agriculture | In ovo immunization of avian embryos with oil-emulsion vaccines |
US5897475A (en) * | 1994-10-05 | 1999-04-27 | Antex Biologics, Inc. | Vaccines comprising enhanced antigenic helicobacter spp. |
US5744137A (en) * | 1995-02-06 | 1998-04-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Agriculture | Oil emulsion vaccines prepared with animal, vegetable, and synthetic oils using a mixture of nonionic surfactants |
US6743430B1 (en) * | 1995-03-29 | 2004-06-01 | Richard E. Parizek | Multicomponent vaccine containing clostridial and non-clostridial organisms in a low dose |
UA56132C2 (ru) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиция вакцины (варианты), способ стабилизации qs21 по отношению к гидролизу (варианты), способ приготовления вакцины |
DK0831897T3 (da) * | 1995-06-07 | 2001-04-30 | Pfizer | In ovo-vaccination mod coccidiosis |
SI0750907T1 (en) * | 1995-06-30 | 2002-08-31 | American Cyanamid Company | Stable macrolide and macrolide vaccine compositions |
GB9605222D0 (en) * | 1996-03-12 | 1996-05-15 | Secr Defence | Clostridium perfringens epsilon toxin vaccines |
CZ94899A3 (cs) * | 1996-09-30 | 1999-09-15 | Embrex, Inc. | Vakcinační přípravek použitelný při produkci aktivní imunity, použití a způsob jeho přípravy |
EP0848956A1 (en) * | 1996-12-17 | 1998-06-24 | Dimminaco Ag/Sa/Ltd. | In ovo vaccination against Newcastle Disease |
US6048535A (en) * | 1997-06-12 | 2000-04-11 | Regents Of The University Of Minnesota | Multivalent in ovo avian vaccine |
EP0892054B1 (en) * | 1997-06-20 | 2006-11-29 | Intervet International BV | Clostridium perfringens vaccine |
US6524592B2 (en) * | 1997-10-17 | 2003-02-25 | American Home Products Corporation | Veterinary vaccines |
US6627205B2 (en) * | 1997-12-01 | 2003-09-30 | Pfizer Incorporated | Ovo vaccination against coccidiosis |
UY25347A1 (es) | 1998-01-12 | 1999-05-14 | Embrex Inc | Procedimiento de inyeccion multiple para el tratamiento de embriones aviarios in ovo, y aparato automatizado para la inyeccion in ovo. |
US6286455B1 (en) | 1998-01-12 | 2001-09-11 | Embrex, Inc. | Automated in ovo injection apparatus |
US6019985A (en) * | 1998-02-27 | 2000-02-01 | Munova Corporation | Immunostimulation methods for providing disease protection in poultry |
US6506385B1 (en) | 1998-04-17 | 2003-01-14 | Embrex, Inc. | Live vaccines and methods of treatment therewith |
US6176199B1 (en) | 1998-10-20 | 2001-01-23 | Embrex, Inc. | Method for localizing allantoic fluid of avian eggs |
US6410222B1 (en) * | 1998-12-14 | 2002-06-25 | Juridical Foundation The Chemosero-Therapeutic Research Institute | In ovo vaccination of marek's disease type I virus |
US6244214B1 (en) | 1999-01-06 | 2001-06-12 | Embrex, Inc. | Concurrent in ovo injection and detection method and apparatus |
US6764687B1 (en) * | 1999-06-09 | 2004-07-20 | Akzo Nobel N.V. | Live attenuated bacteria for use in a vaccine |
US6682754B2 (en) * | 1999-11-24 | 2004-01-27 | Willmar Poultry Company, Inc. | Ovo delivery of an immunogen containing implant |
ZA200104596B (en) * | 2000-06-09 | 2001-12-06 | Akzo Nobel Nv | IBDV strain for in ovo administration. |
CN100475266C (zh) * | 2000-08-03 | 2009-04-08 | 北卡罗来纳州大学 | 经卵内喂养增强卵生物种的发育 |
US6834615B2 (en) | 2001-06-18 | 2004-12-28 | Embrex, Inc. | Method for localizing allantoic fluid of avian eggs |
ATE307606T1 (de) * | 2001-10-04 | 2005-11-15 | Ct Voor Onderzoek In Diergenee | Abgeschwächter mutantenstamm eines virus der newcastle-krankheit für eine in ovo impfung und dessen benutzung |
US6601534B2 (en) | 2002-01-09 | 2003-08-05 | Embrex, Inc. | Methods and apparatus for punching through egg shells with reduced force |
ATE423569T1 (de) | 2002-08-27 | 2009-03-15 | Dow Agrosciences Llc | Verwendung von hitzelabilem escherichia-coli- toxin als adjuvans bei geflügel |
US6981470B2 (en) | 2003-01-27 | 2006-01-03 | Embrex, Inc. | Methods and apparatus for supporting eggs during in ovo injection |
US7089879B2 (en) | 2003-09-09 | 2006-08-15 | Embrex, Inc. | Methods for manipulating air cells within avian eggs |
ES2422885T3 (es) | 2003-12-03 | 2013-09-16 | Zoetis P Llc | Vacunación in ovo de campylobacter en especies aviares |
US7165507B2 (en) | 2004-10-25 | 2007-01-23 | Embrex, Inc. | Methods and apparatus for accurately positioning a device within the subgerminal cavity of avian eggs |
MY149604A (en) * | 2005-04-18 | 2013-09-13 | Schering Plough Ltd | C.perfringens alpha toxoid vaccine |
CN101460192A (zh) * | 2006-03-30 | 2009-06-17 | 恩布里克斯公司 | 家禽疫苗接种的方法和组合物 |
-
2007
- 2007-03-29 CN CNA2007800201920A patent/CN101460192A/zh active Pending
- 2007-03-29 RU RU2010136629/15A patent/RU2561673C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-03-29 BR BRPI0710023-0A patent/BRPI0710023A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2007-03-29 MX MX2008012651A patent/MX2008012651A/es active IP Right Grant
- 2007-03-29 KR KR1020087026466A patent/KR101149687B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2007-03-29 US US11/729,678 patent/US20070243212A1/en not_active Abandoned
- 2007-03-29 RU RU2008138702/15A patent/RU2409385C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-03-29 EP EP07754139.9A patent/EP2004220B1/en active Active
- 2007-03-29 AU AU2007245198A patent/AU2007245198B2/en not_active Ceased
- 2007-03-29 PT PT77541399T patent/PT2004220E/pt unknown
- 2007-03-29 KR KR1020127002226A patent/KR20120042865A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-03-29 ES ES07754139.9T patent/ES2545265T3/es active Active
- 2007-03-29 JP JP2009502948A patent/JP5014413B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-03-29 PL PL07754139T patent/PL2004220T3/pl unknown
- 2007-03-29 US US11/729,618 patent/US20070243199A1/en not_active Abandoned
- 2007-03-29 HU HUE07754139A patent/HUE027091T2/en unknown
- 2007-03-29 CA CA002647939A patent/CA2647939A1/en not_active Abandoned
- 2007-03-29 WO PCT/US2007/007569 patent/WO2007126816A2/en active Application Filing
-
2008
- 2008-09-25 IL IL194387A patent/IL194387A0/en unknown
-
2009
- 2009-11-24 US US12/624,601 patent/US20100143403A1/en not_active Abandoned
- 2009-11-24 US US12/624,610 patent/US20100136049A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-07-12 JP JP2010157503A patent/JP2010275313A/ja active Pending
- 2010-08-19 AU AU2010212448A patent/AU2010212448B2/en not_active Ceased
- 2010-08-19 AU AU2010212449A patent/AU2010212449B2/en not_active Ceased
- 2010-08-31 RU RU2010136627/15A patent/RU2010136627A/ru not_active Application Discontinuation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4458630A (en) * | 1982-06-22 | 1984-07-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Disease control in avian species by embryonal vaccination |
US5688513A (en) * | 1991-07-12 | 1997-11-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Coccidiosis vaccines |
US6495146B1 (en) * | 1995-06-07 | 2002-12-17 | Pfizer Incorporated | In ovo vaccination against coccidiosis |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2561673C2 (ru) | Способы и композиции для вакцинации домашней птицы | |
JP6294938B2 (ja) | 新規なアジュバント組成物 | |
RU2570732C9 (ru) | Усиленный иммунный ответ у видов птиц | |
US6506385B1 (en) | Live vaccines and methods of treatment therewith | |
CN114746113A (zh) | 针对副鸡禽杆菌和禽脑脊髓炎病毒和禽痘病毒的三联疫苗 | |
WO2024156065A1 (en) | Methods of eliciting an immune response against clostridium perfringens and/or necrotic enteritis and compositions for use thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20160413 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160330 |