JP5660806B2

JP5660806B2 - 炎症性腸疾患等慢性炎症の鑑別方法

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Publication number: JP5660806B2
Application number: JP2010119099A
Authority: JP
Inventors: 三善　英知; 英知三善; 信一郎新崎; 英樹飯島; 武石　俊作; 俊作武石
Original assignee: LSIP LLC
Current assignee: LSIP LLC
Priority date: 2010-05-25
Filing date: 2010-05-25
Publication date: 2015-01-28
Anticipated expiration: 2030-05-25
Also published as: JP2011247665A

Description

本発明は疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(Inflammatory Bowel Disease)等の慢性炎症の鑑別に関する。

疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別は難しく、これまで内視鏡診断などに頼ってきているが、それでも内視鏡だけでは程度の軽い場合などは判断が簡単ではない。また、治療効果などの判定のたびに内視鏡診断を行うのでは、患者さんに対する侵襲性が高い為、簡便な鑑別方法が求められている。特に、治療効果の検証をする上で、内視鏡診断は現実的な手法とは言いがたかった。

本願の発明者等は、炎症性腸疾患(IBD)の鑑別法として血清IgGの糖鎖異常（フコシル化ガラクトース欠損IgGの増加）が有効であることを発見し、国立大学法人大阪大学より特許申請（特許文献１）するとともに論文に公表した (非特許文献１)。この研究内容については、アメリカの消化器病学会のニュースにも取り上げられ、国際的な注目を浴びた。

なお、ガラストース欠損IgGに関しては、慢性関節リウマチを代表する自己免疫性疾患でも増加することが古くから知られているため、自己免疫疾患分野における応用も期待される。

国際公開公報ＷＯ２００７／１３６００１Ａ１

Shinzaki et al. Am. J. Gastroenterology 103 (5), 1173-1181

特許文献１、非特許文献１の提案は、方法論的には、血清からIgG（免疫グロブリンＧ）を単離後、糖鎖を遊離し、蛍光標識した後に、高速液体クロマログラフィー（HPLC）で解析するものである。定量性、再現性に非常に優れ、異なる患者集団でvalidationを行ったが、ほぼ最初の検討結果に一致した。

しかし、1検体当たりの解析に時間がかかり、将来的に多検体処理を行う方法としては、HPLCは必ずしも適当でないと思われる。

前記の特許文献１、非特許文献１の提案により、糖鎖構造の相違によって炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症疾患を鑑別する技術は向上したが、設備、技術力、鑑別する人間の能力の問題でこの手法が使える施設は限定されており、工程が複雑である為、必要な時間、労力とも多大である。

そこで、この発明は、疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を簡便に行うことができ、かつ、非侵襲性であって、治療効果の検証も可能な炎症性腸疾患等慢性炎症の鑑別方法を提案することを目的にしている。

本願の請求項１記載の発明は、
健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行う炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項２記載の発明は、
使用するレクチンを、GSL-II、ABA、BLL、HPA、WGA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepaの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることを特徴とする請求項１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項３記載の発明は、
鑑別の対象とする生体分子を抗体とすることを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項４記載の発明は、
鑑別の対象とする被検体をIgG、又は、その分解物、若しくは、その変性物としたことを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項５記載の発明は、
鑑別はそれぞれのレクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項６記載の発明は、
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項５記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項７記載の発明は、
鑑別はWGAのシグナルに対するそれぞれのレクチン比率が、cut off値の上にあるか下にあるかで判断することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項８記載の発明は、
複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことを特徴とする請求項７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項９記載の発明は、
鑑別の為の検出方法は、アレイ、ELISA、Western Blotting、FACSのいずれかを対象とする請求項１乃至請求項８のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１０記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、Protein-AまたはProtein-G／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズ含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１１記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／Protein AまたはProtein G／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１２記載の発明、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、抗IgG抗体／被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１３記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayの場合、選択レクチン／被検者試料／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１４記載の発明は、
前記抗IgG抗体は、抗体のfull bodyである場合、抗原認識部位を含む抗体の一部である場合、キメラ抗体を含む人工的に処理した抗体である場合を含むことを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１５記載の発明は、
前記抗IgG抗体の替わりに、IgGを特異的に認識する人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸のいずれかが使用されることを特徴とする請求項１２又は請求項１３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１６記載の発明は、
請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、sandwich assayの最上部に位置する分子をラベルすることを特徴とする請求項１０乃至１５のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１７記載の発明は、
請求項１０乃至１６のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、更に、二次抗体を用いる、あるいはラベルした二次抗体を用いることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１８記載の発明は、
請求項１６または請求項１７記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項１９記載の発明は、
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項１８記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項２０記載の発明は、
鑑別の為の検出方法がsandwich assayでない場合、被検者試料／選択レクチン／基板または磁気ビーズを含むレクチンを固層化する為の担体であることを特徴とする請求項９記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項２１記載の発明は、
前記選択レクチンの代わりに、前記選択レクチンが認識する糖鎖構造と同様の構造を認識する抗糖鎖抗体、人工抗体、アプタマー、ペプチド、改変ペプチド、核酸、改変核酸を用いることを特徴とする請求項１０乃至請求項２０のいずれか一項記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項２２記載の発明は、
請求項２０乃または請求項２１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法において、前記被検者試料を直接ラベルすることを特徴とする炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項２３記載の発明は、
前記ラベルを、蛍光ラベル、RIラベル、発光ラベル、発光を誘導するラベル、発色ラベル、ビオチンラベルのいずれかとすることを特徴とする請求項２２記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

請求項２４記載の発明は、
前記ラベルがビオチンによる場合、更にラベルしたアビジンを用いることを特徴とする請求項２３記載の炎症性腸疾患の鑑別方法
である。

本発明により、IgG（免疫グロブリンＧ）の糖鎖異常を短時間に多検体処理が可能になる。

フコシル化ガラクトース欠損IgGの量は、炎症性腸疾患の臨床的活動性と相関し、少数例での検討ではあるが、治療効果の予測にも応用できることがわかっている。

本発明は高速液体クロマログラフィー（HPLC）のように、特定の研究機関でなければ解析できないことはなく、どこの施設でも測定可能と言える。従って、広く臨床検査として普及させることが可能である。

また、レクチンアレイを使って診断に利用できるものを絞り込む手法は、疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別に限らず、糖鎖を対象とするあらゆる疾患の鑑別に対して有効である。

本発明の方法を用いて健常及び疾病間のsignalの相違を確認する鑑別方法の模式図。 WGAとGSL-IIを用いて疾患鑑別を行なった結果を表わす図。 WGAとABAを用いて疾患鑑別を行なった結果を表わす図。 WGAとHPAを用いて疾患鑑別を行なった結果を表わす図。ＧＳＬ−ＩＩを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。ＡＢＡを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。ＨＰＡを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを用いて疾患鑑別を行なった場合のＷＧＡで規格化したシグナル強度を表わす図。Ｃａｌｓｅｐａを用いて疾患鑑別を行なった場合の規格化しないシグナル強度を表わす図。Ｃａｌｓｅｐａを用いて疾患鑑別を行なった場合のＷＧＡで規格化したシグナル強度を表わす図。ＰＳＡ、ＬＣＡを用いて疾患鑑別を行なった場合のＷＧＡで規格化したシグナル強度を表わす図。

疾患の鑑別、特に、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を高速液体クロマログラフィー（HPLC）などを使用することなしに簡便に、例えば、臨床現場でも行えるようにする場合、鑑別方法候補としては、ELISA法を検討する必要がある。

このELISA法でレクチン（Lectin）を用いる場合、どのレクチンを用いるかが非常に重要であり、その選択方法が鑑別の成否を左右すると言っても過言ではない。本発明では、特有のLectin Arrayを用いている。

炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症を鑑別する為のtarget moleculeは糖鎖（糖鎖を含む分子）である為、糖鎖構造を反映したシグナルを検出するために用いることのできる分子を使用することで、汎用的且つ簡便な鑑別方法を実現できる。

糖鎖構造を反映したシグナルを検出するために用いることのできる分子としては、一般的には抗糖鎖抗体、レクチン、ペプチドなどが考えられる。

これらの分子から炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症を鑑別できる分子を選択して、疾患由来抗体とこれらの分子の結合状態をシグナルにすることで、炎症性腸疾患(IBD)等の慢性炎症の鑑別を簡便に行うことができ、かつ、非侵襲性であって、治療効果の検証も可能な炎症性腸疾患等慢性炎症の鑑別方法を提案することができる。

一例としてレクチンを用いる方法について記す。

４５種類のレクチンを固相化したレクチンアレイを用いて、炎症性腸疾患患者のIgGの糖鎖を鑑別するレクチンを選択する。

疾患の鑑別方法においては、レクチンを固層化する為の担体、等の構造を基本とし、ラベルの内容によっては更にシグナル検出用の分子（酵素や二次抗体を含む）を加えることもある。

レクチンを固層化する為の担体としては次のようなものを採用できる。

抗IgG抗体／サンプルタンパク／選択レクチン／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。

蛍光物質やRI等でラベルしたサンプルタンパク／選択レクチン／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。

選択レクチン／サンプルタンパク／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。

蛍光物質やRI等でラベルした選択レクチン／サンプルタンパク／抗IgG抗体／基板または磁気ビーズなどを含むレクチンを固層化する為の担体。

これらの基本構造に対して、蛍光、発光、RI、発色等の方法でシグナルを検出する。

また、用いる抗IgG抗体はIgG full body、Fab化したもの、IgGの糖鎖を処理したものなど対象によって使い分ける。

最終的に用いる手法としては、ELISA、アレイ、によるシグナル検出が適当であるが、これらの分子あるいはこれらの分子と同様の認識を示す分子を用いるあらゆる方法に本発明で提示する方法や分子を利用することができる。

本発明による方法の効果、特に、選択レクチンによる鑑別の効果を確認することを目的として、図１に示す形体で、健常及び疾病間のsignalの相違を確認した。

図１の模式図に現したように、基板上にレクチン２種類を固定し（WGAと、GSL-II、 ABA 又は HPA）、これらのレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較した。

WGAとGSL-IIを用いた場合は、図２に示したように、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。

WGAとABAを使用した場合は、図３に示したように、図２図示のGSL-IIの場合と同様に、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。

WGAとHPAを使用した場合は、図４に示したように、GSL-II及びHPAの場合と同様に、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。

以上の結果より炎症性腸疾患の鑑別をレクチン（Lectin）を使用することで効果的に行えることが明らかとなった。

また、使用するレクチンを、GSL-II、ABA、HPA、WGAの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることで炎症性腸疾患の鑑別を行えると考えられた。

なお、ここでは検証を行っていないが、BLLはABAと同様の特性を有することが知られているので、前記において、ABAに替えてBLLをレクチンとして使用しても同様に炎症性腸疾患の鑑別を行うことができると考えられる。

また、前記のより、鑑別の対象とする生体分子を抗体にして、（Lectin）を使用して炎症性腸疾患の鑑別を行うことができることを確認できた。前記ではIgGを鑑別の対象とする生体分子にしている。

なお、前記の実施例では、鑑別の対象とする生体分子を抗体（IgG）にしているが、IgGの分解物、又は、IgGの変性物を鑑別の対象とする生体分子にしても、前記の実施例と同様に、（Lectin）を使用して炎症性腸疾患の鑑別を行うことができると考えられる。

更に、図２〜図４の結果に表わされているように、前記実施例のいずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（Ｕ）、Crohn Disease（Ｃ１＋Ｃ２）間の鑑別が可能であることを確認できた。

次に、規格化しないシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であるか検討した。

前記と同様に、基板上にレクチン（ＧＳＬ−ＩＩ、ＡＢＡ、ＨＰＡ）を固定し、このレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較した。

図５、図６、図７は、それぞれ、レクチンとして、ＧＳＬ−ＩＩ、ＡＢＡ、ＨＰＡを用いた場合の、規格化しないシグナル強度で鑑別が可能であるか判定したものであるが、いずれの場合でも鑑別が可能であった。

すなわち、ＧＳＬ−ＩＩ、ＡＢＡ、ＨＰＡを組み合わせず、１種類で使用した場合であっても、図５、図６、図７に示したように、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＶ）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。

この場合も、図５〜図７の結果に表わされているように、いずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＶ）間の鑑別が可能であった。

同様に、レクチンとしてＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを用い、前記と同様に、基板上にレクチン（ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉ及び、これらとＷＧＡ）を固定し、このレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較し、規格化しないシグナル強度、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。

図８図示のように、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉの規格化しないシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であった。

すなわち、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉを組み合わせず、１種類で使用した場合であっても、図８に示したように、健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間で統計的にも明確な差が見られ、本発明の方法による鑑別の効果が明らかにされた。

また、複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことができた。

この場合も、図８の結果に表わされているように、いずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。

また、図９図示のように、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−ＩのＷＧＡで規格化したシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であった。すなわち、ＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉと、ＷＧＡとの組み合わせにすることで炎症性腸疾患の鑑別を行うことができた。ここでも、複数のレクチンのシグナルの組み合わせによって鑑別を行うことが可能であった。

この場合も、図９の結果に表わされているように、いずれの場合であっても、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。

なお、図８、図９に示された実験結果から、α2、6 sialic acid を認識するレクチンであれば、上記のＳＮＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉに限られず使用可能であることを確認できた。

また、レクチンとしてＣａｌｓｅｐａを用い、規格化しないシグナル強度、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。更に、レクチンとしてＰＳＡ、ＬＣＡを用い、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。すなわち、レクチンとしてＣａｌｓｅｐａ、ＰＳＡ、ＬＣＡを用い、前記と同様に、基板上にレクチン（Ｃａｌｓｅｐａ、ＣａｌｓｅｐａとＷＧＡ、ＰＳＡとＷＧＡ、ＬＣＡとＷＧＡ）を固定し、このレクチンに結合した患者若しくは健常者由来の蛍光ラベルしたIgGからのシグナル強度比率を比較し、規格化しないシグナル強度、ＷＧＡで規格化したシグナル強度の場合について鑑別が可能であるか判定した。

図１０図示のように、Ｃａｌｓｅｐａの規格化しないシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であり、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。

更に、図１１、図１２図示のように、Ｃａｌｓｅｐａ、ＰＳＡ、ＬＣＡのＷＧＡで規格化したシグナル強度で健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）の鑑別が可能であり、所定のcut off値を定めることにより、レクチンのシグナル値がcut off値の上にあるか下にあるかで健常（ＨＶ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、Crohn Disease（ＣＤ）間の鑑別が可能であった。

以上、添付図面を参照して本発明の好ましい実施形態、実施例を説明したが、本発明はこれらに限られること無く、特許請求の範囲の記載から把握される技術的範囲において種々に変更可能である。

例えば、健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別をレクチンを使って行うにあたり、使用するレクチンを、GSL-II、ABA、BLL、HPA、WGA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepaの中の１種類若しくは２種類以上の組み合わせにすることを説明したが、これらは例示であり、同等の認識機能を持つレクチン、抗体であればこれらに限られない。

Claims

健常、潰瘍性大腸炎、Crohn Diseaseの鑑別を、対象より得られたＩｇＧ抗体、その分解物もしくはその変性物と、GSL-II、ABA、BLL、HPA、WGA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepa, PSAおよびLCAからなる群から選択される１以上のレクチンとの結合に基づいて行う、炎症性腸疾患の鑑別方法。
GSL-II、ABA、BLL、HPA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepa、PSAおよびLCAからなる群から選択される１つのレクチンと、対象より得られたＩｇＧ抗体、その分解物またはその変性物との結合に基づいて鑑別を行う、請求項1記載の方法。
GSL-II、ABA、BLL、HPA、SNA、SSA、TJA-1、Calsepa、PSAおよびLCAからなる群から選択される1以上のレクチンと、対象より得られたＩｇＧ抗体、その分解物またはその変性物との結合により得られるシグナル値を、WGAと対象より得られたＩｇＧ抗体、その分解物またはその変性物との結合により得られるシグナル値により規格化することを特徴とする請求項１記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
鑑別の為のレクチンと、対象より得られたＩｇＧ抗体、その分解物またはその変性物との結合を、アレイまたはＥＬＩＳＡ法により検出する、請求項１〜3何れかに記載の炎症性腸疾患の鑑別方法。
固相にレクチンを固定化させ、ラベルした対象由来のＩｇＧ抗体その分解物またはその変性物を作用させ、固定化レクチンとＩｇＧ抗体その分解物またはその変性物との結合シグナルを測定する、請求項１〜４何れかに記載の方法。
sandwich assayにてレクチンと、対象より得られたＩｇＧ抗体、その分解物またはその変性物との結合を検出する、請求項１〜４いずれかに記載の方法。
対象由来のＩｇＧ抗体を用いる、請求項１〜６何れかに記載の方法。
レクチンとの結合により得られるシグナルのcut off値を予め定め、測定値が当該cut off 値の上にあるか下にあるかで鑑別を行う、請求項１〜7何れかに記載の方法。