JP5596924B2 - ビンカアルカロイドn酸化物および類似体による過剰増殖疾患の処置 - Google Patents
ビンカアルカロイドn酸化物および類似体による過剰増殖疾患の処置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5596924B2 JP5596924B2 JP2008555403A JP2008555403A JP5596924B2 JP 5596924 B2 JP5596924 B2 JP 5596924B2 JP 2008555403 A JP2008555403 A JP 2008555403A JP 2008555403 A JP2008555403 A JP 2008555403A JP 5596924 B2 JP5596924 B2 JP 5596924B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oxide
- cancer
- tumor
- vinblastine
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
- C07D519/04—Dimeric indole alkaloids, e.g. vincaleucoblastine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本発明は、過剰増殖障害を処置するための活性を有するビンカアルカロイドN酸化物に関する。さらに、本発明は、過剰増殖障害を処置するために、ビンカアルカロイドN酸化物を単独で、または一つもしくは複数の他の活性物質もしくは処置と併用して用いる薬学的組成物および方法に関する。
米国において4人に1人は癌により死亡し、癌は死因の第二位である。U.S. Cancer Statistics Working Group; United States Cancer Statistics: 2000 Incidence, Atlanta (GA): Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, and National Cancer Institute (2003)(非特許文献1)。米国国立癌研究所は、ほぼ1000万人のアメリカ人が浸潤性癌の既往を有するが、米国癌学会は、2004年において、130万人を超えるアメリカ人が浸潤性癌と診断され、50万例を超える症例が死亡すると報告している。American Cancer Society, Cancer Facts & Figures 2004(非特許文献2)。これらの統計値には、米国において診断されると予想される基底細胞癌および扁平上皮癌の100万人の症例は含まれない。
式中、
R'1は、水素原子、またはアルコキシ、アシル、ホルミル、もしくはハロゲノアシル基を表し、
R'2は、水素原子またはアルキル基を表し、
R'3およびR"3は、同一であるかまたは異なり、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシル、もしくはアルカノイルオキシ基を表し、またはそうでなければR'3およびR"3は共にカルボニル基を形成し、またはそうでなければR'3およびR'5は共にエポキシ架橋もしくは二重結合を形成し、
R'4は、水素原子、またはアルキルオキシカルボニル、ヒドロキシメチル、もしくはアルカノイルオキシメチル基を表し、好ましくはアルキルオキシカルボニル基を表し、
R'5およびR"5は、同一であるかまたは異なり、それぞれ独立して、水素原子、またはヒドロキシル、アルカノイルオキシル、エチル、もしくは2-ヒドロキシエチル基を表し、
R'6は、水素原子、またはエチル、2-ヒドロキシエチル、もしくはアセチル基を表し、
R'7は、水素原子またはシアニド基を表し、
R1は、水素原子、またはアルキル、ホルミル、もしくはアシル基を表し、好ましくは水素またはアルキル基を表し、
R2は、水素原子またはアルコキシ基を表し、
R3は、水素原子、ヒドロキシル、もしくはアルカノイルオキシル基を表し、またはそうでなければR3およびR4は共に、エポキシ架橋もしくは二重結合を形成し、
R4は、水素原子、またはヒドロキシルもしくはアルカノイルオキシル基を表し、またはそうでなければR4およびR5は共にエポキシ架橋を形成し、
R6は、アルキルオキシカルボニル、ヒドラジド、アセトアミド、ヒドロキシメチル、またはアルカノイルオキシメチル基を表し、
R5およびR7は、水素原子、またはヒドロキシルもしくはアルカノイルオキシル基を表すと共に、その酸付加塩およびその四級アンモニウム塩を表す。
本発明は、癌および炎症のような過剰増殖障害を処置するための化合物、組成物、および方法に関する。本発明の一つの局面は、以下の式Iを有するビンカアルカロイドN酸化物、またはその薬学的に許容される塩に向けられる:
式中、
R'1は、水素、アルキル、アルコキシ、アシル、ホルミル、またはハロゲノアシル基を表し;
R'2は、水素またはアルキル基を表し;
R'3およびR"3は、同一であるかまたは異なり、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ、もしくはアルカノイルオキシ基を表し、またはそうでなければR'3およびR"3は共にカルボニル基を形成し、またはそうでなければR'3およびR'5は共にエポキシ架橋もしくは二重結合を形成し;
R'4は、水素、アルキルオキシカルボニル、ヒドロキシメチル、もしくはアルカノイルオキシメチル基を表し、好ましくはアルキルオキシカルボニル基を表し;
R'5およびR"5は、同一であるかまたは異なり、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、アルコキシカルボニル、ハロゲン原子1〜3個によって置換されてもよいC1-C7アルキル、アルカノイルオキシ、または2-ヒドロキシエチル基を表し;
R'6は、水素、エチル、2-ヒドロキシエチル、またはアセチル基を表し;
R'7は、水素またはシアノを表し;
R1は、水素、アルキル、ホルミル、またはアシル基を表し、好ましくは水素またはアルキル基を表し;
R2は、水素またはアルコキシを表し;
R3は、水素、ヒドロキシ、もしくはアルカノイルオキシ基を表し、またはそうでなければR3およびR4は共に、エポキシ架橋もしくは二重結合を形成し;
R4は、水素、ヒドロキシ、もしくはアルカノイルオキシ基を表し、またはそうでなければR4およびR5は共にエポキシ架橋を形成し;
R6は、アルキルオキシカルボニル、ヒドラジド、アセトアミド、ヒドロキシメチル、アルカノイルオキシメチル基、もしくは -C(=O)-A-NH-Pを表し、式中-A-は-NH-、-NH-alk-COO-、もしくは-NH-alk-COONH-の一つであり、alkは直鎖もしくは分岐C1-C7アルキル基であり、および-NH-Pはペプチド残基であり、またはR5およびR6は共にオキサゾリジン-2,4-ジオン環を形成し;
R5およびR7は、水素、ヒドロキシ、もしくはアルカノイルオキシ基を表すと共に、その酸付加塩およびその四級アンモニウム塩を表し;
R8およびR'8のそれぞれは、Oであるかまたは存在しないが、ただしR8およびR'8の少なくとも一つはOであり;ならびに
nは1または2である。
1H NMRスペクトルはD2OまたはCDCl3を溶媒として用いてINOVA-300 MHzまたはINOVA-500 MHz分光計より得られた(s、d、t、ddおよびmは、それぞれ、一重項、二重項、三重項、二重項の二重項、および多重項を示す)。分析用薄層クロマトグラフィーは、シリカゲル60 F254で予めコーティングされた、EMD Chemicals, Inc.製のポリエステルで裏打ちされたプレート上で実施した。ラジアル薄層クロマトグラフィーは、本発明者らの研究室にて石膏を含むシリカゲル60 PF254(EMD Chemicals, Inc.)でコーティングした層厚 2mmのシリカプレートを用いてHarrison Research Chromatron(7924T)上で実施した。分析用高速液体クロマトグラフィー(HPLC)は4.6mm×250mmのMICROSORB C18カラムを用いて1800〜2100 psiの圧力にて実施した。ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビンのN酸化物の合成手順は、ビノレルビンの酸化手順のためのP. Mangenyらより応用した。ビンブラスチンN酸化物が形成されると、新しい立体中心が形成される。本発明者らは、マレイン酸塩の単結晶X線解析によって、後述の合成されたビンブラスチンN'b-酸化物において新しく導入された酸素原子の立体配置が近傍のエチル基に対してシスであることを見出している(図1)。本発明では式IにおけるR8またはR'8窒素原子のいずれかのN酸化物の双方のエピマーが意図される。ビンブラスチンN酸化物はビノレルビンの合成における中間体である。Mangeny, P. et al. Tetrahedron. 35:2175-2179 (1979)を参照されたい。
ビンブラスチンN'b-酸化物の合成
硫酸ビンブラスチンはAsian Talentから購入した。硫酸ビンブラスチンの610mg試料をジクロロメタン 20mLに溶解して、続いて、5%炭酸ナトリウム水溶液 20mLを加えて振盪した。有機相を分離して、水性の溶液をジクロロメタン(2×20mL)およびクロロホルム(20mL)で順次抽出した。一つにまとめた有機相および抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させて、乾固するまで飛散させ、ビンブラスチンフリー塩基 526mg(97%)を粘着性の白色固体として得た。ビンブラスチンフリー塩基の純度は、ガードカラムMICROSORB 100-5 C18をセットしたホルダーを含むVarian CHROMSEP HPLCカラム SS 250×4.6mmを用いて、グラジエント:30/70(アセトニトリル中0.1%トリフルオロ酢酸)/(0.1%トリフルオロ酢酸水溶液)〜100/0(アセトニトリル中0.1%トリフルオロ酢酸)/(0.1%トリフルオロ酢酸水溶液)、検出 254nmおよび270nmにて、1H 300MHz NMRおよびHPLC(99.1%AUC)により確認した。
ビノレルビンN'b酸化物の合成
ビノレルビンフリー塩基はAsia Talentから購入した。必要な場合は、9:1 CHCl3−MeOHを溶離液として用いたシリカゲルのラジアルクロマトグラフィーにより精製を行った。
ビンクリスチンN'b酸化物の合成
硫酸ビンクリスチンはAsian Talentから購入した。硫酸ビンクリスチンの480mg試料を7:3 クロロホルム/メタノールの10mLに溶解して、続いて、5%炭酸ナトリウム水溶液の15mLを加えて振盪した。有機相を分離した後、水性の溶液にジクロロメタン(2×20mL)およびクロロホルム(2×20mL)を順次加えて抽出した。一つにまとめた有機相および抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させて乾固するまで濃縮し、ビンクリスチンフリー塩基の420mg(98%)が粘着性の黄白色の固体として得られた。ビンクリスチンフリー塩基の純度は、1H 300MHz NMRおよびHPLC(99.0% AUC)により確認した。
ビンカアルカロイドおよび類似体であるそのN酸化物のリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、および血液学的悪性疾患に由来する細胞における細胞毒性
ビンカアルカロイドおよび類似体であるそのN酸化物の異なるリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫の細胞株に対する細胞毒性について、インビトロにおいて正常酸素(normoxic)および0.2%O2低酸素の条件下で試験を行う。各化合物における50%阻害濃度(IC50)を求めるために、MTTまたはアラマーブルー色素を用いた標準的生存性アッセイを行う。培養した腫瘍細胞を正常酸素または低酸素条件下で8時間以上、化合物で処理して、24〜48時間後に生存性を測定する。一部のケースにおいて、作用機序を確認するために、生体内還元酵素に対する酵素阻害物質を細胞と共に同時培養する。陽性対照は化学療法剤を当技術分野において有効であることが示されている用量で使用する。結果は、ビンカアルカロイドおよびその関連するN酸化物類似体が血液学的悪性疾患に由来する多くの細胞株に対して細胞毒性であることを示すはずであり、IC50値はナノモルないしナノモルよりも低い範囲内である。ビンカアルカロイドの類似体であるN酸化物は、正常酸素または正常酸素または良好酸素(euoxic)条件下において親化合物よりも強いまたは示差的な細胞毒性を示すと期待される。
ビンカアルカロイドおよび類似体であるそのN酸化物のリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、および血液学的悪性疾患に由来する細胞における抗腫瘍活性
ビンカアルカロイドおよび類似体であるN酸化物のインビボにおける抗腫瘍効果について、血液学的悪性疾患の同種および異種移植実験用マウスモデルを用いて調べる。例えば、DBA/2マウス(n=12/群)に1×105個のマウスL1210または1×106個のP388白血病腫瘍細胞を腹腔内(ip)接種する。腫瘍移植後、マウスにビンカアルカロイドまたは類似体N酸化物の10〜1000mg/kgを静脈内投与により投与する。物質は、最適な投与スケジュールの恩典を得るために、単回または反復投与計画(即ち、週1回、q3d)にて投与してよい。腫瘍負荷マウスの生存期間の延長に関して、溶媒対照を投与したマウスに比してビンカアルカロイドおよびN酸化物類似体投与の効果は、予め定めた生存期間エンドポイントを用いて比較する。体重低下、神経毒性、リンパ球減少症および好中球減少症などの急性毒性の症状についても動物をモニターする。陽性対照として、標準的な物質を用いて投与を比較する。
ビンカアルカロイド類似体およびそのN酸化物の固形腫瘍ラインにおける細胞毒性
ビンカアルカロイドおよび類似体であるそのN酸化物の異なる固形腫瘍細胞株に対する示差的な細胞毒性は、インビトロにおいて正常酸素条件および0.2%O2の低酸素条件下にて実証される。ビンブラスチンN酸化物およびビンクリスチンN酸化物のインビトロにおけるヒトH460肺腺癌、HT29結腸直腸腺癌、A549肺非小細胞癌、FaDU頭頚部腫瘍細胞株に対する処置効果から得られた結果を図2A〜2Dおよび3A〜3D、ならびに表1および2に示す。腫瘍細胞株は標準的条件下においてDMEM−10%FBSで培養した。100mmプラスチック培養皿に1×106個の腫瘍細胞を播種して、ビンカアルカロイドまたはN酸化物類似体を0.01〜100nMの用量範囲で適用した。細胞を、静かに振盪しながら37℃にて14時間、低酸素装置(INVIVO2400 Hypoxia Workstation, Ruskin Technology)内で一定レベルの低酸素(0.2%O2-5%CO2−平衡N2)に曝露した。同様に処理した細胞を正常酸素(空気-5%CO2)条件下において37℃でインキュベートした。24〜72時間後に生存性を評価するため、細胞を回収して48穴プラスチック培養プレートで細胞1×103個/ウェルの密度にて新鮮な培地に再度接種した。簡潔に言うと、アラマーブルーを0日目および3日目に反復ウェルに加えて、プレートリーダー(530〜560nm励起、590発光)を用いて蛍光を判定する前に37℃にてさらに3〜6時間、細胞をインキュベートした。増殖阻害パーセントを算出して、各薬剤濃度において対照処理細胞に対してプロットした。対になる正常酸素および低酸素処理について、50%増殖阻害濃度(IC50)の値を算出した。低酸素細胞毒性比(HCR)は、低酸素条件に対する正常酸素条件下での化合物のIC50の比として求められた。
* HCRは(IC50空気)/(IC50低酸素)として定義される。
* HCRは(IC50空気)/(IC50低酸素)として定義される。
試験管内腫瘍細胞感受性試験を用いた固形腫瘍ラインに対するビンカアルカロイド類似体およびそのN酸化物の細胞毒性
異なる固形腫瘍細胞株に対するビンカアルカロイドおよび類似体であるそのN酸化物の示差的細胞毒性は、インビトロにおいてクローン形成(試験管内腫瘍細胞感受性)試験を用いて正常酸素条件下および0.2%O2低酸素条件下において実証される。低酸素(0.2%O2)条件に対する正常酸素(20%O2)条件への曝露後のH460肺癌腫瘍細胞の生存可能コロニーの生育に対するビンクリスチンN酸化物の処置効果から得られた結果を図4に示す。
ヒト固形腫瘍細胞株に対するビンカアルカロイドN酸化物類似体の細胞毒性の活性化は酸素依存性である
本発明者らの結果は、ビンカアルカロイドN酸化物類似体は正常酸素条件下では低い細胞毒性活性を有するが低酸素条件下では強力な細胞毒性物質へと活性化されることを実証する。ヒトH460肺腺癌腫瘍細胞を標準的条件下においてDMEM-10%FBSで培養した。100mmプラスチック培養皿に1×106個/培養皿の腫瘍細胞を播種して、ビンカアルカロイドまたはN酸化物類似体を0.01〜100nMの用量範囲で適用した。細胞を、静かに振盪しながら37℃にて14時間、低酸素装置(INVIVO2400 Hypoxia Workstation, Ruskin Technology)内で一定レベルの低酸素(0.2%、1%または5%O2-5%CO2−平衡N2)に曝露した。同様に処理した細胞を正常酸素(空気-5%CO2)条件下において37℃でインキュベートした。24〜72時間後に生存性を評価するため、細胞を回収して48穴プラスチック培養プレートで細胞1×103個/ウェルの密度で新鮮な培地に再度接種した。簡潔に言うと、アラマーブルーを0日目および3日目に反復ウェルに加えて、プレートリーダー(530〜560nm励起、590発光)を用いて蛍光を判定する前に37℃にてさらに3〜6時間、細胞をインキュベートした。増殖阻害パーセントを算出して、各薬剤濃度において対照処理細胞に対してプロットした。対になる正常酸素および低酸素処理について、50%増殖阻害濃度(IC50)の値を算出した。低酸素細胞毒性比(HCR)は、((低酸素におけるIC50)/(正常酸素におけるIC50))として定義された。図5において、本発明者らは、ヒトH460肺腺癌細胞に対する細胞毒性の活性化が酸素依存性であることを実証している。酸素濃度が低下するに伴って、培養したH460肺腫瘍細胞に対するビンブラスチンN酸化物の高い細胞毒性が観察された。検査した0.2%、1%および5%O2の部分O2濃度に対してプロットしたビンブラスチンN酸化物の低酸素細胞毒性比(HCR)を図5に示す。
LC/MS-MS分析により測定される低酸素性癌細胞におけるビンカアルカロイドN酸化物のそれぞれの親化合物への生体内還元
本明細書において、本発明者らは、クロマトグラフィーおよび質量分析法での分析によって検出されるように、ビンブラスチンN酸化物およびビクリスチンN酸化物が(0.2%O2)低酸素条件下においてそれぞれの親化合物に生体内還元されることを実証する。ヒトH460肺腺癌腫瘍細胞を100mm培養皿に細胞1×106個/培養皿の密度で播種して、無処理またはビンカアルカロイドN酸化物類似体を0.02〜7μMの用量範囲で適用した。細胞を、静かに振盪しながら37℃にて12時間、低酸素装置(INVIVO2400 Hypoxia Workstation, Ruskin Technology)内で一定レベルの低酸素(0.2%O2-5%CO2−平衡N2)に曝露した。同様に処理した細胞を正常酸素(空気-5%CO2)条件下において37℃でインキュベートした。DNA含有量の分析およびLC/MS/MS分析に備えて、細胞を回収して、DNA溶解緩衝液(20mMトリス-HCL、pH 8.0、1mM EDTA、0.1%トリトンX-100)に溶解して、-80℃に保存した。測定したビンカアルカロイドまたはN酸化物類似体の濃度を実験において溶解した細胞の量に対して正規化するために、溶解物を融解して、Hoescht 33258色素および蛍光(λ励起 350nm、λ発光 455nm)を用いてDNAを分析した。溶解物を、0.1%酢酸およびビンカアルカロイド内部標準を含むメタノール 150mlと混合して、10分間、ボルテックスにかけ、18000gで5分間、遠心分離した。清澄化した上清を、ガラス挿入物がセットされたHPLCバイアルに移して、LC-MS/MSで分析した。クロマトグラフィーはAcquity BEH C18カラムを備えたAcquity UPLCシステムで実施して、0.1%(v:v)ギ酸の水溶液を移動相Aとして、0.1%(v:v)ギ酸のアセトニトリル溶液を移動相Bとして使用した。質量分析はMicromass Quattro Micro三連四重極質量分析計を用いて実施した。
ビンカアルカロイドN酸化物類似体は、インビボにおいてそれらの親化合物であるビンカアルカロイドに比して低い全身および致死毒性を有する
本発明者らは、本明細書において、ビンブラスチンN酸化物およびビンクリスチンN酸化物の類似体が、げっ歯類においてインビボでそれぞれの親化合物であるビンブラスチンおよびビンクリスチンに比して低い全身および致死毒性を有することを実証する。
マウスの固形腫瘍モデルにおけるビンカアルカロイドおよび類似体であるそのN酸化物の抗腫瘍活性
ビンカアルカロイドおよび類似体であるN酸化物のインビトロにおける抗腫瘍効果を異種移植マウスモデルを用いて調べる。例えば、ヒトH460肺腺癌、HT29結腸直腸腺癌、またはA549肺癌腫瘍断片(約1mm3)を雌性ヌード(nu/nu)マウスに皮下(sc)移植する。腫瘍が約100mm3の大きさに達したら(移植後25日)、動物を一群当たり10匹に対で対応させる。マウスにビンカアルカロイドN酸化物の類似体を1〜200mg/kgの用量でq3d×5のスケジュールにてiv注射する。また、陰性対照としてマウスに賦形剤を、陽性対照として生体内還元された親化合物を最大耐用量で同一スケジュールを用いて投与する。腫瘍をカリパスで週2回測定して、式:腫瘍体積(mm3)=((幅)2×長さ)/2を用いて腫瘍体積を算出する。動物は毒性の徴候をモニターして、試験当初の5日間は1日1回、その後、試験終了までは週2回、体重を測定する。プロトコールに予め決められた通り、腫瘍が予め定められたエンドポイントの大きさである1200mm3に達するか、または試験終了(60日目)のいずれか早い時点で、各動物を積極的に安楽死させる。エンドポイント到達時間(TTE)は、各マウスについて、TTE(日)=(log10(エンドポイント体積mm3)−b)/mとして算出して、式中、bは対数変換した腫瘍増殖データセットの線形回帰より得られる線の切片であり、mは勾配である。投与の転帰は、日を単位として表される対照(C)群に対する投与(T)群の中央TTEの増加として(TGD=T−C)、または対照群の中央TTEのパーセント%TGD=((T−C)/C)×100として定義される腫瘍増殖遅延(TGD)から求められる。試験に残っている動物のパーセントを投与後時間の関数として表すためにKaplan-Meierのプロットを作成する。投与群対対照群の間の統計学的有意性は対数順位解析により調べる。
ビンアルカロイドN酸化物類似体の腫瘍選択性
腫瘍負荷マウスにおいて、ビンアルカロイドN酸化物類似体およびそれらの生体内還元された親化合物代謝物の全身性および局所腫瘍濃度をHPLC/MS-MSなどの定量的分析手順を用いてモニターする。
Claims (4)
- ビンブラスチンN酸化物、およびビンクリスチンN酸化物からなる群より選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩、ならびに
薬学的に許容される担体
を含む、癌の治療のための薬学的組成物であって、癌が、低酸素組織の固形腫瘍であり、ならびに前記ビンクリスチンN酸化物、またはビンブラスチンN酸化物が、前記低酸素組織において生体内還元されることを特徴とする、前記薬学的組成物。 - 化合物が、ビンクリスチンN酸化物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項1記載の薬学的組成物。
- 化合物が、ビンブラスチンN酸化物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項1記載の薬学的組成物。
- 癌が、結腸、頭頚部、または肺の癌である、請求項1記載の薬学的組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US77420406P | 2006-02-17 | 2006-02-17 | |
US60/774,204 | 2006-02-17 | ||
PCT/US2007/004252 WO2007098091A2 (en) | 2006-02-17 | 2007-02-20 | Treatment of hyperproliferative diseases with vinca alkaloid n-oxide and analogs |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009527480A JP2009527480A (ja) | 2009-07-30 |
JP5596924B2 true JP5596924B2 (ja) | 2014-09-24 |
Family
ID=38437916
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008555403A Active JP5596924B2 (ja) | 2006-02-17 | 2007-02-20 | ビンカアルカロイドn酸化物および類似体による過剰増殖疾患の処置 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8048872B2 (ja) |
EP (1) | EP1989212B1 (ja) |
JP (1) | JP5596924B2 (ja) |
CN (1) | CN101421282B (ja) |
CA (1) | CA2642717C (ja) |
IL (1) | IL193500A (ja) |
WO (1) | WO2007098091A2 (ja) |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HUE047352T2 (hu) | 2008-09-23 | 2020-04-28 | Nektar Therapeutics | Eljárás ütemezett beadásra kamptotecin elõgyógyszerekkel (például PEG-ironotekánnal) |
WO2010048330A1 (en) | 2008-10-21 | 2010-04-29 | Threshold Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of cancer using hypoxia activated prodrugs |
EP2429584A4 (en) * | 2009-05-13 | 2013-02-20 | Genzyme Corp | TREATMENT PROCEDURE AND COMPOSITIONS |
US9642999B2 (en) * | 2010-02-12 | 2017-05-09 | Varian Medical Systems, Inc. | Brachytherapy applicator |
WO2013116281A1 (en) * | 2012-01-31 | 2013-08-08 | Ziopharm Oncology, Inc. | Combination therapy including isophosphoramide mustard, analogs, or salts thereof |
WO2013170719A1 (zh) * | 2012-05-16 | 2013-11-21 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 长春瑞滨衍生物、其药物组合物及其制备方法和用途 |
WO2014022524A1 (en) * | 2012-07-31 | 2014-02-06 | Nimble Epitech, Llc | Pharmaceutical composition containing a hypomethylating agent and a histone deacetylase inhibitor |
JP6326697B2 (ja) * | 2012-12-03 | 2018-05-23 | ザ スクリプス リサーチ インスティテュート | ビンカアルカロイドのc20’−尿素誘導体 |
CN104740602B (zh) * | 2013-12-30 | 2018-10-30 | 暨南大学 | 长春碱及其类似物的应用 |
EP2987794B1 (en) * | 2013-04-19 | 2018-05-30 | Jinan University | Vinblastine derivatives, preparation method therefor and application thereof |
HU230462B1 (hu) * | 2013-05-30 | 2016-07-28 | Richter Gedeon Nyrt. | Új bisz-indol alkaloidok mint rákellenes gyógyszerek |
US9950194B2 (en) | 2014-09-09 | 2018-04-24 | Mevion Medical Systems, Inc. | Patient positioning system |
CN104817575B (zh) * | 2015-03-12 | 2017-02-01 | 天津中医药大学 | 化合物、其提取方法、包含其的药物组合物及其用途 |
US11103159B2 (en) * | 2016-03-04 | 2021-08-31 | United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force | Exhaled breath hypoxia biomarkers |
WO2018085877A1 (en) * | 2016-11-10 | 2018-05-17 | The University Of Melbourne | A method of treatment |
WO2022140661A1 (en) * | 2020-12-23 | 2022-06-30 | Cascade Prodrug Inc. | Combination therapy with a vinca alkaloid n-oxide and an immune checkpoint inhibitor |
WO2022266251A1 (en) * | 2021-06-16 | 2022-12-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Compositions for treatment of psoriasis |
CN117599071B (zh) * | 2024-01-19 | 2024-04-09 | 中国中医科学院中药研究所 | 土贝母苷甲在制备用于治疗银屑病的药物中的应用 |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4307100A (en) * | 1978-08-24 | 1981-12-22 | Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) | Nor bis-indole compounds usable as medicaments |
FR2434172A1 (fr) * | 1978-08-24 | 1980-03-21 | Anvar | Nouveaux composes intermediaires utiles dans la synthese de derives bis-indoliques et procede pour leur preparation |
FR2461714A1 (fr) * | 1979-07-17 | 1981-02-06 | Anvar | Nouvelle classe de composes bis-indoliques utiles comme medicaments et procede pour leur preparation |
US4303584A (en) * | 1980-04-02 | 1981-12-01 | Eli Lilly And Company | Method of preparing vincristine |
US4305878A (en) * | 1981-01-15 | 1981-12-15 | Allied Corporation | Purifying ethyl tetrahydrofurfuryl ether by aqueous salt extraction |
US5047528A (en) | 1987-01-22 | 1991-09-10 | University Of Bristish Columbia | Process of synthesis of vinblastine and vincristine |
USRE37449E1 (en) | 1987-02-06 | 2001-11-13 | University Of British Columbia | Process of synthesis of 3′,4′-anhydrovinblastine, vinblastine and vincristine |
FR2707988B1 (fr) * | 1993-07-21 | 1995-10-13 | Pf Medicament | Nouveaux dérivés antimitotiques des alcaloïdes binaires du catharantus rosesus, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques les comprenant. |
US5654279A (en) | 1996-03-29 | 1997-08-05 | The Regents Of The University Of California | Tissue destruction in cryosurgery by use of thermal hysteresis |
US6027499A (en) | 1997-05-23 | 2000-02-22 | Fiber-Tech Medical, Inc. (Assignee Of Jennifer B. Cartledge) | Method and apparatus for cryogenic spray ablation of gastrointestinal mucosa |
US5885276A (en) | 1997-12-02 | 1999-03-23 | Galil Medical Ltd. | Method and device for transmyocardial cryo revascularization |
FR2779146B1 (fr) | 1998-06-02 | 2002-01-18 | Roowin | Nouveaux derives de vinca-alcaloides et procedes de preparation |
US6468268B1 (en) | 1999-01-25 | 2002-10-22 | Cryocath Technologies Inc. | Cryogenic catheter system |
PT1044977E (pt) * | 1999-03-09 | 2002-09-30 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Derivados de camptotecina com actividade antitumoral |
US6555547B1 (en) | 2000-02-28 | 2003-04-29 | Cell Pathways, Inc. | Method for treating a patient with neoplasia by treatment with a vinca alkaloid derivative |
JP5448299B2 (ja) * | 2003-12-04 | 2014-03-19 | アルバニー モレキュラー リサーチ, インコーポレイテッド | ビンカ誘導体 |
EP1694330A4 (en) * | 2003-12-04 | 2009-06-24 | Amr Technology Inc | DERIVATIVES OF VINORELBINE |
WO2005097128A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-20 | Novacea, Inc. | 1,4-bis-n-oxide azaanthracenediones and the use thereof |
US9061015B2 (en) * | 2004-12-30 | 2015-06-23 | Pierre Fabre Medicament | Stable solid dispersion of a derivative of vinca alkaloid and process for manufacturing it |
-
2007
- 2007-02-20 WO PCT/US2007/004252 patent/WO2007098091A2/en active Application Filing
- 2007-02-20 JP JP2008555403A patent/JP5596924B2/ja active Active
- 2007-02-20 CN CN2007800136264A patent/CN101421282B/zh active Active
- 2007-02-20 CA CA2642717A patent/CA2642717C/en active Active
- 2007-02-20 EP EP07751041.0A patent/EP1989212B1/en active Active
-
2008
- 2008-04-29 US US12/111,672 patent/US8048872B2/en active Active
- 2008-08-17 IL IL193500A patent/IL193500A/en active IP Right Grant
-
2011
- 2011-10-25 US US13/280,974 patent/US8883775B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2009527480A (ja) | 2009-07-30 |
US20080305075A1 (en) | 2008-12-11 |
IL193500A (en) | 2015-10-29 |
EP1989212A2 (en) | 2008-11-12 |
CA2642717A1 (en) | 2007-08-30 |
WO2007098091A3 (en) | 2008-08-28 |
IL193500A0 (en) | 2009-08-03 |
WO2007098091A2 (en) | 2007-08-30 |
US8883775B2 (en) | 2014-11-11 |
CN101421282B (zh) | 2013-08-14 |
US8048872B2 (en) | 2011-11-01 |
CA2642717C (en) | 2015-08-18 |
CN101421282A (zh) | 2009-04-29 |
US20120107230A1 (en) | 2012-05-03 |
EP1989212B1 (en) | 2013-06-19 |
EP1989212A4 (en) | 2010-05-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5596924B2 (ja) | ビンカアルカロイドn酸化物および類似体による過剰増殖疾患の処置 | |
JP5513135B2 (ja) | マンニッヒ塩基n−オキシド薬物 | |
WO2007098089A2 (en) | Treatment of hyperproliferative diseases with methotrexate n-oxide and analogs | |
WO2007095389A2 (en) | Treatment of hyperproliferative diseases with camptothecine n-oxide and analogs | |
US20070117784A1 (en) | Treatment of hyperproliferative diseases with anthraquinones | |
EP3969050A1 (en) | Anti-cancer nuclear hormone receptor-targeting compounds | |
JP6321673B2 (ja) | 放射線と組み合わせて使用するための放射線増感剤化合物 | |
WO2006031719A2 (en) | 1,4-bis-n-oxide-5,8-dihydroxyanthracenedione compounds and the use thereof | |
AU2017283653B2 (en) | Porphyrin compounds and compositions useful for treating cancer | |
US20050222190A1 (en) | 1,4-bis-N-oxide azaanthracenediones and the use thereof | |
WO2007098090A2 (en) | Treatment of hyperproliferative diseases with n-oxides of estrogen receptor modulators | |
AU2006220886A1 (en) | Treatment of hyperproliferative diseases with anthraquinones | |
US11607464B2 (en) | Compositions and methods for the treatment and imaging of cancer |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20090601 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20090601 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20091001 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20091002 |
|
A072 | Dismissal of procedure [no reply to invitation to correct request for examination] |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A073 Effective date: 20091111 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100219 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121227 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130326 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20131120 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20131121 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20131120 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140324 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140519 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20140522 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140710 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140808 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5596924 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |