JP6326697B2

JP6326697B2 - ビンカアルカロイドのｃ２０’−尿素誘導体

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Publication number: JP6326697B2
Application number: JP2015546455A
Authority: JP
Inventors: デイルエルボガー
Original assignee: ザスクリプスリサーチインスティテュート
Priority date: 2012-12-03
Filing date: 2013-08-23
Publication date: 2018-05-23
Anticipated expiration: 2033-08-23
Also published as: WO2014088657A1; AU2013356664A1; US9611271B2; CA2893200C; EP2925760A1; AU2013356664B2; US20150291610A1; EP2925760B1; JP2016507483A; EP2925760A4; CA2893200A1

Description

政府の支援
本発明は、国立衛生研究所からの助成金CA115526及び42056に基づく政府の支援でなされた。政府は本発明における一定の権利を有する。

本来はニチニチソウ植物の葉から分離されたビンカアルカロイド[Vinca rosea Linn., now Cantharanthus roseus (L.) G.Don] [Noble et al., Ann. N. Y. Acad. Sci.1958 76:882-894; Noble, Lloydia 1964 27:280-281; Svoboda et al., J. Am. Pharm. Assoc. Sci. Ed.1959 48:659-666]は、インドリンを含有する五環系に結合したインドールを含有する四環系を含有するインドール-インドリン二量体化合物のファミリーである。ビンカアルカロイドは、ビンドリンとカタランチンのカップリングの水和生成物として見ることができる。[Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc.2008, 130:420; Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2009, 131:4904.を参照のこと] その水和によって、下記、ビンブラスチン(1)、ビンクリスチン(2)及びビンデシン(1a)内に存在する21'-ヒドロキシル基が得られる。
ビンブラスチン及びビンクリスチンは、抗腫瘍薬としてのその臨床使用の結果として最も広く認識されたビンカアルカロイドであり、その発見は植物由来天然産物ががん化学療法に使用した最も初期の重要な貢献の一つである。[Neuss et al., In The Alkaloids; Brossi et al. Eds.; Academic: San Diego, 1990 37:229-240; Pearce, In The Alkaloids; Brossi et al. Eds.; Academic: San Diego, 1990 37:145-204; Kuehne, In The Alkaloids; Brossi et al.Eds.; Academic: San Diego, 1990 37:77-132.] 特に、その2つの天然アルカロイド、ビンブラスチン及びビンクリスチンは、重要な臨床薬であり、ホジキン病、精巣がん(80%の治癒率)、卵巣がん、乳がん、頭頚部がん、及び非ホジキンリンパ腫(ビンブラスチン)の治療のための併用治療に用いられるか又はリンパ性小児白血病及びホジキン病(ビンクリスチン)のための治癒的治療法に用いられる。半合成ビンカアルカロイドビンデシン(1a)、ビンブラスチンの誘導体は、肺がん、急性白血病、頻度は低いもののメラノーマ、及び乳がんを治療するために用いられる。[Goodman & Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Hardman et al. Eds., 9^th ed., McGraw-Hill, 1257-1260, 1996.]

その継続した臨床使用に対する制限は、P-糖タンパク質(Pgp)、ビンブラスチン及びビンクリスチンを含む多くの化学療法薬の細胞内濃度を低下させる細胞表面薬剤排出輸送体の過剰発現から誘導される腫瘍耐性の出現による治療のぶり返しの場合である。
ビンブラスチン及びビンクリスチンは、チューブリンを結合するとともに微小管形成及び細胞分裂を阻害することを示す最初の低分子であった。[Neuss et al., In The Alkaloids; Brossi et al.Eds.; Academic: San Diego, 1990 37:229-240; Pearce, In The Alkaloids; Brossi et al.Eds.; Academic: San Diego, 1990 37:145-204; Kuehne, In The Alkaloids; Brossi et al.Eds.; Academic: San Diego, 1990 37:77-132; Fahy, Curr. Pharm. Design 2001, 7:1181-1197; Potier, J. Nat. Prod. 1980 43:72-86; Kutney, Acc. Chem. Res. 1993 26:559-566; Miyazaki et al., Org. Lett. 2007 9:4737-4740.] その臨床的重要性、低天然存在度、及び構造的複雑性のため、ビンブラスチン及びビンクリスチンは、広範囲な及び継続した生物学的及び合成的な研究の課題であった。[Fahy, Curr.Pharm. Design 2001, 7:1181-1197; Potier, J. Nat. Prod.1980 43:72-86; Kutney, Acc. Chem. Res. 1993 26:559-566; Miyazaki et al., Org. Lett. 2007 9:4737-4740; Noble et al., Ann. N. Y. Acad. Sci. 1958 76:882-894; Noble, Lloydia 1964 27:280-281; Svoboda et al., J. Am. Pharm. Assoc. Sci. Ed. 1959 48:659-666; Langlois et al., J. Am. Chem. Soc. 1976 98:7017-7024; Kuehne et al., J. Org. Chem. 1991 56:513-528; Bornmann et al., J. Org. Chem. 1992 57:1752-1760; Yokoshima et al., J.Am.Chem.Soc. 2002 124:2137-2139; Kuboyama et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2004 101:11966-11970; Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2008 130:420-421; Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2009 131:4904-4916.]

ビンカアルカロイドは、チューブリン上の共通の結合部位を共有している。ベータ-チューブリン結合に対する相対的な全体の親和性はビンクリスチン＞ビンブラスチン＞ビノレルビン＞ビンフルニンであるが、チューブリンヘテロ二量体に対する全4つの薬剤の親和性にはほとんど差がない。ビンフルニンは生体外ではほとんど効力がないが、生体内では活性であり、このことはその優れた細胞取り込みに起因している。
これらの化合物はがん性細胞（cancerous cells）の発育を阻害するのに活性があるが、ビンカアルカロイドの有効性プロファイルには差がある。ビンクリスチンは、白血病及びリンパ腫を含む血液学的悪性腫瘍の治療に広い使用が見出されている。ビンクリスチンは、また、小児固体腫瘍において、従来は、小細胞肺がんにおいて広く用いられている。ビンブラスチンは、精巣がんに治癒的である併用療法の重要な成分である。ビンデシンは、白血病、リンパ腫、メラノーマ、乳がん、及び肺がんの治療に用いられている。ビノレルビンは、全く異なり、主に乳がん及び非小細胞肺がんに使用が見出されている。ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビンデシンの構造式を下記に示す。

ビンブラスチン及び最初のC20'-ビンブラスチン類縁体の白血病細胞系(L1210)、大腸がん細胞系(HCT116)及びビンブラスチン耐性の大腸がん細胞系(HCT116/VM46)に対する細胞発育阻害データは、Leggans et al., Org. Lett. 2012 14:1428-1431に本発明者及び共同研究者らによって報告されており、以下に示す。

本発明者及び共同研究者らは、ビンブラスチンの全合成[Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2008 130:420-421; Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2009 131:4904-4916]及びカタランチンとビンドリンのワンポット、二工程、バイオミメティックFe(III)促進単一電子酸化カップリング及び続いてのFe(III)/NaBH₄仲介その場アルケン酸化を用いて直接ビンブラスチンを生成するビンクリスチン及び鍵となる類縁体を含む関連した天然産物の全合成へのその拡張を報告した。[Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2006 128:10596-10612; Elliott et al., J. Am. Chem. Soc. 2006 128:10589-10595; Choi et al., Org. Lett. 2005 7:4539-4542; Yuan et al., Org. Lett. 2005 7:741-744; Wilkie et al., J. Am. Chem. Soc. 2002 124:11292-11294; Va et al., J. Am. Chem. Soc. 2010 132:8489-8495; Sasaki et al., J. Am. Chem. Soc. 2010 132:13533-13544; Kato et al., J. Am. Chem. Soc. 2010 132:3685-3687; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2010 20:6408-6410; Gotoh et al., ACS Med. Chem. Lett.2011 2:948-952; Gotoh et al., J. Am. Chem. Soc. 2012:134:13240-13243.]
最近では、本発明者及び共同研究者らは、ビンブラスチンC20'-第三級アルコールを導入するために用いられる無水ビンブラスチン三置換アルケンのFe(III)/NaBH4仲介遊離基酸化の研究の結果を詳述し[Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2009 131:4904-4916] 非活性化アルケンの直接官能基化の簡単な方法を得るための反応を拡張した。[Leggans et al., Org. Lett.2012, 14:1428-1431; Barker et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134:13588-13591.] これらの研究において、広いアルケン基質範囲が限定され、限定的なマルコフニコフ付加位置選択性が確定され、優れた官能基許容範囲が示され、別の遊離基トラップが導入され、Fe(III)塩及び開始する水素化物源が調べられ、反応パラメータに比較的に非感受性である著しく温和な反応条件(0〜25℃、5〜30分)が導入された。

このFe(III)/NaBH₄仲介反応に対する関心は、ビンブラスチンに接近する際のその使用だけでなく、別のC20'-官能性を組み込んでいるそれ以外は到達できないビンブラスチン類縁体の遅い段階の異なった[Boger et al., J. Org. Chem. 1984, 49:4050-4055]調製に示される機会から出現した。この部位がビンブラスチンの特性に重要なことは知られており[Borman et al., In The Alkaloids; Brossi, A., Suffness, M., Eds.; Academic: San Diego, 1990 37:133-144]、チューブリン結合複合体に深く埋め込まれることがわかっている[Gigant et al., Nature 2005 435:519-522]が、C20'-置換基作用の従来の探究は、C20'-アルコールの半合成O-アシル化又はその脱離及び続いてのアルケン還元又は超酸触媒付加に限られていた。[Miller et J. Med. Chem. 1977 20:409-413; Miller et al., Ger Patent 2753791 (Chem. Abstr. 1978 89:129778); Gerzon et al., Eur. Patent 55602 (Chem. Abstr. 1982 97:163310); Duflos et al., Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents 2002 2:55-75.] これらの初期の反応によって常に得られた誘導体の生物学的効力がかなり低下することになったが、限られた数の鍵となる類縁体のみの試験であった。
その結果として、Fe(III)/NaBH₄仲介アルケン官能基化反応の開発の過程で、その使用は、別のC20'-官能性をもった一連の鍵となるビンブラスチン類縁体の調製まで広げられた。最初の関心にはC20'-アジドやC20'-アミンが含まれ、これらの双方がビンブラスチン(1)の約1/100の効力及び20'-デオキシビンブラスチン(3)の約1/10の効力であることがわかった。
しかしながら、C20'-アミンのアシル化は、活性を10倍に改善し且つ置換されていないC20'-尿素又は20'-チオ尿素の組み込みによってビンブラスチン自体の効力にほぼ適合した化合物が得られた。以下でわかるように、ビンブラスチンのC20'-アミン、C20'-尿素、及びC20'-チオ尿素誘導体の体系的な探究によって、ビンブラスチンの効力を大幅に超えるC20'-尿素ベースの類縁体が得られるだけでなく、Pgp-過剰発現のビンブラスチン耐性腫瘍細胞系に対する活性も良好である。意外にも且つ期待とは対照的にチューブリン結合複合体のＸ線共結晶構造に示されるようにビンブラスチンC20'中心を取り囲んでいるチューブリン結合部位の立体障害に基づいて[Gigant et al., Nature 2005 435:519-522]、大きいC20'-尿素誘導体が適応し、細胞ベースの増殖分析において強力な官能基活性及び効果的に結合するチューブリンが示される。

発明の概略
本発明は、20'位に尿素基又はチオ尿素基で置換され、20'位炭素原子に直接結合されているその近位窒素原子が第二級であり且つ遠位窒素が一置換又はより好ましくは二置換されている; すなわち、1つ以上の好ましくは2つの置換基を含有する、ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビンデシンのようなビンカアルカロイド化合物を企図する。これらの近位及び遠位の窒素は、20'位近くの原子及び近位尿素窒素を介して20'-炭素原子に結合される、置換基R⁴及びR⁵に結合した遠位尿素窒素を有する尿素誘導体を示す企図された化合物の部分構造で下記に例示される。

後述される場合を除いて、遠位窒素R⁴又はR⁵置換基の1つはヒドリドであり得る。従って、R⁴及びR⁵の少なくとも1つはヒドリド(水素)以外であり、より好ましくは双方がヒドリド以外である。好ましくは、R⁴及びR⁵は、独立して、a)1〜約6個の炭素原子を有し且つ第三級又は第四級の炭素原子を含まない直鎖又は分枝鎖ヒドロカルビル基、b)1又は2つの環、12までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4つの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造、c)5員又は6員環原子及びアルキル部分に1〜3個の炭素を含有するアラルキル基又はヘテロアラルキル基であり、又はd)遠位窒素原子(R⁴及びR⁵)に結合した2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5〜10個の環原子を有する単環又は縮合環系を含有する脂肪族、複素環又は芳香族複素環構造を形成し且つ独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2つの追加のヘテロ原子を含有し得る。上記のb)又はc)又はd)の環構造は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい。上記の企図された20'-置換ビンカアルカロイドは、また、分子の10'位にフルオロ基で更に置換され得る。このような企図された化合物の医薬的に許容され得る塩もまた企図される。
好ましいビンカアルカロイドは、必要により、下記の構造式Ｉで例示されるようにヒドリドよりもむしろフルオロ基で10'位に置換されていてもよい20'-尿素置換された又は20'-チオ尿素置換されたビンブラスチン、ビンクリスチン又はビンデシンである。

これらの3つの化合物は、構造的に非常に類似し、各々が抗がん治療に活性がある。更に、2011年8月25日に公開された国際公開第2012/103700 A2号パンフレットに示されているように、ビンクリスチン又はビンブラスチンの10'位をフルオロ基で置換すると、分析した抗がん領域においてほとんど同一の活性を有する化合物が得られた。他の位置での他の基による置換に対する活性の類似性は、ビンカアルカロイド及びこれらの3つの具体的なアルカロイド化合物の中の当該技術においても認められる。
従って、上記式Ｉにおいて、Zはヒドリド(H)又はフルオロ(F)であり、YはO又はS、好ましくはOであり、R⁴及びR⁵は独立してヒドリド又は後述する置換基であるが、ZがFである場合にのみR⁴及びR⁵は共にヒドリドである。
一態様において、R⁴とR⁵の一方又は双方は、1〜約6個の炭素原子を有する第三級又は第四級ヒドロカルビル基以外の直鎖又は分枝鎖ヒドロカルビル基である。ZがHである場合、R⁴及びR⁵の少なくとも1つはヒドリド以外であり、より好ましくは、R⁴及びR⁵の双方がヒドリド以外である。本発明の他の態様において、R⁴及びR⁵は、また、1又は2つの環、12個までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4つの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造であり得る。R⁴及びR⁵は、第3の態様においては5員又は6員環原子及びアルキル部分に1〜3個の炭素を含有するアラルキル基又はヘテロアラルキル基であり得る。遠位窒素原子(R⁴及びR⁵)についての2つの置換基はその窒素原子と一緒に5員又は6員単環又は2つの環を含有する縮合環系を形成することができ、本発明の第4の態様においては各々が5員又は6員を含有することができ、独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2つの追加のヘテロ原子を含有することもできる。

前述の環又は環系の各々は、必要によりC₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されてもよい。上記の企図された20'-置換ビンカアルカロイドは、また、分子の10'位にフルオロ置換基で更に置換され得る。好ましいビンカアルカロイドの医薬的に許容され得る塩もまた企図される。
生理的に(医薬的に)許容され得る担体又は希釈剤に溶解又は分散させたがん細胞増殖阻害量の企図された20'-尿素置換された又は20'チオ尿素置換されたビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン、ビンクリスチン及びビンデシン又はこれらの医薬的に許容され得る塩の化合物を含有する医薬組成物もまた企図される。
診断されたがんを治療する方法もまた企図される。その治療は、哺乳類の被検者の範囲内でのように生体外又は生体内で行うことができ、治療的に有効な量、例えば、がん細胞増殖阻害量の前に定義した企図された20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物をがん性細胞培養物に又は哺乳類の被検者に投与することによってがん性細胞と接触させ、好ましくはその接触(投与)を反復して、時間と共に少なくともがん細胞の発育(増殖)を阻止することを含んでいる。そのように治療されるがん細胞には、ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビンデシンのような置換されていないビンカアルカロイド親化合物によって通常治療されるものが含まれ、白血病細胞又はリンパ腫細胞のような血液がん細胞だけでなく、がん、肉腫、メラノーマ、神経腫等の細胞が含まれる。

本発明は、いくつかの利点及び効果を有する。
本発明の一利点は、好ましい20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物がビンブラスチンのような置換されていない親ビンカアルカロイドより大腸がんのがん細胞系に対する細胞毒性薬として約10倍の効力にほぼ等しいことである。
本発明の一効果は、好ましい20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物がビンブラスチンのような置換されていない親ビンカアルカロイドより多剤耐性大腸がんのがん細胞系に対して約80倍の効力にほぼ等しいことである。
本発明の他の利点は、企図された20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物が置換されていない親ビンカアルカロイドより白血病細胞系に対する細胞毒性薬として約10倍の効力にほぼ等しいことである。
本発明の他の効果は、企図された20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物が合成するのに比較的容易なことである。
なお更なる利点及び効果は、以下の開示から当業者に明らかになるであろう。

定義
本発明及び付随した特許請求の範囲に関連して、下記の用語は、下記の意味を有する:
冠詞「1つの」は、冠詞の文法上の対象の1つ又は1つを超える(すなわち、少なくとも1つ)を意味するために本明細書に用いられる。一例として、「1つの元素」は、1つの元素又は1つを超える元素を意味する。
語「オルト」、「メタ」及び「パラ」は、これらの通常の方法でそれぞれ「1-2」、「1-3」及び「1-4」に置換されているベンゼノイド化合物を記載するために用いられる。これらの同じ語は、脂肪族化合物においてもこれらの同じ置換パターンを記載するのに便利なものとして本明細書に用いられる。
語「ヒドロカルビル」は、炭素と水素のみを含有する直鎖及び分枝鎖の脂肪族基並びに脂環基が含まれる非芳香族基のために簡略にした用語として本明細書に用いられる。従って、アルキル基、アルケニル基及びアルキニル基が考えられるが、厳密に言えばヒドロカルビル基でもあるフェニル基やナフチル基のような芳香族炭化水素は本明細書においては後述されるようにアリール基と呼ばれる。
個々の脂肪族ヒドロカルビル置換基が意図される場合、その基、すなわち、C₁-C₄アルキル、メチル又はヘキシニルが挙げられる。例示的なヒドロカルビル基は、1〜約6個の炭素原子、好ましくは1〜約4個の炭素原子の鎖を含有する。
特に好ましいヒドロカルビル基は、アルキル基である。結果として、一般化された、より好ましい置換基は、記述語「ヒドロカルビル」を本明細書に列挙される置換基のいずれかの「アルキル」で置き換えることによって挙げることができる。

アルキル基の例としては、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル等が挙げられる。適切なアルケニル基の例としては、エテニル(ビニル)、2-プロペニル、3-プロペニル、1,4-ペンタジエニル、1,4-ブタジエニル、1-ブテニル、2-ブテニル、3-ブテニル、ヘキシニル、ヘキサジエニル等が挙げられる。アルキニル基の例としては、エチニル、2-プロピニル、3-プロピニル、1-ブチニル、2-ブチニル、3-ブチニル等が挙げられる。
語「ヒドロカルビル」を用いる場合に通常の化学接尾語命名法に従うが、得られた名前の1つ以上の置換基に対する類似性が可能なことから、末端の「イル」を除くとともに適切な接尾語を付加する通常の実施に必ずしも従うとは限らない。従って、ヒドロカルビルエーテルは、化学命名法の通常の原則に従う場合におそらくより適切であり得るように「ヒドロカルボキシ」基ではなく「ヒドロカルビルオキシ」基と呼ばれる。説明的ヒドロカルビルオキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、n-プロポキシ基、イソプロポキシ基、アリルオキシ基、n-ブトキシ基、イソブトキシ基、sec-ブトキシ基、tert-ブトキシ基、シクロヘキセニルオキシ基等が挙げられる。
当業者が理解するように、C₁アルケニル基のような存在するはずがない置換基は、語「ヒドロカルビル」によって包含されることを意図しないが、2個以上の炭素原子を有するような置換基は意図する。
用語「シクロヒドロカルビル」又は「炭素環式」は、単独で又は組み合わせて、3〜約8個の炭素原子、好ましくは3〜約6個の炭素原子を含有し、且つ環状であるヒドロカルビル基を意味する。このようなシクロヒドロカルビル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘプチニル等が挙げられる。

用語「アリール」は、単独で又は組み合わせて、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル基、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ基、フェニル基、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル基、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ基、ハロゲン(フルオロ、クロロ又はブロモ)基、ニトロ基等より選ばれる1、2又は3つの独立した置換基をもっていてもよい以下に挙げられるフェニル基又はナフチル基又は他の基、例えばフェニル、4-トリル、3-クロロ-4-エトキシフェニル、4-(tert-ブトキシ)フェニル、4-フルオロフェニル、4-クロロフェニル、2,3-ジメトキシフェニル、3,4,5-トリメトキシフェニル、4-トリフルオロメチルフェニル等を意味する。
ヘテロシクリル(ヘテロシクロ)は、必要により1個以上の環炭素原子にハロゲン基、ヒドロカルビル基、ヒドロカルビルオキシ基、オキソ基等で、及び/又は第二級環窒素原子(すなわち、-NH-)にヒドロカルビル基で置換されていてもよい、飽和又は部分的に不飽和の環内に独立して窒素原子、酸素原子又は硫黄原子である1〜4個の環内ヘテロ原子(非炭素)を含有する5員又は6員環であり、ここで、ヒドロカルビル基又はヒドロカルビルオキシ基は、1〜約6個の炭素原子、好ましくは1〜約4個の炭素原子を含有する。このようなヘテロシクリル基の例は、ピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、ジヒドロピリジル基、テトラヒドロピリジル基、4-(C₁-C₆-ヒドロカルビル)-ピペリジニル基、4-フェニルピペリジニル基、キノリニル基、イソキノリル基、インドリニル基、テトラヒドロインドリニル基、イソインドリニル基、テトラヒドロイソインドリニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、オキサチアゾリル基、1,2,3-トリアゾリル基、1,2,4-トリアゾリル基、ピラゾリル基、1,2,4-オキサジアジニル基及びアゼピニル基等である。

「ヘテロアリール」基は、好ましくは炭素以外の環内に1、又は2、又は3又は4つの原子を含有する芳香族複素環である。これらのヘテロ原子は、独立して、窒素、硫黄又は酸素であり得る。ヘテロアリール基は、単一の5員又は6員単環又は2つの6員環又は5員環と6員環を有する縮合環系を含有し得る。例示的なヘテロアリール基としては、6員環置換基、例えばピリジル、ピラジル、ピリミジニル、及びピリダジニル; 5員環置換基、例えば1,3,5-トリアジニル基、1,2,4-トリアジニル基又は1,2,3-トリアジニル基、イミダジル基、フラニル基、チオフェニル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、イソキサゾリル基、チアゾリル基、1,2,3-オキサジアゾリル基、1,2,4-オキサジアゾリル基、1,2,5-オキサジアゾリル基、又は1,3,4-オキサジアゾリル基及びイソチアゾリル基; 6/5員縮合環置換基、例えばベンゾチオフラニル基、イソベンゾチオフラニル基、ベンゾイソキサゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、プリニル基、テトラヒドロイソキノリニル基、テトラヒドロイソインドリニル基、及びアントラニリル基; 及び6/6員縮合環、例えば1,2-ベンゾピロニル基、1,4-ベンゾピロニル基、2,3-ベンゾピロニル基及び2,1-ベンゾピロニル基、キノリニル基、イソキノリニル基、シンノリニル基、キナゾリニル基、及び1,4-ベンゾキサジニル基が挙げられる。
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素又は臭素を意味する。用語「ハロヒドロカルビル」は、上で定義した通りの重要性を有するヒドロカルビル基を意味し、ここで、1つ以上の水素はハロゲンで置き換えられる。このようなハロヒドロカルビル基の例としては、クロロメチル、1-ブロモエチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、1,1,1-トリフルオロエチル等が挙げられる。用語ペルフルオロヒドロカルビルは、各水素がフッ素原子で置き換えられているヒドロカルビル基を意味する。このようなペルフルオロヒドロカルビル基の例は、上記のトリフルオロメチルに加えて、ペルフルオロブチル、ペルフルオロイソプロピル、ペルフルオロドデシル及びペルフルオロデシルである。ハロヒドロカルビルオキシ置換基は、ハロゲン化エーテル、例えばトリフルオロメトキシ基等である。

発明の詳細な説明
本発明は、このような化合物の20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物又は医薬的に許容され得る塩を企図する。より詳しくは、企図されたビンカアルカロイド化合物は、20'位に尿素基又はチオ尿素基で置換され、20'炭素原子に直接結合されている近位窒素原子は第二級であり(近位窒素原子に1つの水素原子が結合されていれる)且つそれの遠位窒素が1つの、より好ましくはビンカアルカロイド化合物が10'-フルオロ基を含有しない場合には2つの非ヒドリド置換基(下記式中のR⁴基とR⁵基)を含有する。好ましいビンカアルカロイド化合物は、必要により、10'位がフルオロ基で更に置換されていてもよい20'-置換ビンブラスチン、20'-置換ビンクリスチン又は20'-置換ビンデシンであり、構造が下記式Ｉに対応する:

式中、ZはH又はFであり、R⁴及びR⁵は後述される。
R⁴及びR⁵の置換基は、独立して、ヒドリド、a)第三級又は第四級の炭素原子を含まない、1〜約6個の炭素原子、好ましくは2〜6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖又は環状ヒドロカルビル基、b)1又は2つの環、12個までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4つの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造からなる群より選ばれる。第3の置換基、c)は、3個までの環原子が独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る5又は6個の環原子及びアルキル部分に1〜3個の炭素を含有するアラルキル基又はヘテロアラルキル基である。或いは、d)遠位窒素原子に結合した2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5員又は6員脂肪族又は芳香族単環又は2つの環を含有する縮合環系を形成し、その2つの環の各々が5環原子又は6環原子を含有する。上記a)〜d)のR⁴とR⁵の置換基の少なくとも1つはヒドリド以外であり、より好ましくはZがHである場合はR⁴とR⁵の置換基は共にヒドリド以外である。ZがFである場合、R⁴とR⁵は共にHであり得るが、1つだけがHであることが好ましく、R⁴とR⁵の双方がH以外であることがより好ましい。
d)の単環又は縮合環系は、独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2つの追加のヘテロ原子を含有し得る。上記のb)、c)及びd)の環又は環系の各々は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されてもよい。

より詳しく好ましい1つ以上の好ましい2つの遠位窒素原子置換基(R⁴基及びR⁵基)を調べると、ZがFである場合にのみR⁴とR⁵の双方がヒドリドであり得るが、好ましくはR⁴及びR⁵の少なくとも1つはヒドリド以外であり、より好ましくはR⁴とR⁵の双方がヒドリド以外である。1つの好ましいR⁴及び/又はR⁵置換基は、第三級又は第四級の炭素原子を含まない、1〜6個の炭素原子、好ましくは2〜6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖ヒドロカルビル基である。例示的なヒドロカルビル置換基を一般的に前述してきた。このヒドロカルビル基は、t-ブチル基[(CH₃)₃C-]のように第三級炭素原子又はネオペンチル基[(CH₃)₃CH₂-]に存在するように第四級炭素を含有する置換基を除外する。
遠位窒素置換基(R⁴及び/又はR⁵)の第2の基は、1又は2つの環、12個までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4個までの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造である。その環構造は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群よりそれ自体が選ばれる、1、2又は3つの置換基(環置換基)で置換されていてもよい。説明的環構造としては、前述のフェニル、ビフェニル、ナフチル、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロデシル、ピリジル、フラニル、プリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソインダニル等が挙げられる。
企図された芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造R⁴及び/又はR⁵置換基は、1〜3つのそれ自体の置換基を含有することができるが、好ましくは1つだけ、例えばクロロ又はフルオロのようなハロゲン、メチルのようなC₁-C₆-ヒドロカルビル基、メトキシのようなC₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ基、トリフルオロメチルのようなペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル基又はペンタフルオロエトキシのようなペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ基を含有する。1つを超える置換基が環構造置換基に存在する場合、これらの複数の置換基は同じ基である必要はない。

1つの好ましい窒素置換基は、環内に3〜6個の炭素原子を含有する1つの環を含有する。他の好ましい置換基は、1又は2つの環を含有する芳香環構造である。1つの好ましい芳香環は、1つの置換基を含有する。
遠位窒素原子R⁴及び/又はR⁵置換基の他の企図された基は、3個までの環原子が独立して窒素、酸素又は硫黄及びアルキル部分に1〜3個の炭素であり得る5又は6個の環原子を含有するアラルキル基又はヘテロアラルキル基である。企図された環構造の芳香環部分は、必要により、上述した通り、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい。0又は水素以外の1つの環置換基が好ましい。
説明的5員又は6員芳香族及び芳香族複素環置換基もまた既に述べた。アラルキル基又はヘテロアラルキル基のアルキル部分は、1〜3個の炭素原子を含有し得る。説明的環置換されていないアラルキル基としては、ベンジル基及びフェネチル基が挙げられるが、説明的ヘテロアラルキル基としてはメチルピリジル及びエチルイミダゾリルが挙げられる。
遠位尿素窒素原子は、また、2つのR⁴及びR⁵置換基と一緒に環構造を形成することができる。その窒素含有環構造は、5員又は6員単環を含有することができ、環が共に5員、又は共に6員であるか、又は一方の環が5員であり、もう一方が6員である2つの縮合環構造を含有することもできる。企図された環構造は、また、独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る環(1又は2つ)内に1又は2つの追加のヘテロ原子(非炭素原子)を含有することができる。この窒素含有環は、好ましくは6員環又は5/6員縮合環系である。5員、6員、6/6員及び5/6員環に存在する遠位窒素原子を含有する20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンブラスチン化合物を以下に例示する。

これらの窒素含有環は、1-イミダジル基、1-ピラゾリル基、1-(1,2,4-トリアゾリル)基、2-o-イソキサジニル基又は2-(1,3,2-ジオキサゾリル)基の場合のように芳香族であり得るが、通常では1-ピペリジニル、1-ピロリジニル、1-ピペラジニル、1-モルホリニル、1-チオモルホリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソインドリニル等の脂肪族化合物である。ピペラジン環の4位窒素に存在する第二級窒素(-NH-)のような遊離水素原子を含有する-NR⁴R⁵環状置換基が、イソシアネート又はイソチオシアネート試薬と反応することから合成の間及びその後にt-Boc、F-moc、アセチル、メチルのようなC₁-C₆-ヒドロカルビル、又は他の基で遮断されることは留意される。
尿素窒素原子含有環構造は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されてもよい。
ピペリジニル基又は-NR⁴R⁵環状構造によって形成された環構造の芳香族部分に結合したフェニル置換基は、独立して、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ハロゲン(フルオロ、クロロ又はブロモ)及びニトロからなる群より選ばれる1〜3つの置換基を含有し得る。
本発明の他の態様は、二重に置換されたビンカアルカロイド化合物である。この化合物は、上述した20'-尿素基又は20'-チオ尿素基を含有し、更に分子の10'位に付加されたフルオロ(F)置換基を含有する。異なるフッ素化ビンカアルカロイドの調製は、Va et al., J Am Chem Soc 2010 132:8489-8495及び2011年8月25日に公開された国際公開第2011/103007号パンフレットに述べられているが、その合成は本明細書にも使用し得る。下記のデータから分かるように、ビンブラスチン分子中の20'-尿素置換及び10'-フルオロ置換双方の存在によって、調べたがん細胞系の各々に対する発育阻止活性がいずれかの置換単独の阻止活性よりも大きかった。

医薬組成物及び方法
企図された20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物は、また、少なくとも、血液がん細胞、例えば白血病細胞又はリンパ腫細胞だけでなく、がん、肉腫、メラノーマ、神経腫等の細胞の増殖(発育)を阻害するのに有効である薬剤(医薬組成物)の製造において使用し得る。企図された化合物、薬剤又はそれを含有する医薬組成物は、そのがん性細胞に親化合物である場合にそれを必要としている被検者のように生体外（in vitro）、又は生体内（in vivo）で接触させることによってその発育を阻止する。そのように用いられる場合、生体外分析のように、医薬使用に意図しない組成物中に存在し得るものと比較してまとめて医薬的に許容され得る希釈剤と言われる医薬的に許容し得る塩、緩衝剤等が存在する。
本発明の化合物は、それ自体で、又は医薬的に許容され得る塩として用いるために供給され得る。企図された化合物は、アミンである。親ビンブラスチンは5.4及び7.4のpKa値が報告されているが、ビンクリスチンは6.04及び7.67のpKa値が報告されている。[The Merck Index, 13^th ed. Merck & Co., Whitehouse Station, NJ, 2001, pages 1778-1779.] 双方の化合物は、それらの硫酸塩として市販されている。ビンデシンは、6.04及び7.67のpKa値を有することが報告されている[The Merck Index, 12^th ed., Merck and Co., Whitehouse Station, NJ, 1996, page 1704]。ビンデシンもまた硫酸塩として市販されている。

企図された化合物に有効な例示的な塩としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない: 硫酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ブチル酸塩、樟脳酸塩、カンファスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシ-エタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩(palmoate)、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニル-プロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、メシル酸塩及びウンデカン酸塩。
Berge, J. Pharm. Sci. 1977 68(1):1-19には、医薬化合物による医薬的に許容され得る塩を形成する一般に用いられる医薬的に許容され得る酸及び塩基のリストが記載されている。
ある場合には、塩は、本発明の化合物の単離、精製又は分割の援助としても使用し得る。そのような使用において、用いられる酸及び調製される塩は、医薬的に許容し得る必要はない。
以下のデータから分かるように、企図された化合物は、ナノモル〜ミクロモル量で生体外分析実験に活性がある。生体外分析のような分析において用いられる場合、企図された化合物は、分析すべき接触細胞に対して約0.5nM〜約1000nM、好ましくは約1nM〜約50nMの濃度を与えるのに充分である量で組成物中に存在する。

企図された医薬組成物は、生理的に(医薬的に)許容され得る担体に溶解又は分散させたがん性細胞増殖阻害量の企図された20'-尿素置換又はチオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容され得る塩を含有する。その量は、典型的には、同一のがんを治療するのに用いられる親ビンカアルカロイドの量とほぼ同じ量〜少ない量である。このような組成物は、その細胞を接触させるために細胞培養物のように生体外で哺乳類細胞に投与され得るか又は必要としている生きたホスト哺乳類のように生体内で細胞を接触させ得る。
通常では、ここで企図される20'-置換ビンカアルカロイドのような新生物治療薬は、受容者の体表面積(bsa)の1平方メートル当たりの質量で生体内に非経口的に投与される。成人に対するこの量は、典型的には、約1〜約20mg/m² bsa、及び小児に対してはその量の約1/2であり、量は白血球減少を引き起こさないように選ばれる。体重約10kg以下の小児は、典型的には約0.05mg/kgで投与される。
例えば、硫酸ビンブラスチンは、典型的には、成人に第1の用量として3.7mg/m² bsa、第2週目の用量として5.5mg/m² bsa、第3週目の用量として7.4mg/m² bsa、第4週目の用量として9.25mg/m² bsa及び第5週目の用量として11.1mg/m² bsaで投与される。投薬は、典型的には、18.5mg/m² bsaを超えず、白血球数が約3000細胞/mm³に減少する場合には増加してはならない。成人に対する常用量は、約5.5〜7.4mg/m² bsaである。企図された20'位尿素置換又は20'位チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容され得る塩の投薬は、典型的には、親化合物の投薬を超えず、より少量であり得る。
企図された組成物は、典型的には、それを必要としている被検者に1ヵ月以内に複数回、例えば毎週生体内で投与され、数ヵ月から数年までの期間にわたって投与され得る。通常では、企図された組成物は、治療の過程で複数回投与される。

通常の実施において、企図された20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物は、親20'-ヒドロキシ-ビンカアルカロイドと同じ量及び同じ間隔で同一の疾患状態を治療するために投与される。企図された20'-尿素-又はチオ尿素-置換ビンカアルカロイドは、治療の最初の過程として用いることができ、好ましくは、治療の最初の過程又は後の過程後に再発する場合には、特に多剤耐性が示されるか又は疑われる(必要とされる)場合に投与される。
企図された医薬組成物は、好ましくは望まれる慣用の非毒性の医薬的に許容され得る担体、補助剤、及び賦形剤を含有する製剤で、経口的(口から)又は非経口的に投与され得る。本明細書に用いられる用語非経口には、皮下注射、静脈内注射(最も好ましい)、筋肉内注射、胸骨内注射、又は注入技術が含まれる。薬剤の製剤化は、例えば、Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania; 1975 and Liberman, H.A.and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980に述べられている。
経口投与のための固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、及び顆粒剤が含まれ得る。固体剤形中の企図された化合物は、前述のように、血清又は血漿中、約0.5nM〜約1000nM、好ましくは約1nM〜約50nMの濃度にするのに充分な量である。固体剤形は、また、1週間の間に複数回投与され得る。

このような固体剤形において、本発明の化合物は、普通は、必要とされる投与経路に適切な1つ以上の補助剤と組み合わせられる。経口的に投与される場合には、化合物は、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸や硫酸のナトリウム塩やカルシウム塩、ゼラチン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、及び/又はポリビニルアルコールと混合され、次に便利な投与のために錠剤化又は封入され得る。このようなカプセル剤又は錠剤は、活性化合物をヒドロキシプロピルメチルセルロース中に分散させて得ることができるように徐放性製剤を含有し得る。カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合の剤形は、また、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウム又は炭酸カルシウム又は重炭酸マグネシウム又は重炭酸カルシウムのような緩衝剤を含み得る。錠剤及び丸剤は、更に、腸溶コーティングで調製され得る。
企図された医薬組成物は、好ましくは、非経口投与に適応される。従って、医薬組成物は、好ましくは、投与されるときに液体形態であり、最も好ましくは、液体は水性液体であるが、他の液体も後述されるように企図され、現在非常に好ましい組成物は注射用製剤である。
従って、注射用製剤、例えば、滅菌注射用水性又は油性溶液又は懸濁液は、適切な分散剤又は沈殿防止剤を用いた当該技術に従って製剤化され得る。滅菌注射用製剤は、また、非毒性の非経口的に許容され得る希釈剤又は溶媒中の滅菌注射用溶液又は懸濁液、例えば1,3-ブタンジオール中の溶液であり得る。使うことができる許容され得る賦形剤及び溶媒には水、リンゲル液、及び生理食塩水、リン酸緩衝食塩水がある。

他の液体医薬組成物としては、例えば、非経口投与に適している溶液が挙げられる。20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド活性成分の滅菌水溶液又は水、エタノール、又はプロピレングリコールを含む溶媒中の活性物質成分の滅菌溶液は、非経口投与に適している液体組成物の例である。いくつかの態様において、企図された20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイドは、使用前に注射用に適切な塩化ナトリウムのような液体媒体に溶解される乾燥粉末として供給される。
更に、溶媒又は懸濁媒体として滅菌不揮発性油も慣用的に使われている。このために合成モノ-又はジグリセリドを含む任意の穏やかな不揮発性油が使われ得る。更に、オレイン酸のような脂肪酸も注射用組成物の調製に用い得る。ジメチルアセトアミド、イオン及び非イオン清浄剤を含む界面活性剤、ポリエチレングリコールが使用し得る。上述したような溶媒と湿潤剤の混合物も有効である。
滅菌溶液は、望ましい溶媒系に活性成分を溶解し、次に得られた溶液をメンブランフィルターに通過させて、滅菌することによって、或いは滅菌条件下で滅菌化合物を予め滅菌した溶媒に溶解することによって、調製され得る。
治療を必要としている及び企図された化合物を含有する医薬組成物が投与される哺乳類(被検者)は、ヒトのような霊長類、チンパンジー又はゴリラのような類人猿、カニクイザル又はマカクのようなサル、ラット、マウス又はウサギのような実験動物、イヌ、ネコ、ウマのようなコンパニオンアニマル、又は乳牛又は食用牛、ヒツジ、ラム、ブタ、ヤギ、ラマのような食用動物等であり得る。

生体外分析が企図される場合、細胞や組織のような分析すべき試料が使用し得る。これらの生体外組成物は、典型的には、水、塩化ナトリウム又は塩化カリウム、及び良く知られているように、行われる分析によっては、pH 4.0〜8.5、好ましくはpH 7.2〜7.4のような望ましいpH値に緩衝される1つ以上の緩衝塩、例えば酢酸塩、リン酸塩、Hepes等、EDTAのような金属イオンキレート剤を含有する。
好ましくは、医薬組成物は、単位剤形である。このような形において、組成物は、適切な量の活性化合物を含有する単位用量に分割される。単位剤形は包装された製剤であり得、包装は、例えば、バイアル又はアンプル中に分離した量の製剤を含有する。
他の好ましい実施態様例において、企図された20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイドは、1つ以上の他の新生物治療化合物と投与される。このような共同治療は当該技術において周知であり、シスプラチン、5-フルオロウラシル等の他の薬剤が同時投与される。その同時投与は、通常、2つ以上の活性薬剤が協力して作用し得るように時間が決められている各化合物の物理的に別個の投与である。

結果及び考察
化学.
標的にされたビンブラスチンC20'-尿素及びC20'-チオ尿素類縁体を2つの方法によって調製した(スキーム1)。
スキーム1

第1の方法(方法1)には、最近入手しやすい20'-アミノビンブラスチン(7) [Leggans et al., Org. Lett. 2012, 14:1428-1431]を利用可能なイソシアネートで処理して、対応する尿素を形成することが含まれた。イソシアネートがすぐに利用可能でなかった場合には、方法2を用いた。この方法には、20'-アミノビンブラスチン(7)をp-ニトロフェニル-クロロホーメートで処理して、活性化カルバメート13を得、次に、これを一連のアミンで処理して、追加のC20'-尿素類縁体を得ることが必要とされた。
また2つの相補的な方法を用いてビンブラスチンC20'-チオ尿素類縁体を調製した(スキーム2)。
スキーム2

従って、20'-アミノビンブラスチン(7)をイソシアネートに対して小さな一連の市販のイソチオシアネート(方法3)で処理して、対応するC20'-チオ尿素類縁体を得た。或いはまた、20'-アミノビンブラスチン(7)と二硫化炭素(82%)の反応から作られるか又は無水ビンブラスチン(KSCN)の直接のFe(III)/NaBH₄仲介官能基化によって利用可能である[Leggans et al., Org.Lett.2012 14:1428-1431]20'-イソチオシアノ-ビンブラスチン(5)[Leggans et al., Org.Lett.2012 14:1428-1431]を利用可能なアミンで処理して(方法4)、一組のC20'-チオ尿素ビンブラスチン類縁体を得た。
一連のN,N-二置換C20'-尿素及びC20'-チオ尿素ビンブラスチン類縁体もまた、方法2及び方法4並びに市販のN,N-二置換アミンを用いて調製した。更に、強力なC20'-尿素及びC20'-チオ尿素誘導体であることがわかったものと直接比較するためにカルバメート類縁体45を合成した。従って、ビンブラスチン(1)をN,N-ジメチルカルバミルクロリドで処理して、C20'-カルバメート45を得た(下記)。

生物活性.
C20'-置換ビンブラスチン類似体について、HCT116(ヒト大腸がん)、及びHCT116/VM46(耐性ヒト大腸がん)腫瘍細胞系に対する細胞発育阻止活性を調べ、後者はPgpの過剰発現によってビンブラスチンに対して耐性(100倍)を示している。[Lampidis et al., Biochemistry 1997 36:2679-2685; Perego et al., Cancer Res.2001 61:6034-6037.] 報告されたように[Leggans et al., Org.Lett.2012 14:1428-1431]、置換されていない尿素11に基づく実験を行ったが、ビンブラスチンの効力に一致しなかった。本明細書において調製された系統的に異なる一置換C20'-尿素誘導体の試験の結果を、ビンブラスチン(1)及びLeggans et al., Org.Lett.2012 14:1428-1431の置換されていない尿素(11)と一緒に下記表にまとめる。
L1210(マウス白血病)がん性細胞系に対する細胞発育阻止活性も測定し、結果はHCT116がん性がん細胞系（cancerous carcinoma cell line）によって見られたものと質的に及び量的に(IC₅₀)ほとんど同じであり、尿素誘導体についてはビンブラスチン自体の活性に一致したか又は超えたIC₅₀値が得られた。結果を下記に示す。

末端N-アルキル置換基は、充分な耐性があるだけでなく、活性の著しい増大を示し、11の効力に対して改善し且つビンブラスチン自体をかなり上回る誘導体を示した。小さいN-アルキル置換基をもった、尿素誘導体14〜18がこれらのうちで最も顕著である。これらの化合物の一部は、HCT116に対するIC₅₀値が700-800pMであり、HCT116に対する活性を11に相対して約10倍に改善し、ビンブラスチン自体の効力を上回った(約10倍)。
より大きいN-アルキル誘導体19及び21さえも、ビンブラスチンの活性に一致したか又はわずかに上回り、大きいt-ブチル置換基をもった20だけが、わずかであるが、驚くべきことに期待が示される活性の適度の低下が見られた。22においてアルキル置換基に対してH-結合供与体か又は受容体として働き得る極性基を導入すると、HCT116細胞系において他の小さいアルキル置換基で認められた活性が維持され; しかしながら、親尿素11に見られるのと同様に、耐性細胞系に対する効力に有害作用を有した(IC₅₀ >1000nM、HCT116/VM46)。
N-アリール置換基をもった一置換C20'-尿素誘導体(23-30)の試験は、更に予想外であった。全てが親尿素11を超えるレベルで細胞発育阻止活性を示し、ビンブラスチン自体の効力に一致したか又は上回った。親N-フェニル基尿素23についての電子吸引性又は電子供与性置換基は充分に許容される。

強い極性置換基は調べなかったが、p-メトキシ置換基がp-置換基の中で最良であるとわかったことは注目すべきことである。結果として、m-及びo-メトキシフェニル置換基の影響も調べた。重大なことに、N-(m-メトキシフェニル)及びN-(o-メトキシフェニル)尿素置換基をもったそれぞれ29及び30は、示された例外的活性を示し、ビンブラスチンの効力をほぼ10倍に大幅に超え(IC₅₀ 770 pMと6.8nM、HCT116)、ビンブラスチン耐性HCT116細胞系に対して独特な強い活性を示した(IC₅₀ = 80及び65nM、HCT116/VM46)。この活性は15及び18と共に、ビンブラスチンより10倍の改善を示している。
フェニル環と尿素窒素(31及び32)間に1又は2つのメチレンスペーサーを配置すると、双方の誘導体が23とビンブラスチン自体の活性と一致している活性が維持された。31におけるフェニル環を芳香族複素環(フラン又はピリジン)で置き換えると、33及び34が得られ、親31に匹敵する活性を示し、ビンブラスチンの効力と一致したか又はわずかに超えた。
チューブリン結合複合体のＸ線結晶構造において認められたビンブラスチンC20'中心を取り囲んでいるチューブリン結合部位の見掛けの立体障害を考えれば、すべてのこれらの所見は予想外である。[Gigant et al., Nature 2005 435:519-522.] 更に、どのくらいの空間だけがC20'-誘導体に利用できるかをプローブするために、剛性N-ビフェニル尿素35を調製し調べた。注目すべきことに、下記で、ビンブラスチンと区別ができないレベルで細胞発育阻止活性を示した。

この結果は、このようなC20'-尿素誘導体への立体的に厳しい変性が本明細書において検索されたものをまさに超えるらしいことを示している。結果として及び効力の改善に加えて、このことは、Pgp排出[Hitchcock, J. Med. Chem. 2012 55:4877-4895]、生体内薬剤分布、選択的細胞取り込み、及び代謝が含まれる追加の特徴に影響する薬剤の物理的及び化学的特性を調整する優れた部位であり得ることである。
一連のチオ尿素誘導体についても、以下に示されるように調べた。置換されていないチオ尿素誘導体12が最初の実験での対応する尿素11の活性に近いが(IC₅₀ = 7.7と7.5nM、HCT116)、一置換N-アルキル又はN-アリール誘導体36及び37は、対応する尿素21及び23の活性の1/3〜1/4であることがわかった(HCT116)。しかしながら、感受性細胞系とビンブラスチン-耐性細胞系間の活性差がこのチオ尿素系列で減少したことは注目すべきであり(15倍〜25倍と100倍)、Pgpによって輸送され得ることが幾分効果的でないことが示された。[Hitchcock, J. Med. Chem. 2012 55:4877-4895]

下記で、末端尿素窒素が完全に置換され得るか又は誘導体がN-H H-結合供与体の存在を必要とするか又はそれから利益を得るかを確かめるために、N,N-二置換尿素とチオ尿素の小さいが重要な系列を調べた。注目すべきことに、すべてのN,N-二置換尿素は、ビンブラスチン活性と一致しているか又は上回り且つ末端H-結合供与部位がこれらの機能活性に重要でないことを示す強力な細胞発育阻止活性を示した。
しかしながら、39と40は共に、対応する一置換尿素誘導体14及び15より活性が低かった。末端窒素、41及び42について環状置換基を有する尿素は、非環式誘導体39及び40と同様の効力を示した。N,N-ジメチルチオ尿素誘導体43においては類似の所見がなされ、ビンブラスチンの効力に近いが、対応するN,N-ジメチル尿素38より活性がわずかに低かった。
興味深いことに、またチオ尿素誘導体36及び37と同様に、化合物43及び特に尿素誘導体39及び42は、感受性HCT116細胞系とビンブラスチン耐性HCT116細胞系の間の活性差が減少した(10倍と100倍)。N,N-ジメチル尿素又はチオ尿素39及び43とN,N-ジメチルカルバメート44とを比較すると(>1/1000の活性)、C20'-アミンとC20'-アルコール官能基化の相違と重要性が明らかに示され、前者のH-供与体能力が重要であり得ることを示している。

^aL1210(ネズミ白血病細胞系)。HCT116(ヒト結腸がん細胞系)。HCT116/VM46(耐性ヒト結腸がん細胞系、Pgp過剰発現)。Avg IC₅₀(4〜16の定量、SD = ±10%)。ND = 行わず。

二置換C20'尿素類縁体による細胞発育阻止は、系統的に探索され、末端窒素として環状アミンが組み込まれた(下記で)。化合物42及び53-54は、感受性HCT116細胞系に対して活性がほとんど又は全く変化せず、活性(C = S > O > NMe)に対して負の顕著な効果を有する6員環の極性原子を組み込むことにより耐性HCT116/VM46細胞系に対して明白な傾向を示している。この傾向を見出した後に、末端環状アミンに追加の無極性官能性を組み込んでいる類縁体を調製した(化合物55〜59)。
末端窒素がアリル(化合物55)又はベンジル(化合物57〜59)であるC20'-尿素ビンブラスチン類縁体は、ビンブラスチンに相対して約10倍の活性を更に増強させ、耐性HCT116/VM46に対して得られた活性はビンブラスチンより80倍良好であり、飽和ピペリジンベースの尿素42より8倍良好である。尿素窒素にベンジルでない疎水性フェニル置換基を有する6員環状アミン(化合物55)を組み込むと、不飽和ピペリジン化合物55又は縮合フェニル環類縁体化合物57〜59で見られたHCT116/VM46細胞系の活性が増強された。この結果は、電子的効果が活性強化に関与していること及びそれが単に付加された疎水性芳香環から誘導される追加のファンデルワールス相互作用でない場合があることを示している。強力なイソインドリンへのメトキシ基の付加(化合物59)は、細胞発育活性を更に影響しなかった。
新規な誘導体の例外的な活性だけでなく、感受性腫瘍細胞系と耐性腫瘍細胞系に対する活性の差の減少(化合物1について約13〜16倍と約90倍)が、これらの所見において重要である。おそらく、このことは、新規な誘導体がビンブラスチン自体ほどPgp排出に効果的な基質ではないが、より極性の類縁体化合物41及び54、特に置換されていない尿素化合物11は効果的な基質であることを示している。
明らかに、ビンブラスチンの中のC20'位は、効力を同時に増強することができ且つおそらく臨床的耐性の中心となる相対的Pgp輸送を減少させることができる官能基化に従う鍵となる部位を表している。
顕著ではないが、最初の報告に詳述されるように[Leggans et al., Org. Lett. 2012 14:1428-1431]、アミド9及びメチルカルバメート10が、尿素11の活性の1/10より低いことがわかり、尿素末端窒素が活性を増強するのに果たす独特な役割が更に強調される。アルコール官能基化に対するC20'-アミンの重要性及び尿素/チオ尿素とカルバメート/アミド誘導体の相違は、下記の表に例示される。

^*Leggans et al., Org.Lett.2012 14:1428-1431.
結果として且つ許容される置換基のサイズを考えて、本明細書において尿素を調製するために用いられる中間体p-ニトロフェニル-カルバメート13さえも試験し、驚くべきことに効果的な薬剤であることがわかり(IC₅₀ = 55nM、HCT116)、メチルカルバメート10の活性と一致した。
置換されていない第一級アミン7自体でなされた所見の一般性を確かめるために、2つの追加のC20'-アミン(45及び46)を20'-アミノビンブラスチン(7)の還元的アミノ化(H₂CO(5当量)、NaBH₃CN(20当量)、THF、4時間、32%(45) NHMe、33%(46) NMe₂)によって調製し、結果を下記に示す。C20'-メチルアミンは7より強力であったが、ビンブラスチンの活性のまだ1/10であり、C20'-ジメチルアミン誘導体46は調べたC20'-アミンの中で最も活性であり、生物活性に関してH-結合供与体の重要性が示された。

活性尿素誘導体が誘導体化C20'-アミンのH-結合供与部位を必要とするか又はそれから利益を得るかを確かめるために20'-(メチルアミノ)ビンブラスチン(45)を得た。従って、45をエチルイソシアネートで処理すると、15と比較するN-メチル尿素47が得られた。下記のデータからわかるように、15と47の間の活性が1/700に低下し(HCT116)、明らかにC20'位についての水素結合供与部位の重要性が例示された。

この所見は、化合物の活性を維持するか又は多くの場合改善する尿素末端窒素について更なる官能基化を可能にしつつ、尿素官能性の組み込みがC20'位に直接結合した鍵となるH-結合部位を維持すること及びそれがビンブラスチンC20'-アルコールの酸性に最も近いことを明らかに示している。
他の最近の研究において、10'位にフッ素原子を組み込むと、ビンブラスチン自体より活性が8倍改善された強力な分子(48)が得られた。[Gotoh et al., ACS Med. Chem. Lett.2011 2:948-952.] 10'-F置換基とC20'-尿素双方を組み込むとビンブラスチンの効力を増強する点で相加効果を有するかを定量することは興味深いことであった。双方の官能性を有する類縁体49を、下記で示されるように調製し評価した。

15及び48に相対的な49において効力のわずかな改善が見られ、これらの変性が完全には相加的でないことが示された。それにもかかわらず、変性したビンブラスチン49は、ビンブラスチンより少なくとも10倍強力であり、細胞発育阻止についてサブナノモルIC₅₀が示され(620pM、HCT116)且つビンブラスチン-耐性細胞系に対する活性がほぼ10倍改善される(IC₅₀ = 70nM、HCT116/VM46)。

チューブリンへの結合.
ビンブラスチンC20'中心を取り囲んでいるチューブリン結合部位の見掛けの立体障害[Gigant et al., Nature 2005 435:519-522]及び細胞毒性細胞発育分析においてビンブラスチン自体の機能的効力を支持し改善するC20'-尿素置換基のサイズを考えれば、これらの効果がこれらの標的(チューブリン)結合親和性関連があり得るか又は分子の他の特性(例えば、細胞透過性、代謝、溶解性)に対する影響から誘導され得るかは明らかでなかった。結果として、2つの代表的なC20'-尿素誘導体35及び39を、ブタチューブリンから³H-ビンブラスチンの競合的置換を測定することによって行われる確立されているチューブリン結合分析において調べた[Owellen et al., Biochem. Pharmacol. 1977 26:1213-1219]。
特に、35は、大きいビフェニル尿素置換基を含有するがビンブラスチンの機能的活性と一致するのに対して、39は、機能的活性がビンブラスチンをわずかに超える(≦3倍)かなり小さいN,N-ジメチル尿素をもっている。重要なことに、これらの結合実験から、39がビンブラスチンよりわずかに良好な親和性でチューブリンに結合することが確認され、更に、大きいビフェニル置換基をもった35さえも注目すべきことに親和性が一致して又はビンブラスチンをわずかに超えてさえも結合することが確かめられた。
従って、官能基分析において認められた尿素39だけでなく35の効果は、これらの標的チューブリン結合親和性と直接相関する。35によるこれらの予期しない所見によって、C20'中心を取り囲んでいるチューブリンとのビンブラスチン相互作用が可撓性であり且つ非常に大きい置換基さえ対応できる再構築が可能であることが強調される。この部位がT5ループをN末端β1チューブリンヌクレオチド結合ドメインに関係させるヌクレオチド結合部位に隣接し且つヌクレオチド結合ドメインを中間ドメインに結合するH6らせん及びH6-H7ループに隣接していることは注目すべきである。この領域は、35の結合に対応できる重要な再構築が可能であるか又は尿素置換基がヌクレオチド結合部位に達すると共に結合したヌクレオチドを置換することができるようである。

更なるチューブリン結合実験
下記で示されるブタチューブリンから³H-ビンブラスチンの競争的置換を測定することによって行われるチューブリン結合分析においてC20'尿素誘導体化合物58を調べた[Owellen et al., Biochem. Pharmacol. 1977 26:1213-1219]。結合実験から、化合物58がビンブラスチンより高い親和性でチューブリンを結合することが確かめられ、細胞発育機能的分析におけるその効力増強がその標的チューブリン親和性と直接相関すると共に固有の活性の改善が微小管形成阻害の直接的な結果であることを示すことが確かめられた。

チューブリン結合特性

我々の研究室で見出された例外的な活性が他のものによっても見出されることを確認するために、ビンブラスチン(1)及び化合物55、57及び58を、乳房、肺、結腸、前立腺及び子房組織から臨床的に興味深い細胞系が含まれるより包括的なヒト腫瘍15-細胞系パネルにおいて独立の研究室のオフサイトで調べた(下記)。化合物55、57及び58は、MCF-7を除いて調べたすべての細胞系に対して注目すべき効力を示し、3つの全化合物がビンブラスチンより少なくとも10倍の活性改善が示された(10〜200倍強力な範囲)。
15細胞系パネルにおける細胞発育阻止

化合物57は、LNCaP-FGC(20pM)に対して例外的な効力を示したが、化合物58は、この細胞系パネルにおいて耐性HCT116/VM46細胞系(3.5nM)に対して最良の活性を示し、感受性HCT116細胞系との差が1/20に減少した。このヒト腫瘍細胞系パネルにおけるビンブラスチンの平均IC₅₀値は、不活性であった2つの細胞系を除外して6.1nMであり、比較平均IC₅₀値は、化合物55、57及び58について310pM、200pM、及び200pMであり、化合物57及び58についてはビンブラスチンの活性より30倍の平均増強が示された。

結論
ビンブラスチンの注目すべき一連の以前には到達し難いC20'-尿素誘導体を調製し、細胞ベースの発育阻止機能分析においてビンブラスチンの効力と一致するか又はそれを実質的に超えることがわかった。これらの相対的チューブリン結合親和性に直接関係するこれらの活性に必要とされるか又はそれを増強する尿素の構造的な特徴を定義することに加えて、実験によりC20'-置換基のサイズに対して前例のない立体障害が確かめられた。C20'位についてのH-結合供与体は、強力なビンブラスチン類縁体の重要な特徴であることが明白に示された。この部位がビンブラスチンの特性に重要なことは知られており且つこのような置換基が明らかに立体的に拘束されるチューブリン結合複合体に深く埋め込まれて位置するが、実験から、立体的に嵩高い尿素が許容されるだけでなくこの部位のその官能基化が効力を10倍も増強する最高の機会を与えることが明らかになった。効力の改善に加えて、C20'部位は、また、Pgp排出、生体内薬剤分布、選択的細胞取り込み、及び代謝が含まれる追加の特徴に影響する薬剤の物理的及び化学的特性を調整する優れた部位であり得る。
ビンブラスチンの一連の二置換C20'尿素誘導体を調製し、化合物55及び57〜59が並外れた異常な効力を有するだけでなく、Pgp過剰発現ビンブラスチン耐性HCT116/VM46細胞系に対して更に活性改善を示すことがわかり、感受性HCT116細胞系及び耐性HCT116細胞系に対する活性の差がわずか1/10〜1/20(ビンブラスチンについては約1/100)に減少したことが示された。
化合物57は、ビンブラスチンより高い親和性でチューブリンに結合することわかり、細胞発育機能分析において見出されたその効力増強がその標的チューブリン結合親和性と相関することが確認された。ヒト腫瘍15-細胞系パネルにおける化合物55、57及び58の試験から、これらのC20'尿素類縁体が臨床的に関連したヒトがん細胞系の広域スペクトル全体でビンブラスチンより平均して20倍〜30倍強力であることが明らかになり(10〜200倍強力な範囲)、低pM IC₅₀値が示された(58については40〜450 pM)。明らかに、ビンブラスチンの中のC20'位は、チューブリン結合親和性を同時に改善することができ、生物学的効力をかなり増強することができ、且つおそらく臨床的耐性の中心となる相対的Pgp輸送を減少させることができる官能基化に従う鍵となる部位を表している。

実験の項
一般手順.
すべて市販の試薬を特に明記しない限り精製せずに用いた。THFは使用前に蒸留した。特に明記しない限り、炉乾燥(200℃)したガラス製品において及び無水Arの不活性雰囲気下ですべての反応を行った。
カラムクロマトグラフィをシリカゲル60により行った。TLCは、Whatman(登録商標)シリカゲル(250μm) F₂₅₄ガラスプレート及びUVによって視覚化されるスポットで行った。PTLCは、Whatman(登録商標)シリカゲル(250及び500μm) F₂₅₄ガラスプレートで行った。
旋光度を室温(23℃)でナトリウムD線(λ= 589nm)を用いてRudolph Research Analytical Autopol III(登録商標)自動旋光計により定量し、以下のように記録する: [α]^D ₂₃、濃度(c = g/100mL)及び溶媒。FT-IR分光法をNicolet 380 FTIR機器により記録した。
¹H NMRは、Bruker 600MHz分光計により記録した。化学シフトを残留CHCl₃の内部標準からppmで記録する(¹Hについてはδ7.26)。プロトン化学データを以下の通り記録する: 化学シフト(δ)、多重度(ovlp = オーバーラップ、br = 幅広い、s = 一重線、d = 二重線、t = 三重線、q = 四重線、m = 多重線)、結合定数、及び積分。
高分解能質量スペクトルを内部高分解能較正基準としてAgilent ESI-L低濃度チューニングミックスを用いてAgilent ESI-TOF/MSにより得た。各試験化合物(>95%)の純度を10〜98%アセトニトリル/水/0.1%ギ酸勾配(2つの異なる勾配)を有するZORBAX(登録商標)SB-C18カラム(3.5mm、4.6mm×50mm、0.75mL/分の流量及び220nmと254nmでの検出)を用いてAgilent 1100 LC/MS機器により定量した。

細胞系キー
AU565(乳房、her2/neuの過剰発現)、NCI-H520(肺)、HCC1143(乳房、トリプルネガティブ)、HCC70(乳房、p53の過剰発現)、HCT116(結腸)、KPL4(乳房、erbB2の過剰発現)、LNCaP-FGC(前立腺)、LS174T(結腸、高レベルのMUC2 mRNA)、MCF-7(乳房、her2/neuの過剰発現)、MDA-MB-468(乳房、トリプルネガティブ、EGFR増幅)、SW403(結腸、KRAS^G12V突然変異)、T47D(乳房、変異体p53)、ZR-75-1(乳房、her2の過剰発現)、PA-1(子房、AIB1の過剰発現)、HCT116/VM46(結腸、ビンブラスチン耐性)。

尿素の合成のための一般法.
方法1:
THF(3mL)中の20'-アミノビンブラスチン(7、3.5mg、0.004mmol)の溶液をイソシアネート(0.008mmol)で処理した。この反応混合物を25℃で2時間撹拌し、次に蒸留H₂O(3mL)を添加して急冷した。この混合物をCH₂Cl₂中の10% MeOHで抽出し、合わせた有機抽出液をNaCl飽和水溶液(3mL)で洗浄した。有機層をNa₂SO₄で乾燥し、減圧下で濃縮した。分取用薄層クロマトグラフィー(PTLC; SiO₂、EtOAc、:MeOH:Et₃N = 97:3:3)処理により、尿素(15、19〜21、23〜32及び34〜35)を得た; 収率(35〜98%)。用いられるイソシアネートとしては、エチルイソシアネート、n-ブチルイソシアネート、t-ブチルイソシアネート、シクロヘキシルイソシアネート、フェニルイソシアネート、ベンジルイソシアネート、フェネチルイソシアネート、o-メトキシフェニルイソシアネート、m-メトキシフェニルイソシアネート、p-メトキシフェニルイソシアネート、p-フルオロ-フェニルイソシアネート、p-クロロフェニルイソシアネート、p-トリルイソシアネート、p-トリフルオロメチルフェニルイソシアネート、フルフリルイソシアネート及びp-ビフェニルイソシアネートが挙げられる。

方法2:
THF(3mL)中の20'-アミノビンブラスチン(7、5.7mg、0.007mmol)の溶液を4-ニトロフェニルクロロホーメート(2.1mg、0.011mmol、1.5当量)で処理した。この反応混合物を25℃で4時間撹拌し、次に、減圧下で濃縮した。PTLC(SiO₂、EtOAc:MeOH = 95:5)により、13(4.6mg、67%、オフホワイトの固形物)を得た。THF(3mL)中の13(4.0mg、0.004mmol)の溶液をアミン(0.008mmol)で処理した。この反応混合物を25℃で1時間撹拌し、次に、蒸留H₂O(3mL)を添加して急冷した。この混合物をCH₂Cl₂中の10% MeOHで抽出し、合わせた有機抽出液をNaCl飽和水溶液(3mL)で洗浄した。有機層をNa₂SO₄で乾燥し、減圧下で濃縮した。PTLC(SiO₂、EtOAc:MeOH:Et₃N = 97:3:3)により、尿素(14、16〜18、22、33、39〜42及び52〜59)を得た; 収率(40〜99%)。用いられるアミンとしては、メチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、シクロプロピルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、2-(アミノメチル)ピリジン、モルホリン、ピペリジン、エタノールアミン、ピロリジン、N-メチルピペラジン、テトラヒドロピリジン、4-フェニルピペリジン、1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン、イソインドリン及び4-メトキシイソインドリンが挙げられる。

チオ尿素の合成のための一般法.
方法3:
THF(4mL)中の20'-アミノビンブラスチン(7、8.0mg、0.010mmol)の溶液をイソチオシアネート(0.031mmol)処理した。この反応混合物を25℃で2時間撹拌し、次に蒸留H₂O(3mL)を添加して急冷した。この混合物をCH₂Cl₂中の10% MeOHで抽出し、合わせた有機抽出液をNaCl飽和水溶液(3mL)で洗浄した。有機層をNa₂SO₄で乾燥し、減圧下で濃縮した。PTLC(SiO₂、EtOAc:MeOH:Et₃N = 97:3:3)によりチオ尿素(37)を得た; 収率(70%)。用いたイソチオシアネート: フェニルイソチオシアネート。

方法4:
THF(3mL)中の20'-アミノビンブラスチン(7、8.2mg、0.010mmol)の溶液を二硫化炭素(915μL、15mmol)で処理した。この反応混合物を13時間撹拌し、次に蒸留H₂O(5mL)を添加して急冷した。この混合物をCH₂Cl₂中の10% MeOHで抽出し、NaCl飽和水溶液(2mL)で洗浄した。有機層をNa₂SO₄で乾燥し、減圧下で濃縮した。PTLC(SiO₂、EtOAc:MeOH:Et₃N = 97:3:3)により、5(7.0mg、82%、白色の固形物)を得た。[Leggans et al., Org. Lett. 2012 14:1428-1431.]
THF(3mL)中の20'-イソチオシアノビンブラスチン(5、6.0mg、0.007mmol)の溶液をアミン(0.011mmol)で処理した。この反応混合物を25℃で1時間撹拌し、次に蒸留H₂O(3mL)を添加して急冷した。この混合物をCH₂Cl₂中の10% MeOHで抽出し、合わせた抽出物をNaCl飽和水溶液(3mL)で洗浄した。有機層をNa₂SO₄で乾燥し、減圧下で濃縮した。PTLC(SiO₂、EtOAc:MeOH:Et₃N = 97:3:3)によりチオ尿素(36、38及び43)を得た; 収率(26-92%)。用いられるアミンとしては、シクロヘキシルアミン、4-フルオロフェネチルアミン及びジメチルアミンが挙げられる。

N,N-二置換遠位アミノ基を有する尿素の合成のための一般法
THF(3mL)中の20'-アミノビンブラスチン¹(5.7mg、0.007mmol)の溶液を4-ニトロフェニルクロロホーメート(2.1mg、0.011mmol、1.5当量)及びトリエチルアミン(10μL、0.07mmol、10当量)で処理した。20'-アミノビンブラスチンの消費がLCMSで見られるまで(典型的には4時間)この反応混合物を25℃で撹拌し、次に、第二級アミンを添加した(0.07mmol)。反応がLCMSで完了するまで(典型的には3〜4時間)この反応混合物を25℃で撹拌し、次に、N₂の流れ下で濃縮した。PTLC(SiO₂、EtOAc:MeOH = 94:6)により尿素(化合物52〜59)を得た; 収率(34〜79%)。

個々の化合物の物理的データ

化合物(R = 20'-NHCO₂C₆H₄NO₂) 13
収率: 67%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.87 (br s, 1H), 8.11 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.04 (br s, 1H), 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.18-7.14 (m, 1H), 7.14-7.08 (m, 2H), 6.76 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.0, 3.9 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.30 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.00 (t, J = 13.2 Hz 1H), 3.81 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.72 (s, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.60-3.55 (m, 4H), 3.43 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.37 (dd, J = 15.9, 4.5 Hz, 1H), 3.35-3.26 (m, 2H), 3.20-3.13 (m, 2H), 2.98 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.85-2.77 (m, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.46-2.42 (m, 1H), 2.35 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.24 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 2.20-2.13 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.85-1.76 (m, 2H), 1.64 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 1.47-1.40 (m, 2H), 1.37-1.29 (m, 2H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3467, 2924, 1736, 1218 cm^-1; HRESI-TOF m/z 975.4492 (C₅₃H₆₂N₆O₁₂ + H⁺,必要とした値975.4498); [α]_D ²³ -13 (c 0.1, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH₃) 14
収率: 85%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.83 (br s, 1H), 7.97 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.19-7.13 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.0, 4.4 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 4.54 (br s, 1H), 4.33 (br s, 1H), 3.84 (t, J = 13.2 Hz 1H), 3.80 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.39-3.36 (m, 2H), 3.32-3.21 (m, 3H), 3.20-3.10 (m, 2H), 2.86 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.83 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.68 (s, 1H), 2.58 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.45 (dd, J = 16.9, 10.5 Hz, 1H), 2.38 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.20-2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.85-1.74 (m, 4H), 1.69 (d, J = 13.7 Hz, 2H), 1.44-1.30 (m, 2H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3539, 2870, 1721, 1554, 1461, 1223, 1039, 712 cm^-1; HRESI-TOF m/z 867.4631 (C₅₃H₆₂N₆O₁₂ + H⁺, 必要とした値867.4651); [α]_D ²³ -1.5 (c 0.05, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH₂CH₃) 15
収率: 95%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.84 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.19-7.14 (m, 1H), 7.14-7.07 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 9.9, 4.0 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.59 (br s, 1H), 4.29 (br s, 1H), 3.83 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.37 (d, J = 15.0 Hz, 2H), 3.34-3.19 (m, 4H), 3.18-3.13 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.68 (s, 1H), 2.57 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 2.47-2.43 (m, 1H), 2.38 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.20-2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.86-1.73 (m, 4H), 1.68 (d, J = 14.3 Hz, 2H), 1.41-1.38 (m, 4H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3463, 2921, 1739, 1500, 1459, 1228, 1039, 739 cm^-1; HRESI-TOF m/z 881.4797 (C₄₉H₆₄N₆O₉ + H⁺, 必要とした値881.4808); [α]_D ²³ +5.4 (c 0.08, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH₂CH₂CH₃) 16
収率: 40%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.84 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.18-7.14 (m, 1H), 7.14-7.08 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.1, 4.3 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.28 (br s, 1H), 3.83 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 15.9, 4.7 Hz, 2H), 3.34-3.27 (m, 2H), 3.27-3.11 (m, 4H), 2.83 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.68 (s, 1H), 2.57 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.38 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 2.24-2.15 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.87-1.75 (m, 4H), 1.60-1.52 (m, 6H), 1.40-1.34 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3436, 2952, 1739, 1547, 1459, 1243, 1032, 755 cm^-1; HRESI-TOF m/z 895.4953 (C₅₀H₆₆N₆O₉ + H⁺, 必要とした値895.4964); [α]_D ²³ +4.0 (c 0.05, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH(CH₃)₂) 17
収率: 59%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.84 (br s, 1H), 8.00 (br s, 1H), 7.52 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.17-7.08 (m, 3H), 6.65 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.87 (dd, J = 10.1, 3.7 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.29 (br s, 1H), 4.14 (br s, 1H), 3.96-3.91 (m, 1H), 3.81-3.77 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.73-3.71 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.37 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 3.34-3.26 (m, 2H), 3.23 (t, J = 11.9 Hz, 1H), 3.18-3.11 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.56 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.47-2.43 (m, 1H), 2.36 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.20-2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.86-1.73 (m, 4H), 1.47-1.42 (m, 1H), 1.37-1.29 (m, 3H), 1.20 (dd, J = 6.4, 2.5 Hz, 6H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3471, 3323, 2923, 1741, 1459, 1239, 1041 cm^-1; HRESI-TOF m/z 917.4761 (C₅₀H₆₆N₆O₉ + Na⁺, 必要とした値917.4783); [α]_D ²³ +6.1 (c 0.1, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH(CH₂)₂) 18
収率: 70%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.86 (br s, 1H), 8.02 (br s, 1H), 7.50 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.18-7.13 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.2, 4.4 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.66 (s, 1H), 3.91 (t, J = 13.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.41-3.13 (m, 6H), 3.08-3.00 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.77 (br s, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.70-2.68 (m, 1H), 2.67 (s, 1H), 2.63 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.47-2.43 (m, 1H), 2.38 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.24 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 2.19 (dd, J = 12.9, 7.7 Hz, 1H), 2.15 (s, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.86-1.70 (m, 4H), 1.52-1.49 (m, 2H), 0.81 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.70-0.69 (m, 2H), 0.50-0.48 (m, 2H); IR (膜) ν_max 3629, 2952, 1740, 1506, 1458, 1245, 998, 748 cm^-1; HRESI-TOF m/z 893.4792 (C₅₀H₆₄N₆O₉ + H⁺, 必要とした値893.4808); [α]_D ²³ +19 (c 0.09, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH₂CH₂CH₂CH₃) 19
収率: 45%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.85 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.50 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.18-7.13 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.2, 4.4 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.31 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 4.56 (br s, 1H), 4.27 (br s, 1H), 3.80 (s, J = 1.6 Hz, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 15.9, 4.7 Hz, 2H), 3.31-3.20 (m, 4H), 3.15 (br s, 2H), 3.09 (dd, J = 14.5, 7.2 Hz, 4H), 2.83 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.68 (s, 1H), 2.55 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.47-2.43 (m, 1H), 2.38 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.20-2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.07 (s, 1H), 1.86-1.72 (m, 4H), 1.56-1.49 (m, 2H), 1.38-1.33 (m, 4H), 0.93 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.3 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3544, 2952, 1736, 1501, 1458, 1240, 1030, 761 cm^-1; HRESI-TOF m/z 909.5106 (C₅₁H₆₈N₆O₉ + H⁺, 必要とした値909.5121); [α]_D ²³ +14 (c 0.06, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHC(CH₃)₃) 20
収率: 45%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.83 (br s, 1H), 7.99 (br s, 1H), 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.19-7.14 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.65 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.1, 3.9 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.54 (br s, 1H), 4.10 (br s, 1H), 3.83 (t, J = 14.1 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.40-3.22 (m, 5H), 3.17-3.12 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.68 (s, 1H), 2.54 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.35 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.21-2.14 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.87-1.75 (m, 2H), 1.73-1.62 (m, 4H), 1.49-1.41 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.37-1.31 (m, 2H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3457, 2941, 1741, 1556, 1458, 1244, 1036, 741 cm^-1; HRESI-TOF m/z 909.5128 (C₅₁H₆₈N₆O₉ + H⁺, 必要とした値909.5121); [α]_D ²³ +3.0 (c 0.1, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHC₆H₁₁) 21
収率: 51%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.84 (br s, 1H), 7.99 (br s, 1H), 7.52 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.20-7.14 (m, 1H), 7.14-7.07 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.3, 4.1 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.53 (br s, 1H), 4.22 (br s, 1H), 4.02 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.83 (t, J = 12.9 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.50-3.45 (m, 1H), 3.39-3.21 (m, 3H), 3.16-3.12 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.55 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.37 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 2.21-2.14 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.04-1.90 (m, 2H), 1.86-1.74 (m, 4H), 1.64-1.59 (m, 2H), 1.37-1.31 (m, 6H), 1.20-1.02 (m, 6H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3460, 2919, 1738, 1556, 1459, 1242, 1033, 752 cm^-1; HRESI-TOF m/z 935.5276 (C₅₃H₇₀N₆O₉ + H⁺, 必要とした値935.5277); [α]_D ²³ +3.8 (c 0.09, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH₂CH₂OH) 22
収率: 60%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.78 (br s, 1H), 7.99 (br s, 1H), 7.52 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.19-7.09 (m, 3H), 6.69 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.89-5.85 (m, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.31 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 4.59 (br s, 1H), 3.83-3.72 (m, 4H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.76 (s, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.57-3.54 (m, 1H), 3.42-3.37 (m, 3H), 3.34-3.29 (m, 1H), 3.26-3.17 (m, 4H), 3.08-3.03 (m, 1H), 2.87 (br s, 1H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.68 (s, 1H), 2.60-2.42 (m, 1H), 2.33-2.17 (m, 1H), 2.14-2.09 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.97-1.77 (m, 2H), 1.75-1.64 (m, 3H), 1.50-1.45 (m, 1H), 1.38-1.34 (m, 2H), 1.16 (dd, J = 14.3, 4.6 Hz, 2H), 0.83-0.81 (m, 3H), 0.77 (t, J = 7.1 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3399, 2927, 1738, 1502, 1458, 1232, 1040 cm^-1; HRESI-TOF m/z 897.4753 (C₄₉H₆₄N₆O₁₀ + H⁺, 必要とした値897.4756); [α]_D ²³ -14 (c 0.2, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHC₆H₅) 23
収率: 87%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ ¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.87 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.47 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.31 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.16-7.14 (m, 1H), 7.13-7.05 (m, 3H), 6.62 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.3, 4.6 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.39-3.35 (m, 2H), 3.32-3.28 (m, 1H), 3.22-3.18 (m, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.82 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.59 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.36-2.28 (m, 2H), 2.25-2.13 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 1.85-1.76 (m, 3H), 1.71-1.65 (m, 2H), 1.64-1.54 (m, 2H), 1.24-1.20 (m, 2H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3468, 2940, 1742, 1501, 1460, 1237, 1031, 760 cm^-1; HRESI-TOF m/z 929.4807 (C₅₃H₆₄N₆O₉ + H⁺, 必要とした値929.4807); [α]_D ²³ +16 (c 0.9, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONH(4-フルオロフェニル)) 24
収率: 47%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.81 (br s, 1H), 7.97 (br s, 1H), 7.49 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 8.8, 4.8 Hz, 2H), 7.18-7.14 (m, 1H), 7.12-7.08 (m, 2H), 7.01 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.2, 4.5 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.71 (br s, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.75 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.40-3.36 (m, 2H), 3.32-3.28 (m, 1H), 3.21-3.06 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.59 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.34 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 2.20-2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.85-1.75 (m, 4H), 1.59-1.50 (m, 4H), 1.23-1.21 (m, 2H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3490, 2921, 1745, 1509, 1455, 1228, 1043, 736 cm^-1; HRESI-TOF m/z 947.4726 (C₅₃H₆₃FN₆O₉ + H⁺, 必要とした値947.4713); [α]_D ²³ -4.4 (c 0.08, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONH(4-クロロフェニル)) 25
収率: 63%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.80 (br s, 1H), 7.95 (br s, 1H), 7.40 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.19-7.07 (m, 5H), 6.65 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.2, 4.5 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.81 (br s, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.75 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.36 (d, J = 15.7 Hz, 2H), 3.31-3.26 (m, 2H), 3.22-3.15 (m, 2H), 3.01-2.91 (m, 1H), 2.82 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.61-2.55 (m, 2H), 2.49-2.43 (m, 2H), 2.21-2.14 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.83-1.74 (s, 4H) 1.36-1.27 (m, 4H), 1.16-1.04 (m, 2H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3376, 2923, 1736, 1493, 1455, 1240, 1090, 765 cm^-1; HRESI-TOF m/z 963.4407 (C₅₃H₆₃ClN₆O₉ + H⁺, 必要とした値963.4418); [α]_D ²³ +21 (c 0.07, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONH(4-メチルフェニル)) 26
収率: 40%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.86 (br s, 1H), 7.99 (br s, 1H), 7.47 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.18-7.07 (m, 3H), 6.61 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.85 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.74 (br s, 1H), 4.30 (br s, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.67-3.62 (m, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.40-3.34 (m, 2H), 3.31-3.27 (m, 1H), 3.20-3.16 (m, 1H), 2.81 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.58 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.24-2.14 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.03 (s, 1H), 1.87 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 1.84-1.76 (m, 2H), 1.63-1.53 (m, 4H), 1.38-1.34 (m, 2H), 1.21 (dd, J = 14.5, 5.7 Hz, 2H), 0.81 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.6 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3369, 2912, 1722, 1507, 1445, 1230, 1017, 729 cm^-1; HRESI-TOF m/z 943.4949 (C₅₄H₆₆N₆O₉ + H⁺, 必要とした値943.4964); [α]_D ²³ +36 (c 0.1, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONH(4-トリフルオロ-メチルフェニル)) 27
収率: 60%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.82 (br s, 1H), 7.94 (br s, 1H), 7.58 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.18-7.14 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.65 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.87 (dd, J = 10.0, 4.2 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.99 (br s, 1H), 3.90-3.84 (m, 2H), 3.80 (s, 6H), 3.75 (s, 1H), 3.67-3.63 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.40-3.36 (m, 2H), 3.33-3.29 (m, 1H), 3.27-3.20 (m, 1H), 3.13-3.10 (m, 1H), 2.83 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.68 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.60 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.48-2.43 (m, 1H), 2.40 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.33-2.24 (m, 2H), 2.20-2.15 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 2.01 (s, 1H), 1.90-1.87 (m, 2H), 1.84-1.75 (m, 2H), 1.66 (d, J = 14.9 Hz, 2H), 1.40-1.32 (m, 2H), 0.82 (t, J = 7.2 Hz, 6H); IR (膜) ν_max 3334, 2931, 1716, 1537, 1472, 1232, 1023, 745 cm^-1; HRESI-TOF m/z 997.4685 (C₅₄H₆₃F₃N₆O₉ + H⁺, 必要とした値997.4681); [α]_D ²³ -18 (c 0.04, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONH(4-メトキシフェニル)) 28
収率: 36%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.80 (br s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.38 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.24-7.20 (m, 1H), 7.18-7.09 (m, 2H), 6.93 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.39 (s, 1H), 6.34 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.88 (dd, J = 10.0, 4.7 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.04 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.77 (s, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.65-3.58 (m, 2H), 3.52-3.48 (m, 1H), 3.38-3.33 (m, 2H), 3.31-3.27 (m, 1H), 3.02-2.93 (m, 2H), 2.86-2.79 (m, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.18-2.14 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.04-1.97 (m, 1H), 1.83-1.74 (m, 2H), 1.35-1.28 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 7.3 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3447, 2899, 1742, 1507, 1459, 1234, 1036, 736 cm^-1; HRESI-TOF m/z 959.4917 (C₅₄H₆₆N₆O₁₀ + H⁺, 必要とした値959.4913); [α]_D ²³ -9.4 (c 0.04, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONH(3-メトキシフェニル)) 29
収率: 50%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.82 (br s, 1H), 7.96 (br s, 1H), 7.47 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.19 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.16-7.13 (m, 1H), 7.12-7.06 (m, 3H), 6.99 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 6.61 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.2, 4.6 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.30 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.78 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.66-3.62 (m, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.38-3.35 (m, 2H), 3.31-3.27 (m, 1H), 3.22-3.18 (m, 1H), 3.15-3.10 (m, 1H), 3.03 (d, J = 13.3 Hz, 2H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.58 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.47-2.40 (m, 1H), 2.34 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 2.22-2.14 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.84-1.76 (m, 3H), 1.75-1.69 (m, 2H), 1.38-1.31 (m, 2H), 1.23-1.21 (m, 1H), 0.81 (ovlp t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.80 (ovlp t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3483, 2985, 1745, 1501, 1454, 1228, 1033, 760 cm^-1; HRESI-TOF m/z 959.4905 (C₅₄H₆₆N₆O₁₀ + H⁺, 必要とした値959.4913); [α]_D ²³ -19 (c 0.05, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONH(2-メトキシフェニル)) 30
収率: 35%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.85 (br s, 1H), 8.07 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.49 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.17-7.12 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 7.05-6.95 (m, 2H), 6.88-6.86 (m, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.0, 4.7 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 5.13-5.10 (m, 1H), 4.76 (br s, 1H), 4.57 (br s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.40-3.36 (m, 2H), 3.34-3.20 (m, 2H), 3.14-3.07 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.60 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.50-2.42 (m, 1H), 2.39 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 2.27 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.20-2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.09-1.99 (m, 2H), 1.84-1.76 (m, 4H), 1.50-1.39 (m, 2H), 1.38-1.28 (m, 2H), 0.81 (ovlp t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.80 (ovlp t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3451, 2919, 1730, 1531, 1461, 1257, 952, 721 cm^-1; HRESI-TOF m/z 959.4909 (C₅₄H₆₆N₆O₁₀ + H⁺, 必要とした値959.4913); [α]_D ²³ +24 (c 0.03, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH₂C₆H₅) 31.
収率: 96%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.84 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.47 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.31 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.17-7.08 (m, 4H), 6.62 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.3, 4.6 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.48-4.31 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.38-3.33 (m, 2H), 3.31-3.26 (m, 1H), 3.22-3.18 (m, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.83 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.59 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.36-2.28 (m, 2H), 2.25-2.13 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 1.83-1.71 (m, 3H), 1.71-1.65 (m, 2H), 1.64-1.54 (m, 2H), 1.24-1.20 (m, 2H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3454, 2992, 1737, 1501, 1459, 1231, 1033, 729 cm^-1; HRESI-TOF m/z 943.4950 (C₅₄H₆₆N₆O₉ + H⁺, 必要とした値943.4964); [α]_D ²³ +29 (c 0.3, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH₂CH₂C₆H₅) 32.
収率: 98%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.83 (br s, 1H), 7.97 (br s, 1H), 7.40 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.17-7.08 (m, 6H), 6.39 (s, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.89 (dd, J = 10.3, 4.6 Hz, 1H), 5.39 (s, 1H), 5.32 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.52 (s, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.64-3.63 (m, 2H), 3.49-3.43 (m, 1H), 3.37-3.32 (m, 1H), 3.31-3.19 (m, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.99 (d, J = 15 Hz, 1H), 2.95-2.89 (m, 2H), 2.72 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.58-2.50 (m, 1H), 2.45-2.37 (m, 1H), 2.40-2.30 (m, 2H), 2.25-2.13 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.00-1.94 (m, 1H), 1.84-1.70 (m, 4H), 1.71-1.65 (m, 2H), 1.64-1.54 (m, 2H), 1.34-1.28 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3448, 2927, 1742, 1555, 1461, 1236, 1038, 749 cm^-1; HRESI-TOF m/z 957.5106 (C₅₅H₆₈N₆O₉ + H⁺, 必要とした値957.5121); [α]_D ²³ -17 (c 0.06, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH₂(2-ピリジル)) 33.
収率: 79%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.84 (br s, 1H), 8.52 ( s, 1H), 8.04 (br s, 1H), 7.66 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.18-7.08 (m, 3H), 6.67 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.87-5.83 (m, 1H), 5.54 (br s, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.62-4.52 (m, 2H), 3.87-3.83 (m, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.39-3.28 (m, 3H), 3.23-3.17 (m, 1H), 3.10-3.02 (m, 1H), 2.83 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.57 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.48 (q, J = 9.5 Hz, 1H), 2.35 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 2.28 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 2.21-2.16 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (s, 1H), 1.45-1.32 (m, 1H), 1.86-1.70 (m, 8H), 1.27-1.22 (m, 2H), 0.80 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.73 (t, J = 7.1 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3375, 2925, 1737, 1503, 1459, 1230, 1039 cm^-1; HRESI-TOF m/z 944.4913 (C₅₃H₆₅N₇O₉ + H⁺, 必要とした値944.4916); [α]_D ²³ +2.7 (c 0.2, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONHCH₂(2-フリル)) 34.
収率: 96%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.83 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.50 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.17-7.08 (m, 3H), 6.66 (s, 1H), 6.31 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.21 (br s, 1H) 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 9.8, 4.7 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.40-4.37 (m, 2H), 3.80 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.40-3.28 (m, 2H), 3.26-3.20 (m, 1H), 3.22-3.18 (m, 1H), 3.10-3.00 (m, 3H), 2.83 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.55 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.35 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.02 (s, 1H), 1.85-1.76 (m, 3H), 1.71-1.65 (m, 4H), 1.37-1.20 (m, 4H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.72 (t, J = 7.5 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3388, 2925, 1739, 1504, 1459, 1230, 1039 cm^-1; HRESI-TOF m/z 933.4736 (C₅₂H₆₄N₆O₁₀ + H⁺, 必要とした値933.4756); [α]_D ²³ +11 (c 0.1, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCONH(4-ビフェニル)) 35.
収率: 44%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.82 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.58-7.51 (m, 6H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.31 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.17-7.13 (m, 1H), 7.13-7.06 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.4, 4.8 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.82 (br s, 1H), 3.82 (t, J = 13.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.39-3.36 (m, 2H), 3.32-3.28 (m, 1H), 3.19 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 3.14-3.06 (m, 1H), 3.02 (d, J = 12.5 Hz, 2H), 2.82 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.60 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.35 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 2.23 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 2.21-2.14 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.82-1.77 (m, 4H), 1.73-1.65 (m, 4H), 1.37-1.34 (m, 1H), 0.82 (t, J = 7.4 Hz, 6H); IR (膜) ν_max 3444, 2967, 1735, 1523, 1459, 1240, 1039, 744 cm^-1; HRESI-TOF m/z 1005.5122 (C₅₉H₆₈N₆O₉ + H⁺, 必要とした値1005.5121); [α]_D ²³ -8.8 (c 0.1, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCSNHC₆H₁₁) 36.
収率: 26%, 方法4.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.85 (br s, 1H), 8.03 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.16-7.14 (m, J = 7.0 Hz, 1H), 7.12-7.06 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 10.1, 4.1 Hz, 1H), 5.47 (s, 2H), 5.35-5.33 (m, 1H), 5.29 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.73 (s, 1H), 3.67-3.63 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.44 (s, 1H), 3.39-3.33 (m, 2H), 3.32-3.26 (m, 2H), 3.24-3.14 (s, 2H), 3.09 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 2.81 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.65 (s, 1H), 2.62-2.60 (m, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.38-2.26 (m, 3H), 2.24-2.14 (m, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.08-1.97 (m, 5H), 1.83-1.66 (m, 4H), 1.44-1.36 (m, 4H), 1.20-1.06 (m, 2H), 0.87 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 6.9 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3467, 2912, 1727, 1506, 1456, 1230, 1087, 774 cm^-1; HRESI-TOF m/z 951.5051 (C₅₃H₇₀N₆O₈S + H⁺, 必要とした値951.5048); [α]_D ²³ +9.2 (c 0.2, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCSNHC₆H₅) 37.
収率: 70%, 方法3.¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 9.82 (br s, 1H), 8.09 (br s, 1H), 7.54 (m, 4H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.24-7.19 (m, 1H), 7.19-7.14 (m, 2H), 6.60 (s, 1H), 6.25 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 5.92 (dd, J = 10.0, 4.3 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.37 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.80 (s, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.49-3.32 (m, 4H), 3.17-3.07 (m, 2H), 2.94-2.80 (m, 3H), 2.78 (s, 3H), 2.65-3.62 (s, 1H), 2.52-2.43 (m, 1H), 2.33-2.22 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 1.94-1.80 (m, 2H), 1.44-1.37 (m, 3H), 1.14 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 0.88 (t, J = 6.3 Hz, 6H); IR (膜) ν_max 3449, 2930, 1737, 1498, 1458, 1231, 1039, 751 cm^-1; HRESI-TOF m/z 945.4573 (C₅₃H₆₄N₆O₈S + H⁺, 必要とした値945.4579); [α]_D ²³ +8.1 (c 0.2, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCSNHCH₂CH₂(4-フルオロフェニル)) 38
収率: 91%, 方法4.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.83 (br s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.26-7.24 (m, 2H), 7.17-7.08 (m, 3H), 6.97-6.94 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.1, 3.4 Hz, 1H), 5.75 (br s, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.77-3.74 (m, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.60 (s, 1H), 3.42-3.35 (m, 2H), 3.32-3.28 (m, 1H), 3.25-3.10 (m, 3H), 3.02-2.97 (m, 1H), 2.96-2.91 (m, 1H), 2.83-2.80 (m, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.55 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.32 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.22-2.17 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.84-1.65 (m, 4H), 1.54-1.44 (m, 2H), 1.37-1.22 (m, 5H), 0.82 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.74 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3468, 2961, 1737, 1507, 1461, 1226, 1038 cm^-1; HRESI-TOF m/z 991.4790 (C₅₅H₆₇N₆O₈S + H⁺, 必要とした値991.4798); [α]_D ²³ +6.6 (c 0.2, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCON(CH₃)₂) 39
収率: 99%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.84 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.48 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.17-7.13 (m, 1H), 7.12-7.07 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.0, 5.1 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.68 (s, 1H), 3.90 (t, J = 14.7 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.73 (s, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.38-3.35 (m, 2H), 3.31-3.27 (m, 2H), 3.23-3.19 (m, 2H), 3.17-3.12 (m, 2H), 3.05 (s, 6H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.58 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.38 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 2.23-2.14 (m, 2H), 2.10 (s, 1H), 1.87-1.74 (m, 4H), 1.69 (d, J = 13.9 Hz, 2H), 1.40-1.33 (m, 4H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3472, 2955, 1723, 1500, 1459, 1258, 1038, 777 cm^-1; HRESI-TOF m/z 881.4790 (C₄₉H₆₄N₆O₉ + H⁺, 必要とした値881.4808); [α]_D ²³ -50 (c 0.04, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCON(CH₂CH₃)₂) 40
収率: 88%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.87 (br s, 1H), 8.02 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.18-7.13 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.2, 4.1 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.35 (br s, 1H), 3.85 (t, J = 12.7 Hz, 2H), 3.79 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.51-3.45 (m, 1H), 3.40-3.20 (m, 3H), 3.17-3.12 (m, 1H), 2.83 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.71 (s, 7H), 2.58 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.39 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 2.23 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.20-2.14 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.08 (s, 1H), 1.88-1.67 (m, 4H), 1.37-1.32 (m, 1H), 1.29-1.25 (m, 4H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 0.81 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3486, 2940, 1741, 1520, 1458, 1233, 1042, 709 cm^-1; HRESI-TOF m/z 909.5130 (C₅₁H₆₈N₆O₉ + H⁺, 必要とした値909.5121); [α]_D ²³ -38 (c 0.08, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCO-(モルホリン)) 41
収率: 99%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.84 (br s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.99 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.19-7.14 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.1, 4.1 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 3.85 (d, J = 10.9 Hz, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.79-3.77 (m, 1H), 3.77-3.64 (m, 11H), 3.62-3.56 (m, 4H), 3.48-3.44 (m, 1H), 3.38-3.36 (m, 1H), 3.33-3.05 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.60 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.40 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.29-2.22 (m, 2H), 2.20-2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.90-1.74 (m, 2H), 1.70-1.67 (m, 2H), 1.37-1.32 (m, 2H), 0.81 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 7.5 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3448, 2919, 1740, 1538, 1449, 1247, 1032, 711 cm^-1; HRESI-TOF m/z 923.4897 (C₅₁H₆₆N₆O₁₀ + H⁺, 必要とした値923.4913); [α]_D ²³ -8.0 (c 0.1, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCO-(ピペリジン)) 42
収率: 34%, 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.85 (br s, 1H), 8.02 (br s, 1H), 7.50 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.17-7.14 (m, 1H), 7.11-7.09 (m, 2H), 6.59 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 10.1, 4.1 Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 3.82 (t, J = 14.7 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.73 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.52-3.48 (m, 2H), 3.43-3.40 (m, 2H), 3.38-3.34 (m, 2H), 3.31-3.26 (m, 4H), 3.18-3.12 (m, 2H), 2.82 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.47-2.38 (m, 4H), 2.28-2.20 (m, 2H), 2.18-2.14 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 2.07 (s, 1H), 1.90-1.76 (m, 4H), 1.69 (s, 1H), 1.35-1.27 (m, 5H), 0.80 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.3 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3458, 2958, 1791, 1509, 1466, 1251, 1061, 737 cm^-1; HRESI-TOF m/z 921.5103 (C₅₂H₆₈N₆O₉ + H⁺, 必要とした値921.5121); [α]_D ²³ -9.2 (c 0.02, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCSN(CH₃)₂) 43
収率: 71%, 方法4.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.83 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.50 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.18-7.13 (m, 1H), 7.12-7.08 (m, 2H), 6.64 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.0, 5.1 Hz, 1H), 5.54 (s, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.70-4.67 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.44 (s, 6H), 3.38 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 3.31 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 3.27-3.15 (m, 3H), 3.14-3.03 (m, 2H), 2.83 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.70 (s, 1H), 2.67 (s, 1H), 2.54 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.48-2.43 (m, 1H), 2.38 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.23-2.16 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.96 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 1.85-1.74 (m, 2H), 1.38-1.29 (m, 4H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3458, 2963, 1728, 1536, 1474, 1235, 1061, 737 cm^-1; HRESI-TOF m/z 897.4559 (C₄₉H₆₄N₆O₈S + H⁺, 必要とした値897.4579); [α]_D ²³ -56 (c 0.07, CHCl₃).

化合物(R = 20'-OCON(CH₃)₂) 44
収率: 88%.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.86 (br s, 1H), 8.02 (br s, 1H), 7.50 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.17-7.12 (m, 1H), 7.12-7.07 (m, 2H), 6.61 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 10.2, 4.1 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.84 (t, J = 12.7 Hz, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.47 (dd, J = 14.6, 7.2 Hz, 2H), 3.40-3.19 (m, 4H), 3.16-3.12 (m, 2H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.70 (s, 9H), 2.66 (s, 1H), 2.57 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.38 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 2.22 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.20-2.13 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 2.07 (s, 1H), 1.86-1.76 (m, 2H), 1.72 (d, J = 14.5 Hz, 2H), 1.38-1.30 (m, 2H), 0.80 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3472, 2969, 1731, 1539, 1459, 1224, 1048, 740 cm^-1; HRESI-TOF m/z 882.4642 (C₄₉H₆₃N₅O₁₀ + H⁺, 必要とした値882.4648); [α]_D ²³ -64 (c 0.03, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCH3) 45
THF(3mL)中の溶液20'-アミノビンブラスチン(8.8mg、0.011mmol)を水溶液中の37%ホルムアルデヒド(4μL、0.05mmol)で処理した。この反応混合物を25℃で4時間撹拌し、次にシアノ水素化ホウ素ナトリウム(12mg、0.20mmol)で処理した。この反応混合物を25℃で1時間撹拌し、次に蒸留H₂O(3mL)で急冷した。この混合物をCH₂Cl₂中の10% MeOHで抽出し、合わせた有機抽出液をNaCl飽和水溶液(3mL)で洗浄した。有機層をNa₂SO₄で乾燥し、減圧下で濃縮した。PTLC(SiO₂、EtOAc:MeOH:Et₃N = 97:3:3)により45(2.8mg、32%、オフホワイトの固形物)及び46(2.9mg、33%、オフホワイトの固形物)を得た。45について: ¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.87 (br s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.18-7.14 (m, 1H), 7.11-7.08 (m, 2H), 6.58 (br s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 9.9, 4.0 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.30 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.07-3.91 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.73 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.36 (dd, J = 16.3, 4.6 Hz, 1H), 3.31-3.26 (m, 1H), 3.12-3.04 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 3H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.37-2.31 (m, 1H), 2.31-2.20 (m, 1H), 2.17-2.13 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.87-1.73 (m, 2H), 1.18-1.08 (m, 2H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3487, 2953, 1729, 1505, 1461, 1239, 1037, 735 cm^-1; HRESI-TOF m/z 824.4576 (C₄₇H₆₁N₅O₈ + H⁺, 必要とした値824.4593); [α]_D ²³ -114 (c 0.03, CHCl₃).

化合物(R = 20'-N(CH₃)₂) 46
¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.89 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.52 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.17-7.11 (m, 3H), 6.57 (br s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 9.5, 4.3 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 3.97-3.92 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.73 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.38-3.27 (m, 4H), 3.20 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.17-3.12 (m, 1H), 2.84 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 3H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.38 (s, 6H), 2.31-2.29 (m, 1H), 2.18-2.14 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.87-1.73 (m, 6H), 1.49-1.42 (m, 2H), 1.36-1.31 (m, 2H), 0.83-0.78 (m, 6H); IR (膜) ν_max 3404, 2951, 1734, 1501, 1459, 1227, 1037, 731 cm^-1; HRESI-TOF m/z 838.4752 (C₄₈H₆₃N₅O₈ + H⁺, 必要とした値838.4749); [α]_D ²³ +16 (c 0.01, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NMeCONHCH₂CH₃) 47
収率: 95%, 方法1.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.83 (br s, 1H), 7.95 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.16-7.09 (m, 3H), 6.66 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 9.9, 3.9 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 4.54 (br s, 1H), 4.29 (br s, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.70-3.65 (m, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.43-3.37 (m, 2H), 3.33-3.18 (m, 5H), ), 3.05-3.02 (m, 2H), 2.98 (br s, 3H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.56 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 2.47-2.43 (m, 1H), 2.36 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.24-2.16 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.87-1.75 (m, 3H), 1.38-1.32 (m, 5H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 7.3 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3462, 3400, 2926, 1735, 1504, 1460, 1243, 1039 cm^-1; HRESI-TOF m/z 895.4956 (C₅₀H₆₆N₆O₉ + H⁺, 必要とした値895.4964); [α]_D ²³ +17 (c 0.1, CHCl₃).

化合物49
塩化鉄(III)6水和物(55mg、0.21mmol)を、CF₃CH₂OH(0.1mL)、0.1N HCl水溶液(1.0mL)及びH₂O(1.0mL)中の(-)-ビンドリン(19mg、0.041mmol)及び10'-フルオロカタランチン[Gotoh et al., ACS Med. Chem. Lett. 2011, 2:948-952] (15mg、0.041mmol)の溶液にAr下に23℃で添加した。この反応混合物を23℃で2時間撹拌した。その間に、別個のフラスコで、脱気水(40mL)中のシュウ酸鉄(III)6水和物(198mg、0.41mmol)の混合物を0℃に冷却し、Ar下に置いた。CsN₃(215mg、1.23mmol)を0℃でその混合物に添加し、続いてビンドリンカップリング溶液及びH₂O(1mL)中のNaBH₄(31mg、0.81mmol)を添加した。得られた混合物を30分間撹拌した後、28〜30%NH₄OH水溶液(4mL)の添加によって急冷した。
この混合物をCH₂Cl₂中の10% MeOHで抽出し、有機層をNa₂SO₄で乾燥し、減圧下で濃縮した。PTLC(SiO₂、EtOAc:MeOH:Et₃N = 97:3:3)により、10'-フルオロ-20'-アジドビンブラスチン(50、2.4mg、7%、白色の固形物)及び10'-フルオロ-20'-アジドロイロシジン(6.0mg、17%、白色の固形物)を得た。THF/H₂O(1/1mL)中の化合物50(2.4mg、0.0028mmol)の溶液をCoCl₂・6H₂O(35mg、0.15mmol)、続いてNaBH₄(17mg、0.45mmol)で処理した。この反応混合物を2時間撹拌し、NaHCO₃飽和液(1mL)を添加して急冷した。
この混合物をCH₂Cl₂中の10% MeOHで抽出し、NaCl飽和水溶液(1mL)で洗浄した。有機層をNa₂SO₄で乾燥し、減圧下で濃縮した。PTLC(SiO₂、EtOAc:MeOH = 90:10)により、10'-フルオロ-20'-アミノビンブラスチン(51、1.6mg、70%、白色の固形物)を得た。THF(3mL)中の溶液51(1.6mg、0.0019mmol)をエチルイソシアネート(2μL 0.025mmol)で処理した。この反応混合物を25℃で4時間撹拌し、次に減圧下濃縮した。PTLC(SiO₂、CH₂Cl₂:MeOH = 92:8)により、49(1.0mg、59%、白色の固形物)を得た。

50: ¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.76 (br s, 1H), 8.00 (br s, 1H), 7.39 (dd, J = 8.8, 5.1 Hz, 1H), 6.86-6.82 (m, 1H), 6.76 (dd, J = 9.6, 2.4 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.3, 4.6 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.93 (t, J = 14.1 Hz, 1H), 3.82-3.76 (m, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.72 (s, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.40-3.33 (m, 2H), 3.30-3.25 (m, 2H), 3.13-3.07 (m, 1H), 2.95 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.83-2.73 (m, 3H), 2.69 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.62 (s, 1H), 2.43-2.40 (m, 2H), 2.25 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 2.18-2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 2.07 (s, 1H), 1.85-1.77 (m, 2H), 1.63-1.52 (m, 2H), 1.47-1.41 (m, 2H), 0.93 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 2925, 2109, 1734, 1614, 1460, 1228, 1038 cm ^-1; HRESI-TOF m/z 854.4218 (C₄₆H₅₆FN₇O₈ + H⁺, 必要とした値854.4247); [α]_D ²³ -6.0 (c 0.08, CHCl₃).
51: ¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.81 (br s, 1H), 8.00 (br s, 1H), 7.40-7.37 (m, 1H), 6.89-6.85 (m, 1H), 6.78 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.89 (dd, J = 10.1, 4.0 Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 3.92 (t, J = 14 Hz, 1H), 3.82-3.77 (m, 1H), 3.81 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.38 (d, J = 16.0, 4.7 Hz, 2H), 3.32-3.27 (m, 1H), 3.10-3.05 (m, 2H), 2.84 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 2.75-2.68 (m, 3H), 2.71 (s, 3H), 2.64 (s, 1H), 2.50-2.45 (m, 1H), 2.17 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.08 (s, 1H), 2.05 (s, 1H), 1.87-1.75 (s, 4H), 1.42-1.15 (m, 6H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.3 Hz, 3H); HRESI-TOF m/z 828.4311 (C₄₆H₅₈FN₅O₈ + H⁺, 必要とした値828.4311); [α]_D ²³ -23 (c 0.10, CHCl₃).
49: ¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.77 (br s, 1H), 7.95 (br s, 1H), 7.39 (dd, J = 8.8, 5.2 Hz, 1H), 6.86 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.88 (dd, J = 9.8, 4.6 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.41 (br s, 1H), 4.21 (br s, 1H), 3.84-3.77 (m, 2H), 3.80 (s, 6H), 3.75 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.40 (dd, J = 17.0, 5.2 Hz, 2H), 3.35-3.19 (m, 4H), 3.16-3.08 (m, 2H), 2.82 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.65 (s, 1H), 2.57 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.47-2.43 (m, 1H), 2.39 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.22-2.17 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.87-1.75 (m, 4H), 1.69 (d, J = 14.6 Hz, 2H), 1.43-1.38 (m, 3H), 1.19 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.4 Hz, 3H); HRESI-TOF m/z 899.4713 (C₄₉H₆₃FN₆O₉ + H⁺, 必要とした値899.4713).

化合物(R = 20'-NHCO-ピロリジン) 52
収率: 79%; 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.86 (br s, 1H), 8.00 (br s, 1H), 7.50 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.16-7.14 (m, 1H), 7.11-7.09 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.1, 4.2 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 3.89 (q, J = 12.0, 10.3 Hz 1H), 3.80 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.56-3.52 (m, 2H), 3.49-3.45 (m, 2H), 3.38-3.35 (m, 2H), 3.30 (td, J = 9.4, 4.7 Hz, 1H), 3.27-3.13 (m, 4H), 3.07-3.00 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.59 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.49-2.39 (m, 2H), 2.23 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 2.20-2.15 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.97-1.93 (m, 4H), 1.87-1.77 (m, 2H), 1.70 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 1.38-1.32 (m, 4H), 0.81 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3461, 2927, 1737, 1227 cm^-1; HRESI-TOF m/z 907.4953 (C₅₁H₆₆N₆O₉ + H⁺, 必要とした値907.4964); [α]_D ²³ -8 (c 0.2, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCO-チオモルホリン) 53
収率: 34%; 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.84 (br s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.18-7.15 (m, 1H), 7.13-7.10 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.5, 4.6 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.88-3.85 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.39-3.35 (m, 2H), 3.30 (td, J = 9.4, 4.6 Hz, 1H), 3.24-3.19 (m, 3H), 3.13-3.11 (m, 1H), 2.83 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.69-2.68 (m, 4H), 2.67 (s, 1H), 2.60 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.48-2.43 (m, 1H), 2.39 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.22-2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.84-1.78 (m, 4H), 1.75-1.72 (m, 3H), 1.36-1.33 (m, 4H), 1.29-1.26 (m, 2H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.74 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3468, 2924, 1735, 1502, 1458, 1293, 1227 cm^-1; HRESI-TOF m/z 939.4683 (C₅₁H₆₆N₆O₉S + H⁺, 必要とした値939.4685); [α]_D ²³ -58 (c 0.05, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCO-N-メチルピペラジン) 54
収率: 77% ; 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.85 (br s, 1H), 8.00 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.17-7.15 (m, 1H), 7.12-7.09 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.2, 4.3 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 3.85 (t, J = 12.9 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.65-3.62 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.51-3.48 (m, 2H), 3.39-3.34 (m, 2H), 3.30 (td, J = 9.5, 4.8 Hz, 1H), 3.23 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 3.15-3.12 (m, 2H), 2.84-2.80 (m, 7H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.58 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.47-2.37 (m, 6H), 2.29 (s, 3H), 2.21-2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.92-1.88 (m, 1H), 1.84-1.81 (m, 1H), 1.66 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3465, 2932, 1736, 1503, 1458, 1227, 1038 cm^-1; HRESI-TOF m/z 936.5226 (C₅₂H₆₉N₇O₉ + H⁺, 必要とした値936.5229); [α]_D ²³ -15 (c 0.2, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCO-1,2,5,6-テトラヒドロピリジン) 55
収率: 71%; 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.86 (br s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.50 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.17-7.14 (m, 1H), 7.11-7.08 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.87-5.84 (m, 1H), 5.85 (dd, J = 10.2, 3.9 Hz, 1H), 5.73 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.46 (br s, 1H), 4.09-4.01 (m, 2H), 3.89-3.84 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.75-3.71 (m, 2H), 3.74 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.50-3.46 (m, 1H), 3.39-3.34 (m, 2H), 3.30 (td, J = 9.4, 4.8 Hz, 1H), 3.22 (dd, J = 11.9, 5.6 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 12.5 Hz, 2H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.59 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.40 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.24-2.15 (m, 4H), 2.11 (s, 3H), 1.89-1.69 (m, 4H), 1.35-1.25 (m, 5H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3452, 2926, 1737, 1503, 1458, 1230, 1040 cm^-1; HRESI-TOF m/z 919.4936 (C₅₂H₆₆N₆O₉ + H⁺, 必要とした値919.4964); [α]_D ²³ -136 (c 0.03, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCO-4-フェニルピペリジン) 56
収率: 73%; 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.86 (br s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24-7.10 (m, 8H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.0, 4.3 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.55 (br s, 1H), 4.33 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 4.26 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.87-3.83 (m, 1H), 3.81-3.77 (m, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.39-3.35 (m, 2H), 3.31-3.25 (m, 2H), 3.20-3.16 (m, 2H), 3.04-2.95 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.61 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 2.47-2.40 (m, 2H), 2.25 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 2.20-2.15 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.94-1.87 (m, 3H), 1.84-1.72 (m, 5H), 1.37-1.22 (m, 6H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.4 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3442, 2922, 1738, 1503, 1233, 1038 cm^-1; HRESI-TOF m/z 997.5432 (C₅₈H₇₂N₆O₉ + H⁺, 必要とした値997.5433); [α]_D ²³ -22 (c 0.05, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCO-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン) 57
収率: 58%; 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.86 (br s, 1H), 8.00 (br s, 1H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17-7.13 (m, 5H), 7.11-7.09 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.1, 4.1 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.77-4.71 (m, 2H), 4.57 (s, 1H), 3.94-3.89 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.52 (s, 3H), 3.40-3.36 (m, 2H), 3.30 (td, J = 9.5, 4.8 Hz, 1H), 3.24-3.20 (m, 2H), 3.14-3.10 (m, 2H), 2.95-2.94 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.62 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.47-2.41 (m, 1H), 2.40 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.27 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 2.21-2.16 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.05 (s, 1H), 1.84-1.74 (m, 4H), 1.39-1.25 (m, 4H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.5 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 2922, 2852, 1737, 1617, 1459, 1227, 1039 cm^-1; HRESI-TOF m/z 969.5102 (C₅₆H₆₈N₆O₉ + H⁺, 必要とした値969.5120); [α]_D ²³ +25 (c 0.07, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCO-イソインドリン) 58
収率: 45%; 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.86 (br s, 1H), 7.99 (br s, 1H), 7.47 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.33-7.31 (m, 2H), 7.29-7.26 (m, 2H), 7.15-7.12 (m, 1H), 7.10-7.07 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.4, 4.7 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 4.92-4.85 (m, 4H), 4.41 (br s, 1H), 3.95 (t, J = 13.6 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.41-3.36 (m, 2H), 3.32-3.16 (m, 5H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.46-2.43 (m, 2H), 2.33-2.29 (m, 1H), 2.21-2.16 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.05 (s, 1H), 1.85-1.71 (m, 4H), 1.35-1.25 (m, 4H), 0.80 (t, J = 7.3 Hz, 6H); IR (膜) ν_max 3468, 2928, 1737, 1500, 1460, 1228, 1040 cm^-1; HRESI-TOF m/z 955.4952 (C₅₅H₆₆N₆O₉ + H⁺, 必要とした値955.4964); [α]_D ²³ -56 (c 0.03, CHCl₃).

化合物(R = 20'-NHCO-5-メトキシ-イソインドリン) 59
収率: 64%; 方法2.¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.86 (br s, 1H), 8.00 (br s, 1H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.15-7.12 (m, 1H), 7.10-7.07 (m, 2H), 6.85-6.82 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.2, 4.5 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.88-4.78 (m, 4H), 4.39 (br s, 1H), 3.97-3.92 (m, 1H), 3.87 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 6H), 3.74 (s, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.42-3.23 (m, 5H), 3.18-3.15 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.63 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.47-2.39 (m, 2H), 2.30-2.27 (m, 1H), 2.21-2.16 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.85-1.76 (m, 6H), 1.35-1.28 (m, 2H), 0.80 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 7.3 Hz, 3H); IR (膜) ν_max 3461, 2926, 1737, 1617, 1460, 1236, 1035, 741 cm^-1; HRESI-TOF m/z 985.5061 (C₅₆H₆₈N₆O₁₀ + H⁺, 必要とした値985.5069); [α]_D ²³ -27 (c 0.2, CHCl₃).

細胞発育阻止分析.
化合物について、培養内L1210(ATCC #CCL-219、マウスリンパ性白血病、支援情報を参照のこと)細胞、HCT116(ATCC #CCL-247、ヒト大腸がん)細胞、及びHCT116/VM46(HCT116のビンブラスチン-耐性株)細胞の細胞発育阻止を試験した。細胞の集団(血球計で定量した場合、> 1×10⁶細胞/mL)を、適切な量の10%ウシ胎児血清(FBS、Gibco)を含有するダルベッコ変法イーグル培地(DMEM、Gibco)で30,000細胞/mLの最終濃度に希釈した。
96ウェルプレート(Corning Costar)の各ウェルに、100μLの細胞培養液をマルチチャネルピペットで添加した。培養液を5% CO₂及び95%加湿空気の雰囲気中37℃で24時間インキュベートした。試験化合物を以下の通りプレートに添加した: 検体を1mMの濃度までDMSOに希釈し、10倍連続希釈法を別個の96ウェルプレートで行った。新鮮な培養液(100μL)を細胞の各ウェルに添加して、ウェル当たり2μLの培養液、続いて200μLの各試験薬剤を構成した。化合物を0〜1,000nM又は0〜10,000nM間の6つの濃度で繰り返して試験した(n = 2〜8回)。添加後、培養物を追加の72時間インキュベートした。
ホスファターゼ分析を用いて、以下の通りIC₅₀値を決定した: 各細胞中の培養液は除去し、100μLのホスファターゼ溶液(30mLの0.1M NaOAc中100mgのホスファターゼ基質、pH 5.5、0.1%トリトンX-100緩衝液)を各ウェルに添加した。プレートを37℃で5分間(L1210)又は15分間(HCT116及びHCT116/VM46)インキュベートした。所定のインキュベーション時間後、50μLの0.1N NaOHを各ウェルに添加し、96ウェルプレートリーダを用いて405nmの吸収を定量した。吸収が生細胞の数に正比例するので、IC₅₀値を算出し、記録した値は4〜16回の定量(+10%SD)の平均を表している。

チューブリン結合競合分析.
³H-ビンブラスチン(Moravek Biochemicals, Inc.から入手した)の精製されたブタチューブリン(Cytoskeleton, Inc.から入手したチューブリン及び一般チューブリン緩衝液)からの競合的置換を前述の手順を用いて測定した。[Owellen et al., Biochem. Pharmacol. 1977 26:1213-1219.] 記載されているように、850μLの緩衝液で希釈した100μL試料のチューブリン溶液を25μLの7.2×10^-5M ³H-ビンブラスチンと37℃で15分間インキュベートした後、25μLの7.2×10^-5Mの非標識アルカロイドを添加し、インキュベーションを60分間続けた。チューブリン結合³H-ビンブラスチンをDEAE濾紙に吸着させ、直接計数した。ミリポアSteriflipフィルターユニットを用いて、濾紙を緩衝液で軽い吸引下に洗浄した。
特許、特許出願及び本明細書に引用される論文の各々は援用されているものとする。
前述の説明及び実施例は説明的なものとして意図され、限定するものとされるものではない。なお本発明の精神及び範囲内の他の変更も可能であり、当業者にとってそれ自体容易なことである。

本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕20'位が尿素基又はチオ尿素基で置換されており、20'-炭素原子に直接結合されている近位窒素原子が第二級であり、遠位窒素原子が置換されていないか、又は1又は2つの置換基を含有するビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容され得る塩であって、
前記1又は2つの置換基が、独立して、a)第三級又は第四級の炭素原子を含まない1〜約6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖ヒドロカルビル基、b)1又は2つの環、12個までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4個までの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造(前記環構造は、必要により、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)、c)3個までの環原子が独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る5又は6個の環原子及びアルキル部分に1〜3個の炭素を含有するアラルキル基又はヘテロアラルキル基(前記環構造は、必要により、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)、及びd)遠位窒素原子についての2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5員又は6員単環又は2つの環を含有する縮合環系(その2つの環の各々が5員又は6員を含有することができ、更に独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2個の追加の環ヘテロ原子を含有することができる)を形成する基(前記環又は環系は、必要により、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)からなる群より選ばれ、
必要により、10'-フルオロ置換基を含有し、前記10'-フルオロ置換基が存在する場合にのみ置換されていない遠位窒素原子を有する、前記ビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容できる塩。
〔２〕20'-置換ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビンデシンである、前記〔1〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔３〕20'-置換基が、尿素である、前記〔1〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔４〕遠位尿素窒素原子が、1つの置換基を含有する、前記〔3〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔５〕1つの置換基が、1〜約6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖非第三級ヒドロカルビル基である、前記〔4〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔６〕1つの置換基が、1又は2つの環、12個までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4個までの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造である、前記〔4〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔７〕1つの置換基が、3〜6個の炭素を含有する1つの環を含有する脂肪族炭素環構造である、前記〔6〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔８〕1つの置換基が、1又は2つの環を含有する芳香環構造である、前記〔6〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔９〕芳香環構造が、単一の置換基を含有する、前記〔8〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔１０〕遠位尿素窒素原子についての2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5員又は6員単環又は2つの環を含有する縮合環系を形成し、その2つの環の各々が5員又は6員を含有することができ、更に独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2個の追加の環ヘテロ原子を含有することができ、前記環又は環系が、必要により、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されてもよい、前記〔3〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔１１〕遠位尿素窒素原子についての前記2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に6員環を形成する、前記〔10〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔１２〕遠位尿素窒素原子についての前記2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5員環を形成する、前記〔10〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔１３〕遠位尿素窒素原子についての前記2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に2つの環を含有する縮合環系を形成し、その2つの環の各々が5員又は6員を含有することができ、更に独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2個の追加の環ヘテロ原子を含有することができる、前記〔10〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔１４〕構造が下記式Iに対応する前記〔1〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩:

[式中、Zは、H又はFであり、
R ⁴ 及びR ⁵ は、独立して、ヒドリド、又はa)第三級又は第四級の炭素原子を含まない1〜約6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖ヒドロカルビル基、b)1又は2つの環、12個までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4個までの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造(前記環構造は、必要により、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)、c)3個までの環原子が独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る5又は6個の環原子及びアルキル部分に1〜3個の炭素を含有するアラルキル基又はヘテロアラルキル基(前記環構造は、必要により、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)、及びd)遠位窒素原子についての2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5員又は6員単環又は2つの環を含有する縮合環系(その2つの環の各々が5員又は6員を含有することができ、更に独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2個の追加の環ヘテロ原子を含有することができる)を形成する基(前記環又は環系は、必要により、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C ₁ -C ₆ -ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)からなる群より選ばれるが、
R ⁴ 及びR ⁵ は、ZがFである場合、双方ヒドリドのみである]。
〔１５〕ZがFである、前記〔15〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
〔１６〕構造が下記構造式に対応する、前記〔15〕に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩:

。
〔１７〕生理的に許容され得る担体に溶解又は分散させたがん性細胞増殖阻害量の前記〔1〕記載の20'-尿素置換ビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容され得る塩を含む医薬組成物。
〔１８〕がん性細胞の発育を阻止する方法であって、前記がん性細胞とがん性細胞増殖阻害量の前記〔1〕に記載の20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容され得る塩とを接触させることを含む、前記方法。
〔１９〕前記がん性細胞を複数回接触させる、前記〔18〕に記載の方法。
〔２０〕前記がん性細胞を生体外で接触させる、前記〔18〕に記載の方法。
〔２１〕前記接触させたがん性細胞が、白血病細胞である、前記〔18〕に記載の方法。
〔２２〕前記接触させたがん性細胞が、がん細胞である、前記〔18〕に記載の方法。
〔２３〕前記接触させたがん性細胞が、ビンブラスチンに耐性がある、前記〔22〕に記載の方法。

Claims

20'位が尿素基又はチオ尿素基で置換されており、20'-炭素原子に直接結合されている近位窒素原子が第二級であり、遠位窒素原子が1又は2つの置換基を有するビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容され得る塩であって、
前記1又は2つの置換基が、独立して、a)第四級の炭素原子を含まない1〜6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖ヒドロカルビル基、b)1又は2つの環、12個までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4個までの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造(前記環構造は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)、c)3個までの環原子が独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る5又は6個の環原子及びアルキル部分に1〜3個の炭素を含有するアラルキル基又はヘテロアラルキル基(前記環構造は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)、及びd)遠位窒素原子についての2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5員又は6員単環又は2つの環を含有する縮合環系(その2つの環の各々が5員又は6員を含有することができ、更に独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2個の追加の環ヘテロ原子を含有することができる)を形成する(前記環又は環系は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)からなる群より選ばれ、
必要により、10'位にフッ素原子を有し、
20'-置換ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビンデシンである、前記ビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容できる塩。
20'-置換基が、尿素基である、請求項1に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
遠位尿素窒素原子が、1つの置換基を有する、請求項2に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
1つの置換基が、1〜6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖非第三級ヒドロカルビル基である、請求項3に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
1つの置換基が、1又は2つの環、12個までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4個までの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造である、請求項3に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
1つの置換基が、3〜6個の炭素を含有する1つの環を含有する脂肪族炭素環構造である、請求項5に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
1つの置換基が、1又は2つの環を含有する芳香環構造である、請求項5に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
芳香環構造が、単一の置換基を有する、請求項7に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
遠位尿素窒素原子についての2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5員又は6員単環又は2つの環を含有する縮合環系を形成し、その2つの環の各々が5員又は6員を含有することができ、更に独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2個の追加の環ヘテロ原子を含有することができ、前記環又は環系が、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されてもよい、請求項2に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
遠位尿素窒素原子についての前記2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に6員環を形成する、請求項9に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
遠位尿素窒素原子についての前記2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5員環を形成する、請求項9に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
遠位尿素窒素原子についての前記2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に2つの環を含有する縮合環系を形成し、その2つの環の各々が5員又は6員を含有することができ、更に独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2個の追加の環ヘテロ原子を含有することができる、請求項9に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
構造が下記式Iに対応する請求項1に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩:

[式中、Zは、H又はFであり、
R⁴及びR⁵は、独立して、ヒドリド、又はa)第四級の炭素原子を含まない1〜6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖ヒドロカルビル基、b)1又は2つの環、12個までの環原子、及び独立して窒素、酸素又は硫黄である4個までの環原子を含有する芳香族又は脂肪族炭素環又は複素環構造(前記環構造は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)、c)3個までの環原子が独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る5又は6個の環原子及びアルキル部分に1〜3個の炭素を含有するアラルキル基又はヘテロアラルキル基(前記環構造は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)、及びd)遠位窒素原子についての2つの置換基がその遠位窒素原子と一緒に5員又は6員単環又は2つの環を含有する縮合環系(その2つの環の各々が5員又は6員を含有することができ、更に独立して窒素、酸素又は硫黄であり得る1又は2個の追加の環ヘテロ原子を含有することができる)を形成する(前記環又は環系は、必要により、C₁-C₆-ヒドロカルビル、C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、フェニル、ハロゲン、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビル、ペルフルオロ-C₁-C₆-ヒドロカルビルオキシ、ニトロ及びこれらの混合物からなる群より選ばれる1、2又は3つの置換基で置換されていてもよい)からなる群より選ばれるが、
R ⁴及びR⁵の少なくとも一方又は他方はヒドリド以外である]。
ZがFである、請求項13に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩。
構造が下記構造式に対応する、請求項14に記載のビンカアルカロイド化合物又はその塩
生理的に許容され得る担体に溶解又は分散させたがん性細胞増殖阻害量の請求項1記載の20'-尿素置換ビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容され得る塩を含む医薬組成物。
がん性細胞の発育を阻止するための医薬組成物であって、がん性細胞増殖阻害量の請求項1に記載の20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容され得る塩を含む、前記医薬組成物。
前記がん性細胞が、前記医薬組成物と複数回接触させられる、請求項17に記載の医薬組成物。
がん性細胞の発育を阻止する方法であって、前記がん性細胞とがん性細胞増殖阻害量の請求項1に記載の20'-尿素置換又は20'-チオ尿素置換ビンカアルカロイド化合物又はその医薬的に許容され得る塩とを接触させることを含み、
前記がん性細胞を生体外で接触させる、前記方法。
前記がん性細胞が、白血病細胞である、請求項17に記載の医薬組成物。
前記がん性細胞が、がん細胞である、請求項17に記載の医薬組成物。
前記がん細胞が、ビンブラスチンに耐性がある、請求項21に記載の医薬組成物。