JP5577103B2 - 改変配列を有するレオウイルス - Google Patents
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Description
本出願は、35 U.S.C.119(e)に基づいて、2007年3月12日提出の米国特許出願第60/894,425号、および2007年11月21日提出の米国特許出願第60/989,568号に対する優先権を主張し、いずれも参照することによって本明細書に組み込まれる。
任意の3型哺乳動物オルトレオウイルス(本明細書では単に「レオウイルス」と称する)からのゲノム分節のいずれかを、本明細書で開示されるように改変することができる。代表的な3型哺乳動物オルトレオウイルスは、DearingおよびAbney株を含むが、これらに限定されない。例えば、ATCC受入番号VR−232およびVR−824を参照されたい。本明細書で開示されるように改変できるレオウイルスは、自然発生的レオウイルス(例えば、患者など自然のソースから単離される)および再集合体レオウイルス(例えば、米国特許第7,163,678を参照)を含む。
前述したように(例えば、米国特許第6,110,461号、第6,136,307号、第6,261,555号、第6,344,195号、第6,576,234号、および第6,811,775号)、レオウイルスは、宿主細胞のRas経路機構を使用して、二本鎖RNA活性タンパク質キナーゼ(PKR)を下方制御し、したがって細胞内で複製する。これらの発見に基づいて、レオウイルスを使用して哺乳動物における増殖性疾患を治療するための方法が開発されている。代表的な哺乳動物は、マウス、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ブタ、非ヒト霊長類、およびヒトを含む。本明細書で使用されるように、「患者」は増殖性疾患を有する任意の哺乳動物を含む。
少なくとも1つが本明細書で説明されるような改変配列を有する、1つもしくは複数のレオウイルスを含む医薬組成物を提供する。例えば、米国特許第6,576,234号を参照されたい。少なくとも1つが改変配列を有する1つもしくは複数のレオウイルスに加えて、医薬組成物は、典型的には医薬的に容認可能な担体を含む。医薬的に容認可能な担体は、レオウイルスに対する媒体、担体、または培地として作用する固体、半固体、または液体材料を含む。したがって、例えば、改変配列を有するレオウイルスを含む組成物は、錠剤、ピル、粉末、トローチ剤、小袋、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、乳液、溶液、シロップ、エアロゾル(固体としてまたは液体培地中)、例えば、重量で最大10%の活性成分を含有する軟膏、軟質および硬質ゼラチンカプセル、座薬、無菌注射液、および無菌パッケージ化粉末の形態である。
レオウイルスを産生するための培養は、懸濁適合したHEK293S万能細胞バンク(MCB)から開始した。HEK293細胞は、L−グルタミンで補充した無血清培地(HEK293 SFMII)において維持した。HEK293細胞は、3つの15Lスピナーフラスコに増殖および播種し、3つのフラスコがそれぞれ12Lになるまでさらに拡大した。レオウイルスによるHEK293の感染は、ウイルスを細胞培地に直接接種することによって行った。HEK293S細胞の存続性が感染後20〜50%まで減少した際にウイルスを採取した。3つのスピナーすべてから得たウイルス材料を単一の無菌容器に貯留し、攪拌して均一混合液を作製した。3リットルの貯留した細胞懸濁液を除去し、円錐チューブに移して、最大3000rpmで15分間遠心分離した。次いで、100mLの精製調節培地を用いて細胞を再懸濁し、アルコール−ドライアイス浴で3回スナップ凍結した後、種ストックとして使用するために無菌のラベル付きクリオバイアルに充填した。
Claims (60)
- 1つもしくは複数のアミノ酸修飾を有するλ−3ポリペプチドを含むレオウイルスであって、前記1つもしくは複数のアミノ酸修飾は、配列番号23における、残基979におけるLeu、残基1045におけるArg、またはこれらの組み合わせから成る群より選択される、レオウイルス。
- 前記λ−3ポリペプチドが、配列番号23における、残基214におけるVal、残基267におけるAla、残基557におけるThr、残基755におけるLys、残基756におけるMet、残基926におけるPro、残基963におけるPro、残基1071におけるVal、またはこれらのいずれかの組み合わせから成る群より選択されるアミノ酸修飾をさらに有する、請求項1に記載のレオウイルス。
- 前記λ−3ポリペプチドは、配列番号19を含む、請求項1または2に記載のレオウイルス。
- 1つもしくは複数のアミノ酸修飾を有するσ−3ポリペプチドを含むレオウイルスであって、前記1つもしくは複数のアミノ酸修飾は、配列番号25における、残基14におけるLeu、残基198におけるLys、またはこれらのいずれかの組み合わせから成る群より選択され、前記アミノ酸配列が残基14においてLeuを含む場合、前記アミノ酸配列は、前記アミノ酸配列に少なくとも1つの追加修飾をさらに含む、請求項1から3のいずれか一項に記載のレオウイルス。
- 前記σ−3ポリペプチドは、配列番号15を含む、請求項4に記載のレオウイルス。
- 少なくとも1つのアミノ酸修飾を有するμ−1ポリペプチドを含むレオウイルスであって、前記少なくとも1つのアミノ酸修飾は、配列番号27における、残基73においてAspを含む、レオウイルス。
- 前記μ−1ポリペプチドは、配列番号17を含む、請求項6に記載のレオウイルス。
- 少なくとも1つのアミノ酸修飾を有するμ−2ポリペプチドを含むレオウイルスであって、前記少なくとも1つのアミノ酸修飾は、配列番号29における、残基528においてSerを含む、レオウイルス。
- 前記μ−2ポリペプチドは、配列番号16を含む、請求項8に記載のレオウイルス。
- レオウイルスσ−2ポリペプチドをさらに含む、請求項1、2、4、6または8に記載のレオウイルス。
- 前記σ−2ポリペプチドが、配列番号30における、70位、127位、195位、241位、255位、294位、296位、または340位のうちの1つもしくは複数においてCysを含む、請求項10に記載のレオウイルス。
- 前記σ−2ポリペプチドが、配列番号12を含む、請求項11に記載のレオウイルス。
- 前記レオウイルスが再集合体である、請求項1から12のうちのいずれか一項に記載のレオウイルス。
- 1つもしくは複数の核酸修飾を有するL1ゲノム分節を含むレオウイルスであって、前記1つもしくは複数の核酸修飾が、配列番号22における、2953位におけるCである、レオウイルス。
- 前記L1ゲノム分節が、配列番号22における、660位におけるT、817位におけるG、1687位におけるA、2283位におけるG、2284〜2286位におけるATG、2794位におけるC、2905位におけるC、3153におけるA、3231位におけるGから成る群より選択される、1つもしくは複数のさらなる核酸修飾を有する、請求項14に記載のレオウイルス。
- 前記L1ゲノム分節が、配列番号8を含む、請求項14または15に記載のレオウイルス。
- 1つもしくは複数の核酸修飾を有するS4ゲノム分節をさらに含むレオウイルスであって、前記S4ゲノム分節における前記1つもしくは複数の核酸修飾が、配列番号24における、74位におけるAおよび624位におけるAから成る群より選択される、請求項14から16のいずれか一項に記載のレオウイルス。
- 前記S4ゲノム分節が、配列番号4を含む、請求項17に記載のレオウイルス。
- 少なくとも1つの核酸修飾を有するM2ゲノム分節を含むレオウイルスであって、前記少なくとも1つの核酸修飾が、配列番号26における、248位においてCを含む、レオウイルス。
- 前記M2ゲノム分節が、配列番号6を含む、請求項19に記載のレオウイルス。
- 少なくとも1つの核酸修飾を有するM1ゲノム分節を含むレオウイルスであって、前記少なくとも1つの核酸修飾は、配列番号28における、1595位においてTを含む、レオウイルス。
- 前記M1ゲノム分節は、配列番号5を含む、請求項21に記載のレオウイルス。
- 前記レオウイルスは再集合体である、請求項14から22のうちのいずれか一項に記載のレオウイルス。
- レオウイルスλ−3ポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、前記レオウイルスλ−3ポリペプチドの前記配列は、1つもしくは複数のアミノ酸修飾を含み、前記1つもしくは複数のアミノ酸修飾は、配列番号23における、残基979におけるLeu、残基1045におけるArg、またはこれらの組み合わせから成る群より選択される、ポリペプチド。
- 前記λ−3ポリペプチドが、配列番号23における、残基214におけるVal、残基267におけるAla、残基557におけるThr、残基755におけるLys、残基756におけるMet、残基926におけるPro、残基963におけるPro、残基1071におけるVal、またはこれらのいずれかの組み合わせから成る群より選択さる、1つもしくは複数のアミノ酸修飾をさらに含む、請求項24に記載のポリペプチド。
- 前記λ−3ポリペプチドは、配列番号19を含む、請求項24または25に記載のポリペプチド。
- レオウイルスσ−3ポリペプチドのアミノ酸配列をさらに含む請求項24から26のいずれか一項に記載のポリペプチドであって、前記レオウイルスσ−3ポリペプチドの前記配列は、1つもしくは複数のアミノ酸修飾を含み、前記1つもしくは複数のアミノ酸修飾は、配列番号25における、残基14におけるLeu、残基198におけるLys、またはこれらのいずれかの組み合わせから成る群より選択され、前記アミノ酸配列が残基14においてLeuを含む場合、前記アミノ酸配列は、前記アミノ酸配列に少なくとも1つの追加の変更をさらに含む、ポリペプチド。
- 前記σ−3ポリペプチドは、配列番号15を含む、請求項27に記載のポリペプチド。
- レオウイルスμ−1ポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、前記レオウイルスμ−1ポリペプチドの前記配列は、少なくとも1つのアミノ酸修飾を含み、前記少なくとも1つのアミノ酸修飾は、配列番号27における、残基73においてAspを含む、ポリペプチド。
- 前記μ−1ポリペプチドは、配列番号17を含む、請求項29に記載のポリペプチド。
- レオウイルスμ−2ポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、前記レオウイルスμ−2ポリペプチドの前記配列は、少なくとも1つのアミノ酸修飾を含み、前記少なくとも1つのアミノ酸修飾は、配列番号29における、残基528においてSerを含む、ポリペプチド。
- 前記μ−2ポリペプチドは、配列番号16を含む、請求項31に記載のポリペプチド。
- 請求項24から32のいずれか一項に記載のポリペプチドを1つもしくは複数含む、レオウイルス。
- 前記レオウイルスは、配列番号30における、70位、127位、195位、241位、255位、294位、296位、または340位のうちの1つもしくは複数においてCysを含むσ−2ポリペプチドをさらに含む、請求項33に記載のレオウイルス。
- 前記σ−2ポリペプチドは、配列番号12を含む、請求項34に記載のレオウイルス。
- 前記レオウイルスは再集合体である、請求項33から35のうちのいずれか一項に記載のレオウイルス。
- レオウイルスL1ゲノム分節の核酸配列を含む核酸分子であって、前記レオウイルスL1ゲノム分節の前記核酸配列は、1つもしくは複数の核酸修飾を含み、前記1つもしくは複数の核酸修飾は、配列番号22における、2953位におけるCである、核酸分子。
- 配列番号22における、660位におけるT、817位におけるG、1687位におけるA、2283位におけるG、2284〜2286位におけるATG、2794位におけるC、2905位におけるC、3153位におけるA、3231位におけるGから成る群より選択される、1つもしくは複数のさらなる核酸修飾を含む、請求項37に記載の核酸分子。
- 前記L1ゲノム分節は、配列番号8を含む、請求項37または38に記載の核酸分子。
- レオウイルスS4ゲノム分節の核酸配列をさらに含む、請求項37から39のいずれか一項に記載の核酸分子であって、前記レオウイルスS4ゲノム分節の前記核酸配列が、1つもしくは複数の核酸修飾を含み、前記1つもしくは複数の核酸修飾が、配列番号24における、74位におけるAおよび624位におけるAから成る群より選択される、核酸分子。
- 前記S4ゲノム分節が、配列番号4を含む、請求項40に記載の核酸分子。
- レオウイルスM1ゲノム分節の核酸配列を含む核酸分子であって、前記レオウイルスM1ゲノム分節の前記核酸配列が、少なくとも1つの核酸修飾を含み、前記少なくとも1つの核酸修飾が、配列番号26における、1595位にTを含む、核酸分子。
- 前記M1ゲノム分節が、配列番号5を含む、請求項42に記載の核酸分子。
- レオウイルスM2ゲノム分節の核酸配列を含む核酸分子であって、前記レオウイルスM2ゲノム分節の前記核酸配列が、少なくとも1つの核酸修飾を含み、前記少なくとも1つの核酸修飾が、配列番号28における、248位にCを含む、核酸分子。
- 前記M2ゲノム分節が、配列番号6を含む、請求項44に記載の核酸。
- 請求項37から45のいずれか一項に記載の前記核酸分子のうちの1つもしくは複数を含む、レオウイルス。
- 前記レオウイルスが再集合体である、請求項46に記載のレオウイルス。
- 配列番号5、6及び8のうち少なくとも一つの配列を有するゲノム分節を含む、レオウイルス。
- 配列番号16、17及び19のうち少なくとも一つの配列を有するポリペプチドを含む、レオウイルス。
- IDAC受入番号190907−01を有する、請求項48または49に記載のレオウイルス。
- 前記レオウイルスが、修飾を含まないレオウイルスを超える増殖利点を呈する、請求項1から23、33から36、および46から50のうちのいずれか一項に記載のレオウイルス。
- 前記増殖利点が、プラーク形成サイズの増大である、請求項51に記載のレオウイルス。
- 請求項1から23、33から36、または46から52のうちのいずれか一項に記載のレオウイルス、および医薬的に容認可能な担体を含む、医薬組成物。
- 患者において増殖性疾患を治療するための組成物であって、請求項1から23、33から36、または46から52のうちのいずれか一項に記載のレオウイルス、または請求項53に記載の医薬組成物を含む、組成物。
- 前記レオウイルスを、腫瘍崩壊を生じさせるための有効な量で投与するための、請求項54に記載の組成物。
- 手術、化学療法、放射線治療、および免疫抑制療法から成る群より選択される処置のうちの少なくとも1つのための、請求項54に記載の組成物。
- 1回以上投与するための、請求項54に記載の組成物。
- 経静脈的、経脈管的、髄腔内、筋肉内、皮下的、骨盤内、局所的、経口的、経直腸的、経膣的、経鼻腔的、直接注射または吸入によって投与するための、請求項54に記載の組成物。
- 請求項1から23、33から36、または46から52のうちのいずれか一項に記載のレオウイルスを含むキット。
- 1つもしくは複数の薬剤をさらに含む、請求項59に記載のキット。
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