JP5530633B2 - アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよびその作成および使用法。 - Google Patents
アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよびその作成および使用法。 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5530633B2 JP5530633B2 JP2008549585A JP2008549585A JP5530633B2 JP 5530633 B2 JP5530633 B2 JP 5530633B2 JP 2008549585 A JP2008549585 A JP 2008549585A JP 2008549585 A JP2008549585 A JP 2008549585A JP 5530633 B2 JP5530633 B2 JP 5530633B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- solid support
- beads
- ligand
- associative
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 title description 11
- 239000012504 chromatography matrix Substances 0.000 title description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 172
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 172
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 152
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 128
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 119
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 62
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 29
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 17
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 17
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 14
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 claims description 9
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 8
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 claims description 7
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims description 6
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 164
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 52
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 51
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 49
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 48
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 43
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 31
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 31
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 27
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 22
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 20
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 17
- 241000894007 species Species 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 description 13
- -1 N-hydroxysuccinimide ( NHS) ester Chemical class 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- PUVAFTRIIUSGLK-UHFFFAOYSA-M trimethyl(oxiran-2-ylmethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CC1CO1 PUVAFTRIIUSGLK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 12
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- HPILSDOMLLYBQF-UHFFFAOYSA-N 2-[1-(oxiran-2-ylmethoxy)butoxymethyl]oxirane Chemical class C1OC1COC(CCC)OCC1CO1 HPILSDOMLLYBQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 8
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 8
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 7
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 7
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 6
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 6
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 6
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 description 5
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 5
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 235000021463 dry cake Nutrition 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100028789 Arabidopsis thaliana PBS1 gene Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001735 carboxylic acids Chemical group 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 108700041430 link Proteins 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 238000004262 preparative liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 150000003512 tertiary amines Chemical group 0.000 description 2
- SURVRMRLLSFWHA-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylazaniumyl)butanoate Chemical compound CN(C)C(C)CC(O)=O SURVRMRLLSFWHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 6-[3-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-3-oxopropyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)C(CCC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)=O DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002479 acid--base titration Methods 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940093740 amino acid and derivative Drugs 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000751 azo group Chemical group [*]N=N[*] 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N fluoromethane Chemical compound FC NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 1
- 150000002411 histidines Chemical class 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 150000002433 hydrophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002634 lipophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 102000044158 nucleic acid binding protein Human genes 0.000 description 1
- 108700020942 nucleic acid binding protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical group 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- BFKJFAAPBSQJPD-UHFFFAOYSA-N tetrafluoroethene Chemical group FC(F)=C(F)F BFKJFAAPBSQJPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035024 thioglycerol Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000007039 two-step reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
- B01D15/3804—Affinity chromatography
- B01D15/3809—Affinity chromatography of the antigen-antibody type, e.g. protein A, G, L chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
- B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
- B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3268—Macromolecular compounds
- B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
- B01J20/3274—Proteins, nucleic acids, polysaccharides, antibodies or antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/305—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F)
- C07K14/31—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F) from Staphylococcus (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
ある実施形態において、本発明は、該マトリックスが固体支持体および少なくとも1つのタンパク質リガンドを含み、その方法が、a)会合性基が該固体支持体と反応するように、該固体支持体を該会合性基に接触させること;b)該固体支持体を活性化すること(即ち、活性化基の添加);c)該タンパク質リガンドが該固体支持体に結合し、a)の該会合性基と相互作用するように、該固体支持体を該タンパク質リガンドに接触させること;
を含む、アフィニティークロマトグラフィーマトリックスを作る方法を提供する。
標的分子がマトリックスのタンパク質リガンドに結合するように、条件の第一の組の下で、混合物を
a)固体支持体;b)該固体支持体に結合したタンパク質リガンド;およびc)会合性基が、該タンパク質リガンドと相互作用している該固体支持体に別個に結合した該会合性基;を含むアフィニティークロマトグラフィーマトリックスと接触させること;および2)標的分子が該マトリックスの該タンパク質リガンドにもはや結合しないように、1)の条件を変更し、それによって関心のある物質を精製することを含む、該混合物から標的分子を精製する方法を提供する。場合により、例えば、リン酸塩緩衝食塩水、水または以下に記述した補充された緩衝液などの適した洗浄剤を用いる1つ以上の洗浄段階が段階1および2の間に行われ得る。該マトリックスは、段階1に先立って適切な緩衝液で平衡化され得る。
c)タンパク質リガンドが該固体支持体に結合し、a)の該会合性基と相互作用するように、該固体支持体を該タンパク質リガンドに接触させること;を含む、該タンパク質リガンドを該固体支持体に連結する方法を提供する。
c)プロテインAが該固体支持体に共有結合し、a)の該帯電分子種と非共有結合的に相互作用するように、該アガロース支持体を該プロテインAに接触させること;を含む、該プロテインAをアガロース支持体に連結する方法を提供する。
固体支持体ヘのリガンドのカップリング方法
ある実施形態において、本発明はタンパク質リガンドをクロマトグラフィー媒体などの予め形成された固体支持体へカップリング(例えば、リガンドを利用するカップリング)する方法を提供する。この方法では、該タンパク質リガンドを共有結合的に結合する活性化剤および該タンパク質リガンドと非共有結合的に相互作用し、該タンパク質リガンドと該活性化剤の間の共有結合の形成を容易にする会合性基が両方とも、別個で明確な反応によって該固体支持体に連結され、該活性化剤および該会合性基は、それらを該固体支持体に共有結合的に結合する該反応に先立って連結されない。この方法は、a)該会合性基を該固体支持体と反応させることb)該固体支持体を活性化することおよびc)タンパク質リガンドを該固体支持体に連結することを含み得る。ある実施形態において、該会合性基および該タンパク質リガンドは両方とも該固体支持体に共有結合的に結合され得るが、該固体支持体を介する以外、お互いに共有結合的に結合されない。該会合性基および該活性化剤は、該固体支持体の外表面に共有結合的に結合され得る。該タンパク質リガンドは、該固体支持体に結合される該活性化剤に共有結合され得る。該会合性基は、該タンパク質リガンドと、例えば非共有結合的に相互作用し得、従って該タンパク質リガンドと該固体支持体の外表面に共有結合的に結合されている該活性化剤の間の共有結合の形成を容易にする。該タンパク質リガンドおよび該会合性基は両方とも、該固体支持体の内表面および微細孔に接近して結合し得ることが意図されている。
これは、「リンカーを利用するカップリング」(ここでは、ただ1つのカップリング位置の集団が存在し得る。)および「リガンドを利用するカップリング」(ここでは、カップリング位置の少なくとも2つの可変の集団が存在し得る。)の間の相違の1例である。会合性基および活性化基は、その種類、量および関与する基の反応性において独立に変化され得るために、広範囲のカップリング条件および形態が利用され得る。
本発明における使用に適した会合性基は、イオン化学種などの帯電分子種および疎水性分子種などの非帯電分子種を含む。該会合性基は、例えば、固体支持体に直接共有結合的に結合することによって、該固体支持体を修飾し得る。イオン化学種の適した例は、第4級アミン、第3級アミン、第2級アミン、第1級アミン、スルホン酸、カルボン酸またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。疎水性分子種の適した例は、フェニル基、ブチル基、プロピル基またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。また、混合状態の分子種、例えば、帯電分子種および疎水性分子種の混合物、が用いられ得る。該会合性基はまた、タンパク質リガンドと相互作用し得る。従って、該会合性基および該タンパク質リガンドの間の相互作用は、相互作用の混合で構成され得る(例えばイオン性および疎水性分子種)。
それが、関心のある標的分子の特異的結合相手であれば、本発明の実施において、任意のタンパク質リガンドが用いられ得る。タンパク質リガンドの例は、プロテインA,プロテインG,抗体のFc受容体、ホルモンまたは成長因子の受容体を含み得る。該タンパク質リガンドは、例えばIgG、IgM、IgA、IgD、IgEなどの免疫グロブリンまたはその断片であり得る。断片は、標的抗原の抗原決定基および/またはFc受容体および/またはプロテインAおよび/またはプロテインGを結合する能力を保持している免疫グロブリン断片を含み得る。該タンパク質リガンドは、Fc分子またはその断片であり得る;Fabなど;酵素、例えばグルタチオントランスフェラーゼ、チロシンキナーゼ、例えば、MAP,Src、Lck;基剤、例えばグルタチオン。該タンパク質リガンドは、例えば1つ以上のヒスチジンを含むポリペプチドなどのタンパク質タグであり得る。該タンパク質リガンドは、Embrel(登録商標)などの融合タンパク質であり得る。該タンパク質リガンドは、転写因子、逆転写酵素、トポイソメラーゼ、ヘリカーゼなどの核酸結合タンパク質であり得る。標的分子が、受容体である場合は、そのリガンド、例えば成長因子、は本発明の方法において該タンパク質リガンドとして働き得る。該標的分子が、免疫グロブリン、例えばIgG、またはFc領域の少なくとの1部を含むその断片である場合、該タンパク質リガンドは、プロテインA、プロテインGまたはその機能性断片であり得る。その機能性断片は、IgGのFc領域またはFc断片に結合する能力を保持しているプロテインA断片またはプロテインG断片を含み得る。
任意の多孔性物質が、固体支持体として用いられ得る。一例として、該多孔性物質は、膜、ゲル、カセット、カラム、チップ、スライド、プレートまたはモノリスの形をとり得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、本発明は、介入リンカーを介して固体支持体に連結され得る会合性基および/またはタンパク質リガンドを提供する。該リンカーは、リンキング部分に連結した少なくとも1つの官能基を含み得る。該連結部分は、官能基に連結され得る任意の分子を含み得る。従って、該連結部分は任意のアルキル、アルケニルまたはアルキニル基を含み得る。該連結部分は、1から30の範囲の炭素原子を含み得る。いくつかの実施形態において、リンカーは30を超す炭素原子で構成され得る。連結部分は、窒素、酸素および硫黄などの少なくとも1つのヘテロ原子を含み得る。該連結部分は、分枝鎖、非分枝鎖または環状鎖で構成され得る。該連結部分は、2つ以上の官能基で置換され得る。1つの特別な実施形態において、該リンカーはヒドロキシ基を介してアガロースに取り付けられた次の式の化合物を含み得る。
CH2CH2N(CH2CH3)CH2CH(OH)CH2O(CH2)4OCH2CH(O)CH2
ある実施形態において、本発明は、混合物からの標的分子の精製法を提供する。該標的分子は、特異的結合相手が、固体支持体に連結され得るならば、該特異的結合相手を有する任意の分子であり得る。該標的分子の例は、免疫グロブリンなどのタンパク質を含み得る。該免疫グロブリンは、ポリクロナール抗体またはモノクロナール抗体またはその機能的断片であり得る。該機能的断片は、その抗原になお特異的に結合し、一方で、同時に固体支持体に連結したタンパク質リガンドに特異的に結合する能力を保持している可変領域を含む免疫グロブリンの任意の断片を含み得る。
ある実施形態において、本発明はまた、非特異的に結合した不純物を除去し、従ってより純粋な最終製品を得るためのクロマトグラフィーマトリックスの洗浄方法を提供する。マトリックスは、当分野で知られている任意のクロマトグラフィーマトリックスを含み得る。1例として、該クロマトグラフィーマトリックスは親和性マトリックスであり得る。該親和性マトリックスは、リガンドを利用するカップリングで作られる親和性マトリックスを含む本明細書に記述する親和性マトリックスのいずれかであり得る。該方法は、該標的分子が該クロマトグラフィーマトリックスに結合後に実施される中間洗浄を含み得る。通常、非特異的に吸着された不純物は、標的化合物または製品を除く任意の成分を含み得る。非特異的に結合した不純物の例は、タンパク質、DNA,脂質、エンドトキシン、ウイルス粒子およびフェノール赤、ペプトン、フルロニックF68,アミノ酸を含む他の小分子を含み得る。
いくつかの実施形態において、該塩濃度は、0.0001Mより多いが、0.8M未満である。
第4級アミンリガンド、臭化シアンおよびn−プロテインA(14mg/ml)を用いるリガンドを利用するカップリング
アガロース・ビーズ(Sepharose 4B)(GE Healthcare,Piscataway NJ)を先述した方法(Porath and Fornstedt, 1970,J.Chromatography,51:479)に従って、エピクロルヒドリンを用いて架橋した。該アガロース・ビーズを次の方法に従って、正に帯電した会合性基(例えば、カチオン類)と反応させた:ビーズ100mLを75重量%のグリシジルトリメチルアンモニウムクロリド(GTMAC)100mLおよび50重量%の水酸化ナトリウム3.3gに加えた。反応溶液を室温で一晩回転振蕩器で激しく振蕩(>100rpm)した。ついで、該ビーズをろ過し、Milli−Q水(Millipore Corp,Billerica,MA)200mL容量で3回洗浄した。
第4級アミンリガンド、臭化シアンおよびn−プロテインA(17.8mg/ml)を用いるリガンドを利用するカップリング
アガロース・ビーズ(Sepharose 4B)(GE Healthcare, Piscataway NJ)を先述した方法(Porath and Fornstedt, 1970, J. Chromatography, 51 :479)に従って、エピクロルヒドリンを用いて架橋した。該アガロース・ビーズを次の方法に従って、正に帯電した会合性基(例えば、カチオン類)と反応させた:ビーズ100mLを75重量%のグリシジルトリメチルアンモニウムクロリド(GTMAC)100mLおよび50重量%の水酸化ナトリウム3.3gに加えた。反応溶液を室温で一晩回転振蕩器で激しく振蕩(>100rpm)した。ついで該ビーズをろ過し、Milli−Q水(Millipore Corp,Billerica,MA)200mL容量で3回洗浄した。
第4級アミンリガンド、臭化シアンおよびr−プロテインAを用いるリガンドを利用するカップリング
アガロース・ビーズ(Sepharose 4B)(GE Healthcare,Piscataway,NJ)を先述した方法(Porath and Fornstedt, 1970,J.Chromatography,51:479)に従って、エピクロルヒドリンを用いて架橋した。該アガロース・ビーズを次の方法に従って、正に帯電した会合性基(例えば、カチオン類)と反応させた:ビーズ100mLを75重量%のグリシジルトリメチルアンモニウムクロリド(GTMAC)100mLおよび50重量%の水酸化ナトリウム3.3gに加えた。反応溶液を室温で一晩回転振蕩器で激しく振蕩(>100rpm)した。ついで該ビーズをろ過し、Milli−Q水200mL容量で3回洗浄した。
臭化シアンおよびn−プロテインA(17.8mg/ml)を用いる、第4級アミンリガンドを用いないリガンドを利用しないカップリング
アガロース・ビーズ(Sepharose 4B)(GE Healthcare,Piscataway,NJ)を先述した方法(Porath and Fornstedt,1970,J.Chromatography,51:479)に従って、エピクロルヒドリンを用いて架橋した。ついで、該ビーズをろ過し、Milli−Q水(Millipore Corp,Billerica,MA)200mL容量で3回洗浄した。
臭化シアンおよびn−プロテインAを用いる、第4級アミンリガンドを用いないリガンドを利用しないカップリング
アガロース・ビーズ(Sepharose 4B)(GE Healthcare,Piscataway,NJ)を先述した方法(Porath and Fornstedt,1970,J.Chromatography,51:479)に従って、エピクロルヒドリンを用いて架橋した。ついで該ビーズをろ過し、Milli−Q(登録商標)水(Millipore Corp,Billerica,MA)200mL容量で3回洗浄した。該ビーズ(10mL)をろ過し、ついで20mLの1MNa2CO3中で平衡化させた。試料を0.5gCNBr/mLのアセトニトリル溶液を含む第二の瓶と共に氷上で冷却した。該溶液を冷却後、該ビーズにCNBrのアセトニトリル溶液1.5mLを加え、該ビーズを氷上の振蕩器(>100rpm)上に置いた。2分後に、もう1つのCNBrのアセトニトリル溶液1.5mLを該ビーズに加え、該ビーズを氷上の振蕩器(>100rpm)上に置いた。該ビーズを4分間反応させ、ついで200mLの氷冷水および200mLの氷冷0.012MNaHCO3で洗浄し、濾過した。濾過ビーズケーキ(10mL)を市販のr−プロテインA250mg(25mg/mL)を含む0.012MNaHCO310mLに加えた。該ビーズを一晩室温で振蕩した。該ビーズをついで、0.2MNaHCO3で洗浄し,濾過した。該ビーズケーキを、0.2MNaHCO3中の0.5Mのエタノールアミン20mLに加えた。30分後、該ビーズを0.2MNaHCO3,0.5MNaCl(pH4.5)を含む0.1M酢酸ナトリウムで洗浄し、最後にリン酸塩緩衝食塩水で洗浄した。静的及び動的容量を下の実施例12に記述したように測定した。
第4級アミンリガンド、ブタンジオールジグリシジルエーテルおよびn−プロテインAを用いるリガンドを利用するカップリング
アガロース・ビーズ(Sepharose 4B) (GE Healthcare,Piscataway,NJ)を先述した方法(Porath and Fornstedt,1970,J.Chromatography,51:479)に従って、エピクロルヒドリンを用いて架橋した。該アガロース・ビーズを次の方法に従って、正に帯電した会合性基(例えば、カチオン類)と反応させた:ビーズ50mLを75重量%のグリシジルトリメチルアンモニウムクロリド(GTMAC)40g、10mLのMilli−Q水および50重量%の水酸化ナトリウム1.67gに加えた。反応液を室温で一晩回転振蕩器で激しく振蕩(>100rpm)した。ついで該ビーズをろ過し、Milli−Q(登録商標)水(Millipore Corp,Billerica,MA)100mL容量で3回洗浄した。ビーズの試料を下記のプロトコールを用いて滴定し、第4級アンモニウムリガンド密度を測定した。
第4級アミンリガンド、ブタンジオールジグリシジルエーテルおよびn−プロテインAを用いるリガンドを利用するカップリング
実施例7のビーズは、会合性基の添加を除いて実施例6に記述したビーズと同じである。アガロース・ビーズを次の方法に従って、正に帯電した会合性基(例えば、カチオン類)と反応させた:ビーズ50mLを75重量%のGTMAC25g、25mLのMilli−Q水および50重量%の水酸化ナトリウム1.67gに加えた。反応液を室温で一晩回転振蕩器上で激しく振蕩(>100rpm)した。ついで該ビーズをろ過し、Milli−Q(登録商標)水(Millipore Corp,Billerica,MA)100mL容量で3回洗浄した。次の段階(BUDGE活性化およびプロテインAカップリング)はすべて実施例6に記載したのと同じであった。ついで該ビーズを標準曲線にn−プロテインAを用いる標準BCAアッセイ(Pierce,Rockford,IL)を用いて、記載した静的容量およびプロテインAリガンド密度について特性化した(下表1参照)。
第4級アミンリガンド、ブタンジオールジグリシジルエーテルおよびn−プロテインAを用いるリガンドを利用するカップリング
実施例8のビーズは、会合性基の添加を除いて実施例6に記述したビーズと同じである。アガロース・ビーズ次の方法に従って、正に帯電した会合性基(例えば、カチオン類)と反応させた:ビーズ50mLを75重量%のGTMAC10g、40mLのMilli−Q水(Millipore Corp,Billerica,MA)および50重量%の水酸化ナトリウム1.67gに加えた。反応液を室温で一晩回転振蕩器上で激しく振蕩(>100rpm)した。ついで該ビーズをろ過し、Milli−Q(登録商標)水(Millipore Corp,Billerica,MA)100mL容量で3回洗浄した。次の段階(BUDGE活性化およびプロテインAカップリング)はすべて実施例6に記載したのと同じであった。ついで該ビーズを標準曲線にn−プロテインAを用いる標準BCAアッセイ(Pierce,Rockford,IL)を用いて、記載した静的容量およびプロテインAリガンド密度について特性化した(下表1参照)
CPG上で第4級アミンリガンド、エピクロルヒドリンおよびn−プロテインAを用いるリガンドを利用するカップリング
プロテインAを会合性基を用いてCPGにカップルするために、Controlled pore glass(CPG)(Millipore Corp,Billerica,MA)LCA−CPG1000Aを用いた。LCA−CPG(10mL)を、50%重量のグリシジルトリメチルアンモニウムクロリドを含む10mLの水溶液に加えた。反応液を30℃で一晩軽く(<100rpm)振蕩した。ついで、該CPGを50mLのMilli−Q(登録商標)水(Millipore Corp,Billerica,MA)で洗浄し、濾過して乾燥ケーキを得た。該CPGを30℃で2時間軽く振蕩したエピクロルヒドリンの水溶液35mLに加えた。該ビーズを100mLのMilli−Q(登録商標)水(Millipore Corp,Billerica,MA)で洗浄し、ついで濾過し、乾燥ケーキを得た。該ビーズ(5mL)をn−プロテインA15mg/mL濃度を含む0.01MNaHCO35mLに加えた。カップリング反応液を35℃で一晩軽く振蕩した。ついで、該ビーズを100mLのMilli−Q(登録商標)水(Millipore Corp,Billerica,MA)で洗浄し、ついで濾過して、乾燥ケーキを得た。ついで、該ビーズをpH8の0.1Mのトリス緩衝液中の1Mのエタノールアミン10mLに加えた。該反応を1時間行い、ついで該ビーズを0.2MNaHCO3,0.5MNaCl(pH4.5)を含む0.1M酢酸ナトリウムそれぞれ50mLで洗浄し、ついで、最終的にリン酸塩緩衝食塩水で洗浄した。先述したように該静的容量を測定し、結果を表2に示す。該会合性基の濃度は、元素分析により測定した。
CPG上で第4級アミンリガンド、エピクロルヒドリンを用いないプロテインAのリガンドカップリング
プロテインAを会合性基を用いないでCPGに連結するために、Controlled pore glass(CPG)(Millipore Corp,Billerica,MA)ProsSep5−CHO1000Aを用いた。該5−CHOビーズ(5mL)をn−プロテインA15mg/mL濃度含む0.01MのNaHCO35mLに加えた。カップリング反応液を35℃で一晩軽く(<100rpm)振蕩した。ついで、該ビーズをMilli−Q(登録商標)水(Millipore Corp,Billerica,MA)100mLで洗浄し、ついで濾過し、乾燥ケーキを得た。ついで、該ビーズをpH8の0.1Mのトリス緩衝液中の1Mのエタノールアミン10mLに加えた。反応を1時間行い、ついで該ビーズを0.2MNaHCO3,0.5MNaCl(pH4.5)を含む0.1M酢酸ナトリウムそれぞれ50mlで洗浄し、ついで最終的にリン酸塩緩衝食塩水で洗浄した。先述した該静的容量を測定し、結果を表2に示す。該会合性基の濃度は元素分析により測定した。
会合性基濃度の測定:第四級アミンリガンドの滴定
第四級アミンリガンド密度を酸塩基滴定を用いて測定した。ビーズの試料1mLを使い捨てプラスチックカラムに置き、ついで、Milli−Q(登録商標)水(10mL)(Millipore Corp,Billerica,MA)および1MNaCl(10mL)で平衡化させた。ついで該ビーズをMilli−Q(登録商標)水(10mL)(Millipore Corp,Billerica,MA)4mLで洗浄し、濾過して湿ったビーズケーキを得た。該ビーズを攪拌棒を備えた小さなビーカー中の1MNaCl80mLに加えた。ビーカにpH計を置いた。該試料を0.01MHClで滴定した。対照として強アニオン交換ビーズ(Q−Sepharose FF)を用いた。実施例6−8のデータを下表1に示す。結果は驚くべきことに、低会合性基密度および対応する低リガンド密度は、市販の代替物および替わりの実験条件の両方と比較して、より優れた静的容量を与えることを示す。
IgGの静的および動的容量の測定
上記の実施例に記述した製品それぞれの静的または飽和容量および商業的標準を次の方法を用いて測定した:
1.PBS緩衝液中の各試料からビーズ懸濁液(20%ビーズ)を作成した。
2.該ビーズ懸濁液を攪拌し、500μL試料を15mLの3つの円錐プラスチック管にピペットで採った。
3.PBS中のタンパク質溶液(IgG)(1mg/mL)を各管(14mL)に加えた。
4.該管に栓をし、オービタルシェーカーでゆっくり(<100rpm)と振蕩した。
5.24時間後、該ビーズを安定させ、結合後該溶液のUV測定をした。
6.該UV吸収をIgG濃度に変換し(ε−1.38)、物質収支を用いて飽和容量を測定した。
中間洗浄を用いて、および用いずに、異なる結合リガンド密度に対するIgG溶出プールにおける宿主細胞タンパク質(HCP)レベル
モデルHCPフィードストックとして、精製したモノクロナール抗体(mAb)、血清を含まぬCHO培地(Angel Biotechnology,Northumberland,UK)を用いた。リン酸塩緩衝食塩水(PBS1 pH 7.4−7.5,伝導率15−17mS/cm)溶液の10カラム容量(CV)で平衡化させた後、該フィードの20CVを実施例6−8に記述した該プロテインA媒体を充填したカラム(内径0.66cm、長さ7cm)にロードした。ついで該カラムをPBSの10CVまたは1MNaCIを補充したPBSの8CV(pH 7.4−7.5)で洗浄し、ついで補充されていない PBS(pH 7.4−7.5)の2CVで洗浄した。ついで、0.1Mクエン酸ナトリウム(pH3)溶出緩衝液の10CVで洗浄した。0.5から5.5CVのピーク画分を集めた。ついで、該カラムを6Mのグアニジン塩酸塩の5CVで洗浄し、ついでPBS緩衝液で平衡化させた。結合−溶出実験をBioCad(登録商標)分取液体クロマトグラフィー(Applied Biosystems Inc.,Foster City,CA)上で行った。溶出プールの280nmにおけるUV吸収を測定してIgG濃度および収量を決定した。CHOP濃度についても市販の酵素免疫測定(ELISA)キット(Cygnus Technologies Inc.,Southport,NC)を用いて分析した。結果を図3に示す。結果は高タンパク質リガンド密度に関連した非特異的結合が、適切な中間洗浄緩衝液を用いて容易に相殺されることを示している。表1の結果と組み合わせて、このデータは、本明細書中に記述した方法およびマトリックスの柔軟性は、当業者が非特異的結合のような望ましくない副作用を最小化しながら望ましい容量を最大化することを可能にし、従って、特別な用途に合わせ得る親和性マトリックスを提供することを示唆している。
塩緩衝液による中間洗浄を用いた、IgG溶出プールにおける宿主細胞タンパク質(HCP)およびDNAレベルの減少
モデルHCPフィードストックとして、精製した、IgGを発現していない、血清を含まないCHO培地(Lampire,Biological Laboratories,Piperville,PA)を用い、ポリクロナールヒトγグロブリン(hlgG)(SeraCare Life Sciences,Inc.,Oceanside,CA)1mg/mlでスパイクした。リン酸塩緩衝食塩水(PBS1 pH7.4−7.5,伝導率15−17mS/cm)溶液の10カラム容量(CV)で平衡化させた後、該フィードの20CVを実施例2に記述した該プロテインA媒体を充填したカラム(内径0.66cm、 長さx7cm)に装填した。ついで該カラムを0−1MNaCIを補充したPBS(pH7.4−7.5)の8CVついで補充されていないPBS(pH7.4−7.5)の2CVで洗浄した。ついで、0.1Mクエン酸ナトリウム(pH3)溶出緩衝液の10CVで洗浄した。0.5から5.5CVのピーク画分を集めた。ついで該カラムを6Mのグアニジン塩酸塩の5CVで洗浄し、ついでPBS緩衝液で再平衡化させた。結合−溶出実験をBioCad(登録商標)分取液体クロマトグラフィーシステム(Applied Biosystems Inc.,Foster City,CA)上で行った。該溶出プールの280nmにおけるUV吸収を測定してIgG濃度および収量を決定した。CHOP濃度についても市販の酵素免疫測定(ELISA)キット(Cygnus Technologies Inc.,Southport,NC)を用いて分析した。
低pHおよび高塩濃度での中間洗浄を用いた、IgG溶出プールにおけるHCPレベルの減少
本実験は、PBS(pH6.5および0.4MNaCI補充)の8CVを含む中間洗浄緩衝液を用いたことを除き、上記実施例14に記述したのと同様の条件下で行った。
アミノ酸またはアルキル化アミノ酸を含む中間洗浄緩衝液を用いた、IgG溶出プールにおけるHCPレベルの減少
本実験は、8CVのPBS緩衝液(pH7.4−7.5、伝導率15−17mS/cm)および0.25−0.5Mベタイン、L−アラニン、グリシン、またはリジン、または0.125−0.25Mバリンまたは0.15Mグルタミン酸含む中間洗浄緩衝液を用いたことを除き、上記実施例14に記述したのと同様の条件下で行った。
Claims (12)
- a)会合性基が固体支持体と相互作用するように、前記固体支持体を前記会合性基に接触させること;
b)その後、活性化基を用いて前記固体支持体を活性化すること;
c)次いで、前記固体支持体をタンパク質リガンドに接触させ、前記活性化基を介して共有結合するようにするとともに、前記会合性基と非共有結合的に相互作用するようにし、前記タンパク質リガンドが前記固体支持体に結合すること;
を含む、前記タンパク質リガンドを前記固体支持体に連結する方法であって、
前記会合性基と前記活性化基の両方は、前記固体支持体に結合しているが、互いには結合していない、前記方法。 - 固体支持体がビーズである、請求項1に記載の方法。
- ビーズが、アガロース・ビーズである、請求項2に記載の方法。
- 会合性基が、帯電分子種である、請求項1に記載の方法。
- 帯電分子種が、陽電荷を帯びている、請求項4に記載の方法。
- 帯電分子種が、陰電荷を帯びている、請求項4に記載の方法。
- 会合性基が、疎水性である、請求項1に記載の方法。
- 固体支持体を、a)臭化シアン;b)アルデヒド;c)エポキシド;d)活性化カルボン酸の少なくとも1つと接触させることにより、前記固体支持体が活性化される、請求項1に記載の方法。
- タンパク質リガンドがまた、免疫グロブリンを結合し得る、請求項1に記載の方法。
- タンパク質リガンドが、プロテインAおよびプロテインGから選ばれる、請求項9に記載の方法。
- タンパク質リガンドが、固体支持体に共有結合的に結合している、請求項1に記載の方法。
- 会合性基および固体支持体の間の相互作用が、共有結合である、請求項1に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US75687306P | 2006-01-06 | 2006-01-06 | |
US60/756,873 | 2006-01-06 | ||
PCT/US2007/000366 WO2007081851A2 (en) | 2006-01-06 | 2007-01-05 | Affinity chromatography matrices and methods of making and using the same |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011149726A Division JP5643721B2 (ja) | 2006-01-06 | 2011-07-06 | アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよびその作成および使用法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009522580A JP2009522580A (ja) | 2009-06-11 |
JP5530633B2 true JP5530633B2 (ja) | 2014-06-25 |
Family
ID=38137755
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008549585A Active JP5530633B2 (ja) | 2006-01-06 | 2007-01-05 | アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよびその作成および使用法。 |
JP2011149726A Active JP5643721B2 (ja) | 2006-01-06 | 2011-07-06 | アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよびその作成および使用法 |
JP2014155888A Pending JP2015007064A (ja) | 2006-01-06 | 2014-07-31 | アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよびその作成および使用法 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011149726A Active JP5643721B2 (ja) | 2006-01-06 | 2011-07-06 | アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよびその作成および使用法 |
JP2014155888A Pending JP2015007064A (ja) | 2006-01-06 | 2014-07-31 | アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよびその作成および使用法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US7833723B2 (ja) |
EP (1) | EP1974215B1 (ja) |
JP (3) | JP5530633B2 (ja) |
CN (3) | CN101365948B (ja) |
ES (1) | ES2662042T3 (ja) |
WO (1) | WO2007081851A2 (ja) |
Families Citing this family (47)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050261475A1 (en) * | 2004-02-13 | 2005-11-24 | Harvard Medical School | Solid-phase capture-release-tag methods for phosphoproteomic analyses |
US9375499B2 (en) | 2006-07-14 | 2016-06-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Adsorptive membranes for trapping viruses |
US9116150B2 (en) | 2007-11-19 | 2015-08-25 | Emd Millipore Corporation | Method of and device for packing a chromatography column |
WO2009066275A1 (en) * | 2007-11-22 | 2009-05-28 | Dublin City University | A method of immobilising biological molecules to a support and products thereof |
US8592555B2 (en) | 2008-08-11 | 2013-11-26 | Emd Millipore Corporation | Immunoglobulin-binding proteins with improved specificity |
US8268570B2 (en) | 2008-08-28 | 2012-09-18 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Restricted access media and methods for making restricted access media |
JP5666310B2 (ja) * | 2008-12-03 | 2015-02-12 | 株式会社カネカ | ホルミル基含有多孔質担体、それを用いた吸着体、およびそれらの製造方法 |
SG162687A1 (en) | 2008-12-24 | 2010-07-29 | Millipore Corp | Caustic stable chromatography ligands |
JP5863640B2 (ja) * | 2009-04-29 | 2016-02-16 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | 免疫複合体の精製 |
AU2010332778B2 (en) | 2009-12-18 | 2015-03-19 | Novartis Ag | Wash solution and method for affinity chromatography |
KR102006097B1 (ko) | 2010-03-31 | 2019-07-31 | 제이에스알 가부시끼가이샤 | 친화성 크로마토그래피용 충전제 |
JP5998050B2 (ja) | 2010-03-31 | 2016-09-28 | Jsr株式会社 | アフィニティークロマトグラフィー用充填剤 |
EP2583973B1 (en) * | 2010-06-21 | 2018-03-21 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Method for purifying protein using amino acid |
JP2012018135A (ja) * | 2010-07-09 | 2012-01-26 | Mitsubishi Chemicals Corp | 分離剤 |
SG10201604559TA (en) | 2011-06-08 | 2016-07-28 | Emd Millipore Corp | Chromatography matrices including novel staphylococcus aureus protein a based ligands |
WO2013013193A1 (en) * | 2011-07-20 | 2013-01-24 | Zepteon, Incorporated | Polypeptide separation methods |
WO2013033517A1 (en) * | 2011-09-01 | 2013-03-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Viral clearance methods |
CN102743788B (zh) * | 2012-07-06 | 2014-05-07 | 淮阴工学院 | 促细胞生长的抗生物污染的材料表面处理方法 |
WO2014034457A1 (ja) | 2012-09-03 | 2014-03-06 | 株式会社カネカ | ミックスモード抗体アフィニティー分離マトリックスとそれを用いた精製方法および標的分子 |
JP6303379B2 (ja) * | 2012-10-10 | 2018-04-04 | 東ソー株式会社 | 抗体の精製方法 |
US9604168B2 (en) | 2013-02-14 | 2017-03-28 | Nanopareil, Llc | Hybrid felts of electrospun nanofibers |
CN105555795A (zh) * | 2013-09-17 | 2016-05-04 | 株式会社钟化 | 新抗体纯化方法和由该方法得到的抗体、以及使用了阳离子交换基团的新抗体纯化法和由该方法得到的抗体 |
WO2015080174A1 (ja) | 2013-11-27 | 2015-06-04 | Jsr株式会社 | 固相担体、固相担体の製造方法、アフィニティ精製用担体、アフィニティクロマトグラフィー用充填剤の製造方法、アフィニティクロマトグラフィー用充填剤、クロマトグラフィーカラムおよび精製方法 |
JPWO2015199196A1 (ja) | 2014-06-27 | 2017-04-20 | Jsr株式会社 | アフィニティークロマトグラフィー用担体 |
US10525376B2 (en) | 2015-07-20 | 2020-01-07 | W. L. Gore & Associates, Inc. | Affinity chromatography devices |
US10526367B2 (en) | 2015-07-20 | 2020-01-07 | W. L. Gore & Associates, Inc. | Affinity chromatography devices |
JP6737579B2 (ja) * | 2015-10-30 | 2020-08-12 | Jsr株式会社 | アフィニティークロマトグラフィー用担体、クロマトグラフィーカラム、精製方法、及び該方法で精製された標的物質 |
KR102216602B1 (ko) * | 2016-04-08 | 2021-02-17 | 더블유.엘. 고어 앤드 어소시에이트스, 인코포레이티드 | 친화성 크로마토그래피 장치 |
EP3455240A1 (en) * | 2016-05-11 | 2019-03-20 | GE Healthcare BioProcess R&D AB | Method of storing a separation matrix |
US10703774B2 (en) | 2016-09-30 | 2020-07-07 | Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab | Separation method |
ES2909833T3 (es) | 2016-05-11 | 2022-05-10 | Cytiva Bioprocess R & D Ab | Método de limpieza y/o desinfección de una matriz de separación |
US10889615B2 (en) | 2016-05-11 | 2021-01-12 | Cytiva Bioprocess R&D Ab | Mutated immunoglobulin-binding polypeptides |
US10730908B2 (en) | 2016-05-11 | 2020-08-04 | Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab | Separation method |
EP3455243B1 (en) | 2016-05-11 | 2021-03-24 | Cytiva BioProcess R&D AB | Separation matrix |
EP3487868B1 (en) | 2016-07-25 | 2024-08-28 | Cephalon, Inc. | Affinity chromatography wash buffer |
EP3510042B1 (en) | 2016-09-07 | 2024-05-22 | GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited | Methods for purifying antibodies |
US11124539B2 (en) * | 2016-11-16 | 2021-09-21 | Cytiva Bioprocess R&D Ab | Chromatography resin, production and use thereof |
CN110997133A (zh) | 2017-08-23 | 2020-04-10 | Jsr株式会社 | 色谱用载体、配体固定载体、色谱柱、靶物质的纯化方法和色谱用载体的制造方法 |
CN107823915B (zh) * | 2017-10-31 | 2020-03-06 | 苏州博进生物技术有限公司 | 一种耐碱性亲和层析介质 |
US10737259B2 (en) | 2018-08-31 | 2020-08-11 | Pall Corporation | Salt tolerant anion exchange medium |
US11045773B2 (en) | 2018-08-31 | 2021-06-29 | Pall Corporation | Salt tolerant porous medium |
CN117920163A (zh) | 2018-11-06 | 2024-04-26 | Jsr株式会社 | 有机硫化合物的制造方法 |
US11918957B2 (en) | 2018-12-12 | 2024-03-05 | Donaldson Company, Inc. | Affinity membrane and method of preparation |
EP4126316A1 (en) | 2020-04-01 | 2023-02-08 | Nanopareil, LLC | Surface functionalized affinity membranes |
US20240116027A1 (en) | 2021-03-25 | 2024-04-11 | Jsr Corporation | Method for producing chromatography carrier, method for producing chromatography column, and chromatography carrier |
JPWO2022202467A1 (ja) | 2021-03-25 | 2022-09-29 | ||
WO2023058409A1 (ja) | 2021-10-05 | 2023-04-13 | Jsr株式会社 | クロマトグラフィー担体をカラムに充填する方法、スラリーの保存方法、及びスラリー |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3932557A (en) * | 1972-12-19 | 1976-01-13 | Gulf Research & Development Company | Reactive hydrophilic epoxy containing polymer |
US4210723A (en) * | 1976-07-23 | 1980-07-01 | The Dow Chemical Company | Method of coupling a protein to an epoxylated latex |
JPH075688B2 (ja) | 1983-02-14 | 1995-01-25 | キュノ、インコーポレーテッド | 変性多糖支持体 |
US4724207A (en) * | 1984-02-02 | 1988-02-09 | Cuno Incorporated | Modified siliceous chromatographic supports |
DE3543348A1 (de) * | 1985-12-07 | 1987-06-11 | Bayer Ag | Perlfoermige vernetzte, epoxy- und basische aminogruppen aufweisende mischpolymerisate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
SE8604684L (sv) * | 1986-11-03 | 1988-05-04 | Excorim Kommanditbolag | Sett att belegga fasta partiklar med en hydrofil gel samt genom settet belagda partiklar |
US5089605A (en) * | 1987-03-13 | 1992-02-18 | Repligen Corporation | Immobilized immunoglobulin-binding proteins |
US5260373A (en) * | 1987-03-13 | 1993-11-09 | Repligen Corporation | Immobilized immunoglobulin-binding proteins |
SE467308B (sv) * | 1990-10-22 | 1992-06-29 | Berol Nobel Ab | Fast yta belagd med ett hydrofilt ytterskikt med kovalent bundna biopolymerer, saett att framstaella en saadan yta och ett konjugat daerfoer |
US5543054A (en) * | 1993-11-24 | 1996-08-06 | Millipore Corporation | Method and apparatus for covalent immobilization of charge- conjugated carbohydrate molecules |
SE9503925D0 (sv) * | 1995-11-07 | 1995-11-07 | Pharmacia Biotech Ab | Separationsmedium för IgG |
CN1057608C (zh) * | 1995-12-04 | 2000-10-18 | 广州市博普生物技术有限公司 | 一种亲和层析材料及制备方法和应用 |
US5874165A (en) * | 1996-06-03 | 1999-02-23 | Gore Enterprise Holdings, Inc. | Materials and method for the immobilization of bioactive species onto polymeric subtrates |
US7544500B2 (en) * | 1999-11-13 | 2009-06-09 | Talecris Biotherapeutics, Inc. | Process for the production of a reversibly inactive acidified plasmin composition |
JP4115728B2 (ja) * | 2002-03-26 | 2008-07-09 | デンカ生研株式会社 | フロースルー式検査法用組成物、これを用いたキット及び検査法 |
ITMI20020729A1 (it) * | 2002-04-08 | 2003-10-08 | Resindion S R L | Supporti per l'immobilizzazione covalente di enzimi |
CA2482856A1 (en) * | 2002-04-15 | 2003-10-30 | American National Red Cross | Plasma protein-binding ligands |
SE526038C2 (sv) * | 2002-07-08 | 2005-06-21 | Gambro Lundia Ab | Polymeraffinitetsmatris, förfarande för framställning därav och anvädning därav |
JP2004170195A (ja) * | 2002-11-19 | 2004-06-17 | Reverse Proteomics Research Institute Co Ltd | タンパク質の固定化方法 |
ES2214136B1 (es) * | 2003-02-21 | 2007-05-16 | Consejo Sup. De Invest. Cientificas. | Nuevo metodo de inmovilizacion de enzimas y otras bio-macromoleculas sobre soportes activados con grupos epoxido conteniendo grupos ionizados en el brazo espaciador que une cada grupo epoxido a la superficie del soporte. |
US20050282294A1 (en) * | 2004-06-17 | 2005-12-22 | Lothar Britsch | Affinity supports with immobilised protein A |
US8728828B2 (en) * | 2004-12-22 | 2014-05-20 | Ge Healthcare Bio-Sciences Ab | Purification of immunoglobulins |
-
2007
- 2007-01-05 WO PCT/US2007/000366 patent/WO2007081851A2/en active Application Filing
- 2007-01-05 CN CN200780001886XA patent/CN101365948B/zh active Active
- 2007-01-05 CN CN201210342435.5A patent/CN103028380B/zh active Active
- 2007-01-05 US US11/650,093 patent/US7833723B2/en active Active
- 2007-01-05 ES ES07716413.5T patent/ES2662042T3/es active Active
- 2007-01-05 JP JP2008549585A patent/JP5530633B2/ja active Active
- 2007-01-05 EP EP07716413.5A patent/EP1974215B1/en active Active
- 2007-01-05 CN CN201210121586.8A patent/CN102626610B/zh active Active
-
2009
- 2009-11-13 US US12/590,726 patent/US7846682B2/en active Active
-
2010
- 2010-11-01 US US12/916,978 patent/US8114611B2/en active Active
-
2011
- 2011-07-06 JP JP2011149726A patent/JP5643721B2/ja active Active
-
2014
- 2014-07-31 JP JP2014155888A patent/JP2015007064A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2662042T3 (es) | 2018-04-05 |
CN103028380A (zh) | 2013-04-10 |
JP5643721B2 (ja) | 2014-12-17 |
US7833723B2 (en) | 2010-11-16 |
CN101365948B (zh) | 2012-11-07 |
US20110105730A1 (en) | 2011-05-05 |
CN103028380B (zh) | 2015-08-19 |
WO2007081851A2 (en) | 2007-07-19 |
JP2009522580A (ja) | 2009-06-11 |
JP2015007064A (ja) | 2015-01-15 |
US7846682B2 (en) | 2010-12-07 |
US20100063261A1 (en) | 2010-03-11 |
JP2011256176A (ja) | 2011-12-22 |
CN102626610A (zh) | 2012-08-08 |
EP1974215A2 (en) | 2008-10-01 |
EP1974215B1 (en) | 2017-12-27 |
US20070207500A1 (en) | 2007-09-06 |
CN102626610B (zh) | 2014-10-01 |
US8114611B2 (en) | 2012-02-14 |
CN101365948A (zh) | 2009-02-11 |
WO2007081851A3 (en) | 2007-09-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5530633B2 (ja) | アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよびその作成および使用法。 | |
US6610630B2 (en) | Chromatography adsorbents utilizing mercapto heterocyclic ligands | |
WO2015041218A1 (ja) | 新規抗体精製方法及びそれから得られる抗体(Novel Antibody Purification Method and Antibody obtained therefrom)、並びに陽イオン交換基を用いた新規抗体精製法及びそれから得られる抗体(Novel Antibody Purification method using Cation Exchanger and Antibody obtained therefrom) | |
TW201306868A (zh) | 混合模式之配位體 | |
US20050029196A1 (en) | Packing materials for separation of biomolecules | |
US10583429B2 (en) | Mixed mode ligands | |
CN115318256A (zh) | 阴离子交换-疏水混合模式色谱树脂 | |
JP4739233B2 (ja) | 免疫グロブリンの精製 | |
EP4308176A1 (en) | Mixed mode cation exchange chromatography ligands based on 1,3-dioxoisoindolin-2-yl structures | |
CN111683976B (zh) | 具有阴离子交换-疏水混合模式配体的色谱树脂 | |
CN114040815B (zh) | 阴离子交换-疏水混合模式色谱树脂 | |
Maeno et al. | Phosphorylcholine (PC)-bonded Protein A affinity chromatographic medium for high-throughput purification with reduced non-specific protein adsorption |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090903 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110412 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20110413 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110706 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20111129 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120126 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120612 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121011 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20121127 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130820 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130826 |
|
RD13 | Notification of appointment of power of sub attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7433 Effective date: 20140210 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20140210 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140317 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140421 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5530633 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |