JP5499352B2 - 抗酸化物質、飲食物、化粧料、医薬部外品、及び、美白剤 - Google Patents
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Description
まず、本発明においてEucampia属及びRhaphoneis属は、微細藻類の一種である珪藻植物門(Bacillariopohyta)に属する。Eucampia属はコアミケイソウ綱(Coscinodiscophyceae)イトマキケイソウ亜綱(Biddulphiophycidae)ヘミアリウス目(Hemiaulales)ヘミアリウス科(Hemiaulaceae)に、Rhaphoneis属はオビケイソウ綱(Fragilariophyceae)オビケイソウ亜綱(Fragilariophycidae)ラフォネイス目(Rhaphoneidales)ラフォネイス科(Rhaphoneidaceae)に属する微細藻類を意味する(非特許文献1参照)。
[実施例1]
(1)微細藻類Eucampiaの培養
駿河湾深層水水産利用施設沖に設置された取水管より、深度397mの海洋深層水を汲み上げ、孔径0.45μmのメンブランフィルターでろ過滅菌し、培養用海水とした。500mlのポリカーボネイト製容器に海水を満たし、ここに駿河湾海洋深層水中より採取した微細藻類Eucampiaを初期密度10細胞/mlで接種した。これを恒温培養装置内で、培養温度20℃、白色蛍光灯下で光強度3000−4000ルクス、光周期12時間明期12時間暗期で培養した。
培養液を孔径1μmのメンブランフィルターによりろ過し、藻体を捕集した。付着した塩分を除くため、蒸留水にて2回洗浄した。得られた藻体を−30℃で凍結した後、凍結乾燥した。凍結乾燥物は0.5mm以下に粉砕し、水又はエタノールに分散した。分散液を超音波破砕装置により周波数20kHz、出力100Wで3分間破砕し、遠心分離(1000rpm、5分)して上澄みを取り出すことで藻体抽出物を得た。
前記実施例1で得られたEucampia抽出物の抗酸化活性(活性酸素消去活性)を確認するため、DPPHラジカル消去能の評価を行った。
具体的には、96穴マイクロプレートに、20μLの試料希釈系列、Trolox希釈系列、及び、250μLのDPPH溶液を加え、室温で20分間撹拌後、マイクロプレートリーダーで520nmにおける試料の吸光度(Asample)を測定した。また、コントロールとして、被検試料の代わりに200mMの2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)緩衝液(pH6.0)を添加した場合の吸光度(Acontrol)、ブランクとして、DPPH溶液の代わりに同量のエタノールを添加した場合の吸光度(Ablank)をそれぞれ測定した。
消去能(%)=[{Acontrol−(Asample−Ablank)}/Acontrol]×100
Eucampiaの水抽出物とエタノール抽出物のDPPHラジカル消去率を図1に示す。
図1から明らかな通り、Eucampiaの水抽出物、エタノール抽出物とも抗酸化活性(ラジカル消去能)を示した。抽出溶媒としては、水よりエタノールを用いることが好適であるといえる。
(1)微細藻類Rhaphoneisの培養
駿河湾深層水水産利用施設沖に設置された取水管より、深度687mの海洋深層水を汲み上げ、孔径0.45μmのメンブランフィルターで除菌ろ過し培養海水とした。有効水量4トンの水槽に3トンの海水を満たし、ここに駿河湾海洋深層水中より採取した微細藻類Rhaphoneisを接種した。孔径2μmのカートリッジフィルターでろ過滅菌し、培養用海水とした。有効水量4トンの水槽に3トンの海水を満たし、ここに駿河湾海洋深層水中より採取した微細藻類Rhaphoneisを接種した。これを培養温度20℃、光条件は太陽光を基準とし、10,000ルクスに満たない場合は9:00−17:00までの間、ナトリウムランプを点灯した。
培養液を孔径1μmのメンブランフィルターによりろ過し、藻体を捕集した。得られた藻体を−30℃で凍結した後、凍結乾燥した。凍結乾燥物は0.5mm以下に粉砕し、タノールに分散した。分散液を超音波破砕装置により周波数20kHz、出力100Wで3分間破砕し、遠心分離(1000rpm、5分)して上澄みを取り出すことでRhaphoneis抽出物(脱塩無)を得た。
また、捕集した藻体の付着した塩分を除くため、蒸留水にて2回洗浄し、得られた藻体を−30℃で凍結した後、凍結乾燥した。凍結乾燥物は0.5mm以下に粉砕し、エタノールに分散した。分散液を超音波破砕装置により周波数20kHz、出力100Wで3分間破砕し、遠心分離(1000rpm、5分)して上澄みを取り出すことでRhaphoneis抽出物(脱塩有)を得た。
前記実施例2で得られたRhaphoneis抽出物の抗酸化活性(活性酸素消去活性)を確認するため、DPPHラジカル消去能の評価を行った。また、比較のためニンジン、クレソンの可食部をエタノール抽出し、藻体抽出試料と同様の測定を行った。別途、Troloxの濃度を横軸、吸光度変化量を縦軸として検量線を描き、試料のTrolox換算濃度を求めた。
表1から明らかな通り、Rhaphoneis抽出物には高い抗酸化能があることが示された。
抽出液の美白機能をチロシナーゼ活性阻害により評価した。
具体的には、96穴マイクロプレートに、上記実施例2において調製されたRhaphoneis抽出物(脱塩有)100μlを入れ、次に120U/mLのチロシナーゼ(シグマ製)100μLを添加し、37℃で10分間プレインキュベートを行った。ここに2.5mMのL−DOPA(L−dioxyphenylalanin)100μLを添加した後、さらに37℃で5分間インキュベートを行い、マイクロプレートリーダーにて490nmにおける吸光度(Asample)を測定した。別途、L−DOPAの代わりに0.1Mリン酸緩衝液(pH6.8)を加えたものの吸光度(Ablank)、被検溶液の代わりに0.1Mリン酸緩衝液(pH6.8)を加えたものの吸光度(Acontrol)を同様の操作にて測定を行った。
阻害活性(%)=[{Acontrol−(Asample−Ablank)}/Acontrol]×100
測定したRhaphoneis抽出物のチロシナーゼ阻害活性(%)とコウジ酸相当濃度(ppm)を表2に示す。なお、Rhaphoneis抽出物の測定は、ロットを代えて2回行った。
表2に示すように、該抽出物は安定してチロシナーゼ活性阻害作用を有することが判る。これにより、該抽出物は美白機能を有する素材となることが判る。
抽出液の美白機能をB16メラノーマ細胞により評価した。
なお、1.0%Rhaphoneis抽出物を用いる代りに、PBS緩衝液を加えたものをコントロールとした。また、1.0%Rhaphoneis抽出物を用いる代りに、コウジ酸を用いて陽性コントロールとした。
Rhaphoneisの水抽出物、及び、エタノール抽出物の美白機能の評価結果を、表3に示す。また、コントロール(PBS緩衝液)、及び、陽性コントロール(コウジ酸)を用いた美白機能の評価結果を、表3に示す。
なお、表3に示す美白効果は下記の基準により評価した。
「5」: コントロールと同程度又はそれ以上の黒色
「1」〜「4」: 数字が小さいほど白色に近い色調
「0」: 白色
表3から明らかなように、該抽出物はB16メラノーマ細胞のメラニン色素産生を抑制し、細胞を白化する効果を有することが示された。これにより、該抽出物は美白機能を有する素材となることが判る。
図2から、該抽出物はB16メラノーマ細胞のメラニン色素産生量を抑制することにより細胞を白化する効果を有することが明示された。これにより、該抽出物は美白機能を有する素材となることが判る。
Claims (9)
- 抗酸化性を有するユーカンピア(Eucampia)、若しくは、ラフォネイス(Rhaphoneis)の藻体、又は/及び、前記藻体を、粉砕して溶媒により抽出した抽出物を含むことを特徴とする抗酸化物質。
- 前記藻体が、海洋深層水中からの採取物、又は、海洋深層水中での培養物であることを特徴とする請求項1記載の抗酸化物質。
- 抗酸化性を有するユーカンピア(Eucampia)、若しくは、ラフォネイス(Rhaphoneis)の藻体、又は/及び、前記藻体を、粉砕して溶媒により抽出した抽出物を含む抗酸化物質が含まれていることを特徴とする飲食物。
- 抗酸化性を有するユーカンピア(Eucampia)、若しくは、ラフォネイス(Rhaphoneis)の藻体、又は/及び、前記藻体を、粉砕して溶媒により抽出した抽出物を含む抗酸化物質が含まれていることを特徴とする化粧料。
- 抗酸化性を有するユーカンピア(Eucampia)、若しくは、ラフォネイス(Rhaphoneis)の藻体、又は/及び、前記藻体を、粉砕して溶媒により抽出した抽出物を含む抗酸化物質が含まれていることを特徴とする医薬部外品。
- 美白活性を有するラフォネイス(Rhaphoneis)の藻体、又は/及び、前記藻体を、粉砕して溶媒により抽出した抽出物を含むことを特徴とする美白剤。
- 前記藻体が海洋深層水中からの採取物、又は/及び、海洋深層水中での培養物であることを特徴とする請求項6記載の美白剤。
- 美白活性を有するラフォネイス(Rhaphoneis)の藻体、又は/及び、前記藻体を、粉砕して溶媒により抽出した抽出物を含む美白剤が含まれていることを特徴とする化粧料。
- 美白活性を有するラフォネイス(Rhaphoneis)の藻体、又は/及び、前記藻体を、粉砕して溶媒により抽出した抽出物を含む美白剤が含まれていることを特徴とする医薬部外品。
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