JP5388090B2 - 強膜透明化による角膜移植材料調製方法 - Google Patents
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Description
(1)強膜を透明化する方法であって、以下のステップ:
(a)動物ドナーから単離した強膜組織を脱水するステップ;及び
(b)ステップ(a)からの強膜組織に、架橋処理を施すステップ
を含む、上記方法。
(2)ステップ(a)を、自然乾燥により行う、上記(1)に記載の方法。
(3)ステップ(a)を、強膜組織の少なくとも一部分が外気と接触する条件下で、2〜10℃にて少なくとも16時間静置することにより行う、上記(1)又は(2)に記載の方法。
(4)ステップ(a)を、吸湿性化合物での処理により行う、上記(1)に記載の方法。
(5)ステップ(b)での架橋処理を化学的架橋により行う、上記(1)〜(4)のいずれか1つに記載の方法。
(6)1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC)、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩/N−ヒドロキシスクシンイミド(EDC/NHS)、グルタールアルデヒド、又はパラホルムアルデヒドを用いて化学的架橋を行う、上記(5)に記載の方法。
(7)EDC/NHSを用いて化学的架橋を行う、上記(6)に記載の方法。
(8)ステップ(b)において、紫外線照射を用いて架橋処理を行う、上記(1)〜(4)のいずれか1つに記載の方法。
(9)動物がヒトである、上記(1)〜(8)のいずれか1つに記載の方法。
(10)以下のステップ:
(a)動物ドナーから単離した強膜組織を脱水するステップ;及び
(b)ステップ(a)からの強膜組織に、架橋処理を施すステップ
を含む、角膜移植用移植材料の製造方法。
(11)上記(1)〜(9)のいずれか1つに記載の方法により透明化された、動物強膜組織。
(12)化学的架橋剤及び使用説明書を少なくとも含む、上記(1)〜(7)のいずれか1つに記載の方法により強膜組織を透明化するためのキット。
(a)動物ドナーから単離した強膜組織を脱水するステップ;及び
(b)ステップ(a)からの強膜組織に、架橋処理を施すステップ
を含む。
本発明はまた、本発明の方法により透明化された動物強膜組織にも関する。
(a)動物ドナーから単離した強膜組織を脱水するステップ;及び
(b)ステップ(a)からの強膜組織に、架橋処理を施すステップ
を含む、角膜移植用移植材料の製造方法にも関する。
米国アイバンクより研究目的で輸入したヒト強角膜片から、生検パンチ(カイインダストリー社製)を用いて強膜組織片を切り出し、生理食塩水に4℃にて1時間浸漬した後、強膜試料を超純水に浸漬し、4℃にて一晩静置した。続いて強膜組織試料をスライドガラスに載せ、4℃の冷蔵庫内に一晩(16時間)〜2日間静置した。
ウサギ強膜試料を、結膜等の強膜以外の組織を除去するためにディスパーゼ処理した後(2.4U/mLディスパーゼ(インビトロジェン社製)、4℃、45時間)、種々の濃度のグリセロール溶液(0、20、40、60、80又は100%(v/v)、PBS中;グリセロール:シグマ社製、PBS:ギブコ社製、以下同じ)に室温で浸漬した。透明度は5分間程度で平衡に達した。
自然乾燥又はグリセロール処理により透明化した強膜組織は、水溶液への浸漬により容易に再不透明化する(図3C)。そこで、組織の架橋処理により、水和後における透明化強膜の透明度の維持を試みた。
紫外線照射による架橋によって、水和後における透明化強膜組織の透明度の維持を試みた。
上記のとおり、強膜組織は自然乾燥又はグリセロール処理による脱水によって透明化する。その機構を検討するために、走査型電子顕微鏡による観察を行った。
Claims (13)
- 以下のステップ:
(a)動物ドナーから単離した強膜組織を自然乾燥またはグリセロール処理により脱水して透明化させるステップ;及び
(b)ステップ(a)からの強膜組織に、架橋処理を施すステップ
を含む、移植材料の製造方法。 - ステップ(a)を、自然乾燥により行う、請求項1に記載の方法。
- ステップ(a)を、強膜組織の少なくとも一部分が外気と接触する条件下で、2〜10℃にて少なくとも16時間静置することにより行う、請求項1又は2に記載の方法。
- ステップ(a)を、強膜を2枚の支持体に挟んだ状態で、2〜10℃にて少なくとも16時間静置することにより行う、請求項1又は2に記載の方法。
- ステップ(a)を、グリセロール処理により行う、請求項1に記載の方法。
- ステップ(b)での架橋処理を化学的架橋により行う、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC)、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩/N−ヒドロキシスクシンイミド(EDC/NHS)、グルタールアルデヒド、又はパラホルムアルデヒドを用いて化学的架橋を行う、請求項6に記載の方法。
- EDC/NHSを用いて化学的架橋を行う、請求項7に記載の方法。
- ステップ(b)において、紫外線照射を用いて架橋処理を行う、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 動物がヒトである、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 移植材料が角膜移植用である、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法により製造された、移植材料。
- 化学的架橋剤及び使用説明書を少なくとも含む、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法により移植材料を製造するためのキット。
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