JP5340935B2

JP5340935B2 - 抗ｃｓ１抗体に基づく組合せ療法を用いて多発性骨髄腫を処置する方法

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Publication number: JP5340935B2
Application number: JP2009523968A
Authority: JP
Inventors: ダニエルアファール，; ケニスシー．アンダーソン，; ユー−ツタイ，
Original assignee: アッヴィ・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド; デイナファーバーキャンサーインスティチュート，インコーポレイテッド
Priority date: 2006-08-07
Filing date: 2007-08-07
Publication date: 2013-11-13
Anticipated expiration: 2027-08-07
Also published as: DK2068874T3; HRP20150449T1; AU2007281684A1; SI2641601T1; CA2660356C; US20140322201A1; LU93276I2; HUS1600044I1; US20080152646A1; LTPA2016029I1; SI2068874T1; HRP20161284T1; EP2641601B1; NL300840I2; CY2016036I2; CN101686971A; HUS1600043I1; EP2068874B1; IL196919A; HUS1600045I1

Description

１．関連出願の引用
本願は、２００６年８月７日出願の米国出願第６０／８３６，１８５号および２００７年６月１５日出願の米国出願第６０／９４４，２６２号に対して米国特許法第１１９条（ｅ）項の下での利益を主張する。これらの内容は、本明細書中に参考として援用される。

２．背景
多発性骨髄腫（「ＭＭ：ｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａ」）は単一クローン由来形質細胞が悪性増殖したものを表す。多発性骨髄腫及び骨髄腫という用語は交換可能に使用され、同じ状態を指している。骨髄腫腫瘍、その産物及びこの腫瘍に対する宿主応答は、多くの臓器機能不全並びに骨痛もしくは骨折、腎不全、易感染性、貧血、低カルシウム血症及び時に凝固異常の症状、神経学的症状及び血管の過粘性症状をもたらす。非特許文献１を参照されたい。現在、ＭＭに対して有効な長期処置はない。これは、高蛋白血症、貧血、腎機能不全、骨病変及び免疫不全として表れる形質細胞の悪性疾患である。ＭＭは、早期段階では症状が認められない場合があるので、早期診断が困難である。この疾患は、処置がなされない場合、生存期間中央値が６ヶ月の進行性の経過を示す。全身性化学療法が主要な処置であり、化学療法による現段階の生存期間中央値は約３年ではあるが、１０年より長期の生存者は５％未満である（非特許文献２参照）。

多発性骨髄腫は薬剤感受性の疾患であると考えられているが、最初のうちは化学療法に反応したＭＭ患者も殆ど全てが最終的には再発する（非特許文献２参照）。ＭＭに対してメルファランおよびプレドニゾンの療法が導入されて以来、ビンカアルカロイド、アントラサイクリンおよびニトロソウレアをベースとした処置を含めた多数の多剤併用化学療法が試験されてきた（非特許文献３参照）が、過去３０年間にわたって結果の改善は殆ど認められていない（非特許文献３及び非特許文献４参照）。モノクロナール抗体と治療剤とを用いる組合せ療法などの新規な処置方法が必要とされている。

Ｄ．Ｌｏｎｇｏ、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ第１４版ｐ．７１３（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、ニューヨーク、１９９８年）Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．ｅｔａｌ．、ＡｎｎｕａｌＭｅｅｔｉｎｇＲｅｐｏｒｔ１９９９、ＲｅｃｅｎｔＡｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＭｕｌｔｉｐｌｅＭｙｅｌｏｍａ（１９９９年））Ｃａｓｅ，ＤＣｅｔａｌ．、（１９９７年）Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ）６３：ｐ．８９７−９０３Ｏｔｓｕｋｉ，Ｔ．ｅｔａｌ．、（２０００年）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６０：ｐ．１

３．概要
本明細書では、抗ＣＳ１抗体の抗腫瘍特性を活用するのに有用な組成物及び方法について記載している。これらの方法及び組成物に用いることができる抗ＣＳ１抗体については米国特許公開第２００５／００２５７６３号及び同２００６／００２４２９６号に記載されており、これらの内容は引用により本明細書に組み込まれている。こうした抗ＣＳ１抗体は、ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＡＣＣ、１９Ａ、ＡＰＥＸ−１及びＦＯＡＰ１２（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０２１１８１．３）としても公知のＣＳ１（ＣＤ２サブセット１）を標的とする。ＣＳ１は、ＭＭと診断された患者からの骨髄試料において高度に発現される糖蛋白質である。インビトロ及びインビボのいずれにおける実験でも、抗ＣＳ１抗体は顕著な抗骨髄腫活性を示す（例えば、米国特許公開第２００５／００２５７６３号及び同２００６／００２４２９６号参照。これらの内容は引用により本明細書に組み込まれている）。例えば、抗ＣＳ１抗体ＨｕＬｕｃ６３は抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）を介して骨髄腫細胞の溶解を効果的に媒介する（例えば、米国特許公開第２００５／００２５７６３参照。これの内容は引用により本明細書に組み込まれている。）が、これに限定されるものではない。マウス骨髄腫腫瘍モデルでは、ＨｕＬｕｃ６３を用いた処置によって腫瘍量が５０％を超えて著しく縮小した（例えば、米国特許公開第２００５／００２５７６３号参照。これの内容は引用により本明細書に組み込まれている。）。

本開示内容は、新たに診断されたものから末期再発／難治性のものまでの範囲の、意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ：ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＧａｍｍｏｐａｔｈｙｏｆＵｎｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ）、くすぶり型骨髄腫、無症候性ＭＭ及び症候性ＭＭと診断された患者を処置するための組成物及び方法に関する。特に、上記方法は、ＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む医薬組成物と１種以上の治療剤とを組合せた投与に関する。通常、この抗ＣＳ１抗体は、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で週に１回から月に１回までで、静脈内注入として第一の医薬組成物において投与される。

ボルテゾミブ、レナリドマイドなどの治療剤を１種以上含む第二の医薬組成物を抗ＣＳ１抗体の投与と同時に、又は投与前に、又は投与後に投与することができる。この組成物は、その治療剤に応じて経口、静脈内又は皮下に投与することができる。治療剤は高用量速度（ｒａｔｅ）、標準用量速度及び低減した用量速度で用いることができる。

一部の実施態様において、本明細書に記載の医薬組成物を投与することにより、治療剤に対する多発性骨髄腫細胞の感受性が増大する。例えば、抗ＣＳ１抗体を含有させることによって治療剤の活性が増強し、その結果、より低い用量を本明細書に記載の組成物及び方法で用いることができるが、これに限定されるものではない。

一部の実施態様において、本明細書に記載の医薬組成物を投与することにより、欧州血液骨髄移植グループ（ＥＢＭＴ：ＥｕｒｏｐｅａｎＧｒｏｕｐｆｏｒＢｌｏｏｄａｎｄＭａｒｒｏｗｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）によって定義されている有益な寛解のうちの少なくとも１つが誘発される。例えば、本明細書に記載の医薬組成物を投与することにより、完全寛解、部分寛解、最小寛解、無変化又はプラトー（ｐｌａｔｅａｕ）を得ることができる。

図１Ａは、ＨｕＬｕｃ６３で処理したＭＭ細胞の自己ＡＤＣＣ媒介溶解を示す。図１Ｂは、ＨｕＬｕｃ６３で処理したＭＭ細胞の自己ＡＤＣＣ媒介溶解を示す。図１Ｃは、ＨｕＬｕｃ６３で処理したＭＭ細胞の自己ＡＤＣＣ媒介溶解を示す。図２Ａは、Ｈｓｐ９０及びボルテゾミブ抵抗性患者腫瘍細胞に対するＨｕＬｕｃ６３誘導ＡＤＣＣを示す。図２Ｂは、Ｈｓｐ９０及びボルテゾミブ抵抗性患者腫瘍細胞に対するＨｕＬｕｃ６３誘導ＡＤＣＣを示す。図３Ａは、エフェクター細胞をレナリドマイドで前処理した場合のＭＭ細胞に対するＨｕＬｕｃ６３誘導ＡＤＣＣの増強を示す。図３Ｂは、エフェクター細胞をレナリドマイドで前処理した場合のＭＭ細胞に対するＨｕＬｕｃ６３誘導ＡＤＣＣの増強を示す。図３Ｃは、エフェクター細胞をレナリドマイドで前処理した場合のＭＭ細胞に対するＨｕＬｕｃ６３誘導ＡＤＣＣの増強を示す。図４Ａは、インビトロにおけるＨｕＬｕｃ６３誘導ＡＤＣＣに対するボルテゾミブ前処理の効果を示す。例は４名の異なるドナーについて示されている。図４Ｂは、インビトロにおけるＨｕＬｕｃ６３誘導ＡＤＣＣに対するボルテゾミブ前処理の効果を示す。例は４名の異なるドナーについて示されている。図４Ｃは、インビトロにおけるＨｕＬｕｃ６３誘導ＡＤＣＣに対するボルテゾミブ前処理の効果を示す。例は４名の異なるドナーについて示されている。図４Ｄは、インビトロにおけるＨｕＬｕｃ６３誘導ＡＤＣＣに対するボルテゾミブ前処理の効果を示す。例は４名の異なるドナーについて示されている。図５Ａは、ＯＰＭ２腫瘍を有するマウスにおけるＨｕＬｕｃ６３及びボルテゾミブの効果を示す。図５Ｂは、ＯＰＭ２腫瘍を有するマウスにおけるＨｕＬｕｃ６３及びボルテゾミブの効果を示す。

５．詳細な説明
本明細書に記載の組成物は抗ＣＳ１抗体と特定用量の１種以上の治療剤を組み合わせたものであり、これによって互いに抗骨髄腫活性が増強又は補完される。好適な抗ＣＳ１抗体の例としては、ＣＳ１上に特定されている３つのエピトープクラスターのうちの１つ以上に結合する単離抗体及びハイブリドーマ細胞株Ｌｕｃ２、Ｌｕｃ３、Ｌｕｃ１５、Ｌｕｃ２２、Ｌｕｃ２３、Ｌｕｃ２９、Ｌｕｃ３２、Ｌｕｃ３４、Ｌｕｃ３５、Ｌｕｃ３７、Ｌｕｃ３８、Ｌｕｃ３９、Ｌｕｃ５６、Ｌｕｃ６０、Ｌｕｃ６３、Ｌｕｃ６９、ＬｕｃＸ．１、ＬｕｃＸ．２又はＬｕｃ９０によって産生されたモノクロナール抗体が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書の以下では、これらのモノクロナール抗体をそれぞれ抗体Ｌｕｃ２、Ｌｕｃ３、Ｌｕｃ１５、Ｌｕｃ２２、Ｌｕｃ２３、Ｌｕｃ２９、Ｌｕｃ３２、Ｌｕｃ３４、Ｌｕｃ３５、Ｌｕｃ３７、Ｌｕｃ３８、Ｌｕｃ３９、Ｌｕｃ５６、Ｌｕｃ６０、Ｌｕｃ６３、Ｌｕｃ６９、ＬｕｃＸ及びＬｕｃ９０と称する。ヒト化型は「ｈｕ」という接頭語によって示されている（例えば、米国特許公開第２００５／００２５７６３号及び同２００６／００２４２９６号参照。これらの内容は引用により本明細書に組み込まれている）。

一部の実施態様では、好適な抗ＣＳ１抗体として、ＣＳ１（下記表１の配列番号１；例えば、米国特許公開第２００６／００２４２９６号参照。これの内容は引用により本明細書に組み込まれている。）上に特定されている３つのエピトープクラスターのうちの１つ以上に結合する単離抗体が挙げられる。米国特許公開第２００６／００２４２９６号に開示され、また、下記の表１に示したように、これらのＣＳ１抗体結合部位は、以下の３つのエピトープクラスターに分けられている：
（１）ｈｕ５０／ｍｕ５０（配列番号２）に結合するＬｕｃ９０によって規定されるエピトープ。このエピトープはヒトＣＳ１の約２３番目のアミノ酸残基から約１５１番目のアミノ酸残基にわたる。このエピトープは細胞外ドメインのドメイン１（Ｖドメイン）内にある。また、このエピトープはＬｕｃ３４、（ＬｕｃＸ．１及びＬｕｃＸ．２を含む）ＬｕｃＸ並びにＬｕｃ６９によっても認識される。

（２）ｍｕ２５／ｈｕ７５（配列番号３）及びｈｕ５０／ｍｕ５０（配列番号８１）に結合するＬｕｃ３８によって規定されるエピトープ。このエピトープはヒトＣＳ１の約６８番目のアミノ酸残基から約１５１番目の残基にわたると思われる。また、このエピトープはＬｕｃ５によっても認識される。

（３）ｍｕ７５／ｈｕ２５（配列番号４）に結合するＬｕｃ６３によって規定されるエピトープ。このエピトープはヒトＣＳ１の約１７０番目のアミノ酸残基から約２２７番目のアミノ酸残基にわたる。このエピトープはヒトＣＳ１のドメイン２（Ｃ２ドメイン）内にある。このエピトープはＬｕｃ４、Ｌｕｃ１２、Ｌｕｃ２３、Ｌｕｃ２９、Ｌｕｃ３２及びＬｕｃ３７によっても認識される。

上記の方法及び医薬組成物については以下にさらに詳細に説明するが、通常、これらには上述のような抗ＣＳ１抗体を少なくとも１種含める。一部の実施態様において、こうした医薬組成物には抗ＣＳ１抗体ＨｕＬｕｃ６３を含有させる。ＨｕＬｕｃ６３はヒトＣＳ１に対する組換えヒト化モノクロナールＩｇＧ１抗体である。ＨｕＬｕｃ６３の重鎖可変領域（配列番号５）及び軽鎖可変領域（配列番号６）のアミノ酸配列は、米国特許公開第２００５／００２５７６３号（その内容は引用により本明細書に組み込まれている）及び表１に開示されている。

一部の用量では、相加効果がみられ、他の用量では、相乗効果がみられた。一部の実施態様では、この相乗効果によって、１種以上の抗ＣＳ１抗体との組合せで１種以上の治療剤を、効力を維持しながら投与量を下げて投与することが可能となる。これらの薬剤の使用に伴う副作用が用量依存性であることを考えれば、本明細書に記載の組成物及び方法を用いることによって、これらの薬剤をその推奨投与量で投与する場合に、ＭＭの処置に用いる従来の処置レジメン及び新規処置レジメンにおいて認められる有害な副作用を減少させることができる。

他の実施態様では、この相乗効果によって、承認投与量でありながらも予想される効力よりも高い効力で、１種以上の治療剤を１種以上の抗ＣＳ１抗体と組合せて投与することが可能となる。

上記組成物は、新たに診断されたものから末期再発／難治性のものまでの範囲の意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型骨髄腫、無症候性ＭＭ及び症候性ＭＭを処置するために投与することができる。通常、こうした組成物を投与することによって血清又は尿中のＭ蛋白質が減少し、その結果、欧州血液骨髄移植グループ（ＥＢＭＴ）が定義するプラトー、無変化、最小寛解、部分寛解又は完全寛解が認められる。

５．２．医薬組成物
本明細書で提供されるのは、多発性骨髄腫と診断された患者において腫瘍量を縮小させ、及び／又は腫瘍成長を後退させるのに有用な医薬組成物である。以下において上記医薬組成物の成分についてさらに詳細に説明するが、こうした成分としては、通常、ＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体及び１種以上の治療剤が挙げられる。一部の実施態様では、上記組成物の各種成分は別々に提供される。例えば、抗ＣＳ１抗体を第一の医薬組成物として提供し、治療剤を第二の組成物として提供することができる。組成物が２種以上の治療剤を含む場合、抗ＣＳ１抗体を第一の医薬組成物として提供し、１種類の治療剤を第二の組成物として提供し、その他の治療剤を第三の組成物として提供することができる。他の実施態様では、抗ＣＳ１抗体を１つの医薬組成物として提供し、治療剤を混合して第二の医薬組成物として提供することができる。さらに他の実施態様では、抗ＣＳ１抗体を１種以上の治療剤との組合せで含む１つの組成物を提供することができる。

代表的な実施態様では、抗ＣＳ１抗体を、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与を可能にするのに十分な濃度で医薬組成物中に存在させる。一部の実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法に用いるのに適したＨｕＬｕｃ６３の濃度としては、少なくとも約０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．７５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１９ｍｇ／ｋｇ及び少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

上記抗ＣＳ１抗体は、単回投与レジメンでも複数回投与レジメンでも投与することができる。概して、抗ＣＳ１抗体は約１〜約２４時間の時間をかけて投与されるが、通常は約１〜２時間の時間をかけて投与される。投与は、合計４用量以上で約１〜約４週間またはそれより長く反復することができる。通常は、最低４用量から最高５２用量までで、週に１回、隔週に１回又は月に１回で投与を繰り返す。

抗ＣＳ１抗体の有効投与量、用量総数及び処置期間を決定することは、十分当業者の能力の範囲内であり、最大許容投与量（ＭＴＤ：ｍａｘｉｍｕｍｔｏｌｅｒａｔｅｄｄｏｓｅ）を見出すための標準的な用量漸増試験を利用して決定することができる（例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎｅｔａｌ．、２００２年、Ｂｌｏｏｄ、１００（９）：ｐ．３０６３−３０６７参照。これらの内容は引用により本明細書に組み込まれている。）。

一部の実施態様では、抗ＣＳ１抗体と組み合わせて１種以上の治療剤を投与する。この治療剤は抗ＣＳ１抗体の投与と同時に、又はそれに先だって、又はその後に投与することができる。

一部の実施態様では、治療剤の投与に先だって抗ＣＳ１抗体を投与する。例えば、治療剤投与の約０〜６０日後に抗ＣＳ１抗体を投与することができる。一部の実施態様では、治療剤投与の約３０分〜約１時間前、又は治療剤投与の約１時間〜約２時間前、又は治療剤投与の約２時間〜約４時間前、又は治療剤投与の約４時間〜約６時間前、又は治療剤投与の約６時間〜約８時間前、又は治療剤投与の約８時間〜約１６時間前、又は治療剤投与の約１６時間〜１日前、又は治療剤投与の約１日〜５日前、又は治療剤投与の約５日〜１０日前、又は治療剤投与の約１０日〜１５日前、又は治療剤投与の約１５日〜２０日前、又は治療剤投与の約２０日〜３０日前、又は治療剤投与の約３０日〜４０日前、又は治療剤投与の約４０日〜５０日前、又は治療剤投与の約５０日〜６０日前にＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を投与する。

一部の実施態様では、治療剤の投与と同時に抗ＣＳ１抗体を投与する。

一部の実施態様では、治療剤の投与後に抗ＣＳ１抗体を投与する。例えば、治療剤投与の約０〜６０日前にＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を投与することができる。一部の実施態様では、治療剤投与の約３０分〜約１時間後、又は治療剤投与の約１時間〜約２時間後、又は治療剤投与の約２時間〜約４時間後、又は治療剤投与の約４時間〜約６時間後、又は治療剤投与の約６時間〜約８時間後、又は治療剤投与の約８時間〜約１６時間後、又は治療剤投与の約１６時間〜１日後、又は治療剤投与の約１日〜５日後、又は治療剤投与の約５日〜１０日後、又は治療剤投与の約１０日〜１５日後、又は治療剤投与の約１５日〜２０日後、又は治療剤投与の約２０日〜３０日後、又は治療剤投与の約３０日〜４０日後、又は治療剤投与の約４０日〜５０日後、又は治療剤投与の約５０日〜６０日後にＨｕＬｕｃ６３を投与する。

こうした治療剤は、臨床医が適切と判断する任意の方法で投与することができ、通常、ＰｈｙｓｉｃｉａｎＤｅｓｋＲｅｆｅｒｅｎｃｅ、第５６版（２００２年）（メディカルエコノミックス出版社（ＰｕｂｌｉｓｈｅｒＭｅｄｉｃａｌＥｃｏｎｏｍｉｃｓ）、ニュージャージー州）に記載されているもののような一般に認められている有効用量範囲で提供される。他の実施態様では、標準的な用量漸増を行うことによって最大許容投与量（ＭＴＤ）を見出すことができる（例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎｅｔａｌ．、２００２年、Ｂｌｏｏｄ、１００（９）：ｐ．３０６３−３０６７参照。これの内容は引用により本明細書に組み込まれている。）。

一部の実施態様では、治療剤をその一般に認められている有効用量よりも低い用量で用いることができる。例えば、各種実施態様において、前記組成物は、一般に認められている有効用量範囲の約１０％〜７５％未満の投与量を含む。一部の実施態様では、この一般に認められている有効用量範囲の少なくとも約１０％以下、少なくとも約１５％以下、少なくとも約２５％以下、少なくとも約３０％以下、少なくとも約４０％以下、少なくとも約５０％以下、少なくとも約６０％以下、少なくとも約７５％以下又は少なくとも約９０％を用いる。

上記治療剤は、下記のようにして、単独で若しくは順次、又は他の治療剤とのカクテルとして投与することができる。この治療剤は経口で、静脈内で、筋肉内注射により全身で、皮下に、髄腔内もしくは腹腔内注射により投与することができる。

本明細書に記載の組成物に用いることができる治療剤の例としては、デキサメタゾン、サリドマイド、メルファラン、プレドニゾン、ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣＬリポソーム注射剤、ボルテゾミブ、レナリドマイド及び／又はこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

従って、一部の実施態様では、以下の２種の医薬組成物を提供する：治療上有効な量のＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物及び治療上有効な量のレナリドマイドを含む第二の組成物。

一部の実施態様では、以下の２種の医薬組成物を提供する：治療上有効な量のＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物及び治療上有効な量のボルテゾミブを含む第二の組成物。

一部の実施態様では、以下の少なくとも２種の医薬組成物を提供する：治療上有効な量のＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物並びに治療上有効な量のレナリドマイド及び治療上有効な量のボルテゾミブを含む第二の組成物。一部の実施態様では、レナリドマイド及びボルテゾミブを別々に提供することによって以下の計３種の医薬組成物を提供する：ＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物、レナリドマイドを含む第二の組成物及びボルテゾミブを含む第三の組成物。

一部の実施態様では、以下の少なくとも２種の医薬組成物を提供する：治療上有効な量のＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物及び治療上有効な量のレナリドマイド及びデキサメタゾンを含む第二の組成物。一部の実施態様では、レナリドマイド及びデキサメタゾンを別々に提供することによって以下の計３種の医薬組成物を提供する：ＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物、レナリドマイドを含む第二の組成物及びデキサメタゾンを含む第三の組成物。

一部の実施態様では、以下の少なくとも２種の医薬組成物を提供する：治療上有効な量のＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物及び治療上有効な量のボルテゾミブ及びデキサメタゾンを含む第二の組成物。一部の実施態様では、ボルテゾミブ及びデキサメタゾンを別々に提供することによって以下の計３種の医薬組成物を提供する：ＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物、ボルテゾミブを含む第二の組成物及びデキサメタゾンを含む第三の組成物。

一部の実施態様では、以下の少なくとも２種の医薬組成物を提供する：治療上有効な量のＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物及び治療上有効な量のレナリドマイド、ボルテゾミブ及びデキサメタゾンを含む第二の組成物。一部の実施態様では、レナリドマイド、ボルテゾミブ及びデキサメタゾンを別々に提供する。これらの薬剤が有効性を保持する限り、ある程度投与量、投与経路、及び薬剤が固形、半固形又は液状のいずれで提供されるかに応じて、他の組合せを含む組成物を調製することができる。例えば、以下の計３種の組成物を作製することができる：治療上有効な量のＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物、デキサメタゾンを含む第二の組成物並びにレナリドマイド及びボルテゾミブを含む第三の組成物。

一部の実施態様では、以下の少なくとも２種の医薬組成物を提供する：治療上有効な量のＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体を含む第一の組成物並びに治療上有効な量のボルテゾミブを含み、必要に応じて以下の薬剤：サリドマイド、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤及び／又はプレドニゾンのうちの１種以上を含み得る第二の組成物。これらの薬剤が有効性を保持する限り、ある程度投与量、投与経路、及び薬剤が固形、半固形又は液状のいずれで提供されるかに応じて、サリドマイド、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤及びプレドニゾンの各種組合せを含む組成物を調製することができる。

これらの医薬組成物は固形、半固形又は液（例えば、懸濁液もしくはエアロゾル）状の剤型として存在させることができる。通常、この組成物は正確な投与量の単回投与に適した単位投与形態で投与する。例えば、抗ＣＳ１抗体は約１〜１，０００ｍｇの範囲の投与量で包装することができる。一部の実施態様では、抗ＣＳ１抗体は、少なくとも約１ｍｇ、少なくとも約１０ｍｇ、少なくとも約２０ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約１００ｍｇ、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、少なくとも約５００ｍｇ、少なくとも約７５０ｍｇ、少なくとも約１，０００ｍｇの投与量で包装することができる。

また、上記組成物には、動物又はヒトへの投与用医薬組成物を製剤化するのに一般に用いられる賦形剤と定義される医薬用として許容可能な、毒性のないキャリア又は希釈剤を、目的とする製剤に応じて含有させることもできる。この希釈剤は、上記組合せの生物活性に影響を与えないように選択され。このような希釈剤の例は蒸留水、生理食塩液、リンゲル液、デキストロース溶液及びハンクス液である。

さらに、上記医薬組成物又は製剤には、他のキャリア、佐剤又は毒性がなく非治療用で非免疫原性の安定剤などを含有させることもできる。このような希釈剤又はキャリアの効果的な量は、成分の溶解性又は生物活性の面で医薬用として許容可能な製剤を得るのに効果的である量である。

５．３．方法
本明細書に記載の医薬組成物はＭＭの処置において有用である。通常、この組成物は、新たに診断されたものから末期再発／難治性のものまでの範囲の意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型骨髄腫、無症候性ＭＭ及び症候性ＭＭを処置するために用いることができる。

上記組成物は、他の処置ストラテジー、即ち、自家幹細胞移植および同種異系エフェクター細胞移植と組み合わせることによって、処置される骨髄腫の病期に基づいた効果的な処置ストラテジーを開発することができる（例えば、多発性骨髄腫研究財団（ＭｕｌｔｉｐｌｅＭｙｅｌｏｍａＲｅｓｅａｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ）、ＭｕｌｔｉｐｌｅＭｙｅｌｏｍａ：ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、ｐ．１−３０（２００４年））；米国特許第６，１４３，２９２号；同第５，９２８，６３９号；Ｉｇａｒａｓｈｉ，ｅｔａｌ．、Ｂｌｏｏｄ、２００４年、１０４（１）：ｐ．１７０−１７７；Ｍａｌｏｎｅｙ，ｅｔａｌ．、２００３年、Ｂｌｏｏｄ１０２（９）：ｐ．３４４７−３４５４；Ｂａｄｒｏｓ，ｅｔａｌ．、２００２年、ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ．２０：１２９５−１３０３；Ｔｒｉｃｏｔ，ｅｔａｌ．、１９９６年、Ｂｌｏｏｄ８７（３）：ｐ．１１９６−１１９８参照；これらの文献の内容は引用により本明細書に組み込まれている）。

１９７５年以来最も広く用いられてきた病期分類システムはデューリー・サーモン（Ｄｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎ）システムであり、このシステムでは疾患の臨床病期（病期Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ）は４種の測定値に基づいている（例えば、ＤｕｒｉｅおよびＳａｌｍｏｎ、１９７５年、Ｃａｎｃｅｒ３６：ｐ．８４２−８５４参照）。これら４種の測定値とは、（１）血清及び／又は尿中の単一クローン性（Ｍ）蛋白質（パラプロテインとも呼ばれる）のレベル、（２）溶解性骨病変の数、（３）ヘモグロビン値並びに（４）血清カルシウムレベルである。これらの３病期は、さらに腎機能によって類別されることができ、Ａ（比較的正常な腎機能、血清クレアチニン値＜２．０ｍｇ／ｄＬ）とＢ（異常な腎機能、クレアチニン値≧２．０ｍｇ／ｄＬ）とに分類される。新しい、より簡単な別のシステムは、国際病期分類システム（ＩＳＳ：ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｔａｇｉｎｇＳｙｓｔｅｍ）である（例えば、Ｇｒｅｉｐｐｅｔａｌ．、２００３年、”Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｉｎｄｅｘ（ＩＰＩ）ｆｏｒｍｙｅｌｏｍａ：ｒｅｐｏｒｔｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｍｙｅｌｏｍａｗｏｒｋｉｎｇｇｒｏｕｐ”，ＴｈｅＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ参照）。上記ＩＳＳは２種の血液検査結果ベータ_２−ミクログロブリン（β_２−Ｍ）及びアルブミンの評価に基づいたものであり、この評価により患者は療法の種類とは無関係に３つの予後群に分類される。

上記医薬組成物を選択された投与量範囲及び経路で投与すると、通常、欧州血液骨髄移植グループ（ＥＢＭＴ）によって定義されているような有益な寛解が誘導される。表２にＥＢＭＴの治療効果判定基準を列挙する。

処置の結果を評価するのに用いることができる追加的な判定基準としては、「ほぼ完全寛解（ｎｅａｒｃｏｍｐｌｅｔｅｒｅｓｐｏｎｓｅ）」及び「非常に良い部分寛解（ｖｅｒｙｇｏｏｄｐａｒｔｉａｌｒｅｓｐｏｎｓｅ）」が挙げられる。「ほぼ完全寛解」は、免疫固定テストが陽性である以外は「完全寛解（ＣＲ）」の判定基準と同じと定義される。「非常に良い部分寛解」は、Ｍ蛋白質の９０％超の低下と定義される（例えば、多発性骨髄腫研究財団（ＭｕｌｔｉｐｌｅＭｙｅｌｏｍａＲｅｓｅａｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ）、ＭｕｌｔｉｐｌｅＭｙｅｌｏｍａ：ＴｒｅａｔｍｅｎｔＯｖｅｒｖｉｅｗ９（２００５年）参照）。

ＭＭに関連する少なくとも１種の症状を臨床的に発呈している個体において組成物の投与が寛解を誘発する程度は、疾患の重症度（例えば、病期Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ）にある程度依存しており、そしてその患者が新規に診断された者か末期難治性ＭＭを有する者かどうかにある程度依存している。従って、一部の実施態様では、上記医薬組成物の投与によって完全寛解が誘発される。

他の実施態様では、上記医薬組成物の投与によって非常に良い部分寛解又は部分寛解が誘発される。

他の実施態様では、上記医薬組成物の投与によって最小寛解が誘発される。

他の実施態様では、上記医薬組成物の投与によって疾患の進行が阻止され、ＥＢＭＴによって「無変化」又は「プラトー」と分類される効果が得られる。

ＭＭと診断された個体を治療するための抗ＣＳ１抗体及び１種以上の治療剤を含む組成物の投与経路及び投与量範囲については、ＭＴＤを見出すための標準的な用量漸増試験などの当該分野で標準的な技術を用いて決定することができる（例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，ｅｔａｌ．２００２年、Ｂｌｏｏｄ、１００（９）：ｐ．３０６３−３０６７参照。この内容は引用により本明細書に組み込まれている）。

通常、抗ＣＳ１抗体は静脈内投与される。本明細書に記載の他の治療剤の投与は当該分野で公知の任意の手段によって行われ得る。このような手段としては、経口、直腸、経鼻、局所（口腔内及び舌下を含む）又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内）の投与が挙げられ、こうした手段は、利用できる剤形によってある程度依存する。例えば、丸剤又はカプセル剤形式で利用できる治療剤は通常、経口投与される。しかしながら、経口投与では、一般に静脈内投与の場合よりも高用量を投与することが必要となる。具体的症例で最良である実際の投与経路の決定は当業者の能力の範囲内に十分あり、ある程度、１ヶ月当たりの必要投与回数と必要用量との関係に依存する。

本明細書に記載の組成物及び方法に用いる抗ＣＳ１抗体及び治療剤の投与量の選択に影響する因子としては、薬剤の種類、レシピエント患者の年齢、体重及び臨床症状並びに治療を施す臨床医又は実施者の経験及び判断が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一般に、選択される投与量は無変化をもたらすのに十分であるべきであるが、少なくとも最小変化をもたらすことが好ましい。医薬品の有効量とは、臨床医又は有資格の観察者により確認され、ＥＢＭＴによって定義されている、客観的に確認可能な寛解（例えば、最小寛解、部分寛解又は完全寛解）を与える量である。

一般的には、ＨｕＬｕｃ６３などの抗ＣＳ１抗体は、治療剤を含む組成物とは別の組成物として投与される。上述のように、治療剤同士はそれぞれ別の組成物として投与するか、カクテルに混合して単一の混合組成物として投与することができる。一部の実施態様では、抗ＣＳ１抗体及び１種以上の治療剤をそれぞれ含む組成物を同時に投与する。他の実施態様では、治療剤を含む組成物の投与の前に抗ＣＳ１抗体を投与することができる。さらに他の実施態様では、治療剤を含む組成物の投与の後に抗ＣＳ１抗体を投与する。

抗ＣＳ１抗体を治療剤の投与前又は後に投与する実施態様では、抗ＣＳ１抗体の投与と治療剤の投与との間の持続期間についての決定は当業者の能力の範囲内に十分あり、ある程度、１ヶ月当たりの必要投与回数と必要用量との関係に依存する。

本明細書に記載の方法に用いる抗ＣＳ１抗体の用量は、通常０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲である。上記治療剤の至適用量は、ＰｈｙｓｉｃｉａｎＤｅｓｋＲｅｆｅｒｅｎｃｅ、第５６版（２００２年）（メディカルエコノミックス出版社（ＰｕｂｌｉｓｈｅｒＭｅｄｉｃａｌＥｃｏｎｏｍｉｃｓ）、ニュージャージー州）に記載されているもののような一般に認められている有効用量である。ＰｈｙｓｉｃｉａｎＤｅｓｋＲｅｆｅｒｅｎｃｅに記載されていない薬剤の至適用量についてはＭＴＤを見出すための標準的な用量漸増試験を利用して決定することができる（例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎｅｔａｌ．、２００２年、Ｂｌｏｏｄ、１００（９）：ｐ．３０６３−３０６７参照。これらの内容は引用により本明細書に組み込まれている）。

一部の実施態様では、医薬組成物中に抗ＣＳ１抗体を、少なくとも約０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．７５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１９ｍｇ／ｋｇ及び少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇの投与量割合で静脈内投与するのに適した濃度又は重量／容量百分率又は重量で存在させる。

６．実施例
実施例１：レナリドマイドと組合せたＨｕＬｕｃ６３
レナリドマイドはＩＭｉＤｓ（登録商標）と呼ばれる新しい種類の経口制癌剤の最初のものである。これらの免疫調節性誘導体は化学的にはサリドマイドに類似しているが、サリドマイドよりも効力が強く、副作用プロフィールも異なっている。これらは癌細胞及びその微環境に影響を及ぼす多様な作用メカニズムを有する。レナリドマイドは、免疫応答を誘導し、免疫細胞の活性を増強し、炎症を抑制することが示されている。例えば、レナリドマイドはＴ細胞及びＮＫ細胞の活性化を増強し得、インターロイキン２の産生を誘導し得、そして腫瘍壊死因子−α及びインターロイキン１−βなどの炎症促進性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）サイトカインを抑制し得る。現在、デキサメタゾンと組合せたレナリドマイドが多発性骨髄腫の第二選択治療として認可されている。

インビトロＡＤＣＣアッセイ：方法及び結果
ＡＤＣＣは、以前に報告されたとおり、従来のＣｒ^５１アッセイと同様の感度で、カルセイン−ＡＭ放出アッセイによって測定された。インフォームドコンセントを得た後、正常ドナーの白血球除去産物又はＭＭ患者の末梢血から、ナチュラル−キラー（ＮＫ：ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒ）エフェクター細胞を含む末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌ）を単離した。漸増濃度（０〜１０μｇ／ｍｌ）のＨｕＬｕｃ６３又はヒトアイソタイプ対照ＩｇＧ_１ＭＳＬ１０９ｍＡｂを２０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で添加し、最終容量を１ウェル当たり２００μｌとした。一部の実施態様では、ＰＢＭＣエフェクター細胞を０．２μＭのレナリドマイドで３日間前処理した後に、ＨｕＬｕｃ６３媒介ＡＤＣＣアッセイを行った。４時間インキュベーションした後、培養上清１００μｌをブラックビュープレート（ＢｌａｃｋＶｉｅｗＰｌａｔｅ）（商標）−９６プレートに移し、任意の蛍光単位（ＡＦＵ）を蛍光光度計（ワラックビクター２（ＷａｌｌａｃＶＩＣＴＯＲ２））で読み取った。このアッセイは、（ＡＦＵ平均最大放出−培地対照放出（ｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔｒｏｌｒｅｌｅａｓｅ））／（ＡＦＵ平均自然放出−培地対照放出）＞７の場合にのみ有効である。３回の実験からの比溶解％の計算は次式を用いて行った：
比溶解％＝１００×（ＡＦＵ平均実験放出−ＡＦＵ平均自然放出^１）／（ＡＦＵ平均最大放出^２−ＡＦＵ平均自然放出）
^１Ａｂ又はＮＫ細胞非存在下の標的細胞によるカルセイン−ＡＭ放出
^２界面活性剤による溶解時の標的細胞によるカルセイン−ＡＭ放出
ＡＤＣＣアッセイを用いて、同一患者からのエフェクター細胞による患者ＭＭ細胞のＨｕＬｕｃ６３媒介溶解を測定した。ＨｕＬｕｃ６３は、患者の試料において患者の自己骨髄腫細胞の顕著な溶解を誘発したが、アイソＩｇＧ_１は誘発しなかった（図１Ａ〜１Ｃ）。ボルテゾミブ及び／又は（熱ショック蛋白質９０を標的とする）１７−ＡＡＧを含む新規な抗ＭＭ療法に対して抵抗性又は不応性のＭＭを有する患者においてもＨｕＬｕｃ６３媒介自己腫瘍細胞溶解が実証された（図２Ａ及び２Ｂ）。これらのデータは、ＨｕＬｕｃ６３が新たに診断された患者或いは標準的治療薬及び／又は新規薬剤に抵抗性の患者からの骨髄腫細胞を標的にすることができることを示唆している。

ＡＤＣＣアッセイを用いて、患者骨髄腫細胞の同一患者からのＰＢＭＣエフェクター細胞によるＨｕＬｕｃ６３媒介溶解を測定した。ＭＭ患者からのＣＤ１３８精製腫瘍細胞を、ＨｕＬｕｃ６３（黒塗りの記号）又はアイソタイプ対照ＩｇＧ_１（白抜きの記号）の系列希釈物の存在下に自己エフェクター細胞とインキュベートした。ＰＢＭＣエフェクター細胞をレナリドマイド（０．２ｍＭ）（四角記号）又はビヒクル対照（丸記号）の存在又は非存在下に３日間プレインキュベートした後、ＨｕＬｕｃ６３媒介ＡＤＣＣを実施した。ＨｕＬｕｃ６３媒介ＡＤＣＣは患者の試料において自己骨髄腫細胞の顕著な溶解を誘発したが、アイソＩｇＧ_１は誘発しなかった。ＰＢＭＣエフェクター細胞をレナリドマイドと共にプレインキュベートすることによってＡＤＣＣ活性が著しく増大した（図３Ｃ）。同様に、エフェクター細胞をレナリドマイドで前処理することによって骨髄腫細胞株のＨｕＬｕｃ６３誘導性溶解が増強された（図３Ａ及び３Ｂ）。これらの結果から、ＭＭにおいてレナリドマイドをＨｕＬｕｃ６３と組み合わせる処置ストラテジーの枠組みが得られる。

実施例２：ボルテゾミブと組合せたＨｕＬｕｃ６３
ボルテゾミブは強力で特異的な可逆性プロテアソーム阻害剤である。プロテアソームは全ての細胞内に存在し、細胞増殖の調節を促進する働きをしている。プロテアソームを阻害すると、癌細胞のアポトーシスが生じる。ボルテゾミブは骨髄腫細胞を特に効果的に殺傷することが示されており、現在、多発性骨髄腫における第二及び第三選択療法として認可されている。最近のデータから、骨髄腫細胞をボルテゾミブ処理することにより、ＮＫ機能の阻害剤であるＭＨＣクラスＩの細胞表面発現の抑制的調節がもたらされることが分かった（Ｓｈｉｅｔａｌ．、Ｂｌｏｏｄ（ＡＳＨＡｎｎｕａｌＭｅｅｔｉｎｇＡｂｓｔｒａｃｔｓ）、２００６年１１月、１０８：ｐ．３４９８）。この仮説は、骨髄腫細胞をボルテゾミブ処理するとこの細胞がＮＫ媒介性殺傷をうけやすくなり、このため、ＨｕＬｕｃ６３媒介ＡＤＣＣが増強されるということである。この実験の目的はボルテゾミブと組合せたＨｕＬｕｃ６３を用いることにより治療利益が得られるかどうかを検討することであった。

ＭＭ細胞株及びマウス異種移植腫瘍においてＣＳ１の発現に対するＨｕＬｕｃ６３及びボルテゾミブでの処理の効果をそれぞれフローサイトメトリー及び免疫組織化学によって検討した。

インビトロＡＤＣＣアッセイ：方法及び結果
ＯＰＭ２骨髄腫細胞を対数期の中間部で採取し、完全培地（１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ）に１．０×１０^６個／ｍＬの濃度で懸濁し、一夜ベルケイド（Ｖｅｌｃａｄｅ）（１０ｎＭ）で処理するか、無処理とした。次いで、細胞を採集し、洗浄し、生細胞として２０×１０６個／ｍＬの濃度で再懸濁し、細胞１０^６個当たり５０ｍＣｉのＮａ_２［^５１Ｃｒ］Ｏ_４で１時間標識した。^５１Ｃｒ標識細胞を洗浄した後、１０％熱不活性化ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ７５μＬ当たり１５，０００個の細胞濃度で９６穴Ｖ底ポリスチレンプレートに添加した。標的細胞に、０．００１〜１０μｇ／ｍＬの範囲の最終抗体濃度でＨｕＬｕｃ６３及びヒトＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体ＭＳＬ−１０９を添加した。ロゼットセップ（ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ）ヒトＮＫ細胞濃縮カクテル（ステム・セル・テクノロジーズ社（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））を用いて健常ドナーの全血からＮＫ細胞を濃縮した。この濃縮ＮＫ細胞をベルケイド処理又は未処理のＯＰＭ２細胞に１０：１の比率で添加した。３７℃で４時間インキュベーションした後、細胞を遠心し、上清の遊離^５１Ｃｒを測定した。１００ｍｇ／ｍｌのジギトニンで溶解させた標的細胞からの最大放出量を求めた。標的細胞プラス培地プラスＮＫ細胞を用いて抗体非依存性細胞障害活性（ＡＩＣＣ）を測定し、一方、ＮＫエフェクターを含まない^５１Ｃｒ標識細胞プラス培地を用いて自然溶解を測定した。

細胞障害性％を、（（試料−ＡＩＣＣ）／（最大値−ＡＩＣＣ）＊１００として計算した。

ＨｕＬｕｃ６３又はボルテゾミブ又はこれら両薬剤での前処理又は後処理でＣＳ１質の発現に著しい変化が認められないＯＰＭ２多発性骨髄腫細胞株を用いてＣＳ１蛋白質の発現を調べた。次に、ＨｕＬｕｃ６３とボルテゾミブとの組合せについてＡＤＣＣアッセイによりインビトロで抗骨髄腫活性を調べた。これらの結果から、ボルテゾミブで前処理を行うと、健常ドナーからのＮＫエフェクター細胞を用いるＯＰＭ２細胞に対するＨｕＬｕｃ６３媒介ＡＤＣＣは著しく増強されることが示された。ＯＰＭ２細胞をビヒクル対照（四角記号）又はボルテゾミブ（１０ｎＭ、丸記号）で１８時間前処理し、健常ドナーからのヒトＮＫ細胞を用いるＨｕＬｕｃ６３媒介ＡＤＣＣに供した。ＨｕＬｕｃ６３（黒塗りの記号）及びアイソタイプ対照抗体（白抜きの記号）を０．００１〜１０μｇ／ｍｌの範囲の用量で用いた。これらの結果によって、ボルテゾミブ前処理によってインビトロでのＨｕＬｕｃ６３媒介ＡＤＣＣのＥＣ_５０は著しく減少したことが示される（図４Ａ〜４Ｄ、表３）。

インビボ異種移植マウスモデル：方法及び結果
タコニックファームズ社（ＴａｃｏｎｉｃＦａｒｍｓ）（ジャーマンタウン、ニューヨーク州）から入手した６〜８週齢の雌性ＩｃｒＴａｃ：ＩＣＲ−Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄマウスの左下側腹部に１×１０^７個のＯＰＭ２（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ））細胞を接種した。キャリパーでの測定を週に２回行って式：Ｌ×Ｗ×Ｈ／２（式中、Ｌ（長さ）はマウスの背中の平面における腫瘍の最長辺であり、Ｗ（幅）は上記長さに対して直角をなす同じ面の最長測定値であり、Ｈ（高さ）はマウスの背面に垂直な最高点で測定される）を用いて腫瘍容積を算出した。腫瘍が平均約１００ｍｍ^３の大きさに達した時、動物を無作為に１群８〜１０匹のマウスの３群に分け、１ｍｇ／ｋｇの抗体の週２回の計６用量の腹腔内投与により処置した。ボルテゾミブを、週２回０．７５ｍｇ／ｋｇの用量を計６用量腹腔内投与した。腫瘍増殖を１〜２ヶ月の期間にわたってモニタリングした。動物実験をＰＤＬバイオファーマ社（ＰＤＬＢｉｏＰｈａｒｍａ）のＩＡＣＵＣにより承認されたプロトコルを用いてＮＩＨの指針（「ＧｕｉｄｅｆｏｒｔｈｅＣａｒｅａｎｄＵｓｅｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌｓ」）のもとで行った。

インビボにおけるＨｕＬｕｃ６３とボルテゾミブとの組合せ療法の効果を調べるために、ＯＰＭ２腫瘍を有するマウスを、最適以下の用量のＨｕＬｕｃ６３（１ｍｇ／ｋｇ）又はアイソタイプ対照抗体で週２回３週間にわたって処置した。ボルテゾミブを、アイソタイプ対照抗体又はＨｕＬｕｃ６３のいずれかを投与したマウスに対して０．７５ｍｇ／ｋｇを週２回投与した。これらの結果から、ＨｕＬｕｃ６３単独及びそのボルテゾミブと組合せたＨｕＬｕｃ６３の抗腫瘍効果は顕著であることが示された（図５Ａ）。組合せ処置群のマウスは、ＨｕＬｕｃ６３単独療法群よりも平均４０〜５０％小さい腫瘍を、そしてボルテゾミブ群よりも平均６０〜７０％小さい腫瘍を示した。

第二の実験において、ボルテゾミブについては異なる用量及び投与スケジュールを用いたのに対してＨｕＬｕｃ６３については元の用量及び投与スケジュールを維持しながら、インビボでＨｕＬｕｃ６３をボルテゾミブと組合せた。ＯＰＭ２細胞はＳＣＩＤマウスの腹側部に接種した。腫瘍が平均約１００ｍｍ^３の大きさに達した時、動物を無作為に１群１５匹のマウスの４群に分け、１ｍｇ／ｋｇの抗体の週２回の計１０用量腹腔内投与により処置した。ボルテゾミブを、１週目及び２週目について１ｍｇ／ｋｇの用量で週２回、３週目は処置せず、４週目及び５週目について１ｍｇ／ｋｇで週２回の計８用量で腹腔内投与した。この投与スケジュールの目的は、各処置サイクルが２週間の投与と１週間の休薬で構成される臨床におけるボルテゾミブの投与スケジュールをより正確に再現することにあった。腫瘍増殖を１〜２ヶ月の期間にわたってモニタリングした。

これらの結果から、ＨｕＬｕｃ６３単独、ボルテゾミブ単独及びＨｕＬｕｃ６３のボルテゾミブとの組合せの抗腫瘍活性は顕著であることが示された（図５）。組合せ処置群のマウスは、いずれかの薬剤単独で処置したマウスよりも有意に小さな腫瘍を示した。これらのデータから、ボルテゾミブは抗骨髄腫腫瘍活性においてＨｕＬｕｃ６３と相乗作用を示すことが示される。

実施例３：初回及び２回目再発後の多発性骨髄腫患者におけるＨｕＬｕｃ６３及びボルテゾミブの第１ｂ相非盲検用量漸増試験
この提唱される第１ｂ相多施設非盲検複数回投与用量漸増試験は、初回及び２回目再発後の多発性骨髄腫患者におけるＨｕＬｕｃ６３及びボルテゾミブの組合せを評価する。ＨｕＬｕｃ６３を、１．０ｍｇ／ｍ^２の一定用量のボルテゾミブ静脈内注射（ＩＶ）との組合せで２．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の最大５用量レベルでＩＶ投与する。患者は１０日毎にＨｕＬｕｃ６３の投与を受け、ボルテゾミブは２１日間のサイクル（２週間にわたって週２回（１、４、８、１１日目）、その後は１０日間の休薬期間（１２〜２１日目））で投与される。

９週間の治療（６用量のＨｕＬｕｃ６３、３サイクルのボルテゾミブ）後、ＥＢＭＴ判定基準を評価する。患者が進行性の疾患を有している場合には、ＨｕＬｕｃ６３を中止するとともに、ボルテゾミブ投与は中止するか、現場の治験責任医師の裁量で継続することができる。患者が９週目で寛解を示すかまたは安定な疾患を示す場合には、計２４週間の処置（１６用量のＨｕＬｕｃ６３、８サイクルのボルテゾミブ）が完了するかまたは疾患の進行が生じるようにＨｕＬｕｃ６３及びボルテゾミブの投与を継続する。ＨｕＬｕｃ６３及びボルテゾミブの投与は、９週目の来診のデータが入手できるまでは継続する。

患者にＨｕＬｕｃ６３を１０日毎に１回ＩＶ投与し、各用量は１時間かけて注入する。ボルテゾミブを８回の３週間サイクルでＩＶＰとして投与し、各サイクルは１、４、８及び１１日目にボルテゾミブ投与、その後は１０日間の休薬期間（１１〜２１日目）で構成される。投薬コホートは以下の通りである：２．５ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１．３ｍｇ／ｍ^２ボルテゾミブ、５ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１．３ｍｇ／ｍ^２ボルテゾミブ、１０ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１．３ｍｇ／ｍ^２ボルテゾミブ、１５ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１．３ｍｇ／ｍ^２ボルテゾミブ及び２０ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１．３ｍｇ／ｍ^２ボルテゾミブ。

ＨｕＬｕｃ６３はバイアル入りの静脈内用製剤として１０ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。ボルテゾミブは、ベルケイド（登録商標）の添付文書の通り、注射用塩化ナトリウム液である生理（０．９％）食塩水３．５ｍＬで１ｍｇ／ｍＬのボルテゾミブ３．５ｍＬに再構成されることになる、１０ｍＬバイアル入り３．５ｍｇ凍結乾燥ケーク又は粉末として提供される。

この試験には５コホートで約１５〜３０名の患者を登録する。各コホートは３名の患者で開始する。処置の最初の６週間以内にどの患者にも用量制限毒性（ＤＬＴ：ｄｏｓｅ−ｌｉｍｉｔｉｎｇｔｏｘｉｃｉｔｙ）が認められない場合、次のより高用量のコホートへの登録を開始する。１名の患者がＤＬＴを有した場合、さらに３名の患者をこのコホートに登録する。このコホートで他にＤＬＴを有する患者がいない場合、次のコホートへの用量漸増を進め得る。コホートの二人目の患者がＤＬＴを示した場合に、最大許容投与量（ＭＴＤ）に到達する。

用量制限毒性（ＤＬＴ）は、国立癌センター研究所共通毒性基準第３．０版（ＮＣＩＣＴＣＡＥｖ３．０：ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒＣｅｎｔｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅＣｏｍｍｏｎＴｏｘｉｃｉｔｙＣｒｉｔｅｒｉａＶｅｒｓｉｏｎ３．０）を用い、グレード４血液毒性もしくは高ビリルビン血症、又はＨｕＬｕｃ６３もしくはＨｕＬｕｃ６３とボルテゾミブとの組合せに関連づけられると考えられる任意の他の器官系におけるグレード３毒性と定義される。次のコホートへの用量漸増では、３名の評価可能な患者が最初の６週間（４用量のＨｕＬｕｃ６３、２サイクルのボルテゾミブ）を完了しなければならない。ＤＬＴが生じた場合には、さらに３名の評価可能な患者を獲得する。ＮＣＩＣＴＣＡＥｖ３．０により分類されている有害事象を評価することにより安全性について患者をモニタリングし、ＥＢＭＴを用いて臨床活性について患者をモニタリングする。最大許容投与量（ＭＴＤ）は、ＤＬＴの発生率が３３％以下である試験最高用量と定義される。用量制限毒性が認められない場合は、最高許容投与量がＨｕＬｕｃ６３２０ｍｇ／ｋｇ＋ボルテゾミブ１．０ｍｇ／ｍ^２である。

実施例４：ＨｕＬｕｃ６３及びレナリドマイドの第１ｂ相多施設非盲検用量漸増試験
この提唱される第１ｂ相多施設非盲検複数回投与用量漸増試験は、初回及び２回目再発後の多発性骨髄腫患者におけるＨｕＬｕｃ６３及びレナリドマイドの組合せを評価する。ＨｕＬｕｃ６３は、１５ｍｇの一定用量のレナリドマイド経口投与との組合せで２．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の最大５用量レベルで静脈内注射（ＩＶ）によって与えられる。患者は７日毎にＨｕＬｕｃ６３の投与を受け、レナリドマイドは２８日間サイクル（２１日間は１日１回、その後は７日間の休薬期間（２２〜２８日目））で与えられる。

８週間の治療（８用量のＨｕＬｕｃ６３、２サイクルのレナリドマイド）後、ＥＢＭＴ判定基準を評価する。このレジメンに４週間サイクルの１、８、１５及び２２日目に１日当たり４０ｍｇの経口用量のデキサメタゾンを加える。１２週目（１２用量のＨｕＬｕｃ６３、３サイクルのレナリドマイド、１サイクルのデキサメタゾン）に病態進行の証拠がみられた場合には、ＨｕＬｕｃ６３投与を中止し、調査者の裁量で１６週目までレナリドマイド及びデキサメタゾンを継続する。患者が安定した疾患を有するか又はより改善された場合には、これらをＨｕＬｕｃ６３とともに１６週目（計１５用量）又は病態進行が認められるまで継続する。ＥＭＢＴ判定基準は１６週目で評価される。

患者にＨｕＬｕｃ６３を１０日毎に１回静脈内で与え、各用量は１時間かけて注入する。レナリドマイドを３週間にわたって毎日経口投与した後、１週間の休薬期間を設ける。投薬コホートは以下の通りである：２．５ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１５ｍｇレナリドマイド、５ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１５ｍｇレナリドマイド、１０ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１５ｍｇレナリドマイド、１５ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１５ｍｇレナリドマイド及び２０ｍｇ／ｋｇＨｕＬｕｃ６３／１５ｍｇレナリドマイド。８週目の後、上記のレジメンに４週間サイクルの１、８、１５及び２２日目に１日当たり４０ｍｇの経口用量のデキサメタゾンを加える。

ＨｕＬｕｃ６３はバイアル入りの静脈内用製剤として１０ｍｇ／ｍＬの濃度で提供される。レナリドマイドは経口投与用の５ｍｇカプセル剤及び１０ｍｇカプセル剤として供給される。

この試験には５コホートで約１５〜３０名の患者を登録する。各コホートは３名の患者で開始する。処置の最初の４週間以内にどの患者にも用量制限毒性（ＤＬＴ）が認められない場合、次のより高用量のコホートへの登録を開始する。１名の患者がＤＬＴを示した場合、さらに３名の患者をこのコホートに追加登録する。このコホートで他にＤＬＴを示す患者がいない場合、次のコホートへの用量漸増を進め得る。コホートの二人目の患者がＤＬＴを示した場合に、最大許容投与量（ＭＴＤ）に到達する。

用量制限毒性（ＤＬＴ）は、国立癌センター研究所共通毒性基準第３．０版（ＮＣＩＣＴＣＡＥｖ３．０：ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒＣｅｎｔｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅＣｏｍｍｏｎＴｏｘｉｃｉｔｙＣｒｉｔｅｒｉａＶｅｒｓｉｏｎ３．０）を用い、グレード４血液毒性もしくは高ビリルビン血症、又はＨｕＬｕｃ６３もしくはＨｕＬｕｃ６３とレナリドマイドとの組合せに関連づけられると考えられる任意の他の器官系におけるグレード３毒性と定義される。次のコホートへの用量漸増のためには、３名の評価可能な患者が最初の４週（４用量のＨｕＬｕｃ６３、１サイクルのレナリドマイド）を完了しなければならない。ＤＬＴが生じた場合には、さらに３名の評価可能な患者を獲得する。ＮＣＩＣＴＣＡＥｖ３．０により分類されている有害事象を評価することにより安全性について患者をモニタリングし、ＥＢＭＴを用いて臨床活性について患者をモニタリングする。最大許容用量（ＭＴＤ）は、ＤＬＴの発生率が３３％以下である試験最高用量と定義される。用量制限毒性が認められない場合は、最高許容用量がＨｕＬｕｃ６３２０ｍｇ／ｋｇ＋レナリドマイド１５ｍｇとなる。

本明細書中で引用した全ての刊行物、特許、特許出願及びその他の文献は、個々の刊行物、特許、特許出願もしくはその他の文献がそれぞれ、あらゆる目的で引用により本明細書に組み込まれていることが個別に示されている場合と同程度に、あらゆる目的で全文引用により本明細書に組み込まれている。

種々の特定の実施態様について例示し説明したが、本発明の精神と範囲を逸脱することなく様々な変更を加えることができることは明瞭に理解されよう。

Claims

被験体において多発性骨髄腫を治療するための医薬的組合せ物であって、治療的有効量のＨｕＬｕｃ６３（ここで該ＨｕＬｕｃ６３は、配列番号５に対応する重鎖可変領域および配列番号６に対応する軽鎖可変領域を有するヒト化ＩｇＧ_１抗体である）を含む第一の医薬組成物と、治療的有効量のレナリドマイドを含む第二の医薬組成物とを含み、第一医薬組成物および第二医薬組成物は、同時に、別々に、または順次投与されるものである、医薬的組合せ物。
治療的有効量のデキサメタゾンをさらに含む、請求項１に記載の医薬的組合せ物。
ＨｕＬｕｃ６３が、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される、請求項１に記載の医薬的組合せ物。
レナリドマイドが、１ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日の用量で経口投与される、請求項１に記載の医薬的組合せ物。
第一医薬組成物および第二医薬組成物の各々が、さらに医薬用に許容可能なキャリアを含む、請求項１に記載の医薬的組合せ物。