JP5308055B2 - β−N−アセチルヘキソサミニダーゼ - Google Patents
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(c)配列番号:1に記載のアミノ酸配列において1若しくは複数のアミノ酸が置換、欠失、付加、及び/若しくは挿入されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、配列番号:1に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質をコードするDNA、(d)配列番号:2に記載の塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズするDNAであり、且つβ−N−アセチルヘキソサミニダーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAが提供される。
実施例に記載の操作のうち、プラスミド調製、制限酵素消化などの基本的な操作については2001年、Cold Spring Harbor Laboratory発行、Molecular Cloning:A Laboratory Manual 3rd ed.に記載の方法に従って行った。プラスミドの構築に使用した制限酵素および他の酵素は、タカラバイオ、東洋紡のいずれかから入手した。
シークエンス反応:
1.96.0℃ 1分
2.96.0℃ 10秒
3.50.0℃ 5秒
4.60.0℃ 4分
5.2.〜4.を25回繰り返した。
PCR反応:
1.94.0℃ 2分
2.94.0℃ 15秒
3.50.0℃ 30秒
4.68.0℃ 1kbpにつき1分
5.2.〜4.を30回繰り返し。
プライマー1(5’−gtaccaggcgtccacgtgcgagat−3’)、
プライマー2(5’−ccagagctcactctgctttggtcatcg−3’)、
プライマー3(5’−cgaacgagcgaatgggggtaaagc−3’)を設計した。
5’末端RACE条件:
1.94.0℃ 30秒
2.72.0℃ 3分
3.1.〜2.を5回繰り返し
4.94.0℃ 30秒
5.70.0℃ 30秒
6.72.0℃ 3分
7.4.〜6.を5回繰り返し
8.94.0℃ 30秒
9.65.0℃ 30秒
10.72.0℃ 3分
11.2.〜4.を25回繰り返し。
3’末端RACE条件:
1.94.0℃ 30秒
2.72.0℃ 3分
3.1.〜2.を5回繰り返し
4.94.0℃ 30秒
5.70.0℃ 30秒
6.72.0℃ 3分
7.4.〜6.を5回繰り返し
8.94.0℃ 30秒
9.69.0℃ 30秒
10.72.0℃ 3分
11.2.〜4.を25回繰り返し。
(2)準備したBmN細胞に混合液を加え、25℃で16時間培養後に混合液を除去し、新たなTC−100(10%FBSを含む)を2ml添加して、25℃で7日間静置培養した。その培養上清を組換えウイルス原液とした。
Claims (8)
- カイコのβ−N−アセチルヘキソサミニダーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAであって、以下(a)、(b)、及び(c)のいずれかに記載のDNA;
(a)配列番号:1に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA、
(b)配列番号:2に記載の塩基配列のコード領域を含むDNA、
(c)配列番号:1に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、及び/若しくは挿入されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、β−N−アセチルヘキソサミニダーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNA。 - 以下(a)、(b)、及び(c)のいずれかに記載のポリペプチド;
(a)配列番号:1に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
(b)配列番号:2に記載の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるポリペプチド、
(c)配列番号:1に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、及び/若しくは挿入されたアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、且つβ−N−アセチルヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド。 - 請求項1記載のDNAを有する組換えベクター。
- 請求項3記載の組換えベクターにより形質転換された形質転換細胞。
- 請求項3記載の組換えベクターにより形質転換された形質転換体。
- 請求項5記載の形質転換体の子孫またはクローンである、形質転換体。
- 形質転換体の製造方法であって、
請求項3記載の組換えベクターを作製する工程と、
前記組換えベクターを宿主細胞に導入する工程と
を有する、形質転換体の製造方法。 - β−N−アセチルヘキソサミニダーゼの製造方法であって、
請求項4記載の形質転換細胞を培養する工程と、
前記細胞またはその培養上清からβ−N−アセチルヘキソサミニダーゼを精製する工程と
を有する、β−N−アセチルヘキソサミニダーゼの製造方法。
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JP2008110297A JP5308055B2 (ja) | 2008-04-21 | 2008-04-21 | β−N−アセチルヘキソサミニダーゼ |
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JP2009254324A JP2009254324A (ja) | 2009-11-05 |
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- 2008-04-21 JP JP2008110297A patent/JP5308055B2/ja active Active
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