JP5251859B2

JP5251859B2 - バイオセンサ

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Publication number: JP5251859B2
Application number: JP2009291813A
Authority: JP
Inventors: 満洋森田; 勝也白崎; 勇紀赤阪
Original assignee: Nipro Corp
Current assignee: Nipro Corp
Priority date: 2009-12-24
Filing date: 2009-12-24
Publication date: 2013-07-31
Anticipated expiration: 2029-12-24
Also published as: JP2011133294A; WO2011078257A1

Description

本発明は、第１電極又は第２電極に、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む試薬の各成分が塗布されたバイオセンサに関する。

近年、糖尿病の患者が各国において増加している。糖尿病の治療としては、例えば、インスリン療法がある。インスリンは血糖値をコントロールする薬物として知られており、糖尿病の治療薬として糖尿病患者に投与されている。インスリンを投与する必要性は、糖尿病患者の血糖値に基づいて判断される。このため、糖尿病患者にとって、血糖値の把握が重要である。血糖値とは、血液中のグルコース濃度である。糖尿病患者自らが自分の血糖値を簡易に測定できることを目的として、簡易な血糖測定装置が開発されている。

前述された血糖測定装置として、バイオセンサが用いられるものが知られている（特許文献１〜４）。バイオセンサは、血糖と反応する酵素が固定された電極を有する。血糖値の測定に用いられる酵素として、グルコースオキシターゼ（以下、「ＧＯＤ」と略されることがある。）やグルコースデヒドロゲナーゼ（以下、「ＧＤＨ」と略されることがある。）が知られている。バイオセンサにおいて、酵素が固定された電極が作用極と称され、試料中に電子を供給する電極が対極と称される。

試料である血液がバイオセンサに導入され、その血液中のグルコースに作用極のＧＯＤが反応すると、グルコースがグルコン酸及び過酸化水素に分解され、その過酸化水素が水及び電子に分解される。このようにして発生した電子が作用極に伝達される。一方、対極からは血液中に電子が供給される。このようにして、ＧＯＤとグルコースとの反応によって、作用極と対極との間に電流が流れる。そして、流れた電流値に基づいて、血液中のグルコース濃度、つまり血糖値が算出される。また、作用極には、電子を伝達する物質が固定されることがある。この物質は、電子メディエータと称される。電子メディエータとして、例えば、フェリシアン化カリウム、ヘキサアンミンルテニウムやキノン誘導体類等の有機化合物、又は有機−金属錯体などが挙げられる。

前述されたバイオセンサにおいて、ＧＯＤやＧＤＨなどの酵素は、水溶液にされて電極に塗布されることによって固定される。具体的には、ディッピング法やスクリーン印刷法、オフセット印刷法、インクジェット印刷法などが公知である（特許文献６〜８）。

また、前述されたバイオセンサにおいて、電極に塗布される酵素などの水溶液にカチオン性の界面活性剤（脂肪酸）が含有されることが公知である（特許文献９）。カチオン性の界面活性剤が含有されることによって、血液試料中の赤血球（ヘマトクリット値）が溶血されて、比較的粘度が高い血液試料であっても、誤差を少なくして、迅速に血糖値が測定されるという利点がある。

特開２００９−９７８７７号公報特開２００５−４３２８０号公報特開２００５−３７３３５号公報特開２００２−１０７３２５号公報特開平９−１５９６４２号公報特開２００６−１２５９０４号公報特表２００９−５３３６７４号公報特開平６−３３１７号公報特許第４０１８０８２号公報

前述されたバイオセンサにおいて、スペーサによって形成された空間が試料空間とされる構成が公知である。試料空間は、バイオセンサの外側に開口されており、その開口が血液に曝されると、毛細管現象によって血液が試料空間へ導かれる。したがって、開口が血液に曝されてから試料空間が血液で満たされるまでの時間は、毛細管現象に依存することとなる。この時間は、迅速な測定を実現する観点からは、できる限り早いことが望ましい。

本発明は、前述された事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、対向配置された第１面と第２面とにより試料空間が形成されたバイオセンサにおいて、試料空間へ試料が迅速に満たされる手段を提供することにある。

本発明は、第１電極と、第２電極と、検体が導入される試料空間と、試薬とを備えたバイオセンサである。上記試料空間は、少なくとも上記第１電極の一部を含む第１面と、当該第１面と対向して配置された第２面との間に形成されている。上記試薬は、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む。上記試薬の各成分は、下記（Ａ）又は（Ｂ）の態様で塗布されている。
（Ａ）上記試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一の成分が上記第１面又は上記第２面の一方に塗布され、他の成分が上記第１面又は上記第２面の他方に塗布されている。
（Ｂ）上記試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が上記第１面及び上記第２面に塗布されている。

バイオセンサは、検体中の被検出物質を電気化学的に検出するためのものである。検体としては、血液や唾液、尿などの主として液体が挙げられる。例えば、検体が血液であれば、被検出物質として、血糖やコルチゾール、コレステロール、中性脂肪、ヘモグロビン、ビリルビン並びに銅、亜鉛及び鉄等の微量金属などが挙げられる。検体がバイオセンサの電極と接触されることにより、検体と酵素とが混合されて、被検出物質が酵素反応を起こす。その酵素反応の過程において生成される電荷が電極に流れることによって、被検出物質が電気的に検出可能となる。

試薬に含まれる酵素は、前述された被検出物質の電気的な検出のために被検物質又は反応生成物と反応するものであれば特に限定されないが、例えば、被検出物質が血液中のグルコースであれば、グルコースを分解して電子を発生させるものである。具体的には、酵素として、グルコースオキシダーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、フラビンアデニンジヌクレオチドを補酵素としたグルコースデヒドロゲナーゼ、ピロロキノリンキノンを補酵素としたグルコースデヒドロゲナーゼが挙げられる。

試薬に含まれるメディエータは、例えば、前述された酵素によってグルコースが分解されて発生した電子を第１電極又は第２電極へ伝達するものであり、具体的には、メディエータとして、フェリシアン化カリウム、フェロシアン化カリウム、ジメチルフェロセン、フェリシニウム、ヘキサアンミンルテニウム化合物、オスミウム化合物、ヒドロキノンなどが挙げられる。

試薬に含まれる水溶性高分子は、第１面又は第２面に皮膜を形成するものである。これにより、試薬に含まれる他の成分が第１面又は第２面に固定されやすくなり、また、酵素活性が安定する。具体的には、水溶性高分子として、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリフルオロスルホナート、酢酸セルロース、デキストランなどが挙げられる。

試薬に含まれる溶血剤は、検体である血液を溶血させるものである。これにより、検体である血液の粘度に依存することなく、酵素反応による被検物質の測定が迅速に行われる。具体的には、溶血剤として、塩化アンモニウム、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、オクタデシルトリメチルアンモニウムブロミドなどが挙げられる。

試薬に含まれる界面活性剤は、試薬の各成分の混合を円滑に行うためのものである。具体的には、界面活性剤として、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）、Ｔｗｅｅｎ（商標）、Ｂｒｉｊ（商標）などが挙げられる。

試薬に含まれる緩衝液は、安定な測定条件とするために試薬のｐＨを調整するものである。具体的には、緩衝液として、ＭＥＳ緩衝液、ＰＢＳ緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液、ＰＩＰＥＳ緩衝液、ＭＯＰＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ＣＡＰＳ緩衝液などが挙げられる。

本発明によれば、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一の成分が上記第１面又は上記第２面の一方に塗布され、他の成分が上記第１面又は上記第２面の他方に塗布されているか、或いは、試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が上記第１面及び上記第２面に塗布されているので、試料空間へ試料が迅速に満たされる。これにより、迅速な被検物質の測定が実現される。

図１は、本発明の実施形態に係る血糖測定装置１０の外観を示す斜視図である。図２は、バイオセンサ１１の分解斜視図である。

以下に、適宜図面が参照されて、本発明の好ましい実施形態が説明される。なお、以下に説明される各実施形態は本発明の一例にすぎず、本発明の要旨を変更しない範囲で、本発明の実施形態が適宜変更できることは言うまでもない。

［血糖測定装置１０］
図１に示されるように、血糖測定装置１０は、バイオセンサ１１と装置本体１２とを有する。バイオセンサ１１が装置本体１２の接続部１３に差し込まれることによって、バイオセンサ１１と装置本体１２とが電気的に接続される。バイオセンサ１１は、１回の血糖測定毎に取り替えられるものである。このバイオセンサ１１が、本発明におけるバイオセンサに相当する。

［装置本体１２］
図１に示されるように、装置本体１２は、筐体５０に電子部品が収容された電子装置である。筐体５０の表側には、液晶ディスプレイ５１及び操作キー５２，５３，５４が配置されている。操作キー５２，５３，５４は、ユーザの操作に基づいて対応するコマンドを発生させるためのものである。液晶ディスプレイ５１は、装置本体１２の状態や測定結果、エラー表示などを行う。

［バイオセンサ１１］
図１に示されるように、バイオセンサ１１は、細長なシート形状である。バイオセンサ１１の長手方向１０１の一端が、装置本体１２の接続部１３に差し込まれることによって、バイオセンサ１１が装置本体１２に装着される。また、バイオセンサ１１が長手方向１０１に引き抜かれることによって、バイオセンサ１１が装置本体１０から取り外される。

バイオセンサ１１の表裏は相対的な関係なので、いずれが表であっても裏であってもよい。本実施形態においては、図１に現れる側が表と称され、図１に現れない側が裏と称される。つまり、バイオセンサ１１は、表面２１及び裏面２２が表裏面をなすシート形状である。

図２に示されるように、バイオセンサ１１は、主として、第１基板２３、第１電極２４、スペーサ２５、第２電極２６、第３電極２７及び第２基板２８を有する。図２における上側、つまり表側から順に、第１基板２３、スペーサ２５、第１電極２４、第２電極２６及び第３電極２７、第２基板２８の順に積層されて、シート形状のバイオセンサ１１が構成されている。

［第１基板２３］
図２に示されるように、第１基板２３は、平面視がバイオセンサ１１と概ね同じ形状であって、長手方向１０１において第２基板２４より若干短いシートである。第１基板２３は、電気絶縁性の材料からなる。この電気絶縁性の材料として、例えばポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）等のポリエステルや、フッ素樹脂及びポリカーボネイト、ガラスなどが挙げられる。

第１基板２３の一方の面は、表面２１を構成する。第１基板２３の表面２１には、方向１０２の両端に一対の着色部３０，３１が形成されている。着色部３０，３１は、表面２１と色分けされたものである。着色部３０，３１は、後述される試料導入口４１の位置の視認を容易にするためのものである。したがって、着色部３０，３１は、試料導入口４１の直上に配置されている。

後述されるように、第１基板２３において、空間４０に対応する領域４２には、試薬の各成分が固定されている。試薬の各成分の詳細については、後述される。第１基板２３において、スペーサ２５側を向く面のうち、試薬が塗布される領域４２が本発明における第２面に相当する。

［第２基板２８］
図２に示されるように、第２基板２８は、平面視がバイオセンサ１１と概ね同じ形状のシートである。第２基板２８は、電気絶縁性の材料からなる。この電気絶縁性の材料として、例えばポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）等のポリエステルや、フッ素樹脂及びポリカーボネイト、ガラスなどが挙げられる。

第２基板２８の一方の面は、裏面２２を構成する。後述されるように、裏面２２と反対側の面３４には第１電極２４，第２電極２６及び第３電極２７が設けられている。第２基板２８において、装置本体１２の接続部１３に差し込まれる長手方向１０１の一端側は、第１基板２３とは対向されていない。

各図には現れていないが、第２基板２８の裏面２２には、着色部３０，３１と同様の着色部が形成されている。

［第１電極２４］
図２に示されるように、第１電極２４は、第２基板２８における裏面２２と反対側の面３４に設けられている。第１電極２４は、第２基板２８の面３４において、長手方向１０１へ延出されており、方向１０２において第２基板２８の１／３程度の幅を有する。面２４において、第１電極２４は、後述される第２電極２６及び第３電極２７と電気的に非接続に配置されている。第１電極２４の素材としては、例えば、銀／塩化銀、金、パラジウム、白金などが挙げられる。第１電極２４は、第１基板２３に対して、スクリーン印刷法、インクジェット法、スパッタリング、真空蒸着、ゾルゲル法、クラスタビーム蒸着又はＰＬＤなどの手法によって面３４に積層されている。第１電極２４において、装置本体１２の接続部１３側に対応する端部は、第１基板２３と対向せずに露出されている。この端部が装置本体１２と電気的に接続される接続端子３３である。

［第２電極２６］
図２に示されるように、第２電極２６は、第２基板２８における裏面２２と反対側の面３４に設けられている。第２電極２６は、第２基板２８の面３４において、長手方向１０１へ延出されており、方向１０２において第２基板２８の１／３程度の幅を有する。面２４において、第２電極２６は、第１電極２４及び後述される第３電極２７と電気的に非接続に配置されている。第２電極２６の素材としては、例えば、カーボンが挙げられる。第２電極２６にカーボンが用いられることによって、銀／塩化銀、金、パラジウム、白金などが採用される第１電極２３の抵抗値が、カーボン製の第２電極２６の抵抗値より低くなるので、空間４０の血液に電子が供給されやすくなる。もちろん、第２電極２６が、第１電極２４と同様に、銀／塩化銀、金、パラジウム、白金などの素材で構成されてもよい。第２電極２６において、装置本体１２の接続部１３側に対応する端部は、第１基板２３と対向せずに露出されている。この端部が装置本体１２と電気的に接続される接続端子３７である。

［第３電極２７］
図２に示されるように、第３電極２７は、第２基板２８における裏面２２と反対側の面３４に設けられている。第３電極２７は、第２基板２８の面３４において、長手方向１０１へ延出されており、方向１０２において第２基板２８の１／３程度の幅を有する。面２４において、第３電極２７は、第１電極２４及び第２電極２６と電気的に非接続に配置されている。第３電極２７の素材としては、例えば、銀／塩化銀、金、パラジウム、白金などが挙げられる。第３電極２７は、空間４０へ血液が導入されたか否かを検出するための電極である。第３電極２７において、装置本体１２の接続部１３側に対応する端部は、第１基板２３と対向せずに露出されている。この端部が装置本体１２と電気的に接続される接続端子３９である。

［スペーサ２５］
図２に示されるように、スペーサ２５は、平面視がバイオセンサ１１と概ね同じ形状のシートである。スペーサ２５としては、電気絶縁性を有する両面テープが好適に用いられる。スペーサ２５は、着色部３０，３１に対応する位置に、方向１０２へ延びる空間４０を有する。つまり、スペーサ２５は、長手方向１０１に対して空間４０によって分断された２枚のシートから構成されている。空間４０によって、領域３８と領域４２との間に、スペーサ２５の厚み分の試料空間が形成される。つまり、空間４０が試料空間となる。空間４０には、第１電極２４の一部、第２電極２６の一部及び第３電極２７の一部がそれぞれ露出されている。

第１電極２４において、空間４０に対応する領域３８には、試薬の各成分が固定されている。試薬の各成分の詳細については、後述される。第１電極２４において、スペーサ２５側を向く面のうち試薬が塗布される領域３８が本発明における第１面に相当する。

図１に示されるように、空間４０は、バイオセンサ１１の端に開口されており、この開口が試料導入口４１となる。なお、図１には現れていないが、試料導入口４１と対向する位置においても空間４０が開口されている。試料導入口４１が血液に曝されると、毛細管作用によって血液が空間４０に流れ込む。

［領域３８，４２へ固定される試薬の成分］
以下、領域３８，４２に固定される試薬の成分が詳述される。この試薬は、グルコースオキシダーゼ、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む。なお、試薬は、更に他の成分を含んでもよい。

試薬は、領域３８に塗布される第１試薬と、領域４２に塗布される第２試薬に分けて調製される。第１試薬は、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤のうちいずれか一の成分を含む。第２試薬は、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤のうち残りの成分を含む。

したがって、第１試薬及び第２試薬において、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤の組成の組み合わせは、次の６パターンとなる。
（１）第１試薬：界面活性剤
第２試薬：水溶性高分子、溶血剤
（２）第１試薬：溶血剤
第２試薬：水溶性高分子、界面活性剤
（３）第１試薬：水溶性高分子
第２試薬：溶血剤、溶血剤
（４）第１試薬：溶血剤、界面活性剤
第２試薬：水溶性高分子
（５）第１試薬：水溶性高分子、界面活性剤
第２試薬：溶血剤
（６）第１試薬：水溶性高分子、溶血剤
第２試薬：界面活性剤

なお、グルコースオキシダーゼ、メディエータ及び緩衝液は、第１試薬又は第２試薬のいずれに含まれてもよいが、本実施形態のように、第１電極２４が作用極として機能し、領域３８に第１試薬が塗布されるのであれば、酵素及びメディエータは第１試薬に含まれることが好ましい。また、第１試薬及び第２試薬が、領域３８，４２にそれぞれ塗布される手法は、公知の手法が採用される。このような公知の手法として、例えば、ディッピング法やスクリーン印刷法、オフセット印刷法、インクジェット印刷法などが挙げられる。

［本実施形態の作用効果］
本実施形態によれば、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一の成分が領域３８，４２の一方に塗布され、他の成分が領域３８，４２の他方に塗布されているので、試料導入口４１から空間４０へ血液が迅速に満たされる。これにより、バイオセンサ１１において、第１電極２４の領域３８に固定されたグルコースオキシダーゼと血液中のグルコースが迅速に反応して、迅速な血糖値の測定が実現される。

なお、本実施形態では、試薬に含まれる酵素がグルコースオキシダーゼであるが、本発明の試薬に含まれる酵素がグルコースオキシダーゼに限定されないことは言うまでもない。例えば、血糖測定に用いられるバイオセンサであれば、グルコースオキシダーゼに代えてグルコースデヒドロゲナーゼが酵素として試薬に含まれてもよい。

また、本発明に係るバイオセンサは、血糖測定装置１０のように携帯型の血糖測定装置に限定されるものではない。したがって、血液中の他の成分の測定にバイオセンサが用いられる場合に、その測定に必要な酵素が含まれる試薬が電極に固定される態様においても利用可能である。また、試料も血液に限定されず、尿や唾液などの検体であってもよいし、被検出物質が含まれる水溶液であってもよい。

［変形例］
前述された実施形態においては、第１試薬は、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤のうちいずれか一の成分を含み、第２試薬は、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤のうち残りの成分を含むが、第１試薬及び第２試薬のいずれもに、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が含まれてもよい。変形例においても、グルコースオキシダーゼ、メディエータ及び緩衝液は、第１試薬又は第２試薬のいずれに含まれてもよいが、本実施形態のように、第１電極２４が作用極として機能し、第１電極２４の領域３８に第１試薬が塗布されるのであれば、酵素及びメディエータは第１試薬に含まれることが好ましい。

したがって、変形例において、第１試薬及び第２試薬の組成は次のようになる。
第１試薬：グルコースオキシダーゼ、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤
第２試薬：水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤、緩衝液

このような変形例によっても、前述された実施形態と同様に、試料導入口４１から空間４０へ血液が迅速に満たされ、バイオセンサ１１において、第１電極２４の領域３８に固定されたグルコースオキシダーゼと血液中のグルコースが迅速に反応して、迅速な血糖値の測定が実現される。

以下、本発明の実施例が説明される。

［バイオセンサ］
バイオセンサとしては、前述された実施形態と同様の構成のバイオセンサ１１を用いた。第１電極２４、第２電極２６及び第３電極２７の素材としてはカーボンを用いた。領域３８，４２への試薬の塗布は、後述される実施例１〜７、比較例１，２、表１に従って、ディスペンサーを用いて行った。

［実施例１］
バイオセンサ１１の領域３８に塗布される第１試薬、及び領域４２に塗布される第２試薬の組成を以下の通りとして、表１に示される組成及び塗布量で領域３８，４２にそれぞれ塗布した。
第１試薬：酵素（フラビンアデニンジヌクレオチドを補酵素としたグルコースデヒドロゲ
ナーゼ：ＦＡＤ−ＧＤＨ）
メディエータ（フェリシアン化カリウム）
水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）
溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）
緩衝液（ＭＥＳ緩衝液）
第２試薬：界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）

［実施例２］
バイオセンサ１１の領域３８に塗布される第１試薬、及び領域４２に塗布される第２試薬の組成を以下の通りとして、表１に示される組成及び塗布量で領域３８，４２にそれぞれ塗布した。
第１試薬：酵素（ＦＡＤ−ＧＤＨ）
メディエータ（フェリシアン化カリウム）
水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）
界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）
緩衝液（ＭＥＳ緩衝液）
第２試薬：溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）

［実施例３］
バイオセンサ１１の領域３８に塗布される第１試薬、及び領域４２に塗布される第２試薬の組成を以下の通りとして、表１に示される組成及び塗布量で領域３８，４２にそれぞれ塗布した。
第１試薬：酵素（ＦＡＤ−ＧＤＨ）
メディエータ（フェリシアン化カリウム）
溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）
界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）
緩衝液（ＭＥＳ緩衝液）
第２試薬：水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）

［実施例４］
バイオセンサ１１の領域３８に塗布される第１試薬、及び領域４２に塗布される第２試薬の組成を以下の通りとして、表１に示される組成及び塗布量で領域３８，４２にそれぞれ塗布した。
第１試薬：酵素（ＦＡＤ−ＧＤＨ）
メディエータ（フェリシアン化カリウム）
水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）
緩衝液（ＭＥＳ緩衝液）
第２試薬：溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）
界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）

［実施例５］
バイオセンサ１１の領域３８に塗布される第１試薬、及び領域４２に塗布される第２試薬の組成を以下の通りとして、表１に示される組成及び塗布量で領域３８，４２にそれぞれ塗布した。
第１試薬：酵素（ＦＡＤ−ＧＤＨ）
メディエータ（フェリシアン化カリウム）
溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）
緩衝液（ＭＥＳ緩衝液）
第２試薬：水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）
界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）

［実施例６］
バイオセンサ１１の領域３８に塗布される第１試薬、及び領域４２に塗布される第２試薬の組成を以下の通りとして、表１に示される組成及び塗布量で領域３８，４２にそれぞれ塗布した。
第１試薬：酵素（ＦＡＤ−ＧＤＨ）
メディエータ（フェリシアン化カリウム）
界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）
緩衝液（ＭＥＳ緩衝液）
第２試薬：水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）
溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）

［実施例７］
バイオセンサ１１の領域３８に塗布される第１試薬、及び領域４２に塗布される第２試薬の組成を以下の通りとして、表１に示される組成及び塗布量で領域３８，４２にそれぞれ塗布した。
第１試薬：酵素（ＦＡＤ−ＧＤＨ）
メディエータ（フェリシアン化カリウム）
水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）
溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）
界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）
緩衝液（ＭＥＳ緩衝液）
第２試薬：水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）
溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）
界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）

［比較例１］
バイオセンサの領域３８に以下の第２試薬を、表１に示される組成及び塗布量で塗布し、領域４２には何も塗布しなかった。
第１試薬：酵素（ＦＡＤ−ＧＤＨ）
メディエータ（フェリシアン化カリウム）
水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）
溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）
界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）
緩衝液（ＭＥＳ緩衝液）
第２試薬：なし

［比較例２］
バイオセンサ１１の領域３８に塗布される第１試薬、及び領域４２に塗布される第２試薬の組成を以下の通りとして、表１に示される組成及び塗布量で領域３８，４２にそれぞれ塗布した。
第１試薬：酵素（ＦＡＤ−ＧＤＨ）
メディエータ（フェリシアン化カリウム）
緩衝液（ＭＥＳ緩衝液）
第２試薬：水溶性高分子（ポリビニルピロリドン；ＰＶＰ）
溶血剤（テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド；ＭＴＡＢ）
界面活性剤（商品名：ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）

［評価試験］
評価試験は、ポテンシオスタットによる吸引時間の測定により行った。血液試料を空間４０の第１電極２４側の試料導入口４１から吸引させ、第１電極２４と第２電極２６との間に電流が発生した時間を開始時間とし、第１電極２４と第３電極２７との間に電流が発生した時間を終了時間とした。そして、開始時間から終了時間までに要した時間を吸引時間とした。その結果を表１に示す。

表１に示されるように、各実施例１〜７では、平均値が１．０２未満であるのに対して、比較例１，２は、最も遅い実施例７よりも大幅に遅かった。これにより、各実施例１〜７により、毛細管現象による空間４０への血液の導入速度が速まることが確認された。

１１・・・バイオセンサ
２４・・・第１電極
２６・・・第２電極
４０・・・空間（試料空間）

Claims

第１基板、少なくとも２枚のスペーサ、及び第２基板が、厚み方向に第１基板、スペーサ、第２基板の順に積層されており、
上記第１基板、上記２枚のスペーサ、及び上記第２基板に囲まれて試料空間が形成されており、
上記試料空間の延出方向の両端側にそれぞれ開口する試料導入口が形成されており、
上記第１基板又は上記第２基板に設けられて上記試料空間に露呈された作用極としての第１電極、及び上記第１基板又は上記第２基板において上記第１電極と上記延出方向に離間されて設けられて上記試料空間に露呈された第２電極を具備し、
上記試料空間に露呈された上記第１電極の表面である第１面、及び当該第１面と対向して上記試料空間に露呈された上記第１基板又は上記第２基板の表面である第２面に試薬が塗布され、且つ上記第２電極の表面に試薬が塗布されておらず、
上記試薬は、検体中の被検物質との酵素反応に適した組成の酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含み、
上記試薬の各成分が、下記（Ａ）又は（Ｂ）の態様で塗布されたバイオセンサ。
（Ａ）上記試薬の成分のうち、酵素、メディエータ及び緩衝液が上記第１面に塗布され、且つ、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一又は二の成分が上記第１面又は上記第２面の一方に塗布され、他の成分が上記第１面又は上記第２面の他方に塗布されている。
（Ｂ）上記試薬の成分のうち、酵素、メディエータ及び緩衝液が上記第１面に塗布され、且つ、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が上記第１面及び上記第２面に塗布されている。
第１基板、少なくとも２枚のスペーサ、及び第２基板が、厚み方向に第１基板、スペーサ、第２基板の順に積層されており、
上記第１基板、上記２枚のスペーサ、及び上記第２基板に囲まれて試料空間が形成されており、
上記試料空間の延出方向の両端側にそれぞれ開口する試料導入口が形成されており、
上記第１基板又は上記第２基板に設けられて上記試料空間に露呈された作用極としての第１電極、及び上記第１基板又は上記第２基板において上記第１電極と上記延出方向に離間されて設けられて上記試料空間に露呈された第２電極を具備し、
上記試料空間に露呈された上記第１電極の表面である第１面、及び当該第１面と対向して上記試料空間に露呈された上記第１基板又は上記第２基板の表面である第２面に試薬が塗布され、且つ上記第２電極の表面に試薬が塗布されておらず、
上記試薬は、検体中の被検物質との酵素反応に適した組成の酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含み、
上記試薬の成分のうち、酵素、メディエータ及び緩衝液が上記第１面に塗布され、且つ、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一又は二の成分が上記第１面又は上記第２面の一方に塗布され、他の成分が上記第１面又は上記第２面の他方に塗布されたバイオセンサ。
第１基板、少なくとも２枚のスペーサ、及び第２基板が、厚み方向に第１基板、スペーサ、第２基板の順に積層されており、
上記第１基板、上記２枚のスペーサ、及び上記第２基板に囲まれて試料空間が形成されており、
上記試料空間の延出方向の両端側にそれぞれ開口する試料導入口が形成されており、
上記第１基板又は上記第２基板に設けられて上記試料空間に露呈された作用極としての第１電極、及び上記第１基板又は上記第２基板において上記第１電極と上記延出方向に離間されて設けられて上記試料空間に露呈された第２電極を具備し、
上記試料空間に露呈された上記第１電極の表面である第１面、及び当該第１面と対向して上記試料空間に露呈された上記第１基板又は上記第２基板の表面である第２面に試薬が塗布され、且つ上記第２電極の表面に試薬が塗布されておらず、
上記試薬は、検体中の被検物質との酵素反応に適した組成の酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含み、
上記試薬の成分のうち、酵素、メディエータ及び緩衝液が上記第１面に塗布され、且つ、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が上記第１面及び上記第２面に塗布されたバイオセンサ。