JP5248600B2 - トリアゾリルアミノピリミジン化合物 - Google Patents
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Description
R1は、メチル、メトキシ、ヒドロキシ、アミノ、クロロ、アミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)、(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)、アミノカルボニル(C1−C3アルキル)、1−((1−アミノ)エチルカルボニルアミノ)エチル、2−(N−メチルアミノ)エトキシ、2−シアノプロパ−2−イル、(2−ヒドロキシ−2−メチル)−1−プロピルオキシ、(2−ヒドロキシ)エチルアミノカルボニルメチル、(1−フルオロ)−(2−アミノ)エチル、(1−フルオロ)−(1−メチル)−(2−アミノ)エチル、ジフルオロメチル、1−((2,2−ジフルオロ)エチルアミノ)エチル、ジフルオロメチルカルボニル、トリフルオロメチルカルボニル、(1−アミノ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、(1−メチルアミノ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、(1−ヒドロキシ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、2−(アミノ)エトキシ、2−(ヒドロキシ)エトキシ、1−((N−(2−ヒドロキシ)エチル)−(N−メチル)−アミノ)(C1−C2アルキル)、4−(ヒドロキシ)ピペリジン−1−イル−メチル、1−(ピペラジン−1−イル)エチル、2−(ヒドロキシ)エチルスルホニル、1−(アミノ)シクロプロピル、1−(メチルアミノ)シクロプロピル、1−アミノ(シクロブチル)、1−アミノシクロペンタ−2−イル、シクロペンタノン−2−イル、テトラヒドロフラ−2−イル、ピロリジン−2−イル、アジリジン−2−イル、もしくは(モルホリン−4−イル)メチルであり、
R2は、水素もしくはアミノであるが、ただしR2がアミノである場合、R1およびR2は上記フェニルに縮合したピロール環を形成するか;またはR1がアミノである場合、R1およびR2は上記フェニルに縮合したピロール環もしくはピリジン環のいずれかを形成することができ、
R3は水素、クロロ、もしくはフルオロであり、
R4は水素、メチル、クロロ、もしくはフルオロであり、
R5は水素、ヒドロキシメチル、もしくはメチルであり、かつ
R6は水素、ヒドロキシメチル、もしくはメチルである)
あるいはその薬理学的に許容できる塩を提供する。
R1は、メチル、メトキシ、ヒドロキシ、アミノ、クロロ、アミノ(C1−C2アルキル)、ジメチルアミノメチル、(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)、アミノカルボニルメチル、2−(N−メチルアミノ)エトキシ、(2−ヒドロキシ−2−メチル)−1−プロピルオキシ、ジフルオロメチル、2−(アミノ)エトキシ、2−(ヒドロキシ)エトキシ、4−(ヒドロキシ)ピペリジン−1−イル−メチル、[N−(2−ヒドロキシ)エチル−N−メチル]−アミノメチル、2−(ヒドロキシ)エチルスルホニル、1−(アミノ)シクロプロピル、テトラヒドロフラ−2−イル、もしくは(モルホリン−4−イル)メチルであり、
R2は水素もしくはアミノであるが、ただしR2がアミノである場合、R1およびR2は上記フェニルに縮合したピロール環を形成するか;またはR1がアミノである場合、R1およびR2は上記フェニルに縮合したピロール環もしくはピリジン環のいずれかを形成することができ、
R3は水素もしくはハロであり、かつ
R4は水素もしくはハロである)
あるいはその薬理学的に許容できる塩を提供する。
a)R1はアミノ(C1−C4アルキル)である、
b)R1は1−(アミノ)エチルである、
c)R2は水素である、
d)R3はフルオロである、
e)R4はフルオロである、
f)R5は水素またはメチルである、
g)R5はメチルである、
h)R6は水素である、
i)R1はアミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)、(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)、アミノカルボニル(C1−C3アルキル)、1−((1−アミノ)エチルカルボニルアミノ)エチル、2−シアノプロパ−2−イル、(2−ヒドロキシ)エチルアミノカルボニルメチル、(1−フルオロ)−(2−アミノ)エチル、(1−フルオロ)−(1−メチル)−(2−アミノ)エチル、ジフルオロメチル、1−((2,2−ジフルオロ)エチルアミノ)エチル、(1−アミノ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、(1−メチルアミノ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、(1−ヒドロキシ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、1−((N−(2−ヒドロキシ)エチル)−(N−メチル)−アミノ)(C1−C2アルキル)、4−(ヒドロキシ)ピペリジン−1−イル−メチル、1−(ピペラジン−1−イル)エチル、または(モルホリン−4−イル)メチルである、
j)R1は、アミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)、(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)、(2−ヒドロキシ)エチルアミノカルボニルメチル、または(モルホリン−4−イル)メチルであり、かつ
R6は水素である、
k)R1は、アミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)、(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)、または(モルホリン−4−イル)メチルであり、
R3はフルオロであり、
R4はフルオロであり、
R5は水素またはメチルであり、かつ
R6は水素である、
l)R1はアミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)、または(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)であり、
R3はフルオロであり、
R4はフルオロであり、
R5は水素またはメチルであり、かつ
R6は水素である、
m)R1が1−(アミノ)エチルであり、R3がフルオロであり、R4がフルオロであり、R5が水素であり、かつR6が水素である請求項1に記載の化合物、ならびに
n)R1が1−(アミノ)エチルであり、R3がフルオロであり、R4がフルオロであり、R5がメチルであり、かつR6が 水素である請求項1に記載の化合物。
スキームIの化合物5は、出発物質1と出発物質2、または出発物質3と出発物質4とのいずれかの間のパラジウム(0)カップリング反応によって調製される。テトラキス(トリフェニルホスフィン)−パラジウム(0)または[1,1’−ビス(ジフェニル−ホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(DCMとの錯体(1:1))[Pd(dppf)Cl2].Pd(dppf)Cl2などの適切なパラジウム触媒が、塩基(炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムなど)の存在下で使用される。この反応は、テトラヒドロフラン(THF)、ジオキサン、および水などの溶媒中で、一般にオイルバスまたはマイクロ波反応器を用いて約100℃〜150℃の温度で実施される。
2−ベンゾ[b]チオフェン−7−イル−4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン
フラスコ中で、7−ブロモ−ベンゾ[b]チオフェン(426mg、2mmol)、ビス−(ピナコラト)−ジボロン(756mg、3mmol)、Pd(dppf)Cl2(81mg、0.1mmol)、酢酸カリウム(294mg、3mmol)をジメチルスルホキシド(DMSO)(10mL)の中で混合した。この混合物に窒素を5分間吹き込んだ。このフラスコを密封し、オイルバスの中に置き、100℃で4時間加熱した。この混合物をクロロホルム/イソプロピルアルコール(IPA)(3/1)で希釈した。この溶液を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で暗色残渣になるまで濃縮した。カラムクロマトグラフィ(ヘキサン→ヘキサン中20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を無色の固体として得た(342mg、66%)。MS(ES) m/z 261[M+1]+。
ベンゾ[b]チオフェン−7−ボロン酸
メカニカルスターラーを取り付けた12L モートン(Morton)フラスコ中で、7−ブロモベンゾ[b]チオフェン(300g、1.41mmol)およびトリ−イソプロピルボレート(403.6g、2.15mmol)を無水THF(4L)中で混合し、窒素下でドライアイス/アセトン浴中で−70℃まで冷却した。内部温度を−67.5℃より低く保つような速度でn−ブチルリチウム(1.6M ヘキサン溶液、714g、1.68mmol)を滴下した。添加終了後、反応混合物をこの温度で1時間撹拌したままにした。冷却浴を取り除き、4Lの水をゆっくり加えると、温度が約−5℃まで上昇した。次に、この溶液のpHが約pH=2となるまで濃HClを加えた(75mL)。このスラリーを1時間撹拌したままにした。十分な5N NaOH水溶液を加えてこの混合物のpHを約pH=12に調整し、22Lの分液漏斗(bottom−drop funnel)に移した。分離し、下側の水層を保存した。上側の有機層を4Lのメチル−tert−ブチルエーテルで希釈し、1Lの5N NaOH水溶液で抽出した。水層を分離し、それまでの水系抽出液と合わせ、分液漏斗に戻した。この水層をさらなるメチル−tert−ブチルエーテル(4L)で洗浄した。再度、水層を分離し、メカニカルスターラーを取り付けた12Lの3つ口丸底フラスコに移した。この溶液を、氷水浴を用いて+5℃まで冷却した。この溶液のpHが約pH=2となるまで濃HClをゆっくりと加えた。この混合物を30分間撹拌し、次いで生成した固体を濾別した。漏斗上の固体を2Lの水で2回リンスし、30分間風乾した。この固体を50℃の真空オーブン中に置き、真空下で一晩乾燥した。この乾燥した固体を、2Lのn−ヘプタンで30分間スラリー化し黄色を取り除いた。固体を再度濾別し、30分間風乾し、次いで40℃で一晩真空乾燥し、標記の化合物(188.8g、75%)を白色固体として得た。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.86(d,J=8Hz,1H),7.49−7.57(m,2H),7.30−7.39(m,2H)。
1−(2−ブロモ−フェニル)−エタノンオキシム
圧力容器中の15mLのジオキサン中で1−(2−ブロモ−フェニル)−エタノン(4.5g、22.6mmol)、50% ヒドロキシルアミン水溶液(2.3g、69.6mmol)および1mLの酢酸を混合した。この容器を密封し、この混合物をオイルバス中で150℃で3時間加熱した。この混合物を室温まで冷却した。クロロホルム/IPA(3/1)で希釈し、水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。層を分離し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。真空中で濃縮し、粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィ(ジクロロメタン(DCM)中20% THF)によって精製し、標記の化合物(4.0g、83%)を得た。MS(ES) m/z 214/216[M+1]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−エチルアミン
40mLの乾燥1,2−ジメトキシエタン中の水素化ホウ素ナトリウム(3.1g、86mmol)および四塩化チタン(1M トルエン溶液、43mL、43mmol)の溶液をN2下で0℃まで冷却した。1−(2−ブロモ−フェニル)−エタノンオキシム(4.6g、21.5mmol)を上記の溶液に滴下した。この混合物を室温で一晩撹拌した。反応を200mLの水でクエンチした。この混合物を水酸化アンモニウムを用いて塩基性にした。この粗生成物をトルエンおよび酢酸エチル中に抽出した。層を分離し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。真空中で濃縮し、粗生成物(4.0g、100%)を得た。MS(ES) m/z 200/202[M+1]+。
2−(2−ブロモ−4−クロロフェニル)−2−フルオロアセトニトリル
DCM(6mL)中の2−ブロモ−4−クロロ−ベンズアルデヒド(3.5g、16mmol)を、ヨウ化亜鉛(8mg)が入っているフラスコに加えた。この混合物を室温で30分間撹拌した。この混合物を、氷水浴を用いて0℃まで冷却した。シアン化トリメチルシリル(2.14mL、15.99mmol)をこの激しく撹拌した混合物に加えた。冷却浴を取り除き、室温で18時間撹拌した。DCM(20mL)を加え、混合物を0℃まで冷却した。DCM(8mL)中のジエチルアミノ硫黄トリフルオリド(2.32mL、18mmol)の溶液をこれまでの反応混合物に加え、この混合物を一晩撹拌した。反応混合物を氷水(50mL)中に注ぎ込み、有機層を分離した。この有機層を水、0.5N HCl、水、飽和NaHCO3、および水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥した。有機溶媒を除去し、粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィ(ヘキサン/酢酸エチル、10:1)によって精製し、標記の化合物(2.40g、74%)を得た。MS(GC)249[M]+。
2−(2−ブロモ−4−クロロフェニル)−2−フルオロエタンアミン、塩酸塩
2−(2−ブロモ−4−クロロフェニル)−2−フルオロアセトニトリル(2.45g、9.86mmol)をTHF(50mL)に溶解した。この混合物を0℃まで冷却し、次いでBH3−THF錯体(1N、20mL、20mmol)を加えて一晩撹拌した。エタノール(5mL)を加え、次いでHClエタノール溶液を用いて酸性まで調整した。溶媒を除去した後、DCM(20mL)をその固体に加えた。濾過し、DCMで洗浄し、乾燥して標記の化合物をHCl塩として得た。MS(ES) m/z 254[M+1]+。
2−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−2−メチルプロパンニトリル
水素化ナトリウム(1g、42.1mmol)を、10mLのジメチルホルムアミド(DMF)中の(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−アセトニトリル(3g、14mmol)の撹拌溶液に0℃で加えた。この混合物を0℃〜室温で半時間撹拌した。ヨウ化メチル(6g、42mmol)を加えた。もう30分間撹拌した。この反応液を水でクエンチした。生成物をDCM中に抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、油状残渣を得た。この残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィ(FCC)(勾配溶離液として、ヘキサンからヘキサン中の20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を白色固体として得た(2.2g、65%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41−7.47(m,2H),7.03−7.08(m,1H),1.88(s,6H)。
2−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−2−メチルプロパン酸
2−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−2−メチル−プロピオニトリル(1g、4.13mmol)および1,4,7,10,13,16−ヘキサオキサシクロオクタデカン(18−クラウン−6)(100mg、1重量%)をエタノール(5mL)中の水酸化ナトリウム(10M、20mL、200mmol)と混合した。この混合物を還流状態で3時間加熱した。反応を1N HClでクエンチした。生成物をクロロホルムで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、油状残渣を得た。この残渣をFCC(溶離液として、DCM中の10% メタノール)によって精製し、標記の化合物を黄色固体として得た(1g、93%)。MS(ES) m/z 260/262[M+1]+。
2−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−2−メチルプロパン−1−アミン
ボラン−THF錯体(2M THF溶液、10mL、20mmol)を、10mLのTHF中の2−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−2−メチル−プロピオニトリル(0.8g、3.30mmol)の撹拌溶液に0℃で加えた。この混合物を0℃〜室温で週末にわたって撹拌した。この反応を希水酸化アンモニウムでクエンチした。生成物をクロロホルムで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、標記の化合物を得た(0.8g、99%)。MS(ES) m/z 246/248[M+1]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−2,2,2−トリフルオロエタノール
THF(50mL)中の2−ブロモ−4−フルオロ−ベンズアルデヒド(6.1g、30.1mmol)およびトリフルオロメチルトリメチルシラン(5.4g、36.1mmol)を100mL丸底フラスコに入れた。この溶液をN2下で0℃まで冷却した。Bu4NF(0.3g、1.20mmol)を加えた。この混合物を0℃でもう1時間撹拌した。塩化水素(40mL、1M、40mmol)をこの混合物に加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。この反応混合物をクロロホルムで希釈した。この有機層を水/飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮し、粗生成物を得た。FCC(ヘキサン/酢酸エチル、4/1)によって精製し、標記の化合物を黄色油状物として得た(7.40g、90%)。MS(ES) m/z 273/275[M+1]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−2,2,2−トリフルオロエタノン
20mLのDCM中の1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−2,2,2−トリフルオロ−エタノール(12g、43.9mmol)を、DCM(400mL)中の3,3,3−トリアセトキシ−3−ヨードフタリド(52g、122.6mmol)および18−クラウン−6(0.6g)の撹拌した懸濁溶液に加えた。この混合物を室温で4時間撹拌し、NaHCO3/NaS2O3の溶液に注ぎ込んだ。この有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮した。得られた粗生成物をFCC(溶離液として、ヘキサン中の20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を淡黄色油状物として得た(9g、76%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.77(m,1H),7.51(m,1H),7.20(m,1H)。
1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)プロパン−1−オール
窒素下、0℃の臭化エチルマグネシウム(1M エーテル溶液、8.37mL、8.37mmol)を、ジエチルエーテル(15mL)中の2−ブロモ−4−フルオロベンズアルデヒド(1g、4.93mmol)の溶液に加えた。混合物を室温で1時間撹拌した。水をゆっくり加え、次いで2M HClを用いてこの混合物を酸性条件まで調整した。生成物をクロロホルム/IPA(3/1)で抽出した。硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で黄色油状物まで濃縮した。カラムクロマトグラフィ(ヘキサン中の30%酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を無色の油状物として得た(1.1g、96%)。1H NMR(400MHz,CD3Cl)δ0.99(t,J=7.2Hz,3H),1.75(m,2H),4.99(m,1H),7.03(m,1H),7.25(m,1H),7.53(m,1H)。
N−(2−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)プロパン−2−イル)ホルムアミド
98%硫酸(3g、31mmol)を、25mL丸底フラスコ中の2−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−プロパン−2−オール(2.4g、10.30mmol)およびシアン化トリメチルシリル(2.04g、59mmol)の混合物にN2下、−20℃で滴下した。このフラスコを冷却浴の外へ移動し、この混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物を氷水で希釈し、水酸化アンモニウムでpH=8まで中和した。生成物をクロロホルム/IPA(3/1、100mL)で抽出した。この有機層を水/飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮し、粗生成物を得た。FCC(溶離液として、DCM中の20% THF)によって精製し、標記の化合物を白色固体として得た(2g、75%)。MS(ES) m/z 260/262[M+1]+。
1−(1−アジド−2,2,2−トリフルオロエチル)−2−ブロモ−4−フルオロベンゼン
4,5−ジクロロ−3,6−ジオキソシクロヘキサ−1,4−ジエン−1,2−ジカルボニトリル(5g、22mmol)を、50mLのDCM中のトリフェニルホスフィン(5.76g、22mmol)の撹拌溶液に少しずつ加えた。2分間撹拌した後、アジ化テトラ−N−ブチルアンモニウム(6.25g、22mmol)を加えた。10mLのDCM中の1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−2,2,2−トリフルオロエタノール(4g、14.7mmol)の溶液を上記の混合物に加えた。この混合物を室温で1時間撹拌し、約30mLまで濃縮した。この混合物をシリカカラムに充填した。ヘキサンからヘキサン中の20% 酢酸エチルを用いて溶出し、標記の化合物を茶色の油状物として得た(0.8g、18%)。MS(ES) m/z 298/300[M+1]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−2,2,2−トリフルオロエタンアミン
ラネーニッケル(1.58g、26.8mmol)を、10mLのエタノール中の1−(1−アジド−2,2,2−トリフルオロ−エチル)−2−ブロモ−4−フルオロ−ベンゼン(0.8g、2.68mmol)、ギ酸(1.24g、26.8mmol)、およびヒドラジン(0.86g、26.8mmol)の溶液に加えた。この混合物を室温で1時間撹拌し、過剰のニッケルを濾別した。この母液を水で希釈し、クロロホルムで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、標記の化合物を茶色の油状物として得た(0.73g、100%)。MS(ES) m/z 272/274[M+1]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)シクロブタンカルボン酸
水酸化カリウム(8.39g、150mmol)および臭化テトラブチルアミン(0.3g、触媒量)を、トルエン(20mL)中の2−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)アセトニトリル(4g、18.69mmol)および1,3−ジブロモプロパン(4.15g、20.5mmol)の溶液に加えた。これを100℃の温度で2時間撹拌した。この混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。この有機層を1N HClおよび飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥した。有機溶媒を除去し、粗生成物を得た。蒸留して、1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)シクロブタンカルボニトリルを得た(沸点110−120℃/0.3Torr.(約40Pa))(1.5g、31%)。MS(GC)m/z 253[M]+。
1−(2−ブロモ−4−クロロフェニル)エタンアミン
1−(2−ブロモ−4−クロロフェニル)エタノール(2.33g、10mmol)、チタンイソプロポキシド(6mL、20mmol)およびエタノール中のアンモニア(25mL、50mmol)の混合物を、N2下、常温で6時間撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム(0.6g、15mmol)を加え、この混合物を3時間撹拌した。この反応を水酸化アンモニウム(2N、25mL)でクエンチした。不溶物を濾過によって除去した。水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、HCl溶液(1N、30mL)で抽出した。この水層を酢酸エチルで洗浄し、次いでNaOH(2N)溶液でpH 10−12まで処理した。この水層を酢酸エチル(50mL×3)で抽出した。有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥した。有機溶媒を除去し、標記の化合物を得た(1.5g、64%)。MS(ES) m/z 236[M+1]+。
2−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)シクロペンタノン
ジオキサン(10mL)中の2−ブロモ−4−フルオロ−1−ヨードベンゼン(4.5g、15mmol)、シクロペンタノン(2.65mL、29.9mmol)、炭酸セシウム(10.72g、32.9mmol)、4,5−ビス(ジスフェニルホスフィノ)−9,9−ジメチルキサンテン(0.54g、0.9mmol)、およびパラジウム2(ジベンザルアセトン)3[Pd2(dba)3)](0.35g、0.37mmol)の混合物を、N2下で80℃まで22時間加熱した。混合物を室温まで冷却した後、エーテルで希釈し、セライトパッドに通して濾過し、溶媒を除去した。この残渣をカラムクロマトグラフィ(ヘキサン:エーテル/20:1)によって精製し、標記の化合物を得た(0.55g、15%)。MS(GC)m/z 258[M]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−2,2−ジフルオロエタノン
n−BuLi(8.86mL、14.18mmol)を、THF(50mL)中の2−ブロモ−4−フルオロ−1−ヨードベンゼン(4.27g、14.2mmol)の溶液に、−100℃でN2下で15分間にわたってゆっくりと加えた。この溶液を30分間撹拌した。ジフルオロ酢酸エチル(2.81mL、26.9mmol)を加え、3時間撹拌した。HCl(50mL、2N)溶液を加え、この溶液を室温まで加温した。有機層を分離し、この有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を除去した。この残渣をカラムクロマトグラフィ(ヘキサン:酢酸エチル/10:1)によって精製し、標記の化合物を得た(2.3g、64%)。MS(GC) m/z 252[M]+。
5−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−3,4−ジヒドロ−2H−ピロール
乾燥THF(30mL)中の1−ビニルピロリジン−2−オン(2g、8.58mmol)の溶液を、−20℃、N2雰囲気下でリチウムジイソプロピルアミド(LDA)(13mL、31.45mmol)で処理し、同じ温度で30分間撹拌した。次いで2−ブロモ−4−フルオロ安息香酸メチル(2g、8.58mmol)を加え、これを週末にわたって撹拌した。HCl(12N、9mL)溶液および水(12mL)を加えた。THFを除去し、HCl(12N、12mL)および水(15mL)を加えた。これを100℃で15時間加熱した。この混合物を室温まで冷却し、5% NaOH溶液を加えた。この溶液をエーテルで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を除去した。この残渣をカラムクロマトグラフィ(ヘキサンから酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を得た(0.42g、27%)。MS(ES) m/z 244[M+1]+。
2−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)ピロリジン
水素化ホウ素ナトリウム(146mg、3.7mml)を、メタノール−酢酸(飽和;10mL)混合物中の5−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−3,4−ジヒドロ−2H−ピロール(420mg、1.73mmol)の溶液に−40℃で加えた。室温まで加温した後、水(10mL)を加え、NaOH溶液(2N)を用いてこの溶液を塩基性にした。この溶液をDCMで抽出し、この有機溶液を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、炭酸カリウムで乾燥し、有機溶媒を除去し、標記の化合物を得た(300mg、71%)。MS(ES) m/z 236[M+1]+。
tert−ブチル 1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)シクロブチルカルバメート
トリエチルアミン(0.52g、5.13mmol)およびアジドジフェニルホスフィン(1.11g、4.03mmol)を、tert−ブタノール(7.3mL)中の1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)シクロブタンカルボン酸(1.0g、3.65mmol)の溶液に室温で加えた。これを50℃で30分間撹拌し、90℃で一晩撹拌した。この混合物をエーテルで希釈し、この有機層を飽和炭酸水素ナトリウムおよび飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、真空中で濃縮し、残渣を得た。この残渣をカラムクロマトグラフィ[ヘキサン:エーテル/20:1]によって精製し、標記の化合物を得た(1.26g、48%)。MS(ES) m/z 368[M+23]+。
2−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−アセトアミド
(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−アセチルクロリド(3.5g、14mmol)、水酸化アンモニウム(8.8M 水溶液、50mL、0.45mmol)およびTHF(10mL)を圧力容器中で混合した。この容器を密封し、混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物をクロロホルム−IPA(3:1、100mL)で希釈した。この有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液および水で洗浄した。この混合物を硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮し、標記の化合物を白色固体として得た(3.0g、93%)。MS(ES) m/z 232/234[M+1]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)プロパン−1−アミン
トリフェニルホスフィン(2.48g、9.44mmol)およびヨウ素(2.40g、9.44mmol)の溶液を室温で10分間撹拌した。1H−イミダゾール(0.97g、14.2mmol)を加え、室温で10分間撹拌した。1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)プロパン−1−オール(1.1g、4.72mmol)を加え、室温で2時間撹拌した。DMF(5mL)中のアジ化ナトリウム(0.62g、9.44mmol)の懸濁液を加え、一晩撹拌した。DCMで希釈し、水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で黄色油状物になるまで濃縮した。
(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−N−(2−ヒドロキシエチル)−アセトアミド
塩化チオニル(1.5g、12.6mmol)を、DCM(3mL)中の(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−酢酸(0.3g、1.26mmol)の溶液に加えた。この混合物を2時間還流させた。溶媒および過剰の塩化チオニルを減圧下で除去し、中間体(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−アセチルクロリドを得た。この残渣をDCM(3mL)に溶解し、DCM(3mL)中のエタノールアミン(0.15mL、2.52mmol)の撹拌溶液に0℃で加えた。この混合物を一晩撹拌した。DCMで希釈し、飽和NaHCO3、水、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮し、標記の化合物を白色固体として得た(300mg、86%)。MS(ES) m/z 276[M+1]+。
2−アミノ−1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エタノール
シアン化トリメチルシリル(1.01mL、7.39mmol)およびヨウ化亜鉛(0.11g、0.37mmol)を、DCM(10mL)中の2−ブロモ−4−フルオロベンズアルデヒド(1.5g、7.39mmol)の溶液に加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を除去した。残渣をTHF(5mL)に溶解し、0℃まで冷却した。ボラン−THF錯体(11.1mL、11.1mmol)を加えた。この混合物を室温で3時間撹拌した。1M HClをゆっくり加え、15分間撹拌した。飽和炭酸ナトリウムを用いてpHを塩基性に調整した。DCMで抽出した。これを硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、標記の化合物を無色の油状物として得た(1.5g、86%)。MS(ES) m/z 235[M+1]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)シクロプロパンアミン
臭化エチルマグネシウム(3N、53.9mL、74.9mmol)を、エーテル(25mL)中の2−ブロモ−4−フルオロベンゾニトリル(15g、73.5mmol)およびテトライソプロポキシチタン(23mL、162mmol)の溶液に、N2下で−70℃で加えた。この温度で10分間撹拌した後、これを放置して室温まで加温させ、1時間撹拌した。三フッ化ホウ素エーテル錯体(BF3OEt2)(16.8mL、147mmol)をこの溶液にゆっくり加え、もう1時間撹拌した。1N HCl(200mL)およびエーテル(150mL)を加えた後、エーテル層を分離した。10% NaOH(150mL)を水溶液に加え、それをエーテルで抽出した。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、真空中で濃縮し、残渣を得た。この残渣をカラムクロマトグラフィ(ジエチルエーテル)によって精製し、標記の化合物を得た(7.5g、44%)。MS(ES) m/z 230[M+1]+。
tert−ブチル 1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)シクロプロピルカルバメート
NaOH(0.78g、19.5mmol)およびジ−tert−ブチルジカーボネート[(Boc)2O](4.2g、19.1mmol)を、tert−ブタノール(18mL)および水(26mL)中の1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)シクロプロピルアミン(3.5g、15.2mmol)の溶液に加えた。室温で1時間撹拌した後、この反応混合物をエーテルで抽出した。有機層を分離し、それを硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、真空中で濃縮した。この残渣をカラムクロマトグラフィ(ヘキサン/ジエチルエーテル)によって精製し、標記の化合物を得た(4.45g、89%)。1H NMR(400MHz−CDCl3)δ7.61(bs,1H),7.25(dd,J=7.6,4Hz,1H),6.95(td,J=8.4,2.4Hz,1H),5.547(s,1H),1.372(s,9H),1.1(m,2H),0.881(m,2H)。
[1−(2−ブロモ−フェニル)−エチル]−カルバミン酸 tert−ブチルエステル
ジイソプロピルエチルアミン(1.5g、12mmol)を、20mLのDCM中の1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−エチルアミン(4g、20mmol)およびジ−tert−ブチルジカーボネート(6.5g、30mmol)の溶液に加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物をクロロホルム/IPA(3/1)で希釈し、飽和塩化ナトリウム水溶液および水で洗浄し、それを硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮した。この粗生成物をカラムクロマトグラフィ(DCM中の10% メタノール)によって精製し、標記の化合物を得た(2.0g、33%)。MS(ES) m/z 244/246[M−tert−ブチル]+。
(R)−tert−ブチル 1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エチルカルバメート
(R)−tert−ブチル 1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エチルカルバメートを、キラルクロマトグラフィ(キラルセル(Chiralcel)(登録商標)OD−Hカラム:CO2中40% メタノール、0.2% イソプロピルアミン;流量、5mL/分;検出、225nm)によって分離し、標記の化合物を得た。MS(ES) m/z 478[M+1]+。振動円二色性(VCD)分光法によってキラリティを決定した。
tert−ブチル 1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エチル(メチル)カルバメート
水素化ナトリウム(0.89g、22.4mmol、鉱油中60%分散物)を、DMF(10mL)中のtert−ブチル 1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エチルカルバメート(4.75g、14.9mmol)の溶液に加えた。混合物を室温で30分間撹拌した。ヨウ化メチル(1.86mL、29.9mmol)を加えた。この混合物を室温で1時間撹拌した。酢酸エチルで希釈し、水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。カラムクロマトグラフィ(ヘキサンからヘキサン中の20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を無色の油状物として得た(4.9g、98%)。1H NMR(400MHz,CD3Cl)δ1.32(s,9H),1.45(t,J=8.0Hz,3H),2.58(s,3H),5.39(br,1H),7.00(m,1H),7.28(m,2H)。
tert−ブチル 2−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)アジリジン−1−カルボキシレート
水酸化カリウム(1.15g、17.5mmol、新しい粉末)を、乾燥THF(50mL)中のtert−ブチル 2−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)−2−ヒドロキシエチルカルバメート(1.19g、3.56mmol)およびp−トルエンスルホニルクロリド(0.75g、3.88mmol)の溶液に加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。DCMで希釈し、水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。カラムクロマトグラフィ(ヘキサンからヘキサン中の5%酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を無色の油状物として得た(0.46g、41%)。1H NMR(400MHz,CD3Cl)δ1.47(s,9H),2.08(d,J=3.2Hz,1H),2.67(d,J=5.6Hz,1H),3.59(dd,J=3.6Hz,6.0Hz,1H),7.00(m,1H),7.28(m,1H),7.35(m,1H)。
1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−3−[1,3]ジオキサン−2−イル−プロパン−1−オール
臭化(1,3−ジオキサン−2−イルエチル)マグネシウム(0.5M THF溶液、40mL、20mmol)を、THF(20mL)中の2−ブロモ−4−フルオロ−ベンズアルデヒド(3g、15mmol)の溶液に、N2下で、0℃で加えた。この混合物を室温で48時間撹拌し続けた。この反応混合物を1N HClでクエンチし、次いで希水酸化アンモニウムを用いて約pH9まで塩基性にした。生成物をクロロホルム/IPA(3/1)で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(DCM中の10% メタノール)によって精製し、標記の化合物を黄色油状物として得た(24.5g、95%)。MS(ES) m/z 319/321[M+1]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−ブタン−1,4−ジオール
1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−3−[1,3]ジオキサン−2−イル−プロパン−1−オール(4.0g、12.5mmol)および酢酸(20mL、280mmol)の混合物を100℃で30分間加熱した。この反応混合物を炭酸ナトリウム(2N)で希釈した。生成物をクロロホルム中に抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮し、中間体のアルデヒドを得た。メタノール(50mL)中の上記の中間体の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム(1.42g、37.6mmol)を加えた。この混合物を室温で1時間撹拌した。反応を希HClでクエンチした。生成物をクロロホルム中に抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮し、標記の化合物を黄色油状物として得た(2.5g、76%)。MS(ES) m/z 288[M+Na]+。
2−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−テトラヒドロ−フラン
圧力チューブ中で、1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェニル)−ブタン−1,4−ジオール(1g、3.8mmol)、銀(I)ヘキサフルオロアンチモネート(131mg、0.4mmol)、塩化白金(II)(40mg、0.2mmol)を1,2−ジクロロエタン(10mL)中で混合した。このチューブを密封し、混合物を110℃で一晩加熱した。この混合物をクロロホルム−IPA(3:1、100mL)で希釈した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液および水で洗浄した。この混合物を硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(ヘキサン中の20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を淡黄色油状物として得た(0.72g、77%)。
2−[2−(2−ブロモ−フェノキシ)−エトキシ]−テトラヒドロピラン
2−ブロモ−フェノール(10g、57.80mmol)を、DMF(6mL)中の水素化ナトリウム(鉱油中60%分散物、2.77g、69.36mmol)の懸濁液に加えた。この混合物を1時間撹拌した。2−(2−ブロモ−エトキシ)−テトラヒドロピラン(13.54g、64.74mmol)を加えた。この溶液を室温で一晩撹拌した。この混合物を酢酸エチルおよび水で希釈した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液および水で洗浄した。この混合物を硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(ヘキサン中の10% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を薄黄色油状物として得た(13.9g、80%)。MS(ES) m/z 323[M+Na]+。
[2−(2−ブロモ−フェニル)−エチル]−カルバミン酸 tert−ブチルエステル
ジ−tert−ブチルジカーボネート(2.7g、12.4mmol)を、DCM(16.5mL)中の2−ブロモフェネチルアミン(1.65g、8.25mmol)、トリエチルアミン(3.45mL、24.7mmol)および4−ジメチルアミノピリジン(DMAP)(100mg)の溶液に加え、室温で一晩撹拌した。DCMで希釈し、飽和NaHCO3、次いで飽和NH4Clで洗浄し、有機物をNa2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカのパッドに通して濾過して1:1 酢酸エチル:ヘキサンで溶出することにより精製し、標記の化合物を得た。MS(ES) m/z 244[M−tert−ブチル]−。
{2−[2−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−エチル}−カルバミン酸 tert−ブチルエステル
Pd(dppf)Cl2(71mg、84.9μmol)を、1,4−ジオキサン(11.3mL)中の[2−(2−ブロモ−フェニル)−エチル]−カルバミン酸 tert−ブチルエステル(0.85g、2.83mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(810mg、3.11mmol)、および酢酸カリウム(830mg、8.49mmol)の懸濁液に加え、100℃で5時間加熱した。室温まで冷却し、濃縮した。残渣をDCMに溶解し、シリカのパッド(30mLの半融ガラス漏斗中の1cmパッド)に通して濾過し、20mLのDCMで洗浄した。濃縮し、標記の化合物を得た。MS(ES) m/z248[M−Boc]+。
1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェノキシ)プロパン−2−オン
DMF(10mL)中の2−ブロモ−4−フルオロ−フェノール(1g、4.89mmol)およびK2CO3(1.8g、13.2mmol)の懸濁液を、氷浴中、窒素下で0℃まで冷却した。クロロアセトン(678mg、7.33mmol)を30分間かけて加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。水を加え、酢酸エチルで抽出した。この溶液を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(ヘキサンからヘキサン中の10% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を黄色油状物として得た(0.75g、59%)。1H NMR(400MHz−CDCl3)δ2.35(s,3H),4.51(s,2H),6.73(dd,J=4.8,8.8Hz,1H),6.97(m,1H),7.32(m,1H)。
1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェノキシ)−2−メチル−プロパン−2−オール
THF(4mL)中の1−(2−ブロモ−4−フルオロ−フェノキシ)−プロパン−2−オン(520mg、2.10mmol)の溶液を、氷浴中で窒素下で0℃まで冷却した。塩化メチルマグネシウム(3.0M THF溶液、0.84mL、2.53mmol)を滴下した。この混合物を0℃でさらに半時間撹拌した。水を加え、酢酸エチルで抽出した。この溶液を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(ヘキサンからヘキサン中の30% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を黄色油状物として得た(230mg、42%)。MS(ES) m/z 285[M+Na]+。
2−ブロモ−1−ブロモメチル−4−フルオロ−ベンゼン
還流冷却器を備えた丸底フラスコ中で、2−ブロモ−4−フルオロ−1−メチル−ベンゼン(15g、79.3mmol)、N−ブロモスクシンイミド(18.08g、101.6mmol)、および2,2−アゾビスイソブチロニトリル(3.9g、23.8mmol)を四塩化炭素(150mL)中で混合した。この混合物を還流状態で21時間加熱した。この混合物を冷却し、減圧下で溶媒を除去した。この粗製混合物をDCMに懸濁し、水で洗浄した。この有機物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィ(ヘキサン中の1% 酢酸エチル→ヘキサン中の10% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を油状白色固体として得た(18.5g、87%)。GCMS m/z 268[M]+。
4−(2−ブロモ−4−フルオロ−ベンジル)−モルホリン
2−ブロモ−1−ブロモメチル−4−フルオロ−ベンゼン(4g、14.9mmol)、モルホリン(2.6mL、29.8mmol)、およびジイソプロピルエチルアミン(5.2mL、29.8mmol)をアセトニトリル(10.0mL)中で混合した。この反応混合物を81℃で2時間加熱し、室温まで冷却した。溶媒を減圧下で除去した。DCMで希釈し、水、次いで飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。この有機物を硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、溶媒を減圧下で除去し、標記の化合物を得た(3.9g、95%)。LCMS(ES) m/z 274[M+1]+。
(2−ブロモ−4−フルオロベンジル)−ジメチル−アミン
2−ブロモ−4−フルオロベンズアルデヒド(5g、24.63mmol)、ジメチルアミン(2M、49.26mL、98.52mmol)および酢酸(8.47mL、147.78mmol)をDCM(50mL)中で混合し、30分間撹拌した。この混合物に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(49.26mmol、10.44g)を加え、室温で一晩撹拌した。飽和NaHCO3溶液(100mL)で洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液で乾燥し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥した。この有機物を濾過し、溶媒を減圧下で除去し、標記の化合物を茶色がかった油状物として得た(4.56g)。GCMS m/z 232[M]+。
N−(1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エチル)−2,2−ジフルオロアセトアミド
ジフルオロ酢酸(777mg、8.1mmol)を、DCM(20mL)中の1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エタンアミン(1.18g、5.4mmol)、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(1.55g、8.1mmol)、1−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(1.24g、8.1mmol)、およびトリエチルアミン(2.26mL、16.2mmol)の混合物に0℃で加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物をDCMで希釈し、水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、真空中で濃縮した。この残渣をカラムクロマトグラフィ[ヘキサン中の5%〜50% 酢酸エチル]によって精製し、標記の化合物を得た(1.06g、44%)。MS(ES) m/z 296[M+1]+。
N−(1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エチル)−2,2−ジフルオロエタンアミン
ボラン−THF錯体(10.69mL、10.7mmol)を、THF(3mL)中のN−(1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エチル)−2,2−ジフルオロアセトアミド(1.06g、3.56mmol)の溶液に加えた。この混合物を17時間還流させた。塩化水素酸(5N、8mL)でクエンチした。この溶液を1時間撹拌した。飽和NaHCO3を加えた。この混合物をDCMで希釈し、水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、真空中で濃縮し、標記の化合物を得た(0.94g、93%)。MS(ES) m/z 282[M+1]+。
2−ベンゾ[b]チオフェン−7−イル−4−フルオロ−フェノール
フラスコ中で、7−ブロモ−ベンゾ[b]チオフェン(6.53g、30.64mmol)、5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニルボロン酸(4.87g、31.26mmol)、Pd(dppf)Cl2(1.25g、1.53mmol)、2−(ジ−tert−ブチルホスフィノ)ビフェニル(0.28g、0.92mmol)、炭酸ナトリウム(2M、30.64mL、61.92mmol)をジオキサン(60mL、あるいはTHF)中で混合した。この混合物を100℃で2時間加熱した。この混合物をクロロホルム/IPA(3/1)で希釈した。この溶液を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮した。この残渣をカラムクロマトグラフィ(ヘキサンからヘキサン中の10% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を黄色固体として得た(6.0g、80%)。MS(ES) m/z 243[M−1]+。
[2−(2−ベンゾ[b]チオフェン−7−イル−フェノキシ)−エチル]−カルバミン酸 tert−ブチルエステル
水素化ナトリウム(424mg、18mmol)を、10mLのDMF中の2−ベンゾ[b]チオフェン−7−イル−フェノール(1g、4.4mmol)の溶液に加えた。この混合物を室温で1時間撹拌し、(2−ブロモ−エチル)−カルバミン酸 tert−ブチルエステル(2g、8.9mmol)を加えた。この反応混合物を室温で4時間撹拌し続けた。この混合物をクロロホルム−IPA(3:1、100mL)で希釈した。この有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液および水で洗浄した。この混合物を硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィ(ヘキサン中の20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を淡黄色固体として得た(1.4g、86%)。MS(ES) m/z 392[M+Na]+。
[2−(2−ベンゾ[b]チオフェン−7−イル−4−フルオロ−フェノキシ)−エチル]−メチル−カルバミン酸 tert−ブチルエステル
水素化ナトリウム(620mg、26mmol)を、15mLのDMF中の2−ベンゾ[b]チオフェン−7−イル−4−フルオロ−フェノール(1g、2.6mmol)の溶液に加えた。この混合物を室温で1時間撹拌し、ヨウ化メチル(3.7g、26mmol)を加えた。この反応混合物を、室温でもう4時間撹拌し続けた。この混合物をクロロホルム−IPA(3:1、100mL)で希釈した。この有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液および水で洗浄した。この混合物を硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で黄色油状物まで濃縮した。この残渣をカラムクロマトグラフィ(ヘキサン中の20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を淡黄色固体として得た(0.85g、82%)。MS(ES) m/z 424[M+Na]+。
2−クロロ−5−フルオロ−4−(7−{2−[2−(テトラヒドロ−ピラン−2−イルオキシ)−エトキシ]−フェニル}−ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)−ピリミジン
500mLの丸底フラスコ中で、THF(30mL)中の2−[2−(2−ベンゾ[b]チオフェン−7−イル−フェノキシ)−エトキシ]−テトラヒドロピラン(500mg、1.41mmol)およびトリイソプロピルボレート(530mg、2.82mmol)の溶液を、N2下で−70℃まで冷却した。この溶液に、リチウムジイソプロピルアミド(2M THF溶液、1.41mL、2.82mmol)を、30分間にわたって徐々に加えた。この混合物を続けてさらに1時間、冷却浴中で撹拌した。この混合物を、THF(20mL)中の2,4−ジクロロ−5−フルオロピリミジン(353mg、2.12mmol)、Pd(dppf)Cl2(57.6g、0.07mmol)および炭酸ナトリウム(2M 水溶液、1.8mL、3.6mmol)の還流溶液に、30分間かけて徐々に移した。さらに1時間還流させた。この混合物を室温まで冷却し、クロロホルム/IPA(3/1)および水で希釈した。この有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥した。真空中で濃縮した。残渣をFCC(ヘキサン中の20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を得た(550mg、80%)。MS(ES) m/z 507[M+Na]+。
2−(2−(5−(ヒドロキシメチル)−1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)イソインドリン−1,3−ジオン
トルエン(50mL)中の2−(2−アジドエチル)イソインドリン−1,3−ジオン(12g、55.5mmol)および2−プロピン−1−オール(3.88mL、66.6mmol)の混合物を、密封した反応器中で、90℃で3日間加熱した。室温まで冷却し、固体を集めた。カラムクロマトグラフィ(DCMからDCM中の2% メタノール)によって精製し、標記の化合物(第1の画分)を白色固体として得た(4.7g、31%)。MS(ES) m/z 273[M+1]+。
2−(2−(4−(ヨードメチル)−1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)イソインドリン−1,3−ジオン
DCM(4mL)中のトリフェニルホスフィン(0.29g、1.10mmol)およびヨウ素(0.28g、1.10mmol)の混合物を10分間撹拌した。1H−イミダゾール(0.12g、1.84mmol)を加え、10分間撹拌した。2−(2−(4−(ヒドロキシメチル)−1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)イソインドリン−1,3−ジオン(0.2g、0.73mmol)を加え、室温で一晩撹拌した。DCMで希釈し、水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を真空中で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(DCMからDCM中の20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を黄色固体として得た(0.22g、78%)。MS(ES) m/z 383[M+1]+。
2−(2−(4−メチル−1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)イソインドリン−1,3−ジオン
エタノール(10mL)中の2−(2−(4−(ヨードメチル)−1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)イソインドリン−1,3−ジオン(1g、2.62mmol)および0.2gの10% パラジウム炭素の混合物を、水素バルーンの下で一晩撹拌した。濾過して固体を除去し、濃縮した。カラムクロマトグラフィ(DCMからDCM中の20% 酢酸エチル)によって精製し、標記の化合物を黄色固体として得た(0.5g、74%)。MS(ES) m/z 257[M+1]+。
2−(2−[1,2,3]トリアゾール−1−イル−エチル)−イソインドール−1,3−ジオン
1H−1,2,3−トリアゾール(250g;3.51mol)、N−(2−ブロモエチル)フタルイミド(942g;3.52mol)および1500mLのDMFを、メカニカルスターラー、窒素導入口および温度プローブを取り付けた5L丸底フラスコに加えた。この混合物を15℃まで冷却した。すべての固体がほぼ溶解するまでこの混合物を撹拌し、次いで氷水浴中で冷却した。炭酸セシウム(1145g;3.51mol)を、10分間かけて少しずつ加えた。この反応混合物は21℃まで発熱した。この混合物を撹拌したままにし、一晩かけて室温に到らせた。この反応混合物を、8Lの氷水が入っている12Lのフラスコに注ぎ込んだ。この懸濁液を30分間撹拌し、次いで濾過し、固体を3Lの水でリンスした。2時間風乾した。位置異性体の混合物を7Lの無水エタノールから再結晶した。固体を濾過によって単離し、風乾した。16Lの無水エタノールから再度再結晶した。この固体を濾過によって単離し、新しいエタノール(1000mL)でリンスした。この固体を40℃で真空乾燥し、標記の化合物292.7g(34%)を白色固体として得た。MS(EI) m/z 243[M+1]+。
2−[1,2,3]トリアゾール−1−イル−エチルアミン
2−(2−[1,2,3]トリアゾール−1−イル−エチル)−イソインドール−1,3−ジオン(106g;437.59mmol)を、2Lの無水エタノールが入っている5L丸底フラスコ中で溶解した。撹拌した混合物を、窒素下で70℃まで加熱し、この温度で、ヒドラジン一水和物(23mL;463.76mmol;23.69g)を10分間かけて滴下した。この混合物は均一になり、色は黄色になった。この温度で約30分後、固体が反応液中で形成し始め、色は、経時的に徐々にはるかに薄い黄色になっていった。7時間後、熱を取り去り、1時間かけて室温まで冷却した。珪藻土上で濾過し、1000mLのエタノールでリンスした。半固体までエバポレートした。2LのCH2Cl2に溶解し、珪藻土上で濾過し、エバポレートした。残渣をトルエン(1500mL)で希釈し、珪藻土上で濾過し、不溶性の黄褐色の固体を除去した。エバポレートし、真空下に一晩置いた。この油状物を100mLのCH2Cl2に溶解し、珪藻土のパッドに通して濾過した。エバポレートして、43.9g(90%)の標記化合物を濁った油状物として得た。MS(EI)m/z 112[M]+。
[2−(2−{2−[5−フルオロ−2−(2−[1,2,3]トリアゾール−1−イル−エチルアミノ)−ピリミジン−4−イル]−ベンゾ[b]チオフェン−7−イル}−フェニル)−エチル]−カルバミン酸 tert−ブチルエステル
2M 炭酸ナトリウム(1.08mL、2.16mmol)の溶液を、1,4−ジオキサン(4.32mL)中の{2−[2−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−エチル}−カルバミン酸 tert−ブチルエステル(0.5g、1.08mmol)、[4−(7−ブロモ−ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)−5−フルオロ−ピリミジン−2−イル]−(2−[1,2,3]トリアゾール−1−イル−エチル)−アミン(450mg、1.08mmol)、およびPd(dppf)Cl2(45mg、53.99μmol)の懸濁液に加え、100℃で4時間加熱した。室温まで冷却し、濃縮した。残渣をDCMに懸濁させ、60mLの半融ガラス漏斗中で2cmのシリカのパッドに通して濾過した。50mLのDCMおよび50mLの(1:1 酢酸エチル/ヘキサン)で溶出した。次いで、200mLの酢酸エチルで溶出し、生成物を集めた。濃縮し、1:1 DCM/ヘキサン中の10% エタノールで溶出してシリカ上で精製し、標記の化合物を得た。MS(ES) m/z 560[M+1]+。
(9H−フルオレン−9−イル)メチル (R)−1−((R)−1−(2−(2−(2−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチルアミノ)−5−フルオロピリミジン−4−イル)ベンゾ[b]チオフェン−7−イル)−4−フルオロフェニル)エチルアミノ)−1−オキソプロパン−2−イルカルバメート
ジイソプロピルエチルアミン(43mg、335μmol)を、1,4−ジオキサン(5mL)中の(R)−N−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)−4−(7−(2−(1−アミノエチル)−5−フルオロフェニル)ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)−5−フルオロピリミジン−2−アミン(80mg、167μmol)、(9−フルオレニルメトキシカルボニル)−D−アラニンクロリド(83mg、251μmol)の溶液に加えた。この混合物を室温で3時間撹拌した。この混合物をクロロホルム/IPA(3/1、100mL)で希釈し、水/飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮した。粗生成物をFCC(溶離液として、DCM中の10% メタノール)によって精製し、標記の化合物を黄色固体として得た(129mg、100%)。MS(ES) m/z 770[M+1]+。
2−(2−(2−(2−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチルアミノ)−5−フルオロピリミジン−4−イル)ベンゾ[b]チオフェン−7−イル)フェノキシ)エタノール
N−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)−5−フルオロ−4−(7−(5−フルオロ−1H−インドール−7−イル)ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)ピリミジン−2−アミン
N−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)−4−(7−(2−(アミノメチル)フェニル)ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)−5−フルオロピリミジン−2−アミン
N−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)−5−フルオロ−4−(7−(2−((メチルアミノ)メチル)フェニル)ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)ピリミジン−2−アミン
2−((1−(2−(2−(2−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチルアミノ)−5−フルオロピリミジン−4−イル)ベンゾ[b]チオフェン−7−イル)−4−フルオロフェニル)エチル)(メチル)アミノ)エタノール
(R)−N−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)−4−(7−(2−(1−アミノエチル)−5−フルオロフェニル)ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)−5−フルオロピリミジン−2−アミン
N−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)−4−(7−(2−(2−アミノプロパン−2−イル)−5−フルオロフェニル)ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)−5−フルオロピリミジン−2−アミン
2−(2−(2−(2−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチルアミノ)−5−フルオロピリミジン−4−イル)ベンゾ[b]チオフェン−7−イル)−4−フルオロフェニル)−2−メチルプロパンアミド
(R)−N−((R)−1−(2−(2−(2−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチルアミノ)−5−フルオロピリミジン−4−イル)ベンゾ[b]チオフェン−7−イル)−4−フルオロフェニル)エチル)−2−アミノプロパンアミド
実施例88のキラル合成
(R)−N−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)−4−(7−(2−(1−アミノ−2,2,2−トリフルオロエチル)−5−フルオロベンジル)ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)−5−フルオロピリミジン−2−アミン
(S)−(−)−2−メチル−2−プロパンスルフィンアミド(15g、73.89mmol)を、1,2−ジクロロエタン(50mL)中の2−ブロモ−4−フルオロベンズアルデヒド(9.85g、81.28mmol)の撹拌混合物に室温で加えた。次いで、Ti(OEt)4(25.28g、4.78mol)をこの混合物に加え、室温で一晩撹拌した。この反応液を氷/水浴中で冷却し、水で希釈した。この反応混合物を1/2インチ(約1.3cm)のセライトのパッド上で濾過し、濾過された物質をジクロロメタン(4×150mL)で洗浄した。有機層を分離し、水層を150mLのDCMで洗浄した。有機層を合わせ、MgSO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。この残渣を、ヘキサンから8:2 ヘキサン:酢酸エチルで溶出するシリカクロマトグラフィによって精製した。所望の画分を集め、濃縮し、生成物を非常に淡い黄色油状物として得た(21.5g、95%)。GCMS m/z 305[M]+。
テトラブチルアンモニウムトリフェニルジフルオロシリケート(29.8g、55.19mmol)を、THF中の(S,E)−N−(1−(2−ブロモ−4−フルオロフェニル)エチリデン)−2−メチルプロパン−2−スルフィンアミド(13g、42.46mmol)の撹拌混合物に加えた。この混合物を約−60℃まで冷却し、(トリフルオロメチル)トリメチルシランを約10分間にわたって加えた。−55℃まで加温し、2時間撹拌した。0℃まで加温を続けた。この混合物を再度−30℃まで冷却し、飽和NH4Cl(150mL)でクエンチした。生成物を酢酸エチル(2×200mL)の中に抽出した。抽出液を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。この物質を、700gシリカ上で8:2〜1:1 ヘキサン:酢酸エチルで溶出して粗生成物へと精製した。この物質を結晶化させ、長い針状晶を得た(9.7g、91%)。MS(ES) m/z 377[M+1]+。
N−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチル)−5−フルオロ−4−(7−(5−フルオロ−1H−インドール−7−イル)ベンゾ[b]チオフェン−2−イル)ピリミジン−2−アミンについて記載した手順と同様の手順を用いて、標記の化合物を調製した。
メタノール(100mL)中の(S)−N−((R)−1−(2−((2−(2−(2−(1H−1,2,3−トリアゾール−1−イル)エチルアミノ)−5−フルオロピリミジン−4−イル)ベンゾ[b]チオフェン−7−イル)メチル)−4−フルオロフェニル)−2,2,2−トリフルオロエチル)−2−メチルプロパン−2−スルフィンアミド(10.5g、16.52mmol)およびHCl(16.52mL、66.07mmol、ジオキサン溶液)の混合物を2時間撹拌した。この混合物を濃縮し、NaOH(1N)で希釈した。生成物を酢酸エチル(150mL×3)で抽出した。この有機層を1:1 水/飽和塩化ナトリウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。この物質を加熱しながらDCM/ヘキサンに溶解し、冷却して、3時間この物質を凝固させた。固体を濾過し、標記の化合物を得た(8.1gの黄褐色固体、92%)。MS(ES) m/z 546[M+1]+。
ヒトPlk1 cDNAは、その末端の1つにHis6タグ(C末端のFLAG−His6タグなど)を発現するポリヌクレオチド配列を直接連結することができ、適切な発現ベクター(pFastBac(登録商標)ベクター(インビトロジェン(Invitrogen))などに挿入することができ、適切な系(xPlkk1についてYue−Wei Qianら、Science、282、1701(1998)によって報告されているものに類似のバキュロウイルスなど)にトランスフェクトすることができる。ウイルス発現系を使用する場合、そのウイルス(例えば、Plk1−Flag−His6タグポリヌクレオチド構築物を保有するバキュロウイルス)を、適切な宿主細胞(Sf9細胞など)の培養物の中に感染させる。十分な量のPlk1−Flag−His6タグ融合タンパク質が発現されたとき、例えば、感染後約46時間目に、その培養物をオカダ酸(0.1μM)で、十分な時間(例えば、3時間)処理するべきである。Plk1−Flag−His6タグ融合物を、金属親和性樹脂(タロン(TALON)(登録商標)など)を用い、当該技術分野で周知の方法を使用して、細胞ペレットから精製する。精製したPlk1−Flag−His6タグ融合物を、使用するまで、適切な培地(例えば、10mM HEPES、150mM NaCl、0.01% トリトン(TRITON)(登録商標) X−100、1mM ジチオトレイトール(DTT)、10% グリセロール、pH 7.5)中で、小さいアリコートにして−80℃で保存する。精製したPlk1−Flag−His6タグ融合タンパク質の特性(identity)をMALDI(マトリックス支援レーザー脱離/イオン化)によって確認する。
ヒトCdc25C cDNA(これは、任意の適切な供給源から入手してよい)は、任意の好都合な発現系で発現させることができ、その後でBin Ouyangら、Oncogene、18、6029−6036(1999)によって記載されている方法と類似の周知の方法によって精製を行う。1つの便利な系は、pGEX−2Tベクター(アマシャム(Amersham))を用いて形質転換したE.coli BL21を18℃で一晩増殖させるステップを含む。このpGEX−2Tベクターには、ヒトCds25CについてのcDNAが、1mM イソプロピル−β−D−チオガラクトピラノシドを用いる誘導発現用に遺伝子操作されている。Plk1の基質である発現したGST−Cdc25C(1−206)は、(例えば、グルタチオンセファロース(GLUTATHIONE SEPHAROSE)(登録商標)4Bによって)精製し、適切な溶液(10mM HEPES、100mM NaCl、pH 7.5など)中で、小さいアリコートにして−80℃で保存することができる。
Plk1キナーゼ反応液は、50mM HEPES、pH 7.3、1.0mM ジチオトレイトール、5.0μM ATP、10mM MgCl2、0.01% トリトン(登録商標) X−100、0.4μCi 33P−ATP、および0.06μg/μL GST−Cdc25c(1−206)ペプチドを含有する緩衝液中にPlk1−Flag−His6タグ融合酵素(0.2ng/μL)を含む。化合物は、DMSO中の10mM ストックとして準備する。10点の濃度−応答曲線を作成するために、化合物を、20% DMSO中で1:3で連続希釈し、その後で化合物の活性を測定するため、反応混合物中で1:5に希釈する(4% 最終DMSO濃度中の20μM〜0.001μMの最終濃度)。この反応を室温で60分間実施し、60μLの10.0% H3PO4を加えることによりクエンチする。この反応混合物(85μL)を30μLの10.0% H3PO4で予め濡らした96ウェルのホスホセルロースフィルタープレートに移し、室温で20−30分間インキュベートし、次いで0.5% H3PO4で3回洗浄する。ウェルを乾燥させた後、40μLのマイクロシント(MicroScint)TM20(パッカード(Packard))を加え、次いでワラックマイクロベータ(登録商標)ジェット(Wallac MICROBETA(登録商標)Jet)上でカウントする。10点の濃度−応答データからの%阻害値を、例えば、アクティビティベース(ACTIVITY BASE)(商標)ソフトウェア(IDBS)を使用して、4パラメータのロジスティック方程式を使用して、後で分析する。IC50の絶対値を、得られたカーブフィッティングから算出する。すべての例示化合物は、100nM未満のIC50を有し、IC50についての最小有意比(Minimum Significant Ratio、MSR)は3.6であったが、ただし、いずれかのラセミ混合物および/または少なくとも1種の鏡像異性体は100nM未満のIC50を有していた。例えば、実施例57のラセミ体は11nMのIC50を有していた。これは、本発明の化合物が強力なPlk1の阻害剤であることを実証する。
ヒーラー細胞を、200細胞/ウェルで96ウェルのベックマンディッキンソン(Beckman Dickinson)のバイオコート(BIOCOAT)(商標)プレートにプレーティングし、MEM(最小必須培地)中で、10%FBS (ウシ胎仔血清)とともに37℃、5% CO2で24時間インキュベートする。化合物(0.25% DMSO中)をその培地に加え、0.5μM〜0.0098μMの範囲にわたって10点で投与することによって、細胞を処置した。細胞は、その化合物に23時間曝露させた後、例えばプリファー(PREFER)(商標)定着液を用いて30分間定着させ、次いで0.1% トリトン(登録商標) X100を用いて、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)溶液中で15分間浸透させる(permeablized)。細胞をPBSで3回洗浄し、次いで50μg/mL RNAseで消化する。一次抗体、抗ホスホヒストンH3セリン10を、1% ウシ血清アルブミン(BSA)を含むPBS中1:500で、この細胞に4℃で一晩添加する。3回PBSで洗浄した後、細胞を、アレクサ(Alexa)488で標識した二次抗体とともに室温で1時間インキュベートする。再度、それらをPBSで3回洗浄し、次いで15μM ヨウ化プロピジウムを30分間加えて、核を染色する。蛍光プレートをアキュメンエクスプローラー(ACUMEN EXPLORER)(商標)[ティーティーピーラボテック社(TTP LABTECH LTD)によって製造されている、レーザー走査蛍光マイクロプレート細胞計算器(488nm アルゴンイオンレーザー励起および多数個の光電子増倍管検出を備える)]で走査し、ホスホヒストンH3、DNA量およびDNA縮合によって測定される有糸分裂細胞を測定する。画像分析は、異なる亜群の細胞を同定するために、細胞の蛍光信号に基づいて行う。pHH3(S10)陽性の細胞は、500−530nmの平均強度が閾値を上回ることで同定する。ヨウ化プロピジウム/DNAに由来する655−705nmの全強度を、個々の細胞(2N〜4N由来のDNA量を有する細胞)および細胞周期における亜群(2N細胞、4N細胞)を同定するために使用する。575−640nmのピーク強度を、4N細胞中の有糸分裂細胞を同定するためのマーカーとして使用されるDNA縮合を同定するのに使用する。アッセイ結果は、各同定した亜群の割合(%)、%pHH3、%2N、%4N、%有糸分裂および全細胞数である。EC50は、アクティビティーベース(商標)を使用して、各結果の4パラメータ・ロジスティックへのカーブフィッティングにより決定する。PHH3(s10)、DNA量、および有糸分裂について得られるEC50は、それぞれ、2.6、2.4および2.5の最小有意比(MSR)を有する。例えば、実施例57のラセミ体は、pHH3(s10)EC50=37nM、DNA量EC50=40nMおよび有糸分裂EC50=36nMを有する。
細胞増殖に対する化合物の効果は、当該技術分野で周知の細胞および細胞増殖法を使用して決定することができる(Robert C.Squatritoら、Gynecological Oncology、58、101−105、(1995))。例えば、アメリカ培養細胞系統保存機関(American Type Culture Collection)から入手することができるHCT116細胞を、96ウェルプレートに約2000細胞/ウェルで播種し、そして37℃の調湿したCO2インキュベーター中で一晩付着させてもよい。20−24時間のインキュベーション後、半対数的に連続希釈した化合物を加え、プレートをインキュベーターに戻す。適切な長さの曝露(例えば、72時間)の後、細胞増殖を、周知の方法を使用して見積もる。1つの方法では、10μLのテトラゾリウム塩(アラマーブルー(Alamar Blue)(商標)など)をその細胞プレートに加える。この色素への適切な曝露の後、蛍光(530nm励起、580nm発光)を測定する。得られるIC50は、3.1の最小有意比(MSR)を有する。例えば、実施例57のラセミ体は、119nM(n=2)の平均IC50を有する。これは、本発明の化合物が、いくつかの種類の癌を含めた増殖性障害の治療において有用であることを実証する。
Claims (10)
- 下式の化合物:
R1はメチル、メトキシ、ヒドロキシ、アミノ、クロロ、アミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)、(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)、アミノカルボニル(C1−C3アルキル)、1−((1−アミノ)エチルカルボニルアミノ)エチル、2−(N−メチルアミノ)エトキシ、2−シアノプロパ−2−イル、(2−ヒドロキシ−2−メチル)−1−プロピルオキシ、(2−ヒドロキシ)エチルアミノカルボニルメチル、(1−フルオロ)−(2−アミノ)エチル、(1−フルオロ)−(1−メチル)−(2−アミノ)エチル、ジフルオロメチル、1−((2,2−ジフルオロ)エチルアミノ)エチル、ジフルオロメチルカルボニル、トリフルオロメチルカルボニル、(1−アミノ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、(1−メチルアミノ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、(1−ヒドロキシ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、2−(アミノ)エトキシ、2−(ヒドロキシ)エトキシ、1−((N−(2−ヒドロキシ)エチル)−(N−メチル)−アミノ)(C1−C2アルキル)、4−(ヒドロキシ)ピペリジン−1−イル−メチル、1−(ピペラジン−1−イル)エチル、2−(ヒドロキシ)エチルスルホニル、1−(アミノ)シクロプロピル、1−(メチルアミノ)シクロプロピル、1−アミノ(シクロブチル)、1−アミノシクロペンタ−2−イル、シクロペンタノン−2−イル、テトラヒドロフラ−2−イル、ピロリジン−2−イル、アジリジン−2−イルまたは(モルホリン−4−イル)メチルであり、
R2は水素またはアミノであるが、ただしR2がアミノである場合、R1およびR2はフェニルに縮合したピロール環を形成するか、あるいはR1がアミノである場合、R1およびR2はフェニルに縮合したピロール環またはピリジン環のいずれかを形成することができ、
R3は水素、クロロまたはフルオロであり、
R4は水素、メチル、クロロまたはフルオロであり、
R5は水素、ヒドロキシメチルまたはメチルであり、
R6は水素、ヒドロキシメチルまたはメチルである)
またはその薬理学的に許容できる塩。 - R1がアミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)、(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)、アミノカルボニル(C1−C3アルキル)、1−((1−アミノ)エチルカルボニルアミノ)エチル、2−シアノプロパ−2−イル、(2−ヒドロキシ)エチルアミノカルボニルメチル、(1−フルオロ)−(2−アミノ)エチル、(1−フルオロ)−(1−メチル)−(2−アミノ)エチル、ジフルオロメチル、1−((2,2−ジフルオロ)エチルアミノ)エチル、(1−アミノ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、(1−メチルアミノ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、(1−ヒドロキシ)−(2,2,2−トリフルオロ)エチル、1−((N−(2−ヒドロキシ)エチル)−(N−メチル)−アミノ)(C1−C2アルキル)、4−(ヒドロキシ)ピペリジン−1−イル−メチル、1−(ピペラジン−1−イル)エチルまたは(モルホリン−4−イル)メチルである、請求項1に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
- R1がアミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)、(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)、(2−ヒドロキシ)エチルアミノカルボニルメチルまたは(モルホリン−4−イル)メチルであり、
R6が水素である、
請求項1または2に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。 - R1がアミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)、(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)または(モルホリン−4−イル)メチルであり、
R3がフルオロであり、
R4がフルオロであり、
R5が水素またはメチルであり、
R6が水素である、
請求項1から3のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。 - R1がアミノ(C1−C4アルキル)、ジメチルアミノ(C1−C2アルキル)または(C1−C2アルキル)アミノ(C1−C2アルキル)であり、
R3がフルオロであり、
R4がフルオロであり、
R5が水素またはメチルであり、
R6が水素である、
請求項1から4のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。 - R1が1−(アミノ)エチルであり、R2が水素であり、R3がフルオロであり、R4がフルオロであり、R5が水素であり、R6が水素である、請求項1から5のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
- R1が1−(アミノ)エチルであり、R2が水素であり、R3がフルオロであり、R4がフルオロであり、R5がメチルであり、R6が水素である、請求項1から5のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
- 薬理学的に許容できる担体、希釈剤または賦形剤とともに請求項1から7のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含む、医薬組成物。
- 医薬用の、請求項1から7のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
- 癌治療用の、請求項1から7のいずれか1項に記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
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