JP5189088B2 - 抗ウイルス剤 - Google Patents

Description

本発明は新規抗ウイルス剤に関する。さらに詳しくはヒドロキシチロソールを有効成分とする新規抗インフルエンザウイルス剤に関する。

インフルエンザは、インフルエンザウイルスによる感染症であり、日本では毎年冬期に流行する。インフルエンザウイルスは、エンベロープを有する一本鎖ＲＮＡウイルスで、ウイルス粒子内部では一本鎖ＲＮＡが分節構造を取り、８本の分節ＲＮＡが核タンパク質（ＮＰ）やポリメラーゼと複合体を形成している。この複合体は、ウイルス膜の内側を裏打ちしているマトリックスタンパク質１（Ｍ１）と結合することで安定化される。
インフルエンザウイルスは、ＮＰとＭ１の抗原性の違いによりＡ、Ｂ、Ｃの三つの型に分類される。さらにＡ型ウイルスは、ウイルス膜上のタンパク質である赤血球凝集素（ＨＡ）とノイラミニダーゼ（ＮＡ）の抗原性の違いにより、ＨＡ１６種類（Ｈ１〜Ｈ１６）、ＮＡ９種類（Ｎ１〜Ｎ９）の亜型に分類される。また、Ａ型ウイルスには、ヒト、水禽、ブタ、ウマの各動物に特有のウイルスが存在するが、各動物種のウイルスは他の動物種には感染しないと考えられており、ヒトに感染するものとしては、Ｈ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２の亜型が知られていた。しかしながら、１９９７年には香港で高病原性トリインフルエンザウイルスＨ５Ｎ１亜型のヒトへの感染が確認され、当該ウイルス感染への対策についても必要性が高まっている。

インフルエンザ予防の基本はワクチン接種であるが、インフルエンザワクチンの発病防止効果は通常でも７０〜９０％であり、高齢者ではさらに低下する。また、抗原変異のためにワクチンの効果が減弱することもある。
一方、近年、種々の抗ウイルス剤も開発が進められ、アマンタジン、ノイラミニダーゼ阻害剤のザナミヴィル、オセルタミヴィル等が知られている。抗ウイルス剤は、インフルエンザウイルスの変異に影響を受けないという利点があるが、インフルエンザの型によって効果の程度が異なり、また、ある種の副作用が認められる等の問題もあるため、より安全かつ有効な抗ウイルス剤が求められている。

ところで、特開２００２−２０３０５号公報（特許文献１）には、オリーブ属植物の葉成分の抽出物とミカン属植物の種子成分を含む組成物が、インフルエンザ感染の死亡率を減少させることが記載されている。
オリーブ葉、またはその抽出物の作用については、特開２００４−１６１６７６号公報（特許文献２）に、レジオネラ菌等への抗菌作用が記載されている。また、オリーブに含まれるオレウロペインおよびその誘導体に、Haemophilus influenzaeその他の細菌に対して、抗菌作用を示すことが記載され（非特許文献１）、特開平８−１１９８２５号公報（特許文献３）には、オレウロペインの誘導体であるヒドロキシチロソールのメラニン生成抑制効果や過酸化脂質生成抑制効果が記載され、ヒドロキシチロソールを含む皮膚外用剤や浴用剤が提案されている。

特表２００５−５１７０３３号公報（特許文献４）には、オレウロペインとヒドロキシチロソールの混合物を投与することを含むエイズ関連神経疾患、炎症、炎症関連疾患の処置方法が記載されている（例えば段落００３６）。一方、特表２００４−５２３４６８号公報（特許文献５）及び特表２００５−５３２３９８号公報（特許文献６）に記載された発明は、オリーブ植物水からヒドロキシチロソール富化組成物を製造する方法に関するものであり、これらの文献には、オリーブから得られるヒドロキシチロソールが抗ウイルス薬として使用され得ることが一行記載されているものの（それぞれ段落００３８、段落００４０）、どのようなウイルスに効果があるのか等具体的なことは記載されていない。

特開２００２−２０３０５号公報 特開２００４−１６１６７６号公報 特開平８−１１９８２５号公報 特表２００５−５１７０３３号公報 特表２００４−５２３４６８号公報 特表２００５−５３２３９８号公報 Journal of Pharmacy and Pharmacology, Volume 51, Number 8, 1 August 1999, pp. 971-974(4)

本発明は、安全性の高い新規な抗インフルエンザウイルス剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意検討を重ねた結果、オリーブ抽出物に含まれる成分の中でも、ヒドロキシチロソールが、インフルエンザウイルスに対する高い不活化効果を有し、また細胞毒性も低いことを見出し、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は、
〔１〕ヒドロキシチロソールを有効成分として含有する抗インフルエンザウイルス剤；
〔２〕前記インフルエンザウイルスが、ヒトまたはトリインフルエンザウイルスである上記〔１〕に記載の抗インフルエンザウイルス剤；
〔３〕前記トリインフルエンザウイルスが、Ｈ５Ｎ１亜型トリインフルエンザＡウイルスである上記〔２〕に記載の抗インフルエンザウイルス剤；
〔４〕前記ヒトインフルエンザウイルスが、Ｈ１Ｎ１亜型またはＨ３Ｎ２亜型ヒトインフルエンザＡウイルスである請求項２に記載の抗インフルエンザウイルス剤；および、
〔５〕前記〔１〕〜〔４〕のいずれか１項に記載の抗インフルエンザウイルス剤を含有する食品、に関する。

本発明は、ヒドロキシチロソールについて、抗インフルエンザウイルス剤の有効成分とするという新規な有用性および用途を提供する。ヒドロキシチロソールはオリーブの葉、実、茎、根等にも含まれる成分であることから、ヒトや動物に対する安全性が高く、本発明の抗インフルエンザウイルス剤は食品として摂取されることも可能である。

本発明に係る抗インフルエンザウイルス剤は、ヒドロキシチロソールを有効成分として含む。
本発明に係る抗インフルエンザウイルス剤に用いるヒドロキシチロソールは、オリーブ葉抽出物等の天然物からの抽出物、当該抽出物を精製したもの、または化学的に合成されたもののいずれであってもよい。

本発明に係る抗インフルエンザウイルス剤は、医薬品、健康食品、動物用飼料等として使用することができる。標準的な摂取量は１日当たり、０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは０．１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは１〜２００ｍｇ／ｋｇ体重である。

本発明に係る抗インフルエンザウイルス剤は、インフルエンザウイルスに感染した対象に治療を目的として投与してもよく、また予防剤として、健康な人が摂取してもよい。

本発明に係る抗インフルエンザウイルス剤は、そのまま摂取してもよく、食品、飼料、飲料中に混合してもよい。また、適宜添加剤を使用して公知の方法により製剤化することもできる。製剤化の例としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ、チュアブル、トローチ等の経口剤、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、貼付剤等の外用剤、注射剤、舌下剤、吸入剤、点眼剤、坐剤等を挙げることができる。

上記添加剤としては、一般的に使用される賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、矯味矯臭剤、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤、吸収促進剤等を挙げることができる。

上記賦形剤としては、例えばトウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α化デンプン、デキストリン、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、エリスリトール、マルチトール、ソルビトール、トレハロース、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム等を挙げることができる。

上記結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、アラビアガム、トラガント、ゼラチン、セラック等を挙げることができる。

上記滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、タルク等を挙げることができる。

上記崩壊剤としては、例えば結晶セルロース、寒天、ゼラチン、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、ペクチン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスポビドン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム等を挙げることができる。

上記着色剤としては、例えば三二酸化鉄、黄色三二酸化鉄、カルミン、カラメル、β−カロチン、酸化チタン、タルク、リン酸リボフラビンナトリウム、黄色アルミニウムレーキ等を挙げることができる。

上記矯味矯臭剤としては、例えばココア末、ハッカ油、メントール、レモン油、竜脳、桂皮末、アスコルビン酸、酒石酸、リンゴ酸、アスパルテーム、アセスルファムカリウム等を挙げることができる。

上記乳化剤または海面活性剤としては、例えばステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、モノステアリン酸グリセリン、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル等を挙げることができる。

上記溶解補助剤としては、例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコール、安息香酸ベンジル、エタノール、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド等を挙げることができる。

上記懸濁化剤としては、前記界面活性剤の他、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子等を挙げることができる。

上記等張化剤としては、例えばブドウ糖、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール等を挙げることができる。

上記緩衝剤としては、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩等の緩衝液を挙げることができる。

上記防腐剤としては、例えばメチルパラベン、プロピルパラベン、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等を挙げることができる。

上記抗酸化剤としては、例えば亜硫酸塩、アスコルビン酸、トコフェロール等を挙げることができる。

上記安定化剤としては、例えばアスコルビン酸、エデト酸ナトリウム、エリソスビン酸、トコフェロール等を挙げることができる。

上記吸収促進剤としては、ミリスチン酸イソプロピル、トコフェロール、カルシフェロール等を挙げることができる。

本発明に係る抗インフルエンザ剤が対象とするインフルエンザウイルスは特に限定されないが、ヒトまたはトリインフルエンザ、特にＨ５Ｎ１亜型トリインフルエンザＡウイルス、Ｈ１Ｎ１亜型またはＨ３Ｎ２亜型ヒトインフルエンザＡウイルスに対して高い効果を示す。

以下、本発明を実施例によって更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら制限されるものではない。
＜１．ヒドロキシチロソールのトリインフルエンザウイルスに対する効果＞
以下のヒドロキシチロソール（１）および（２）のトリインフルエンザウイルス（Ｈ５Ｎ１亜型、A/chicken/Yamaguchi/7/04）感染に対する抗ウイルス効果を調べた。
（１）ＨＴ２０群：ヒドロキシチロソール含有量２２．３％
（２）ＨＴ１００群：ヒドロキシチロソール含有量９８．３％

上記のヒドロキシチロソールをそれぞれ２ｍｇ／ｍｌの濃度となるように滅菌リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）で調製し、ポアサイズ０．２２μｍのメンブレンフィルターで濾過した。
トリインフルエンザウイルスを１０日齢の発育鶏卵の尿膜腔内に接種し、３７.５℃の
条件下で３日間培養した。その後、尿膜腔液を５０００ＲＰＭ、２０分間の条件で遠心分離し、上清をウイルス液とした。
各群のヒドロキシチロソール液およびウイルス液を等量ずつ混和（ヒドロキシチロソールの最終濃度１ｍｇ／ｍｌ）し、室温で２４時間放置した。

トリインフルエンザウイルスおよび各群のヒドロキシチロソールの混合液を１０倍段階希釈し、９６ウェル・マイクロプレートで培養したＭＤＣＫ細胞に接種した。各希釈列は、それぞれ４ウェルの細胞に接種した。
ウイルス−ヒドロキシチロソール混合液を細胞に接種し、５日間培養後、顕微鏡で細胞の変性を観察し、ウイルス感染価（５０％組織培養感染量、ＴＣＩＤ５０）を算出した。
トリインフルエンザウイルスの実験結果を表１に示す。表中の分数は、ウイルスが増殖したウェル数／接種ウェル数を示し、例えば「４／４」は、接種した４つのウェルのうち、すべてにおいてウイルスの増殖が見られたことを表す。

ＨＴ１００群において、著しいウイルス感染価の低下が認められた。また、ＨＴ２０群においても感染価は低下した。

＜２．ヒドロキシチロソールのトリインフルエンザウイルスに対する効果＞
ヒドロキシチロソール（含有量９８．３％）を２、１、０．５、０．２５および０．１２５ｍｇ／ｍｌの濃度となるように滅菌リン酸緩衝食塩水で調製した。
上記と同様に、Ｈ５Ｎ１亜型高病原性トリインフルエンザウイルスを使用してウイルス液を調製した。
ヒドロキシチロソール液とウイルス液を等量ずつ混和し、室温で２４時間放置した。
その後、ウイルス−ヒドロキシチロソール混合液を１０倍段階希釈し、ＭＤＣＫ細胞に接種した。それぞれの希釈列を細胞に接種し、５日間培養後、顕微鏡で細胞変性を観察し、０．１ｍｌあたりのウイルス感染価（５０％細胞培養感染量、ＴＣＩＤ₅₀）を算出した。その実験結果を表２に示す。

＜３．ヒドロキシチロソールのヒトインフルエンザウイルスに対する効果＞
ヒドロキシチロソール（含有量９８．３％）を２ｍｇ／ｍｌの濃度となるように滅菌リン酸緩衝食塩水で調製した。
上記と同様に、Ｈ１Ｎ１亜型（ソ連型）およびＨ３Ｎ２亜型（香港型）インフルエンザウイルスを使用してウイルス液を調製した。
ヒドロキシチロソール液とウイルス液を等量ずつ混和し、室温で２４時間放置した。
その後、ウイルス−ヒドロキシチロソール混合液を１０倍段階希釈し、ＭＤＣＫ細胞に接種した。それぞれの希釈列を細胞に接種し、５日間培養後、顕微鏡で細胞変性を観察し、０．１ｍｌあたりのウイルス感染価（５０％細胞培養感染量、ＴＣＩＤ₅₀）を算出した。その実験結果を表３に示す。

以上より、ヒドロキシチロソールは、トリインフルエンザウイルスに対して、濃度依存的に、高い不活化効果を示すことが明らかとなった。また、ヒトインフルエンザウイルスに対しても、高い不活化効果を示すことが明らかとなった。

Claims (4)

1. ヒドロキシチロソールを有効成分として含有する抗インフルエンザウイルス剤。
2. 前記インフルエンザウイルスが、ヒトまたはトリインフルエンザウイルスである請求項１に記載の抗インフルエンザウイルス剤。
3. 前記トリインフルエンザウイルスが、Ｈ５Ｎ１亜型トリインフルエンザＡウイルスである請求項２に記載の抗インフルエンザウイルス剤。
4. 前記ヒトインフルエンザウイルスが、Ｈ１Ｎ１亜型またはＨ３Ｎ２亜型ヒトインフルエンザＡウイルスである請求項２に記載の抗インフルエンザウイルス剤。