JP5178049B2 - 標的物質検出素子、標的物質検出装置、及び標的物質検出方法 - Google Patents
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Description
同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を同時に検出するための標的物質検出素子であって、
基材と、該基材の表面に設けられた2種類以上の金属構造体と、該2種類以上の金属構造体それぞれの表面に設けられた標的物質捕捉体と、を有し、
前記金属構造体の種類の数は前記標的物質の種類の数以上であることを特徴とする標的物質検出素子である。
前記2種類以上の金属構造体は、同一の種類に属する金属構造体ごとに独立して配置されていることが好ましい。
同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を検出する標的物質検出装置であって、
前記標的物質検出装置が、
標的物質検出素子と、
標的物質を含む検体を前記標的物質検出素子に接触させる反応機構と、
標的物質検出素子に光を照射するための光源と、
前記標的物質検出素子からの検出シグナルを検出する検出部と、
前記検出シグナルを解析して前記標的物質の定量を行うための解析部と、
を少なくとも有し、
前記標的物質検出素子は、基材と、該基材の表面に設けられた2種類以上の金属構造体と、該2種類以上の金属構造体それぞれの表面に設けられた前記標的物質捕捉体とを有する標的物質検出素子であり、
前記検出部は、前記検体と接触させた前記標的物質検出素子からの出射光のスペクトルを取得した上で、前記スペクトルを前記金属構造体の種類ごとに分別してスペクトルピークを特定し、前記検体接触前後における前記金属構造体の種類毎の前記スペクトルピークの変化を検出シグナルとして取得する検出部であり、
前記解析部は、前記金属構造体の種類ごとに分別して検出された検出シグナルを統合して解析し、前記標的物質の濃度を前記標的物質の種類ごとに算出する解析部であることを特徴とする標的物質検出装置である。
前記金属構造体の種類の数が、前記標的物質の種類の数以上であることが好ましい。
前記検出部が、局在表面プラズモン共鳴を用いて検出する検出部であることが好ましい。
前記解析部が、多元連立方程式を利用して前記標的物質の濃度を算出する解析部であることが好ましい。
同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を同時に検出するための標的物質検出方法であって、基材と該基材の表面に設けられた2種類以上の金属構造体と該2種類以上の金属構造体それぞれの表面に設けられた標的物質捕捉体とを有する標的物質検出素子に、
前記複数の互いに種類が異なる標的物質を含む検体を接触させる工程と、
前記標的物質検出素子に光を照射する工程と、
前記標的物質検出素子からの出射光のスペクトルを取得する工程と、
前記スペクトルを前記金属構造体の種類ごとに分別してスペクトルピークを特定し、前記検体接触前後における前記金属構造体の種類毎の前記スペクトルピークの変化を検出シグナルとして取得する検出工程と、
前記金属構造体の種類ごとに分別して検出された検出シグナルを統合して解析し、
前記標的物質の濃度を前記標的物質の種類ごとに算出する解析工程と、
を有することを特徴とする標的物質検出方法である。
前記金属構造体の種類の数が、前記標的物質の種類の数以上であることが好ましい。
同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を同時に検出するための標的物質検出方法であって、基材と該基材の表面に設けられた、光共鳴モードを複数有する金属構造体と該金属構造体の表面に設けられた標的物質捕捉体とを有する標的物質検出素子に、前記同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を含む検体を接触させる工程と、前記標的物質検出素子に入射光を照射する工程と、前記標的物質検出素子からの出射光のスペクトルを取得する工程と、前記スペクトルから前記複数の光共鳴モードのうち特定の共鳴モードに対応する複数のスペクトルピークを特定し前記複数のスペクトルピークの検体接触前後での変化をスペクトルのピーク毎に検出シグナルとして取得する検出工程と、前記検出シグナルから前記標的物質の濃度を前記標的物質の種類ごとに算出する解析工程と、を有することを特徴とする標的物質検出方法である。
前記解析工程が、既知濃度の前記標的物質含有溶液により予め求めておいた検量用データにしたがって前記標的物質の濃度を算出する工程であることが好ましい。
前記解析工程が、多元連立方程式を利用して前記標的物質の濃度を算出する工程であることが好ましい。
前記2種類以上の金属構造体が、同一の種類に属する金属構造体ごとに独立して配置されていることが好ましい。
標的物質検出素子と、該標的物質検出素子を保持するための保持部と、
前記標的物質検出素子から得られる検出シグナルを検出するための検出部と、
前記検出シグナルを解析して前記標的物質の定量分析を行うための解析部とを少なくとも有する複数種類の標的物質を検出する標的物質検出装置であって、
前記標的物質検出素子は、基材と、該基材の表面に設けられた2種類以上の金属構造体と、該2種類以上の金属構造体それぞれの表面に設けられた前記標的物質捕捉体とを有する標的物質検出素子であり、
前記検出部は、前記標的物質検出素子が有する前記金属構造体の種類ごとに検出シグナルを分別して検出することが可能な検出部であり、
前記解析部は、前記金属構造体の種類ごとに分別して検出された検出シグナルを統合して解析し、前記標的物質の濃度を前記標的物質の種類ごとに算出する解析部であることを特徴とする標的物質検出装置である。
前記解析部は、既知濃度の前記標的物質含有溶液により予め求めておいた検量用データにしたがって前記標的物質の濃度を算出する解析部であることが好ましい。
前記解析部は、多元連立方程式を利用して前記標的物質の濃度を算出する解析部であることが好ましい。
複数の互いに種類が異なる標的物質を同時に検出するための標的物質検出方法であって、
基材と該基材の表面に設けられた2種類以上の金属構造体と該2種類以上の金属構造体それぞれの表面に設けられた標的物質捕捉体とを有する標的物質検出素子に、
前記複数の互いに種類が異なる標的物質を含む検体を接触させる工程と、
前記標的物質検出素子に光を照射する工程と、
前記標的物質検出素子から得られる検出シグナルを前記標的物質検出素子が有する前記金属構造体の種類ごとに検出シグナルを分別して検出する工程と、
前記金属構造体の種類ごとに分別して検出された検出シグナルを統合して解析し、前記標的物質の濃度を前記標的物質の種類ごとに算出する解析工程と、
を有することを特徴とする標的物質検出方法である。
前記検出工程は、局在表面プラズモン共鳴を用いて検出する検出工程であることが好ましい。
前記解析工程は、既知濃度の前記標的物質含有溶液により予め求めておいた検量用データにしたがって前記標的物質の濃度を算出する工程であることが好ましい。
前記解析工程は、多元連立方程式を利用して前記標的物質の濃度を算出する工程であることが好ましい。
(標的物質検出素子)
図7は本発明の第1実施形態における検出素子の概念図を示している。
その製造方法の一例を図5に示す。
金属構造体表面に固定化された標的物質捕捉体は標的物質を特異的に捕捉できるものであれば何でも良い。
次に、前記検出素子を用いた標的物質検出装置および検出方法について図9および図10を用いて説明する。
まず検出装置について説明する。
また、インレット5、アウトレット6はそれぞれ送液ポンプ16、廃液リザーバ17に接続される。
続いて、検出方法について説明する。
f1(X1)+f2(X2)+f3(X3)+・・・+fn(Xn)=A (1)
但し、
fn(Xn):ある種類αに属する金属構造体からなる検出素子において、第nの標的物質の濃度がXnである際の濃度応答性を表す関数
Xn:第nの標的物質の濃度
A:ある種類αに属する金属構造体からなる検出素子から得られるシグナル
である。
g1(X1)+g2(X2)+g3(X3)+・・・+gn(Xn)=B (2)
但し、
gn(Xn):ある種類βに属する金属構造体からなる検出素子において、第nの標的物質の濃度がXnである際の濃度応答性を表す関数
Xn:第nの標的物質の濃度
B:ある種類βに属する金属構造体からなる検出素子から得られるシグナル
である。
次に本発明の第2実施形態について述べる。
本実施形態では、入射光は共鳴波長のピークを検出するのに十分な広域帯の波長を有する。また、複数の光共鳴モードを同時に共鳴させる場合には、入射光は無偏光の光とし、特定の光共鳴モードを選択的に共鳴させる場合には各光共鳴モードに対応した直線偏光を入射する。なお、図21(a)に示すように光の電場の振動方向が、特定の一方向のみに振動している光が直線偏光の光である。また、図21(c)に示すように電場の振動方向が、光の進行方向に対し、垂直な平面内の全方向に振動している光が無偏光の光である。
本実施形態の検出素子は、金属構造体の形状が第一の実施形態とは異なり、光共鳴モードを複数有する。
前記金属構造体に前記入射光を入射させることにより、第1の実施形態と同様、2つの検出感度の異なる局在表面プラズモン共鳴を生じさせることができる(図17)。
図11に本実施例で用いた検出素子の構造の概略を示す。2種類の大きさの金コロイドは、2cが直径40nmであり、2dが直径100nm(英国BBI社製)であった。基板は、KBM903により表面修飾された石英ガラス基板(信越化学工業株式会社製)とし、前記金コロイド溶液を検出部に一昼夜浸漬して固定化した。次に、標的物質捕捉体の代わりに、モデル系として、微粒子近傍の誘電体としてポリメチルメタクリレート樹脂(PMMA)をスピンコート法によって製膜し、局在表面プラズモン共鳴によるピーク波長のPMMA膜厚依存性を確認した(図12)。なお、PMMA樹脂はアニソールに溶解して用いた。
図13に本実施例で用いた検出装置の構造の概略を示す。厚さ625μmの石英板である基材1上に、膜厚20nmの金薄膜を形成した。この金薄膜に電子線描画装置を用いて正方形状の金属構造体2eのパターニングを行なった。この際、各金属構造体は、250nmのスペースを開けてアレイ状に配置し、3mm×3mmの領域で基材に配置した。また、別の基材1上に前記金属構造体とは異なる種類のリング形状の金属構造体2fを同様の方法で作製した。図14に、作製した2種類の金属構造体を有する基材の走査型電子顕微鏡(SEM)画像を示す。金属構造体の平面形状の外形はSEM画像から、(イ)100nm×100nm及び(ロ)200nm×200nmの大きさの正方形状であることを確認した。また、(ロ)は図14に示すようにリング構造を有しており、リングの帯幅は70nmであった。なお、解像性の高低により、形状は、多少丸みを帯びることはある。
次に、これらの金属構造体を表面に有する基材を用いた検出方法について説明する。
以上により、表面に抗ADDL抗体を有する二種類の検出素子を作製することができる。
(1)作製した素子に標的物質であるADDLを含んだ検体をインレット5より導入し、ADDLを金属構造体が有する捕捉体に捕捉させる。
(2)検体を排出し、リン酸緩衝液をインレット5より導入し、反応ウェル7内部を洗浄する。
(3)最後にリン酸緩衝液を充填した後、光を照射して金の構造体の吸収スペクトルを測定する。
200nm角素子ピークシフト量或はピーク強度変化:aX+bY
100nm角素子ピークシフト量或はピーク強度変化:cX+dY
但し、a、b、c、d:既知濃度のADDLより決定した係数
X、Y:2種類のサイズのADDL未知濃度
(実施例2)
図18に本実施例で用いた検出装置の構造の概略を示す。厚さ625μmの石英板である基材1上に、膜厚20nmの金薄膜を形成した。この金薄膜に電子線描画装置を用いて長方形状を有する金の構造体2hのパターニングを行なった。この際、各構造体は、600nmのスペースを開けてアレイ状に配置し、3mm×3mmの領域で基材に配置した。図19に、作製した金の構造体を有する基材の走査型電子顕微鏡(SEM)画像を示す。金の構造体の平面形状の外形はSEM画像から、300nm×100nmの大きさの長方形形状であることを確認した。なお、解像性の高低により、形状は、多少丸みを帯びることはある。本実施例の金属構造体の吸収スペクトルは、純水中に存在する際に、無偏光の広帯域な光を当てると650nm近傍及び1400nm近傍に特徴的な吸収ピークが観察される。
以上により、表面に抗ADDL抗体を有する検出素子を作製することができる。
(1)作製した素子に標的物質であるADDLを含んだ検体をインレット5より導入し、ADDLを金属構造体が有する捕捉体に捕捉させる。
(2)検体を排出し、リン酸緩衝液をインレット5より導入し、反応ウェル7内部を洗浄する。
(3)最後にリン酸緩衝液を充填した後に無偏光の広帯域な光を照射し、金の構造体の吸収スペクトルを測定する。
Aの振動方向の電場によって生じるスペクトルピークのシフト量或はピーク強度変化:
aX+bY
Bの振動方向の電場によって生じるピークシフト量或はピーク強度変化:cX+dY
但し、a、b、c、d:既知濃度のADDLより決定した係数
X、Y:2種類のサイズのADDL未知濃度
2 金属構造体
2a 金属構造体(大)
2b 金属構造体(小)
2c 40nmの金属構造体
2d 100nmの金属構造体
2e 正方形状の金属構造体
2f リング形状の金属構造体
3 標的物質捕捉体
4 標的物質
4a 標的物質(大)
4b 標的物質(小)
5 インレット
6 アウトレット
7 反応ウェル
8 検出素子
9 検出可能領域
10 流路
11 基板
12 金属膜
13 電子線レジスト膜
14 光源ユニット
15 光検出装置
16 送液ポンプ
17 廃液リザーバ
18 中央演算装置
19 表示ユニット
20 入力ユニット
21 HDD
22 RAM
23 コリメーターレンズ
24 端部
25 端部
Claims (17)
- 同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を同時に検出するための標的物質検出素子であって、基材と、該基材の表面に設けられた2種類以上の金属構造体と、該2種類以上の金属構造体それぞれの表面に設けられた標的物質捕捉体と、を有し、
前記金属構造体の種類の数は前記標的物質の種類の数以上であることを特徴とする標的物質検出素子。 - 前記金属構造体のうち、互いに種類が異なるものは、互いに形状もしくは材質が異なることを特徴とする請求項1に記載の標的物質検出素子。
- 前記2種類以上の金属構造体は、同一の種類に属する金属構造体ごとに独立して配置されていることを特徴とする請求項1または2に記載の標的物質検出素子。
- 同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を検出する標的物質検出装置であって、
前記標的物質検出装置が、
標的物質検出素子と、
標的物質を含む検体を前記標的物質検出素子に接触させる反応機構と、
標的物質検出素子に光を照射するための光源と、
前記標的物質検出素子からの検出シグナルを検出する検出部と、
前記検出シグナルを解析して前記標的物質の定量を行うための解析部と、を少なくとも有し、
前記標的物質検出素子は、基材と、該基材の表面に設けられた2種類以上の金属構造体と、該2種類以上の金属構造体それぞれの表面に設けられた標的物質捕捉体とを有する標的物質検出素子であり、
前記検出部は、前記検体と接触させた前記標的物質検出素子からの出射光のスペクトルを取得した上で、前記スペクトルを前記金属構造体の種類ごとに分別してスペクトルピークを特定し、前記検体接触前後における前記金属構造体の種類毎の前記スペクトルピークの変化を検出シグナルとして取得する検出部であり、
前記解析部は、前記金属構造体の種類ごとに分別して検出された検出シグナルを統合して解析し、前記標的物質の濃度を前記標的物質の種類ごとに算出する解析部であることを特徴とする標的物質検出装置。 - 前記金属構造体の種類の数が、前記標的物質の種類の数以上であることを特徴とする請求項4に記載の標的物質検出装置。
- 前記検出部が、局在表面プラズモン共鳴を用いて検出する検出部であることを特徴とする請求項4または5に記載の標的物質検出装置。
- 前記解析部が、既知濃度の前記標的物質含有溶液により予め求めておいた検量用データにしたがって前記標的物質の濃度を算出する解析部であることを特徴とする請求項4〜6のいずれかに記載の標的物質検出装置。
- 前記解析部が、多元連立方程式を利用して前記標的物質の濃度を算出する解析部であることを特徴とする請求項5〜7のいずれかに記載の標的物質検出装置。
- 同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を同時に検出するための標的物質検出方法であって、
基材と該基材の表面に設けられた2種類以上の金属構造体と該2種類以上の金属構造体それぞれの表面に設けられた標的物質捕捉体とを有する標的物質検出素子に、
前記同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を含む検体を接触させる工程と、
前記標的物質検出素子に光を照射する工程と、
前記標的物質検出素子からの出射光のスペクトルを取得する工程と、
前記スペクトルを前記金属構造体の種類ごとに分別してスペクトルピークを特定し、前記検体接触前後における前記金属構造体の種類毎の前記スペクトルピークの変化を検出シグナルとして取得する検出工程と、
前記金属構造体の種類ごとに分別して検出された検出シグナルを統合して解析し、前記標的物質の濃度を前記標的物質の種類ごとに算出する解析工程と、
を有することを特徴とする標的物質検出方法。 - 前記金属構造体の種類の数が、前記標的物質の種類の数以上であることを特徴とする請求項9に記載の標的物質検出方法。
- 前記検出工程が、局在表面プラズモン共鳴を用いて検出する検出工程であることを特徴とする請求項9または10に記載の標的物質検出方法。
- 前記解析工程が、既知濃度の前記標的物質含有溶液により予め求めておいた検量用データにしたがって前記標的物質の濃度を算出する工程であることを特徴とする請求項9〜11のいずれかに記載の標的物質検出方法。
- 前記解析工程が、多元連立方程式を利用して前記標的物質の濃度を算出する工程であることを特徴とする請求項9〜12のいずれかに記載の標的物質検出方法。
- 同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を同時に検出するための標的物質検出方法であって、基材と該基材の表面に設けられた、光共鳴モードを複数有する金属構造体と該金属構造体の表面に設けられた標的物質捕捉体とを有する標的物質検出素子に、前記同一の認識部位を有する複数種類の標的物質を含む検体を接触させる工程と、前記標的物質検出素子に入射光を照射する工程と、前記標的物質検出素子からの出射光のスペクトルを取得する工程と、前記スペクトルから前記複数の光共鳴モードのうち特定の共鳴モードに対応する複数のスペクトルピークを特定し前記複数のスペクトルピークの検体接触前後での変化をスペクトルのピーク毎に検出シグナルとして取得する検出工程と、前記検出シグナルから前記標的物質の濃度を前記標的物質の種類ごとに算出する解析工程と、を有することを特徴とする標的物質検出方法。
- 前記検出工程が、局在表面プラズモン共鳴を用いて検出する検出工程であることを特徴とする請求項14に記載の標的物質検出方法。
- 前記解析工程が、既知濃度の前記標的物質含有溶液により予め求めておいた検量用データにしたがって前記標的物質の濃度を算出する工程であることを特徴とする請求項14または15に記載の標的物質検出方法。
- 前記解析工程が、多元連立方程式を利用して前記標的物質の濃度を算出する工程であることを特徴とする請求項14〜16のいずれかに記載の標的物質検出方法。
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