JP5160534B2 - 低免疫原性および長時間循環性タンパク質−脂質複合体の組成物 - Google Patents
低免疫原性および長時間循環性タンパク質−脂質複合体の組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5160534B2 JP5160534B2 JP2009503092A JP2009503092A JP5160534B2 JP 5160534 B2 JP5160534 B2 JP 5160534B2 JP 2009503092 A JP2009503092 A JP 2009503092A JP 2009503092 A JP2009503092 A JP 2009503092A JP 5160534 B2 JP5160534 B2 JP 5160534B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lipid
- protein
- factor
- composition
- particles
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 110
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 110
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 89
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 claims abstract description 66
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 42
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 26
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 108
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 49
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 48
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims description 8
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims description 8
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 claims description 8
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 claims description 8
- 238000004513 sizing Methods 0.000 claims description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 7
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 claims description 7
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 claims description 7
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 claims description 7
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims description 7
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 claims description 7
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 claims description 7
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 claims description 7
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 claims description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 claims description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 5
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 claims description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 5
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 claims description 4
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 3
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 3
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 claims description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 3
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 claims description 2
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 claims description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 63
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 25
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 23
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 22
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 description 22
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 17
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 14
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- -1 anionic phospholipids Chemical class 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 6
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 6
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 6
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 6
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 6
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 6
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 6
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 5
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 5
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 5
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 5
- RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N simvastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)C(C)(C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N 0.000 description 5
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 5
- 102000002110 C2 domains Human genes 0.000 description 4
- 108050009459 C2 domains Proteins 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- JHDGGIDITFLRJY-UHFFFAOYSA-N laurdan Chemical compound C1=C(N(C)C)C=CC2=CC(C(=O)CCCCCCCCCCC)=CC=C21 JHDGGIDITFLRJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 4
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 4
- 238000007811 spectroscopic assay Methods 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 3
- IJRKANNOPXMZSG-SSPAHAAFSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O IJRKANNOPXMZSG-SSPAHAAFSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 3
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000004576 lipid-binding Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 3
- 210000005164 penile vein Anatomy 0.000 description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001479434 Agfa Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010089996 B-domain-deleted factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010054265 Factor VIIa Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000446313 Lamella Species 0.000 description 1
- 241001123862 Mico Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101000882917 Penaeus paulensis Hemolymph clottable protein Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-ZDFGOMNRSA-N [2,2,3,3,4,5,5-heptadeuterio-7-methyl-6-oxo-7-(trideuteriomethyl)-1-bicyclo[2.2.1]heptanyl]methanesulfonic acid Chemical compound C12(C(=O)C(C(C(C1([2H])[2H])([2H])[2H])(C2(C([2H])([2H])[2H])C)[2H])([2H])[2H])CS(=O)(=O)O MIOPJNTWMNEORI-ZDFGOMNRSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 229940031675 advate Drugs 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- VIYFPAMJCJLZKD-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 VIYFPAMJCJLZKD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940012414 factor viia Drugs 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000198 fluorescence anisotropy Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000005367 kimax Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 108010036927 trypsin-like serine protease Proteins 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- A61K38/37—Factors VIII
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
- A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
明細書において、PIを含む脂質粒子と会合した治療薬は時に治療薬−PIと称される。
この実施例は脂質粒子の調製について記載する。
材料:アルブミン不含全長rFVIII(Baxter Health Care Glendale、カリフォルニア州)を抗原として使用した。Advateは西ニューヨーク血友病財団から寄贈された。ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)および大豆ホスファチジルイノシトール(Soy PI)をAvanti Polar Lipids(アラバスター、アラバマ州)から購入した。コレステロール、IgG不含ウシ血清アルブミン(BSA)およびジエタノールアミンをSigma(セントルイス、ミズーリ州)から購入した。ヤギ抗マウスIgおよび抗ラットIg、アルカリ性ホスファターゼ抱合体をSouthern Biotechnology Associates社(バーミングハム、アラバマ州)から入手した。p−ニトロフェニルリン酸二ナトリウム塩をPierce(ロックフォード、イリノイ州)から購入した。モノクローナル抗体ESH4、ESH5およびESH8をAmerican Diagnostica社(グリニッチ、コネチカット州)から購入した。モノクローナル抗体N77210MをBiodesign International(サコ、メイン州)から購入した。正常凝固対照血漿およびFVIII欠損血漿をTrinity Biotech(ウィックローカウンティー、アイルランド)から購入した。DiaPharma Group(ウェストチェスター、オハイオ州)のCoamatic第VIII因子キットを使用して血漿試料中のrFVIII活性を測定した。
トリスバッファー(TB)(25mMトリスおよび300mM NaCl、pH=7.0)を用いる適切なモル比のDMPC、大豆PIおよびコレステロール(50:50:5)の薄い脂質フィルムの水和により粒子を調製した。必要量の脂質をキマックス(kimax)管中でクロロホルムに溶解し、そしてBuchi−R200ロータエバポレーター(Fisher Scientific、ニュージャージー州)を用いて溶媒を乾燥させた。脂質分散物をボルテックスにより、37℃で20分間混合して多重膜ベシクル(MLV)を形成した。得られたMLVを高圧押出機(Mico社、ミドルトン、ウィスコンシン州)中250psi以下の圧力で孔径80nmの二重ポリカーボネート膜(GE Osmonics Labstore、ミネトンカ、ミネソタ州)を通して押し出し、そして次に0.22μm MillexTM−GPフィルターユニット(Millipore Corporation、ベッドフォード、マサチューセッツ州)を通して滅菌濾過した。リン酸塩アッセイを用いてリン脂質濃度を推定した。Nicomp Model CW380粒子径分析器(Particle Sizing Systems、サンタバーバラ、カリフォルニア州)を用いて粒子径をモニタリングした。37℃で脂質粒子にタンパク質を添加し、そしてこの過程の間にTB中のCa2+イオン濃度を5mM CaCl2から0.2mM CaCl2に低下させて、最適な脂質−Ca2+相互作用を確実にし、そして脂質相変化を可能にした。特記しない限り、全実験に関して、タンパク質の脂質に対する比率を1:10000に維持した。
不連続デキストラン密度勾配遠心技術を用いて脂質粒子から遊離タンパク質を分離した。手短にいえば、5mlポリプロピレン遠心管中でインキュベートしたrFVIII−PI混合物0.5mlを20(重量/容量)%デキストラン(Ca+2不含TB中)1.0mlと混合した。次いで10(重量/容量)%デキストラン3ml、続いてCa+2不含TB0.5mlを混合物の上部に注意深く添加した。Beckman SW50.1ローター中45000rpmで、4℃で30分間遠心した後、結合タンパク質および遊離脂質粒子はデキストラン帯の上部まで浮遊し、非結合rFVIIIは勾配の底部に留まる。一段階活性化部分トロンボプラスチン時間(APTT)アッセイを用いてrFVIII−PIのタンパク質会合効率を推定した。この手順により会合効率72±9%を生じ、これはホスファチジルセリン(PS)含有リポソームで観察されたもの(45±16.8%)よりも非常に高い(Purohitら、Biochim Biophys Acta 1617:31−38(2003)、Kemball−Cookら、Thromb Res 67:57−71(1992))。
この実施例は、実施例1で調製された脂質構造体の特徴付けについて記載する。フォームバールコーティングしたグリッド上で空気乾燥し、そして2%酢酸ウラニルでおよそ1分間ネガティブ染色することにより顕微鏡分析用の脂質分散試料を調製した。Hitachi H500 TEMを使用し、75kVで操作して試料を写真撮影した。Agfa Duoscan T1200スキャナを用いて陰画を300dpiでスキャンした。透過型電子顕微鏡研究を用いて測定された粒子の形態は以下を示した。粒子径はほぼ100nmであり、動的光散乱研究と合致することが見出された(データは示していない)。顕微鏡写真の分析により、リポソームラメラに典型的なドーナツ様構造は観察されず、代わりにディスク様構造の粒子が示され(図2a)、そしてリポソームと区別される、高いモル%のFVIIIを収容できる独特な脂質組織を形成することが可能である。
この実施例はrFVIIIおよびrFVIII−PIの蛍光分析について記載する。rFVIIIの三次構造に及ぼすPIの影響を、280nmまたは265nmのいずれかでの試料の励起により測定し、そして300−400nmの範囲の波長で発光をモニタリングした。PTI−Quantamaster蛍光分光光度計(Photon Technology International、ローレンスビル、ニュージャージー州)でスペクトルを獲得した。タンパク質濃度は5μg/mlであり、そしてスリット幅を4nmに設定した。この粒子に負荷されたFVIIIの蛍光発光スペクトルは遊離タンパク質と比較して最大発光の青色シフトを示し、これはFVIIIが疎水性環境に置かれていることを示唆している(図2b)。この観察は、蛍光特性の変化が観察されなかった(Purohitら、2003)PS含有リポソームと会合したFVIIIに関して観察された蛍光スペクトルと対照的であり、そして結晶学的および生物物理学的研究に基づいて提示される分子モデルに合致する。FVIIIはC2ドメインのC末端領域(2303−2332)を介してのみPS含有リポソームと会合し、そして分子の残りはバルク水に接近可能である(Purohitら、2003)。しかしながらFVIII−PI微粒子では、FVIIIの分子表面のほとんどが脂質粒子の疎水性アシル鎖領域に埋没している、および/または、PI粒子に対し、そのタンパク質は脂質界面での水濃度がより少ない脂質−水界面に位置する可能性がある。
この実施例はサンドイッチELISAおよびrFVIII−PI会合に関与するrFVIIIエピトープの検出について記載する。PIと会合したrFVIIIエピトープを測定するためにサンドイッチELISAを実施した。手短にいえば、Nunc−Maxisorb96ウェルプレートを炭酸塩バッファー(0.2M、pH9.6)中の適切な濃度の捕捉モノクローナル抗体で、4℃で一晩コーティングした。次いでプレートをTween−PBS(2.7mM KCl、140mM NaCl、1.8mM KH2PO4、10mM Na2HPO4・2H2O、0.05(重量/容量)%Tween20、pH7.4)で洗浄し、そして次に1%BSA(PBS中で調製)で、室温で2時間遮断した。0.5μg/mlの種々の希釈のrFVIII−PI(1:0、1:5000、10000、および50000)または遮断バッファー中のPI含有リポソーム100μlを37℃ で1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、そして次に遮断バッファー中1:1000希釈のヤギ抗ラットIg−アルカリ性ホスファターゼ抱合体を含有する1:500希釈のラットポリクローナル抗体100μlと共に室温で1時間インキュベートした。最後の洗浄の後、ジエタノールアミンバッファー(1Mジエタノールアミン、0.5mM MgCl2)中1mg/ml p−ニトロフェニルリン酸溶液200μlを添加し、そして室温で30分間インキュベートした。3N NaOH100μlを添加して反応を停止させた。プレートリーダーを用いて405nmで光学密度を測定した。
この実施例はrFVIIIおよびrFVIII−PIのCD分析について記載する。d−10カンファースルホン酸で較正されたJASCO−715分光偏光計でCDスペクトルを獲得した。タンパク質の脂質に対する比率は、用いられたタンパク質濃度が20μg/ml(98.6IU/ml)である時1対2500であった。10mm石英キュベットを使用して255から208nmの範囲にわたって二次構造分析に関するスペクトルが得られた。加熱速度60℃/時を用いて20から80℃で、215nmでの楕円率をモニタリングすることによりrFVIIIおよびrFVIII−PIの熱変性を測定した。脂質粒子の存在による光散乱効果を前述のように補正した(Balasubramanianら、Pharm Res 17:344−350(2000))。
表2A−2Cで示されるようないくつかのバッファー系でタンパク質の会合を実施した。全例でタンパク質の脂質に対する比率は1:10000であった。次いで密度勾配遠心法により脂質構造体から遊離タンパク質を分離し、そして活性および分光アッセイを用いて各分画と会合したタンパク質を測定した。
この実施例は免疫原性研究について記載する。すなわちFVIII遺伝子のエクソン16に標的欠失を有する血友病Aマウス(C57BL/6J)の雌雄対を使用した。血友病Aマウスのコロニーを確立し、そして8−12週齢の動物をインビボ研究で使用した。マウスの性別は免疫応答に影響力を有さないので、雄および雌双方のマウスを研究に使用した。
この実施例は薬物動態研究について記載する。rFVIIIまたはrFVIII−PI(10IU/25g)を雄血友病Aマウスに陰茎静脈を介して単回静脈内ボーラス注射として投与した。注射後0.08、0.5、1、2、4、8、16、24、36および48時間後に心穿刺により血液試料をACDバッファー(10:1容量/容量)の入ったシリンジに収集した(n=3マウス/時点)。直ちに遠心により血漿を収集し(5000rpm、5分間、4℃)、そして分析まで−70℃で保存した。発色アッセイを用いて血漿試料中のrFVIIIの活性を測定した。各時点のrFVIII活性の平均値を用いて基本的な薬物動態パラメーター(半減期、MRTおよび血漿活性曲線下面積)をノンコンパートメント分析(NCA)20(WinNonlin Pharsight Corporation、マウンテンビュー、カリフォルニア州)により計算した。0から、活性が測定可能な最後の時点までの血漿活性下面積(AUC)対時間曲線を、対数線形台形法により測定した。消失速度定数(ラムダz)を最終相濃度の対数線形回帰により推定した。消失半減期(t1/2)をln2/ラムダzとして計算し、そしてMRTをAUMC/AUC(ここでAUMCは濃度と時間の積対時間の曲線プロット下の面積である)から計算した。
この実施例はrFVIIIおよびトランケートされた(切断)FVIII,BDDrFVIIIに関する会合効率について記載する。FVIIIまたはBDDrFVIIIを有する脂質構造体を上述の方法により調製した。これらのタンパク質に関する会合パーセントを表3に示す。
雄血友病マウス(20−24g、22−25週齢)に脂質構造体と会合したrBDDFVIII(PI−BDDrFVIIIと称される)10IU/25gを単回静脈内ボーラス注射として陰茎静脈を介して与えた。投与後0.08、0.5、1、2、4、8、16、24、36および48時間に心穿刺により血液試料を収集し(n=1/時点)、そしてクエン酸デキストロース(ACD)に10:1(容量/容量)の比率で加えた。5000g、4℃で5分間遠心して血漿を分離し、そして分析まで−70℃で保存した。発色アッセイによりタンパク質の活性に関して血漿試料を分析した。次いで各時点で測定されたBDDrFVIIIの活性を利用して基本PKパラメーターを推定した(半減期、t1/2および血漿活性曲線下面積/暴露、AUAC)。
この実施例はその他の実施例においてPI含有脂質構造体との比較のために用いられたPS含有リポソームの調製について記載する。最終タンパク質濃度が3μg/mlで一定となるような方法で様々な濃度のO−ホスホ−L−セリン(OPLS)またはホスホコリンを含有する溶液とBDDrFVIIIを混合した。OPLSまたはホスホコリン濃度は0と100μMの間で変動した。各混合物はさらなる分析に供する前に5分間インキュベートする。漸増濃度のリン脂質頭部基の存在下でのBDDrFVIIIの固有の蛍光をQuanta Master PTI装置で測定した。励起を285nmに設定し、そして最大ピーク(例えば330nm)で発光を記録した。正規化された蛍光(F/F0)データを[脂質]に対してプロットし、そして脂質頭部基−BDDrFVIII相互作用に関する解離定数の決定のために使用した。
リポソームの存在下タンパク質を37℃で30分間、時折穏やかに旋回しながらインキュベートすることにより、予め形成されたリポソームとタンパク質との会合を実施した。全調製物に関してタンパク質を同一のモル比に維持した(1:10000)。
1,2ジミリストイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−N−[メトキシ(ポリエチレングリコール)2000](DMPC−PEG2000)または1,2ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−N−[メトキシ(ポリエチレングリコール)2000](DSPE−PEG2000)の乾燥粉末にリポソーム調製物を添加することにより予め形成されたリポソームのPEG化を達成した。室温で45分間インキュベーションを実施した。DMPC−PEG2000の予め形成された脂質二重層への移動を促進するために、DMPC−PEG2000濃度が臨海ミセル濃度を下回った状態を維持するように注意を払った。
リポソームと会合したタンパク質の量を推定するために、不連続デキストラン密度勾配での浮遊によりリポソーム会合タンパク質から遊離タンパク質を分離した。手短にいえば、5mlポリプロピレン遠心管中でリポソーム−タンパク質混合物0.5mlを20(重量/容量)%デキストラン(カルシウム不含トリスバッファー中)1mlと混合し、そして10(重量/容量)%デキストラン3mlおよびカルシウム不含トリスバッファー0.5mlをリポソーム含有帯に積層した。勾配を、Beckman SW50.1ローター中45000rpmで30分間超遠心に供した。リポソームおよびその会合タンパク質はバッファー/10%デキストラン帯の界面に浮遊し、そして会合していないタンパク質は底部に留まった。一段階活性化部分トロンボプラスチン時間(APTT)アッセイを用いてリポソームと会合したタンパク質の活性を測定した。結果を表4Aおよび4Bに示す。
この実施例は、比較目的で使用されたPSおよびホスファチジルエタノールアミン(PE)含有リポソームと会合したBDDrFVIIIの会合効率について記載する。
DMPC:BPS:ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン(DOPE)(モル比70:10:20)を以下に記載するように調製した:必要とされる量のDMPC、BPSおよびDOPEをクロロホルムに溶解した。Buchi−R200ロトエバポレーター(Fisher Scientific)中で溶媒を除去することにより、ガラス管の壁面に薄い脂質フィルムが形成された。脂質フィルムを37℃でトリスバッファー(TB 25mm トリス、300mM NaCl、5mM CaCl2 pH=7.4)と再水和することによりリポソームを調製した。高圧押出機(Lipex Biomembranes社)を用いて200psi以下の圧力で二重積層された100nmのポリカーボネート膜を通してリポソームを8回押し出した。粒子の粒子径分布をNicomp Model CW380粒子径分析器(Particle Sizing Systems)を用いてモニタリングした。
リポソームの存在下タンパク質を37℃で30分間、時折穏やかに旋回しながらインキュベートすることにより、予め形成されたリポソームとタンパク質との会合を達成した。全調製物に関してタンパク質を同一のモル比に維持した(1:10000)。
1,2ジミリストイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−N−[メトキシ(ポリエチレングリコール)2000](DMPC−PEG2000)または1,2ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−N−[メトキシ(ポリエチレングリコール)2000](DSPE−PEG2000)の乾燥粉末にリポソーム調製物を添加することにより予め形成されたリポソームのPEG化を達成した。室温で45分間インキュベーションを実施した。DMPC−PEG2000の、予め形成された脂質二重層への移動を促進するために、DMPC−PEG2000濃度が臨海ミセル濃度を下回った状態を維持するように注意を払った。
リポソームと会合したタンパク質の量を推定するために、不連続デキストラン密度勾配での浮遊により、リポソーム会合タンパク質から遊離タンパク質を分離した。手短にいえば、5mlポリプロピレン遠心管中でリポソーム−タンパク質混合物0.5mlを20(重量/容量)%デキストラン(カルシウム不含トリスバッファー中)1mlと混合し、そして10(重量/容量)%デキストラン3mlおよびカルシウム不含トリスバッファー0.5mlをリポソーム含有帯に積層した。勾配を、Beckman SW50.1ローター中45000rpmで30分間超遠心に供した。リポソームおよびその会合タンパク質はバッファー/10%デキストラン帯の界面に浮遊し、そして会合していないタンパク質は底部に留まった。一段階活性化部分トロンボプラスチン時間(APTT)アッセイを用いてリポソームと会合したタンパク質の活性を測定した。結果を表5に示す。
この実施例はこの方法の別のタンパク質、第VII因子への適用について記載する。この実施例ではFVIIを含む脂質構造体を調製した。必要とされる量のDMPC、SPIおよびChol(ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC):大豆ホスファチジルイノシトール(SPI):コレステロール(Chol)(モル比50:50:5)をクロロホルムに溶解した。Buchi−R200ロトエバポレーター(Fisher Scientific)中で溶媒を除去することにより、ガラス管の壁面に薄い脂質フィルムが形成された。脂質フィルムを37℃で25mMトリスバッファー(300mM NaCl、pH=7.0;カルシウム不含)と再水和することにより脂質粒子(LP)を調製した。高圧押出機(Lipex Biomembranes社)を用いて200psi以下の圧力で二重積層された80nmのポリカーボネート膜を通してLPを20回押し出した。粒子の粒子径分布をNicomp Model CW380粒子径分析器(Particle Sizing Systems)を用いてモニタリングした。
この実施例はこの方法の別のタンパク質、リゾチームへの適用について記載する。必要とされる量のDMPC、SPIおよびChol(ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC):大豆ホスファチジルイノシトール(SPI):コレステロール(Chol)(モル比50:50:5)をクロロホルムに溶解した。Buchi−R200ロトエバポレーター(Fisher Scientific)中で溶媒を除去することにより、ガラス管の壁面に薄い脂質フィルムが形成された。脂質フィルムを37℃で25mMトリスバッファー(300mM NaCl、pH=7.0;カルシウム不含)と再水和することにより脂質粒子(LP)を調製した。高圧押出機(Lipex Biomembranes社)を用いて200psi以下の圧力で二重積層された80nmのポリカーボネート膜を通してLPを20回押し出した。粒子の粒子径分布をNicomp Model CW380粒子径分析器(Particle Sizing Systems)を用いてモニタリングした。
この実施例は別のタンパク質、エリスロポエチン(EPO)の本発明の脂質粒子との会合について記載する。DMPC、SPIおよびChol[(ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC):大豆ホスファチジルイノシトール(SPI):コレステロール(Chol)(モル比50:50:5)]をクロロホルムに溶解した。Buchi−R200ロトエバポレーター(Fisher Scientific)中で溶媒を除去することにより、ガラス管の壁面に薄い脂質フィルムが形成された。脂質フィルムを37℃で25mMトリスバッファー(300mM NaCl、pH=7.0;カルシウム不含)と再水和することにより脂質粒子(LP)を調製した。高圧押出機(Lipex Biomembranes社)を用いて200psi以下の圧力で二重積層された80nmのポリカーボネート膜を通してLPを20回押し出した。粒子の粒子径分布をNicomp Model CW380粒子径分析器(Particle Sizing System)を用いてモニタリングした。
Claims (14)
- ホスファチジルコリン(PC)、ホスファチジルイノシトール(PI)およびコレステロールを含む脂質粒子であって、
PCのPIに対する比率が60:40から40:60の間であり、且つコレステロールがPCおよびPIを合わせたものの5から15%の間で存在し、
前記粒子のサイズは40から140nmの間である、脂質粒子。 - PCのPIに対する比率が50:50である請求項1に記載の粒子。
- PCおよびPIの各アシル鎖が独立して12個から22個の炭素原子を有し、且つ飽和または不飽和である請求項1に記載の粒子。
- 粒子が凍結乾燥形態で存在する請求項1に記載の粒子。
- PIが大豆PIであり、そしてPCが卵PCである請求項1に記載の粒子。
- 請求項1に記載の脂質粒子を含み、且つ、当該脂質粒子と会合した一以上の治療薬をさらに含む組成物であって、前記治療薬はペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質であり、当該治療薬の免疫原性が低下している組成物。
- 治療薬が血液凝固カスケードに関与するタンパク質である請求項6に記載の組成物。
- 治療薬が第VIII因子、第VII因子、第IX因子、第V因子、ウィルブランド因子(vWF)およびフォンヘルデブラント因子(vHF)からなる群から選択される請求項7に記載の組成物。
- 治療薬が組織プラスミノーゲンアクチベーター、インスリン、成長ホルモン、エリスロポエチンアルファ、VEG−F、トロンボポエチンおよびリゾチームからなる群から選択される請求項6に記載の組成物。
- 脂質粒子の少なくとも50%、60%、70%、80%または90%が40から100nmの間のサイズである請求項9に記載の組成物。
- 脂質粒子のサイズが80nmから100nmの間である請求項10に記載の組成物。
- ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質からなる群から選択される治療薬の免疫原性を低下させる方法であって
a)PC、PIおよびコレステロールを含む多重膜ベシクルを定寸装置を通して押し出して140nm未満の脂質粒子を形成することにより請求項1に記載の脂質粒子を調製する工程;ならびに
b)治療薬を工程a)で調製された脂質粒子と混合し、治療薬の免疫原性を低下させる工程
を含む方法。 - ヒト以外の哺乳類の血液凝固疾患を治療するための組成物の使用であって、
前記組成物が、脂質粒子と当該粒子と会合した一以上の治療薬を含み、
前記脂質粒子は、ホスファチジルコリン(PC)、ホスファチジルイノシトール(PI)およびコレステロールを含み、PCのPIに対する比率が60:40から40:60の間であり、且つコレステロールがPCおよびPIを合わせたものの5から15%の間で存在し、
前記粒子のサイズは40から140nmの間である、組成物の使用。 - 治療薬が第VIII因子、第VII因子、第IX因子、第V因子、ウィルブランド因子(vWF)およびフォンヘルデブラント因子(vHF)からなる群から選択される請求項13に記載の組成物の使用。
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US78741106P | 2006-03-30 | 2006-03-30 | |
US78758606P | 2006-03-30 | 2006-03-30 | |
US60/787,586 | 2006-03-30 | ||
US60/787,411 | 2006-03-30 | ||
US86506206P | 2006-11-09 | 2006-11-09 | |
US60/865,062 | 2006-11-09 | ||
US87017706P | 2006-12-15 | 2006-12-15 | |
US60/870,177 | 2006-12-15 | ||
PCT/US2007/008311 WO2007117469A2 (en) | 2006-03-30 | 2007-03-30 | Compositions of less immunogenic and long-circulating protein-lipid complexes |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009532371A JP2009532371A (ja) | 2009-09-10 |
JP2009532371A5 JP2009532371A5 (ja) | 2010-05-13 |
JP5160534B2 true JP5160534B2 (ja) | 2013-03-13 |
Family
ID=38581584
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009503092A Expired - Fee Related JP5160534B2 (ja) | 2006-03-30 | 2007-03-30 | 低免疫原性および長時間循環性タンパク質−脂質複合体の組成物 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7875289B2 (ja) |
EP (1) | EP2007357B1 (ja) |
JP (1) | JP5160534B2 (ja) |
AU (1) | AU2007235463B2 (ja) |
CA (1) | CA2660310C (ja) |
NZ (1) | NZ572308A (ja) |
WO (1) | WO2007117469A2 (ja) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7875289B2 (en) * | 2006-03-30 | 2011-01-25 | The Research Foundation Of State University Of New York | Compositions of less immunogenic and long-circulating protein-lipid complexes |
WO2009039628A1 (en) | 2007-09-27 | 2009-04-02 | Immunovaccine Technologies Inc. | Use of liposomes in a carrier comprising a continuous hydrophobic phase for delivery of polynucleotides in vivo |
CN102046151A (zh) * | 2008-03-26 | 2011-05-04 | 牛津大学 | 靶向内质网的脂质体 |
JP5715051B2 (ja) | 2008-06-05 | 2015-05-07 | イムノバクシーン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドImmunovaccine Technologies Inc. | リポソーム、抗原、ポリヌクレオチド及び疎水性物質の連続相を含む担体を含む組成物 |
US10617640B2 (en) | 2009-07-07 | 2020-04-14 | The Research Foundation For The State University Of New York | Phosphoserine containing compositions for immune tolerance induction |
EP3058953A1 (en) * | 2009-07-07 | 2016-08-24 | The Research Foundation Of State University Of New York | Lipidic compositions for induction of immune tolerance |
EP2763659B1 (en) | 2011-10-06 | 2017-07-19 | The Research Foundation Of State University Of New York | Compositions and methods for immune tolerance induction |
JP6240077B2 (ja) | 2011-10-06 | 2017-11-29 | イムノバクシーン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドImmunovaccine Technologies Inc. | Tlr2を活性化するか、またはその活性を増加させるアジュバントを含むリポソーム組成物およびその使用 |
KR20150032939A (ko) | 2012-05-09 | 2015-03-31 | 웨스턴 유니버시티 오브 헬스 사이언시스 | 프로리포좀 테스토스테론 제제 |
KR20150133222A (ko) * | 2013-03-13 | 2015-11-27 | 스테메트릭스, 인코포레이티드. | 피부 조성물 및 피부 조성물의 용도 |
CN105992591A (zh) * | 2013-09-24 | 2016-10-05 | 纽约州立大学研究基金会 | 用于降低抗原特异性免疫原性的组合物和方法 |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4127502A (en) * | 1977-06-10 | 1978-11-28 | Eastman Kodak Company | Stabilizers for reconstituted, lyophilized samples |
US4920016A (en) | 1986-12-24 | 1990-04-24 | Linear Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US4837028A (en) * | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US4795806A (en) * | 1987-07-16 | 1989-01-03 | Miles Laboratories, Inc. | Phospholipid affinity purification of Factor VIII:C |
US5997864A (en) * | 1995-06-07 | 1999-12-07 | Novo Nordisk A/S | Modified factor VII |
ATE223204T1 (de) * | 1992-04-10 | 2002-09-15 | Hisamitsu Pharmaceutical Co | Liposomenzusammensetzung |
DE4416180C2 (de) * | 1994-05-06 | 1997-08-14 | Immuno Ag | Stabiles Präparat zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen und Verfahren zur Herstellung dieses Präparats |
DE4416166C2 (de) * | 1994-05-06 | 1997-11-20 | Immuno Ag | Stabiles Präparat zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen |
US5580856A (en) * | 1994-07-15 | 1996-12-03 | Prestrelski; Steven J. | Formulation of a reconstituted protein, and method and kit for the production thereof |
CA2181390C (en) | 1995-07-18 | 2001-04-24 | Pankaj Modi | Phospholipid formulations |
AT403764B (de) * | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
EP0981548A4 (en) * | 1997-04-30 | 2005-11-23 | Enzon Inc | SINGLE CHAIN PROTEINS FIXING ANTIGENS CAPABLE OF GLYCOSYLATION, PRODUCTION AND USES THEREOF |
AU747391B2 (en) * | 1998-04-27 | 2002-05-16 | Cantab Biopharmaceuticals Patents Limited | Pharmaceutical composition comprising factor VIII and neutral liposomes |
AU2002239607A1 (en) * | 2000-11-30 | 2002-06-11 | Baxter Healthcare Corporation | Ahf associated dispersion system and method for preparation |
ZA200305980B (en) * | 2001-02-12 | 2007-01-31 | Res Dev Foundation | Modified proteins, designer toxins, and methods of making thereof |
WO2003013245A1 (en) | 2001-08-07 | 2003-02-20 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Polyamines and analogs for protecting cells during cancer chemotherapy and radiotherapy |
US8518437B2 (en) * | 2001-11-13 | 2013-08-27 | Celator Pharmaceuticals, Inc. | Lipid carrier compositions with enhanced blood stability |
US7351688B2 (en) * | 2003-02-05 | 2008-04-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | Compositions and methods for less immunogenic protein formulations |
WO2004071420A2 (en) | 2003-02-05 | 2004-08-26 | The Research Foundation Of State University Of New York | Compositions and methods for less immunogenic protein formulations |
JP4777873B2 (ja) * | 2003-02-14 | 2011-09-21 | チルドレンズ ホスピタル アンド リサーチ センター アット オークランド | 親油性薬物送達ビヒクルおよびこれらの使用方法 |
KR20070089693A (ko) * | 2004-11-08 | 2007-08-31 | 트랜세이브, 인코포레이티드 | 지질-기재 플래티넘 화합물 제형을 복막내 투여하여 암을치료하는 방법 |
NZ565039A (en) | 2005-06-29 | 2010-04-30 | Univ New York State Res Found | Compositions and methods for less immunogenic protein-lipid complexes |
US7875288B2 (en) * | 2006-03-30 | 2011-01-25 | The Research Foundation Of State University Of New York | Method for treating blood coagulation disorders |
US7875289B2 (en) * | 2006-03-30 | 2011-01-25 | The Research Foundation Of State University Of New York | Compositions of less immunogenic and long-circulating protein-lipid complexes |
-
2007
- 2007-03-30 US US11/731,648 patent/US7875289B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-03-30 NZ NZ572308A patent/NZ572308A/en not_active IP Right Cessation
- 2007-03-30 CA CA2660310A patent/CA2660310C/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-03-30 WO PCT/US2007/008311 patent/WO2007117469A2/en active Application Filing
- 2007-03-30 JP JP2009503092A patent/JP5160534B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-03-30 EP EP07754777.6A patent/EP2007357B1/en not_active Not-in-force
- 2007-03-30 AU AU2007235463A patent/AU2007235463B2/en not_active Ceased
-
2010
- 2010-12-28 US US12/979,621 patent/US20110123625A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2009532371A (ja) | 2009-09-10 |
US20070274980A1 (en) | 2007-11-29 |
US20110123625A1 (en) | 2011-05-26 |
WO2007117469A3 (en) | 2008-07-03 |
EP2007357A2 (en) | 2008-12-31 |
AU2007235463A1 (en) | 2007-10-18 |
EP2007357A4 (en) | 2013-07-17 |
WO2007117469A2 (en) | 2007-10-18 |
EP2007357B1 (en) | 2016-11-09 |
NZ572308A (en) | 2011-09-30 |
CA2660310A1 (en) | 2007-10-18 |
CA2660310C (en) | 2015-04-21 |
US7875289B2 (en) | 2011-01-25 |
AU2007235463B2 (en) | 2012-11-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5160534B2 (ja) | 低免疫原性および長時間循環性タンパク質−脂質複合体の組成物 | |
JP3051650B2 (ja) | 血液凝固疾患の治療のための安定な調製物 | |
US7875288B2 (en) | Method for treating blood coagulation disorders | |
US20120164189A1 (en) | Lipidic Compositions for Induction of Immune Tolerance | |
US7351688B2 (en) | Compositions and methods for less immunogenic protein formulations | |
EP1898939A2 (en) | Compositions and methods for less immunogenic pr0tein-lip1d complexes | |
US11484499B2 (en) | Pharmaceutical formulations of PEGylated liposomes and blood coagulation factors | |
US10064922B2 (en) | Compositions and methods for immune tolerance induction | |
WO2007123691A2 (en) | Method for treating blood coagulation disorders | |
CA3227245A1 (en) | Modified colloidal particles for use in the treatment of haemophilia a | |
JP2024532164A (ja) | 血友病aの治療における使用のための修飾コロイド粒子 | |
Ramani et al. | Preclinical Evaluation of PEGylated Liposomal-Recombinant Human FVIII in a Murine Model of Hemophilia A | |
MX2008000223A (en) | Compositions and methods for less immunogenic pr0tein-lip1d complexes | |
Miclea et al. | Effect of phosphatidylethanolamine and polyethylene glycol on the immunogenicity and pharmacokinetic properties of PS containing liposomal B domain deleted rFVIII in a murine model of hemophilia A |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100329 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100329 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120725 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20120726 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121024 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20121114 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20121212 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5160534 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20151221 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |