JP5122962B2

JP5122962B2 - ｕＰＡＲターゲティング造影剤

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Publication number: JP5122962B2
Application number: JP2007533418A
Authority: JP
Inventors: カスバートソン，アラン; アルボ，ベンテ・イー
Original assignee: ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ
Priority date: 2004-09-29
Filing date: 2005-09-28
Publication date: 2013-01-16
Anticipated expiration: 2025-09-28
Also published as: WO2006036071A2; EP1796733A2; AU2005287934A1; WO2006036071A3; US8568689B1; RU2394837C2; MX2007003750A; KR20070083604A; BRPI0516168A; CN101065152A; JP2008514588A; RU2007111467A; AU2005287934B2; CA2580464A1; KR101248350B1

Description

本発明は、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）検出用の造影剤に関する。さらに具体的には、本発明は、造影性部分で標識された、ｕＰＡＲに結合するペプチドベクターを含む造影剤に関する。造影剤は、この受容体に関連した疾患を診断するためｕＰＡＲが発現される部位の識別に使用できる。

ウロキナーゼ型プラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ）と細胞表面との相互作用はもっぱら糖脂質アンカー受容体（ｕＰＡＲ）によって媒介され、この受容体にはｕＰＡが高い親和性で結合する。

ｕＰＡＲはグリコシルホスファチジルイノシトール結合（ＧＰＩアンカー）を介して細胞膜の外層に局在化している。これは３つの相同ドメインからなる高度にシステインリッチグリコシル化されたタンパク質である。ｕＰＡは触媒活性をもつＣ末端セリンプロテアーゼドメインと、増殖因子様ドメイン（ＧＦＤ、ａａ１−４９）及びクリングルドメイン（ａａ５０−１３５）を含むモジュラーＮ末端部とからなる。ｕＰＡとｕＰＡＲとの相互作用は主にｕＰＡのＧＦＤの１９〜３１残基によって媒介される。

細胞外マトリックスのタンパク質分解は腫瘍の浸潤及び転移に役割を果たすことが認められており、ｕＰＡＲは診断用造影剤の潜在的ターゲットとなる。ｕＰＡＲは、現在まで研究されたほとんどのヒト癌腫、特に腫瘍細胞自体、血管新生を起こした腫瘍関連内皮細胞及びマクロファージにおいて、インビボで上方制御されるらしい。癌患者のｕＰＡＲ過剰発現は、進行疾患に存在し、多数のヒト癌腫の予後診断の悪さと相関している。ｕＰＡＲ発現が細胞外マトリックスリモデリング及び癌のような細胞運動を伴う病理的状態においてのみ上方制御されるという事実から、診断の魅力的マーカーとなる。

国際公開第０１／２５４１０号では、診断又は治療用の標識ＰＡＲターゲティングタンパク質及びペプチドについて説明している。ペプチド又はタンパク質は、ｕＰＡのｕＰＡＲ結合部位の残基１３〜３０を含む、３８個以上のアミノ酸残基を含む。

米国特許第６２７７８１８号では、診断標識と結合できるｕＰＡＲターゲティング環状ペプチド化合物について説明している。ペプチドは、ｕＰＡのアミノ酸残基２０〜３０に基づく。

米国特許第６５１４７１０号は、さらに、ｕＰＡＲに対する親和性を有する環状ペプチドも対象とする。ペプチドは、検出可能な標識を担持することができる。ペプチドは、結合単位で結合した１１個のアミノ酸を含む。

Ｐｌｏｕｇｅｔａｌ．ｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２００１，４０，１２４５７−１２１６８では、ｕＰＡＲターゲティングペプチドを説明しているが、本明細書に記載のアミノ酸配列を含めて、イメージングに関連しては説明していない。

ｕＰＡＲの効率的なターゲティング化及びイメージングには、化学的に強固で安定している選択的高親和性ベクターが必要である。これらの厳しい条件は、本発明の造影剤によって満たされる。
国際公開第０１／２５４１０号パンフレット米国特許第６２７７８１８号明細書米国特許第６５１４７１０号明細書Ｐｌｏｕｇｅｔａｌ．ｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２００１，４０，１２４５７−１２１６８

技術的必要性に鑑みて、本発明は、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）の検出用の造影剤を実現する。さらに具体的には、本発明は、造影性部分で標識された、高親和性でｕＰＡＲに結合するペプチド配列を含む造影剤に関する。Ｐｌｏｕｇは、例えば、アミノ酸に対する標準的省略記号が使用され、Ｘは２５個のアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸を表す、配列Ｘ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｘ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒを持つｕＰＡＲターゲティングペプチドを開示している。

第１の態様では、本発明は、次の式ＩａのｕＰＡＲターゲティング造影剤を提供する。
Ｚ_１−Ｗ_１−Ｘ_０−Ｘ_１−Ｐｈｅ−Ｘ_２−Ｘ_３−Ｘ_４−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｘ_５−Ｘ_６−Ｗ_２−Ｚ_２（Ｉａ）

式中、
Ｘ_０は１〜５個のアミノ酸を表し、
Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４及びＸ_５は独立に１つのアミノ酸を表し、
Ｐｈｅはフェニルアラニンを表し、
Ｌｅｕはロイシンを表し、
Ｔｒｐはトリプトファンを表し、
Ｘ_６は０〜５個のアミノ酸を表すか又は次の式（Ｉｂ）であり、
β−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｚ_１−Ｗ_１−Ｘ_０−Ｘ_１−Ｐｈｅ−Ｘ_２−Ｘ_３−Ｘ_４−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｘ_５）（Ｉｂ）
式中、記号は式Ｉａで定義した通りであり、
β−Ａｌａは、βアラニンを表し、
Ｌｙｓはリシンを表し、
Ｗ_１及びＷ_２は、同一又は異なる部分であって、各々スペーサー、バイオモディファイヤーであるか或いは存在せず、Ｚ_１又はＺ_２の少なくとも一方が存在していて画像診断法で直接又は間接的に検出できる造影性部分を表す。

アミノ酸Ｘ_０、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５及びＸ_６は、すべて、天然若しくは非天然アミノ酸であり、好ましくは、非天然であるのが好ましいＸ_１を除き天然である。すべてのアミノ酸は、Ｄ型であるか又はＬ型であり、以下に示すような優先傾向がある。

式Ｉａの薬剤のＸ_０−Ｘ_１−Ｐｈｅ−Ｘ_２−Ｘ_３−Ｘ_４−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｘ_５−Ｘ_６成分は、ｕＰＡＲに対する親和性を有し、これ以降ペプチドベクターと称する。造影剤のペプチドベクターは、ｕＰＡの増殖因子ドメインと相同性を有するが、ヒトｕＰＡに見られるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含まないという点で従来技術のｕＰＡＲターゲティングベクターと異なる。

Ｘ_０は、１〜５個のＤ又はＬアミノ酸を表す。好ましくは、Ｘ_０は、アラニン（Ａｌａ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ）からなる群から選択されるアミノ酸を含む。アミノ酸は、好ましくは、Ｄ型であるのが好ましいスレオニンを除き、Ｌ型である。最も好ましくは、Ｘ_０は、Ｌ−Ａｓｐ、Ｄ−Ｔｈｒ又はＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを表す。

Ｘ_１は、好ましくは、β−シクロアルキルアラニンを表し、さらに好ましくはβ−シクロペンチルアラニン、β−シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）又はβ−シクロヘプチルアラニンであり、最も好ましくはβ−シクロヘキシルアラニンである。
Ｘ_２は、好ましくは、セリン（Ｓｅｒ）又はアラニン（Ａｌａ）、さらに好ましくはセリン、最も好ましくはＤ−セリンを表す。

Ｘ_３は、好ましくは、アルギニン（Ａｒｇ）又はＮ−メチルアルギニン（ｍＡｒｇ）、チロシン（Ｔｙｒ）又はアラニンのようなアルギニン模倣体、さらに好ましくはＤ−アルギニンを表す。

Ｘ_４は、好ましくは、チロシン、アラニン、ロイシン又はシクロヘキシルアラニン、さらに好ましくはチロシン、最も好ましくはＬ−チロシンを表す。

Ｘ_５は、好ましくは、セリン、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アラニン、チロシン又はロイシン、さらに好ましくはＬ−セリン又はＤ−ヒスチジンを表す。

Ｘ_６は、好ましくは０〜５個のＤ又はＬアミノ酸を表す。好ましくは、Ｘ_６は、グリシン、アスパラギン酸、リシン、フェニルアラニン又はβ−アラニン（β−Ａｌａ）からなる群から選択されるアミノ酸を含む。或いは、Ｘ_６は、式（Ｉｂ）の基を含む。
β−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｚ_１−Ｗ_１−Ｘ_０−Ｘ_１−Ｐｈｅ−Ｘ_２−Ｘ_３−Ｘ_４−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｘ_５）（Ｉｂ）
式中、すべての記号は、既に定義した通りであり、また、式Ｉｂのβ−Ａｌａは、式ＩａのＸ_５に結合されている。括弧内のペプチド鎖は、Ｘ_５を介してリシンのε−アミノ基に結合される。この別の実施形態では、造影剤は、β−アラニンで予め誘導体化されたα−アミノ基を有し、それにより、リシンのα−炭素原子に関して擬対称的二量体を形成する、修飾リシン骨格上で合成された二量体を含む。この別の実施形態では、二量体は、好ましくは、ホモ二量体であり、そこでは２つの単量体中のペプチド配列は同じである。最も好ましくは、Ｘ_６は存在しない。

驚いたことに、Ｐｌｏｕｇがチロシン及びセリンをそれぞれ使用しているペプチドベクターのＸ_４及びＸ_５位置は、上で概要を述べたように、他のアミノ酸で置換できることがわかった。

Ｗ_１及びＷ_２は、個々に、スペーサーとして作用する部分、バイオモディファイヤー部分又はその両方を表すか、或いは存在せず、好ましくは単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位に基づき、前記構成単位の１〜１０単位を含む。Ｗ_１又はＷ_２は、さらに、好ましくはグリシン、リシン、アスパラギン酸、セリン又はアミノヘキサン酸を含む１〜１０個のアミノ酸残基を表すことができる。さらに好ましくは、Ｗ_１又はＷ_２は、ＰＥＧに基づく構造と組み合わせた１〜１０個のアミノ酸残基など、アミノ酸残基とＰＥＧに基づく構造の両方を含む。好ましくは、Ｗ_１又はＷ_２のいずれかは、バイオモディファイヤーを表し、好ましい一実施形態では、Ｗ_１又はＷ_２の少なくとも一方が、単分散のＰＥＧに基づく構造、式（ＩＩ）の１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸からなる単位を表す。

式中、ｍは、１〜１０までの整数に等しく、Ｃ末端側終端は、アミド又は酸部分である。バイオモディファイヤーとして、Ｗ_１又はＷ_２は、化合物の薬物動態及び血中クリアランス速度を変更する機能を有する。バイオモディファイヤーを使用すると、組織、つまり、筋肉、肝臓などへの化合物の摂取が少なくなり、それにより、バックグラウンド干渉が少ないためより良好な診断画像が得られる。分泌は、主に、腎臓を通して行われ、これはバイオモディファイヤーの他の利点である。

バイオモディファイヤー部分Ｗ_１又はＷ_２は、好ましくは、グルタル酸及び／又はコハク酸及び／又はＰＥＧに基づくユニット、例えば式ＩＩの部分を含むものから誘導される。Ｗ_１又はＷ_２は、さらに、造影性部分Ｚ_１又はＺ_２をペプチドベクターに結合する、バイオモディファイヤーの性質を持つ、スペーサーとして作用することができる。他の代表的なスペーサー要素は、構造型多糖類、貯蔵型多糖類、ポリアミノ酸及びそのメチル及びエチルエステル及びポリペプチド、オリゴ糖及びオリゴヌクレオチドを含み、酵素切断部位を含む場合も、含まない場合もある。スペーサー部分としては、Ｗ_１又はＷ_２の役割の１つは、比較的かさばる造影性部分をペプチドベクターの受容体結合ドメインから遠ざけることである。或いは、最も単純な形態では、Ｗ_１又はＷ_２は、官能的な結合であるか又は造影性部分をペプチドベクターに容易に結合できる官能基を含み、そのような基は、−ＮＲ^ａ−、ＣＯ_２、−Ｎ（Ｃ＝Ｓ）−、−Ｎ（ＣＯ）−、−Ｓ、−Ｏ−、−Ｏ−ＮＨ_２及び−ＣＨＯを含み、Ｒ^ａ基は独立にＨ、Ｃ_１−１０アルキル、Ｃ_３−１０アルキルアリール、Ｃ_２−１０アルコキシアルキル、Ｃ_１−１０ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−１０ハロアルキル及びα−ハロアセチルである。

Ｚ_１が存在せず、Ｗ_１が存在する場合、Ｗ_１は、好ましくは、遊離アミノ基又は代謝阻害基を含むアミノ基を持つＮ末端を有する。代謝阻害基という用語で、アミノ末端のペプチド又はアミノ酸のインビボ代謝作用を阻害又は抑制する生体適合基を意味する。このような基は、当業者に周知であり、アセチル、Ｂｏｃ、（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）、Ｆｍｏｃ（フルオレニルメトキシカルボニル）、ベンジルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル及びアリルオキシカルボニルの群から適切に選択される。好ましい代謝阻害基は、アセチル及びベンジルオキシカルボニルである。Ｚ_２及びＷ_２が存在しない場合、ペプチドベクターのＣ末端は、好ましくは、アミド又はカルボン酸基であり、好ましくはアミド基である。また、Ｚ_２が存在せず、アミノ酸を含むＷ_２が存在する場合、Ｗ_２は、好ましくは、アミド又はカルボン酸基で終端し、さらに好ましくはアミド基で終端する。

本発明の造影剤は、好ましくは、直鎖ペプチドを含む、つまり、アミノ酸同士又はアミノ酸と環状構造を生成する薬剤の他の構成成分との間に架橋がないということである。したがって、好ましくは、硫化物、チオエーテル架橋又は環状ペプチド構造を形成する他の架橋がない。造影剤は、好ましくは、最大２０個のアミノ酸を含む。

好ましい一実施形態では、式Ｉａの
Ｘ_０−Ｘ_１−Ｐｈｅ−Ｘ_２−Ｘ_３−Ｘ_４−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｘ_５−Ｘ_６で表されるペプチドベクターは、配列
Ｘ_０−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒを含み、造影剤は、式
Ｚ_１−Ｗ_１−Ｘ_０−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ_６−Ｗ_２−Ｚ_２を有し、式中、記号は既に定義した通りである。

さらに好ましくは、ペプチドベクターは、配列
Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ又は
Ｔｈｒ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒを含み、
式中、斜体は、Ｄアミノ酸を表し、Ｘ_６は、存在しない。

本発明の造影剤の一例は、
Ｚ_１−Ｗ_１−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＮＨ_２であり、
式中、Ｚ_１及びＷ_１は、既に定義した通りであり、Ｘ_６、Ｗ_２及びＺ_２は、存在せず、Ｃ末端は、アミド基である。

Ｚ_１及びＺ_２の一方又は両方が存在し、造影性部分を表す。Ｚは、これ以降、Ｚ_１又はＺ_２のいずれかを表すために使用される。Ｚは、任意の造影性部分とすることができる。Ｚの性質は、診断で使用されるイメージングモダリティに依存する。インビボイメージングでの検出に適している様々な構成成分が、例えば、国際公開第９８／４７５４１号から知られ、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。

Ｚは、放射線又はＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲ、Ｘ線、超音波又は光学イメージングのような、インビボ画像診断法において直接的に又は間接的に検出することができる部分である。Ｚは、例えば、検出可能な放射線を放出するか又は放出させることができる部分（例えば、放射性崩壊、蛍光励起、スピン共鳴励起などによる）、局所電磁場に影響を及ぼす部分（例えば、常磁性、超常磁性、フェリ磁性又は強磁性種）、放射線エネルギーを吸収、放出又は散乱する部分（例えば、発色団、粒子（ベシクルを含む気体又は液体を含む）、重元素及びその化合物など）及び検出可能な物質を生成する部分（例えば、気体超微粒気泡発生体）を含む。

造影性部分Ｚは、実体Ｍ及び部分Ｙ_１で表すことができ、Ｍは、金属イオン、常磁性金属、金属放射性核種、重金属及び重金属酸化物を表す。部分Ｙ_１は、１つ以上の部分Ｍを担持することができなければならない。担持とは、化学結合、例えば、共有結合又はイオン結合（ｅｌｅｃｔｒｏｖａｌｅｎｔｏｒｉｏｎｉｃｂｏｎｄｓ）など部分Ｙ_１とＭとの会合の何らかの形態又は吸収若しくは他の何らかの種類の会合によるもののことで、好ましくは、Ｍは、キレート部分Ｙ_１でキレート化される。

イメージングモダリティ及び造影性部分Ｚは、以下でさらに詳しく説明される。

この態様の第１の実施形態では、Ｚは、適宜部分Ｙ_１で担持される放射性金属イオン又はガンマ線放出放射性ハロゲンのような放射線及びＳＰＥＣＴイメージングモダリティで使用される１つ以上の部分Ｍを含む。好ましくは、Ｍは、α放射線及びβ放射線が少ないか又は全くない、また１時間を超える半減期を有する、γ放出体である。好ましい基Ｍは、放射性核種^６７Ｇａ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^８１ｍＫｒ、^９９Ｍｏ、^９９ｍＴｃ、^２０１ＴＩ及び^１３３Ｘｅである。最も好ましいのは、^９９ｍＴｃである。

Ｍは、さらに、同位元素又は同位元素の対、^４７Ｓｃ_２１、^１４１Ｃｅ_５８、^１８８Ｒｅ_７５、^１７７Ｌｕ_７１、^１９９Ａｕ_７９、^４７Ｓｃ_２１、^１３１Ｉ_５３、^６７Ｃｕ_２９、^１３１Ｉ_５３と^１２３Ｉ_５３、^１８８Ｒｅ_７５と^９９ｍＴｃ_４３、^９０Ｙ_３９と^８７Ｙ_３９、^４７Ｓｃ_２１と^４４Ｓｃ_２１、^９０Ｙ_３９と^１２３Ｉ_５３、^１４６Ｓｍ_６２と^１５３Ｓｍ_６２及び^９０Ｙ_３９と^１１１Ｉｎ_４９で代表させることができる。

Ｍが放射線又はＳＰＥＣＴイメージング用の金属放射性核種を表す場合、Ｙ_１は、好ましくは、Ｍと安定したキレートを形成するのに好適なキレート剤を表す。このようなキレート剤は、当技術分野で周知であり、そのようなキレート剤の典型的な例は、国際公開第０１／７７１４５号の表Ｉで説明されている。

特に好ましいのは、式（ＩＩＩ）のキレート剤Ｙ_１である。

式中、
それぞれのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４は独立にＨ又はＣ_１−１０アルキルであり、Ｃ_３−１０アルキルアリール、Ｃ_２−１０アルコキシアルキル、Ｃ_１−１０ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−１０アルキルアミン、Ｃ_１−１０フルオロアルキル又は２つ以上のＲ基は、これらの結合先の原子とともに、炭素環式、複素環式、飽和又は不飽和環を形成する。

より特に好ましいのは、式（ＩＩＩ）のキレート剤Ｙ_１であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、水素又はメチル基であり、Ｒ^４は、アルキル又はアルキルアミン基である。さらに好ましくは、Ｙ_１は、ここではｃＰＮ２１６と表される式（ＩＶ）のキレートであり、最も好ましくは、イメージング部分Ｍは、^９９ｍＴｃである。＊は、可能な結合部位を示している。

他の好ましいキレート剤は、式（Ｖ）で表されるものである。

式中、Ｒ１〜Ｒ６は独立にＨ、アルキル、アリール又はそれらの組み合わせを表し、Ｒ１〜Ｒ６基は、キレートを式（Ｉａ）のＷ_１又はＷ_２に結合できるように１つ以上の官能部分を含む。好適な官能部分は、例えば、アルキルアミン、アルキルスルフィド、アルコキシアルキルカルボン酸塩、アリールアミン、アリールスルフィド又はアルファ−ハロアセチルである。

Ｚが、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ及び^７７Ｂｒのようなガンマ線放出放射性ハロゲンであり、^１２５Ｉが好ましい場合、これは、当技術分野で周知の置換反応又は付加反応でＷ_１又はＷ_２に共有結合できるか又はＷ_１若しくはＷ_２が存在しない場合にＸ_０又はＸ_６に代わりに共有結合できるか又はＸ_６が存在しない場合に直接Ｘ_５に共有結合できる。

第２の実施形態では、式（Ｉａ）の化合物は、ＰＥＴイメージングモダリティで使用できる部分Ｚを含む。次いで、Ｚは、陽電子放射性をもつ放射線放出体、好ましくは陽電子放出放射性非金属を含む。好ましい基Ｚは、陽電子放出体^１１Ｃ、^１８Ｆ、^１３Ｎ、^１５Ｏ、^７７Ｆ、^７５Ｂｒ、^７６Ｂｒ及び^１２４Ｉのいずれかを含む。^１８Ｆが特に好ましい。好適な金属陽電子放出体は、^６４Ｃｕ、^４８Ｖ、^５２Ｆｅ、^５５Ｃｏ、^９４ｍＴｃ、^６８Ｇａ又は^８２Ｒｂであり、^６８Ｇａが好ましく、キレート剤Ｙ_１でキレート化することができる。

^１８Ｆを含むもののような非金属放射性核種は、当技術分野で周知の置換又は付加反応で、存在する場合に部分Ｗ_１又はＷ_２に又は或いはＸ_０、Ｘ_５又はＸ_６に共有結合することができる。

Ｚが^１８Ｆ標識されたアルデヒド、チオール又はアミノオキシ基である場合、Ｗ_１又はＷ_２は、好ましくは、アルファ−ハロアセチル部分、アルデヒド又はアミノオキシ基を含む官能基を持つ。チオール結合化学作用並びにアルデヒド及びアミノオキシ結合化学作用、^１８Ｆ−シントン及びこの化学作用を使用して調製された標識ペプチドは、国際公開第０３／０８０５４４号及び国際公開第０４／０８０４９２号で説明されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。或いは、^１８Ｆは、例えば^１８Ｆ−フルオロベンズアルデヒドのような^１８Ｆを含む他の部分によって導入できる。次いで、結合部位Ｗ_１、Ｗ_２、Ｘ_０、Ｘ_５又はＸ_６は、好ましくはアミノオキシ基を含む。

ＭがＰＥＴイメージング用の金属陽電子放出体を表す場合、Ｙ_１は、Ｍと安定したキレートを形成するのに好適なキレート剤を表す。このようなキレート剤は、当技術分野で周知であり、そのようなキレート剤の典型的な例は、国際公開第０１／７７１４５号の表Ｉ及び放射線及びＳＰＥＣＴイメージングを対象とする前の実施形態で説明されている。

好ましい一実施形態では、Ｙ_１は、ＤＯＴＡキレート剤であり、Ｍは、マイクロ波化学作用を使用してキレートに容易に導入できる^６８Ｇａである。

第３の実施形態では、Ｚは、ＭＲイメージングモダリティで使用される１つ以上の部分Ｍを担持する部分Ｙ_１を含む。Ｍは、ここでは、常磁性金属を表し、このような好適な金属イオンとしては、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）、Ｅｕ（ＩＩＩ）又はＤｙ（ＩＩＩ）がある。Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｄｙ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）及びＭｎ（ＩＩ）は、特に好ましい。Ｙ_１は、キレート剤、特に例えば米国特許第４６４７４４７号及び国際公開第８６／０２８４１号に記載の非環式又は環式ポリアミノカルボン酸塩（例えば、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＤＯＴＡ及びＤＯ３Ａ）のようなキレート剤を表す。Ｍは、さらに、例えば、Ｙ_１が金属酸化物のコーティングとして機能するようにＹ_１に吸着又はＹ_１に結合した超常磁性、フェリ磁性又は強磁性種のような金属酸化物を表すこともできる。ＭＲ造影剤として使用される金属酸化物は、例えば米国特許第６２３０７７７号で説明されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。

第４の実施形態では、Ｚは、Ｘ線イメージングモダリティで使用される造影性部分を表す。Ｚは、ここでは、タングステン、金及びビスマスのような、好ましくは酸化物の形態の、重金属を含む。Ｚは、さらに、Ｘ線造影剤として周知のヨウ化アリール誘導体、例えば、ｌｏｐａｍｉｒｏｎ（商標）及びＯｍｎｉｐａｑｕｅ（商標）で表すこともできる。これらの薬剤は、その酸又はアミン機能を介して、式（Ｉａ）のペプチドベクターに、適宜Ｗ_１又はＷ_２を介して、結合することができる。

他の実施形態では、式（Ｉａ）の化合物は、ガス充填マイクロベシクルの形態のＺを含む。このような超音波造影剤は、例えば、当技術分野で、例えば国際公開第９８／１８５００号に記載されているように官能化してペプチドと結合すれば、受容体のイメージングに使用することができる。

本発明の第６の、好ましい、実施形態では、式（Ｉａ）の部分Ｚは、光学イメージング法で直接的に又は間接的に検出することができる部分とすることができる。検出可能部分は、光散乱体（例えば、着色又は無着色粒子）、光吸収体又は光放出体とすることができる。さらに好ましくは、Ｚは、発色団又は蛍光化合物のような色素で表される。部分Ｚは、波長が紫外線から近赤外線までの電磁スペクトルの光と相互作用する任意の色素とすることができる。好ましいバージョンでは、Ｚは蛍光特性を有する。

好ましい有機色素部分は、広範な非局在化電子系を有する基、例えば、シアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素錯体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）錯体、ヨードアニリン色素及びビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）錯体を含む。蛍光色素からはシアニン色素の群が好ましい。さらに一段と好ましいのは、カルバシアニン、オキサシアニン、チアシアニン及びアザシアニンからなる群である。Ｃｙ５及びＣｙ７色素の群は、最も好ましい蛍光色素であり、これらは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ−エステル）によってペプチドベクターに結合することができる。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び異なる吸収／放出特性を有するＧＦＰの修飾形態のような蛍光タンパク質も有用である。ある種の希土類金属（例えば、ユウロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の錯体は、蛍光ナノ結晶（量子ドット）のように、いくつかの状況で使用される。

好ましい色素は、カルバシアニンの群から選択され、さらに一段と好ましいのは、インドール型のカルバシアニン色素である。この型の好ましい色素はの例として、次の式ＶＩのものが挙げられる。

式中、Ｑ_１基は、同一又は異なるものであり、置換又は非置換低アルキル基、例えば、適宜置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキル基である。アルキル基は、例えば、複素環エステル基（例えば、ＮＨＳ−エステル）のような、カルボキシ、スルホン酸、アミン、アンモニウム又はエステル基で置換される。Ｑ_２基は、同一又は異なるものであり、例えば、カルボキシ又はスルホン酸基で適宜置換された、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルのような低アルキル基、好ましくはメチル基である。適宜選ばれる芳香族基は、点線で示され、縮合ベンゾ環及び縮合ナフト環を含む両方の構造を含む。いずれの環も、置換又は非置換である。環は、スルホン酸基、カルボン酸基、水酸基、アルキル（スルホアルキル）アミノ基、ビス（スルホアルキル）アミノ基、スルホアルコキシ基、スルホアルキルスルホニル基、アルキル又は置換アルキル又はスルホアルキルアミノ基から選択されるＶ基で置換することができる。ｐは、正整数１、２、３又は４である。好ましくは、シアニン色素は、それぞれ炭素原子数５及び７の炭素架橋を有するペンタメチン又はヘプタメチン色素である。

Ｑ_１、Ｑ_２及びＶは、適宜Ｗ_１及び／又はＷ_２を介してペプチドベクターに色素を結合するための潜在的結合部位であり、Ｑ_１及びＶ基は、好ましい結合部位である。好ましい一態様では、Ｑ_１基は、ペプチドベクターに結合されるが、他のＱ_１基は、適宜置換低アルキル基である。

第２の態様では、本発明は、式（ＶＩＩ）
Ｗ_１−Ｘ_０−Ｘ_１−Ｐｈｅ−Ｘ_２−Ｘ_３−Ｘ_４−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｘ_５−Ｘ_６−Ｗ_２（ＶＩＩ）
のｕＰＡＲターゲティング化合物を提供し、
式中、記号は、式Ｉａについて定義されており、Ｗ_１及びＷ_２の一方又はその両方は、存在し、説明されているとおり、バイオモディファイヤーを表す。式ＶＩＩの化合物は、第１の態様で説明されているように、造影性部分に結合することができるか又は治療のような他の用途もある。

本発明の化合物は、知られている化学合成法を使用して合成することができるが、特に有用なのは、自動ペプチドシンセサイザを採用したＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法である（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，８５：２１４９（１９６４））。典型的には、所望の配列は、固相ペプチド合成で構築される。本発明の実施例に使用されている合成戦略の標準的方法は、Ｅ．Ａｔｈｅｒｔｏｎ＆Ｒ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ，“Ｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｐｅｐｔｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈ”，１９８９，ＩＲＬＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄで説明されている。

例えば、Ｃ末端が酸、アミン又はアミドであるペプチドを産出する、様々な酸に不安定なリンカー基を有する樹脂が使用される。次いで、アミノ保護基が取り除かれ、好適な縮合試薬を使用して配列の第２のアミノ酸が結合される。官能基側鎖に半永久的アミノ保護基及び永久的保護基を持つアミノ酸が採用される。次いで、アミノ脱保護及び結合サイクルは、注目する配列が構築されるまで交互段階で繰り返される。

或いは、ペプチドは、包括的又は最小限の保護戦略を用いて、カルボキシ末端から１段ずつ及び／又はセグメント縮合若しくはライゲーション法の適用により、当技術分野で知られている溶液ペプチド合成法で合成することができる。組み合わせ溶液固相セグメント縮合法も適用できる。

一般に、存在する反応側鎖基（例えば、アミノ基、水酸基、グアニジノ基及びカルボキシル基）は、上に示されているように合成全体において保護される。アミノ酸の保護基については様々な選択が知られている（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．＆Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．（１９９１）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｇｒｏｕｐｓｉｎｏｒｇａｎｉｃｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋを参照）。使用することができるアミノ保護基は、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）及びｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）を含む。使用することができる側鎖保護基は、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリチル（Ｔｒｔ）、Ｂｏｃ及び２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）を含む。他のこのような様々な基が当技術分野で知られていることは理解されるであろう。

最後に、永久的側鎖保護基は、取り除かれ、ペプチドは、樹脂から切断されるが、その際に、通常は、適当な酸性試薬、例えばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で同時に処理する。

Ｗ_１及び／又はＷ_２は、知られている化学合成法を使用してペプチドベクターに結合させることができる。特に有用なのは、ペプチドベクターの調製の場合のように、アミド結合形成によってＷ_１及び／又はＷ_２をペプチドベクターに直接結合させることである。或いは、ペプチドＮ末端上の離脱基がＷ_１及び／又はＷ_２上の求核基で置換される求核試薬置換反応を使用することができる。このような離脱基は、アルファ位置でカルボニル基に結合された臭化物とすることができ、このような求核剤は、窒素とすることができる。

Ｚは、ペプチドベクターへのＷ_１及び／又はＷ_２の結合の場合と同じ方法を使用してペプチドに直接結合させることができる。ＺがＷ_１又はＷ_２を介してペプチドに結合される場合、任意の化学合成法をＺ及びＷ_１又はＷ_２の結合で使用することができる。特に有用なのは、例えばペプチドと造影性部分とのアミド結合をもたらすＺの自動結合である。レポーター部分をペプチドに結合する方法は、当技術分野では周知であり、選択されるレポーター及びどのスペーサーが使用されるかに依存する。

ペプチドベクター及び造影剤は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して精製され、質量分析法及び分析ＨＰＬＣで特徴付けられるようにできる。

本発明の化合物がｕＰＡ／ｕＰＡＲ系の効率的な造影剤として機能する要件は、ペプチドベクターが受容体に対し高親和性を有していなければならない一方で、ベクターは必要なだけ長く受容体上に「留まる」べきであるというものである。そのため、造影剤／ｕＰＡＲ系は、遅い解離反応速度（いわゆる「オフレート」）を示すのが好ましく、これは、解離速度定数Ｋ_ｄｉｓｓとして都合よく表すことができる。本発明の造影剤は、受容体結合反応速度を大幅に改善したことが判明している。これに基づき、特に好ましい本発明の造影剤は、好ましくは＜５０、さらに好ましくは＜２０、さらに一段と好ましくは＜１０、最も好ましくは＜１のｕＰＡ（ＧＦＤ）の増殖因子ドメインに関する解離速度定数（Ｋ_ｄｉｓｓ）を持つ。

本発明の造影剤は、好ましくはｕＰＡの細胞表面ｕＰＡＲへの結合を阻害することができる。本発明の造影剤は、好ましくはジイソプロピルフルオロホスフェート不活性ｕＰＡと等しい効力を有する。パラメータＩＣ_５０は、ｕＰＡの５０％が競合的に取り除かれる濃度を示す。本発明の好ましい造影剤は、ＩＣ_５０＜５０ｎＭ、好ましくは＜２５ｎＭ、さらに好ましくは＜１０ｎＭ、さらに一段と好ましくは＜３ｎＭである。

本発明による造影剤は、好ましくは受容体の上方制御に関連する疾患を診断するためにｕＰＡＲが発現される部位の識別に使用される。受容体は、好ましくは、周辺組織よりも病変組織のほうに５０％以上豊富に存在する。さらに好ましくは、受容体は、周辺組織よりも病変組織のほうに２倍以上豊富に存在する。さらに一段と好ましくは、受容体は、周辺組織よりも病変組織のほうに５倍以上豊富に存在する。

他の態様では、本発明は、細胞の表面上、組織内、器官内又は病理的状態のせいでｕＰＡＲの過剰発現が疑われる生体試料中のｕＰＡＲの存在を検出する方法を提供する。この方法は、
ａ）細胞、組織、器官又は生体試料を本発明の造影剤に接触させる段階と
ｂ）細胞、組織、器官又は試料に関連付けられている造影性部分の存在を検出する段階を含む。この方法では、接触と検出は両方とも、インビトロで実施することができるが、或いは、接触をインビボで、検出をインビトロで行うが、好ましくは接触と検出はインビボである。

好ましい方法は、上述の造影剤をヒト又は動物の身体（例えば脈管系）に投与して、造影剤が分配された身体の少なくとも一部分の画像を生成させる診断法によってヒト又は動物の身体の画像を生成することを含む。

さらに別の態様では、本発明は、上述の造影剤を含む造影剤組成物を予め投与しておいたヒト又は動物の身体の強調画像を生成させる方法であって、身体の少なくとも一部分の画像を生成させることを含む方法を提供する。

本発明の新規造影剤は、選択される造影性部分に応じて、任意のイメージングモダリティにおいて造影剤として使用することができる。画像診断法での造影剤の使用は、したがって、本発明の一態様である。好ましい一態様は、様々な形態の癌及び転移、例えば、乳癌、皮膚癌、結腸癌、膵臓癌、前立腺癌、肺癌又は卵巣癌のイメージング及び診断で使用するための上述の造影剤である。或いは、造影剤は、アテローム性動脈硬化症の不安定プラークのような活性化されたマクロファージが存在する疾患の検出に使用することができる。

本発明は、さらに、本発明の造影剤又はその塩の有効量、例えば、インビボイメージングにおける画像コントラストを高めるのに有効な量を、薬学的に許容される１種以上の補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。

さらに別の態様では、本発明は、コントラスト増強剤をヒト又は動物の身体に投与して身体の少なくとも一部分の画像を生成させる診断法に用いられるコントラスト増強剤の製造における本発明の造影剤の使用を提供する。

以下の非限定的な実施例によって本発明をさらに例示する、実施例では以下の略号を用いる。
ＢＡＥＥＧ：ビス−（アミノエチル）エチレングリコール、
Ｂｏｃ：ｔ−ブチルオキシカルボニル、
Ｃｙ：シアニン、
ＤＥＧ：ジエチレングリコール、
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル、
ＨＡＴＵ：２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー、
Ｋｒｙｔｏｆｉｘ２２２：４，７，１３，１６，２１，２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザビシクロ−（８，８，８）ヘキサコサン、
ＬＣ：液体クロマトグラフィー、
ＭＳ：質量分析計、
ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン、
ＰＥＧ：ポリエチレングリコール、
ＰＢＳ：リン酸緩衝液、
Ｐｍｃ：２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル、
ＰｙＡＯＰ：（７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、
ＲｉｎｋＡｍｉｄｅＭＢＨＡ樹脂：４−メチルベンズヒドリルアミンが結合したポリスチレンマトリックス、
ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相ＨＰＬＣ、
ＲＴ：室温、
Ｓｅｐ−Ｐａｋ：Ｃ１８樹脂を充填した分離カラム、
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン。

実施例１：
Ｃｙ５（ビス−ＳＯ _３）−Ｔｈｒ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＯＨ（２）

Ｈ−Ｔｈｒ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＯＨ（１）の合成
上記配列に対応するペプチドは、標準的な固相ペプチド化学反応で合成された。

Ｃｙ５（ビスＳＯ _３）モノＮＨＳエステルとペプチド（１）との結合
Ｃｙ５（ビスＳＯ_３）モノＮＨＳエステル（１．１８ｍｇ、０．００１７ｍモル）をＤＭＦ中に溶解させ、ペプチド（１）（２ｍｇ、０．００１５ｍモル）を固形物として溶液に加え、次いでＮＭＭ（０．５５μｌ、０．００５ｍモル）を加えた。反応槽をホイルにくるみ、１６時間攪拌機上に置いた。エレクトロスプレイイオン化ＭＳで所望の生成物を確認した。生成物の［Ｍ＋Ｈ］^＋は、１８５０．８５ｍ／ｚと予想され、実際には１８５０．９ｍ／ｚであった。

実施例２：
Ｃｙ５（ビス−ＳＯ _３）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＮＨ _２（３）

Ｃｙ５（ビス−ＳＯ _３）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＮＨ _２（３）の合成
上記配列のアミノ酸は、標準的な固相ペプチド化学反応で構築した。次いで、Ｃｙ５（ビスＳＯ_３）モノＮＨＳエステル（０．５ｅｑ）をＤＭＦ中に溶解させ、Ｈ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＲｉｎｋＡｍｉｄｅＭＢＨＡ樹脂（１ｅｑ）に加え、その後、ＮＭＭ（３ｅｑ）を加えた。反応槽をホイルにくるみ、１６時間攪拌機上に置いた。Ｃｙ５色素結合ペプチドを脱保護し、水２．５％及びＴＩＳ２．５％を含有するＴＦＡで１時間処理して樹脂から切断した。エレクトロスプレイイオン化ＭＳで所望の生成物を確認した。生成物の［Ｍ＋Ｈ］^＋は、１９７７．８８ｍ／ｚと予想され、実際には１９７７．８ｍ／ｚであった。

実施例３：
Ｃｙ５（ビス−ＳＯ _３）−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−βＡｌａ−Ｌｙｓ（Ｃｙ５（ビス−ＳＯ _３）−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ）−ＮＨ _２（５）

Ｈ−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−βＡｌａ−Ｌｙｓ（Ｈ−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ）−ＮＨ _２（４）の合成
上記配列に対応するペプチドは、標準的な固相ペプチド化学反応で構築した。

Ｃｙ５（ビスＳＯ _３）モノＮＨＳエステルとペプチド（４）との結合
Ｃｙ５（ビスＳＯ_３）モノＮＨＳエステル（２．２ｅｑ）をＤＭＦ中に溶解させ、ペプチド（４）（１ｅｑ）を固形物として溶液に加え、次いでＮＭＭ（３ｅｑ）を加える。反応槽をホイルにくるみ、２４時間攪拌機上に置き、所望のビス結合生成物を得る。生成物は、ＲＰ−ＨＰＬＣ及びエレクトロスプレイイオン化ＭＳで分析される。

実施例４：
Ｎ−（４−１８Ｆ−フルオロベンジリデン）アミノオキシアセチル−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＮＨ _２（８）

Ｎ−Ｂｏｃ−アミノオキシアセチル−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＮＨ _２（７）の合成
Ｂｏｃ−アミノオキシアセチル−ＰＥＧ（４）−ジグリコール酸は、Ｂｏｃ−アミノオキシ酢酸の活性エステルを使用し、対応するアミノ−ＰＥＧ（４）−ジグリコール酸と反応させる方法で、当業者が調製しうる。得られた生成物Ｂｏｃ−アミノオキシアセチル−ＰＥＧ（４）−ジグリコール酸（１．４ｅｑ）とＰｙＡＯＰ（１．２ｅｑ）をＤＭＦ中に溶解させる。ＮＭＭ（２ｅｑ、２００μＬ）を加えて、混合物を５分間攪拌する。ペプチド（６）（１ｅｑ）とＮＭＭ（４ｅｑ）のＤＭＦ溶液を加えて、反応混合物を３０分間攪拌する。ＤＭＦを真空中で蒸発させ、分取用ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して生成物を精製する。凍結乾燥に先立って０．３％のアンモニア（ＮＨ_３）／水を使用して所望の生成物を含む分画をｐＨ５に調整し、Ｂｏｃ保護基の脱落を防ぐ。生成物は、ＲＰ−ＨＰＬＣ及びエレクトロスプレイイオン化ＭＳで分析される。

ペプチド（７）の１８Ｆ標識
Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（０．５ｍｌＡＣＮ中に５ｍｇ）及び炭酸カリウム（０．１Ｍ溶液５０μｌ）の存在下で、２０分間、窒素流の中で１１０℃に加熱して^１８Ｆ−フッ化物を共沸乾燥させる。このときに、３×０．５ｍｌのＡＣＮを加えて、取り除く。混合物を＜４０℃に冷やし、ＨａｋａｅｔａｌｉｎＪ．ＬａｂｅｌｌｅｄＣｐｄｓ．＆Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍｓ１９８９２７（７）８２３（０．４ｍｌジメチルスルホキシド中１ｍｇ）で説明されている手順に従って合成されたトリメチルアンモニウムベンズアルデヒドトリフレートを加えた。反応槽を封止し、１５分間９０℃に加熱して、標識化を行わせる。次に４−１８Ｆフルオロベンズアルデヒド原液を室温まで冷ます。その間、ペプチド（７）（６ｍｇ）をＴＦＡ５％水溶液（２００μｌ）で５分間、室温において処理し、Ｂｏｃ保護基を取り除く。溶媒を真空中で取り除く。Ｂｏｃ−脱保護ペプチドを、０．１Ｍの酢酸アンモニウム溶液（ｐＨ４、０．４ｍｌ）に再溶解させ、４−１８Ｆ−フルオロベンズアルデヒド原液と反応槽内で組み合わせる。反応槽を封止し、１５分間７０℃に加熱して、結合を行わせる。室温まで冷ました後、粗コンジュゲートを分取用ＨＰＬＣで精製する。所望のコンジュゲートを含む分画を水１０ｍｌで希釈し、Ｃ１８Ｓｅｐ−Ｐａｋ（エタノール１０ｍｌ及び水２０ｍｌで順次洗浄して予め調製しておいたもの）にローディングする。Ｓｅｐ−Ｐａｋを水１０ｍｌですすぎ、次いで、エタノール２ｍｌで溶出する。エタノールを真空中で取り除き、生成物（８）をＰＢＳ内で形成する。

実施例５：
アセチル−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−ＢＡＥＥＧ−Ｇｌｕｔ−ｃＰＮ２１６（１０）

アセチル−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−ＢＡＥＥＧ−ＮＨ _２（９）の合成
上記配列に対応するペプチジル樹脂は、標準的な固相ペプチド化学反応で合成される。アセチル−ＰＥＧ（４）−ジグリコール酸（５ｅｑ）とＰｙＡＯＰ（４．５ｅｑ）をＤＭＦ中に溶解させる。ＮＭＭ（１０ｅｑ、２００μＬ）を加えて、混合物を５分間攪拌する。次いで、混合物を、ＤＭＦ中で事前膨張させたペプチド樹脂に加え、反応を一晩続ける。次いで、ペプチドを脱保護し、水２．５％及びＴＩＳ２．５％を含有するＴＦＡを１時間使用して樹脂から切断する。生成物は、ＲＰ−ＨＰＬＣ及びエレクトロスプレイイオン化ＭＳで分析される。

ｃＰＮ２１６のペプチド（９）への結合
ペプチド（９）（１ｅｑ）をＤＭＦ中に溶解させ、ｃＰＮ２１６−グルタリール−テトラフルオロチオフェニルエステル（２ｅｑ）を加え、続いて、ＮＭＭ（３ｅｑ）を加える。一晩攪拌した後、減圧下で溶媒を取り除いて反応混合物にさらに処理し、生成物（１０）を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製する。生成物は、ＲＰ−ＨＰＬＣ及びエレクトロスプレイイオン化ＭＳで分析される。

ペプチド（１０）の ^９９ｍＴｃ−標識
ペプチド（１０）（０．１ｍｇ）を塩水又はメタノール（０．１ｍｌ）で戻し、賦形剤の凍結乾燥ツールボックスキット内に移す。ツールボックスキットは、アミンに基づくキレート用の一般的放射性標識条件を与えるように設計されており、塩化第一スズ乾燥物（１６μｇ）、メチレンジホスホン酸（２５μｇ）、炭酸水素ナトリウム（４５００μｇ）、炭酸ナトリウム（６００μｇ）、パラアミノ安息香酸ナトリウム（２００μｇ）を備え、キットｐＨ＝９．２であった。塩水（３ｍｌ）中のテクネチウム酸ナトリウム（^９９ｍＴｃ）注射液（２．１ＧＢｑ）を加え、キットを数回反転させて内容物を溶解し、１５〜２０分間、室温で、インキュベートするのに任せた。ＨＰＬＣ及びＩＴＬＣで直ちに試料を分析し、^９９ｍＴｃ標識ペプチド（１１）を、キット再構成後、１〜３時間被験者に投与する。

実施例６：
アセチル−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−ＢＡＥＧ−Ｇｌｕｔ−ＤＯＴＡ（１５）のガドリニウム（ＩＩＩ）錯体

アセチル−Ａｓｐ−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−ＤＥＧ−ＮＨ _２（１２）の合成
上記配列に対応するペプチドを、標準的な固相ペプチド化学反応で合成する。

トリ−ｔＢｕ−ＤＯＴＡ（１３）の合成
トリ−ｔＢｕ−ＤＯ３Ａ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’−三酢酸、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル、１０ｍモル）及びブロモ酢酸（１０ｍモル）をＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中に溶解させた。水（５０ｍｌ）中に溶解しているＫ_２ＣＯ_３（３０ｍモル）を加え（ＭｅＯＨ／水混合物中でｐＨ１１）、反応物を２４時間攪拌し、次いでさらに２４時間、４０℃で加熱した。粗生成物を、ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した（ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａ５ミクロン、Ｃ１８、２５０×２１．２ｍｍ、１０ｍｌ／分で４０分間にわたり勾配５〜５０％Ｂ）。エレクトロスプレイイオン化ＭＳで所望の生成物を確認した。生成物の［Ｍ＋Ｎａ］^＋は、５９５．４ｍ／ｚと予想されたが、［Ｍ＋Ｎａ］^＋は５９５．３ｍ／ｚであり、８０度で^１Ｈ−ＮＭＲを使用した。

ＤＯＴＡ結合ペプチド（１４）の合成
トリ−ｔＢｕ−ＤＯＴＡ（１３）（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル１ｅｑ）をＮＭＭ（３ｅｑ）の存在下で５分間ＤＭＦ中ＨＡＴＵ（１ｅｑ）で活性化する。混合物を、ペプチド（１２）に加え、反応を一晩続ける。溶媒を真空中で取り除き、生成物を水５％を含有するＴＦＡ中でｔＢｕ脱保護する。生成物は、ＲＰ−ＨＰＬＣで精製され、ＲＰ−ＨＰＬＣ及びエレクトロスプレイイオン化ＭＳで分析される。

Ｇｄ（ＩＩＩ）との錯形成
ＤＯＴＡ結合ペプチド（１４）（１ｅｑ）を、ＲＴでｐＨ６．５の水溶液中で、ＧｄＣｌ_３（１ｅｑ）と反応させる。塩基性ｐＨの溶液の遠心分離で非錯化Ｇｄ（ＩＩＩ）を取り除く。生成物（１５）を凍結乾燥で単離する。

Claims

次の式ＩａのｕＰＡＲターゲティング造影剤。
Ｚ₁−Ｗ₁−Ｘ₀−Ｘ₁−Ｐｈｅ−Ｘ₂−Ｘ₃−Ｘ₄−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｘ₅−Ｘ₆−Ｗ₂−Ｚ₂（Ｉａ）
式中、
Ｘ₀は１〜５個のアミノ酸を表し、
Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃、Ｘ₄及びＸ₅は独立に１つのアミノ酸を表し、
Ｐｈｅはフェニルアラニンを表し、
Ｌｅｕはロイシンを表し、
Ｔｒｐはトリプトファンを表し、
Ｘ₆は０〜５個のアミノ酸を表すか又は次の式（Ｉｂ）であり、
β−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｚ₁−Ｗ₁−Ｘ₀−Ｘ₁−Ｐｈｅ−Ｘ₂−Ｘ₃−Ｘ₄−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｘ₅）（Ｉｂ）
式中、記号は式Ｉａで定義した通りであり、
β−Ａｌａはβアラニンを表し、
Ｌｙｓはリシンを表し、
式Ｉｂのβ−Ａｌａは式ＩａのＸ₅に結合しており、
Ｗ₁及びＷ₂は同一又は異なる部分であって、Ｗ₁ 又はＷ₂ がバイオモディファイヤーである場合には１〜１０単位の単分散ＰＥＧ構成単位を表すことを条件として、各々バイオモディファイヤーであるか或いは存在せず、Ｚ₁又はＺ₂の少なくとも一方が存在していて画像診断法で直接又は間接的に検出できる造影性部分を表す。
前記式（Ｉａ）がペプチド配列Ｚ₁−Ｗ₁−Ｘ₀−Ｃｈａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ₆−Ｗ₂−Ｚ₂である、請求項１記載の造影剤。
式中、Ｃｈａはシクロヘキシルアラニンを表し、Ｓｅｒはセリンを表し、Ａｒｇはアルギニンを表し、Ｔｙｒはチロシンを表し、他のすべての記号は既に定義した通りである。
Ｚ₁及びＺ₂の少なくとも一方が放射線、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、Ｘ線、ＭＲ、超音波又は光学イメージングで検出できる部分を含むインビボ診断用の造影性部分を表す、請求項１又は請求項２記載の造影剤。
請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の造影剤を、薬学的に許容される１種以上の補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる医薬組成物。