JP5096750B2 - アレルゲン不活化剤、及びそれを含有する皮膚外用剤、又はアレルゲン不活化用製品 - Google Patents
アレルゲン不活化剤、及びそれを含有する皮膚外用剤、又はアレルゲン不活化用製品 Download PDFInfo
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var. japonica)」は、バラ科ミズヒキ属の植物で、夏に黄花の小花を細長く穂のように咲かせる姿から「金色の水引」に見たてこの名前がついた。全草のエキスは、血小板増加による血液凝固促進と止血作用があるので、強壮収斂(しゅうれん)止血剤とされていて、喀血(かっけつ)、血便、子宮出血などの止血に用いる。また、抗菌、消炎、鎮痛作用もあり、健胃、下痢止めにも応用される。
本発明のアレルゲン不活性化剤は、キンミズヒキ(Agrimonia pilosa var. japonica)、オトギリソウ(Hypericum erectum)、紅茶(Camellia Sinensis)、サラシア(Salacia oblonga)、ブドウ(Vitis spp.)、夏枯草(Prunellae Spica)、サンシュユ(Cornus officinalis)、ボケ(Chaenomeles speciosa)からなる群より選ばれた1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。
キンミズヒキ、オトギリソウ、紅茶、サラシア、ブドウ、夏枯草、サンシュユ、ボケの葉を乾燥させる。この乾燥物10重量部に水または50%(v/v)エタノール水溶液150重量部を加え室温にて5日間抽出し、水の場合は60℃で3時間抽出し、濾過して、溶媒を留去し、それぞれの抽出物を得た。これらを試料として試験例1の方法により、スギ花粉アレルゲン不活化作用を測定し、その結果を表1に示した。また、試験例2の方法によりダニアレルゲン不活化作用を測定し、その結果を表2に示した。
〔試験例1〕スギ花粉アレルゲン不活性化試験
(1)スギ花粉アレルゲン不活性化反応
1%DMSOを含む0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液に、試料1〜8をそれぞれ表1に示す濃度で溶解し、各試料溶液を調製した。各試料溶液をそれぞれ100μLずつ96wellマイクロプレートに添加し、0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液にスギ花粉アレルゲン(製品名:精製花粉抗原Cry j 1,生化学工業社製)を溶解した2ng/mLのスギ花粉アレルゲン溶液を1wellあたり100μLずつ添加し、室温で2時間振とうした。また、対照として、試料を添加していない1%DMSOを含む0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液に花粉アレルゲン溶液を添加した溶液についても同様に振とうした。振とう後、マイクロプレートの各wellからスギ花粉アレルゲン溶液を100μLずつ採取し、当該溶液中に存在するスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)を下記に示すサンドイッチELISA法により測定した。
10μg/mLのコーティング溶液(製品名:抗Cry j 1モノクローナル抗体013,生化学工業社製)100μLをELISAプレートの各wellに添加し、室温で2時間静置した。その後、コーティング溶液を除去し、0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液を250μL添加し、4℃で一晩静置した。一晩静置後、0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液を除去し、2時間振とうさせた上記スギ花粉アレルゲン溶液100μLを添加して、室温で2時間振とうした。
スギ花粉アレルゲン不活性化率(%)=(B−A)/B×100
ただし、式中、Aは「試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)」を表し、Bは「試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)」を表す。
T−PBS溶液に試料を各濃度で溶解して調整後、35μLずつ96wellマイクロプレートに添加する。T−PBS溶液に抗原(精製ダニ抗原Der f II )を溶解した400ng/mLの抗原溶液を上記マイクロプレートに35μLずつ添加し、室温で2時間振とうする。また、対照として、試料を添加していない1%DMSOを含む0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液に花粉アレルゲン溶液を添加した溶液についても同様に振とうした。また、対照として、試料を添加していない1%DMSOを含む0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液に花粉アレルゲン溶液を添加した溶液についても同様に振とうした。振とう後、マイクロプレートの各wellからダニアレルゲン溶液を50μLずつ採取し、当該溶液中に存在するスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)を下記に示すサンドイッチELISA法により測定した。
2μg/mLのコーティング溶液(製品名:抗Derf IIモノクローナル抗体15E11,生化学工業社製)50μLをELISAプレートの各wellに添加し、室温で2時間静置した。その後、コーティング溶液を除去し、1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液を200μL添加し、室温で1時間放置した。一時間静置後、0.05%Tween20含有PBS300μLで各wellを3回洗浄、標準溶液、検液を50μLずつ添加し、室温で2時間静置した。
0.05%
Tween 20含有PBS
300μLで各wellを3回洗浄、800倍に希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Der f IIモノクローナル抗体13A4pを50μL添加し、室温で2時間静置した。
0.05%
Tween 20含有PBS
300μLで各wellを3回洗浄後、基質溶液を1wellに100μLずつ加え、15分程度静置した後、2N
硫酸を1wellにつき100μLずつ加え、酵素反応を停止した。硫酸添加後30分以内にプレートリーダーでA490−650の吸光度を測定した。
ダニアレルゲン不活性化率(%)=(B−A)/B×100
式中、Aは「試料添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度(ng/mL)」を表し、Bは「試料無添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度(ng/mL)」を表す。
上記試験の結果を表2に示す。
<処方例1>化粧水1
(成分名) (質量%)
キンミズヒキ水抽出物 0.001
グリセリン 5.0
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.0) 1.5
エタノール 8.0
クエン酸トリエチル 2.0
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
(成分名) (質量%)
ボケ水抽出物 0.01
グリセリン 5.0
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.0) 1.5
エタノール 8.0
クエン酸トリエチル 2.0
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
(成分名) (質量%)
キンミズヒキエタノール抽出物 0.1
ミツロウ 2.0
ステアリルアルコール 5.0
ステアリン酸 8.0
スクワラン 10.0
自己乳化型グリセリルモノステアレート 3.0
ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.0) 1.0
グリセリン 5.0
水酸化カリウム 0.3
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
(成分名) (質量%)
サンシュユエタノール抽出液 1.0
ミツロウ 2.0
ステアリルアルコール 5.0
ステアリン酸 8.0
スクワラン 10.0
自己乳化型グリセリルモノステアレート 3.0
ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.0) 1.0
グリセリン 5.0
水酸化カリウム 0.3
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
(成分名) (質量%)
サラシア水抽出物 5.0
スクワラン 8.0
ワセリン 2.0
ミツロウ 0.5
ソルビタンセスキオレエート 0.8
ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.0) 1.2
カルボキシビニルポリマー 0.2
グリセリン 1.5
水酸化カリウム 0.1
エタノール 7.0
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
(成分名) (質量%)
夏枯草エタノール抽出物 0.5
スクワラン 8.0
ワセリン 2.0
ミツロウ 0.5
ソルビタンセスキオレエート 0.8
ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.0) 1.2
カルボキシビニルポリマー 0.2
グリセリン 1.5
水酸化カリウム 0.1
エタノール 7.0
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
(成分名) (質量%)
紅茶水抽出物 0.1
ブドウ葉水抽出物 1.0
酢酸トコフェロール 0.5
パラジメチルアミノ安息香酸オクチル 4.0
ブチルメトキシベンゾイルメタン 4.0
ステアリルアルコール 18.0
モクロウ 20.0
グリセリンモノステアリン酸エステル 0.3
ワセリン 33.0
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
サンシュユ水抽出物 10.0
タンニン酸 0.1
1,3−ブチレングリコール 5.0
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.0) 1.5
エタノール 15.0
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
ボケエタノール抽出物 20.0
タンニン酸 0.1
1,3−ブチレングリコール 5.0
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.0) 1.5
エタノール 15.0
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
キンミズヒキ抽出物 15.0
タンニン酸 0.1
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.0) 1.5
エタノール 15.0
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
(製法)
1.常法にて上記処方より溶液を調製する。
2.調製した1の溶液に不織布やガーゼ等を1時間浸漬し、その後取り出し、乾燥させ、シートとする。
Claims (4)
- キンミズヒキ(Agrimonia pilosa var. japonica)、オトギリソウ(Hypericum erectum)、紅茶(Camellia Sinensis)、サラシア(Salacia oblonga)、ブドウ(Vitis spp.)、夏枯草(Prunellae Spica)、サンシュユ(Cornus officinalis)、ボケ(Chaenomeles speciosa)からなる群より選ばれた1種又は2種以上の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするアレルゲン不活性化剤。
- アレルゲンが、花粉アレルゲン及び/又はダニアレルゲンであることを特徴とする請求項1に記載のアレルゲン不活性化剤。
- 請求項1記載のアレルゲン不活化剤の1種又は2種以上を配合することを特徴とするアレルゲン不活化用スプレー。
- アレルゲン不活化剤の1種又は2種以上を配合することを特徴とするアレルゲン不活化用シート。
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