JP5090754B2 - 免疫に対する機能性を高めた納豆及び抗アレルギー用組成物 - Google Patents
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Description
(1)納豆菌を有効成分として含有することからなるインターロイキン12産生量を高めて免疫に対する機能性を示す機能性食品であって、
上記納豆菌が、FERM P−21172で特定されるBacillus subtilis TTCC848株とその変異株、FERM P−21173で特定されるBacillus subtilis TTCC903株とその変異株、又はFERM P−21174で特定されるBacillus subtilis TTCC841株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株であること、を特徴とする機能性食品。
(2)上記免疫に対する機能性として、花粉症、通年性アレルギー性鼻炎に対するアレルギー改善作用を有する、前記(1)に記載の機能性食品。
(3)上記食品が、納豆製品である、前記(1)又は(2)に記載の機能性食品。
(4)納豆菌を有効成分として含有することからなるインターロイキン12産生量を高めて免疫に対する機能性を示す抗アレルギー用組成物であって、
上記納豆菌が、FERM P−21172で特定されるBacillus subtilis TTCC848株とその変異株、FERM P−21173で特定されるBacillus subtilis TTCC903株とその変異株、又はFERM P−21174で特定されるBacillus subtilis TTCC841株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株であること、を特徴とする抗アレルギー用組成物。
(5)上記免疫に対する機能性として、花粉症、通年性アレルギー性鼻炎に対するアレルギー改善作用を有する、前記(4)に記載の抗アレルギー用組成物。
(6)前記(1)又は(4)に記載の機能性食品又は抗アレルギー用組成物に使用する納豆菌であって、FERM P−21172で特定されるBacillus subtilis TTCC848株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株。
(7)前記(1)又は(4)に記載の機能性食品又は抗アレルギー用組成物に使用する納豆菌であって、FERM P−21173で特定されるBacillus subtilis TTCC903株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株。
(8)前記(1)又は(4)に記載の機能性食品又は抗アレルギー用組成物に使用する納豆菌であって、FERM P−21174で特定されるBacillus subtilis TTCC841株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株。
(9)前記(6)から(8)のいずれかに記載の納豆菌を1つ以上含む複数の納豆菌の混合菌を有効成分として含有することを特徴とするインターロイキン12産生量を高めて免疫に対する機能性を示す機能性食品。
(10)前記(6)から(8)のいずれかに記載の納豆菌を1つ以上含む複数の納豆菌の混合菌を有効成分として含有することを特徴とするインターロイキン12産生量を高めて免疫に対する機能性を示す抗アレルギー組成物。
本発明は、インターロイキン12産生量を高めて免疫に対する機能性を示す機能性食品又は抗アレルギー用組成物であって、納豆菌を有効成分として含むことを特徴とするものである。本発明では、上記免疫に対する機能性として、花粉症、通年性アレルギー性鼻炎に対するアレルギー改善作用を有すること、上記食品が納豆製品であることを好ましい実施の態様としている。
(1)免疫機能調節を可能とする納豆菌利用技術を提供することができる。
(2)納豆菌を有効成分とする免疫に対する機能性を高めた機能性食品を提供することができる。
(3)免疫に対する機能性を高めた納豆製品を提供することができる。
(4)免疫に対する機能性が高い納豆菌株を提供することができる。
(5)免疫に対する機能性を高めた抗アレルギー用組成物を提供することができる。
(1)納豆菌
納豆菌として、ナットウキナーゼ高生産菌であるTTCC865株(FERM P−19176、特開2004−222516)を用いた。納豆菌胞子を肉汁で37℃、4時間培養した後、新しい肉汁に植え継ぎして、37℃、18時間培養して納豆菌栄養細胞を調製した。これを、ジルコニアシリカビーズ、タングステンシリカビーズを用い、シェイクマスター(株式会社バイオメディカルサイエンス)で15分間破砕し、その後、5分間、−80℃で冷却し、再び15分間破砕して、納豆菌栄養細胞破砕物(納豆菌破砕物)を調製した。破砕の際に、−80℃で冷却した凍結用ラックを用いた。
細胞として、マウス由来マクロファージ様細胞株であるJ774.1細胞(独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンターから購入)を用いた。このJ774.1細胞をRPMI1640(日水製薬株式会社)で5×105cells/mlに調製した。上記RPMI1640には、10%牛胎児血清(FBS、コージンバイオ株式会社)、2mM L−グルタミン(和光純薬工業株式会社)、10mM HEPES(株式会社同仁化学研究所)、100units/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシン(インビトロジェン株式会社)が含まれる。次いで、上記細胞を24wellマルチウエルセルカルチャープレート(ベクトン・ディッキンソン株式会社)に1ml/well蒔いて使用した。
次に、細胞を蒔いた各wellに、OD6000.1、0.5、1.0、2.5、5.0の納豆菌を100μl添加し、5%CO2条件下で37℃、24時間培養を行った。培養終了後、培養上清を回収し、IL−12p40測定時まで−80℃で保存した。
Quantikine(登録商標) mouse IL−12/IL−23p40 immunoassay(R&D Systems,Inc.)を用いて、IL−12p40の測定を行った。
1)納豆菌栄養細胞のIL−12p40誘導
納豆菌栄養細胞(OD6000.1)のIL−12p40誘導試験結果を図1に示す。J774.1細胞に納豆菌栄養細胞を添加して培養した場合は、IL−12p40の誘導が認められた。一方、納豆栄養細胞を加えなかった場合には、IL−12p40の誘導は認められなかった。
納豆菌胞子、納豆菌栄養細胞、納豆菌破砕物のIL−12p40誘導試験の結果を図2に示す。納豆菌胞子を添加して培養した場合は、本実施例で検討したOD6005まで量依存的にIL−12p40の増加が認められた。一方、納豆菌栄養細胞を添加した場合には、OD6001.0までは増加が認められ、それ以上の濃度では減少が認められた。納豆菌の破砕物では、ある一定のIL−12p40誘導は認められたが、添加濃度の違いによるIL−12p40誘導の変化は認められなかった。
(1)納豆菌
納豆菌の選抜は623株行った。
細胞として、実施例1の(2)に記載した細胞と同様のものを使用した。
粘質物判定用培地上で、提供された納豆菌を37℃、24時間培養した後、形成したコロニーの形状を+++(粘質物産生多)〜−(粘質物産生なし)の4段階で目視により評価した。この評価を粘質物産生能の評価とした。一定の評価が得られた優良株については、納豆品質の評価を行った。
納豆大豆を一晩浸漬の後、蒸煮し、納豆菌を接種し、40℃前後の恒温槽で18時間発酵させて納豆を作製した。熟練のパネラー3名により、納豆の外観、粘り、香り、硬さ、味、総合をA(良い)〜D(悪い)の4段階で納豆品質の評価を行った。総合的に一定の評価が得られた優良株に対して、IL−12p40の誘導について評価を行った。
J774.1細胞を蒔いた各wellに納豆菌胞子を2×106cfu/100μlを添加し、5%CO2条件下で、37℃、24時間培養を行った。培養終了後、培養上清を回収し、実施例1の(4)に記載したキットを用いてIL−12p40濃度を測定、IL−12p40の誘導評価を行った。
1)粘質物産生能の評価
納豆菌623株について、粘質物産生能の評価を行ったところ、519株の優良株が得られた。
粘質物産生能の優良株519株について納豆品質の評価を行ったところ、209株の優良株が得られた。
納豆品質の優良株209株のうち、139株についてIL−12p40の誘導評価を行ったところ、TTCC865株よりもIL−12p40の誘導の高い株が確認された。TTCC865株のIL−12p40の誘導を100%とした場合、最も誘導が高い株でTTCC865株の160%強であった(表1)。これらの株を微生物寄託機関に寄託した。受領機関名:独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター、受領日:平成19年2月2日、受領番号:FERM P−21172、FERM P−21173、FERM P−21174。
(1)試験方法
鼻過敏症のモデルであるtoluene 2,4−diisocyanate(TDI)感作モルモットに、納豆菌を38日間経口投与し、滅菌水投与の動物と比較して抗原誘発による鼻汁漏出が抑制されるか検討した。すなわち、納豆菌投与開始後11日目から5日間感作を行い、投与開始後24日、38日目に誘発及び鼻汁量の測定を行った。
鼻汁量の測定結果を図3に示す。媒体としての滅菌水投与群の鼻汁量は、投与24日で142.9mg、投与38日で173.3mgであった。TTCC903投与群の鼻汁量は、投与24日で79.4mg、投与38日で50.5mgであった。TTCC841投与群の鼻汁量は、投与24日で25.9mg、投与38日で19.1mgであった。TTCC Mix(TTCC903、841、865の混合菌)投与群の鼻汁量は、投与24日で12.4mg、投与38日で53.1mgであった。TTCC903、841、Mix投与群は、滅菌水投与群に比べ、有意に鼻汁漏出を抑制した。
Claims (10)
- 納豆菌を有効成分として含有することからなるインターロイキン12産生量を高めて免疫に対する機能性を示す機能性食品であって、
上記納豆菌が、FERM P−21172で特定されるBacillus subtilis TTCC848株とその変異株、FERM P−21173で特定されるBacillus subtilis TTCC903株とその変異株、又はFERM P−21174で特定されるBacillus subtilis TTCC841株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株であること、を特徴とする機能性食品。 - 上記免疫に対する機能性として、花粉症、通年性アレルギー性鼻炎に対するアレルギー改善作用を有する、請求項1に記載の機能性食品。
- 上記食品が、納豆製品である、請求項1又は2に記載の機能性食品。
- 納豆菌を有効成分として含有することからなるインターロイキン12産生量を高めて免疫に対する機能性を示す抗アレルギー用組成物であって、
上記納豆菌が、FERM P−21172で特定されるBacillus subtilis TTCC848株とその変異株、FERM P−21173で特定されるBacillus subtilis TTCC903株とその変異株、又はFERM P−21174で特定されるBacillus subtilis TTCC841株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株であること、を特徴とする抗アレルギー用組成物。 - 上記免疫に対する機能性として、花粉症、通年性アレルギー性鼻炎に対するアレルギー改善作用を有する、請求項4に記載の抗アレルギー用組成物。
- 請求項1又は4に記載の機能性食品又は抗アレルギー用組成物に使用する納豆菌であって、FERM P−21172で特定されるBacillus subtilis TTCC848株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株。
- 請求項1又は4に記載の機能性食品又は抗アレルギー用組成物に使用する納豆菌であって、FERM P−21173で特定されるBacillus subtilis TTCC903株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株。
- 請求項1又は4に記載の機能性食品又は抗アレルギー用組成物に使用する納豆菌であって、FERM P−21174で特定されるBacillus subtilis TTCC841株とその変異株で、かつ、IL−12の産生を誘導し、抗アレルギー作用を有する菌株。
- 請求項6から8のいずれかに記載の納豆菌を1つ以上含む複数の納豆菌の混合菌を有効成分として含有することを特徴とするインターロイキン12産生量を高めて免疫に対する機能性を示す機能性食品。
- 請求項6から8のいずれかに記載の納豆菌を1つ以上含む複数の納豆菌の混合菌を有効成分として含有することを特徴とするインターロイキン12産生量を高めて免疫に対する機能性を示す抗アレルギー組成物。
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