JPWO2018034203A1 - 新規乳酸菌、新規乳酸菌を有効成分として含有する自然免疫活性化剤、及び新規乳酸菌を含有する飲食品 - Google Patents
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Abstract
Description
また、カイコが微生物感染症に対する抵抗性評価のモデル動物として有用であることは、本発明者らにより確かめられている(特許文献2、3等)。
また、緑茶からカイコの筋収縮活性を指標に精製した画分に、哺乳動物細胞のマクロファージ活性化能があることが本発明者らにより確かめられている(非特許文献2)。
該乳酸菌の処理物は、乳酸菌の培養物;濃縮物;ペースト化物;噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物等の乾燥物;液状化物;希釈物;破砕物;殺菌加工物;及び;該培養物からの抽出物よりなる群から選ばれる少なくとも1つの処理物であることを特徴とする自然免疫活性化剤を提供するものである。
更には、該乳酸菌を有効成分とする自然免疫活性化剤、及び、該乳酸菌又は該自然免疫活性化剤を含有する飲食品、並びに、該乳酸菌を用いて醗酵する工程を用いて製造された飲食品を提供することができる。
本発明の乳酸菌は、独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)における受託番号がNITE BP−02307であるロイコノストック(Leuconostoc)属に属する乳酸菌である(以下、「乳酸菌#7−2」と略記する場合がある)。
本発明の乳酸菌#7−2は、キムチを分離源として初めて分離された。
菌体の形状:球形
好気/嫌気:嫌気
乳酸生成能:あり
(1)カタラーゼ:−
(2)酸性フォスファターゼ:+
(3)アルカリフォスファターゼ:+
(4)ナフトール−AS−BI−フォスフォヒドロラーゼ:+
(5)エステラーゼ(C4):+
(6)α−ガラクトシダーゼ:−
(7)エステラーゼリパーゼ(C8):+
(8)β−ガラクトシダーゼ:−
(9)リパーゼ(C14):−
(10)β−グルクロニダーゼ:−
(11)ロイシンアリルアミダーゼ:+
(12)α−グルコシダーゼ:+
(13)バリンアリルアミダーゼ:−
(14)β−グルコシダーゼ:−
(15)シスチンアリルアミダーゼ:−
(16)N−アセチル−β−グルコサミニダーゼ:−
(17)トリプシン:−
(18)α−マンノシダーゼ:−
(19)α−キモトリプシン:−
(20)α−フコシダーゼ:−
グリセロール(Glycerol):−
エリトリトール(Erythritol):−
D−アラビノース(D-Arabinose):−
L−アラビノース(L-Arabinose):−
D−リボース(D-Ribose):+
D−キシロース(D-Xylose):−
L−キシロース(L-Xylose):−
D−アドニトール(D-Adonitol):−
β−メチル−D−キシロピラノサイド(β-Methyl-D-xylopyranoside):−
D−ガラクトース(D-Galactose):+
D−グルコース(D-Glucose):+
D−フルクトース(D-Fructose):+
D−マンノース(D-Mannose):+
L−ソルボース(L-Sorbose):−
L−ラムノース(L-Rhamnose):−
ズルシトール(Dulcitol):−
イノシトール(Inositol):−
D−マンニトール(D-Mannitol):−
D−ソルビトール(D-Sorbitol):−
α−メチル−D−マンノピラノサイド(α-Methyl-D-mannopyranoside):−
α−メチル−D−グルコピラノサイド(α-Methyl-D-glucopyranoside):+
N−アセチルグルコサミン(N-Acetyl glucosamine):+
アミグダリン(Amygdalin):+
アルブチン(Arbutin):+
エスクリンクエン酸第二鉄(Esculin ferric citrate):+
サリシン(Salicin):+
D−セロビオース(D-Cellobiose):+
D−マルトース(D-Maltose):+
D−ラクトース(D-Lactose):−
D−メリビオース(D-Melibiose):+
D−スクロース(D-Sucrose):+
D−トレハロース(D-Trehalose):+
インスリン(Insulin):−
D−メレジトース(D-Melezitose):+
D−ラフィノース(D-Raffinose):+
スターチ(Starch):+
グリコーゲン(Glycogen):−
キシリトール(Xylitol):−
ゲンチオビオース(Gentiobiose):+
D−ツラノース(D-Turanose):+
D−リキソース(D-Lyxose):−
D−タガトース(D-Tagatose):+
D−フコース(D-Fucose):−
L−フコース(L-Fucose):−
D−アラビトール(D-Arabitol):−
L−アラビトール(L-Arabitol):−
グルコネート(Gluconate):+
2−ケト−グルコネート(2-Keto-gluconate):−
5−ケト−グルコネート(5-Keto-gluconate):−
すなわち、乳酸菌#7−2のゲノムDNAから、PCRにより、16SrDNA領域の塩基配列を増幅し、シーケンサーによる解析を行った結果、16SrDNAのほぼ全長に当たる塩基配列が見出された。
この塩基配列をNCBIのBLAST解析で相同性検索を行ったところ、乳酸菌#7−2の16SrDNA領域の塩基配列は、ロイコノストック属であるLeuconostoc carnosum JB16株の塩基配列(登録番号:NR_102781.1)と相同性99%を示したので、乳酸菌#7−2は、ロイコノストック・カルノサム(Leuconostoc carnosum)に属するものである。
しかしながら、16SrDNA領域だけを比較したときですら完全には一致していないので、本発明の乳酸菌#7−2は、上記の株とは異なる乳酸菌株である。
また、乳酸菌#7−2の16SrDNA領域の塩基配列に一致する16SrDNA領域の塩基配列を有する微生物が存在しないこと、ロイコノストック属に属する既知の株等と比べて高い自然免疫活性作用を示すこと等を含め総合的に検討した結果、乳酸菌#7−2は単離された新規な微生物株であると判断した。
乳酸菌#7−2は、その後、千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8 122号室、独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)に、原寄託申請書を提出して、国内寄託(原寄託日:2016年7月26日)から、ブタペスト条約に基づく寄託への移管申請を行い(移管日(国際寄託日):2017年7月25日)、生存が証明され、ブタペスト条約に基づく寄託(国際寄託)への移管申請が受領された結果、受託番号「NITE BP−02307」を受けているものである。
培養は嫌気条件下で行うことが好ましい。培地中の炭素源としては、例えば、D−リボース、D−ガラクトース、D−グルコース、D−フルクトース、D−マンノース、D−マンニトール、N−アセチルグルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、D−セロビオース、D−マルトース、シュクロース、D−トレハロース、ゲンチオビオース、糖蜜、水飴、油脂類等の有機炭素化合物が用いられ、窒素源としては、肉エキス、カゼイン、ペプトン、酵母エキス、乾燥酵母、胚芽、大豆粉、尿素、アミノ酸、アンモニウム塩等の有機・無機窒素化合物を用いることができる。
また、塩類は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、鉄塩、銅塩、亜鉛塩、コバルト塩等の無機塩類を必要に応じて適宜添加する。更に、ビオチン、ビタミンB1、シスチン、オレイン酸メチル、ラード油等の生育促進物質を添加することが、目的物の産生量を増加させる点で好ましい。
また、シリコン油、界面活性剤等の消泡剤を添加してもよい。調製済みの培地としては、例えば、MRS培地、GAM培地等を用いることが好ましい。
培養温度は、25℃〜37℃間に保つことが好ましく、30℃〜37℃で行うことがより好ましい。培養pHは7付近で行うことが好ましい。培養期間は、用いた培地組成、培養温度等により変動するファクターであるが、乳酸菌#7−2の場合、好ましくは12〜72時間、より好ましくは24〜48時間で充分な量の目的物を確保することができる。
培養して得られたコロニーをピックアップし、再度培地上でシングルコロニー形成を行うことも好ましい。
本発明の乳酸菌は、独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)におけるNITE BP−02306であるロイコノストック(Leuconostoc)属に属する乳酸菌である(以下、「乳酸菌#4−2」と略記する場合がある)。
本発明の乳酸菌#4−2は、糠を分離源として初めて分離された。
菌体の形状:球形
好気/嫌気:嫌気
乳酸生成能:あり
(1)カタラーゼ:−
(2)酸性フォスファターゼ:+
(3)アルカリフォスファターゼ:−
(4)ナフトール−AS−BI−フォスフォヒドロラーゼ:+
(5)エステラーゼ(C4):+
(6)α−ガラクトシダーゼ:−
(7)エステラーゼリパーゼ(C8):+
(8)β−ガラクトシダーゼ:−
(9)リパーゼ(C14):−
(10)β−グルクロニダーゼ:−
(11)ロイシンアリルアミダーゼ:+
(12)α−グルコシダーゼ:+
(13)バリンアリルアミダーゼ:−
(14)β−グルコシダーゼ:+
(15)シスチンアリルアミダーゼ:−
(16)N−アセチル−β−グルコサミニダーゼ:−
(17)トリプシン:−
(18)α−マンノシダーゼ:−
(19)α−キモトリプシン:+
(20)α−フコシダーゼ:−
グリセロール(Glycerol):−
エリトリトール(Erythritol):−
D−アラビノース(D-Arabinose):−
L−アラビノース(L-Arabinose):+
D−リボース(D-Ribose):+
D−キシロース(D-Xylose):+
L−キシロース(L-Xylose):−
D−アドニトール(D-Adonitol):−
β−メチル−D−キシロピラノサイド(β-Methyl-D-xylopyranoside):−
D−ガラクトース(D-Galactose):+
D−グルコース(D-Glucose):+
D−フルクトース(D-Fructose):+
D−マンノース(D-Mannose):+
L−ソルボース(L-Sorbose):−
L−ラムノース(L-Rhamnose):−
ズルシトール(Dulcitol):−
イノシトール(Inositol):−
D−マンニトール(D-Mannitol):+
D−ソルビトール(D-Sorbitol):−
α−メチル−D−マンノピラノサイド(α-Methyl-D-mannopyranoside):−
α−メチル−D−グルコピラノサイド(α-Methyl-D-glucopyranoside):+
N−アセチルグルコサミン(N-Acetyl glucosamine):+
アミグダリン(Amygdalin):+
アルブチン(Arbutin):+
エスクリンクエン酸第二鉄(Esculin ferric citrate):+
サリシン(Salicin):+
D−セロビオース(D-Cellobiose):+
D−マルトース(D-Maltose):+
D−ラクトース(D-Lactose):−
D−メリビオース(D-Melibiose):+
D−スクロース(D-Sucrose):+
D−トレハロース(D-Trehalose):+
インスリン(Insulin):−
D−メレジトース(D-Melezitose):+
D−ラフィノース(D-Raffinose):−
スターチ(Starch):+
グリコーゲン(Glycogen):−
キシリトール(Xylitol):−
ゲンチオビオース(Gentiobiose):+
D−ツラノース(D-Turanose):+
D−リキソース(D-Lyxose):−
D−タガトース(D-Tagatose):+
D−フコース(D-Fucose):−
L−フコース(L-Fucose):−
D−アラビトール(D-Arabitol):−
L−アラビトール(L-Arabitol):−
グルコネート(Gluconate):+
2−ケト−グルコネート(2-Keto-gluconate):+
5−ケト−グルコネート(5-Keto-gluconate):−
すなわち、乳酸菌#4−2のゲノムDNAから、PCRにより、16SrDNA領域の塩基配列を増幅し、シーケンサーによる解析を行った結果、16SrDNAのほぼ全長に当たる塩基配列が見出された。
この塩基配列をNCBIのBLAST解析で相同性検索を行ったところ、乳酸菌#4−2の16SrDNA領域の塩基配列は、ロイコノストック属であるLeuconostoc gelidum POUF4d株の塩基配列(登録番号:NR_133769.1)と相同性99%を示したので、乳酸菌#4−2は、ロイコノストック・ゲリダム(Leuconostoc gelidum)に属するものである。
しかしながら、16SrDNA領域だけを比較したときですら完全には一致していないので、本発明の乳酸菌#4−2は、上記の株とは異なる乳酸菌株である。
また、乳酸菌#4−2の16SrDNA領域の塩基配列に一致する16SrDNA領域の塩基配列を有する微生物が存在しないこと、ロイコノストック属に属する既知の株等と比べて高い自然免疫活性作用を示すこと等を含め総合的に検討した結果、乳酸菌#4−2は単離された新規な微生物株であると判断した。
乳酸菌#4−2は、その後、千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8 122号室、独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)に、原寄託申請書を提出して、国内寄託(原寄託日:2016年7月26日)から、ブタペスト条約に基づく寄託への移管申請を行い(移管日(国際寄託日):2017年7月25日)、生存が証明され、ブタペスト条約に基づく寄託(国際寄託)への移管申請が受領された結果、受託番号「NITE BP−02306」を受けているものである。
培養は嫌気条件下で行うことが好ましい。培地中の炭素源としては、例えば、D−リボース、D−ガラクトース、D−グルコース、D−フルクトース、D−マンノース、D−マンニトール、N−アセチルグルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、D−セロビオース、D−マルトース、シュクロース、D−トレハロース、ゲンチオビオース、糖蜜、水飴、油脂類等の有機炭素化合物が用いられ、窒素源としては、肉エキス、カゼイン、ペプトン、酵母エキス、乾燥酵母、胚芽、大豆粉、尿素、アミノ酸、アンモニウム塩等の有機・無機窒素化合物を用いることができる。
また、塩類は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、鉄塩、銅塩、亜鉛塩、コバルト塩等の無機塩類を必要に応じて適宜添加する。更に、ビオチン、ビタミンB1、シスチン、オレイン酸メチル、ラード油等の生育促進物質を添加することが、目的物の産生量を増加させる点で好ましい。
また、シリコン油、界面活性剤等の消泡剤を添加してもよい。調製済みの培地としては、例えば、MRS培地、GAM培地等を用いることが好ましい。
培養温度は、25℃〜37℃間に保つことが好ましく、30℃〜37℃で行うことがより好ましい。培養pHは7付近で行うことが好ましい。培養期間は、用いた培地組成、培養温度等により変動するファクターであるが、乳酸菌#4−2の場合、好ましくは12〜72時間、より好ましくは24〜48時間で充分な量の目的物を確保することができる。
培養して得られたコロニーをピックアップし、再度培地上でシングルコロニー形成を行うことも好ましい。
本発明の乳酸菌は、独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)における受託番号がNITE BP−02308であるロイコノストック(Leuconostoc)属に属する乳酸菌である(以下、「乳酸菌8/11−3」と略記する場合がある)。
本発明の乳酸菌8/11−3は、キムチを分離源として初めて分離された。
菌体の形状:球形
好気/嫌気:嫌気
乳酸生成能:あり
(1)カタラーゼ:−
(2)酸性フォスファターゼ:+
(3)アルカリフォスファターゼ:+
(4)ナフトール−AS−BI−フォスフォヒドロラーゼ:+
(5)エステラーゼ(C4):+
(6)α−ガラクトシダーゼ:+
(7)エステラーゼリパーゼ(C8):+
(8)β−ガラクトシダーゼ:+
(9)リパーゼ(C14):−
(10)β−グルクロニダーゼ:−
(11)ロイシンアリルアミダーゼ:+
(12)α−グルコシダーゼ:+
(13)バリンアリルアミダーゼ:−
(14)β−グルコシダーゼ:+
(15)シスチンアリルアミダーゼ:−
(16)N−アセチル−β−グルコサミニダーゼ:−
(17)トリプシン:−
(18)α−マンノシダーゼ:−
(19)α−キモトリプシン:−
(20)α−フコシダーゼ:−
グリセロール(Glycerol):−
エリトリトール(Erythritol):−
D−アラビノース(D-Arabinose):−
L−アラビノース(L-Arabinose):+
D−リボース(D-Ribose):+
D−キシロース(D-Xylose):+
L−キシロース(L-Xylose):−
D−アドニトール(D-Adonitol):−
β−メチル−D−キシロピラノサイド(β-Methyl-D-xylopyranoside):−
D−ガラクトース(D-Galactose):+
D−グルコース(D-Glucose):+
D−フルクトース(D-Fructose):+
D−マンノース(D-Mannose):+
L−ソルボース(L-Sorbose):−
L−ラムノース(L-Rhamnose):−
ズルシトール(Dulcitol):−
イノシトール(Inositol):−
D−マンニトール(D-Mannitol):+
D−ソルビトール(D-Sorbitol):+
α−メチル−D−マンノピラノサイド(α-Methyl-D-mannopyranoside):−
α−メチル−D−グルコピラノサイド(α-Methyl-D-glucopyranoside):+
N−アセチルグルコサミン(N-Acetyl glucosamine):+
アミグダリン(Amygdalin):+
アルブチン(Arbutin):+
エスクリンクエン酸第二鉄(Esculin ferric citrate):+
サリシン(Salicin):+
D−セロビオース(D-Cellobiose):+
D−マルトース(D-Maltose):+
D−ラクトース(D-Lactose):+
D−メリビオース(D-Melibiose):+
D−スクロース(D-Sucrose):+
D−トレハロース(D-Trehalose):+
インスリン(Insulin):−
D−メレジトース(D-Melezitose):+
D−ラフィノース(D-Raffinose):+
スターチ(Starch):−
グリコーゲン(Glycogen):−
キシリトール(Xylitol):−
ゲンチオビオース(Gentiobiose):+
D−ツラノース(D-Turanose):+
D−リキソース(D-Lyxose):−
D−タガトース(D-Tagatose):+
D−フコース(D-Fucose):−
L−フコース(L-Fucose):−
D−アラビトール(D-Arabitol):−
L−アラビトール(L-Arabitol):−
グルコネート(Gluconate):+
2−ケト−グルコネート(2-Keto-gluconate):−
5−ケト−グルコネート(5-Keto-gluconate):−
すなわち、乳酸菌8/11−3のゲノムDNAから、PCRにより、16SrDNA領域の塩基配列を増幅し、シーケンサーによる解析を行った結果、16SrDNAのほぼ全長に当たる塩基配列が見出された。
この塩基配列をNCBIのBLAST解析で相同性検索を行ったところ、乳酸菌8/11−3の16SrDNA領域の塩基配列は、ロイコノストック属であるLeuconostoc mesenteroides ATCC8293株の塩基配列(登録番号:NR_074957.1)と相同性99%を示したので、乳酸菌8/11−3は、ロイコノストック・メセンテロイデス(Leuconostoc mesenteroides)に属するものである。
しかしながら、16SrDNA領域だけを比較したときですら完全には一致していないので、本発明の乳酸菌8/11−3は、上記の株とは異なる乳酸菌株である。
また、乳酸菌8/11−3の16SrDNA領域の塩基配列に一致する16SrDNA領域の塩基配列を有する微生物が存在しないこと、ロイコノストック属に属する既知の株等と比べて高い自然免疫活性作用を示すこと等を含め総合的に検討した結果、乳酸菌8/11−3は単離された新規な微生物株であると判断した。
乳酸菌8/11−3は、その後、千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8 122号室、独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)に、原寄託申請書を提出して、国内寄託(原寄託日:2016年7月26日)から、ブタペスト条約に基づく寄託への移管申請を行い(移管日(国際寄託日):2017年5月22日)、生存が証明され、ブタペスト条約に基づく寄託(国際寄託)への移管申請が受領された結果、受託番号「NITE BP−02308」を受けているものである。
培養は嫌気条件下で行うことが好ましい。培地中の炭素源としては、例えば、D−リボース、D−ガラクトース、D−グルコース、D−フルクトース、D−マンノース、D−マンニトール、N−アセチルグルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、D−セロビオース、D−マルトース、シュクロース、D−トレハロース、ゲンチオビオース、糖蜜、水飴、油脂類等の有機炭素化合物が用いられ、窒素源としては、肉エキス、カゼイン、ペプトン、酵母エキス、乾燥酵母、胚芽、大豆粉、尿素、アミノ酸、アンモニウム塩等の有機・無機窒素化合物を用いることができる。
また、塩類は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、鉄塩、銅塩、亜鉛塩、コバルト塩等の無機塩類を必要に応じて適宜添加する。更に、ビオチン、ビタミンB1、シスチン、オレイン酸メチル、ラード油等の生育促進物質を添加することが、目的物の産生量を増加させる点で好ましい。
また、シリコン油、界面活性剤等の消泡剤を添加してもよい。調製済みの培地としては、例えば、MRS培地、GAM培地等を用いることが好ましい。
培養温度は、25℃〜37℃間に保つことが好ましく、30℃〜37℃で行うことがより好ましい。培養pHは7付近で行うことが好ましい。培養期間は、用いた培地組成、培養温度等により変動するファクターであるが、乳酸菌8/11−3の場合、好ましくは12〜72時間、より好ましくは24〜48時間で充分な量の目的物を確保することができる。
培養して得られたコロニーをピックアップし、再度培地上でシングルコロニー形成を行うことも好ましい。
本発明の自然免疫活性化剤は、上記乳酸菌、該乳酸菌の死菌、又は、該乳酸菌の処理物を有効成分とする自然免疫活性化剤であって、
上記乳酸菌の処理物は、乳酸菌の、培養物、濃縮物、ペースト化物、乾燥物、液状化物、希釈物、破砕物、殺菌加工物、及び、培養物からの抽出物よりなる群から選ばれる少なくとも1つの処理物であることを特徴とする。
該自然免疫活性化剤に用いられる乳酸菌の処理物としては、例えば、乳酸菌の培養物;濃縮物;ペースト化物;噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物等の乾燥物;液状化物;希釈物;破砕物;殺菌加工物;該培養物からの抽出物;等が挙げられる。
上記自然免疫活性化剤における、上記「その他の成分」としては、特に制限はなく、本発明の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薬学的に許容され得る担体等が挙げられる。
かかる担体としては、特に制限はなく、例えば、後述する剤型等に応じて適宜選択される。また、自然免疫活性化剤中の「その他の成分」の含有量としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
本発明の乳酸菌や該乳酸菌に由来する本発明の自然免疫活性化剤は、医薬品(薬剤)、医薬部外品、一般飲食品、健康食品、醗酵飲食品、粉ミルク等の規格を有する飲食品等に配合することが可能であり、それらの形態によらず様々な医薬品、飲食品等に応用できる。また、プロバイオティクスの生産等に利用できる。
中でも、上記した本発明の乳酸菌を用いて醗酵する工程を用いて製造された飲食品、更にその中でも醗酵乳は、乳酸菌の通常の効果や、本発明に特有の上記効果を発揮し易いために好ましい。
具体的には、例えば、経口固形剤(錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤等)、経口液剤(内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等)、注射剤(溶剤、懸濁剤等)、軟膏剤、貼付剤、ゲル剤、クリーム剤、外用散剤、スプレー剤、吸入散布剤等が挙げられる。
上記結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。
該崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。
該滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。
該着色剤としては、例えば、酸化チタン、酸化鉄等が挙げられる。
上記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
該pH調節剤及び該緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。上記安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、EDTA、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。上記等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。上記局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。
該基剤としては、例えば、流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコール、パラフィン等が挙げられる。上記保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。
具体的には、例えば、健康維持や疲労回復を必要とする個体;癌や生活習慣病の予防や治療を必要とする個体;細菌、真菌、ウイルス等に感染した個体;等に投与することにより使用することができる。
また、投与時期としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、予防的に投与されてもよいし、治療的に投与されてもよい。
本発明の飲食品は、上記した本発明の自然免疫活性化剤や感染症予防治療剤に加えて、更に、「その他の成分」を含有することができる。
これらの食品の製造方法としては、特に制限はなく、例えば、通常の各種食品の製造方法に応じて、適宜製造することができる。
本発明の乳酸菌、該死菌若しくは処理物等を飲食品の製造に使用する場合、製造方法は当業者に周知の方法によって行うことができる。当業者であれば、本発明の乳酸菌の(死)菌体又は処理物を他の成分と混合する工程、成形工程、殺菌工程、醗酵工程、焼成工程、乾燥工程、冷却工程、造粒工程、包装工程等を適宜組み合わせ、目的の飲食品を作ることが可能である。
乳酸菌スターターとして本発明の乳酸菌を用いて醗酵を行う場合、本発明の乳酸菌の培養条件と同様の条件等で行うことができる。
乳酸菌#7−2は、その後、千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8 122号室、独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)に、原寄託申請書を提出して、国内寄託(原寄託日:2016年7月26日)から、ブタペスト条約に基づく寄託への移管申請を行い(移管日(国際寄託日):2017年7月25日)、生存が証明され、ブタペスト条約に基づく寄託(国際寄託)への移管申請が受領された結果、受託番号「NITE BP−02307」を受けているものである。
乳酸菌#4−2も上記乳酸菌#7−2と同様に、特許微生物寄託センター(NPMD)に、原寄託申請書を提出して、国内寄託(原寄託日:2016年7月26日)から、ブタペスト条約に基づく寄託への移管申請を行い(移管日(国際寄託日):2017年7月25日)、生存が証明され、ブタペスト条約に基づく寄託(国際寄託)への移管申請が受領された結果、受託番号「NITE BP−02306」を受けているものである。
乳酸菌8/11−3も上記乳酸菌#7−2と同様に、特許微生物寄託センター(NPMD)に、原寄託申請書を提出して、国内寄託(原寄託日:2016年7月26日)から、ブタペスト条約に基づく寄託への移管申請を行い(移管日(国際寄託日):2017年5月22日)、生存が証明され、ブタペスト条約に基づく寄託(国際寄託)への移管申請が受領された結果、受託番号「NITE BP−02308」を受けているものである。
<<カイコ筋肉標本を用いた、乳酸菌の自然免疫促進活性の測定>>
自然免疫促進活性の測定は、特許文献1に記載されている方法を用い、カイコ筋肉収縮活性を指標に行った。乳酸菌を0.5%炭酸カルシウムMRS寒天培地に広げて、30℃で嫌気培養し、コロニーを形成させた。コロニーを採取して、15mLチューブに加えたMRS培地14mLに植菌し、30℃にて2日間静置培養した。この培養液全量を100mLのMRS液体培地に加えて、30℃で1日静置培養した。この培養液を121℃で20分間オートクレーブ処理し、8000rpm、4℃で10分間遠心分離した。沈殿を0.9%NaCl50mLで洗浄した後、再度8000rpm、4℃で10分間遠心分離し、その沈殿を1mLの0.9%NaCl液に懸濁した。この懸濁液50μLを希釈してカイコ筋肉標本に注射し、注射前後のカイコ標本の長さの変化を測定した。カイコ筋肉標本の長さが15%縮むサンプル量を1unitとした。一方、菌の懸濁液100μLを、遠心エバポレーターで乾燥させて、乾燥重量を測定した。
乳酸菌の前培養は、MRS液体培地を用いて30℃で嫌気培養することにより行った。各種野菜・果物ジュース50mL中に、前培養液を添加して、30℃で静置培養を行った。乳酸菌の生菌数測定は、培養液をMRS寒天培地に広げて30℃で嫌気培養し、現れたコロニー数を計測することにより行った。1.0×106細胞/mL以上になった場合には増殖能「有」と判定した。
キウイジュースは、キウイ100gに対してRO水500mLを加えて調製した。ミカンジュースは「オレンジ100%(株式会社東京めいらく製)」、リンゴジュースは「アップル100%(株式会社東京めいらく製)」、野菜ミックスジュースは「1日分の野菜(株式会社伊藤園製)」を使用した。
ブロッコリージュースは、オートクレーブ処理後37℃で1日間インキュベートして調製した。
pHの調整は、10規定の水酸化ナトリウム溶液を加えて行い、キウイジュースはpH7に、アップルジュース、オレンジジュース及びグレープフルーツジュースはpH6に調節した。
グリセロールストックは、各菌株を0.5%炭酸カルシウムMRS寒天培地に広げて、30℃で嫌気培養してコロニーを形成させた。該コロニーを14mLのMRS液体培地に植菌して30℃で1日嫌気培養した後に、8000rpm、4℃で5分間遠心分離した沈殿を2mLの0.9%NaClに懸濁して、これを等量の80%グリセロール液とよく混ぜて−80℃にて保存した。
ジュース中の全糖濃度をフェノール硫酸法で定量した。グルコース濃度はAccu−Chek(ロシュ社製)を用いて定量した。
フェノール硫酸法は以下のように行った。培養液を8000rpmで10分間遠心分離して、上清を100μL回収した。次に、5%フェノールを100μL加えて、5秒間vortexミキサーで強く撹拌し、硫酸を500μL加えて、発熱するまでvortexミキサーで強く撹拌した。室温で20分間静置後、OD490を測定した。アキュチェックアビバにアキュチェックアビバストリップFをセットしてグルコース濃度の定量を行った。
<各乳酸菌の自然免疫促進活性の測定>
分離した各種乳酸菌をオートクレーブ処理し、遠心分離後、菌体成分画分を回収した。菌の懸濁液をカイコ筋肉標本に注射して、筋肉の収縮を測定することにより各乳酸菌の自然免疫促進活性を評価した。結果を表1に示す。
その結果、Leuconostoc carnosum #7-2(乳酸菌#7−2)の比活性は460units/mg、Leuconostoc gelidum #4-2(乳酸菌#4−2)の比活性は250units/mg、Leuconostoc mesenteroides 8/11-3(乳酸菌8/11−3)の比活性は250units/mgであり、何れの乳酸菌も高い活性値が得られた(表1)。
<各乳酸菌の果物・野菜ジュース及び牛乳中での増殖>
上記の乳酸菌3株それぞれを果物・野菜ジュース及び牛乳に植菌し、菌の増殖の有無を検討した。結果を表2〜4に示す。
また、各乳酸菌を牛乳中で、30℃で24時間培養した結果、何れも増殖が認められた(表4)。
<各乳酸菌の果物・野菜ジュース中での増殖による糖含量の低下>
3株それぞれの乳酸菌を果物ジュース中で培養し、ジュース中の糖濃度を定量した。全糖濃度はフェノール硫酸法で測定した。グルコース濃度はAccu-Chek(ロシュ社製)で定量した。測定結果を表5に示す。
NITE BP−02306
NITE BP−02308
配列番号2は、ロイコノストック(Leuconostoc)属に属する未知の菌株(乳酸菌#4−2)の、16SrDNAのほぼ全長にあたる塩基配列である。
配列番号3は、ロイコノストック(Leuconostoc)属に属する未知の菌株(乳酸菌8/11−3)の、16SrDNAのほぼ全長にあたる塩基配列である。
Claims (7)
- 独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)における受託番号がNITE BP−02307であるロイコノストック(Leuconostoc)属に属する乳酸菌。
- 独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)における受託番号がNITE BP−02306であるロイコノストック(Leuconostoc)属に属する乳酸菌。
- 独立行政法人製品評価技術基盤機構(NITE)の特許微生物寄託センター(NPMD)における受託番号がNITE BP−02308であるロイコノストック(Leuconostoc)属に属する乳酸菌。
- 請求項1ないし請求項3の何れかの請求項に記載の乳酸菌、該乳酸菌の死菌又は該乳酸菌の処理物を有効成分とする自然免疫活性化剤であって、
該乳酸菌の処理物は、乳酸菌の、培養物、濃縮物、ペースト化物、乾燥物、液状化物、希釈物、破砕物、殺菌加工物、及び、培養物からの抽出物よりなる群から選ばれる少なくとも1つの処理物であることを特徴とする自然免疫活性化剤。 - 請求項1ないし請求項3の何れかの請求項に記載の乳酸菌を含有する飲食品。
- 請求項4に記載の自然免疫活性化剤を含有する飲食品。
- 請求項1ないし請求項3の何れかの請求項に記載の乳酸菌を用いて醗酵する工程を用いて製造された飲食品。
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