JP5041135B2

JP5041135B2 - 口腔用組成物及び口腔バイオフィルム形成抑制剤

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Publication number: JP5041135B2
Application number: JP2006348929A
Authority: JP
Inventors: 恵子数野
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 2006-12-26
Filing date: 2006-12-26
Publication date: 2012-10-03
Anticipated expiration: 2026-12-26
Also published as: JP2008156309A

Description

本発明は、口腔内に付着した歯垢、特に口腔バイオフィルム内の病原性細菌を殺菌、静菌することにより、病原性歯垢（口腔バイオフィルム）の形成を抑制する効果に優れ、歯垢形成抑制に有効な口腔用組成物に関する。

う蝕、歯周病、口臭等の口腔疾患の原因は、歯垢中の各種細菌によるものであると考えられ、う蝕はストレプトコッカスミュータンス（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）等の連鎖球菌、歯周病はポルフィロモナスジンジバリス（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）等の偏性嫌気性グラム陰性桿菌を主とした細菌感染症であり、また、口臭の原因としてはフゾバクテリウムヌクレアタム（Ｆ．ｎｕｃｌｅｓｔｕｍ）等の口腔細菌が関与している。従って、口腔疾患の予防、改善に有効な手段として歯垢の抑制、即ち、口腔内の病原性細菌を殺菌、静菌することが有用であると言われている。

近年、歯垢はバイオフィルムとして捉えられ（非特許文献１）、口腔バイオフィルム中の細菌は浮遊性細菌と比較すると細菌のタンパク質発現パターン（非特許文献２，３）や薬剤耐性（非特許文献４，５）が大きく異なり、浮遊性細菌に対し有効であった薬剤がバイオフィルム構成細菌に対して有効でないことが明らかになってきた。

これまでに殺菌手段として数多くの抗菌剤、例えば塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、塩化ベンゼドニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化デカリウム等のカチオン性殺菌剤や、イソプロピルメチルフェノール、トリクロサン等の非イオン性抗菌剤が口腔用組成物に配合され、口腔疾患の予防、改善に有効であることが従来から知られている。例えば、トリクロサンは歯垢抑制剤として歯磨組成物に配合することが知られており（特許文献１）、チモール等のフェノール性化合物も口腔用組成物に配合することにより歯垢を抑制することが知られている（特許文献２）。

しかしながら、これら抗菌剤は、バイオフィルム細菌の薬剤耐性メカニズムにより、これだけではバイオフィルム抑制効果は十分でないことが確認され、これらの殺菌力を増強するため、抗菌剤の滞留性向上技術（特許文献３参照）や、防腐力や抗菌活性を有するファルネソール等の香料成分の活用・併用（特許文献４，５）が提案されているが、これらの技術では、バイオフィルムの薬剤浸透性の低さなどにより、顕著な効果は期待できなかった。このような現状から、バイオフィルム中の細菌に対しても有効な殺菌技術が望まれている。

なお、バイオフィルム抑制組成物として疎水性アミノ酸及びアンモニウム塩の配合（特許文献３）やラクトン及び／又はフラン誘導体の配合（特許文献５）、非イオン性抗菌剤及びジカルボン酸化合物の配合（特許文献６）などが提案されている。

しかし、これらの技術はコストや供給性、製剤安定性などに問題があり、未だ市場に導入されていないのが現状であり、これらに代わる口腔内のバイオフィルム中の細菌に対して有効な殺菌技術の開発が望まれる。

特開昭６０−２３９４１０号公報特表２００１−５２６２０２号公報特開平０８−２６９５３号公報特開２００２−３７０９５３号公報特開２００４−１５５６８１号公報特開２００５−０１５３６９号公報特許第２８０６５７７号公報特開平１１−４３４３７号公報特開２０００−３５５５１５号公報特開２００６−１２４３００号公報Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，Ｊ．Ｗ．Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｐ．Ｓ．ａｎｄＧｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｅ．Ｐ．：Ｂａｃｔｅｒｉａｌｂｉｏｆｉｌｍｓ：ａｃｏｍｍｏｎｃａｕｓｅｏｆｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２８４：１３１８−１３２２，１９９９．Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，Ｊ．Ｗ．，Ｌｅｗａｎｄｏｗｓｋｉ，Ｚ．，Ｃａｌｄｗｅｌｌ，Ｄ．Ｅ．，Ｋｏｒｂｅｒ，Ｄ．Ｒ．ａｎｄＬａｐｐｉｎ−Ｓｃｏｔｔ，Ｈ．Ｍ．：Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｂｉｏｆｉｌｍｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：７１１−７４５，１９９５．Ｈｕｄｓｏｎ，Ｍ．Ｃ．，Ｃｕｒｔｉｓｓ，Ｒ．ＩＩＩ：ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｍｕｔａｎｓｇｅｎｅｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｖｉｒｕｌｅｎｃｅ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．５８：４６４−４７０，１９９０．Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｐ．Ｓ．：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｂａｃｔｅｒｉａｌｂｉｏｆｉｌｍｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９２：１０７−１１３，２００２．ＰｈｉｌｉｐＭａｒｓｈａｎｄＭｉｃｈａｅｌＶ．Ｍａｒｔｉｎ著「ＯｒａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｗｒｉｇｈｔ出版、２０００年、ｐ．５８−８１（Ｄｅｎｔａｌｐｌａｑｕｅ）

本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、高い口腔バイオフィルム抑制作用を示し、バイオフィルム抑制活性を持続できる、歯垢形成抑制に有効な口腔用組成物及び口腔バイオフィルム形成抑制剤を提供することを目的とする。

本発明者は、上記目的を達成するため鋭意研究を重ねた結果、後述のように、紫外線吸収剤として知られているベンゾフェノン又はその塩と、非イオン性抗菌剤及び／又は陽イオン性抗菌剤とを組み合わせて配合し、更に、界面活性剤及び／又はアルコールを配合することにより、口腔内のバイオフィルムに対する形成抑制効果が飛躍的に高く発揮され、バイオフィルム内の病原性細菌を殺菌及び／又は静菌して病原性歯垢の形成を効果的に抑制し得ること、よって、これら成分を併用することで、歯肉炎，歯周病，う蝕，口臭等の口腔疾患の低減及び予防効果に優れた口腔用組成物が得られることを見出した。

なお、ベンゾフェノンは紫外線吸収剤として広く使用されているものであり、口腔用組成物への配合についても開示されている（特許文献７）。しかし、これは歯肉の発赤や腫脹を予防する技術であり、ベンゾフェノンのバイオフィルム抑制活性については示されていない。また、ベンゾフェノンと抗菌剤の組み合わせ配合も開示されている（特許文献８〜１０）が、これら技術は皮膚への保湿、肌荒れ防止や炎症抑制、あるいは芳香に関するものであり、バイオフィルム抑制効果については示されていない。いずれの従来技術においても、本発明のようにベンゾフェノン又はその塩と抗菌剤とを組み合わせて配合し、かつ界面活性剤及び／又はアルコールを併用することで、これら成分の相乗効果によって有効性（口腔バイオフィルムに対する優れた形成抑制効果）が発揮されるという本発明の格別な作用効果は示唆されていない。

従って、本発明は、（Ａ）２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸及びそのナトリウム塩、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノンから選ばれる少なくとも１種のベンゾフェノン又はその塩を０．００１〜５．０質量％と、（Ｂ）イソプロピルメチルフェノール、フェノキシエタノール及び塩化セチルピリジニウムから選ばれる少なくとも１種の抗菌剤を０．００１〜１０．０質量％と、（Ｃ）ラウリル硫酸ナトリウム及び酸化エチレンの付加モル数が２０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油から選ばれる界面活性剤及び／又はエタノール，グリセリン，プロピレングリコール，ポリエチレングリコール４００，ポリエチレングリコール４０００から選ばれるアルコールとを含有し、（Ａ）ベンゾフェノン又はその塩と（Ｂ）抗菌剤との質量比が６０：１〜１：２００の範囲であることを特徴とする口腔用組成物、及び上記（Ａ）成分と、（Ｂ）成分と、（Ｃ）成分とからなり、（Ａ）成分と（Ｂ）成分との質量比が６０：１〜１：２００の範囲であることを特徴とする口腔バイオフィルム形成抑制剤を提供する。

本発明の口腔用組成物は、口腔疾患の原因である口腔バイオフィルム活性を抑制する効果が高く、口腔バイオフィルム内の病原性細菌を殺菌及び／又は静菌して病原性歯垢の形成を抑制し、歯肉炎，歯周病，う蝕，口臭等の口腔疾患の低減及び予防効果に優れたもので、歯垢形成、特に口腔バイオフィルム形成抑制用として有効である。

以下、本発明について更に詳しく説明する。
本発明の口腔用組成物は、（Ａ）ベンゾフェノン又はその塩と、（Ｂ）抗菌剤と、（Ｃ）界面活性剤及び／又はアルコールとを含有することを特徴とする。

本発明の口腔用組成物において（Ａ）ベンゾフェノン又はその塩としては、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸及びそのナトリウム塩、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノンが挙げられ、これらから選ばれる１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて配合することができる。

具体的には、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸ナトリウム、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノン等が挙げられ、これらから選ばれる１種又は２種以上を配合できる。これらの中では、特に２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノンを用いることがより好ましい。

上記ベンゾフェノン又はその塩の配合量は、組成物全体の０．００１〜５．０％（質量％、以下同様）であり、好ましくは０．００１〜３．０％である。配合量が０．００１％未満の場合は十分なバイオフィルム抑制効果が得られず、５．０％を超えると製剤中での析出等が生じて好ましくない。

また、本発明に用いる（Ｂ）抗菌剤としては、非イオン性抗菌剤及び／又は陽イオン性抗菌剤が用いられるもので、非イオン性抗菌剤を単独で配合しても陽イオン性抗菌剤を単独で配合してもよく、非イオン性抗菌剤及び陽イオン性抗菌剤を併用してもよい。

非イオン性抗菌剤及び陽イオン性抗菌剤として具体的には、イソプロピルメチルフェノール、フェノキシエタノール、塩化セチルピリジニウムが挙げられ、１種類を単独で又は２種類以上を組み合わせて配合することができる。

これら抗菌剤の配合量は、組成物全体の０．００１〜１０．０％、好ましくは０．０１〜５．０％である。配合量が０．００１％未満の場合は十分なバイオフィルム抑制効果が得られず、１０．０％を超えると製剤中での析出等があり、問題となる。

本発明においては、上記ベンゾフェノン又はその塩と、非イオン性抗菌剤及び／又は陽イオン性抗菌剤との両成分を組み合わせて配合することが必須であり、この場合、ベンゾフェノン又はその塩と上記抗菌剤とを質量比で６０：１〜１：２００の範囲で配合することが効果と製剤化の面から必要であり、好ましくは質量比を２０：１〜１：６０の範囲とする。質量比が６０：１〜１：２００の範囲外であると満足なバイオフィルム抑制効果が得られない場合がある。

更に、本発明では、製剤中においてベンゾフェノン又はその塩と抗菌剤との効果を有効に発揮させるための可溶化剤として（Ｃ）界面活性剤及び／又はアルコールを配合する。

ここで、界面活性剤としては、陰イオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤が好適に使用される。なお、抗菌剤としてカチオン性抗菌剤を配合する場合は、有効性の点でノニオン性界面活性剤を配合することが望ましく、また、非イオン性抗菌剤を配合する場合は、陰イオン性界面活性剤を用いてもノニオン性界面活性剤を用いてもよいが、陰イオン性界面活性剤及びノニオン性界面活性剤を併用して用いることが可溶化剤としての有効性の点からより好ましい。

陰イオン性界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。

ノニオン性界面活性剤としては、酸化エチレンの付加モル数が２０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油が用いられ、例えばポリオキシエチレン（４０）硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油等が好適である。

界面活性剤の配合量は、組成物全体の０．１〜３．５％、特に０．１〜２．５％が好適である。配合量が０．１％未満の場合はベンゾフェノン又はその塩や抗菌剤を製剤中で安定に配合することができないことがあり、３．５％を超えて配合するとベンゾフェノン又はその塩や抗菌剤の効果が失活してしまうことがあり、いずれの場合も十分なバイオフィルム抑制効果が得られない場合がある。

また、アルコールとしては、特にエタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール４，０００が使用される。なお、これらアルコールは１種単独でも２種以上を配合してもよい。

アルコールの配合量は、組成物全体の０．１〜４５％が好ましく、より好ましくは０．１〜３５％である。配合量が０．１％未満の場合はベンゾフェノン又はその塩と抗菌剤を製剤中で安定に配合することができない場合があり、４５％を超えると十分なバイオフィルム抑制効果が得られない場合がある。

本発明において可溶化剤としての（Ｃ）成分としては、界面活性剤又はアルコールを単独で配合してもよいが、界面活性剤とアルコールを併用することもできるが、界面活性剤とアルコールとの併用が各配合成分の溶解性向上の点からより好適である。
界面活性剤とアルコールとの両方を配合する場合の界面活性剤及びアルコールの合計配合量は、ベンゾフェノン又はその塩と抗菌剤の種類や配合量に応じて適宜調整されるが、組成物全体の０．１〜４５％、特に０．１〜３５％の範囲とすることが好適である。配合量が０．１％未満の場合はベンゾフェノン又はその塩と抗菌剤を製剤中で安定に配合することができない場合があり、４５％を超えると十分なバイオフィルム抑制効果が得られない場合がある。

本発明の口腔用組成物は、固体、固形物、液体、液状、ゲル状、ペースト状、ガム状などの形態にすることができ、練歯磨、液体歯磨、液状歯磨、潤製歯磨等の歯磨類、洗口剤、マウスウォッシュ、トローチ剤、チューイングガム等の様々な剤型にすることが可能であり、その製造方法も剤型に応じた常法を採用することができる。この場合、本発明の口腔用組成物は、その目的、組成物の剤型等に応じて上述した成分以外にも適宜なその他の任意成分を配合することができる。例えば、練歯磨の場合は、研磨剤、粘稠剤、粘結剤、界面活性剤、甘味剤、防腐剤、有効成分、色素、香料等を配合でき、これら成分と水とを混合し製造できる。

具体的に歯磨類の場合には、研磨剤として、第２リン酸水素カルシウム・無水和物及び２水和物、第３リン酸カルシウム、第１リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、水酸化アルミニウム、アルミナ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、第３リン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、ベンナイト、ケイ酸ジルコニウム、ポリメタリン酸メチル、その他合成樹脂等の１種又は２種以上を配合できる（配合量通常５〜６０％、練歯磨の場合には１０〜５５％）。

また、練歯磨等のペースト状組成物の場合には、粘結剤としてカラギーナン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルヒドロキシエチルセルロースナトリウム等のセルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル等のアルギン酸誘導体、キサンタンガム、トラガカントガム、ジェラガム、カラヤガム、アラビアガム等のガム類、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルピロリドン等の合成粘結剤、シリカゲル、アルミニウムシリカゲル、ビーガム、ラポナイト等の無機粘結剤等の１種又は２種以上を配合することができる（配合量通常０．３〜１０％）。

粘稠剤としては、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、エリスリトール等の１種又は２種以上を配合することができる（配合量通常５〜７０％）。

甘味剤としては、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、グリチルリチン酸ジカリウム、ペリラルチン、ソーマチン、ネオヘスペリジルジヒドロカルコン、アスパラチルフェニルアラニンメチルエステル等を配合することができる。

香料は、ペパーミント油、スペアミント油、アニス油、ユーカリ油、ウィンターグリーン油、カシア油、クローブ油、タイム油、セージ油、レモン油、オレンジ油、ハッカ油、カルダモン油、コリアンダー油、マンダリン油、ライム油、ラベンダー油、ローズマリー油、ローレル油、カモミル油、キャラウェイ油、マジョラム油、ベイ油、レモングラス油、オリガナム油、パインニードル油、ネロリ油、ローズ油、ジャスミン油、イリスコンクリート、アブソリュートペパーミント、アブソリュートローズ、オレンジフラワー等の天然香料、及び、これら天然香料の加工処理（前溜部カット、後溜部カット、分留、液液抽出、エッセンス化、粉末香料化等）した香料、及び、メントール、カルボン、アネトール、シネオール、サリチル酸メチル、シンナミックアルデヒド、オイゲノール、３−ｌ−メントキシプロパン−１．２−ジオール、チモール、リナロール、リナリールアセテート、リモネン、メントン、メンチルアセテート、Ｎ−置換−パラメンタン−３−カルボキサミド、ピネン、オクチルアルデヒド、シトラール、プレゴン、カルビールアセテート、アニスアルデヒド、エチルアセテート、エチルブチレート、アリルシクロヘキサンプロピオネート、メチルアンスラニレート、エチルメチルフェニルグリシデート、バニリン、ウンデカラクトン、ヘキサナール、エチルアルコール、プロピルアルコール、ブタノール、イソアミルアルコール、ヘキセノール、ジメチルサルファイド、シクロテン、フルフラール、トリメチルピラジン、エチルラクテート、エチルチオアセテート等の単品香料、更に、ストロベリーフレーバー、アップルフレーバー、バナナフレーバー、パイナップルフレーバー、グレープフレーバー、マンゴーフレーバー、バターフレーバー、ミルクフレーバー、フルーツミックスフレーバー、トロピカルフルーツフレーバー等の調合香料等、口腔用組成物に用いられる公知の香料素材を使用することができ、実施例の香料に限定されない。
また、配合量も特に限定されないが、上記の香料素材は、製剤組成中に０．０００００１〜１％使用するのが好ましい。また、上記香料素材を使用した賦香用香料としては、製剤組成中に０．００１〜２．０％使用するのが好ましい。

本発明の口腔用組成物には、有効成分としてデキストラナーゼ、ムタナーゼ、リゾチーム、アミラーゼ、プロテアーゼ、溶菌酵素、ＳＯＤ（スーパーオキシドディスムターゼ）等の酵素、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウム等のアルカリ金属モノフルオロフォスフェート、フッ化ナトリウム、フッ化第一錫等のフッ化物、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、アルミニウムクロルヒドロキシルアラントイン、ジヒドロコレスタノール、グリチルリチン酸類、グリチルレチン酸、ビサボロール、グリセロフォスフェート、クロロフィル、塩化ナトリウム、キシリトール、塩化亜鉛、水溶性無機リン酸化物、ビタミンＡ、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＥ等のビタミン類及びそれらの誘導体などの公知の有効成分の１種又は２種以上を、本発明の効果を妨げない範囲で有効量配合することができる（配合量通常０．０００１〜５．０％）。

本発明の口腔用組成物は、アルミニウムチューブ、アルミニウム箔の両面をプラスチック等でラミネートしたラミネートチューブ、プラスチックチューブ、あるいは、ボトル状容器、エアゾール容器等の所定の容器に入れて使用することができる。

以下、実験例及び実施例と比較例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例に制限されるものではない。なお、以下の例において配合量はいずれも質量％である。

［実験例］
表１及び表２に示す組成の試験組成物を下記方法で調製し、バイオフィルム抑制効果を下記方法で評価した。結果を表１及び表２に示した。

試験組成物の調製法：
表１及び表２に示す成分及び配合量で、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（和光純薬工業社製）、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸（東京化成社製）、テトラヒドロキシベンゾフェノン（２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノン、和光純薬工業社製）、イソプロピルメチルフェノール（和光純薬工業社製）、フェノキシエタノール（和光純薬工業社製）、塩化セチルピリジニウム（東京化成工業社製）、プロピレングリコール（和光純薬工業社製）、ラウリル硫酸ナトリウム（和光純薬工業社製）、ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油（日本サーファクタント社製）を配合し、精製水で全量が１００ｇになるように調製した。

モデル歯垢での殺菌効果の評価：
ライオン株式会社オーラルケア研究所において継代保存（凍結保存）してあったアクチノマイセスヴィスコサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｖｉｓｃｏｓｕｓ）ＡＴＣＣ４３１４６、フゾバクテリウムヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｎｕｃｌｅａｔｕｍ）ＡＴＣＣ１０９５３、ポルフィロモナスジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）ＡＴＣＣ３３２７７の３菌種の菌液４０μＬをそれぞれ５ｍｇ／Ｌヘミン（Ｓｉｇｍａ社製）及び１ｍｇ／ＬビタミンＫ（和光純薬工業社製）を含むトッドへーウィットブロース（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＨＭ）４ｍＬに添加し、３７℃で一晩嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）した。同様に保存してあったベイヨネラパービューラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｐａｒｖｕｌａ）ＡＴＣＣ１７７４５菌液８０μＬを、１．２６％乳酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ社製）を含むトッドへーウィットブロース（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＬ）４ｍＬに添加し、同様に培養した。培養後、ベイヨネラパービューラを除く３菌種の菌液からそれぞれ３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＨＭに添加し、更に一晩培養した。ベイヨネラパービューラの菌液から同様に３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＬに添加し一晩培養した。再培養後、各菌液を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）し、上清を廃棄した。

各沈渣（細菌）に対してベイサルメディウムムチン培養液（ＢＭＭ）^*を添加し、再懸濁した後、予めＢＭＭ１，０００ｍＬを入れた培養槽に、上記各菌数がそれぞれ１×１０⁷個／ｍＬになるように接種し、３７℃、嫌気条件下（９５ｖｏｌ％窒素、５ｖｏｌ％二酸化炭素）で一晩培養した。その後、ＢＭＭを１００ｍＬ／時間の速度で供給するとともに、同速度で培養液を排出した。上記培養槽から排出された培養液は、液量が３００ｍＬに保たれる別の培養槽に連続的に供給した。この培養槽内の回転盤（約８０ｒｐｍで回転）には、付着担体として直径７ｍｍのハイドロキシアパタイト板（ペンタックス社製）を０．４５μｍのフィルターで濾過したヒト無刺激唾液で２時間処置したものを装着し、その表面にバイオフィルムを形成させた。

上記方法による培養は２１日間行い、後半の１０日間は次に示す薬剤処置を行った。即ち、１日１回、バイオフィルムが付着したハイドロキシアパタイト板を培養槽から取り出し、シャーレ（直径３５ｍｍ、高さ１４ｍｍ）に移し、表１に示した試験組成物（本発明品及び比較品）５ｇで３分間浸漬した後、生理食塩水５ｇで３回洗浄後、再び培養槽内に戻した。同操作は総計１０回実施した。

培養終了時には、試験組成物のバイオフィルム抑制効果を評価するため、バイオフィルムを４ｍＬのＴＨＢＨＭを添加した試験管（直径１３ｍｍ×１００ｍｍ）に移した。直ちに超音波破砕（２００μＡの出力で１０秒間）、段階希釈（１０倍希釈を６段階）を行い、各菌溶液を血液寒天平板培地^**に塗沫した。同平板培地は、肉眼でコロニーが確認できるまで嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）した。各平板培地のコロニー数をカウント後、定法により生菌数（単位；Ｌｏｇｃｆｕ／ＨＡ板、ＣＦＵ：ｃｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔの略）を算出した。

＊ＢＭＭの組成：１リットル中の質量で表す。
プロテオースペプトン（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
４ｇ／Ｌ
トリプトン（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：２ｇ／Ｌ
イーストエキス（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：２ｇ／Ｌ
ムチン（Ｓｉｇｍａ社製）：５ｇ／Ｌ
ヘミン（Ｓｉｇｍａ社製）：２．５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）：０．５ｍｇ／Ｌ
ＫＣｌ（和光純薬工業社製）：１ｇ／Ｌ
システイン（和光純薬工業社製）：０．２ｇ／Ｌ
蒸留水：残
（全量が１Ｌになるようにメスアップした。）

＊＊血液寒天平板培地の組成：１リットル中の質量で表す。
トッドへーウィットブロース（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
寒天（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：１５ｇ／Ｌ
ヘミン（Ｓｉｇｍａ社製）：５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）：１ｍｇ／Ｌ
蒸留水：残
（全量が１Ｌになるようにメスアップした。）

また、試験組成物における配合成分の溶解性について下記方法で評価した。結果を表１及び表２に示す。
溶解性の評価：
試験組成物の調製法に従い１００ｍＬビーカーを用いて、全量が１００ｇになるように調製し、回転数３６０ｒｐｍで１分間撹拌し、３分間静置した後の溶液の様子を以下の評点に従い、目視にて評価を行った。
評点
○；透明
△；僅かに濁り又は沈殿が認められる
×；明らかに濁り又は沈殿が認められる

表１及び表２から明らかなように、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン及び抗菌剤を配合していても、界面活性剤及び／又はアルコールを含有しない場合（比較品２）や、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸及びテトラヒドロキシベンゾフェノンから選ばれるベンゾフェノン又はその塩あるいは抗菌剤を単独で配合し、界面活性剤及び／又はアルコールを併用した場合（比較品３〜１０、比較品１はコントロール）、更には、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン及び抗菌剤を配合していても、これら成分の配合割合が本発明にかかわる質量比から外れる場合（比較品１１，１２）は、２×１０⁶ｃｆｕ／ＨＡ板以上の細菌が生存しているのに対し、本発明品のベンゾフェノン又はその塩と抗菌剤とを特定の質量比の範囲で併用し、界面活性剤及び／又はアルコールを配合したもの（本発明品）は、残存生菌数がいずれも４×１０⁵ｃｆｕ／ＨＡ板以下となり、高いバイオフィルム抑制効果が認められた。

以下、実施例を示す。なお、下記例で用いた香料は以下の通りである。

＊フルーツミックスフレーバーＦＭ３０００（調合香料）
ストロベリーフレーバー４０％
アップルフレーバー１５
メロンフレーバー１７
バナナフレーバー１０
ピーチフレーバー５
オレンジ油２．５
ラズベリーフレーバー２．０
パイナップルフレーバー１．５
グレープフレーバー１．０
トロピカルフルーツフレーバー１．５
ミルクフレーバー１．０
グレープフルーツ油０．５
レモン油０．５
ローズ油０．２
溶剤残
合計１００．０％

また、下記に示す実施例１〜８については、表１及び表２で使用した原料メーカー以外の界面活性剤及びアルコールについては下記原料メーカーのものを使用した。

［実施例１］練歯磨
第２リン酸カルシウム４５．０％
無水ケイ酸２．０
ソルビット（７０％水溶液、日研化成社製）２５．０
プロピレングリコール（ダウケミカル社製）２．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム１．０
アルギン酸ナトリウム０．５
ラウリル硫酸ナトリウム（東邦化学工業社製）１．５
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油
（日本サーファクタント社製）０．８
サッカリンナトリウム１．０
安息香酸ナトリウム０．１
イソプロピルメチルフェノール（和光純薬工業社製）０．０５
２−ヒドロキシ−４−メチルベンゾフェノン（和光純薬工業社製）１．０
香料Ａ１．０
精製水残
計１００．０％
（（Ａ）ベンゾフェノン又はその塩：（Ｂ）抗菌剤＝２０：１）

［実施例２］練歯磨
炭酸カルシウム４０．０％
プロピレングリコール（ダウケミカル社製）４．０
グリセリン（ライオン社製）２０．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム１．５
酸化チタン０．５
ラウリル硫酸ナトリウム（東邦化学工業社製）０．８
サッカリンナトリウム０．１
パラオキシ安息香酸エチル０．１
２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノン
（和光純薬工業社製）０．００５
イソプロピルメチルフェノール（和光純薬工業社製）０．０７
香料Ｂ１．０
精製水残
計１００．０％
（（Ａ）ベンゾフェノン又はその塩：（Ｂ）抗菌剤＝１：１４）

［実施例３］練歯磨
ジルコノシリケート２５．０％
無水ケイ酸２．０
ソルビット液（７０％水溶液、日研化成社製）４０．０
ポリエチレングリコール４００（ライオン社製）５．０
ポリアクリル酸ナトリウム１．０
ラウリル硫酸ナトリウム（東邦化学工業社製）１．０
サッカリンナトリウム０．２
パラオキシ安息香酸メチル０．１
パラオキシ安息香酸ブチル０．１
２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸ナトリウム
（東京化成社製）０．０２
フェノキシエタノール（和光純薬工業社製）１．５
香料Ｃ１．０
精製水残
計１００．０％
（（Ａ）ベンゾフェノン又はその塩：（Ｂ）抗菌剤＝１：７５）

［実施例４］液状歯磨
グリセリン（坂本薬品工業社製）２５．０％
ソルビット液（７０％水溶液、日研化成社製）２５．０
プロピレングリコール（ダウケミカル社製）５．０
無水ケイ酸０．３
ラウリル硫酸ナトリウム（東邦化学工業社製）１．０
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油
（日本サーファクタント社製）１．０
サッカリンナトリウム０．２
安息香酸ナトリウム０．３
２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン（和光純薬工業社製）０．０２
イソプロピルメチルフェノール（和光純薬工業社製）０．０５
香料Ｄ１．０
トラネキサム酸０．１
精製水残
計１００．０％
（（Ａ）ベンゾフェノン又はその塩：（Ｂ）抗菌剤＝１：２．５）

Claims

（Ａ）２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸及びそのナトリウム塩、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノンから選ばれる少なくとも１種のベンゾフェノン又はその塩を０．００１〜５．０質量％と、（Ｂ）イソプロピルメチルフェノール、フェノキシエタノール及び塩化セチルピリジニウムから選ばれる少なくとも１種の抗菌剤を０．００１〜１０．０質量％と、（Ｃ）ラウリル硫酸ナトリウム及び酸化エチレンの付加モル数が２０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油から選ばれる界面活性剤及び／又はエタノール，グリセリン，プロピレングリコール，ポリエチレングリコール４００，ポリエチレングリコール４０００から選ばれるアルコールとを含有し、（Ａ）ベンゾフェノン又はその塩と（Ｂ）抗菌剤との質量比が６０：１〜１：２００の範囲であることを特徴とする口腔用組成物。
（Ａ）２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸及びそのナトリウム塩、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノンから選ばれる少なくとも１種のベンゾフェノン又はその塩と、（Ｂ）イソプロピルメチルフェノール、フェノキシエタノール及び塩化セチルピリジニウムから選ばれる少なくとも１種の抗菌剤と、（Ｃ）ラウリル硫酸ナトリウム及び酸化エチレンの付加モル数が２０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油から選ばれる界面活性剤及び／又はエタノール，グリセリン，プロピレングリコール，ポリエチレングリコール４００，ポリエチレングリコール４０００から選ばれるアルコールとからなり、（Ａ）ベンゾフェノン又はその塩と（Ｂ）抗菌剤との質量比が６０：１〜１：２００の範囲であることを特徴とする口腔バイオフィルム形成抑制剤。