JP4883268B2 - 口腔用組成物及び口腔バイオフィルム抑制剤 - Google Patents

Description

本発明は、口腔バイオフィルム抑制効果が高く、効果の経時安定性に優れ、良好な香味を有し、口腔疾患の原因である口腔バイオフィルムの抑制に有効な口腔用組成物及び口腔バイオフィルム抑制剤に関する。

近年、デンタルプラークはバイオフィルムとして捉えられ（非特許文献１）、バイオフィルム中の細菌は、浮遊性細菌と比較すると細菌のタンパク質発現パターン（非特許文献２，３）や薬剤耐性（非特許文献４，５）が大きく異なり、浮遊性細菌に対して効果のあった薬剤がバイオフィルム構成細菌に対して有効ではないことが明らかになってきた。

これまでに殺菌手段として、フェノール性殺菌剤（特許文献１）などが開発されてきたが、バイオフィルム中の細菌は強力な薬剤耐性メカニズムを有するため、これだけではバイオフィルム抑制効果は不充分であり、口腔疾患のリスクをゼロにすることは困難であった。

また、これらの殺菌力を増強するため、殺菌剤の滞留性向上技術（特許文献２）が考案されたが、バイオフィルムの薬剤浸透性の低さなどにより、著効は期待できなかった。このような現状から、バイオフィルム中の細菌に対しても有効なバイオフィルム抑制組成物の開発が強く望まれていた。

近年、バイオフィルム抑制組成物として、疎水性アミノ酸及びアンモニウム塩の配合（特許文献３）、歯垢構成微生物の細菌間情報伝達機構の制御物質の配合（特許文献４）、ラクトン及び／又はフラン誘導体の配合（特許文献５）、グリセロールリン酸及びフェノール性殺菌剤の配合（特許文献６）、非イオン性抗菌剤及びジカルボン酸化合物の配合（特許文献７）、オフロキサシンやクロサンテルとフェノール性殺菌剤の配合（特許文献８）などが提案されている。

しかしながら、これらの技術は、香味及び口腔バイオフィルム抑制作用の経時安定性などに問題があり、未だ市場に導入されていないのが現状である。このような現状から、上記技術に代わる、口腔バイオフィルム抑制作用を持つ組成物の開発が強く望まれている。

なお、６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン、酸化エチレン平均付加モル数が４０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ペパーミント油、スペアミント油、ウィンターグリーン油、アニス油、ユーカリ油、カシア油、クローブ油、オレンジ油、レモン油は、それぞれ口腔用組成物への配合成分として公知であるが、組み合わせにより高い口腔バイオフィルム抑制作用、香味及び口腔バイオフィルム抑制作用の安定性のいずれもが良好になることはこれまでに報告されていない。また、６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドンの類似化合物の配合が開示されているが（特許文献９〜１４）、これらに口腔バイオフィルム抑制活性は認められていない。更に、これらの特許文献では、同類似化合物と酸化エチレン平均付加モル数が４０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油と、ペパーミント油，スペアミント油，ウィンターグリーン油，アニス油，ユーカリ油，カシア油，クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる１種以上の香料成分の組合せは明示されていない。

Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，Ｊ．Ｗ．，Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｐ．Ｓ．ａｎｄ Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｅ．Ｐ．：Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｆｉｌｍｓ：ａ ｃｏｍｍｏｎ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１３１８−１３２２，１９９９． Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，Ｊ．Ｗ．，Ｌｅｗａｎｄｏｗｓｋｉ，Ｚ．，Ｃａｌｄｗｅｌｌ，Ｄ．Ｅ．，Ｋｏｒｂｅｒ，Ｄ．Ｒ． ａｎｄ Ｌａｐｐｉｎ−Ｓｃｏｔｔ，Ｈ．Ｍ．：Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｂｉｏｆｉｌｍｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：７１１−７４５，１９９５． Ｈｕｄｓｏｎ，Ｍ．Ｃ．，Ｃｕｒｔｉｓｓ，Ｒ．ＩＩＩ：Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ｇｅｎｅｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｔｏ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．５８：４６４−４７０，１９９０． Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｐ．Ｓ．：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｆｉｌｍｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９２：１０７−１１３，２００２． Ｐｈｉｌｉｐ Ｍａｒｓｈ ａｎｄ Ｍｉｃｈａｅｌ Ｖ．Ｍａｒｔｉｎ著「Ｏｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｗｒｉｇｈｔ出版、２０００年、ｐ．５８−８１（Ｄｅｎｔａｌ ｐｌａｑｕｅ） 特開平０２−１１５１１号公報 特開平０４−１３９１１９号公報 特開２００２−３７０９５３号公報 特開２００３−１２８５８０号公報 特開２００４−１５５６８１号公報 特開２００５−０４７８５５号公報 特開２００５−０１５３６９号公報 特開２００５−１８７３７７号公報 特開平１０−１５８１３４号公報 特開平１０−１５８１３５号公報 特開平１０−３１６５４８号公報 特開２００２−１７９５６９号公報 特開２００３−１６０４５７号公報 特開２００４−０５１５３５号公報

本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、高いバイオフィルム抑制作用を示し、かつ、良好な香味を有すると共に、バイオフィルム抑制作用の経時安定性に優れた口腔用組成物及び口腔バイオフィルム抑制剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究を重ねた結果、６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン又はその塩と、酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油とを含有し、かつペパーミント油と、スペアミント油及び／又はウィンターグリーン油と、アニス油，ユーカリ油，カシア油から選ばれる１種又は２種以上と、クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる１種又は２種以上とを併用した香料成分を組み合わせることにより、これら成分が相乗的に作用して、顕著な口腔バイオフィルム抑制効果を示し、かつ極めて良好な香味を有する上、口腔バイオフィルム抑制効果が持続的に発揮され、効果の安定性に優れた口腔用組成物が得られることを初めて見出した。

従って、本発明は下記の口腔用組成物及び口腔バイオフィルム抑制剤を提供する。
請求項１：
６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン又はその塩と、酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油とを含有し、かつペパーミント油と、スペアミント油及び／又はウィンターグリーン油と、アニス油，ユーカリ油，カシア油から選ばれる１種又は２種以上と、クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる１種又は２種以上とを併用した香料成分とを含有することを特徴とする口腔用組成物。
請求項２：
更に、デキストラナーゼを含有することを特徴とする請求項１記載の口腔用組成物。
請求項３：
６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン又はその塩と、酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油とを併用し、かつペパーミント油と、スペアミント油及び／又はウィンターグリーン油と、アニス油，ユーカリ油，カシア油から選ばれる１種又は２種以上と、クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる１種又は２種以上とを併用した香料成分とからなる口腔バイオフィルム抑制剤。

本発明の口腔用組成物は、高い口腔バイオフィルム抑制作用を示し、かつ、良好な香味を有すると共に、バイオフィルム抑制作用の経時安定性に優れたもので、口腔バイオフィルム抑制用として有効である。

以下、本発明につき更に詳細に説明すると、本発明の口腔用組成物は、６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン又はその塩と、酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油と、ペパーミント油とスペアミント油及び／又はウィンターグリーン油とアニス油，ユーカリ油，カシア油から選ばれる１種又は２種以上とクローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる１種又は２種以上とを併用した香料成分とを含有するものである。

本発明において、６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドンは、単独でそのままあるいはエタノールアミンなどの塩として用いても問題ないが、安定性などの面から６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン・エタノールアミンを用いることがより好ましい。

６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン又はその塩の配合量は、組成物全体の０．０５〜２％（質量％、以下同様。）が好ましく、より好ましくは０．１〜２％、更に好ましくは０．１〜１％である。配合量が０．０５％未満の場合は充分なバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、２％を超えると香味や安定性などの点で不充分となる場合がある。

本発明に使用するポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の酸化エチレン平均付加モル数は、安定性の面から６０〜１００であり、更に好ましくはバイオフィルム抑制活性の面から６０〜８０である。ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の酸化エチレン平均付加モル数が４０未満の場合は、口腔バイオフィルム抑制活性の経時安定性が悪くなる場合があり、また、１００を超えるものは一般には市販されていない。

酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の配合量は、組成物全体の０．１〜５％が好ましく、より好ましくは０．１〜２％、更に好ましくは０．３〜１．５％である。配合量が０．１％未満の場合は満足な口腔バイオフィルム抑制活性の経時安定性などが得られない場合があり、５％を超えると香味や口腔バイオフィルム抑制活性などに悪影響を与える場合がある。

また、本発明においては、上記必須成分に加え、ペパーミント油，スペアミント油，ウィンターグリーン油，アニス油，ユーカリ油，カシア油，クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる香料成分を含有することが必要である。これらの中で、６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン由来の苦味の緩和やバイオフィルム抑制効果の面から、特にペパーミント油，スペアミント油，ウィンターグリーン油から選ばれる香料を用いることがより好ましい。本発明では、ペパーミント油と、スペアミント油及び／又はウィンターグリーン油と、アニス油，ユーカリ油，カシア油から選ばれる１種又は２種以上と、クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる１種又は２種以上とを含有する。

上記香料成分中、ペパーミント油の配合量は、組成物全体に対して０．００５〜１．０％、特に０．００５〜０．６％とすることが好ましく、０．００５％未満であると６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン由来の苦味があり、良好な香味やバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、１．０％を超えると香味や安定性などの点で不充分となる場合がある。

スペアミント油、ウィンターグリーン油、ユーカリ油、オレンジ油、レモン油の配合量は、それぞれ組成物全体に対して０．００１〜１．０％、特に０．００１〜０．５％とすることが好ましく、０．００１％未満であると６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン由来の苦味があり、良好な香味やバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、１．０％を超えると香味や安定性などの点で不充分となる場合がある。

アニス油、カシア油、クローブ油の配合量は、それぞれ組成物全体で０．００１〜０．１％、特に０．００１〜０．０５％とすることが好ましく、０．００１％未満であると６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン由来の苦味があり、良好な香味やバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、０．１％を超えると香味や安定性などの点で不充分となる場合がある。

上記ペパーミント油，スペアミント油，ウィンターグリーン油，アニス油，ユーカリ油，カシア油，クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる香料成分の総配合量は、組成物全体の０．００１〜２．０％、特に０．００５〜１．０％が好ましく、０．００１％に満たないと６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン由来の苦味があり、良好な香味やバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、２．０％を超えると香味や安定性などの点で不充分となる場合がある。

また、本発明においては、６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドンと、酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油と、ペパーミント油，スペアミント油，ウィンターグリーン油，アニス油，ユーカリ油，カシア油，クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる香料成分に加え、更にデキストラナーゼを含有することが好ましく、デキストラナーゼの併用により、バイオフィルム抑制活性がより顕著に高まる。

前記デキストラナーゼとしては、ケトミウム属、ペニシリウム属、アスペルギルス属、スピカリア属、ラクトバチルス属、セルビブリオ属等に属する公知のデキストラナーゼ生成菌により公知の方法により得られるデキストラナーゼはもちろん、他の微生物により生産されるデキストラナーゼも使用することができる。

デキストラナーゼの配合量は、口腔用組成物１ｇあたり５〜１００単位（ここで、１単位とはデキストランを基質として反応を行った場合、１分当たりグルコース１μｍｏｌに相当する遊離還元糖を生じる酵素量をいう）が好ましく、その配合量は例えば１００００単位／ｇのデキストラナーゼを用いた場合、組成物全体で０．０５〜１％とすることが好ましく、特に０．０５〜０．５％、とりわけ０．１〜０．３％が好適である。配合量が０．０５％未満であると満足なバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、１％を超えると安定性などの点で不充分となる場合がある。

本発明にかかわる口腔用組成物は、固体、固形物、液体、液状、ゲル体、ペースト状、ガム状等の各種形態にすることができ、練歯磨、液体歯磨、液状歯磨、潤製歯磨等の歯磨類、洗口剤、マウスウォッシュなどの各種剤型に調製でき、その製造法も剤型に応じた常法を採用することができるが、その目的、組成物の剤型等に応じて、上述した成分に加えて更に適宜な任意成分を配合することができる。

具体的には、歯磨類の場合には、研磨剤として例えば第２リン酸カルシウム・２水和物及び無水物、第１リン酸カルシウム、第３リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、水酸化アルミニウム、アルミナ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、第３リン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、硫酸カルシウム、ポリメタクリル酸メチル、ベントナイト、ケイ酸ジルコニウム、合成樹脂等の１種又は２種以上を配合し得る（研磨剤の配合量 通常５〜９０％、練歯磨の場合には１０〜６０％）。

歯磨類などのペースト状や液状口腔用組成物においては、界面活性剤として陰イオン界面活性剤、上記ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油以外の非イオン界面活性剤及び両性イオン界面活性剤の１種又は２種以上を配合し得る。陰イオン界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ミリスチル硫酸ナトリウムなどのアルキル硫酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルザルコシン酸ナトリウム、Ｎ−ミリストイルザルコシン酸ナトリウムなどのＮ−アシルザルコシン酸ナトリウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグリセリドモノ硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、Ｎ−パルミトイルグルタミン酸ナトリウムなどのＮ−アシルグルタミン酸塩、Ｎ−メチル−Ｎ−アシルタウリンナトリウム、Ｎ−メチル−Ｎ−アシルアラニンナトリウム、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム等が用いられる。また、非イオン界面活性剤としては、上記ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油以外のもの、例えばショ糖脂肪酸エステル、マルトース脂肪酸エステル、ラクトース脂肪酸エステルなどの糖脂肪酸エステル、マルチトール脂肪酸エステル、ラクチトール脂肪酸エステルなどの糖アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレートなどのポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリン酸モノ又はジエタノールアミド、ミリスチン酸モノ又はジエタノールアミドなどの脂肪酸ジエタノールアミド、ソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン脂肪酸エステル等が用いられる。両性イオン界面活性剤としては、Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニウムベタイン、２−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリンベタインナトリウムなどが用いられる（界面活性剤の配合量 通常０．１〜２０．０％）。

また、練歯磨等のペースト状組成物の場合には、粘結剤としてカラギーナン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルヒドロキシエチルセルロースナトリウムなどのセルロース誘導体、アルギン酸塩、アルギン酸プロピレングリコールエステル、キサンタンガム、トラガカントガム、カラヤガム、アラビヤガムなどのガム類、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルピロリドンなどの合成粘結剤、シリカゲル、アルミニウムシリカゲル、ビーガム、ラポナイトなどの無機粘結剤等の１種又は２種以上が配合され得る（粘結剤の配合量 通常０．３〜１０％）。

更に、歯磨類などのペースト状や液状口腔用組成物において、粘稠剤としてグリセリン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ヘキシレングリコール、ブチレングリコール、ペンタンジオール、プロピレングリコール、ソルビット、ポリエチレングリコール２００〜２００００、ポリプロピレングリコール３００〜４０００などの１種又は２種以上を配合し得る（配合量 通常１〜７０％）。

香料としては、上記香料成分以外のものを本発明の効果を妨げない範囲で配合することができ、例えばタイム油、コリアンダー油、ラベンダー油、カモミール油、マジョラム油、ベイ油、オリガナム油、パインニードル油、ネロリ油、ローズ油、ジャスミン油、イリスコンクリート、アブソリュートローズ、オレンジフラワー等の天然香料、及び、これら天然香料の加工処理（前溜部カット、後溜部カット、分留、液液抽出、エッセンス化、粉末香料化等）した香料、及び、３−ｌ−メントキシプロパン−１，２−ジオール、チモール、Ｎ−置換−パラメンタン−３−カルボキサミド、オクチルアルデヒド、カルビールアセテート、エチルアセテート、エチルブチレート、アリルシクロヘキサンプロピオネート、メチルアンスラニレート、エチルメチルフェニルグリシデート、バニリン、ウンデカラクトン、ヘキサナール、イソアミルアルコール、ヘキセノール、ジメチルサルファイド、シクロテン、フルフラール、トリメチルピラジン、エチルラクテート、エチルチオアセテート等の単品香料、更に、ストロベリーフレーバー、アップルフレーバー、バナナフレーバー、パイナップルフレーバー、グレープフレーバー、マンゴーフレーバー、バターフレーバー、ミルクフレーバー、トロピカルフルーツフレーバー等の調合香料等、口腔用組成物に用いられる公知の香料素材を使用することができ、実施例の香料に限定されない。含有量も特に限定されないが、上記の香料素材は、製剤組成中に０．０００００１〜１％使用するのが好ましい。また、上記香料素材を併用した賦香用香料としては、製剤組成中に０．１〜２．０％使用するのが好ましい。

なお、本発明においては、上記６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン及びデキストラナーゼ以外に、有効成分として、クロルヘキシジン、ベンゼトニウムクロライド、ベンザルコニウムクロライド、セチルピリジニウムクロライド、デカリニウムクロライドなどの陽イオン性殺菌剤、イソプロピルメチルフェノール、トリクロサン、ヒノキチオール等のフェノール性化合物、リゾチーム、アミラーゼ、プロテアーゼ、溶菌酵素、スーパーオキサイドなどの酵素、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウムなどのアルカリ金属モノフルオロホスフェート、フッ化ナトリウム、フッ化第１錫などのフッ化物、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、アルミニウムクロルヒドロキシルアラントイン、ジヒドロコレスタノール、グリチルリチン酸類、グリチルレチン酸、ビサボロール、グリセロホスフェート、クロロフィル、塩化ナトリウム、水溶性無機リン酸化合物等の有効成分を１種又は２種以上配合し得る。上記有効成分の配合量は、本発明の効果を妨げない範囲で有効量とすることができる（配合量 通常０．０００１〜５％）。

以下、実験例、実施例及び比較例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例に制限されるものではない。なお、以下の例において配合量はいずれも質量％である。

［実験例１］
下記表１に示す組成の口腔用組成物（洗口剤）を調製し、下記評価を行った。結果を表２に示す。
バイオフィルム抑制活性の測定：
ライオン株式会社オーラルケア研究所において継代保存（凍結保存）してあったアクチノマイセス ビスコーサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｖｉｓｃｏｓｕｓ）ＡＴＣＣ ４１４３６株，フゾバクテリウム ニュークレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）ＡＴＣＣ １０９５３株，ポルフィロモーナス ジンジバリス（Ｐｏｒｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）ＡＴＣＣ ３３２７７株菌液４０μＬをそれぞれ５ｍｇ／Ｌ ヘミン（シグマ アルドリッチ社製）及び１ｍｇ／Ｌ ビタミンＫ（和光純薬工業社製）を含むトッドへーウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＨＭ）^*４ｍＬに添加し、３７℃で一晩嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）した。

同様に保存してあったベイヨネラ パービューラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｐａｒｖｕｌａ）ＡＴＣＣ １７７４５株菌液８０μＬを、１．２６％乳酸ナトリウム（シグマ アルドリッチ社製）を含むトッドへーウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＬ）^**４ｍＬに添加し、同様に培養した。

培養後、ベイヨネラ パービューラを除く３菌種の菌液からそれぞれ３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＨＭに添加し、更に一晩培養した。ベイヨネラ パービューラの菌液から同様に３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＬに添加し、一晩培養した。再培養後、各菌液を遠心分離（１００００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）し、上清を廃棄した。各沈査（細菌）に対してベイサルメディウムムチン培養液（ＢＭＭ）^***を添加し、再懸濁した後、予めＢＭＭ １０００ｍＬを入れた培養槽に、上記各菌数がそれぞれ１×１０⁷個／ｍＬになるように接種し、３７℃、嫌気条件下（９５ｖｏｌ％窒素、５ｖｏｌ％二酸化炭素）で一晩培養した。その後、ＢＭＭを１００ｍＬ／ｈの速度で供給するとともに、同速度で培養液を排出した。上記培養槽から排出された培養液は、液量が３００ｍＬに保たれる別の培養槽に連続的に供給した。この培養槽内の回転盤（約８０ｒｐｍで回転）には、付着担体であるコラーゲンゲルを充填したカップ^****を装着し、その表面にバイオフィルムを形成させた。

上記方法による培養は２１日間行い、後半の１０日間は次に示す薬剤処置を行った。即ち、１日１回、バイオフィルムを培養槽から取り出し、試験組成物（実施例、参考例及び比較例）又は生理食塩水（対照）で３分間処理した後、洗浄後、再び培養槽内に戻した。同操作は総計１０回実施した。

培養終了時にバイオフィルムを生理食塩水で洗浄した後、０．０１ｍｍｏｌ／Ｌのサイト９蛍光染色剤（ＳＹＴＯ ９，インビトロジェン社製）を含む生理食塩水８ｍＬを添加したシャーレ（直径３５ｍｍ×１４ｍｍ）に移した。１５分間静置した後、蛍光染色したバイオフィルムを共焦点レーザー顕微鏡（Ｒａｄｉａｎｃｅ ２１００、バイオ・ラッド ラボラトリーズ社製）により観察した。

なお、共焦点レーザー顕微鏡の対物レンズとしては、焦点作動距離２．０ｍｍの水没用レンズ（ＣＦＩ Ｐｌａｎ Ｆｌｕｏｒ １０×；ニコン社製）を用い、４８８ｎｍのレーザー光を照射させ、蛍光波長５００〜５３０ｎｍで得られる画像をバイオフィルム細菌の存在とした。画像の取得は、バイオフィルム上部からコラーゲンゲルカップ側に向けて行い、水平面画像（ｘｙ面、６１９ × ６１９ μｍ）を２．５μｍごとに連続的に取得した。得られた画像から、立体構築ソフト（ＬａｓｅｒＶｏｘ，バイオ・ラッド ラボラトリーズ社製）及び三次元解析ソフト（ＴＲＩ／３Ｄ−ＶＯＬ，ラトックシステムエンジニアリング社製）を用いてバイオフィルムの体積を求めた。結果は、下式から求めたバイオフィルム体積減少率（％）で示した。

＊ＴＨＢＨＭの組成：１リットル中の質量で表す。
トッドへーウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマ アルドリッチ社製）： ５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）： １ｍｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップした。）
＊＊ＴＨＢＬの組成：１リットル中の質量で表す。
トッドへーウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
乳酸ナトリウム６０％水溶液（シグマ アルドリッチ社製）： ２１ｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップした。）

＊＊＊ＢＭＭの組成：１リットル中の質量で表す。
プロテオースペプトン（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
４ｇ／Ｌ
トリプトン（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）： ２ｇ／Ｌ
トリプチケースペプトン（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
２ｇ／Ｌ
ムチン（シグマ アルドリッチ社製）： ５ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマ アルドリッチ社製）： ２．５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）： ０．５ｍｇ／Ｌ
ＫＣｌ（和光純薬工業社製）： １ｇ／Ｌ
システイン（和光純薬工業社製）： ０．２ｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップした。）

＊＊＊＊コラーゲンゲルカップの作製法：
アクリル製のカップ（直径６ｍｍ×高さ５ｍｍ、肉厚０．８ｍｍ）に０．２％コラーゲン溶液（フナコシ社製）を、１００μＬ添加し、３６℃で乾燥させることにより行った。

［実験例２］
下記表１に示す組成の口腔用組成物を調製し、下記評価を行った。結果を表２に示す。
香味の評価；
試験組成物（実施例、参考例及び比較例）１０ｍＬを３０秒間、口に含みすすいだ後、香味について下記の３段階で評価し、１０名の平均点を算出した。

使用時から使用後の香味
評点基準
３点：比較例１と比較して良好な香味である
２点：比較例１と比較してやや良好な香味である
１点：比較例１と比較して同等以下の香味である
評点
◎：２．５点以上
○：２．０点以上２．５点未満
△：１．５点以上２．０点未満
×：１．５点未満

［実験例３］
下記表１に示す組成の口腔用組成物を調製し、下記評価を行った。結果を表２に示す。
安定性の評価；
試験組成物（実施例、参考例及び比較例）を満注量５００ｍＬのＰＥＴ容器に４５０ｍＬ充填し、４５℃恒温槽に１週間保存後、実験例１と同様にしてバイオフィルム抑制活性を測定し、保存前のバイオフィルム抑制活性に対する残存活性（％）を算出した。

なお、実施例、参考例及び比較例の口腔用組成物は下記方法で調製した。
口腔用組成物の調製法：
６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、香料成分及びその他の成分を秤取し、４０℃で加温して蒸留水中で混合分散させた。デキストラナーゼ添加群においてはデキストラナーゼを採取、添加後、すべての群において全量が１００ｍＬになるように蒸留水でメスアップした。

１）Ａ成分；６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン
・エタノールアミン（シグマ アルドリッチ社製）
２）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ＰＯＥ数は、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の
酸化エチレン平均付加モル数を示す。
３）デキストラナーゼ；三共社製（１００００単位／ｇ）
４）テレピン油（和光純薬工業社製 本発明の香料成分の対照品として）
５）ＣＰＣ；塩化セチルピリジニウム（和光純薬工業社製 １）の対照品として）
６）ＨＣＯ−３０；ポリオキシエチレン（３０）硬化ヒマシ油（日本サーファクタント社
製 ２）の対照品として）

上記の結果より、６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドンと、酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油と、ペパーミント油とスペアミント油及び／又はウィンターグリーン油とアニス油，ユーカリ油，カシア油から選ばれる１種又は２種以上とクローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる１種又は２種以上とを併用した香料成分との組み合わせ以外（比較例１〜５）では、バイオフィルム抑制効果、香味、安定性のすべてを満足することはできなかったが、前記成分の組み合わせ（実施例１〜５）により、相乗的な効果が発現し、すべての指標において良好な結果が得られ、本発明の有効性が認められた。更に、６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドンと、酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油と、上記の香料成分にデキストラナーゼを加えると（実施例４、５）、更に顕著にバイオフィルム抑制効果が高まることが分かった。これらの実施例では、バイオフィルム抑制活性（体積減少率％）と安定性（残存活性％）をかけ合わせた保存後の絶対活性においても実施例１〜３より良好であり優位性が認められた。

〔実施例６〕 洗口剤
６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン・エタノールアミン（シグマ アルドリッチ社製） ０．２％
ポリオキシエチレン（１００）硬化ヒマシ油（日本サーファクタント社製）
０．５
香料Ａ ０．５
イソプロピルメチルフェノール ０．０５
エタノール ５．０
ラウリル硫酸ナトリウム ０．１
プロピレングリコール ２．０
トラネキサム酸 ０．０６
グリチルリチン酸ジカリウム ０．０６
グリセリン ５．０
クエン酸 ０．０６
クエン酸ナトリウム ０．５
サッカリンナトリウム ０．０１
水 残
計 １００．０％

〔実施例７〕 歯磨剤
６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン・エタノールアミン（シグマ アルドリッチ社製） ０．５％
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油（日本エマルジョン社製） １．０
香料Ｂ １．０
デキストラナーゼ（三共社製、１１０００単位／ｇ） ０．１６
無水ケイ酸 １５．０
プロピレングリコール ３．０
７０％ソルビット液 ４０．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム １．２
ラウリル硫酸ナトリウム １．０
フッ化ナトリウム ０．２１
ゼラチン ０．３
サッカリンナトリウム ０．２
水 残
計 １００．０％

なお、香料Ａ，Ｂは下記の通りである。

以上、実施例６、７に対して実験例と同様な評価を行った結果、優れたバイオフィルム抑制効果、バイオフィルム抑制効果の経時安定性、香味のいずれにおいても比較例より良好な結果が得られた。

Claims (3)

1. ６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン又はその塩と、酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油とを含有し、かつペパーミント油と、スペアミント油及び／又はウィンターグリーン油と、アニス油，ユーカリ油，カシア油から選ばれる１種又は２種以上と、クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる１種又は２種以上とを併用した香料成分とを含有することを特徴とする口腔用組成物。
2. 更に、デキストラナーゼを含有することを特徴とする請求項１記載の口腔用組成物。
3. ６−シクロヘキシル−１−ヒドロキシ−４−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン又はその塩と、酸化エチレン平均付加モル数が６０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油とを併用し、かつペパーミント油と、スペアミント油及び／又はウィンターグリーン油と、アニス油，ユーカリ油，カシア油から選ばれる１種又は２種以上と、クローブ油，オレンジ油，レモン油から選ばれる１種又は２種以上とを併用した香料成分とからなる口腔バイオフィルム抑制剤。