JP5016200B2 - アカシア属樹皮由来物を含有する腫瘍の予防及び/又は治療用組成物 - Google Patents
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Description
したがって、癌をはじめとする腫瘍の予防又は治療方法の開発は、重要かつ急務の課題といえる。
実際、薬剤として種々の抗癌剤が開発、使用されてきているが、重篤な副作用を伴うなどの問題も多い。
すなわち、本発明は、アカシア属樹皮由来物を含有することを特徴とする、腫瘍の予防及び/又は治療用組成物に関する。
また、本発明の組成物は、長期に服用しても副作用などの心配が少なく、安全性が高い。
本発明では、これらアカシア属樹皮由来物を1種のみ使用してもよいし、2種以上併用してもよい。
本発明では、これらアカシア属の樹皮を1種のみ使用してもよいし、2種以上併用してもよい。
アカシア属の樹皮は、外皮とやや繊維質の内皮とからなり、含水率20%程度以下に乾燥するとハンマーミルなどの粉砕機で容易に微粉化する。本発明では、アカシア属の樹皮として、このアカシア属の内皮と外皮の両方を一緒に用いてもよいし、いずれか一方のみを用いてもよい。
また、前記アカシア属の樹皮の粉末は、アカシア属の樹皮を慣用の方法で粉砕し粉末化して得ることができるが、特に、粒径が100μm以下、特に50〜70μmである粉末が好ましい。粉末の分画は、含水率20%以下に乾燥した樹皮を適当な大きさ、例えば粒径1.6mm以下程度に粉砕し、得られた粉末を振動ふるい機などで分級して所要の粉末を得ることができる。
このようなアルコールとしてエタノールなどが、極性溶媒として水などが使用でき、また必要に応じてそれら溶媒を単独又は2種以上を併用してもよい。特に、優れた抗腫瘍活性を得るために、水と、エチルアルコールなどのアルコールとの混合溶媒が好ましい。
さらに、同一又は異なる溶媒によって複数回抽出操作を行ってもよい。
優れた抗腫瘍活性を有する抽出物を得る上で、アカシア属の樹皮からの水又は熱水による抽出物をさらにエタノールで抽出して得た抽出物を使用してもよい。
さらに、これらの形態で得られた本発明のアカシア属の樹皮抽出物はそのまま腫瘍の予防又は治療に使用できるほか、さらに必要に応じて精製し、その精製物も抗腫瘍活性成分として使用することができる。
本発明のアカシア樹皮ポリフェノールとは、フラバン−3−オールを基本骨格とするフラバノール類の重合体である縮合型タンニンの一種を意味する。ここで、このような縮合型タンニンとして分子量500〜3000のものが好ましい。本発明で用いるアカシア樹皮ポリフェノールは、上記アカシア属の樹皮の粉末などを熱水抽出することにより得ることができる。
また、アカシア樹皮ポリフェノール製品としてはMIMOSA CentralCo-operative Ltd.製の登録商標MIMOSA ME POWDER、MIMOSA MS POWDER、MIMOSA GS POWDER、MIMOSA FS POWDER、MIMOSA WS POWDER、MIMOSA RG POWDER、MIMOSA RN POWDER、MIMOSA DK POWDER、MIMOSA AL POWDER、MIMOSA CR POWDER、GOLDEN MIMOSA POWDERなどが例示される。
本願発明の組成物は、特に、白血病、乳癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、及び血管肉腫、とりわけ白血病及び乳癌の予防又は治療に有用である。
なお、本発明において、治療には、腫瘍を縮小したり、治癒したり、腫瘍の成長、転移、増悪を抑制したりすることなども含まれる。
摂取期間は、使用者又は患者の年齢、症状に応じて任意に定めることができる。
以下の製造例、試験例等において、本発明の各アカシアをそれぞれの学名の後の括弧内に示した番号で示す。例えば、学名:Acacia mearnsii De Wild.のアカシアをアカシアNo.1と記す。
学名:Acacia mearnsii De Wild.(No.1)、学名:Acacia mangium Willd.(No.2)、学名:Acacia dealbata Link.(No.3)、学名:Acacia decurrens Willd.(No.4)、学名:Acacia pycnantha Benth.(No.5)。
アカシアNo.1の樹皮を含水率20%以下まで乾燥し、その乾燥樹皮をハンマーミル(Raymond社製)で1.6mm以下(10メッシュ篩(タイラー:Tyler)通過)の粉末に粉砕した後、更に振動ふるい機で分級し、63μm以下(250メッシュ篩下)の微粉末を得た。
同様にして、残り4種のアカシアNo.2〜5の樹皮を粉砕してそれぞれ63μm以下の微粉末を得た。種類によって250メッシュ篩通過の微粉末の収率に多少の差はあるが、目的とする微粉末が得られた。
本発明の各アカシアNo.1〜5の樹皮をそれぞれ含水率20%以下まで乾燥し、その乾燥樹皮をハンマーミルで1.6mm以下の粉末に粉砕した後、この乾燥粉砕樹皮100gに対して5倍量の熱水を加え、沸騰してから15分間抽出し、10〜20μmのフィルターを用いて濾過した。得られた濾液をスプレードライヤで噴霧乾燥し、樹皮抽出物各40gを得た。
以下、各樹皮抽出物はアカシアNo.1〜5熱水抽出物と記す。
本発明のアカシアの樹皮を含水率20%以下まで乾燥し、その乾燥樹皮をハンマーミルで1.6mm以下の粉末に粉砕した後、この乾燥粉砕樹皮100gに対して5倍量のエタノールを加え、沸騰させて還流させながら15分間抽出し、10〜20μmのフィルターを用いて濾過した。得られた濾液からエタノールを蒸発させた後、濃縮液をクローズドスプレードライヤで噴霧乾燥し、樹皮抽出物(以下、アカシアNo.1エタノール抽出物の如く記す)40gを得た。
アカシアNo.1〜5のエタノール抽出物を得た。
製造例2で得られたアカシア熱水抽出物10gに3倍量のエタノールを加え、沸騰させて還流させながら15分間抽出し、10〜20μmのフィルターを用いて濾過した。得られた濾液からエタノールを蒸発させて、それに水を加えてから凍結乾燥させて9gの抽出物(以下、アカシアNo.1熱水抽出物エタノール画分の如く記す)を得た。
アカシアNo.1〜5の熱水抽出物エタノール画分を得た。
(1)試験試料の調製
製造例2に記載のアカシアNo.1熱水抽出物200mgに2mlの蒸留水を加え、100℃にて10分間抽出した。その抽出液をろ過(ミリポアフィルター、穴径0.45μm)し、ろ液を10%FCS-RPMI1640で10倍及び100倍に希釈し、それぞれアカシアNo.1熱水抽出物の濃度が10mg/ml及び1mg/mlである試験試料を調製した(濃度は、原材料相当分で示している)。
また、有効対照としてマイトマイシンC(協和発酵(株))2mgアンプルに蒸留水1mlを加え、これを10%FCS-RPMI1640で希釈し、50μg/ml溶液としたものを使用した。
腫瘍細胞:マウス白血病細胞YAC−1(理化学研究所細胞バンクより供与)を継代培養し、継代培養4日目のものを10%FCS-RPMI1640で1×106細胞/mlに調製した。
培養試験:上記のYAC−1細胞(1×106細胞/ml)950μlを24穴プレートの各ウエルに注入し、上記で調製した試験試料を50μl加え、攪拌し、37℃下で3日間培養した(注:各試験試料の濃度は、ここで1/20となる)。培養後、細胞数及び生存率を測定し、生存細胞数を求めた。
アカシアNo.1熱水抽出物の試験試料を添加すると、YAC−1細胞の増殖は抑制され、特に0.5mg/mlの濃度で、5.0mg/mlの濃度やマイトマイシンC(濃度2.5μg/ml)よりも大きなYAC−1細胞増殖抑制作用を示した(図1)。
(1)試験飲料及び試験飼料の調製
(i)試験飲料の調製
茶漉しを用いて製造例2に記載のアカシアNo.1熱水抽出物を少量ずつ60℃の水道水に加え、スパーテルで分散させてから、加熱攪拌機Ceramag(IKARHベーシック、有限会社IKAジャパン製)を用いて10分間攪拌し、アカシアNo.1熱水抽出物を、それぞれ7.8mg/ml、15.6mg/ml及び31.3mg/ml含有する、試験飲料1、試験飲料2及び試験飲料3を調製した。
(ii)試験飼料の調製
製造例2に記載のアカシアNo.1熱水抽出物をマウス用飼料((株)クレアCE−2粉餌)に加え混合し、アカシアNo.1熱水抽出物を、それぞれ15.6mg/g及び31.3mg/g含有する、試験飼料2及び試験飼料3を調製した。
マウスは、C3H/HeNマウスの雌(日本チャールスリバー社、神奈川)を6週齢で購入し、一週間予備飼育後、表1に示したとおりに、対照1群、試験1群、試験2群、試験3群、及び陽性対照群に群分けした。
試験は図2に示したタイムスケジュールに従った。
先ず、上記のとおり群分けしたマウスに、Abe S et a1. Gann 73 91-96(1982)及びOhasi K et a1. Yakugaku Zasshi 113 396-399(1993)に記載の方法に従い、同系腫瘍MM46乳癌細胞2×106個をそけい部皮下に移植した。
腫瘍を移植したその日から、これら腫瘍移植マウスに飲料水及び対照飼料〔マウス用飼料((株)クレアCE−2粉餌)〕を与えた。すなわち、対照1群には飲料水として水道水を摂取させ、試験1群〜試験3群には飲料水としてそれぞれ試験飲料1〜3を摂取させた。また、陽性対照群には飲料水として水道水を摂取させ、かつ、腫瘍移植後7日目、11日目及び14日目にレンチナン((株)味の素製)を6.25mg/kg腹腔内投与した。
試験2群及び試験3群については、摂水量が0.2ml/日と、他の群の摂水量4〜6ml/日と比較して著しく少なく体重減少も著しかった。
そのため、腫瘍移植7日目に試験飲料2及び3を水道水に換えた。また、試験2群のマウスを5匹ずつ対照2群及び試験2a群に、試験3群のマウスを5匹ずつ対照3群及び試験3a群に、それぞれ群分けした。対照2群及び対照3群には引き続き対照飼料を給餌した。試験2a群及び試験3a群には対照飼料の代わりにそれぞれ試験飼料2及び3を給餌した。
(4)観察
マウスそけい部皮下に移植した腫瘍の増殖を3日ないし4日おきに4週間まで触知により観察し、また腫瘍直径も測定した。その他、生存日数及び体重も測定した。試験終了時にマウスを屠殺し、腫瘍を取りだし、その湿重量を測定した。
(i)体重
上述のとおり、試験2群及び試験3群では移植後4日目までに急激な体重の減少を示したが、その後試験飲料を水道水に換えるなどした結果、体重は回復し、移植後10日目では対照群との差はほとんど認められなくなった。
(ii)腫瘍増殖
表2に移植後14日目及び28日目の各群の腫瘍直径を平均値±標準偏差で示した。試験1群及び試験3a群で腫瘍直径の抑制が認められた。
図3に各群の移植後28日目の平均腫瘍重量を示した。試験1群及び試験3a群で腫瘍重量の抑制が認められた。
なお、統計学的検定は、Student'sのt検定を用いた。
以上から、アカシア樹皮が、白血病細胞や乳癌の増殖を抑制することが分かり、抗腫瘍活性を有することが認められた。
試験1群及び3a群では、移植後14日目より腫瘍の抑制がみられ、アカシア樹皮の抗腫瘍作用は早期に現れることが認められた。
試験2群及び試験3群で、摂水量の減少が認められたが、これはアカシア樹皮を高濃度に含有する試験飲料の強い苦味によるものと考えられ、試験飲料を水道水に切り換え、試験飼料を代わりに給餌したところ体重の回復が認められたので、この体重減少はアカシア樹皮の毒性によるものではないと考えられた。
OECD(Guidelines for the Testing of Chemicals 401, 1987)に準拠し、マウスを用いた経口急性毒性試験を実施した。
ICR系雌雄マウスについて、雄では7,000mg/kg、雌では6,500mg/kgを上限として、公差500mg/kgで各9用量の検体(上記製造例2のアカシアNo.1熱水抽出物)を雌雄マウスに単回経口投与した。検体は、本発明品を純水に懸濁して用いた。その結果、LD50値は雄では4,468mg/kg、雌では3,594mg/kgであり、いずれも3,000mg/kgの投与量で、死亡例を認めなかった。
上記試験を製造例2のアカシアNo.2〜5熱水抽出物について行って同様の結果を得た。これにより、本発明の組成物は、安全性に優れていることがわかった。
労働省告示第77号(昭和63年9月1日)に準拠し、突然変異誘起性試験を実施した。
Escherichia coli WP2 uvrA株及びSalmonella typhimurium TA株系4菌株を用いて代謝活性化を含む復帰突然変異試験を156〜5,000μg/プレートの用量の検体(製造例2のアカシアNo.1〜5熱水抽出物)で行った。その結果、いずれの菌株についても復帰変異コロニー数の増加が見られなかったことから、製造例2のアカシアNo.1〜5熱水抽出物の突然変異誘起性は陰性であると結論づけられ、安全性に優れていることがわかった。
製造例4のアカシア樹皮熱水抽出物エタノール画分を用い、下記に示す組成にて内服剤を調製した。
製造例4の抽出物画分 1.0(重量%)
乳糖 30.0
コーンスターチ 60.0
結晶セルロース 8.0
ポリビニールピロリドン 1.0
計 100.0
製造例2のアカシア樹皮熱水抽出物を用い、下記に示す組成にてペットフードを調製した。
製造例2の抽出物 1.0(重量%)
オートミール 88.0
でんぷん 5.0
食塩 2.5
全卵 3.0
調味料 0.5
計 100.0
製造例4のアカシア樹皮熱水抽出物エタノール画分を用い、下記に示す組成にて錠剤(菓子)を調製した。
製造例4の抽出物画分 1.0(重量%)
クエン酸 1.0
脱脂粉乳 15.0
ショ糖エステル 1.0
フレーバー 0.5
粉糖 20.0
乳糖 61.5
計 100.0
より詳細には、本発明の組成物は、各種良性腫瘍又は悪性腫瘍の予防及び/又は治療に有用である。
これら組成物は、医薬品、あるいは健康食品、健康補助食品、特定保健用食品、若しくは栄養補助食品などの食品又は動物用飼料に利用できる。
Claims (3)
- 学名:Acacia mearnsii De Wild.から選ばれるアカシア属の樹皮の熱水抽出物を含有することを特徴とする、造血器由来の悪性腫瘍の予防及び/又は治療剤。
- 造血器由来の悪性腫瘍が急性又は慢性の白血病である、請求項1記載の予防及び/又は治療剤。
- アカシア属の樹皮の熱水抽出物がアカシア樹皮ポリフェノールである、請求項1又は2記載の予防及び/又は治療剤。
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