KR101959735B1 - 잇꽃씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암에 대한 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 잇꽃씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암활성 증진용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 시스플라틴(cisplatin)과 병용 투여 시 항암활성을 증진시키고, 시스플라틴의 부작용을 완화하는 잇꽃씨 추출물을 포함하는 항암활성 증진용 조성물, 이를 포함하는 시스플라틴의 항암활성 증진용 건강기능식품 및 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴을 포함하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

Description

잇꽃씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암에 대한 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물{A COMPOSITION FOR ENHANCING ANTI-CANCER EFFECT OF CISPLATIN IN COLORECTAL CANCER COMPRISING SAFFLOWER SEED EXTRACT}

본 발명은 잇꽃씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암활성 증진용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 시스플라틴(cisplatin)과 병용 투여 시 항암활성을 증진시키고, 시스플라틴의 부작용을 완화하는 잇꽃씨 추출물을 포함하는 항암활성 증진용 조성물, 이를 포함하는 시스플라틴의 항암활성 증진용 건강기능식품 및 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴을 포함하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

암을 포함한 각종 성인병은 식생활 습관의 변화와 평균 수명의 연장으로 증가 추세에 있으며, 이에 따른 치료제 개발 연구가 활발히 진행 중이다. 이 중 암은 세계적으로 심장 질환 다음으로 높은 사망률을 가진 질병으로 최근 우리나라의 경우에도 사망률 순위를 구성비로 보면 암으로 인한 사망률이 매우 높다. 이러한 암의 치료에는 외과적 수술방법 이외에도 화학요법, 방사선 요법 등이 널리 사용되어 왔으나, 이런 치료요법은 암세포뿐 만 아니라 정상 세포에도 영향을 미쳐 소화기관과 골수 조직의 손상, 탈모, 면역력 저하 등 여러 부작용을 일으키는 단점이 있다. 또한 암 확진 후 전이가 된 경우가 많아서 이미 암으로 발전한 후에는 각 종 물리적, 화학적 요법을 동원하여도 완전한 치료가 어렵다.

화학적 요법은 악성종양의 치료를 위해 가장 흔히 사용되는 방법으로 주로 항암제를 사용하며, 항암제는 암세포의 DNA에 직접 작용하여 암세포의 복제, 전사, 번역 과정을 차단하거나, 암세포의 분열을 저해함으로써 증식을 억제한다. 현재 암 치료에 사용되는 항암제는 크게 알킬화제, 대사길항제, 항생물질, 유사분열억제제, 호르몬제 및 기타 제제로 분류되며, 대표적으로 독소루비신 (Doxorubicib), 시스플라틴 (Cisplatin), 5-FU, 닥티노마이신(Dactinomycin), 도세탁셀 (docetaxel) 등 현재 약 60여종의 다양한 항암제가 사용되고 있다. 그러나 이러한 항암제들은 암세포에만 선택적으로 작용하는 것이 아니라 정상세포에도 손상을 입히기 때문에 골수 기능 저하, 위장관 점막 손상, 탈모 등 여러 부작용이 나타나는 단점이 있다. 따라서, 인체에 안전하고 부작용이 적은 천연물질을 대상으로 종래의 암 세포 성장억제 물질과 동등하거나 또는 상승 효능을 가지는 새로운 물질을 개발할 필요성이 대두되고 있으며, 암 질환의 치료를 위하여 기존의 항암제의 문제점인 부작용 및 효능 감소의 문제점을 극복하면서도 효과적인 항암 활성을 갖는 새로운 암치료 방법의 개발이 시급한 실정이다.

상기와 같은 항암제들의 암세포 생장억제 효능 증가와 부작용을 감소시키기 위하여 단일 제제의 항암제를 사용하기 보다는 작용기전이 서로 다른 약제를 사용하는 병용요법 또는 천연물을 이용한 부작용이 없는 새로운 항암제를 개발하는 방법 등이 제시되어 연구되고 있다. 이러한 이유로 최근 식이와 관련된 암의 원인 물질을 검색하는 연구 뿐 아니라 식생활에서 섭취하는 식품 중 항암제로 이용하기 위한 물질 탐색 연구도 활발히 진행되고 있다. 특히 우리나라의 경우 200 여종의 한방 생약제가 암 환자에게 처방되고 있음이 통계적으로 보고되었고 (Hong, 1972; Cha, 1977), 여러 종의 한약재 (Hwang 등, 1982)와 마늘 (Son과 Hwang, 1990), 인삼 (Hwang과 Oh, 1984) 및 도라지 (Lee 등, 1998) 등에서 항암 작용이 있는 것으로 보고되고 있다.

대한민국 공개특허 제10-2016-0006814호에는 고련피 노르말헥산 분획물을 포함하는 항암 보조용 약학적 조성물이 개시되었으나, 잇꽃씨 추출물을 이용한 항암 활성 증진용 조성물은 아직까지 보고된 바가 없다.

이에, 본 발명자들은 종래 알려진 항암제들과 병용투여 시 항암 상승효과가 나타나면서 부작용이 거의 없는 천연 항암치료 보조제를 약용작물로부터 탐색하던 중, 잇꽃씨 추출물이 시스플라틴과 병용 투여되는 경우 암세포 증식 억제 활성의 상승효과가 유도됨을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 잇꽃씨 추출물을 이용한 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물 및 대장암 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상술한 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 잇꽃씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 잇꽃씨 추출물은 물, C₁~C₄의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출할 수 있다.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 항암활성 증진용 조성물의 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴은 20:1 내지 40:1의 중량비로 암 환자에게 투여될 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 암 환자는 대장암, 고환암, 방광암, 난소암, 전립선암, 두경부암 및 비소세포성 폐암으로 이루어진 군 중에서 선택한 1종 이상의 암을 앓고 있는 환자일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 항암활성 증진용 조성물은 시스플라틴에 의한 신장 독성을 완화시킬 수 있다.

본 발명은 또한, 전술한 조성물을 유효성분으로 포함하는 항암활성 증진용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명은 또한, 잇꽃씨 추출물 및 시스플라틴을 유효성분으로 포함하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴은 20:1 내지 40:1의 중량비로 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 잇꽃씨 추출물은 시스플라틴과 특정 중량비로 투여하는 경우 암세포를 억제하는 활성이 현저하게 향상되어 암세포 조직의 크기 및 무게를 감소시키는 효능이 있다. 또한, 본 발명의 잇꽃씨 추출물은 시스플라틴 투여에 의해 유발되는 신장 독성과 같은 시스플라틴의 부작용을 완화할 수 있다. 따라서, 본 발명의 잇꽃씨 추출물 및 시스플라틴을 특정 중량비로 혼합한 조성물은 암, 예를 들어 대장암의 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 잇꽃씨 추출물 또는 시스플라틴 처리에 따른 대장암세포 RKO의 세포 형태를 나타낸 것이다.
도 2는 잇꽃씨 추출물 또는 시스플라틴 처리에 따른 대장암세포 RKO의 세포생존률을 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴의 병용 투여에 따른 대장암세포 조직의 크기 감소 효과를 보여주는 사진이다.
도 4는 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴의 병용 투여에 따른 대장암세포 조직의 무게 감소 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 5는 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴의 병용 투여에 따른 혈중 크레아티닌 수치의 감소 효과를 그래프로 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

상술한 바와 같이, 인체에 안전하고 부작용이 적은 천연물질을 대상으로 종래의 암 세포 성장억제 물질과 동등하거나 또는 상승 효능을 가지는 새로운 물질을 개발할 필요성이 대두되고 있으며, 암 질환의 치료를 위하여 기존의 항암제의 문제점인 부작용 및 효능 감소의 문제점을 극복하면서도 효과적인 항암 활성을 갖는 새로운 암치료 방법의 개발이 시급한 실정이다.

이에 본 발명에서는 잇꽃씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물을 제공함으로써 상술한 문제의 해결방안을 모색하였다. 본 발명의 항암활성 증진용 조성물은 시스플라틴과 병용 투여 시, 시스플라틴을 단독으로 투여할 때보다 항암효과가 증진될 뿐만 아니라 신장 독성과 같은 시스플라틴에 의한 부작용을 완화하는 효과가 있어 항암 보조제로서 유용하게 활용될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어는 다음과 같이 정의된다.

용어 “환자”는 인간, 소, 개, 기니아 피그, 토끼, 닭, 곤충 등을 포함하여 치료가 요구되는 임의의 단일 개체를 의미한다. 또한, 임의의 질병 임상 소견을 보이지 않는 임상 연구 시험에 참여한 임의의 대상 또는 역학 연구에 참여한 대상 또는 대조군으로 사용된 대상이 대상에 포함된다.

용어 “약학적 조성물(pharmaceutical composition)”은 본 발명의 20(S)-프로토파낙사디올과 테모졸로마이드에 희석제 또는 담체와 같은 다른 화학 성분들의 혼합물을 의미한다.

용어 “담체(carrier)”는 세포 또는 조직 내로의 화합물의 부가를 용이하게 하는 화합물로 정의된다. 예를 들어, 디메틸술폭사이드(DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기 화합물들의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.

용어 “희석제(diluent)”는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 인간 용액의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다.

용어 “암”“종양”또는 “악성”은 일반적으로 비조절된 세포 성장의 특징을 갖는 포유동물의 생리학적 상태를 나타내거나 설명한다.

용어 “약”은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 25, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

용어 “상승적인(synergistic)”은 각 성분이 병용(조합) 투여될 때 발생되는 효과가, 단일 성분으로서 단독으로 투여될 때 발생되는 효과의 합보다 더 큰 것을 말한다[Chou and Talalay, Adv. Enzyme. Regul., 22:27-55, 1984]. 본 발명의 잇꽃씨 추출물을 유효성분으로 하는 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물은 시스플라틴과 병용 투여함으로써 암 치료효과를 상승시키는 작용을 하고, 본 발명의 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴을 유효성분으로 포함하는 대장암을 치료하기 위한 약학적 조성물 또한 이와 동일한 작용을 한다.

용어 “병용 투여(administered in combination)”는 화합물 또는 성분이 환자에게 함께 투여되는 것을 의미한다. 각 화합물 또는 성분이 함께 투여된다는 것은 원하는 치료 효과를 얻기 위해서, 각 성분을 동일한 시간에 또는 임의의 순서로 또는 상이한 시간에 순차적으로 투여될 수 있음을 의미한다.

용어 “치료”는 이롭거나 바람직한 임상적 결과를 수득하기 위한 접근을 의미한다. 본 발명의 목적을 위해서, 이롭거나 바람직한 임상적 결과는 비제한적으로, 증상의 완화, 질병 범위의 감소, 질병 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음), 질병 진행의 지연 또는 속도의 감소, 질병 상태의 개선 또는 일시적 완화 및 경감 (부분적이거나 전체적으로), 검출가능하거나 또는 검출되지 않거나의 여부를 포함한다. 또한, “치료”는 치료를 받지 않았을 때 예상되는 생존율과 비교하여 생존율을 늘이는 것을 의미할 수도 있다. “치료”는 치료학적 치료 및 예방적 또는 예방조치 방법 모두를 가리킨다. 상기 치료들은 예방되는 장애뿐만 아니라 이미 발생한 장애에 있어서 요구되는 치료를 포함한다. 질병을 “완화(palliating)”하는 것은 치료를 하지 않은 경우와 비교하여, 질병상태의 범위 및/또는 바람직하지 않은 임상적 징후가 감소되거나 및/또는 진행의 시간적 추이(time course)가 늦춰지거나 길어지는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.

본 발명은 잇꽃씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 “잇꽃씨”는 국화과에 속한 잇꽃 (Carthamus tinctorius L.)의 종자를 건조한 것을 의미한다. 잇꽃씨는 한방에서는 혈액순환을 촉진시키고 어혈을 풀어주며 독을 해독하는 효능뿐만 아니라 퇴행성 관절염과 골다공증을 포함한 뼈관절 계통의 질환 치료 효과가 있다.

본 발명의 용어 "추출물"은 상기 잇꽃씨의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농충액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 구체적으로 본 발명의 상기 추출물은 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다.

본 발명의 상기 추출물은, 상기 식물의 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물로부터도 추출이 가능하다.

본 발명의 상기 잇꽃씨의 추출에 있어서, 상기 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.

본 발명에서 상기 잇꽃씨를 추출하는데 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 C₁~C₄의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 및 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 상기 잇꽃씨를 물, C₁~C₄의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서 상기 저급 알코올은 에탄올일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에서는 세척 및 건조로 이물질이 제거된 잇꽃씨를 분쇄하여 70% 에탄올에 넣어 2회 반복하여 열수 추출하였다. 필요한 경우에는 당업계에 공지된 방법에 따라 여과, 농축 및 동결건조 등의 단계를 추가적으로 거쳐 분말로 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 항암활성 증진용 조성물은 시스플라틴과 함께 암 환자에게 병용 투여될 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명의 항암활성 증진용 조성물은 시스플라틴과 동시에 또는 임의의 순서로 또는 상이한 시간에 순차적으로 암 환자에게 투여될 수 있다.

본 발명의 항암활성 증진용 조성물의 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴은 5:1 내지 100:1, 바람직하게는 10:1 내지 50:1, 더욱 바람직하게는 20:1 내지 40:1의 중량비로 투여될 수 있다.

상기 중량비에서 잇꽃씨 추출물의 최대 농도 투여는 정상 세포에 독성을 나타내는 농도 범위 미만이다.

도 3 및 4에서 나타난 바와 같이, 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴을 병용 투여한 경우 각각의 단독 투여군에서 보다 암세포 조직의 크기 및 무게가 현저하게 감소함을 확인하였다. 특히, 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴을 20:1 내지 40:1의 중량비로 투여하는 경우 조합에 따른 항암활성의 상승효과가 최대치로 나타나 암치료제로서의 효과가 매우 뛰어남을 확인하였다.

본 발명에 있어서, 상기 암 환자는 종래 시스플라틴으로 치료하는 암 환자라면 제한은 없으나, 바람직하게는 대장암, 고환암, 방광암, 난소암, 전립선암, 두경부암 및 비소세포성 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택한 1종 이상의 암을 앓고 있는 환자일 수 있다.

도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 잇꽃씨 추출물은 시스플라틴과 병용 투여 시, 시스플라틴에 의해 유발되는 부작용, 특히 신장 독성을 완화하는 효과가 있어 시스플라틴을 장기적으로 투여할 수 밖에 없는 암환자에게 유용하게 활용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 잇꽃씨 추출물을 포함하는 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물은 시스플라틴의 부작용을 완화하기 위한 항암 보조제로서의 역할도 동시에 수행할 수 있다.

본 발명은 또한, 전술한 항암활성 증진용 조성물을 포함하는 시스플라틴의 항암활성 증진용 건강기능식품을 제공한다.

상기 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일 주스 및 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 또한, 건강기능식품은 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 껌류, 아이스크림류, 스프, 음료수, 차, 기능수, 드링크제, 알코올 및 비타민 복합제 중 어느 하나의 형태일 수 있다.

또한, 상기 건강기능식품은 식품첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, “식품첨가물”로서의 적합여부는 다른 규정이 없는 한 식품의약품안정청에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.

상기 “식품첨가물공전”에 수재된 품목으로 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산 칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성품, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고랭색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류 등을 들 수 있다.

이때, 건강기능식품을 제조하는 과정에서 식품에 첨가되는 본 발명에 따른 항암활성 증진용 조성물은 필요에 따라 그 함량을 적절히 가감할 수 있으며, 상기 건강기능식품에 포함된 항암활성 증진용 조성물의 유효용량은 상기 약학조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있고, 유효성분의 혼합양은 예방 또는 치료적 처치 등의 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있다.

본 발명은 잇꽃씨 추출물 및 시스플라틴을 유효성분으로 포함하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴은 20:1 내지 40:1의 중량비로 포함될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물에 함유될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오즈(lactose), 덱스트로즈, 수크로스(sucrose), 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제,감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 무엇보다도, 치료대상 개체의 상태, 치료 대상 암의 특정한 카테고리 또는 종류, 투여 경로, 사용되는 치료제의 속성, 및 상기 특정한 치료제에 대한 종양의 감수성에 의존적일 것이다

상기 약학조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.

특히, 임의의 의학적으로 적합한 방법, 예를 들면, 정상적인 정맥내 투여 또는 동맥내 투여, 뇌척수액으로의 주사에 의해 투여될 수 있다. 일부 경우에, 피내(intradermal) 투여, 강내(intracavity) 투여, 경막내(intrathecal) 투여, 종양 또는 상기 종양에 공급하는 동맥으로의 직접 투여가 유리하다. 종양 또는 그의 일부가 이전에 외과수술에 의해 제거된 경우, 치료제는 직접 주사 또는 미리 이식된 저장부(reservoir)를 통해 종양 부위(및 특히, 종양 부위에 있는 포위된 강(enclosed cavity) 또는 "절제 강(resection cavity)")로 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 체내에서 활성성분의 흡수도, 배설속도, 환자의 연령 및 체중, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증정도 등에 따라 적절히 선택되나, 일반적으로 성인에게 1일 0.01∼250mg/kg, 바람직하게는 0.1∼100mg/kg으로 투여하는 것이 바람직하다. 이렇게 제형화된 단위투여형 제제는 필요에 따라 일정시간 간격으로 수회 투여할 수 있다.

하기의 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기로 하지만, 하기의 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니며, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 해석되어야 할 것이다.

1-1. 잇꽃씨 추출물의 제조

시판되는 잇꽃씨를 구입하여 분쇄한 분쇄물 400 g을 70% 에탄올 600ml에 넣어 환류추출기로 3시간 2회 반복 추출한 후, 와트만(Whatman 46cm) 여과지를 이용하여 불용성물질을 제거하고 냉각 콘덴서가 장착된 농축 장치로 60℃에서 감압 농축하였다. 감압 농축된 추출물의 용매를 완전히 제거하기 위하여 정제수 50 ㎖를 넣어 현탁시킨 후 동결건조기를 이용하여 18.6 g의 추출물을 얻었다(수율: 4.65%).

1-2. 세포의 준비

본 발명의 실시예에서는 대장암세포 Human colorectal carcinoma, RKO(ATCC®CRL2577™)를 사용하였으며, RKO 세포는 10% 열-불활성화 소태아혈청 (FBS, Hyclone, USA) 및 100U/ml 페니실린과 스트렙토마이신(Gibco, USA)을 첨가한 둘베코수정이글배지 (DMEM, Glico, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 구입 후 1주일 정도 계대배양을 하여 안정기의 세포를 혈구계수기(haemacytometer)를 사용하여 세포수를 측정하여 실험에 사용하였다.

1-3. 실험동물의 준비

본 발명의 실시예에서는 중앙실험동물(주)에서 구입한 5주령 된 Balb/c 암컷 누드 마우스를 사용하였다. 22℃에서 명/암 주기를 12시간 간격으로 설정하고, 식이와 물을 자유롭게 공급하여 1 주일간 기본식이로 적응시켰다.

잇꽃씨 추출물의 대장암세포 증식 억제 효과의 확인

2-1. 대장암세포의 세포생존률 확인

플레이트의 세포를 트립신-EDTA로 모아 혈구계수기를 이용하여 세포수를 측정하고 4 ×10⁴ 세포/mL의 농도로 희석하여 96-웰 플레이트에 100 μL씩 분주한 후 하루 동안 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 상기 실시예 1-1에서 제조한 잇꽃씨 추출물(각각 0, 25, 50, 75, 100, 250, 500 및 1000ug/ml)과 항암제 시스플라틴(각각 0, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2 및 5ug/ml)을 각각의 농도로 대장암세포에 처리하고 48시간 경과 후, DOJINDO 회사의 세포 계수 키트 (CCK)-8을 10 μL씩 넣고 37℃에서 3시간 동안 반응시켰다. 이후 마이크로플레이트 판독기 (microplate reader)를 사용하여 480 nm 에서 흡광도를 측정하여 세포생존률을 검사하였다.

그 결과, 도 1(A)에 나타난 바와 같이 잇꽃씨 추출물의 경우 250ug/ml의 투여 농도까지는 농도에 비례하여 대장암 세포 생존율이 감소하였으나, 투여 농도가 250ug/ml를 초과하는 경우 농도 증가에 따른 세포 생존율 감소 효과는 거의 나타나지 않았다. 특히, 100ug/ml의 투여 농도에서 대장암세포 생존률이 약 50%로 감소하였고, 250ug/ml의 투여 농도에서는 약 25%로 감소하였다.

또한, 도 1(B)에 나타난 바와 같이 시스플라틴은 5ug/ml까지 투여 농도 상승에 따라 대장암 세포 생존율이 비례하여 감소하였다.

2-2. 대장암세포의 형태학적 관찰

RKO 세포주를 6-웰 플레이트에 3 ×10⁴ 세포/mL로 깔고, 24시간 후에 잇꽃씨 추출물(각각 0, 50, 100 및 500ug/ml)과 항암제 시스플라틴 (각각 0, 0.5, 1 및 2ug/ml)을 각각 농도별로 처리하고 48시간 후에 세포의 형태를 현미경(200배율, Nikon Eclipse TS100, 일본)으로 확인하였다.

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 아무것도 투여하지 않는 대조군에서는 세포 배양 플레이트에 대장암세포가 암세포 특유의 모양대로 부착되어 있으나, 잇꽃씨 추출물 또는 시스플라틴 투여군에서는 투여 농도에 비례하여 대장암세포가 손상을 입어 원형 모양이 축소되고 플레이트에서 떨어져 나와 부유되면서 사멸되는 전형적인 세포 손상의 소견이 관찰되었다.

잇꽃씨 추출물과 항암제 시스플라틴의 병용투여에 따른 암세포 조직 감소 효과의 확인

3-1. 실험군 설정 및 시료 투여

상기 실시예 1-3의 실험동물을 각 군당 8마리씩, 아무것도 처리하지 않은 정상군, 대장암세포 이식 대조군, 대장암세포 이식 후 잇꽃씨 추출물 100 mg/kg 투여군, 대장암세포 이식 후 잇꽃씨 추출물 200 mg/kg 투여군, 대장암세포 이식 후 시스플라틴 5 mg/kg 투여군, 대장암 세포 이식 후 시스플라틴 5 mg/kg 및 잇꽃씨 추출물 100 mg/kg 투여군, 그리고 대장암세포 이식 후 시스플라틴 5 mg/kg 및 잇꽃씨 추출물 200 mg/kg 투여군으로 총 7군으로 나누었다 (표 1).

투여군	실험시료
	잇꽃씨 추출물	시스플라틴
정상군	-	-
잇꽃씨 투여군	100mg/kg	-
	200mg/kg	-
시스플라틴 투여군	-	5mg/kg
잇꽃씨 및 시스플라틴 투여군	100mg/kg	5mg/kg
	200mg/kg	5mg/kg

3일에 1회씩 총 3회 상기 실시예 1-1에서 제조한 잇꽃씨 추출물을 경구투여 하였고, 시스플라틴은 복강주사로 투여하였다. 물과 사료는 자유롭게 공급하였다. 최종 약물투여로부터 48시간 후 에테르로 마취하여 개복하였으며 심장채혈 및 암세포 조직을 적출하였다.

3-2. 암세포 조직의 형태학적 관찰 및 무게 측정

각 군에서 적출한 암세포 조직을 관찰한 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴을 병용투여한 군에서 크기가 현저하게 감소한 것을 확인하였다. 또한, 적출된 암세포 조직의 무게를 측정한 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴을 병용투여한 군에서 무게가 현저하게 감소한 것을 확인하였다.

대조군과 비교하여 각 군에서 감소된 암조직 무게를 백분율로 나타낸 실측치와 하기 콜비(Colby) 공식에 의한 상승효과 예측치를 표 2에 기재하였다.

E = (A + B) - (A×/ 100)

상기 식에서, A는 활성성분 A의 약효이고, B는 활성성분 B의 약효이며, E는 예측치로 성분A와 성분B (A+B)가 혼합되었을 경우의 예측되는 약효이다.

투여군	암조직 감소율 (실측치)	콜비공식에 의한 상승효과 예측치
잇꽃씨 100mg	40%	-
잇꽃씨 200mg	42%	-
시스플라틴 5mg	51%	-
잇꽃씨 100mg 및 시스플라틴 5mg	67%	70.6%
잇꽃씨 200mg 및 시스플라틴 5mg	73%	71.58%

그 결과, 잇꽃씨 100mg 및 시스플라틴 5mg의 투여군에서는 실측치가 예측치에 매우 근접하였고, 잇꽃씨 200mg 및 시스플라틴 5mg의 투여군에서는 실측치가 예측치를 뛰어넘는 우수한 항암활성 상승효과가 나타남을 확인하였다.

이를 통해, 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴을 20:1 내지 40:1의 중량비로 병용투여하는 경우 상승효과가 최대치로 나타나 암 조직이 현저하게 감소됨을 확인하였다.

잇꽃씨 추출물과 항암제 시스플라틴의 병용투여에 따른 신장 기능 개선 효과의 확인

상기 실시예 3-1의 실험동물로부터 채혈한 혈액에서 신장 기능 지표 항목인 혈중 크레아티닌의 수치를 측정하였다. 구체적으로, 채취한 혈액을 상온에서 1시간 정도 방치한 다음 3,000 rpm으로 원심분리하여 혈청을 분리하고 상용화된 키트 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka, Japan)를 이용하여 측정하였다.

그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이 시스플라틴에 의해 증가된 혈중 크레아티닌 수치를 잇꽃씨 추출물이 유의적으로 감소시킨다는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과를 통해, 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴을 20:1 내지 40:1의 중량비로 병용투여하는 경우 우수한 항암 상승효과가 나타날 뿐만 아니라 잇꽃씨 추출물이 시스플라틴에 의한 신장 독성을 완화하는 효과를 나타내어 시스플라틴의 부작용을 완화하는데 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

제제예

< 제제예 1> 항암활성 증진용 조성물의 산제 제조

잇꽃씨 추출물 9.21mg을 유당 100 mg 및 탈크 10 mg와 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<제제예 2> 항암활성 증진용 조성물의 정제의 제조

잇꽃씨 추출물 9.21mg을 옥수수전분 100mg, 유당 100mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg과 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<제제예 3> 항암활성 증진용 조성물의 캡슐제의 제조

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 잇꽃씨 추출물 9.21 mg을 옥수수전분 100mg, 유당 100mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg과 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<제제예 4> 항암활성 증진용 조성물의 주사제의 제조

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플(2ml)당 잇꽃씨 추출물 9.21mg에 주사용 멸균 증류수 적량 및 pH 조절제 적량을 포함하여 제조하였다.

<제제예 5> 항암활성 증진용 조성물의 액제의 제조

통상의 액제의 제조방법에 따라 적량의 정제수에 잇꽃씨 추출물 9.21 mg, 이성화당 10 g 및 만니톨 5 g을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 후 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.

<제제예 6> 대장암 치료용 약학적 조성물의 산제 제조

잇꽃씨 추출물 400 mg을 시스플라틴 10mg, 유당 100 mg 및 탈크 10 mg와 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<제제예 7> 대장암 치료용 약학적 조성물의 정제의 제조

잇꽃씨 추출물 400 mg을 시스플라틴 10mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg과 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<제제예 8> 대장암 치료용 약학적 조성물의 캡슐제의 제조

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 잇꽃씨 추출물 400 mg을 시스플라틴 10mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg과 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

이하, 본 발명의 잇꽃씨 추출물을 포함하는 건강기능식품의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

<제제예 9> 건강기능식품의 제조

잇꽃씨 추출물 9.21mg에 비타민 혼합물 적량(비타민 A 아세테이트 70μg, 비타민 E 1.0mg, 비타민 B1 0.13mg, 비타민 B2 0.15mg, 비타민 B6 0.5mg, 비타민 B12 0.2㎍, 비타민 C 10mg, 비오틴 10g , 니코틴산아미드 1.7mg, 엽산 50μg, 판토텐산 칼슘 0.5mg) 및 무기질 혼합물 적량(황산제1철 1.75mg, 산화아연 0.82mg, 탄산마그네슘 25.3mg, 제1인산칼륨 15mg, 제2인산칼슘 55mg, 구연산칼륨 90mg, 탄산칼슘 100mg, 염화마그네슘 24.8mg)을 혼합한 다음 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다.

Claims (8)

1. 잇꽃씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 RKO 세포로 야기되는 대장암에 대한 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물로,
   상기 잇꽃씨 추출물과 시스플라틴은 20:1 초과 40:1 이하의 중량비로 투여되는, RKO 세포로 야기되는 대장암에 대한 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 잇꽃씨 추출물은 물, C₁~C₄의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는, RKO 세포로 야기되는 대장암에 대한 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물.
3. 삭제
4. 삭제
5. 제1항에 있어서, 시스플라틴에 의한 신장 독성을 완화시키는 것을 특징으로 하는, RKO 세포로 야기되는 대장암에 대한 시스플라틴의 항암활성 증진용 조성물.
6. 제1항, 제2항 및 제5항 중 어느 한 항의 조성물을 유효성분으로 포함하는, RKO 세포로 야기되는 대장암에 대한 시스플라틴의 항암활성 증진용 건강기능식품.
7. 20:1 초과 40:1 이하의 중량비의 잇꽃씨 추출물 및 시스플라틴을 유효성분으로 포함하는, RKO 세포로 야기되는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
8. 삭제

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