JP4999158B2 - 炭疽菌(bachillusanthracis)の感染防御抗原に対するヒトモノクローナル抗体 - Google Patents
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Description
炭疽菌(Bacillus anthracis)は主に家畜および野生動物、特にウシ、ヒツジ、ウマ、ラバおよびヤギのような草食動物の疾患である。ヒトにおける自然な炭疽感染は稀であるが(疾患のある動物との接触を介する感染の危険性は、約1/100,000)、バイオテロの正に現実的脅威を引き起こす。このバクテリアは耐熱性の頑丈な胞子を形成し、そして粗雑な条件下で何十年も生存することができる。皮膚炭疽は、より迅速に処置することができるが、肺炭疽の多くは2〜4日の致死率が80%より高い突然の破滅的疾病をもたらす。胞子の安定性により疾患が容易に広がり得ることは、2002年に米国で起こった5例の死亡により明らかである。炭疽菌の胞子がテロの行為により広がれば、大勢の人が治療を求め、または死ぬまでこの出来事は発見することができないだろう。抗生物質およびワクチンを含む現在の治療では、これら大多数の犠牲者を助けることはできない。
本発明は、炭疽菌(Bacillus anthracis)(炭疽:anthrax)の感染防御抗原に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体、これにより炭疽菌の生物学的活性を阻害すること、ならびに誘導体(例えば免疫複合体(immunoconjugate)、二重特異性分子および単鎖フラグメント(ScFv)およびそのような抗
体を単独で、または追加の治療薬と組み合わせて含有する他の治療的組成物を提供する。また本発明の抗体を使用して炭疽感染を処置し、そして防止するための方法および組成物も提供する。
(1)中和活性のためにFc受容体への結合を要し;
(2)PA83よりもPA63に高い親和性を現し;
(3)(a)標準的ELISAに従い1μg/mlではPA83に結合せず、0.2以下のOD405nmであり、
(b)競合的結合アッセイで炭疽致死因子または浮腫因子が感染防御抗原へ結合することを遮断しない、
から選択される1もしくは複数の特性を現し、
(4)PA63に対する結合において、マウスIG3、マウス2D5およびマウス14B7から選択される抗−PA抗体と競合しない、
の1もしくは複数を有する。
軽鎖可変領域が、配列番号4、6、10、14および18、および配列番号4、6、10、14および18に少なくとも80%相同な配列から選択されるアミノ酸配列を含む。
物を提供する。特定の態様では、トランスジェニック非ヒト動物はトランスジェニックマウスである(本明細書では”HuMAb”マウス(商標)とも呼ぶ)。
(1)中和活性のためにFc受容体への結合を要し;
(2)PA83よりもPA63に高い親和性を現し;
(3)(a)標準的ELISAに従い1μg/mlではPA83に結合せず、0.2以下のOD405nmであり、
(b)競合的結合アッセイで炭疽致死因子または浮腫因子が感染防御抗原へ結合することを遮断しない(Little,1996を参照にされたい)、
から選択される1もしくは複数の特性を現し、
(4)PA63に対する結合において、0.1mg/kg〜100mg/kgの投薬用量でマウスIG3、マウス2D5およびマウス14B7から選択される抗−PA抗体と競合しない、
特徴を有する、炭疽の感染防御抗原に対する中和抗体を投与することにより、炭疽の処置が必要な患者を処置し、または防止する方法を提供する。本発明の別の特定の態様では、炭疽に感染し、そして炭疽疾患の兆候および/または症状を現している患者を本発明の抗体により処置することができる。
発明の詳細な説明
本発明は、炭疽菌(B.anthracis)を処置および診断するための新規な抗−PA抗体、ならびに改善された抗体に基づく治療を提供する。本発明の方法は炭疽の感染防御抗原に結合し、そして炭疽の感染防御抗原、浮腫因子および/または致死因子の機能を阻害する単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部分を使用し、この方法はヒトの治療に有用である。
の処置または防止に有用である。
et al.,Gene 69:287−300(1988)を参照にされたい]。用語「感染防御抗原」および「PA」は、この用語が1つの形またはその他を具体的に限定しない限り、炭疽の感染防御抗原の83kD(PA83)および63kD(AP63)の両方を指す。
CDR)と呼ばれる超可変領域と、その中に散在するフレームワーク領域(FR)と呼ばれるより保存された領域とに分けることができる。VHとVLはそれぞれ3つのCDRと4つのFRからなり、アミノ末端からカルボキシ末端に向けてFR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4の順序に並んでいる。重鎖および軽鎖の可変領域には、抗原と相互作用する結合領域が含まれる。抗体の定常領域は、免疫グロブリンと、宿主組織または免疫系の各種細胞(たとえばエフェクター細胞)および古典的補体系の第一の構成要素(Clq)を含む因子の結合を媒介することができる。
めに、これらのドメインは別の鎖の相補領域と対になり、そして2つの抗原結合部位を作り出している(たとえばHolliger,P.,et al.(1993) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444−6448; Poljak,R.J.,et al.(1994) Structure 2:1121−1123を参照)にされたい)。本明細書で使用する「ヘテロ抗体」は、一緒に連結された少なくとも2つが異なる特異性を有する2以上の抗体、抗体結合フラグメント(例えばFab)、それらの誘導体または抗原結合領域を指す。これら異なる特異性には別の炭疽抗原に対する結合特異性を含む。
列を意味する。「スイッチドナー」配列は典型的にはμスイッチ領域で、スイッチ組換えの間に消去される構成領域(construct region)の5’(すなわち上流)側であろう。「スイッチアクセプター」領域は、消去される構成領域と置換定常領域(たとえばγ、εなど)の間にある。組換えが常に生じる特異的な部位はないため、最終遺伝子配列は構成から予測することは一般にはできないだろう。
ムを用いて、PAM120加重残基表、12のギャップ長ペナルティ、および4のギャップペナルティを用いても定めることができる。さらに、2つのアミノ酸残基間の同一性の割合は、GCGソフトウェアパッケージ(http://www.gcg.comで入手可能)のGAPプログラムに組み込まれているNeedleman and Wunsch(J.Mol.Biol.48:444−453(1970))のアルゴリズムを用いて、Blossum62マトリックスまたはPAM250マトリックスのいずれかを用い、16、14、12、10、8、6、もしくは4のギャップ加重、および1、2、3、4、5もしくは6の長さ加重を用いて定めることもできる。
きることを示す。
I.炭疽菌(B.anthracis)の感染防御抗原に対するヒト抗体の生産
本発明のモノクローナル抗体(MAb)は、たとえばKohler and Milstein(1975)Nature 256:495に記載の標準体細胞ハイブリダイゼーション技術など、従来のモノクローナル抗体の方法を含む各種技術によって生産することができる。体細胞ハイブリダイゼーション手法が好ましいが、原理的にはモノクローナル抗体を生産するためのその他の技術、例えばBリンパ球のウイルス性または発癌性トランスフォーメーションを用いることもできる。
g, N.et al.(1994),同上;Lonberg,N.(1994)Handbook of Experimental Pharmacology 113:49−101;Lonberg,N.and Huszar,D.(1995) Intern.Rev.Immunol.Vol.13:65−93、およびHarding,F.and Lonberg,N.(1995)Ann.N.Y.Acad.Sci 764:536−546)。HuMabマウスの調製は、後述の第II章および引用により全部、その全内容を本明細書に編入するTaylor,L.et al.(1992) Nucleic Acids Research 20:6287−6295;Chen,J.et al.(1993) International Immunology 5:647−656;Tuaillon et al.(1993) Proc.Natl.Acad.Sci USA 90:3720−3724;Choi et al.(1993) Nature Genetics 4:117−123;Chen,J.et al.(1993) EMBO J.12:821−830;Tuaillon et al.(1994) J.Immunol.152:2912−2920;Lonberg et al.,(1994) Nature 368(6474):856−859;Lonberg,N.(1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49−101;Taylor,L.et
al.(1994) International Immunology 6:579−591;Lonberg,N.and Huszar,D.(1995) Intern.Rev.Immunol.Vol.13:65−93;Harding,F.and Lonberg,N.(1995) Ann.N.Y.Acad.Sci 764:536−546;Fishwild,D.et al.(1996) Nature Biotechnology 14:845−851に記載されている。さらに引用により全部、その全内容を本明細書に編入するLonberg and Kay、およびジェンファーム インターナショナル(GenPharm International)への米国特許第5,545,806号、5,569,825号、5,625,126号、5,633,425号、5,789,650号、5,877,397号、5,661,016号、5,814,318号、5,874,299号、および5,770,429号明細書、Surani et al.への米国特許第5,545,807号明細書、1998年6月11日公開の国際公開第98/24884号パンフレット、1994年11月10日公開の国際公開第94/25585号パンフレット、1993年6月24日公開の国際公開第93/1227号パンフレット、1992年12月23日公開の国際公開第92/22645号パンフレット、1992年3月19日公開の国際公開第92/03918号をパンフレットを参照にされたい。あるいは実施例1、小章IIに記載のHCO12トランスジェニックマウスを用いてヒト抗−PA抗体を作製することができる。
HuMab免疫感作
感染防御抗原に対する完全なヒトモノクローナル抗体を作製するために、HuMabマウスをLonberg,N.et al.(1994) Nature 368(6474):856−859;Fishwild,D.et al.(1996) Nature Biotechnology 14:845−851および国際公開第98/24884号パンフレットに記載されるように、炭疽PA83またはPA63または両方および/または感染防御抗原発現細胞の精製もしくは濃縮調製物で免疫感作することができる。好ましくは、マウスに最初の注射を行うのは6〜16週齢である。例えば感染防御抗原の精製または濃縮調製物(5〜20μg)(米国陸軍の感染症研究所のStephen Littleによる好意により得た)を用いてHuMabマウスの腹腔内において免疫することができる。マウスは免疫応答を促進するために、感染防御抗原を発現するトランスフェクト細胞で免疫感作することもできる。
週に不完全フロイントアジュバントに入れた抗原で腹腔内に免疫感作する(最高で合計6回)場合に、最良の応答が得られることが示されている。免疫応答は、後眼窩からの採血によって得られた血漿サンプルを用いた免疫感作プロトコールの経過について監視することができる。血漿は、ELISAによってスクリーニングすることができ(後述)、そして抗−PAヒト免疫グロブリンの力価が十分なマウスを融合に用いることができる。マウスは屠殺および脾臓の摘出の3日前に静脈内に抗原を追加免疫することができる。各抗原につき2〜3回の融合を行う必要があるかもしれない。各抗原を数匹のマウスに免疫する。例えばHC07およびHC012系のHuMabマウス、合計12匹を免疫感作することができる。
感染防御抗原に対するヒトモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマの作製
マウス脾細胞は標準プロトコールに基づき単離して、PEGとともにマウスミエローマ細胞株と融合することができる。次いで得られたハイブリドーマを、抗原特異性抗体の産生についてスクリーニングする。例えば免疫感作マウスから得られた脾リンパ細胞の単一細胞懸濁液を、50%PEGを用いて、P3X63−Ag8.653非分泌マウスミエローマ細胞(ATCC、CRL1580)の数の1/6と融合する。平底マイクロタイタープレートに約2 x 105個の細胞をプレーティングし、20% ウシクローン血清、18% ”653”調整培地、5% origen(IGEN社)、4mM L−グルタミン、 1mM L−グルタミン、1mM ピルビン酸ナトリウム、5mM HEPES、0.055mM 2−メルカプトエタノール、50ユニット/ml ペニシリン、50mg/ml ストレプトマイシン、50mg/ml ゲンタマイシン、および1X HAT(シグマ社(sigma):融合から24時間後にHATを加える)を含有する選択培地中で2週間インキュベーションする。2週間後、HATをHTに交換した培地中で細胞を培養する。次いで各ウェルをヒト抗−PAモノクローナルIgMおよびIgG抗体について、ELISAでスクリーニングする。大規模なハイブリドーマ成長が生じたら、通常10〜14日後に培地を観察する。ハイブリドーマを分泌する抗体を再びプレーティングし、再スクリーニングし、そしてヒトIgGについてまだ陽性であれば、抗−PAモノクローナル抗体を限界希釈によって少なくとも2倍にサブクローニングすることができる。その後、安定したサブクローンをインビトロで培養し、特性決定のための抗体を組織培養培地中で少量産生する。
炭疽の感染防御抗原に対するヒトモノクローナル抗体を生産するトランスフェクトーマ(transfectoma)の生成
本発明のヒト抗体は、当該技術分野で周知であるように(例えばMorrison,S、(1985) Science 229:1202)、例えば組換えDNA技術および遺伝子トランスフェクション法の組み合わせを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマ中に生産させることができる。
in Enzymology 185、アカデッミック出版、サンディエゴ、カリフォルニア州(1990)に記載されている。当業者は、調節配列の選択を含め発現ベクターの設計が形質転換させる宿主細胞の選択、所望するタンパク質の発現レベル等のような因子に依存し得ると考えるだろう。哺乳動物の宿主細胞の発現に好適な調節配列には、サイトメガロウイルス(CMV)、シンドビスウイルス40(SV40)、アデノウイルス、(例えばアデノウイルス主要後期プロモーター(AdMLP))およびポリオーマに由来するプロモーターおよび/またはエンハンサーのような哺乳動物細胞中で高レベルのタンパク質発現を支配するウイルス要素を含む。あるいはユビキチンプロモーターまたはβ−グロビンプロモーターのような非ウイルス性の調節配列を使用してもよい。
c.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216−4220に記載されたdhfr−CHO細胞を含み、例えばR.J.Kaufman and P.A.Sharp(1982)Mol.Biol.159:601−621に記載されているようなDHFR選択可能マーカーと使用する)、NS0ミエローマ細胞、COS細胞およびSP2細胞を含む。特にNSOミエローマ細胞と使用するために、別の好適な発現系は国際公開第87/04462号、同第89/01036号パンフレットおよび欧州特許第338,841号明細書に開示されているGS遺伝子発現系である。抗体遺伝子をコードするGS発現系である。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物の宿主細胞に導入される場合、抗体は宿主細胞中での抗体の発現、さらに好ましくは宿主細胞が増殖する培養基への抗体の分泌が可能となる十分な期間、宿主細胞を培養することにより生産される。抗体は標準的なタンパク質精製法を使用して培養基から回収することができる。
完全な抗体を発現するための部分的抗体配列の使用
抗体は、主に6つの重鎖および軽鎖相補性決定領域(CDR)に位置するアミノ酸残基を介して標的抗原と相互作用する。このため、CDR内のアミノ酸配列は、CDRの外の配列よりも、個々の抗体間で多様性に富んでいる。CDR配列はほとんどの抗体−抗原相互作用を引き起こしているため、天然に存在する特異的な抗体の特性を模倣する組換え抗体は、異なる特性を有する異なる抗体のフレームワーク配列に移植した天然に存在する特異的抗体から得たCDR配列を含む発現ベクターを構築することによって発現させることが可能である(例えばRiechmann,L.et al.,1998,Nature
332:323−327;Jones,P.et al.,1986,Nature 321:522−525;およびQueen,C.et al.,1989,Proc.Natl.Acad.See.U.S.A.86:10029−10033を参照にされたい)。このようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む公的なDNAデータベースから得ることができる。これらの生殖系列配列は、B細胞成熟(maturation)中にV(D)J結合によって形成された、完全に集成された可変遺伝子を含まないため、成熟した抗体遺伝子配列とは異なるだろう。生殖系列遺伝子配列は、可変領域全体に均一に、個々の高親和性二次レパートリ抗体の配列とも異なるだろう。例えば体細胞突然変異はフレームームワーク領域のアミノ末端部分では比較的頻度が低い。たとえば、体細胞突然変異はフレームームワーク領域1のアミノ末端部分、およびフレームワーク領域4のカルボキシ末端では比較的頻度が低い。さらに、多くの体細胞突然変異は抗体の結合特性を有意に変化させない。このため、もとの抗体と同様の結合特性を有する完全な組換え抗体を再生するために、特定の抗体のDNA配列全体を得る必要はない(すべての目的のために引用により本明細書に編入する、1999年3月12日出願のPCT/US99/05535号明細書を参照にされたい)。CDR領域全体の部分的な重鎖および軽鎖は、典型的にはこの目的には十分である。この部分的配列を用いて、どの生殖系列可変および結合遺伝子セグメントが組換え抗体可変遺伝子に寄与したかを決定する。その後、生殖系列配列を用いて、可変領域の欠損部分を埋める。重鎖および軽鎖リーダー配列はタンパク質成熟の間に切断され、最終的な抗体の特性には寄与しない。このため、発現構築物に相当する生殖系列リーダー配列を用いる必要がある。欠損配列を付け加えるために、クローン化したcDNA配列を、ライゲーションまたはPCR増幅によって合成オリゴヌクレオチドと組み合わせることができる。あるいは可変領域全体を、短く、重複しているオリゴヌクレオチドのセットとして合成し、PCR増幅で組み合わせて全体を合成した可変領域クローンを作製することもできる。このプロセスには、特定の制限酵素認識部位の消去もしくは包含、または特定のコドンの最適化などの利点がある。
従って組み入れられている(Kozak,1991,J.Biol.Chem.266;19867−19870)。およびHindIII部位が翻訳開始部位の上流に作られている。
(1)ヒト重鎖フレームワーク領域およびヒト重鎖CDR(ここで少なくとも1つのヒト重鎖CDRが図1、4、6または8に示したCDRのアミノ酸配列(配列番号20、22、24、38、40、42、50、52、54、62、64および66)から選択されるアミノ酸配列を含んでなる)、および(2)ヒト軽鎖フレームワーク領域およびヒト軽鎖CDR(少なくとも1つの軽鎖CDRが図2、3、5、7または9に示したCDRのアミノ酸配列(配列番号26、28、30、32、34、36、44、46、48、56、58、60、68、70および72)から選択されたアミノ酸配列を含んでなる)、
を含んでなる抗体を調製することを含んでなる抗−PA抗体を調製する方法を提供し、ここで抗体は感染防御抗原に結合する能力を保持する。
ヒトモノクローナル抗体の感染防御抗原への結合の特性決定
本発明のヒトモノクローナル抗−PA抗体の結合を特徴づけるために、免疫感作したマウスから採取した血清を例えばELISAなどによって試験することができる。ELISAプロトコルの一般的な(しかしこれに限定されない)例では、マイクロタイタープレートを20μg/mlの精製した感染防御抗原のPBS溶液でコートし、次いで5%ウシ血清アルブミンのPBS溶液でブロックする。抗−PA抗原を含有する血漿の希釈物を各ウエルに加え、37℃で1〜2時間インキュベートする。プレートをPBS/Tweenで洗浄し、次いでアルカリホスファターゼに結合したヤギ抗ヒトIgG Fc特異性ポリクロナール試薬とともに、37℃で1時間インキュベートする。プレートを洗浄後、pNPP基質(1mg/ml)で発色し、OD405−650で解析する。好ましくは、最高の力価を生じるマウスを融合に使用するであろう。
することができる。バッファー溶液をPBSに交換することができ、濃度を吸光係数1.43を用いてOD280によって測定することができる。モノクローナル抗体をアリコートに分割して、−80℃で保存することができる。
II.ヒトモノクローナル抗−PA抗体を生産するトランスジェニック非ヒト動物の作出
さらに別の観点では、本発明は感染防御抗原に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を発現することができる、トランスジェニックまたはトランスクロモゾーマル(trnschromosomal)マウスのようなトランスジェニックおよびトランスクロモゾーマル非ヒト動物を提供する。特定の態様では、本発明はマウスが炭疽の感染防御抗原および/または感染防御抗原を発現する細胞で免疫感作された時に、ヒト抗−PA抗体を生産するように、ヒト重鎖導入遺伝子を含んでなるゲノムを有するトランスジェニックまたはトランスクロモゾーマルマウスを提供する。ヒト重鎖導入遺伝子は、トランスジェニック、例えばHuMAb Mouse(商標)の場合のように、本明細書に詳細に記載し、そして例示するようにマウスの染色体DNAに組み込まれることができる。あるいはヒト重鎖導入遺伝子は、国際公開第02/43478号パンフレットに記載されているように、トランスクロモゾーマル(例えばKM−Mouse(商標))の場合のように、染色体外に維持され得る。そのようなトランスジェニックおよびトランスクロモゾーマル動物は、V−D−J組換えおよびアイソタイプスイッチングを経て、感染防御抗原に対するヒトモノクローナル抗体の複数のアイソタイプ(例えばIgG、IgA、および/またはIgE)を生産することができる。イソタイプスイッチングは、例えば古典的または非古典的アイソタイプスイッチングにより生じることができる。
び(7)免疫応答中の導入遺伝子抗体座の支配、のうちの1つ以上を生じるように構築する。
ン重鎖に組み込むことを支持する。
リの免疫グロブリンの生産を現すだろう。したがって例えば内因性Ig遺伝子が不活化されている態様では、総免疫グロブリンレベルが血清中約0.1〜10mg/mlであり、好ましくは0.5〜5mg/mlであり、理想的には少なくとも約1.0mg/mlである。IgMからIgGへのスイッチを行うことができる導入遺伝子がトランスジェニックマウスに導入された場合、成熟マウスにおける血清IgG対IgMの比は、好ましくは約10:1である。IgG対IgMの比は、未成熟マウスにおいてははるかに小さいだろう。一般に、約10%超、好ましくは40〜80%の脾およびリンパ節B細胞は、ヒトIgGタンパク質のみを発現する。
CDR内もしくは近傍、または体細胞突然変異がクラスターを形成することが知られている領域中においてクラスターを形成するだろう。
(1)ヒトVL遺伝子セグメントおよびヒトJLセグメントによりコードされるポリペプチド配列と実質的に同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、および(2)ヒトCL遺伝子セグメントによりコードされるポリペプチド配列と実質的に同一のポリペプチド配列を有する軽鎖定常領域、からなるヒト配列軽鎖;ならびに
(1)ヒトVH遺伝子セグメント、場合によりそのD領域、およびヒトJHセグメントによりコードされるポリペプチド配列と実質的に同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および(2)ヒトCH遺伝子セグメントによりコードされるポリペプチド配列と実質的に同一のポリペプチド配列を有する定常領域、からなるヒト配列重鎖、
を含んでなる。
I.再構成していない重鎖および再構成した軽鎖免疫グロブリン導入遺伝子と含むトランスジェニック動物;
II.再構成していない重鎖および再構成していない軽鎖免疫グロブリン導入遺伝子を含むトランスジェニック動物;
III.再構成した重鎖および再構成していない軽鎖免疫グロブリン導入遺伝子を含むトランスジェニック動物;ならびに
IV.再構成した重鎖および再構成した軽鎖免疫グロブリン導入遺伝子を含むトランスジェニック動物。
III.感染防御抗原に結合する二重特異性/多重特異性分子
本発明のさらに別の実施態様では、感染防御抗原に対するヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合部分は、誘導体化されるか、たとえば別のペプチドまたはタンパク質(たとえばFab’フラグメント)などの別の機能的な分子へ結合し、複数の結合部位または標的エピトープに結合する二重特異性または多重特異性分子を生じる。例えば本発明の抗体または抗原結合部分は、別の抗体、抗体断片、ペプチドまたは結合模倣物のような1もしくは複数の別の結合分子に機能的に結合することができる(たとえば化学カップリング、遺伝子融合、または非共有会合などにより)。
Cancer Inst.80:1553−1559参照を参照にされたい)。
4:214に提供されている。それらの方法には少なくとも1つの重鎖または軽鎖に由来する免疫グロブリンFv可変領域の全体または一部をコードする核酸配列を分離、操作、および発現する工程を含む。そのような核酸の供給源は当業者に周知であり、例えば抗GPIIbIIIa抗体生産ハイブリドーマである7E3から得ることもできる。次にキメラ抗体またはそのフラグメントをコードする組換えDNAを、適切な発現ベクターにクローン化することができる。あるいは適切なヒト化抗体をCDR置換によって生成することもできる。米国特許第5,225,539号明細書、Jones et al.1986 Nature 321:552−525;Verhoeyan et al.1988 Science 239:1534、およびBeidler et al.1988
J. Immunol.141:4053−4060。
された英国特許出願第2188638A号明細書)、その内容は引用することにより本明細書に編入する。ヒトCDRは、ヒト単核食細胞に関する免疫グロブリンGのFc受容体に対するヒト化抗体(Humanized Antibodies to Fc Receptors for Immunoglobulin G on Human Mononuclear Phagocytes)という表題の国際公開第94/10332号パンフレットに記載のとおり、オリゴヌクレオチド位置指定突然変異誘発を用いて非ヒトCDRと交換することができる。
V.製薬学的組成物
別の観点では、本発明は例えば製薬学的に許容され得る担体とともに配合したヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分(1もしくは複数)を単独で、または組み合わせて含有する製薬学的組成物などの組成物を提供する。すなわち1つの態様では、組成物には本発明の複数(たとえば2つ以上)の単離されたヒト抗−PA抗体または抗原結合部分の組み合わせを含む。好ましくは組成物の抗体またはその抗原結合部分のそれぞれは、感染防御抗原の予め選択された別のエピトープに結合する。
などの注射用有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティング材料の使用により、分散液の場合には必要な粒子サイズの維持により、および表面活性剤の使用により維持することができる。
して医薬品を投与するための治療用デバイスを開示する米国特許第4,486,194号明細書;正確な注入速度で医薬品を送達するための医薬品注入ポンプを開示する米国特許第4,447,233号明細書;連続薬物送達のための可変フロー埋込可能注入装置を開示する米国特許第4,447,224号明細書;マルチチャンバー区画を有する浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第4,439,196号明細書;浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第4,475,196号明細書が含まれる。これらの特許は引用により本明細書に編入する。このようなインプラント、送達システムおよびモジュールは、他にも数多く当該技術分野で知られている。
et al.(1995)FEBS Lett.357:140;M.Owais et al.(1995)Antimicrob.Agents Chemother.39:180);界面活性プロテインA受容体(Briscoe et al.(1995) Am.J.Physiol.1233:134)、本発明の製剤を含んでもよい異なる種、ならびに本発明の分子の成分;p120(Schreier et al.(1994)J.Biol.Chem.269:9090)を含む。K.Keinanen;M.L.Laukkanen(1994)FEBS Lett.346:123;J.J.Killion;I.J. Fidler(1994)Immunomethods 4:273も参照のこと。本発明の1つの態様では、本発明の治療用化合物をリポソーム中に調製し、さらに好ましい態様では、リポソームはターゲッティング部分を含む。最も好ましい態様では、リポソーム中の治療用化合物は、所望する領域、例えば炎症または感染部位に最も近い部位にボーラス注射することにより送達される。組成物は注射器に入れやすいようにある程度流動的でなければならない。組成物は製造および保存状況下において安定でなければならず、そして細菌および真菌などの微生物の夾雑物の活動が防止されなければならない。
は個体の症状の重篤度、および選択した特定の組成物もしくは投与経路などの因子に基づいて、このような量を決定することができる。
VI.本発明の用途および方法
本発明の抗体、抗体組成物および方法には、炭疽感染の診断、防止および処置が関与するインビトロおよびインビボでの診断用および治療用の多数の用途がある。例えばこれらの抗体は炭疽感染を処置および/または防止するためにヒト個体に投与することができる。加えて、個体の炭疽感染を診断するために、血液または組織サンプルを個体から採取し、そしてサンプル中の炭疽PAの検出が可能となる条件下で本発明の抗体と接触させることができる。本明細書で使用する「個体」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物を含むことを意図する。
満、またはさらに1〜3mg/kgから利益を得ることができる。したがって炭疽ワクチンを受けている患者では、ワクチンから患者自身の抗体の適切な血漿レベルになる前に、炭疽感染に対して即時の防御を提供するために治療用抗体を提供することが望ましく、熟練者は例えば12〜50mg/kgの即時投薬用量範囲を使用することができる。
り、他に優れた毒素中和活性を示すHuMAb 5E8のような多くの抗体が、さらなる開発から除外される。本発明者は、PAに対する結合親和性が有用な基準ではないことを見いだし、故に本発明の選択法から省略する。記載する特性を有する抗体を得るために、上記の2つの工程に加えてさらなる選択工程を実施することができる。
I.トランスジェニック(Cmu標的)マウスの作出
CMDターゲッティングベクターの構築
プラスミドpICEmuは、Balb/Cゲノムラムダファージライブラリから得た、mu遺伝子全般に広がるマウスIg重鎖座位のEcoRI/XhoIフラグメントを含有する(Marcu et al.Cell 22:187,1980)。このゲノムフラグメントをプラスミドpICEMI9HのXhoI/EcoRI部位にサブクローニングした(Marsh et al;Gene 32,481−485,1984)。pICEmuに含まれる重鎖配列は、muイントロンエンハンサーの3’側にちょうど位置するEcoRI部位の下流から、mu遺伝子の最後の膜貫通エキソンの約1kb下流に位置するXhoI部位まで及ぶが、muスイッチ反復領域のほとんどが大腸菌(E.coli)の継代によりすでに消えた。
Biochemical Genetics 28:299−308)。このカセットはプラスミドpKJ1から得たもので(Tybulewicz et al.(1991) Cell 65:1153−1163に記載)、ここからneoカセットをEcoRI/HindIIIフラグメントとして切り出し、そしてEcoRI/HindIII消化pGEM−7Zf(+)にサブクローニングしてpGEM−7(KJ1)を生成した。neoカセットは、EcoRI/SalI消化によりpGEM−7(KJ1)から切り出し、末端を平滑化し、そしてゲノムCmu配列とは反対側に位置するプラスミドpTAR1のSmaI部位にサブクローニングした。得られたプラスミドをNotIで直線化し、そして単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(tk)カセットを挿入して、Mansour et al.(1988) Nature 336:348−352に記載されるように相同性組換え体を有するESクローンを濃縮した。このカセットは、Tybulewicz et al.(1991) Cell 65:1153−1163に記載されているように、マウスpgkプロモーターおよびポリアデニル化部位によって囲まれたtk遺伝子のコード配列からなる。得られたCMD標的ベクターは、重鎖座位と相同な合計約5.3kbを含み、そして突然変異mu遺伝子を生成するように設計されており、この遺伝子に、第1のCmuエキソンの固有のSmaI部位にあるneo発現カセットを挿入した。ターゲッティングベクターをPvuIで直線化し、これをプラスミド配列内で切断した後、ES細胞に電気穿孔した。
標的ES細胞の作製および分析
AB−1 ES 細胞(McMahon,A.P.and Bradley,A.,(1990) Cell 62:1073−1085)は、基本的に(Robertson,E.J.(1987) in Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells:a Practical Approach(E.J.Robertson,ed.)オックスフォード:IRL出版、p.71−112)に記載の分裂不活性SNL76/7 支持細胞層(ibid.)上で増殖させた。直線化したCDMターゲッティングベクターをHasty et al.(Hasty,P.R. et al.(1991) Nature 350:243−246)が記載した方法によってAB−1細胞に電気穿孔で挿入した。電気穿孔した細胞を、100mmの皿に1〜2x106細胞/皿の濃度で播種した。24時間後、G418(活性成分の200μg/ml)およびFIAU(5x10−7M)を培地に加え、そして8〜9日間かけて薬物耐性クローンを成長させた。クローンを収集し、トリプシン処理して2分割し、そしてさらに増殖させた。その後、各クローンに由来する細胞の半分を冷凍し、そしてもう半分をベクターと標的配列との間の相同組換えについて分析した。
Acids Res.19:4293)が記載した通り、クローンから単離した。単離したゲノムDNAをSpeIで消化し、そして915bpのSacIフラグメント、プローブA(図1参照)でプローブしてmuイントロンエンハンサーとmuスイッチ領域との間の配列とハイブリダイズした。プローブAは、野生種座位から得た9.9kbのSpeIフラグメント、およびCMDターゲッティングベクターと相同に組換わったmu座位から得た診断用7.6 kbバンドを検出する(neo発現カセットはSpeI部位を含む)。サザンブロット分析でスクリーニングした1132 G418およびFIAU耐性クローンのうち、3つがmu座位での相同組換えを示唆する7.6kbのSpeIバンドを示した。これら3つのクローンをさらにBglI、BstXIおよびEcoRI酵素で消化して、ベクターがmu遺伝子に相同性を導入したことを確認した。プローブAでハイブリダイズした場合、BglI、BstXIおよびEcoRIで切断した野生型DNAのサザンブロットは、それぞれ15.7、7.3および12.5 kbのフラグメントを生成し、その一方で、標的mu対立遺伝子の存在は7.7、6.6、および14.3 kbの断片により示唆される。SpeI消化により検出された3つの陽性クローンはすべて、neoカセットがCmu1エキソンに挿入されたことを示す、予想どおりのBglI、BstXIおよびEcoRI制限フラグメントを示した。
突然変異したmu遺伝子を有するマウスの作出
264、272および408番と命名した3つの標的ESクローンを解凍し、そしてBradley(Bradley,A.(1987)in Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: a Practical
Approach)オックスフォード:IRL出版、p.113−151)に記載の通りC57BL/6J胚盤胞に注入した。注入した胚盤胞を偽妊娠したメスの子宮に移し、挿入したES細胞に由来する細胞および宿主胚盤胞の混合物を提示するキメラマウスを作出した。ES細胞のキメラへの寄与の程度は、黒色C57BL/6J背景に対するES細胞株由来のアグーチコート呈色の量によって視覚的に見積もることができる。クローン272および408はキメラの発生率が低かった(すなわちアグーチ色素沈着の割合が低かった)が、クローン264のオスキメラの発生率は高かった。これらのキメラをC57BL/6Jメスと交配し、そしてES細胞ゲノムの生殖系列の伝達を示すアグーチの仔を作出した。標的mu遺伝子のスクリーニングは、尾部の生検で採取したBglI消化DNAのサザンブロット分析によって行った(ES細胞DNAの分析について上記の通り)。約50%のアグーチ仔が、ハイブリダイズしている7.7kbのBglIバンドとともに15.7kbの野生型バンドを示し、標的mu遺伝子の生殖系列伝達を示した。
mu遺伝子の機能的不活化のためのトランスジェニックマウスの分析
Cum1へのneoカセットの挿入がIg重鎖遺伝子を不活化したかどうかを調べるために、クローン264キメラを、JH遺伝子セグメントの欠失を生じる重鎖の発現が不活化されるJHD突然変異についてホモ接合性のマウスと交配させた(Chen et al,(1993) Immunol.5:647−656)。4匹のアグーチ仔が生まれた。1ヶ月齢のこれらの動物から血清を採取し、そしてELISAでマウスIgMの存在についてアッセイした。4匹の仔のうち2匹はIgMが完全に欠損していた(表1を参照されたい)。尾部生検で採取したDNAを、BglIで消化し、そしてプローブAとハイブリダイゼーションしたもの(図1の参照されたい)、およびStuIで消化し、そして475bpのEcoRI/StuIフラグメント(同上)でハイブリダイゼーションしたものを、サザンブロットで分析して4匹の仔マウスの遺伝子型を特定したところ、血清IgMを発現できない動物は、重鎖座位の1つの対立遺伝子がJHD突然変異を有し、もう1つの対立遺伝子がCmu1突然変異を有する動物であることが証明された。JHD突然変異についてヘテロ接合のマウスは、野生型の血清Igレベルを示す。これらのデータは、Cmu1突然変異がmu遺伝子の発現を不活化することを示す。
II. HCO12トランスジェニックマウスの作出
HCO12ヒト重導入遺伝子は、pHC2の80kb挿入物(Taylor et al.,1994,Int.Immunol.,6:579−591)、およびpVx6の25kb挿入物を同時に注入して生成した。プラスミドpVx6は以下のように構築した。
ーをEcoRV/BamHIで消化し、そして生殖系列ヒトVH3−23(DP47)遺伝子とともに約4kbの5’フランキングおよび1kbの3’フランキングゲノム配列を含んでなる10kbのEcoRV/BamHI DNAフラグメントにライゲートした。得られたプラスミドp112.2RR.7をBamHI/SalIで消化し、そしてp251fの7kbの精製BamHI/SalI挿入物フラグメントにライゲートした。得られたプラスミドpVx4をXhoIで消化し、そしてp343.7.16の8.5kbのXhoI/SalI挿入物とライゲートした。
Manual)、第2版、1994,コールドスプリングハーバーラボラトリー出版(Cold Spring Harbor Laboratory Press)、プレインビュー、ニューヨーーク)に記載されている通り、精製した26kb挿入物をモル比1:1のpHC2の精製した80kbのNotI挿入物とともに1日半のF2胚の前核 (C57BL/6J x DBA/2J)に同時に注入した。Vx6およびHC2の両方から得た配列を含んでなるトランスジェニックマウスの3つの独立した株を、注入した胚から成長させたマウスから確立した。これらの株は(HCO12)14881、(HCO12)15083、および(HCO12)15087と命名する。この3つの各株を、実施例1に記載のCMD突然変異、JKD突然変異(Chen et al.1993,EMBO J.12:811−820)、および(KCo5)9272導入遺伝子(Fishwild et al.1996,Nature Biotechnology 14:845−851)を含んでなるマウスと交配させた。得られたマウスは、内因性マウス重鎖およびカッパ軽鎖座位の破壊についてホモ接合のバックグラウンドを持つヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖導入遺伝子を発現する。
実施例2:炭疽の感染防御抗原に対する完全なヒト抗体の生産
炭疽の感染防御抗原に対するヒトモノクローナル抗体は、上記のように作出したトランスジェニックマウスで以下に記載のように生産された。
ヒト抗−PAモノクローナル抗体の生成
4つの異なる遺伝的改変体を有するトランスジェニックHuMAb Mouse(商標)、HC2/KCo7株を免疫感作に使用した。これらのトランスジェニックマウスは未編成ヒト重鎖(μおよびγ)およびκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子小座を、内因性μおよびκ鎖座を不活性にする標的突然変異と一緒に含む。したがってマウスはマウスIgMまたはκを発現せず、そして免疫感作に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子はクラススイッチングおよび体性突然変異を受けて高親和性のヒトIgGκモノクローナル抗体を生じる。
0mM NaClを含有する0.1Mグリシン、pH2.9。溶出液を1M Trisバッファー(各2mlの画分に30ul)で中和した。各溶出画分はプールする前にゲルに流した。クマーシーブルー染色による純度を確認したら、画分をプールし、そして150mM NaCl2を含有する10mMリン酸ナトリウムバッファー、pH7.3に対して透析した。
実施例3A:抗−PAヒトモノクローナル抗体による致死毒素のインビトロ中和
TNA実験はLittle et al.,1990、同上に従い行った。簡単に説明すると、毒素感受性のマウスマクロファージ細胞株J774A.1は、抗−PAmAbが濃度を変えて存在するか、またはしないPAおよびLF(10:1)の混合物に暴露した。3時間のインキュベーション後、幾らかのマクロファージを生存能色素(MTT)を使用して測定した。結果(図10)は、ヒト抗−PA抗体がインビトロで致死毒素を中和する活性を示す。以下の表2は、TNAにおいてマクロファージの50%生存能(ED50)を維持するために必要な抗体の有効用量を示す。
実施例3B:Humab5E8によるインビトロ中和には、Fc受容体結合が必要である
毒素中和アッセイを前記のように行ったが、5E8抗体のF(ab’)2フラグメントおよび完全な5E8mAbを、Fc受容体および抗体のFc相互作用を特異的に遮断する抗−マウスFcRII/IIIモノクローナル抗体2.4G2の不存在または存在下で使用した(BDバイオサイエンス(Biosciences)、ファミンゲン、サンディエゴ、カリフォルニア州)。F(ab’)2フラグメントはmAb 5E8のペプシン消化、続いてプロテインAおよびプロテインLカラムクロマトグラフィーを使用したF(ab’)2の精製により調製した。
実施例4:抗体のシークエンシング
4種のHuMabのVHおよびVL領域をハイブリドーマRNAから単離し、cDNAに逆転写し、PCRにより増幅し、そしてシークエンシングした。これらHuMabのVHおよびVL領域の核酸およびアミノ酸配列は以下に、そして図1−9に提供する。5E8ハイブリドーマは2つの軽鎖(VL majorまたはVL minor)の1つと対合する重鎖を有する抗体を生産することに注目されたい。両抗体(すなわち5E8VH/VL majorおよび5E8’VH/VL minor)は、炭疽PXに結合し、そしてTNAに従い炭疽毒素を中和することができる。
5E8 V H 核酸配列
標準的ELISAアッセイは、感染防御抗原へのヒトモノクローナル抗体の結合特性決定の章に記載した通りに行った。プレートをPA83またはPA63のいずれかでコートし、そして結合した抗体をアルカリホスファターゼ結合ヤギ抗−ヒトIgG(Fc特異的)(ジャクソンイムノリサーチ ラボラトリーズ、ウエスト グローブ、ペンシルベニア州)を使用して検出した。ELISAの結合曲線は、完全長PA83およびPAの活性フラグメント(すなわちPA63)に対してHuMab 5E8について作成した。
実施例5B:炭疽の感染防御抗原に関するHuMab 5E8結合特性を測定するためのELISAアッセイ
標準的ELISAアッセイは、感染防御抗原へのヒトモノクローナル抗体の結合特性決定の章に記載した通りに行った。ヒト抗体5E8は、マウスの各抗体14B7、2D5および1G3(Little et al.,1996,Microbiology 142:707−715)と一緒に、PA63をコートしたプレートでインキュベーションした。マウス抗体のPAへの結合は、ヤギ抗−マウスIgG(Fc特異的)アルカリホスファターゼ結合体(ジャクソンイムノリサーチ ラボラトリーズ、ウエスト グローブ、ペンシルベニア州)を使用して検出する。
実施例6:ウサギへの静脈内および皮下投与後のヒトIgGの薬物動態学
この実施例では、ウサギを対象としたヒトモノクローナル抗体の静脈内および皮下注射後にヒトIgGの薬物動態を評価する。データはウサギを対象とした致死的肺炭疽モデルにおいて、炭疽の感染防御抗原に対するヒトモノクローナル抗体の効力を評価するための実験について、投与計画の選択を支持するために作成した。
達成され、そしていずれの投与経路も効力実験に適切である。そのような十分な血清レベルを長期間維持するために、抗体の負荷用量(loading dose)を最初に投与し、続いて低い第2用量の抗体を初期投与からおよそ4日後に投与することができる。しかし治療的モデルで皮下注射を行う場合、最大濃度までの延びた時間を考慮すべきである。実施例7A:ウサギの吸入モデルにおける炭疽菌(Bacillus antheacis)(エームズ(ames)株)の致死的エーロゾル攻撃に対するヒトモノクローナル抗体の効力および治療的処置
この実験は本発明の抗−PA抗体の効力を、ウサギの致死的肺炭疽モデルで示す。抗体5D5または5E8で処置した30匹のウサギのうち26匹が、炭疽に暴露してから14日後に生存していた。すなわち本発明の抗体は、炭疽への暴露に関して効果的な新規処置を提供する。
実施例7B:ウサギの吸入モデルにおける炭疽菌(Bacillus antheacis)(エームズ(ames)株)の致死的エーロゾル攻撃に対するヒトモノクローナル抗体(5E8)の効力
この実験は、より低用量レベルの本発明の抗−PA抗体の効力を、ウサギの致死的肺炭疽モデルで示す。抗体5E8で処置した20匹のウサギのうち17匹が、炭疽に暴露して
から14日後に生存していた。すなわち本発明の抗体は、炭疽の暴露に関して効果的な処置を提供する。
実施例7C:ウサギの吸入モデルにおける炭疽菌(Bacillus antheacis)(エームズ(ames)株)の致死的エーロゾル攻撃に対するヒトモノクローナル抗体(5E8)の治療的処置
この実施例は、暴露の臨床的兆候がウサギの致死的肺炭疽モデルで始まった後、死亡数の防止における本発明の抗−PA抗体の効力を証明する。炭疽に暴露してから24時間後に抗体5E8で処置した10匹のウサギのうち9匹が、14日間生存した。暴露から48時間後に抗体5E8で処置した5匹のウサギのうち3匹が、14日間生存した。これらの動物は処置前に感染のかなりの兆候があった。すなわち本発明を抗体は、炭疽に対する暴露に関し効果的な処置を提供する。
等価物
当業者は、日常的な実験を行うだけで本明細書に記載した本発明の特定の態様の多くの等価物を認識し、あるいは確認できるであろう。そのような等価物は特許請求の範囲の包含することを意図する。
本明細書で引用するすべての特許、係属特許出願および他の公報は、全部、引用により本明細書に編入する。
Claims (35)
- 炭疽菌(Bacillus anthracis)の感染防御抗原に結合する、単離されたモノクローナル抗体であって、
それぞれ、配列番号2および4、配列番号2および6、配列番号12および14、または配列番号16および18に示される、重鎖および軽鎖可変領域配列を含んでなる、
上記抗体。 - 抗体が、それぞれ、配列番号2および4に示される重鎖および軽鎖可変領域配列を有する、請求項1に記載の抗体。
- 抗体が、それぞれ、配列番号2および6に示される重鎖および軽鎖可変領域配列を有する、請求項1に記載の抗体。
- 抗体が、それぞれ、配列番号12および14に示される重鎖および軽鎖可変領域配列を有する、請求項1に記載の抗体。
- 抗体が、それぞれ、配列番号16および18に示される重鎖および軽鎖可変領域配列を有する、請求項1に記載の抗体。
- 毒素中和アッセイが神経、心臓、肺および骨髄から選択される組織に由来する細胞を使用する、請求項1から5のいずれかに記載の抗体。
- 細胞がマクロファージである、請求項6に記載の抗体。
- ヒトIgG重鎖およびヒトカッパ軽鎖を含んでなる、請求項1から5のいずれかに記載の抗体。
- IgG1またはIgG3重鎖を含んでなる、請求項1から8のいずれかに記載の抗体。
- (a) ヒト重鎖VH3-33またはVH3-7生殖細胞系配列に由来するFR1、FR2、FR3およびFR4配列を含んでなる重鎖可変領域、または、
(b) ヒト軽鎖L15、L18またはA27生殖細胞系配列に由来するFR1、FR2、FR3およびFR4配列を含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなる、請求項1から9のいずれかに記載の抗体。 - 抗体が、
(a) 標準的ELISAに従い、PA83よりもPA63に高い親和性を現すか;
(b) 標準的ELISAに従い、1μg/mlではPA83に結合せず、0.2以下のOD405nmであるか;または、
(c) PAに結合する炭疽致死因子または浮腫因子を遮断しない、
請求項1から10のいずれかに記載の抗体。 - 抗体が、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、請求項1から11のいずれかに記載の抗体。
- 抗体がFabフラグメントまたは単鎖抗体(scFv)である、請求項1から12のいずれかに記載の抗体。
- 請求項1に記載の抗体をコードする単離された核酸分子。
- 請求項14に記載の単離された核酸分子を含んでなる発現ベクター。
- 請求項15に記載の発現ベクターを含んでなるトランスフェクトーマ。
- 請求項1から13のいずれかに記載のヒト抗体を発現するトランスジェニック非ヒト動物であって、トランスジェニック非ヒト動物がヒト重鎖導入遺伝子または導入染色体およびヒト軽鎖導入遺伝子または導入染色体を有する、上記トランスジェニック非ヒト動物。
- ハイブリドーマにより生産される請求項1から13のいずれかに記載の単離されたヒト抗体であって、ハイブリドーマが、不死化細胞に融合された、ヒト重鎖導入遺伝子または導入染色体およびヒト軽鎖導入遺伝子または導入染色体を含んでなるゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物から得た、B細胞から調製される、上記単離されたヒト抗体。
- 請求項1から13のいずれかに記載の抗体を含んで成る、二重特異性分子。
- 治療薬に連結された請求項1ないし13のいずれか1項に記載の抗体を含んでなる免疫複合体。
- 治療薬がサイトトキシンまたは放射性同位体である請求項20に記載の免疫複合体。
- 請求項1から13のいずれかに記載のヒト抗体および製薬学的に許容され得る担体を含んでなる製薬学的組成物。
- さらに追加の治療薬を含んでなる請求項22に記載の組成物。
- 追加の治療薬が、感染防御抗原ワクチン、または炭疽菌、胞子、感染防御抗原、致死因子もしくは浮腫因子に対する第2の抗体である、請求項23に記載の製薬学的組成物。
- 請求項19に記載の二重特異性分子または請求項20に記載の免疫複合体、および製薬学的に許容され得る担体を含んでなる製薬学的組成物。
- 検出可能な量の請求項1から13のいずれかに記載の抗体を生産するハイブリドーマ。
- 請求項1から13のいずれかに記載の抗体を生産する方法であって、抗体が動物のB細胞により生産されるように、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入遺伝子を含んでなるゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物を炭疽菌(B.anthracis)の感染防御抗原または炭疽菌(B.anthracis)の感染防御抗原を発現する細胞で免疫感作し、動物からB細胞を単離し、そしてB細胞をミエローマ細胞と融合させて抗体を産生する不死化ハイブリドーマ細胞を形成することを含んでなる、上記方法。
- 有効成分として請求項1から13のいずれかに記載の抗体を含んで成る、炭疽による感染が疑われる細胞における炭疽菌(B.anthracis)の感染防御抗原の生理学的活性を阻害するための製薬学的組成物。
- 有効成分として請求項1から13のいずれかに記載の抗体を含んで成る、炭疽による感染が疑われる細胞中の炭疽菌(B.anthracis)毒素を中和するための製薬学的組成物。
- 有効成分として請求項1から13のいずれかに記載の抗体を含んで成る、炭疽菌(B.anthracis)に感染した宿主の炭疽感染を処置または防止するための製薬学的組成物。
- さらに追加の治療薬を含んでなる請求項30に記載の組成物。
- 追加の治療薬が抗生物質またはワクチンである、請求項31に記載の組成物。
- サンプル中の炭疽菌(B.anthracis)の感染防御抗原の存在を検出する方法であって:抗体および感染防御抗原を含んでなる複合体が形成できる条件下で、サンプルを請求項1から13のいずれかに記載の抗体と接触させ;そして、複合体の形成を検出すること、を含んでなる上記方法。
- 抗体の毒素を中和する能力がFc受容体への結合を要する、請求項1から13のいずれかに記載の抗体。
- PA63に対する結合において、マウス1G3、マウス2D5およびマウス14B7から選択される抗−PA抗体とは競合しない、請求項1から13のいずれかに記載の抗体。
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JP2005508395A (ja) | 2001-11-05 | 2005-03-31 | ボード オブ レジェンツ,ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム | 炭疽菌毒素を検出および中和するための組換え抗体 |
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WO2004052277A2 (en) * | 2002-12-05 | 2004-06-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Anthrax antitoxins |
CN102675462A (zh) * | 2003-06-27 | 2012-09-19 | 艾默根佛蒙特有限公司 | 针对表皮生长因子受体的缺失突变体的抗体及其使用 |
AR045563A1 (es) | 2003-09-10 | 2005-11-02 | Warner Lambert Co | Anticuerpos dirigidos a m-csf |
US20060246079A1 (en) | 2003-11-14 | 2006-11-02 | Morrow Phillip R | Neutralizing human antibodies to anthrax toxin |
EP2163257A1 (en) | 2004-03-03 | 2010-03-17 | IQ Therapeutics BV | Human anthrax toxin neutralizing monoclonal antibodies and methods of use thereof |
GB0417487D0 (en) | 2004-08-05 | 2004-09-08 | Novartis Ag | Organic compound |
US20100003276A1 (en) * | 2004-12-07 | 2010-01-07 | Hermes Jeffery D | Methods for treating anthrax and inhibiting lethal factor |
WO2006089114A2 (en) * | 2005-02-17 | 2006-08-24 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for treating an anthrax toxin mediated condition |
GB0514319D0 (en) * | 2005-07-13 | 2006-06-14 | Secr Defence | Antibodies for anthrax |
US8962278B2 (en) | 2005-08-03 | 2015-02-24 | Ibio Inc. | Compositions and methods for production of immunoglobulins |
CA2634163A1 (en) * | 2005-12-22 | 2007-06-28 | Iq Corporation | Compositions and methods of modulating the immune response |
AU2007259329A1 (en) | 2006-05-12 | 2007-12-21 | Farris, Darise | Anthrax compositions and methods of use and production |
US8093360B2 (en) | 2006-09-28 | 2012-01-10 | Elusys Therapeutics, Inc. | Antibodies that bind B. anthracis exotoxin, formulations thereof, and methods of use |
MX2009003306A (es) * | 2006-10-02 | 2009-04-23 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se unen a cxcr4 y sus usos. |
WO2008121171A1 (en) * | 2007-01-12 | 2008-10-09 | Cornell Research Foundation, Inc. | Adenylyl cyclases as novel targets for antibacterial interventions |
WO2008088771A2 (en) * | 2007-01-12 | 2008-07-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Adenylyl cyclases as novel targets for the treatment of infection by eukaryotic pathogens |
MX2009008430A (es) | 2007-02-09 | 2009-10-28 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-robo4 y sus usos. |
US7935345B2 (en) | 2007-05-21 | 2011-05-03 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Monoclonal antibodies that specifically bind to and neutralize bacillus anthracis toxin, compositions, and methods of use |
US8404252B2 (en) | 2007-07-11 | 2013-03-26 | Fraunhofer Usa, Inc. | Yersinia pestis antigens, vaccine compositions, and related methods |
JOP20080381B1 (ar) | 2007-08-23 | 2023-03-28 | Amgen Inc | بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9) |
TWI580694B (zh) | 2007-11-30 | 2017-05-01 | 建南德克公司 | 抗-vegf抗體 |
US8309090B2 (en) | 2008-09-05 | 2012-11-13 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of National Defense | Monoclonal antibodies for neutralizing anthrax toxin |
TWI516501B (zh) | 2008-09-12 | 2016-01-11 | 禮納特神經系統科學公司 | Pcsk9拮抗劑類 |
WO2010037046A1 (en) | 2008-09-28 | 2010-04-01 | Fraunhofer Usa, Inc. | Humanized neuraminidase antibody and methods of use thereof |
TW201106972A (en) | 2009-07-27 | 2011-03-01 | Genentech Inc | Combination treatments |
US9321823B2 (en) | 2009-09-02 | 2016-04-26 | Genentech, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
US8784819B2 (en) | 2009-09-29 | 2014-07-22 | Ibio Inc. | Influenza hemagglutinin antibodies, compositions and related methods |
EP2509626B1 (en) | 2009-12-11 | 2016-02-10 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Anti-vegf-c antibodies and methods using same |
TWI623323B (zh) | 2009-12-21 | 2018-05-11 | 建南德克公司 | 抗體調配物 |
WO2012047968A2 (en) | 2010-10-05 | 2012-04-12 | Genentech, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
RU2478647C1 (ru) * | 2011-08-10 | 2013-04-10 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Способ получения сыворотки для диагностики сибирской язвы и диагностический набор |
ES2688895T3 (es) | 2013-03-13 | 2018-11-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Formulaciones con oxidación reducida |
CA2904169C (en) | 2013-03-13 | 2021-12-07 | Genentech, Inc. | Formulations with reduced oxidation |
US20140314778A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-23 | Genentech, Inc. | Formulations with reduced oxidation |
AR095399A1 (es) | 2013-03-13 | 2015-10-14 | Genentech Inc | Formulaciones con oxidación reducida, método |
CA2906057A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | Genentech, Inc. | Antibody formulations |
EP3712252A1 (en) | 2013-03-15 | 2020-09-23 | F. Hoffmann-La Roche AG | Cell culture compositions with antioxidants and methods for polypeptide production |
KR102202476B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-01-12 | 제넨테크, 인크. | 세포 배양 배지 및 항체 생산 방법 |
PE20160541A1 (es) | 2013-09-27 | 2016-06-03 | Genentech Inc | Formulaciones de anticuerpos anti-pdl1 |
US9034332B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-05-19 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
BR112016013963A2 (pt) | 2013-12-17 | 2017-10-10 | Genentech Inc | terapia de combinação compreendendo agonistas de ligação de ox40 e antagonistas de ligação do eixo de pd-1 |
US8986691B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
US9067998B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-30 | Kymab Limited | Targeting PD-1 variants for treatment of cancer |
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RU2016128726A (ru) | 2013-12-17 | 2018-01-23 | Дженентек, Инк. | Способы лечения злокачественных опухолей с использованием антагонистов связывания по оси pd-1 и антитела против cd20 |
US8945560B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-02-03 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
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US9045545B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer |
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JP6736467B2 (ja) | 2014-02-04 | 2020-08-05 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 平滑化変異体及びその使用方法 |
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SG11201608106PA (en) | 2014-03-31 | 2016-10-28 | Genentech Inc | Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists |
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US9732145B2 (en) | 2014-07-31 | 2017-08-15 | The Israel Institute of Biological Research (IIBR) | Antibodies directed to Bacillus anthracis protective antigen |
BR112017004393A2 (pt) | 2014-09-15 | 2018-02-27 | Genentech Inc | formulações de anticorpo |
WO2016081384A1 (en) | 2014-11-17 | 2016-05-26 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists |
WO2016126972A1 (en) | 2015-02-04 | 2016-08-11 | Genentech, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
CA2986263A1 (en) | 2015-06-17 | 2016-12-22 | Genentech, Inc. | Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes |
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KR20180093078A (ko) | 2015-12-30 | 2018-08-20 | 제넨테크, 인크. | 단백질 제제를 위한 트립토판 유도체의 용도 |
CA3006529A1 (en) | 2016-01-08 | 2017-07-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods of treating cea-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-cea/anti-cd3 bispecific antibodies |
CA3019952A1 (en) | 2016-02-04 | 2017-08-10 | Curis, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
WO2017159699A1 (en) | 2016-03-15 | 2017-09-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-gpc3 antibodies |
CN109476748B (zh) | 2016-08-08 | 2023-05-23 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的治疗和诊断方法 |
US11779604B2 (en) | 2016-11-03 | 2023-10-10 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods |
EP4116327A1 (en) | 2017-10-11 | 2023-01-11 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Human pd-l1 antibodies and methods of use therefor |
SG11202009258RA (en) * | 2018-03-23 | 2020-10-29 | Univ Texas | Dual specificity antibodies to human pd-l1 and pd-l2 and methods of use therefor |
EP3768298A4 (en) | 2018-03-23 | 2021-12-08 | Board of Regents, The University of Texas System | HUMAN ANTI-PD-L2 ANTIBODIES AND PROCESSES FOR USE |
MX2020014091A (es) | 2018-06-23 | 2021-05-27 | Genentech Inc | Metodos para tratar el cancer de pulmon con un antagonista de fijacion al eje pd-1, un agente de platino y un inhibidor de la topoisomerasa ii. |
EP3823611A1 (en) | 2018-07-18 | 2021-05-26 | Genentech, Inc. | Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent |
JP2021533149A (ja) | 2018-08-08 | 2021-12-02 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | タンパク質製剤のためのトリプトファン誘導体及びl−メチオニンの使用 |
EP4249917A3 (en) | 2018-09-21 | 2023-11-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Diagnostic methods for triple-negative breast cancer |
WO2021257503A1 (en) | 2020-06-16 | 2021-12-23 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4689299A (en) * | 1982-09-30 | 1987-08-25 | University Of Rochester | Human monoclonal antibodies against bacterial toxins |
ATE387495T1 (de) | 1996-12-03 | 2008-03-15 | Amgen Fremont Inc | Vollkommen humane antikörper die egfr binden |
US6197582B1 (en) * | 1998-03-18 | 2001-03-06 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Development of human monoclonal antibodies and uses thereof |
US7618783B2 (en) * | 2000-04-28 | 2009-11-17 | Tetracore, Inc. | Anthrax specific antibodies |
WO2002046208A2 (en) | 2000-11-01 | 2002-06-13 | Elusys Therapeutics, Inc. | Method of producing biospecific molecules by protein trans-splicing |
JP2005508395A (ja) * | 2001-11-05 | 2005-03-31 | ボード オブ レジェンツ,ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム | 炭疽菌毒素を検出および中和するための組換え抗体 |
US7763451B2 (en) * | 2001-11-09 | 2010-07-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Methods for preparing Bacillus anthracis protective antigen for use in vaccines |
US20040009178A1 (en) * | 2002-02-11 | 2004-01-15 | Bowdish Katherine S. | Immunotherapeutics for biodefense |
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