JP4996611B2 - 林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法 - Google Patents
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Description
早期のフィンガー・プリント図譜の研究の中で、データ化の過程は、クロマトグラムの中の主要クロマトグラム・ピークのピーク高又はピーク面積を抽出して当該クロマトグラムの特徴を表すことにより実現されたが、このような方法はただ一部のクロマトグラム特徴でクロマトグラム・フィンガー・プリント図譜全体を表すので、いくつかの情報が紛失になり、最後ではフィンガー・プリント図譜の鑑別感度が降下させる。
フィンガー・プリント図譜の相似度は、一個又は数個のフィンガー・ピークで比較し計算をすることができ、また、フィンガー・プリント図譜における全てのフィンガー・ピークで比較し計算をすることもできる。漢方薬の化学構成の全体波動状況を全面的に度量をするため、普通は上記第2種の計算方法を採用する。スペクトル或はクロマトグラムの分析器具により測定した図譜はバイナリーで保存されたデータ組であるため、1つのベクトルとして、下記の公式でその相似度計算を行うことができる。
と
はそれぞれ両組のクロマトグラム・データの平均値を示し、xi,yiは両組のクロマトグラム・データの対応点を示して、求められた関連係数はS∈[0,1]、この方法により両組のデータの相似程度を判断する。この方法により算出した相似度は、二つの化学サンプルの全体図譜の相似性を反映している。
通常の方法により人参の試料を量り、ノルマル・ヘキサンを入れ、超音波で1時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取り、鑑別サンプルとする。
気相クロマトグラム条件:Dikma DM−1(30mm×0.25mm×0.25μm)毛細管柱。柱温度:100℃。サンプル注入口温度:270℃。プログラム温度昇温。サンプル注入量:1μL。サンプル注入方式:分流,分流比2.0。キャリヤーガス流速:1.30mL/min。
手順(2)により取得したサンプルのフィンガー・プリント図譜から、8−9のピークを選定して相似度の計算を行い、それから当該計算値を標準相似度値と比較することによって、当該サンプルが林下山参であるかまたは栽培人参であるかを鑑別することできる。
側根0.78〜0.96中間値・モード,0.78〜0.96平均値モード。
ひげ根0.81〜0.96中間値・モード,0.90〜0.92平均値モード。
側根0.24〜0.57中間値・モード,0.24〜0.58平均値モード。
ひげ根0.25〜0.61中間値・モード,0.24〜0.71平均値モード。
1、器具と試薬
Shimadzu GC−MSMS−QP2010気相クロマトグラム・マス・スペクトログラフ
Crest超音波洗浄機(型番:1875HTAG)
Spectrafuge 16M遠心機
ノルマル・ヘキサン:Lab−Scan Analytical Sciences,残留農薬レベル
本発明で使用する人参及び林下山参のサンプルは、全て吉林省の各地から調達したものである。(表2を参照)
各人参のサンプルは、主根、側根及びひげ根の3部位に分けられ、それぞれ研磨して粉砕する。各部位の薬材粉末を約50mg量り、精密に量って、1ml Eppendorf管に入れ、0.5mlのノルマル・ヘキサン(n−Hexane)を加え、超音波で1時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取ってGC−MS分析を行う。
4.1) クロマトグラム(chromatogram)条件:Dikma DM−1(30mm×0.25mm×0.25μm)毛細管柱。柱温度:100℃。サンプル注入口温度:270℃。プログラムに従って昇温(表1を参照)。サンプル注入量:1μL。サンプル注入方式:分流,分流比2.0。キャリヤーガス流速:1.30mL/min。
イオン・ソース温度:200℃。連結口温度:250℃。溶剤切断時間:5min。質量スキャン範囲:m/z 35〜380。スキャン間隔:0.5秒。
上記の実験条件で取得した林下山参の主根の揮発油のGC−MSクロマトグラムは、図1を参照する。
林下山参の主根の揮発油の主要成分は、表3を参照する。
栽培人参の主根の揮発油のGC−MSクロマトグラムは、図2を参照する。
栽培人参の主根の揮発油の主要成分は、表4を参照する。
上記方法で形成された林下山参共有モードを標準にし、3ロットの林下山参及び5ロットの栽培人参(GC−MS図譜は図10を参照)の当共有モードとの相似度を計算して、その結果は表4の通りである。
上記方法で形成された林下山参共有モードを標準にし、2ロットの林下山参及び5ロットの栽培人参の側根のGC−MS図譜(図23)の相似度を計算すると、その結果は下記(表6)の通りである。
Claims (4)
- 林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法であって、
手順(1)サンプルの調製と、手順(2)気相クロマトグラム−マス・スペクトラムGC−MS分析と、手順(3)サンプルの鑑別とを含み、
前記(1)サンプルの調製において、人参の主根、側根、ひげ根の3つの各部位から各々人参試料を量り、各人参試料に対し、ノルマル−ヘキサンを入れ、超音波で1時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取って各鑑別用サンプルを取得し、
前記(2)気相クロマトグラム−マス・スペクトラムGC−MS分析において、気相クロマトグラム条件及びマス・スペクトラム条件を用いて各サンプルのGC−MS分析結果に基づくフィンガー・プリント図譜を示すGC−MS図譜を検出し、
その中、気相クロマトグラム条件として、Dikma DM−1(30mm×0.25mm×0.25μm)毛細管柱(キャピラリーカラム)と、100℃の柱温度(カラム温度)と、270℃のサンプル注入口温度と、プログラムに基づく昇温と、1μLのサンプル注入量と、分流のサンプル注入方式と、2.0の分流比と、1.30mL/minのキャリヤーガス流速を採用し、
また、マス・スペクトラム条件として、200℃イオン・ソース温度と、250℃の連結口温度と、5minの溶剤切断時間と、m/z 35〜380の質量スキャン範囲と、:0.5秒のスキャン間隔を採用し、
前記(3)サンプルの鑑別において、手順(2)で獲得した各サンプルのGC−MS図譜から、8−9のピークを選定して相似度の計算を行い、それから当該計算値を林下山参及び栽培人参の主根、側根、ひげ根の各々3つの部位から採取した各人参試料に基づき予め算出した各標準相似度値と各部位毎に比較することによって、当該サンプルが林下山参であるかまたは栽培人参であるかを鑑別することを特徴とする林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。 - 前記標準相似度は、以下の通りからなり、即ち、
林下山参について、主根は、中間値が0.88〜0.91であるモード及び平均値が0.77〜0.88であるモードを採用し、側根は、中間値が0.78〜0.96であるモード及び平均値が0.78〜0.96であるモードを採用し、ひげ根は、中間値が0.81〜0.96であるモード及び平均値が0.90〜0.92であるモードを採用し、
栽培人参について、主根は、中間値が0.38〜0.57であるモード及び平均値が0.36〜0.54であるモードを採用し、側根は、中間値が0.24〜0.57であるモード及び平均値が0.24〜0.58であるモードを採用し、ひげ根は、中間値が0.25〜0.61であるモード及び平均値が0.24〜0.71であるモードを採用することを特徴とする請求項1記載の林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。 - 前記手順(2)気相クロマトグラム−マス・スペクトラム分析で、気相クロマトグラムの温度昇温プログラムは、まず100.0℃から170℃に温度を昇温させ、温度昇温速度は1.5℃/min、それから、170℃から190.0℃に温度を昇温させ、温度昇温速度は8.0℃/min、最後に、190.0℃から240℃に温度を昇温させ、温度昇温速度は2.0℃/minとすることを特徴とする請求項1記載の林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
- 前記手順(3)サンプルの鑑別において、前記選定されるピークはGC−MS図譜の中で応答値が比較的に高い主要なピークであり、且つ、全てのサンプルに共有するピークであることを特徴とする請求項1記載の林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
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