JP4875269B2 - Ｎ−置換４−アミノプテリジン、その調製法および医薬としての使用 - Google Patents

Description

【０００１】
本発明は、以下の一般式のＮ−置換４−アミノプテリジン、その調製プロセス、および、一酸化窒素の平衡の撹乱により引き起こされる疾病の予防および処置におけるその使用に関する。
【０００２】
【化８】

一酸化窒素（ＮＯ）は、生理的および病態生理的機能を遍在的に有する（Ｓ．Ｍｏｎｃａｄａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４３（１９９１）、１０９−１４２）。血管の平滑筋に対して弛緩作用を示し、このように、血圧の調節および血管壁細胞の増殖に決定的に関与しており；それは、血小板凝集阻害を介して血液凝固を制御し、脳および脊髄における神経調節物質として関与する。ＮＯは、同様に、末梢神経系のＮＡＮＣ神経におけるメッセンジャーとして機能する。ＮＯの細胞毒性作用は、感染に対する防御のために、マクロファージおよび多くの他の細胞により利用されるが、炎症反応および自己免疫反応にも役割を果たす。
【０００３】
内因性ＮＯは、アルギニンから、３つの異なるＮＯシンターゼアイソザイムの助けにより産生される（Ｋｅｒｓｈａｗ、Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７（１９９２）６９）。全てのアイソザイムがＮＡＤＰＨ、フラビンアデニンジヌクレオチド、フラビンモノヌクレオチドおよびテトラヒドロビオプテリンを補因子として必要とする。それらは、生体中の局在、Ｃａ²⁺／カルモジュリンによる調節、および、内毒素およびサイトカインによるその誘導性が異なる。構成性カルシウム依存性ＮＯシンターゼは、例えば、内皮（ＩＩＩ型）および脳（Ｉ型）に見られ、そこで、血圧の調節および凝固、並びに、誘導プロセスに関与している。サイトカイン誘導性カルシウム独立的アイソフォーム（ＩＩ型）は、マクロファージ、平滑筋細胞および肝細胞に存在する。それは、比較的大量のＮＯを、長時間におよび産生でき、炎症および自己免疫プロセスおよびマクロファージの細胞毒性活性に関与していると考えられている。
【０００４】
ＮＯ平衡の撹乱により、重篤な疾患および傷害が生じる。従って、敗血性または出血性ショックにおける過度のＮＯの産生により、血圧の大幅な病的下降が生じる。過度のＮＯ産生は、例えば、１型糖尿病などの自己免疫疾患およびアテローム硬化症の発生に関与し、一部には、脳虚血後のグルタミン酸誘導神経毒性に関与している。高濃度のＮＯにより、さらに、シトシンの脱アミン化を通して、ＤＮＡの傷害および癌が生じる。それ故、特定の病的状態に関与するＮＯシンターゼの選択的阻害は、前記疾病の処置または予防のためになる。
【０００５】
これまで、僅か数個のＮ−置換４−アミノプテリンの代表例しか、化学文献に開示されていない。全てのこれらの代表例は、プテリン骨格の７位において水素とは異なる置換基、または、プテリン骨格の６位において葉酸と類似したアミノベンゾイルグルタメート残基を含む（プテリン骨格については以下の式（ａ）および（ｂ）参照）。
【０００６】
【化９】

Ｎ−置換−４−アミノプテリンの薬理効果については極めて僅かな情報しか入手できない：Ｄｅｗｅｙら（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２３（１９７４）７７３）およびＷｅｉｎｓｔｏｃｋら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１１（１９６８）５７３）は、２，７−ジアミノ−４−メチルアミノ−６−フェニルプテリジンの利尿作用の可能性を報告し、Ｒｏｔｈら（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．７３（１９５１）１９１４）は、Ｓ．フェーカリスＲに対する、種々の葉酸類似（２−アミノ−４−アルキルアミノ−プテリジン−６−イルメチル）アミノベンゾイルグルタメートのアンタゴニスト作用を決定した。これらの誘導体の作用（これは著者により「弱い」と特徴づけられている）は、大部分、プテリジンの６位における、かかる物質には典型的である、アミノベンゾイルグルタメートの存在に起因しているようである。
【０００７】
同様に、現在までに、ＮＯシンターゼ（ＮＯＳ）の阻害におけるプテリン類似体の使用に関して、文献ではほんの僅かしか考察されてこなかった。ＮＯＳ阻害への発表されている薬理アプローチの大半は、基質類似体を介した、Ｌ−アルギニンの酵素の基質結合部位に対する競合作用に基づく（例えば、Ｅ．Ｓ．Ｆｕｒｆｉｎｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（１９９４）２６６７７参照）。
【０００８】
文献に考察された、さらなる可能性あるＮＯシンターゼ阻害剤は、Ｎ−イミノエチルオルニチン（ＭｃＣａｌｌら、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１０２（１９９１）２３４）、アミノグアニジン（Ｔ．Ｐ．Ｍｉｓｋｏら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２３３（１９９３）１１９、ＥＰ５４７５８８−Ａ１）、および７−ニトロインダゾール（Ｐ．Ｋ．Ｍｏｏｒｅら、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１０８（１９９３）２９６）である。
【０００９】
ＮＯ産生に対する、単純な６Ｒ−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリン類似体（ＢＨ₄類似体）の効果は、Ｓｔｕｅｈｒら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（１９８９）２０４９６）、Ｇｉｏｖａｎｅｌｌｉら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８（１９９１）７０９１）、ＭuｌｓｃｈおよびＢｕｓｓｅ（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７（１９９１）Ｓ５２）、Ｓａｋａｉら（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３（１９９２）６）、Ｗｅｒｎｅｒら（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３０５（１９９２）１６０）、Ｗａｃｈｔｅｒら（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２８９（１９９３）３５７）、およびＨｅｖｅｌおよびＭａｒｌｅｔｔａ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１（１９９２）７１６０）により研究されている。これらによると、６Ｓ−ＢＨ₄、７−Ｒ／Ｓ−ＢＨ₄、６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロプテリンおよびジヒドロビオプテリンは、部分的に天然補因子を置換できる。ビオプテリン、６，７−ジメチル−５，６，７，８−テトラヒドロプテリン、テトラヒドロ葉酸、ジヒドロ葉酸、葉酸、テトラヒドロネオプテリン、ジヒドロネオプテリン、ネオプテリン、メトトレキサート、プテリン、６−ヒドロキシメチルプテリン、キサントプテリンおよびイソキサントプテリンは有意な効果を示さなかった。５−デアザ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロプテリンを用いた場合にのみ、ＮＯシンターゼの弱い阻害を達成することができた。Ｏｖｅｒｆｅｌｄら（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１０７（１９９２）１００８）は、ＢＨ₄およびセピアプテリンによる、無傷ラット肺胞マクロファージにおけるＮＯ産生阻害を観察したが、これはおそらくフィードバック機序に基づくのだろう。これらの試験で、プテリン−６−カルボン酸は作用を全く示さなかった。
【００１０】
Ｂoｍｍｅｌら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（１９９８）３３１４２およびＰｏｒｔｌａｎｄ Ｐｒｅｓｓ Ｐｒｏｃ．１５（１９９８）５７）は、ＮＯシンターゼのテトラヒドロビオプテリン結合部位を特徴づけるために、プテリンおよび光不安定性プテリン誘導体を使用した。
【００１１】
ＮＯシンターゼ阻害におけるプテリジノンの使用は、ＷＯ−Ａ−９４／１４７８０に開示されている。ＥＰ−Ａ−０，７６０，８１８号およびＥＰ−Ａ−０，７６０，６６４号は、ＮＯシンターゼ阻害のための、多くの異なって置換されたプテリジンおよびテトラヒドロプテリジンの使用を記載する。しかし、それに記載のプテリンおよびプテリジンは、依然として、活性、特にＮＯシンターゼアイソフォームに対する選択性、および溶解度などのいくつかの特性に関する改善が必要である。
【００１２】
Ｐｆｅｉｆｆｅｒら（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３２８（１９９７）３４９）は、ＮＯシンターゼ阻害剤としての４−アミノビオプテリンを記載する（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、３２８（１９９７）３４９）。これらの化合物は、とりわけ、４位に遊離アミノ基および６位に側鎖を有し、これは天然補因子と比較して変化していない。近年、解像されたＸ線構造（Ｂ．Ｒ．Ｃｒａｎｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７９（１９９８）２１２１）は、これらの化合物とＮＯシンターゼの相互作用を示す。
【００１３】
驚くべきことに、特に、４位のアミノ基が、実質的に、置換基により、好ましくはアルキル化またはジアルキル化により遮断され、６位に主に親油性の基を有するプテリジンが、ＮＯシンターゼの強力な阻害剤であり、従って、ＮＯレベルの増加に関連した疾病の処置に使用できることが判明した。
【００１４】
一般式Ｉのプテリンは、ＥＰ０７６０８１８号およびＥＰ０７６０６６４号に開示されたプテリンと比べて、ＮＯシンターゼ阻害作用、アイソフォーム選択性および溶解特性における持続的な改善に関して、かなりの、そしてあらゆる点から驚くべき前進を示す。
【００１５】
本発明は、一般式Ｉを有する化合物であって、
【化１０】

［式中、
Ａは、以下の形
【化１１】

で示される架橋であり、
Ｒ¹は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₁₀）−アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、好ましくは（Ｃ₃−Ｃ₈）−シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アルキルアリール、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキルアリールまたはアリールアルキルであり、ここでの有機基、好ましくはアルキル基は、１つ以上の置換基により、好ましくは置換基Ｒ⁶により置換され得、
Ｒ²は、Ｒ¹とは独立的に、アルキル、アルケニル、アルキニル、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₁₀）−アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、好ましくは（Ｃ₃−Ｃ₈）−シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アルキルアリール、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキルアリール、またはアリールアルキルであり、ここでの有機基、好ましくはアルキル基は、１つ以上の置換基、好ましくは置換基Ｒ⁶により置換され得、
Ｒ¹およびＲ²は、それらを担持する窒素原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓシリーズからの０、１または２個のさらなるヘテロ原子を所望により含み得、また、１つ以上の基、好ましくはＲ⁶基により所望により置換されている３−８員環を形成し得、
Ｒ³は、水素、−ＣＯ−アルキル、好ましくは−ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₇）−アルキル、−ＣＯ−アルキルアリール、好ましくは−ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキルアリールまたは−ＣＯ−アリールであり、
Ｒ⁴は、アルキル、アルケニル、アルキニル、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₁₀）−アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、好ましくは（Ｃ₃−Ｃ₈）−シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリールまたはアルキルアリール、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキルアリール、アリールアルキル、−ＣＯ−Ｏ−アルキル、好ましくは−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−ＣＯ−Ｏ−アリール、−ＣＯ−アルキル、好ましくは−ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキルまたは−ＣＯ−アリールであり、ここでの有機基、好ましくはアルキル基は、１つ以上の置換基により、特に置換基Ｒ⁷により置換され得、
Ｒ⁵は、Ｒ³とは独立的に、水素、−ＣＯ−アルキル、好ましくは−ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₇）−アルキル、−ＣＯ−アルキルアリール、好ましくは−ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキルアリールまたは−ＣＯ−アリールであり、
Ｒ⁶は、−Ｆ、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₁₀）−アルキル、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₁₀）−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−アリール、−ＮＲ⁸Ｒ⁹、オキソ、フェニル、−ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−ＣＦ₃、−ＣＮ、−ＣＯＮＲ⁸Ｒ⁹、−ＣＯＯＨ、−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−ＣＯ−Ｏ−アリール、−Ｓ（Ｏ）_n−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−ＳＯ₂−ＮＲ⁸Ｒ⁹であり、
Ｒ⁷は、Ｒ⁶とは独立的に、Ｒ⁶の意味の１つを有し、
Ｒ⁸は、水素またはアルキル、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキルであり、
Ｒ⁹は、水素、アルキル、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキルまたはアリール、好ましくはフェニルであり、
アリールは、好ましくは、フェニル、ナフチルまたはヘテロアリールであり、その各々は、置換されていなくても置換されていてもよく、例えば、ハロゲン、アルキル、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキルまたはフェニル、−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、好ましくは−Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、アルキレンジオキシ、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₂）−アルキレンジオキシ、−Ｎ⁸Ｒ⁹、−ＮＯ₂、−ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−ＣＦ₃、−ＣＮ、−ＣＯＮＲ⁸Ｒ⁹、−ＣＯＯＨ、−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−Ｓ（Ｏ）_n−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−ＳＯ₂−ＮＲ⁸Ｒ⁹のシリーズからの１つ以上の同一または異なる置換基により置換され得、
ヘテロアリールは、Ｏ、Ｎ、Ｓのシリーズからの１つ以上のヘテロ原子を含む、５−７員不飽和へテロ環であり、
ｎは、０、１または２である］
で示される、全てのその立体異性体および互変異性体形、および全ての比のその混合形の化合物、およびその生理的に許容される塩、水和物およびエステルに関する。
【００１６】
基または置換基が、式Ｉの化合物に１回より多く出現する場合、それらは全て、互いに独立的に、記載の意味を有し、各場合において同一または異なり得る。
【００１７】
アルキル基は、直鎖または分枝であり得る。これは、それらが、他の基に、例えばアルコキシ基、アルコキシカルボニル基またはアミノ基に存在する場合、またはそれらが置換されている場合にも適用する。アルキル基は、通常、１から２０個の炭素原子、好ましくは１から１０個の炭素原子を含む。
【００１８】
アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、これらの基のｎ−異性体、イソプロピル、イソブチル、イソペンチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、３，３−ジメチルブチルである。
【００１９】
アルケニル基の例は、１つ以上の二重結合を含む、直鎖または分枝炭化水素基である。アルケニル基は、通常、２から２０個の炭素原子および１または２個の二重結合、好ましくは２から１０個の炭素原子および１個の二重結合を含む。
【００２０】
アルキニル基の例は、１つ以上の三重結合を含む、直鎖または分枝炭化水素基である。アルキニル基は、通常、２から２０個の炭素原子および１または２個の三重結合、好ましくは２から１０個の炭素原子および１個の三重結合を含む。
【００２１】
アルケニル基の例は、ビニル基、２−プロペニル基（アリル基）、２−ブテニル基および２−メチル−２−プロペニル基である。
【００２２】
アルキニル基の例は、エチニル基、２−プロピニル基（プロパルギル基）または３−ブチニル基である。
【００２３】
シクロアルキル基は、通常、３から８個の環炭素原子、好ましくは５または６個の環炭素原子を含む、飽和環式炭化水素である。シクロアルキル基は、次いで置換し得る。
【００２４】
シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルであり、その全てが、例えば、１つ以上の同一または異なる（Ｃ₁−Ｃ₄）−アルキル基により、特にメチルにより置換され得る。かかる置換シクロアルキル基の例は、４−メチルシクロヘキシルまたは２，３−ジメチルシクロペンチルである。
【００２５】
シクロアルケニル基は、通常３から８個の環炭素原子、好ましくは５または６個の環炭素原子を含む、不飽和環式炭化水素である。シクロアルケニル基は、好ましくは、環系に２重結合を有する。シクロアルケニル基は、次いで置換され得る。
【００２６】
シクロアルキルアルキル基は、シクロアルキル置換アルキル基から得られる、飽和炭化水素である。シクロアルキル基は、通常、５から６個の環炭素原子を有する。シクロアルキルアルキル基の例は、シクロペンチルメチル、シクロペンチルエチル、シクロヘキシルエチルおよび特にシクロヘキシルメチルである。シクロアルキルアルキル基は、次いで置換され得る。
【００２７】
アリールは、炭素環またはヘテロ環式芳香族基、好ましくはフェニル、ナフチルまたはヘテロアリールである。アリール基は、置換されていなくても置換されていてもよい。置換基は、例えば、ハロゲン、アルキル、フェニル、−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、アルキレンジオキシ、−ＮＲ⁸Ｒ⁹、−ＮＯ₂、−ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−ＣＦ₃、−ＣＮ、−ＣＯＮＲ⁸Ｒ⁹、−ＣＯＯＨ、−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−Ｓ（Ｏ）_n−（Ｃ₁−Ｃ₅）−アルキル、−ＳＯ₂−ＮＲ⁸Ｒ⁹のシリーズからの、１つ以上の同一または異なる１価の有機基である。
【００２８】
アルキルアリールは、アルキル置換アリール基、好ましくは（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキルアリール、特にメチルフェニルである。
【００２９】
アリールアルキルは、アリール置換アルキル基、好ましくはフェニルメチルまたは２−フェニルエチルである。
【００３０】
ヘテロアリールまたはヘテロ環式芳香族基は、好ましくは、Ｏ、Ｎ、Ｓからの１つ以上のヘテロ原子を有する、５から７員不飽和へテロ環である。
【００３１】
ヘテロアリール（これから式Ｉの化合物において生じる置換基が誘導され得る）の例は、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、１，３−オキサゾール、１，２−オキサゾール、１，３−チアゾール、１，２−チアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピラン、チオピラン、１，４−ジオキサン、１，２−オキサジン、１，３−オキサジン、１，４−オキサジン、１，２−チアジン、１，３−チアジン、１，４−チアジン、１，２，３−トリアジン、１，２，４−トリアジン、１，３，５−トリアジン、１，２，４，５−テトラジン、アゼピン、１，２−ジアゼピン、１，３−ジアゼピン、１，４−ジアゼピン、１，３−オキサゼピンまたは１，３−チアゼピンである。
【００３２】
ヘテロ環から得られる基は、任意の適切な炭素原子を介して結合し得る。環窒素原子上に水素原子（または置換基）を有する窒素へテロ環、例えばピロール、イミダゾール等も、特に、関連した窒素へテロ環が炭素原子に結合している場合、環窒素原子を介して結合し得る。チエニル基は、例えば、２−チエニル基または３−チエニル基の形、フラン基は、例えば、２−フリル基または３−フリル基の形、ピリジル基は、例えば、２−ピリジル基、３−ピリジル基または４−ピリジル基の形であり得る。
【００３３】
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素、好ましくはフッ素または塩素である。
【００３４】
Ｒ¹は、好ましくは、水素、（Ｃ₂−Ｃ₄）−アルキル（これは、１つ以上の置換基Ｒ⁶により置換され得る）、または（Ｃ₁−Ｃ₂）−アルキルアリールであり、そしてＲ¹は特に好ましくはアリールメチルであり、
Ｒ²は、好ましくは（Ｃ₂−Ｃ₄）−アルキル（これは１つ以上の置換基Ｒ⁶により置換され得る）または（Ｃ₁−Ｃ₂）−アルキルアリールであり、Ｒ²は特に好ましくはアリールメチルであり、
さらに、Ｒ¹およびＲ²は好ましくは、それらを担持する窒素原子と共に、他のヘテロ原子を全く含まないかまたはＮ、Ｏ、Ｓシリーズからの唯１つの他のヘテロ原子を好ましくは含む、５−７員環を形成する。この型の非常に特に好ましい環は、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ジメチルモルホリン、チオモルホリンまたはＮ−（Ｃ₁−Ｃ₂）−アルキルピペラジンであり、ここでのこれらの環はそれ自体、例えば、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキル、−ＮＲ⁸Ｒ⁹または−ＣＯＯＨにより置換され得る。
【００３５】
Ｒ³は、好ましくは、水素、ＣＯ−（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキルまたはＣＯ−アリールであり、Ｒ³は、非常に特に好ましくは水素である。
【００３６】
Ｒ⁴は、好ましくはアリール、（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキル（これは１つ以上の置換基Ｒ⁷により置換され得る）または−ＣＯ−Ｏ−アリールである。特に好ましいＲ⁴基は、アリールおよび１，２−ジヒドロキシプロピルである。
【００３７】
Ｒ⁵は好ましくは水素である。
【００３８】
Ｒ⁶は、好ましくは−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキル、−ＮＲ⁸Ｒ⁹または−ＣＯＯＨである。
【００３９】
Ｒ⁷は、好ましくは−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₁₀）−アルキル、フェノキシ、オキソ、特に好ましくは−ＯＨ、デシルオキシおよびフェノキシである。
【００４０】
アリールは、好ましくは、フェニル、チエニル、フリルおよびピリジルであり、フェニルが特に好ましく、これは全部、記載のように置換できる。好ましい置換基は、（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキル、ハロゲンおよび（Ｃ₁−Ｃ₃）−アルキルオキシおよび（Ｃ₁−Ｃ₂）−アルキレンジオキシである。アリール基上の好ましい置換基の数は、０、１または２であり；フェニル置換基は、好ましくは、メタまたはパラ位にあり、２つの置換基の場合には３および４位にある。
【００４１】
ｎは好ましくは０および２である。
【００４２】
いわゆる構造活性相関に関して、これに関して、プテリン骨格の４および６位は関連性があるようであると記載しなければならない。テトラヒドロプテリン（式（ｂ）と比較）の場合、例えば、６位におけるかさの大きな置換基、例えば置換フェニルは、物質の活性化を増加する。芳香族構造の場合（式（ａ）と比較）、活性の増加は、４位のアミノ置換基をジアルキル化またはジアラルキル化し、６位をアリール化した場合に優先的に観察される。
【００４３】
本発明は、一般式Ｉの化合物の全ての可能なエナンチオマーおよびジアステレオマー、並びに、２つ以上の立体異性体形の混合物、例えば、エナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの全ての比の混合物を包含する。
【００４４】
従って、本発明は、左旋性鏡像体としておよび右旋性鏡像体としての両方の、エナンチオ的に純粋な形、ラセミ体の形、および、全ての比の２つのエナンチオマーの混合物の形のエナンチオマーを包含する。シス／トランス異性が存在する場合、シス形およびトランス形の両方および全ての比のこれらの形の混合物が、本発明により包含される。個々の立体異性体は、所望である場合、慣用的な方法により、例えばクロマトグラフィーまたは結晶化により混合物を分画して、または、合成に立体化学的に純粋な出発物質を使用することにより、または立体選択的合成によって調製できる。立体異性体の分離の前に、所望により、誘導体化を実施し得る。立体異性体の混合物の分離は、式Ｉの化合物の段階で、または、合成中の中間体の段階で実施できる。可動水素原子が存在する場合、本発明は、式Ｉの化合物の全ての互変異性体形も包含する。
【００４５】
本発明は、対応する生理的または毒性的に許容される塩、特に医薬的に利用可能な塩も包含する。従って、酸性基を含む式Ｉの化合物は、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩またはアンモニウム塩の形であり得、これらの塩は、本発明に従って使用できる。前記の塩の例は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、またはアンモニアまたは有機アミン、例えばエチルアミン、エタノールアミン、トリエタノールアミンまたはアミノ酸との塩である。
【００４６】
１つ以上の塩基性（すなわちプロトン化できる）基を含む、式Ｉの化合物は、生理的に許容される無機または有機酸とのその酸付加塩の形であり得、本発明に従って、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、シュウ酸、酢酸、酒石酸、乳酸、サリチル酸、安息香酸、ギ酸、プロピオン酸、ピバル酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、スルファミン酸、フェニルプロピオン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、イソニコチン酸、クエン酸、アジピン酸等との塩として使用し得る。
【００４７】
式Ｉの化合物が、分子中に酸性基および塩基性基の両方を含む場合、本発明は、記載の塩形に加えて、内部塩またはベタイン（双性イオン）も含む。
【００４８】
塩は、式Ｉの化合物から、当業者に公知の慣用的なプロセスにより、例えば、溶媒または分散液中に有機または無機の酸または塩基と合わせることにより、または他の塩からアニオン交換またはカチオン交換により得ることができる。本発明はさらに、式Ｉの化合物の全ての溶媒和物、例えば水和物またはアルコールとの付加物、式Ｉの化合物の誘導体、例えば、エステル、プロドラッグおよび活性代謝物を包含する。
【００４９】
一般式Ｉの本発明に記載の化合物は、以下の合成スキームに示したように得ることができる。
【００５０】
【化１２】

このスキームは、以下に詳細に説明する。
【００５１】
一般式Ｉの化合物を合成するために、純粋な物質としての、または、例えばＤＭＦ、トルエンまたはテトラヒドロフランなどの溶媒中の、２，６−ジアミノ−４−クロロ−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジン（ＩＩ）を、２から２０倍過剰の一般式ＨＮＲ¹Ｒ²（ＩＩＩ）のアミンと、好ましくは室温（ＲＴ）と溶媒の沸点の間の温度で反応させる。別法として、反応はまた、等モル量のアミンを用いて、例えばトリエチルアミンまたはヒューニッヒ塩基などの補助塩基の存在下で実施できる。
【００５２】
得られた２，６−ジアミノ−４−（置換アミノ）−５−ｐ−クロロ−フェニルアゾピリミジン（ＩＶ）を、例えばメタノール、エタノールまたは水などの溶媒中、好ましくは、例えばＨＣｌまたは酢酸などの酸の存在下、または例えばアンモニアなどの塩基の存在下、例えばレーニー・ニッケル、二酸化白金または炭素上パラジウムなどの触媒により、１ないし２００ａｔｍの水素の圧力下で水素化する。
【００５３】
次いで、このように得られた２，５，６−トリアミノ−（置換アミノ）ピリミジン（Ｖ）を、例えばメタノール、エタノール、ＤＭＦまたは水などの溶媒中、Ｒ⁴基を含む特定のグリオキサールモノオキシム（ＶＩ）と混合し、この混合物を、変換が完了するまで室温と使用する溶媒の沸点の間である温度下で撹拌する。冷却後、懸濁液または溶液を、例えばアンモニアなどの塩基で塩基性とし、分離した沈降物を、吸引ろ過し、水で洗浄し、乾燥させる。
【００５４】
得られたプテリジンの溶液を、ＴＨＦ、メタノールまたはエタノールなどの溶媒中、例えばレーニー・ニッケル、二酸化白金または炭素上のパラジウムなどの触媒により、１ないし２００ａｔｍの水素の圧力下で水素化する。
【００５５】
Ｒ³および／またはＲ⁴置換基を導入するためのさらなる誘導体化は、当業者に公知のアシル化の標準的なプロセスにより実施できる。
【００５６】
４−アミノ−プテリジン誘導体の調製の上記の反応は主に、例えばＷＯ−Ａ−９７／２１７１１号に記載している。
【００５７】
本発明は同様に、式Ｉの化合物の調製のための上記プロセスに関する。
【００５８】
本発明は同様に、式Ｖ
【化１３】

で示される化合物に関する。
【００５９】
ここで、Ｒ¹およびＲ²は、前記に定義した意味を有する。
【００６０】
ＮＯレベルの上昇により生じ、従って、一般式Ｉの化合物を用いて本発明に従って処置できるか、または後者を使用して予防できる疾病は、特に、敗血性または出血性ショック、サイトカインによる腫瘍療法または肝硬変で生じるような血圧の病的な下降、またはＩ型糖尿病などの自己免疫疾患、およびアテローム動脈硬化症である。さらに、炎症疾患、例えば慢性関節リウマチおよび特に潰瘍性大腸炎およびインスリン依存性糖尿病および移植片拒絶反応があげられる。
【００６１】
以下の疾患も、一酸化窒素の産生増加に関連し、本発明に従って処置できる。心臓血管系では、これらは、アテローム硬化症、虚血後再灌流傷害、コクサッキーウイルス感染に基づいた心筋炎および心筋症；中枢神経系では、数種の神経炎、脳脊髄炎、ウイルス性神経変性疾患、アルツハイマー病、痛覚過敏、癲癇および偏頭痛；腎臓系では、急性腎不全および糸球体腎炎である。
【００６２】
さらに、一般式Ｉの化合物の適用領域は、胃および子宮／胎盤の領域および精子の運動性に影響を及ぼす領域の処置である。
【００６３】
従って、式Ｉの化合物およびその生理的に許容される塩、水和物、エステルおよび付加物は、動物、好ましくは哺乳動物、特にヒトに、単独で医薬として、または他の物質と互いにまたは共に混合物で使用できる。それ故、本発明はまた、特に、前記の病的状態の治療法または予防法用の医薬の製造における、式Ｉの化合物およびその生理的に許容される塩、水和物およびエステルの使用、および、ＮＯレベルを低下または正常化するための医薬の製造における使用に関する。
【００６４】
本発明は同様に、ＮＯシンターゼを阻害すための、式Ｉの化合物およびその生理的に許容される塩、水和物およびエステルの使用、前記の病的状態の治療法または予防法におけるその使用、およびＮＯ平衡の撹乱を正常化するためのその使用に関する。
【００６５】
同様に、式Ｉの化合物、その生理的に許容される塩、エステルおよび水和物およびエステルを単独で、慣用的な賦形剤および添加剤に加えて、他の物質と互いにまたは共に混合物で含む、医薬が包含される。
【００６６】
かかる他の治療活性物質の例は、β−受容体遮断薬、例えばプロパノロール、ピンドロール、メトプロロール；血管拡張薬、例えばカルボクロメン；鎮静薬、例えばバルビツール酸誘導体、１，４−ベンゾジアゼピンおよびメプロバメート；利尿薬、例えばクロロチアジド；強心薬、例えばジギタリス製品；血圧降下剤、例えば、ヒドララジン、ジヒドララジン、ＡＣＥ阻害剤、プラゾシン、クロニジン、ラウオルフィアアルカロイド；血中の脂肪酸レベルを低下させる薬剤、例えばベザフィブラート、フェノフィブラート；血栓症予防剤、例えばフェンプロクーモン；抗炎症物質、例えばコルチコステロイド、サリチル酸、またはプロピオン酸誘導体、例えばイブプロフェン；抗生物質、例えばペニシリンまたはセファロスポリン；ＮＯ供与体、例えば有機硝酸塩またはシドノンイミンである。
【００６７】
本発明の医薬は、例えば、丸剤、錠剤、フィルムコーティング錠、糖衣錠、顆粒剤、硬および軟ゼラチンカプセル剤、水性、アルコール性または油性溶液、シロップ、エマルションまたは懸濁液の形で経口的に、または、例えば坐剤の形で直腸的に投与できる。しかし、投与は、例えば皮下、筋肉内または静脈内に、注射溶液または点滴溶液の形で行なうこともできる。さらなる適切な投与形は、例えば、経皮的または局所的投与、例えば軟膏、チンキ、スプレーまたは経皮治療系の形で、または鼻腔スプレーまたはエアゾール混合物の形での吸入投与、または、例えば、マイクロカプセル、インプラントまたはロッドである。好ましい投与形態は、例えば、処置する疾病およびその重度に依存する。
【００６８】
本発明に記載の医薬は、医薬製品の製造に既知の標準的なプロセスにより製造できる。
【００６９】
この目的のために、１つ以上の式Ｉの化合物および／またはその生理的に許容される塩、エステルおよび水和物を、１つ以上の固体または液体医薬担体および／または添加剤または賦形剤と、所望であれば、治療または予防作用を有する他の活性医薬成分と組合せて配合し、適切な投与形または投与量形にし、次いでこれをヒト用医薬または脊椎動物用の医薬として使用できる。医薬製品は、治療または予防に有効な量の式Ｉの化合物および／またはその生理的に許容される塩、エステルおよび水和物を含み、これは通常、医薬製品の０．５から９０重量％の量である。
【００７０】
例えば、丸剤、錠剤、糖衣錠、および硬ゼラチンカプセル剤を製造するために、ラクトース、デンプン、例えばコーンスターチまたはデンプン誘導体、タルク、ステアリン酸、またはその塩等を使用できる。軟ゼラチンカプセル剤および坐剤の担体は、例えば、脂肪、ワセリン、半固体および液体ポリオール、天然または硬化油等である。溶液、例えば注射溶液、またはエマルションまたはシロップの製造に適切な担体の例は、水、生理的食塩水、アルコール、例えばエタノール、グリセロール、ポリオール、スクロース、転化糖、グルコース、マンニトール、植物油等である。式Ｉの化合物およびその生理的に許容される塩、エステルおよび水和物は凍結乾燥し得、得られた凍結乾燥物は、例えば、注射用の製品または点滴用の製品の製造に使用できる。マイクロカプセル、インプラントまたはロッドに適した担体の例は、グリコール酸と乳酸の混合ポリマーである。
【００７１】
医薬製品はまた、活性成分および担体の他に、慣用的な添加剤、例えば充填剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、湿潤剤、安定化剤、乳化剤、分散剤、保存剤、甘味剤、着色剤、香味剤、または芳香剤、増粘剤、希釈剤、緩衝物質、また溶媒または可溶化剤、または、徐放作用を達成するための手段、浸透圧を変化させる塩、コーティング物質または抗酸化剤を含み得る。
【００７２】
投与する式Ｉの活性成分および／またはその生理的に許容される塩、エステルまたは水和物の投与量は、個々の症例に依存し、慣用的な方法で最適な効果について個々の環境に適合すべきである。従って、処置する疾病の性質および重度、および、処置するヒトまたは動物の性、年齢、体重および個々の応答、使用する化合物の強度および作用時間、治療が急性であるか慢性であるか、または目的が予防であるかどうか、または式Ｉの化合物に加えて他の活性成分を投与するかどうかに依存する。一般に、約０．０１から１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１から１０ｍｇ／ｋｇ、特に０．３から５ｍｇ／ｋｇ（各場合とも、体重１ｋｇあたりのｍｇ）の１日量が、所望の効果を達成するために、約７５ｋｇの体重の成人への投与に適切である。１日量は、１回投与量で、または特に大量投与の場合、例えば２、３または４回の複数の単回投与量に分割し得る。個々の特徴に応じて、適宜、記載の１日量より上下に変動させることが必要であり得る。医薬製品は、通常、０．２から５００ｍｇ、好ましくは１から２００ｍｇの式Ｉの活性成分および／またはその生理的に許容される塩を含む。
【００７３】
式Ｉの化合物は、主に、酵素のテトラヒドロビオプテリン結合空洞における結合を介して、ＮＯシンターゼの種々のアイソフォームを阻害する。この特性のために、それらは、ヒト医学および脊椎動物医学における活性医薬製品として使用できるだけでなく、科学的ツールとして、または前記のＮＯシンターゼ阻害を目的とする生化学的研究の補助として、および診断目的に、例えば細胞試料または組織試料のインビトロでの診断に使用できる。式Ｉの化合物およびその塩、エステルまたは水和物はまた、他の活性医薬成分の調製の中間体として使用し得る。
【００７４】
（実施例）
以下の調製法および実施例は、それを制限することなく、本発明を説明する。
【００７５】
２，６−ジアミノ−４−クロロ−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジン
ｐ−クロロアニリン（２５．５ｇ、０．２ｍｏｌ）の６Ｎ ＨＣｌ（１００ｍＬ）の溶液を、０−５℃まで冷却し、ＮａＮＯ₂（１３．８ｇ、０．２ｍｏｌ）の水（４０ｍｌ）溶液を、撹拌しながら滴下して加えた。添加完了後、溶液をさらに１５分間撹拌し、反応の進行を、ヨウ素／デンプン紙（青の着色）を用いて調べた。過剰のＨＮＯ₂を、尿素（５ｇ）の添加により破壊した。ジアゾニウム塩溶液を、２，６−ジアミノ−４−クロロピリミジン（２６．０ｇ、０．１８ｍｏｌ）の水（５００ｍＬ）溶液に注ぎ、３０分間撹拌した。次いで、酢酸カリウム（７０ｇ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。沈降した生成物を吸引ろ過し、Ｈ₂Ｏで洗浄し、Ｐ₄Ｏ₁₀でデシケーター中真空で乾燥した。収量：黄色の固体４４．０ｇ（８１％）。ＤＭＦ／Ｈ₂Ｏから再結晶、融点：２６８℃。
【００７６】
２，６−ジアミノ−４−アルキルアミノ−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジン
一般的手順：
２，６−ジアミノ−４−クロロ−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジン（５．０ｇ、１６．６ｍｍｏｌ）および１０ｇのアミンのＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液を、７０℃の油浴中で５時間撹拌した。水（５０ｍＬ）の添加後、冷却し、沈降物を吸引ろ過し、水で洗浄し、乾燥させ、ＥｔＯＨまたはアセトン／水から再結晶した。
【００７７】
このようにして以下が得られた：
１）２，６−ジアミノ−４−ジエチルアミノ−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジン、融点１４５−１４８℃
２）２，６−ジアミノ−４−ジベンジルアミノ−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジン、融点１８５−１８６℃
３）２，６−ジアミノ−４−（モルホリン−４−イル）−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジン、融点２１９−２２１℃
４）２，６−ジアミノ−４−（ピペリジン−１−イル）−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジン、融点１９９−２０１℃
５）２，６−ジアミノ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジン、融点２１８−２２０℃。
【００７８】
２，５，６−トリアミノ−４−アルキルアミノピリミジン（塩酸塩）
一般的手順
１０ｍｍｏｌの２，６−ジアミノ−４−アルキルアミノ−５−ｐ−クロロフェニルアゾピリミジンのメタノール（７０ｍＬ）および濃アンモニア（１０ｍＬ）の溶液を、振とう装置中、レーニー・ニッケル触媒（３．５ｇ）の存在下、Ｈ₂雰囲気下で２日間還元した。触媒を、アルゴン雰囲気下でろ別し、ろ液を真空で蒸発乾固した。残渣をエーテルで処理し、ｐ−クロロアニリンを除去し、残りの固体を、メタノール性ＨＣｌ（１０％、５０ｍＬ）と共に一晩撹拌した。二塩酸塩を吸引ろ過し、真空のデシケーター中ＫＯＨ上で乾燥させた。
【００７９】
このようにして以下が得られた：
６）２，５，６−トリアミノ−４−ジエチルアミノピリミジン二塩酸塩、融点１３８−１４２℃
７）２，５，６−トリアミノ−４−ジベンジルアミノピリミジン二塩酸塩、融点１６５−１６７℃
８）２，５，６−トリアミノ−４−（モルホリン−４−イル）−ピリミジン二塩酸塩、融点２１５−２１８℃（分解）
９）２，５，６−トリアミノ−４−（ピペリジン−１−イル）−ピリミジン二塩酸塩、融点２３８−２４２℃
１０）２，５，６−トリアミノ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ピリミジン三塩酸塩、融点２２６−２３０℃（分解）
２−アミノ−４−アルキルアミノ−６−（Ｒ⁴）−プテリジン
一般的手順
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中Ｒ⁴基を含むアリールグリオキサールモノオキシム（７．５ｍｍｏｌ）の溶液を、２，５，６−トリアミノ−４−アルキルアミノピリミジン二塩酸塩（５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）の沸騰溶液に滴下して加え、この混合物を還流下で３時間煮沸した。冷却後、懸濁液または溶液を、濃アンモニアでｐＨ９−１０に調整し、分離した沈降物を吸引ろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。粗生成物を、ＥｔＯＨおよびＤＭＦ／Ｈ₂Ｏから再結晶した。
【００８０】
このようにして以下が得られた：
１１）２−アミノ−４−（ジメチルアミノ）−６−フェニルプテリジン、融点２４７−２５０℃
１２）２−アミノ−４−（ジメチルアミノ）−６−（４−メチルフェニル）−プテリジン、融点２５１−２５６℃
１３）２−アミノ−４−（ジメチルアミノ）−６−（４−メトキシフェニル）−プテリジン、融点２８０−２８４℃（分解）
１４）２−アミノ−４−（ジメチルアミノ）−６−メトキシメチルプテリジン、融点２３７−２３９℃
１５）２−アミノ−４−（ジエチルアミノ）−６−フェニルプテリジン水和物、融点２０３−２０５℃
１６）２−アミノ−４−（ジエチルアミノ）−６−（４−クロロフェニル）−プテリジン二水和物、融点２５０−２５４℃（分解）
１７）２−アミノ−４−（ジエチルアミノ）−６−（４−メトキシフェニル）−プテリジン水和物、融点２２０−２２２℃
１８）２−アミノ−４−（ジエチルアミノ）−６−（３，４−ジメトキシフェニル）−プテリジン水和物、融点１８２−１８５℃
１９）２−アミノ−４−（ジベンジルアミノ）−６−フェニルプテリジン二水和物、融点２２５−２２７℃
２０）２−アミノ−４−（ジベンジルアミノ）−６−（４−クロロフェニル）−プテリジン二水和物、融点２５０−２５３℃
２１）２−アミノ−４−（ジベンジルアミノ）−６−（４−メトキシフェニル）−プテリジン、融点２４５−２４７℃
２２）２−アミノ−４−（ジベンジルアミノ）−６−（３，４−ジメトキシフェニル）−プテリジンヘミ水和物、融点２００−２０１℃
２３）２−アミノ−４−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）−６−フェニルプテリジン三水和物、融点１７７−１７８℃
２４）２−アミノ−４−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）−６−（４−クロロフェニル）−プテリジン三水和物、融点１８９−１９２℃（分解）
２５）２−アミノ−４−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）−６−（４−メトキシフェニル）−プテリジン水和物、融点２０７−２１０℃（分解）
２６）２−アミノ−４−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）−６−（３，４−ジメトキシフェニル）プテリジン水和物、融点１５８−１６０℃
２７）２−アミノ−４−（モルホリン−４−イル）−６−フェニルプテリジン水和物、融点２２４−２２７℃（分解）
２８）２−アミノ−４−（モルホリン−４−イル）−６−（４−クロロフェニル）−プテリジン塩酸塩水和物、融点２５２−２５４℃（分解）
２９）２−アミノ−４−（モルホリン−４−イル）−６−（４−メトキシフェニル）−プテリジン塩酸塩水和物、融点２３８−２４０℃（分解）
３０）２−アミノ−４−（モルホリン−４−イル）−６−（３，４−ジメトキシフェニル）プテリジン三水和物、融点２１８−２２０℃（分解）
３１）２−アミノ−４−（ピペリジン−１−イル）−６−フェニルプテリジン二水和物、融点２０９−２１１℃
３２）２−アミノ−４−（ピペリジン−１−イル）−６−（４−クロロフェニル）−プテリジン二水和物、融点２４５−２４７℃（分解）
３３）２−アミノ−４−（ピペリジン−１−イル）−６−（４−メトキシフェニル）−プテリジン水和物、融点２１１−２１４℃（分解）
３４）２−アミノ−４−（ピペリジン−１−イル）−６−（３，４−ジメトキシフェニル）プテリジン塩酸塩二水和物、融点２３８−２４１℃（分解）
３５）２−アミノ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−フェニル−プテリジンヘミ水和物、融点２４５−２４７℃（分解）
３６）２−アミノ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（４−クロロフェニル）プテリジンヘミ水和物、融点２７７−２７９℃（分解）
３７）２−アミノ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（４−メトキシフェニル）プテリジンヘミ水和物、融点２２８−２３０℃（分解）
３８）２−アミノ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−６−（３，４−ジメトキシフェニル）プテリジン二水和物、融点１４８−１５１℃（分解）
３９）２−アミノ−４−（ピロリジン−１−イル）−６−（４−メトキシフェニル）−プテリジン二水和物、融点２４３−２４６℃（分解）
２−アミノ−４−アルキルアミノ−６−（Ｒ⁴）−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン
一般的な手順
ＴＨＦ（２５ｍｌ）中で還元するプテリジン（３ｍｍｏｌ）溶液を、水素の取込みが止まるまで、振とう装置中でＰｔＯ₂（０．１０ｇ）／Ｈ₂を用いて触媒的に撹拌した。触媒をろ別し、ろ液を蒸発乾固し、残渣を、数時間撹拌しながらメタノール性ＨＣｌで処理した。形成した結晶を吸引ろ過し、エーテルで洗浄し、真空中デシケーター中で乾燥させた。
【００８１】
このようにして以下が得られた：
４０）２−アミノ−４−（モルホリン−４−イル）−６−（４−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン塩酸塩ヘミ水和物、融点２１９−２２２℃
４１）２−アミノ−４−（モルホリン−４−イル）−６−（３，４−ジメトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン塩酸塩水和物、融点１６８℃
４２）２−アミノ−４−（モルホリン−４−イル）−６−フェニル−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン二塩酸塩ヘミ水和物、融点２００−２０３℃
４３）２−アミノ−４−（ピペリジン−１−イル）−６−（４−クロロフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン三塩酸塩水和物、融点１７０℃
４４）２−アミノ−４−（ピペリジン−１−イル）−６−（４−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン三塩酸塩水和物、融点２１８−２２０℃
４５）２−アミノ−４−（ピペリジン−１−イル）−６−フェニル−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン二塩酸塩二水和物、融点１７８−１８２℃
４６）２−アミノ−４−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）−６−フェニル−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン三塩酸塩水和物、融点１１５℃
４７）２−アミノ−４−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）−６−（４−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン二塩酸塩二水和物、融点１２０℃
４８）２−アミノ−４−（ジエチルアミノ）−６−（４−クロロフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン二塩酸塩ヘミ水和物、融点１３８℃
４９）２−アミノ−４−（シクロヘキシルメチルアミノ）−６−（４−クロロフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン二塩酸塩水和物、融点１６０℃
一般式Ｉの化合物による精製一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）の活性阻害は、以下のように決定できる。
【００８２】
この活性アッセイにおいて、精製ＮＯＳによるＮＯ形成の共生成物であるＬ−シトルリンを定量的に測定する。³Ｈ−放射標識Ｌ−アルギニンを酵素反応の基質として使用し、³Ｈ−Ｌ−シトルリンおよびＮＯに変換する。酵素インキュベート完了後、生成したＬ−シトルリンを、反応混合物からイオン交換クロマトグラフィーにより未使用のＬ−アルギニンから取出し；³Ｈ活性を液体シンチレーションにより測定し、次いでＬ−シトルリンの量に対応させ、これはＮＯＳ活性の直接的な測定値である。
【００８３】
酵素反応を実施する基本媒体はＴＥ緩衝液（トリエタノールアミン、ＥＤＴＡ、ｐＨ７．０）である。
【００８４】
各インキュベートの最終容量は１００μｌである。反応混合物は、以下の６つの成分を氷上で混合することにより得られる。
【００８５】
１．トリエタノールアミン、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、ＥＤＴＡ、Ｌ−アルギニン、カルモジュリンおよびフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）を含む、「ＲＥＡ−Ｍｉｘ」（ｐＨ７．０）；
２．新しく調製した還元形のβ−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）のストック溶液；
３．（６Ｒ）−５，６，７，８−テトラヒドロ−Ｌ−ビオプテリン二塩酸塩ストック溶液（ＢＨ₄）またはＢＨ₄を含まない実験では代わりにＴＥ緩衝液；
４．ブタ小脳またはブタ肝臓からの精製ＮＯシンターゼ；
５．Ｌ−［２，３，４，５−³Ｈ］−アルギニン塩酸塩ストック溶液（１．５２６ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）；
６．試験する物質。
【００８６】
１００μｌのインキュベート容量中の成分の最終濃度は：トリエタノールアミン５０ｍＭ、ＥＤＴＡ ０．５ｍＭ、ＣａＣｌ₂ ２２６μＭ、ＭｇＣｌ₂ ４７７μＭ、Ｌ−アルギニン５０μＭ、カルモジュリン０．５μＭ、ＦＡＤ ５μＭ、ＮＡＤＰＨ １ｍＭ、ＢＨ₄（添加した場合）２μＭ、試験物質１００μＭ。
【００８７】
成分を氷上で混合した後、反応混合物を、直ちに、３７℃の水浴中で１５分間インキュベートした。ＩＣ₅₀値の決定のために、それを、５ｋＵ／ｍｌのカタラーゼの存在下で４５分間インキュベートした。このインキュベート時間後、反応を、９００μｌの氷冷「停止緩衝液」（２０ｍＭ酢酸ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ５．５）の添加により停止し、混合物（全容量はここで１．０ｍｌ）を氷上に置いた。未反応³Ｈ−Ｌ−アルギニンを除去するために、混合物を、前以て洗浄し、２ｍｌの停止緩衝液で平衡化しておいた、ＤｏｗｅｘＡＧ５０ＷＸ−８（１００−２００メッシュ）０．８ｍｌを含むイオン交換カラムにのせた。試料をのせた後、カラムを、各回１ｍｌの水で２回溶出した。試料の流出物および溶出液を、シンチレーション容器に集め、精製した（全容量３ｍｌ）。９ｍｌのシンチレーション溶液を、３ｍｌの測定水溶液に加え、均一な混合物を、Ｔｒｉｃａｒｂ２５００ＴＲ（パッカード）液体シンチレーションカウンターで、各試料について１分間測定した。試験する物質に見られる活性を、対照の活性の比率として記載した。各物質を、２μＭのテトラヒドロビオプテリンの存在下で１００μＭの濃度でアンタゴニスト作用について、およびテトラヒドロビオプテリンの非存在下でＮＯＳに対するアゴニスト作用について試験した。
【００８８】
全てのインキュベートは、三連で実施した。各実験を３回、異なる酵素調製物を用いて繰返した。いくつかの結果を、以下の表１に示す。
【００８９】
【表１】

さらに、３つの既知のヒトＮＯＳアイソフォームに対するアンチプテリン阻害剤の相対的選択性を測定した。このように実施して、ＮＯＳ−ＩＩ／ＮＯＳ−ＩおよびＮＯＳ−ＩＩＩ／ＮＯＳ−Ｉに対するＩＣ₅₀値を形成した（表２と比較）。
【００９０】
データにより、この物質は、ＮＯＳ−ＩＩと比較したＮＯＳ−Ｉの阻害の選択性の増加およびＮＯＳ−ＩＩＩと比較した選択性の増加が示される。
【表２】

ａ 酵素阻害は３００μＭまで完了せず（外挿したＩＣ₅₀値）

Claims (8)

1. 式Ｉを有する化合物であって、
   

   

   ［式中、Ａは、式
   

   

   で示される架橋であり、
   Ｒ¹は水素またはＣ_１‐Ｃ_２０アルキルであり、そして
   Ｒ²はＣ_１‐Ｃ_２０アルキルまたはシクロヘキシルメチルであるか、
   または、Ｒ¹およびＲ²は、それらを担持する窒素原子と共に、ピペリジン、またはモルホリン環を形成し、
   Ｒ³は水素であり、
   Ｒ⁴は１，２−ジヒドロキシプロピル、フェニル、またはアルキルフェニル、アルコキシフェニル、並びにハロゲン化フェニルであり、
   Ｒ⁵は水素であり］、
   全てのその立体異性体、互変異性体形、もしくは全ての比のそれらの混合物の形態の化合物、又は、その生理的に許容される塩もしくは水和物。
2. 慣用的な賦形剤および添加剤に加えて、請求項１に記載の式Ｉの化合物を含み、さらなる活性成分を含んでもよい医薬。
3. 卒中、血圧の病的下降、潰瘍性大腸炎、移植片拒絶反応、腎炎、再灌流傷害、梗塞傷害、心筋症、アルツハイマー病、癲癇、偏頭痛、または、種々の病因発生による神経炎の治療および予防のための、請求項２に記載の医薬。
4. 前記血圧の病的下降が、敗血症ショックまたはサイトカインによる癌療法における血圧の病的下降である、請求項３に記載の医薬。
5. ＮＯシンターゼ阻害剤としての請求項２に記載の医薬。
6. 卒中、血圧の病的下降、潰瘍性大腸炎、移植片拒絶反応、腎炎、再灌流傷害、梗塞傷害、心筋症、アルツハイマー病、癲癇、偏頭痛、または、種々の病因発生による神経炎の診断薬の製造のための、請求項１に記載の化合物の使用。
7. 前記血圧の病的下降が、敗血症ショックまたはサイトカインによる癌療法における血圧の病的下降である、請求項６に記載の使用。
8. 式ＩＩ
   

   

   で示される化合物を、式ＩＩＩ
   ＨＮＲ¹Ｒ² （ＩＩＩ）
   で示される化合物と反応させ、式ＩＶ
   

   

   で示される化合物を得、そして、該式ＩＶで示される化合物を、接触還元により、式Ｖ
   

   

   で示される化合物に変換し、これを式ＶＩ
   

   

   で示される化合物と反応させた後に水素化すると、式Ｉの化合物が得られ、これは、適切な誘導体化により、所望の式Ｉの化合物またはその生理的に許容される塩、水和物、およびアルコールとの付加物に変換でき、ここでの置換基は請求項１に記載の意味を有する、請求項１に記載の式Ｉの化合物の調製方法。