JP4865539B2 - E1不死化細胞の培養物及び該培養物を培養して該培養物から得られる産物の収量を増加させる方法 - Google Patents
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Description
Xieら(2002)非特許文献1には、E1不死化細胞を無血清で懸濁培養する方法が開示されている。
本発明の方法は、概して、本発明に従う細胞に関する技術分野において説明されている方法で得られる収量と比較して、細胞からの産物の収量を増加させるものである。好ましくは、無血清培地を本発明に従う方法における少なくとも一部の時間において使用する。好ましくは、培地は動物由来のものではなく遺伝子組み換えで生産されたタンパク質のみを含有する。そのような培地は種々の供給元から市販されている。本発明の一実施態様においては、VPRO培地(JRH Biosciences)を流加方法又は(供給)灌流方法に使用する。
本発明の方法は、好ましくは、本発明の細胞において産物を生産するために使用される。本発明の方法は、抗体に加えて他のタンパク質(国際公開第00/63403号パンフレット)の生産の改善に使用することができる。タンパク質の製造のために、本発明の細胞は、適度に前記タンパク質をコードする核酸を、実施可能であるように、前記タンパク質の発現を推進することが可能なエレメントと共に含む。さらに、該方法は、E1領域の欠損を有する組み換えアデノウイルスベクターの生産の改善のために使用することができ、その場合、確立された方法論(例えば、米国特許第5,994,128号明細書、国際公開第01/005945号パンフレット)に従い、当業者に既知である補体細胞として細胞を使用する。また、本発明に従う方法を使用して、他の(アデノウイルスではない)ウイルスの細胞内での増殖方法(国際公開第01/38362号パンフレット)を改善することができる。従って、本発明に従う産物は抗体、エリスロポエチンなどの組換えタンパク質に加えて、E1領域の欠損を有する組み換えアデノウイルスベクター、又は他のウイルスであってもよい。
本発明に従う細胞は、アデノウイルス由来E1配列で不死化した細胞であり、該細胞は本明細書ではE1不死化細胞とも称される。当該細胞はアデノウイルスのE1A領域の少なくとも機能的な部分を発現し、好ましくは、E1B領域の少なくとも機能的な部分も発現する。E1Aタンパク質は形質転換活性を有し、E1Bタンパク質は抗アポトーシス活性を有する。本発明に従う細胞は、肺細胞、腎細胞、羊膜細胞を含むいずれの細胞由来であってもよいが、好ましくは網膜細胞由来である。本発明に従う細胞は胚性網膜細胞由来であってもよい。好ましくは、本発明に従う細胞はヒト細胞である。胚性網膜細胞の不死化方法は本技術分野において開示されている(米国特許第5,994,128号明細書)。従って、アデノウイルス由来E1配列で不死化した網膜細胞はその方法によって得ることができる。特定の好ましい実施態様において、本発明の細胞は、PER.C6細胞などのE1不死化HER細胞由来である。本願におけるPER.C6細胞とは、細胞の上流もしくは下流の継代由来の、又は細胞の上流もしくは下流の継代の子孫由来の細胞を意味し、ECACC No.96022940の下に寄託されている。さらに、ts125変異を有するE2A領域も前記細胞内に存在してもよい(米国特許第6,395,519号明細書参照)。PER.C6細胞由来の細胞は、組み換えアデノウイルス又はその他のウイルスに感染したPER.C6細胞であってもよく、組み換え核酸を導入したPER.C6細胞、例えば、所定のタンパク質をコードする核酸が、実施可能であるように、プロモーター及びポリAシグナルなどのその発現を駆動することが可能な配列に連結されている発現カセットを含むPER.C6細胞であってもよく、好ましくは、前記細胞は、当業者に既知である標準な手法に従い選択することができる安定したクローン由来である。当該クローンの培養は、前記組み換え核酸によってコードされるタンパク質を生産することが可能である。
一態様において、本発明は、本発明に従う細胞を培養する方法を提供し、該方法では、本発明に従う供給計画によって、特定のアミノ酸を培養プロセスの間に添加して、濃度が最適なプロセス及び産物の収量のために制限されたか、又は制限されることになるアミノ酸を補充する。アミノ酸は、総ての天然に生ずるD及びLの両方の立体異性体のαアミノ酸およびそれらの誘導体を意味するものである。誘導体は、アミノ酸に付いた別の分子又は原子を有するアミノ酸として定義される。誘導体には、例えば、アミノ基のアセチル化、カルボキシル基のアミノ化、又はシスチンを形成する2個のシステインの硫黄残基の酸化が含まれる。さらに、アミノ酸誘導体には、エステル、塩化物、硫酸塩といった塩などに加えて水和物が含まれてもよい。当業者であれば、特定のアミノ酸が本明細書に記載されている場合、誘導体も使用してもよく、該誘導体も本発明の範囲内に含まれることが理解できる。糖、成長因子、ビタミンなどの他の成分も添加して、本発明に従う方法を改良してもよい。
一態様において、本発明は、アデノウイルスE1配列によって不死化した細胞において産物を培地内で製造する方法を提供し、該方法において、前記産物は、組換えタンパク質、ウイルス、及びE1領域における欠損を有する組み換えアデノウイルスからなる群より選択され、前記方法は、少なくともロイシン、セリン、イソロイシン、アルギニン、メチオニン及びシスチンを培地に添加する工程を含むことを特徴とする。一態様において、本発明は、アデノウイルスE1配列によって不死化した細胞を培養する方法を提供し、前記細胞は懸濁して培養することが可能であるものであって、該方法は、細胞を培養している間に少なくとも一度、グルコース、グルタミン、リン酸塩、ロイシン、セリン、イソロイシン、アルギニン、メチオニン、シスチン、バリン、リジン、スレオニン及びグリシンからなる群から選択される少なくとも1種の培地成分の濃度を決定する工程と、細胞を培養している間に、濃度を前の工程で決定した少なくとも1種の成分が枯渇するとき又は枯渇する前に培地に成分を添加する工程とを含み、添加する工程において、添加される成分は、少なくともグルコース、グルタミン、リン酸塩、ロイシン、セリン、イソロイシン、アルギニン、メチオニン、シスチンを含む。本明細書で使用される「枯渇」とは、培地内の開始時の濃度の30%又はそれ未満の濃度を成分が有する時間として定義される。これらの態様において、グルコース、グルタミン、リン酸塩、ロイシン、セリン、イソロイシン、アルギニン、メチオニン、及びシスチンからなる群から選択される少なくとも1種の培地成分の濃度を決定することが、バリン、リジン、スレオニン及びグリシンからなる群から選択される成分のみ決定することよりも好ましい。特定の実施態様において、本発明に従う少なくとも2種の培地成分の濃度を最初の工程において決定する。特定の実施態様において、添加される成分は、さらに1種又は複数のバリン、リジン、スレオニン、グリシン、アスパラギン、チロシン、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、カルシウム、Long R3 IGF-1、Long EGFおよびインスリンを含む。特定の実施態様において、成分が、最終濃度で、10x106細胞/ml当たりの新たに添加される成分のミリモル/lで、グルコースでは6.0、グルタミンでは、最初の供給においては2.60、その後の供給においては1.75、リン酸塩では0.70、ロイシンでは0.66、セリンでは、最初の供給においては1.10、その後の供給においては0.55、イソロイシンでは0.50、アルギニンでは0.46、メチオニンでは0.23、及びシスチンでは0.25で添加される。更なる実施態様では、下記の成分が、最終濃度で、10x106細胞/ml当たりの新たに添加される成分のミリモル/lで、バリンでは0.45、リジンでは0.44、及びスレオニンでは0.30で、さらに添加される。更なる実施態様において、下記の成分が、最終濃度で、10x106細胞/ml当たりの新たに添加される成分のミリモル/lで、アスパラギンでは0.10、チロシンでは0.13、ヒスチジンでは0.10、フェニルアラニンでは0.02、及びトリプトファンでは0.06で、さらに添加される。さらに、カルシウムも、最終濃度で、10x106細胞/ml当たりの新たに添加される成分のミリモル/lで0.02添加してもよい。IGF、EGF、及びインスリンなどの増殖因子、又はそれらの誘導体も培地中に入れるのに適している。上記成分の添加量は、33%又はそれ未満の、好ましくは20%又はそれ未満の、より好ましくは10%又はそれ未満の、さらにより好ましくは5%又はそれ未満の成分当たりの許容誤差を有してもよい。量は、10x106細胞/ml当たりで示され、細胞/mlの数に直線的に依存する。好ましい実施態様において、前記成分は、48時間と、濃度が前の工程で決定された少なくとも1種の培地成分が枯渇する時との間に添加される。特定の実施態様において、前記添加は24時間とちょうど枯渇する前との間に行われる。特定の態様において、本発明は、本発明に従う方法を提供し、該方法において、前記細胞は、少なくとも500mg/リットル、好ましくは少なくとも700mg/l、より好ましくは少なくとも850mg/l、さらにより好ましくは少なくとも1000mg/l、さらにより好ましくは少なくとも1250mg/l、さらにより好ましくは少なくとも1500mg/lさらにより好ましくは少なくとも1750mg/l、さらにより好ましくは少なくとも2000mg/lのレベルになるように培地中に分泌される組み換えイムノグロブリンを発現する。概して、本発明に従う培地成分の添加によって、すなわち、例えば流加方法では、生産される産物の収量が、全く成分を添加しない方法、すなわちバッチ方法と比較して、少なくとも1.5倍、好ましくは少なくとも2倍、より好ましくは少なくとも2.5倍、さらにより好ましくは約3倍又はそれよりはるかに高い量増加する。
別の方法として、本発明の別の態様において、全培地を交換してもよい。アデノウイルスE1配列によって不死化した網膜細胞由来の細胞にこのことを適用した場合、予期しない高い生細胞密度を保持することができることが示される。培地交換を、当業者に既知のいずれの手段によって行ってもよく、該手段としては、特に制限されないが、遠心分離、濾過などによる細胞の収集後、細胞を新鮮な培地に再懸濁することが挙げられる。別の方法として、灌流システムを使用してもよく、該システムでは、セントリテック(centritech)遠心分離などの細胞分離装置を用いて、又はホロー・ファイバー・カートリッジ内を通過させることなどによって培地を連続的に又は断続的に交換する。従って、本発明の別の態様は、アデノウイルスE1配列によって不死化した胚性網膜細胞由来の細胞を培養する方法を提供することにあり、該方法は、培地を、1日(24時間)当たり0.2〜3、好ましくは0.5〜3の培養ボリュームの割合で交換することを特徴とする。本方法を用いて得られた培養物は、好ましくは20x106細胞/ml以上、より好ましくは30x106細胞/ml以上の生細胞密度を有する。特定の態様において、そのような培養物は40x106細胞/ml以上の細胞密度を有する。特定の態様において、そのような培養物を用いて、組み換え抗体を、少なくとも150mg/l/日の収量で、好ましくは少なくとも200mg/l/日の収量で、より好ましくは少なくとも300、400、又は500mg/l/日の収量で製造する。当然、本発明に従う他の産物も当該方法によって製造できる。ここでは、毎日1回培地の全ボリュームを交換することによって、少なくとも30x106生細胞/mlが支持され、抗体の収量が500mg/L/日以上(750mg/l/日まで)となることが示されている(図5)。毎日1回全部の培地を交換することは、1日当たり3ボリュームの連続した灌流の割合に相当し、連続灌流システムがおよそで少なくとも150〜200mg/L/日を生じることができることを意味する。この灌流の割合を減じ、それによって抗体の収量を増加させる(抗体が分泌される容積を減らすことによって)一の方法は、必須成分で新鮮な培地を補うことである(供給−灌流(fed-batch)として知られている)。PER.C6細胞などの抗体産生E1不死化細胞、クローンのためのこれらの成分は本明細書において特定され(実施例2参照)、それ故に本発明の別の態様は、そのような供給−灌流システムを提供することにあり、該システムにおいて、本発明に従う供給計画が使用される。供給−灌流方法の通常の不利益は毒性のある代謝副産物(乳酸塩及びアンモニアなど)が作られることであり、それによって、細胞の生存率及び産物の収量が低くなる。多くの場合、高い灌流割合での高い細胞濃度では、これらの副産物を除去する必要がある。本発明に従う、PER.C6細胞などのE1不死化細胞、クローンで実証された1の利益は、それらの細胞及びクローンが、濃度が問題とならないように乳酸塩及びアンモニアを利用することができることである(図3A参照)。従って、1日に1回又は2回培地を交換することによって少なくとも500mg/l/日の抗体の収量を得ることができる。別の方法として、毎日例えば1ボリュームの連続灌流割合と、供給の濃縮物(feed concentrate)での培地の補充とを共に用いること(供給−灌流)によって、このことを達成することができる。これは、細胞のブリード(bleed)(細胞の集団の特定のパーセンテージを取り除くこと)と好都合に組み合わせることができる。
細胞及び/又は細胞株を遺伝子組み換えして所定のタンパク質を発現する方法及びベクターは当業者に既知であり、例えば、種々の技術がCurrent Protocols in Molecular Biology, Ausubelら., eds.(Wiley & Sons, New York, 1988, 年4回更新)及びSambrookら, Molecular Cloning: A Laboratory Manual(Cold Spring Laboratory Press, 1989)に示されている。一般的な及び標準の細胞培養技術は当業者に既知であり、例えば、R.I. Freshney, Culture of animal cells:A manual of basic technique, fourth edition(Wiley-Liss Inc., 2000, ISMN 0-471-34889-9)に記載されている。特に断りがない限り、そのような標準技術に従う。
本実施例ではPER.C6細胞を培養した。10%FBS含有DMEM(Invitrogen)中の付着性培養物から直接移すことによって無血清培地に適応させた。簡潔に言うと、サブコンフルエントな状態の対数期の細胞をトリプシン処理し、無血清培地で1回洗浄し、25mlのExCell-525無血清培地(JRH Biosciences)を入れた0.2μフィルター(Corning)を備えた250mlのEnrlenmeyerフラスコに特に断りがなければ0.3〜0.5x106ml-1の開始細胞濃度で直接接種した。培養物をEnrlenmeyerフラスコ内で2〜3日ごとに継代することによって対数増殖期に維持した。フラスコを37℃、5%CO2の加湿インキュベーター内にて磁気振盪機プラットフォーム(Infors)上で100rpmで振盪した。培養物を1000rpmで5分間遠心することによって継代した。上清を取り除き、ペレットを残存する培地に再懸濁した。新鮮な冷却した培地(4℃)を添加し、適当な細胞濃度で新しいフラスコに接種した。無血清培地に移した後、培養物を2〜4週間継代させて完全に適応させ、その後、無血清細胞バンクを構築した。総ての実験をこの細胞バンク由来の細胞を用いて開始した。
バイオリアクターでの培養を2Lの可動範囲を有する3Lの反応器(Applikon)内で行った。温度をヒート・ブランケットによって37℃に維持した。溶存酸素濃度(dO2)を、50%の空気飽和で、注入ガス組成をヘッドスペースによって調整し、微小孔のスパージャーで断続的に散布することによって制御した。開始培養pHを微小孔のスパージャーでCO2を添加することによって7.3に制御した。培養pHの下限を、培養pHを下方へ流れさせる(下限に達しない)ように6.7に設定した。培養物を2つのマリン・インペラーによって75rpmで攪拌した。プロセスデータをBioExpert software(Applikon)によって取得した。
細胞の数及び生存率の測定を、CASY自動細胞カウンター(Sharfe Systems)を用いて行った。グルコース、乳酸塩、アンモニア及びリン酸塩の濃度をEktachem IIアナライザー(Kodak)と細胞のない培養上清を用いて決定した。アミノ酸濃度を、Wandelen及びCohen(1997)に記載されている改変したAccuTag HPLC法(Waters)を用いて決定した。遠心した細胞上清の一定分量(200μl)を-20℃で1mlの凍結バイアル(Nalgen)内で必要となるまで保存した。各実験由来のサンプルを同時に分析して実験のバラツキを回避した。浸透圧を凝固点降下法の浸透圧計(Osmomat 030-d,Gonotec)で測定した。抗体濃度をサンドウィッチタイプELISAによって決定した。簡単に言うと、プレートを2μg ml-1のカッパ軽鎖に対するマウス抗ヒトIgG(Pharmingen)で被覆し、一晩4℃でインキュベートした。重鎖に対するHRP抱合マウス抗ヒトIgG(Pharmingen;1:500)を検出抗体として1時間37℃で用い、OPD(Sigma)を基質として用いた。インキュベーション工程間の洗浄を0.05%Tween20のPBS溶液を用いて行った。サンプルを0.1%BSAを添加した洗浄バッファーで希釈した。定量を10〜400ng ml-1の較正範囲を用いて、IgG1の参照標準と比較した。プロテインAで精製した抗体サンプルの品質分析を等電点電気泳動法(IEF)と変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動法(SDS-PAGE)を用いて行った。グリカン分析では、N結合グリカンを、IgGサンプルの20mMリン酸ナトリウム溶液(pH7.2)内でのPNGase F処理によって除去し、Applied Biosystems Voyager DE ProマススペクトロメーターでのリフレクターモードのMALDI-MSで分析した。マトリックスはアセトニトリル/水/トリフルオロ酢酸が50/50/0.1である溶液中の2,5−ジヒドロキシ安息香酸(10mg ml-1)であった。スペクトルをポジティブイオンモードで得、グリカンをナトリウム付加体([M+Na]+)として検出した。
バッチ培養及び流加培養における代謝産物の利用及び生産の細胞特有の速度を下記等式:
qs = (C2 - C1) / (t2 - t1) x [(X2 - X1) / ln(X2 - X1)]に示す細胞濃度の対数平均値を使用して計算した。
この式において、Cは代謝産物の濃度(マイクロモル/l)、tは時間(日)、及びXは生存細胞濃度である。グルタミンの自然分解から成る速度定数は、分解が速度を計算する時点で重要でないため含めなかった(データ示さず)。グルコース当りの生産された乳酸塩の生産係数(Ylac/glc)、グルタミン当りの生産されたアンモニアの生産係数(Yamm/gln)、グルタミン当りの生産されたアラニンの生産係数(Yala/gln)を下記等式:
Ylac/glc = qlac / qglc
Yamm/gln = qamm / qgln
Yala/gln = qala / qgln
から計算し、モル/モルで表した。
最も簡単な生産方法はバッチ培養である。しかしながら、この培養は生存細胞濃度に制限され、それ故に多くは栄養物の制限により産物の収量が達成できる。異なる細胞濃度での鍵となる栄養物の利用の細胞特有の速度を計算し、細胞増殖に対して栄養物が最適に利用される細胞濃度でバッチ培養を開始することによって、PER.C6又はPER.C6由来サブクローンのバッチ培養の最大最終細胞濃度増加させる方法が示される。
細胞をExCell(商標)525培地(JRH Biosciences)内で維持し(GTM-3培地(Sigma)内での細胞の維持も行った)、バッチ生産をExCell(商標)VPRO培地(JRH Biosciences,カタログ番号14560)内で実施した。バッチ生産のために細胞をExCell(商標)525からExCell(商標)VPROに直接移した。
流加方法は、生細胞濃度を増加させることによって、又は栄養物の濃縮物を供給して消費されるその栄養物を補充することで生産期間を延ばすことによって産物の収量を増加させることを目的とするものである。ここでは、PER.C6由来サブクローンの抗体収量を向上させる供給計画を示す。供給計画は、栄養物の供給の開始において最終細胞密度がより高く、全体の生産プロセスがより短くなるように、より高い開始細胞密度と組み合わせることができる。
流加プロセスを行った結果、乳酸塩及びアンモニアなどの毒性の代謝産物が蓄積され、培地の浸透圧が増加し、それによって、生細胞濃度及びプロセスの長さが最終的に制限され、したがって、産物の収量に影響を及ぼす可能性がある。流加方法を、連続的に培地を交換し、細胞を抜く(特定のパーセンテージの細胞集団を取り除く)ことによって高い細胞濃度を維持できる灌流方法に代えることができる。そのような方法での可能性のある欠点は必要とされる培地の容積が大きいことにより産物の濃度が比較的低いことと、細胞の生存率が比較的低いことがよくあることと、そのようなシステムを操作するのが比較的高度に複雑であることである。したがって、非常に高い生細胞濃度及び/又は特有の生産力を維持できる場合のみ、灌流方法を行うことは有利である。
バランスのとれた栄養物供給の準備はビタミン、微量元素及び脂質などの成分にまで及ぶ。ExCell VPRO、ビタミン、無機塩、微量元素、増殖因子、脂質及び植物の加水分解物の濃縮物(10x又は50x、両方行った)をJRH Bioscienceより得、実施例2に記載した基本の供給濃縮物(カルシウム及び増殖因子を抜いたもの)と共に添加した。ExCell VPRO濃縮物を添加して、最終濃度0.25Xを得た。
図7は、バイオリアクター対バッチ・コントロールにおけるクローン1での供給変更の結果を示す。最大生細胞数は10〜12x106 ml-1に達し、生細胞数は、19日目に培養を終えるまで8〜10x106細胞 ml-1に維持された(図7A)。抗体収量は、バッチでの0.4g L-1から流加方法では1.3 g L-1と3倍増加した(図7B)。
上記の実験において、産物の質を、等電点電気泳動法、SDS-PAGE、MALDI-TOF質量分析法及びHPAEC-PADを含む種々の方法によって検査した。総ての事例において、生産された抗体は基本的にはヒト型の糖鎖形成を示し、生産された抗体の構造の完全性は使用した方法に関係なく非常に良好であり、細胞数及び産物の収量が共により低い(Jonesら,2003)に報告されたものと非常に類似していた。したがって、本発明の方法によって得られる収量の増加は、産物の質の著しい低下を犠牲にしては得られるものではなかった。
流加方法のために開発した供給濃縮物も改良されたバッチ方法に使用する培地を補うために使用してもよい。流加方法由来の少なくとも1種の供給添加物で培地を補うことを、バッチの収量を向上させる他の手段で示した。供給濃縮物で培地を補う同様のアプローチも流加プロセスの間に供給添加物の数を減らし、それによってプロセスを簡略化するために使用してもよく、このことも他の手段によって示した。
Claims (25)
- ECACC 受託No.96022940の下寄託されている細胞で表されるヒト胚性網膜細胞を培養して、前記細胞からの産物の収量を増加させる方法であって、前記細胞は懸濁して培養することが可能であり、該方法は、
a)グルコース、グルタミン、リン酸塩、ロイシン、セリン、イソロイシン、アルギニン、メチオニン、シスチン、バリン、リジン、スレオニン及びグリシンからなる群より選択される少なくとも1種の培地成分の濃度を、該細胞を培養している間に少なくとも一度決定する工程と、
b)該細胞を培養している間、a)の工程で濃度を決定した少なくとも1種の成分が枯渇する際、又は枯渇する前に、培地に成分を添加する工程とを有し、添加する工程において、添加される成分は、少なくともグルコース、グルタミン、リン酸塩、ロイシン、セリン、イソロイシン、アルギニン、メチオニン及びシスチンを含む、前記細胞からの産物の収量を増加させる方法。 - 工程a)で濃度を決定する少なくとも1種の培地成分がグルコース、グルタミン、リン酸塩、ロイシン、セリン、イソロイシン、アルギニン、メチオニン及びシスチンからなる群より選択される請求項1に記載の方法。
- 工程a)で前記培地成分の少なくとも2種の濃度を決定する請求項1又は2に記載の方法。
- 工程b)で添加される成分が、さらにバリン、リジン、スレオニン、グリシン、アスパラギン、チロシン、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、リン酸塩、カルシウム、LongR3 IGF-1、Long EGF及びインスリンの1種又は複数を含む請求項1〜3項のいずれか1項に記載の方法。
- 工程b)において成分を、最終濃度で、10x106細胞/ml当たりの新たに添加される成分のミリモル/lで、グルコースでは4.0〜8.0、ロイシンでは0.44〜0.88、セリンでは0.37〜1.47、イソロイシンでは0.33〜0.67、アルギニンでは0.31〜0.61、メチオニンでは0.15〜、0.31、及びシスチンでは0.1〜0.6で添加する請求項1〜4項のいずれか1項に記載の方法。
- 工程b)において、グルタミンを、10x106細胞/ml当たりの新たに添加されるグルタミンの最終濃度が1.17〜3.47ミリモル/lとなるように添加する請求項5記載の方法。
- 工程b)において成分を1回以上添加し、さらに最初の添加の結果、新たに添加されるグルタミンの最終濃度が後の添加の結果のものより高いことを特徴とする請求項6記載の方法。
- 培地中のグルタミンの残存濃度を0.2〜1.5mMに維持するように、さらにグルタミンを基本的に連続して添加する請求項5記載の方法。
- 培地中のグルタミンの残存濃度を0.5〜1.0mMに維持するように、さらにグルタミンを基本的に連続して添加する請求項8記載の方法。
- 工程b)において、最終濃度が、10x106細胞/ml当たりの新たに添加される成分のミリモル/lで、バリンでは0.3〜0.6、リジンでは0.29〜0.59、スレオニンでは0.2〜0.4と成るように、さらに上記成分を添加する請求項5〜9項のいずれか1項に記載の方法。
- 工程b)において、最終濃度が、10x106細胞/ml当たりの新たに添加される成分のミリモル/lで、アスパラギンでは0.067〜0.13、チロシンでは0.087〜0.17、ヒスチジンでは0.067〜0.13、フェニルアラニンでは0.013〜0.027、及びトリプトファンでは0.04〜0.08となるように、さらに上記成分を添加する請求項10記載の方法。
- 工程b)における成分の添加を、48時間と、濃度を前の工程で決定した少なくとも1種の培地成分がちょうど枯渇する前との間に行う請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記工程を少なくとも1回繰り返す請求項1〜12項のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞を少なくとも9x106/mlの細胞密度となるように増殖させる請求項1〜13項のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞は、回収される産物を生産する請求項1〜14項のいずれか1項に記載の方法。
- 前記産物は組換えタンパク質である請求項15記載の方法。
- 前記組換えタンパク質は、培地中に少なくとも500mg/リットルのレベルとなるように分泌されるイムノグロブリンである請求項16記載の方法。
- 前記組換えタンパク質は、培地中に少なくとも1000mg/リットルのレベルとなるように分泌されるイムノグロブリンである請求項17記載の方法。
- 前記細胞が培養の間懸濁した状態である請求項1〜18項のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞は培地中にあり、前記産物が、組換えタンパク質、ウイルス、及びE1領域における欠損を有する組み換えアデノウイルスからなる群より選択され、該方法は、少なくともグルタミン、グルコース、リン酸塩、ロイシン、セリン、イソロイシン、アルギニン、メチオニン及びシスチンを培地に添加することによって培地を補うことを特徴とする、請求項1〜19項のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞が、前記方法の少なくとも一部の時間において、少なくとも20x106生細胞/mlの細胞濃度に達することをさらに特徴とする請求項20記載の方法。
- 前記細胞が、前記方法の少なくとも一部の時間において、少なくとも30x106生細胞/mlの細胞濃度に達することをさらに特徴とする請求項21記載の方法。
- 下記成分:グルコース3.6〜21.6ミリモル/l、グルタミン6.8〜40.9ミリモル/l、ロイシン0.40〜2.4ミリモル/l、セリン2.31〜13.9ミリモル/l、イソロイシン0.3〜1.8ミリモル/l、アルギニン0.28〜1.66ミリモル/l、メチオニン0.14〜0.83ミリモル/l、シスチン0.15〜0.9ミリモル/l、バリン0.27〜1.62ミリモル/l、リジン0.26〜1.58ミリモル/l、スレオニン0.18〜1.08ミリモル/l、アスパラギン0.06〜0.36ミリモル/l、チロシン0.078〜0.47ミリモル/l、ヒスチジン0.06〜0.36ミリモル/l、フェニルアラニン0.012〜0.072ミリモル/l、トリプトファン0.036〜0.22ミリモル/l及びリン酸塩0.45〜2.7ミリモル/lを培地に添加することによって培地を補うことを特徴とする請求項1〜22項のいずれか1項に記載の方法。
- 培地に添加される成分の量が、グルコース7.2〜14.4ミリモル/l、グルタミン13.6〜27.2ミリモル/l、ロイシン0.79〜1.6ミリモル/l、セリン4.62〜9.24ミリモル/l、イソロイシン0.6〜1.2ミリモル/l、アルギニン0.55〜1.10ミリモル/l、メチオニン0.28〜0.55ミリモル/l、シスチン0.3〜0.6ミリモル/l、バリン0.54〜1.08ミリモル/l、リジン0.53〜1.06ミリモル/l、スレオニン0.36〜0.72ミリモル/l、アスパラギン0.12〜0.24ミリモル/l、チロシン0.16〜0.31ミリモル/l、ヒスチジン0.12〜0.24ミリモル/l、フェニルアラニン0.024〜0.048ミリモル/l、トリプトファン0.072〜0.14ミリモル/l及びリン酸塩0.9〜1.8ミリモル/lである請求項23記載の方法。
- 前記成分を、細胞を培養する前に培地に添加する請求項23又は24に記載の方法。
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---|---|---|---|---|
US6783980B2 (en) * | 1995-06-15 | 2004-08-31 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
SI1445322T2 (sl) | 1995-06-15 | 2012-10-30 | Crucell Holland Bv | Pakirni sistemi za humani rekombinantni adenovirus za gensko terapijo |
US7604960B2 (en) | 1999-04-15 | 2009-10-20 | Crucell Holland B.V. | Transient protein expression methods |
US7297680B2 (en) | 1999-04-15 | 2007-11-20 | Crucell Holland B.V. | Compositions of erythropoietin isoforms comprising Lewis-X structures and high sialic acid content |
US6855544B1 (en) * | 1999-04-15 | 2005-02-15 | Crucell Holland B.V. | Recombinant protein production in a human cell |
US8236561B2 (en) | 1999-04-15 | 2012-08-07 | Crucell Holland B.V. | Efficient production of IgA in recombinant mammalian cells |
WO2003048348A2 (en) | 2001-12-07 | 2003-06-12 | Crucell Holland B.V. | Production of viruses, viral isolates and vaccines |
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KR101183770B1 (ko) | 2003-05-09 | 2012-09-17 | 크루셀 홀란드 비.브이. | E1-불멸화된 세포의 배양물 및 이로부터 생성 수율을 증가시키기 위한 동일물의 배양 방법 |
ES2456015T3 (es) | 2004-03-05 | 2014-04-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Procedimiento para cultivar células mediante perfusión continua y flujo tangencial alternante |
DK1835022T3 (en) | 2005-01-05 | 2015-02-23 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | CELL CULTIVATION PROCEDURE AND UTILIZATION OF THIS |
DE102005054628A1 (de) | 2005-11-16 | 2007-05-24 | Cevec Pharmaceuticals Gmbh | Verfahren zur Herstellung von permanenten humanen Zelllinien |
US11992507B2 (en) | 2006-01-23 | 2024-05-28 | Abt Holding Company | MAPC therapeutics without adjunctive immunosuppressive treatment |
EP1870450A1 (en) * | 2006-06-21 | 2007-12-26 | DSMIP Assets B.V. | Process for the culturing of E1-immortalized HER cells |
ES2625062T3 (es) | 2006-07-14 | 2017-07-18 | Patheon Holdings I B.V. | Proceso mejorado para el cultivo de células |
AU2011211462C1 (en) * | 2006-07-14 | 2015-01-22 | Dpx Holdings B.V. | Improved process for the culturing of cells |
EP2120998B1 (en) | 2006-11-28 | 2013-08-07 | HanAll Biopharma Co., Ltd. | Modified erythropoietin polypeptides and uses thereof for treatment |
JP5576115B2 (ja) | 2007-04-26 | 2014-08-20 | 中外製薬株式会社 | 高濃度アミノ酸含有培地を用いた細胞の培養方法 |
EP2188371B1 (en) * | 2007-08-09 | 2017-12-20 | Wyeth LLC | Use of perfusion to enhance production of fed-batch cell culture in bioreactors |
BRPI0913452A2 (pt) | 2008-09-02 | 2015-12-01 | Pluristem Ltd | células aderentes provenientes do tecido placentário e seu uso em terapia |
US8357661B2 (en) | 2009-04-23 | 2013-01-22 | Crucell Holland B.V. | Recombinant human Alpha1-antitrypsin |
CA2763091C (en) | 2009-07-16 | 2019-07-23 | Crucell Holland B.V. | Production of polio virus at high titers for vaccine production |
MX2012004222A (es) | 2009-10-15 | 2012-06-08 | Crucell Holland Bv | Metodo para purificacion de particulas de adenovirus. |
EA028875B1 (ru) | 2009-10-15 | 2018-01-31 | Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. | Способ очистки аденовирусных частиц из клеточной суспензии |
WO2012030512A1 (en) | 2010-09-03 | 2012-03-08 | Percivia Llc. | Flow-through protein purification process |
JP6282467B2 (ja) | 2010-10-05 | 2018-02-21 | ノヴォ・ノルディスク・ヘルス・ケア・アーゲー | タンパク質を生産するための方法 |
PL2702164T3 (pl) | 2011-04-29 | 2016-06-30 | Biocon Res Limited | Sposób obniżania heterogeniczności przeciwciał i sposób ich wytwarzania |
CN102994547B (zh) * | 2011-09-08 | 2015-05-13 | 哈药集团技术中心 | 重组人促红素-ctp融合蛋白生产工艺及应用 |
WO2014054744A1 (ja) * | 2012-10-03 | 2014-04-10 | 協和発酵キリン株式会社 | 培養液にアミノ酸を添加することによるポリペプチドの還元防止方法 |
CA2924042C (en) | 2013-09-30 | 2023-04-18 | Crucell Holland B.V. | Method for the clarification of high density crude cell culture harvest |
EP3172317B1 (en) | 2014-07-24 | 2019-05-01 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Process for the purification of poliovirus from cell cultures |
RU2672318C1 (ru) * | 2017-09-19 | 2018-11-13 | Общество с ограниченной ответственностью "Международный Биотехнологический Центр "Генериум" | Способ получения моноклональных антител терапевтического назначения с помощью непрерывного культивирования клеток сно |
WO2020238918A1 (en) | 2019-05-28 | 2020-12-03 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | A raman spectroscopy integrated perfusion cell culture system for monitoring and auto-controlling perfusion cell culture |
CN115369069B (zh) * | 2022-08-22 | 2023-12-19 | 上海健士拜生物科技有限公司 | 293细胞补料培养基及其制备和应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001038362A2 (en) * | 1999-11-26 | 2001-05-31 | Crucell Holland B.V. | Production of vaccines |
JP2002541854A (ja) * | 1999-04-15 | 2002-12-10 | クルセル ホラント ベスローテン フェンノートシャップ | ヒト細胞における組み換え蛋白質の生産 |
Family Cites Families (63)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4703008A (en) * | 1983-12-13 | 1987-10-27 | Kiren-Amgen, Inc. | DNA sequences encoding erythropoietin |
NZ210501A (en) * | 1983-12-13 | 1991-08-27 | Kirin Amgen Inc | Erythropoietin produced by procaryotic or eucaryotic expression of an exogenous dna sequence |
FR2573436B1 (fr) | 1984-11-20 | 1989-02-17 | Pasteur Institut | Adn recombinant comportant une sequence nucleotidique codant pour un polypeptide determine sous le controle d'un promoteur d'adenovirus, vecteurs contenant cet adn recombinant, cellules eucaryotes transformees par cet adn recombinant, produits d'excretion de ces cellules transformees et leurs applications, notamment a la constitution de vaccins |
IL77081A (en) | 1984-12-04 | 1999-10-28 | Genetics Inst | AND sequence encoding human erythropoietin, a process for its preparation and a pharmacological preparation of human erythropoietin |
US5681718A (en) | 1986-03-14 | 1997-10-28 | Celltech Limited | Methods for enhanced production of tissue plasminogen activator in cell culture using alkanoic acids or salts thereof |
US4835260A (en) * | 1987-03-20 | 1989-05-30 | Genetics Institute, Inc. | Erythropoietin composition |
US5192539A (en) * | 1988-07-21 | 1993-03-09 | Akzo N.V. | Infectious bursal disease virus production in continuous cell lines |
US5047335A (en) * | 1988-12-21 | 1991-09-10 | The Regents Of The University Of Calif. | Process for controlling intracellular glycosylation of proteins |
GB8900483D0 (en) * | 1989-01-10 | 1989-03-08 | Celltech Ltd | Recombinant dna method |
DE3923963A1 (de) * | 1989-07-20 | 1991-01-31 | Behringwerke Ag | Muteine des menschlichen erythropoetins, ihre herstellung und ihre verwendung |
US5856298A (en) * | 1989-10-13 | 1999-01-05 | Amgen Inc. | Erythropoietin isoforms |
EP0596881B1 (fr) | 1991-08-01 | 1997-03-19 | Fondation Nationale De Transfusion Sanguine | Expression dans des lignees lymphoblastoides humaines non-tumorales avec un vecteur integratif |
US5384249A (en) * | 1991-12-17 | 1995-01-24 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | α2→3 sialyltransferase |
IL110669A (en) | 1993-08-17 | 2008-11-26 | Kirin Amgen Inc | Erythropoietin analogs |
US5631158A (en) * | 1993-10-25 | 1997-05-20 | Creative Biomolecules, Inc. | Methods and compositions for high protein production from non-native DNA |
US5830851A (en) * | 1993-11-19 | 1998-11-03 | Affymax Technologies N.V. | Methods of administering peptides that bind to the erythropoietin receptor |
US5773569A (en) * | 1993-11-19 | 1998-06-30 | Affymax Technologies N.V. | Compounds and peptides that bind to the erythropoietin receptor |
US5789247A (en) * | 1994-04-01 | 1998-08-04 | Ballay; Annick | Expression in non-tumoral human lymphoblastoid lines with an integrative vector |
US5610043A (en) | 1994-04-28 | 1997-03-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Human prostatic cell lines immortalized by adenovirus 12-simian virus 40 (AD12/SV40) hybrid virus |
US5767078A (en) * | 1995-06-07 | 1998-06-16 | Johnson; Dana L. | Agonist peptide dimers |
SI1445322T2 (sl) | 1995-06-15 | 2012-10-30 | Crucell Holland Bv | Pakirni sistemi za humani rekombinantni adenovirus za gensko terapijo |
US6265212B1 (en) | 1995-06-15 | 2001-07-24 | Introgene B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
US5989805A (en) | 1995-10-27 | 1999-11-23 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Immortal avian cell line to grow avian and animal viruses to produce vaccines |
ES2259182T3 (es) | 1995-11-13 | 2006-09-16 | Takara Bio Inc. | Metodo de introduccion de genes en celulas diana por medio de retrovirus. |
US5681597A (en) * | 1996-02-06 | 1997-10-28 | Liquid Container L.P. | Vacuum conveyor picker for blow bottle container |
US5856292A (en) | 1996-04-08 | 1999-01-05 | Colgate Palmolive Company | Light duty liquid cleaning compositions |
US5835382A (en) * | 1996-04-26 | 1998-11-10 | The Scripps Research Institute | Small molecule mimetics of erythropoietin |
NZ334546A (en) | 1996-10-25 | 2000-12-22 | G | Erythropoietin receptor agonist and use in the treatment of hematopoietic disorders |
US7732129B1 (en) * | 1998-12-01 | 2010-06-08 | Crucell Holland B.V. | Method for the production and purification of adenoviral vectors |
EP0973866A4 (en) | 1997-03-04 | 2000-04-19 | Baxter Int | ADENOVIRUS E1-COMPLEMENTING CELL LINES |
CA2221819A1 (en) * | 1997-03-27 | 1998-09-27 | Thomas A. Gigliatti | Insect expression vectors |
EP1012319B1 (en) | 1997-03-27 | 2005-03-02 | The University Of British Columbia | Insect expression vectors |
US5997128A (en) * | 1997-05-30 | 1999-12-07 | Hewlett-Packard Company | Translational service station for imaging inkjet printheads |
DK0986644T3 (da) | 1997-07-23 | 2007-01-29 | Roche Diagnostics Gmbh | Fremstilling af erythropoietin ved endogen genaktivering med virale promotorer |
BR9813391C1 (pt) | 1997-12-03 | 2021-05-25 | Roche Diagnostics Gmbh | processo para produzir uma composição de epo e processo para aumentar a atividade específica de uma composição de epo |
US6670188B1 (en) * | 1998-04-24 | 2003-12-30 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
CA2331154A1 (en) | 1998-06-16 | 1999-12-23 | Human Genome Sciences, Inc. | Polypeptides having sequence identity with acid labile subunit of insulin-like growth factor |
NZ514690A (en) | 1999-04-13 | 2004-07-30 | Kenneth S | Modulation of excitable tissue function by peripherally administered erythropoietin |
US6855544B1 (en) * | 1999-04-15 | 2005-02-15 | Crucell Holland B.V. | Recombinant protein production in a human cell |
WO2003048348A2 (en) | 2001-12-07 | 2003-06-12 | Crucell Holland B.V. | Production of viruses, viral isolates and vaccines |
US20050164386A1 (en) | 1999-04-15 | 2005-07-28 | Uytdehaag Alphonsus G. | Overexpression of enzymes involved in post-translational protein modifications in human cells |
WO2003048197A1 (en) | 2001-12-07 | 2003-06-12 | Crucell Holland B.V. | Production and of viruses, viral isolates and vaccines |
US7297680B2 (en) * | 1999-04-15 | 2007-11-20 | Crucell Holland B.V. | Compositions of erythropoietin isoforms comprising Lewis-X structures and high sialic acid content |
EP1171615B1 (en) | 1999-04-26 | 2006-12-13 | Genentech, Inc. | Cell culture process for glycoproteins |
US6215499B1 (en) * | 1999-05-06 | 2001-04-10 | Phillips Petroleum Company | Method and apparatus for interactive curved surface seismic interpretation and visualization |
US6492169B1 (en) * | 1999-05-18 | 2002-12-10 | Crucell Holland, B.V. | Complementing cell lines |
US6558948B1 (en) * | 1999-11-23 | 2003-05-06 | Stefan Kochanek | Permanent amniocytic cell line, its production and use for the production of gene transfer vectors |
EP1184458A1 (en) | 2000-08-28 | 2002-03-06 | U-BISys B.V. | Differentially expressed CD46 epitopes, proteinaceous molecules capable of binding thereto, and uses thereof |
PA8536201A1 (es) | 2000-12-29 | 2002-08-29 | Kenneth S Warren Inst Inc | Protección y mejoramiento de células, tejidos y órganos que responden a la eritropoyetina |
CA2447791A1 (en) * | 2001-06-13 | 2002-12-19 | Neslihan Delacruz | Methods of culturing animal cells and polypeptide production in animal cells |
US7473767B2 (en) | 2001-07-03 | 2009-01-06 | The Institute For Systems Biology | Methods for detection and quantification of analytes in complex mixtures |
EP2447370B1 (en) * | 2001-09-28 | 2018-07-18 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | MicroRNA molecules |
ATE397019T1 (de) | 2001-12-17 | 2008-06-15 | Crucell Holland Bv | Herstellung von f(ab')2 fragmenten in saügetierzelle |
US8137910B2 (en) * | 2002-05-03 | 2012-03-20 | Duke University | Method of regulating gene expression |
CA2491567A1 (en) | 2002-07-01 | 2004-01-08 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Recombinant tissue protective cytokines and encoding nucleic acids thereof for protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues, and organs |
US20040268441A1 (en) * | 2002-07-19 | 2004-12-30 | University Of South Carolina | Compositions and methods for the modulation of gene expression in plants |
US8524477B2 (en) * | 2002-10-29 | 2013-09-03 | Crucell Holland B.V. | Methods to obtain recombinant proteins with increased sialylation from cells that express adenovirus E1A protein, and proteins obtained thereby |
MXPA05006522A (es) * | 2002-12-23 | 2006-02-17 | Bristol Myers Squibb Co | Mejora en la calidad de producto en procesos de cultivo en celulas de mamiferos para la produccion de proteina. |
KR101183770B1 (ko) * | 2003-05-09 | 2012-09-17 | 크루셀 홀란드 비.브이. | E1-불멸화된 세포의 배양물 및 이로부터 생성 수율을 증가시키기 위한 동일물의 배양 방법 |
US20050144669A1 (en) * | 2003-07-01 | 2005-06-30 | Whitehead Institute For Biomedical Research | MicroRNAs in plants |
CA2541970A1 (en) * | 2003-10-09 | 2005-06-09 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Gene silencing by using micro-rna molecules |
US7642078B2 (en) * | 2005-12-28 | 2010-01-05 | Crucell Holland B.V. | Methods to obtain recombinant proteins with increased sialylation from cells that express adenovirus E1A protein, and proteins obtained thereby |
WO2008059041A2 (en) * | 2006-11-16 | 2008-05-22 | Crucell Holland B.V. | Complementation of factor xi deficiency by factor v mutants |
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2010
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002541854A (ja) * | 1999-04-15 | 2002-12-10 | クルセル ホラント ベスローテン フェンノートシャップ | ヒト細胞における組み換え蛋白質の生産 |
WO2001038362A2 (en) * | 1999-11-26 | 2001-05-31 | Crucell Holland B.V. | Production of vaccines |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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