JP4808822B1 - ミミズ乾燥粉末の製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】生ミミズをカリウム、ナトリウム、マグネシウムおよびカルシウムからなる群から選ばれる少なくとも1種の金属の塩化物と接触させ、
その後、粉末状ヒドロキシカルボン酸と生ミミズとを接触させ、水で希釈してpH2〜5に調整し、3〜180分間保持した後、生ミミズを水洗し、摩砕し、得られた摩砕物を凍結乾燥することを特徴とするミミズ乾燥粉末の製造方法である。
【選択図】なし
Description
その後、粉末状ヒドロキシカルボン酸と生ミミズとを接触させ、水で希釈してpH2〜5に調整し、3〜180分間保持した後、生ミミズを水洗し、摩砕し、得られた摩砕物を凍結乾燥することを特徴とするものである。
その後、生ミミズをpH2〜5に調整したヒドロキシカルボン酸水溶液中に浸漬し、3〜180分間保持したのち、生ミミズを水洗し、摩砕し、得られた摩砕物を凍結乾燥することを特徴とするものである。
生ミミズを加工するに先立ち、所定の金属塩化物に接触させてから、ヒドロキシカルボン酸と接触させると、ミミズにとって不快棲息環境が形成される結果、その環境に順応するためにミミズは消化管内の消化物を排泄し、それとともに体内に含まれていた水銀、カドミウム、鉛などの有害物質が排出される。
(実施例1)
24時間明所に放置後、体皮に付着する汚物を剥ぎ取った生のアカミミズ30kgを平皿に約5cmの厚さに拡げ、この上に塩化ナトリウム250gを均一に振りかけた。20分後、ミミズを水洗いした。
その後、クエン酸250gを同様に振りかけた後15秒で純水30リットルを加えて希釈した。この時、水を加えた直後のpHは2.25であり、完全に希釈したときのpHは2.74であった。
クエン酸粉末を振りかけると、ミミズは一気に黄色い体液を放出した。水で希釈した後に、その状態で20分間保持した。
次いで、汚れたクエン酸水溶液から生ミミズを取り出し、水洗したのち、ホモジナイザーを用いて10℃において摩砕し、ミミズペーストを調製した。次に、このミミズペーストを吸引脱気して、その中に含まれているガスを除いたのち、ステンレス鋼製トレーに移し、瞬間的に−35℃まで急冷し、この温度に50時間維持して徐々に凍結した。
凍結したミミズペーストを−35℃で圧力0Paを2時間保ったのち、温度25℃まで昇温し、40Paで10時間、次いで40℃、圧力35Paで14時間、次いで65℃、圧力35Paで12時間乾燥し、最後に温度を80℃とし、圧力25Paにおいて6時間保つことにより真空凍結乾燥を行った。この処理により含水量8質量%の淡黄色のミミズ乾燥粉末を得た。
24時間明所に放置後、体皮に付着する汚物を剥ぎ取った生のアカミミズ30kgを平皿に約5cmの厚さに拡げ、この上に水30リットルを加えた。水を加えた後に、その状態で20分間保持した。
次いで、水から生ミミズを取り出し、水洗したのち、ホモジナイザーを用いて10℃において摩砕し、ミミズペーストを調製した。次に、このミミズペーストを吸引脱気して、その中に含まれているガスを除いたのち、ステンレス鋼製トレーに移し、瞬間的に−35℃まで急冷し、この温度に50時間維持して徐々に凍結した。
凍結したミミズペーストを−35℃で圧力0Paを2時間保ったのち、温度25℃まで昇温し、40Paで10時間、次いで40℃、圧力35Paで14時間、次いで65℃、圧力35Paで12時間乾燥し、最後に温度を80℃とし、圧力25Paにおいて6時間保つことにより真空凍結乾燥を行った。この処理により含水量8質量%の淡黄色のミミズ乾燥粉末を得た。
24時間明所に放置後、体皮に付着する汚物を剥ぎ取った生のアカミミズ30kgを平皿に約5cmの厚さに拡げ、この上にクエン酸250gを振りかけた後15秒で純水30リットルを加えて希釈した。
クエン酸粉末を振りかけると、ミミズは一気に黄色い体液を放出した。水で希釈した後に、その状態で20分間保持した。
次いで、汚れたクエン酸水溶液から生ミミズを取り出し、水洗したのち、ホモジナイザーを用いて10℃において摩砕し、ミミズペーストを調製した。次に、このミミズペーストを吸引脱気して、その中に含まれているガスを除いたのち、ステンレス鋼製トレーに移し、瞬間的に−35℃まで急冷し、この温度に50時間維持して徐々に凍結した。
凍結したミミズペーストを−35℃で圧力0Paを2時間保ったのち、温度25℃まで昇温し、40Paで10時間、次いで40℃、圧力35Paで14時間、次いで65℃、圧力35Paで12時間乾燥し、最後に温度を80℃とし、圧力25Paにおいて6時間保つことにより真空凍結乾燥を行った。この処理により含水量8質量%の淡黄色のミミズ乾燥粉末を得た。
24時間明所に放置後、体皮に付着する汚物を剥ぎ取った生のアカミミズ30kgを平皿に約5cmの厚さに拡げ、この上にクエン酸250gを均一に振りかけた。その後、水30リットルを加えて希釈した。クエン酸粉末を振りかけると、ミミズは一気に黄色い体液を放出した。水で希釈した後に、その状態で20分間保持した。次いで、汚れたクエン酸水溶液から生ミミズを取り出し、水洗したのち、塩化ナトリウム250gを振りかけ、その状態で20分間保持した。
次いで、生ミミズを水洗し、ホモジナイザーを用いて10℃において摩砕し、ミミズペーストを調製した。次に、このミミズペーストを吸引脱気して、その中に含まれているガスを除いたのち、ステンレス鋼製トレーに移し、瞬間的に−35℃まで急冷し、この温度に50時間維持して徐々に凍結した。
凍結したミミズペーストを−35℃で圧力0Paを2時間保ったのち、温度25℃まで昇温し、40Paで10時間、次いで40℃、圧力35Paで14時間、次いで65℃、圧力35Paで12時間乾燥し、最後に温度を80℃とし、圧力25Paにおいて6時間保つことにより真空凍結乾燥を行った。この処理により含水量8質量%の淡黄色のミミズ乾燥粉末を得た。
24時間明所に放置後、体皮に付着する汚物を剥ぎ取った生のアカミミズ30kgを平皿に約5cmの厚さに拡げ、この上にクエン酸250gおよび塩化ナトリウム250gを混合して均一に振りかけた。その後、クエン酸250gおよび塩化ナトリウム250gを振りかけた後15秒で純水30リットルを加えて希釈した。
クエン酸粉末および塩化ナトリウムを振りかけると、ミミズは一気に黄色い体液を放出した。水で希釈した後に、その状態で20分間保持した。
次いで、汚れたクエン酸水溶液から生ミミズを取り出し、水洗したのち、ホモジナイザーを用いて10℃において摩砕し、ミミズペーストを調製した。次に、このミミズペーストを吸引脱気して、その中に含まれているガスを除いたのち、ステンレス鋼製トレーに移し、瞬間的に−35℃まで急冷し、この温度に50時間維持して徐々に凍結した。
凍結したミミズペーストを−35℃で圧力0Paを2時間保ったのち、温度25℃まで昇温し、40Paで10時間、次いで40℃、圧力35Paで14時間、次いで65℃、圧力35Paで12時間乾燥し、最後に温度を80℃とし、圧力25Paにおいて6時間保つことにより真空凍結乾燥を行った。この処理により含水量8質量%の淡黄色のミミズ乾燥粉末を得た。
<測定試料の調製>
上記で得られた各ミミズ乾燥粉末1gに生理食塩水20mlを加えて、1500rpmで1時間振盪行った。これを10000×g、4℃、で15分遠心分離した上清を測定試料とした。
蛋白質定量は、ブラッドフォード法(M.Bradford,Anal.Biochem.,72:248−254,1976)に従って算出した。
上記測定試料に対して、プロテインアッセイキット(Bio−Rad Laboratories,Inc.)を用いてタンパク質量測定用試料調製を行い、595nmの吸光度を測定した。別途ウシ血清アルブミン(Bovine,Sigma−Aldrich Co.)を用いて作製した検量線によりタンパク質量の換算を行った。
非特許文献(須見洋行,岡本猛,石井陽一,ルンブロキナーゼ(ミミズ酵素)の力価検定法−フィブリンおよび合成アミド分解能−,薬理と臨床,20:347−351,2010)記載の方法に準じて、合成アミド基質分解活性を測定した。
合成アミド基質は、ウロキナーゼの合成基質であるpyroGlu−Gly−Arg−pNA(BIOPHEN CS−61(44),コスモバイオ(株))をジメチルスルホキシド(DMSO)で5×10−3Mになるよう溶解し調製した。
上記で得られた測定試料0.1mlに、ホウ酸緩衝液(BSB)を0.8mlを加えて2分間インキュベーションした後、合成アミド基質0.1mlを加えて、37℃で5分間反応させた後、405nmの吸光度を測定し、1分間あたりの最大傾き(初速度)より、吸光係数10.79mM−1・cm−1で放出されたpNA量算を出した。得られた結果を下記表2に示す。
また、合成アミド基質分解活性を、タンパク質総量で割ることにより得られる比活性を下記表3に示す。
非特許文献(T.Astrup&S.Mullertz,The fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity.,Arch.Biochem.Biophys.,40:346−351,1952)記載の方法に準じて、フィブリン平板を作成し、フィブリン平板法による溶解活性の比較を行った。
フィブリノーゲン(Bovine FractionI−S,Sigma−Aldrich Co.)を終濃度0.5%になるようホウ酸緩衝液(pH7.8:BSB)で溶解した。この溶液10mlにトロンビン(臨床用,富士製薬工業(株))を0.5ml加えてフィブリン平板を作製した。
溶解面積の測定は、各測定試料30μlをのせたものを37℃で4時間インキュベーションにおいて生じる溶解窓の面積を測定することにより行った。また、タンパク分解酵素であるトリプシン(Bovine,Sigma−Aldrich Co.)の検量線を作成し、単位換算を行い、各測定試料中の蛋白質量から、比活性を求めた。結果を下記表4に示す。
一方、比較例1および2から明らかなように、クエン酸処理のみでは水処理のみと比較して酵素活性が、2倍ないし4倍程度であった。また、比較例2および3の結果から明らかなように、クエン酸処理を先に行い、その後金属の塩化物で処理した場合は、クエン酸処理のみと酵素活性はあまり変わらなかった。
また、この粉末を純水、アルコールなどにより抽出された溶液を遠心分離し、分子量別に分画することにより、医薬品、化粧品、サプリメントの有効成分として利用することができる。
Claims (6)
- 生ミミズをカリウム、ナトリウム、マグネシウムおよびカルシウムからなる群から選ばれる少なくとも1種の金属の塩化物と接触させ、
その後、粉末状ヒドロキシカルボン酸と生ミミズとを接触させ、水で希釈してpH2〜5に調整し、3〜180分間保持した後、生ミミズを水洗し、摩砕し、得られた摩砕物を凍結乾燥することを特徴とするミミズ乾燥粉末の製造方法。 - 生ミミズをカリウム、ナトリウム、マグネシウムおよびカルシウムからなる群から選ばれる金属の塩化物と接触させ、
その後、生ミミズをpH2〜5に調整したヒドロキシカルボン酸水溶液中に浸漬し、3〜180分間保持したのち、生ミミズを水洗し、摩砕し、得られた摩砕物を凍結乾燥することを特徴とするミミズ乾燥粉末の製造方法。 - 前記生ミミズを、10〜50時間明所に放置後、体皮に付着する汚物を剥ぎ取ってから、前記金属の塩化物と接触させる請求項1または2記載のミミズ乾燥粉末の製造方法。
- 前記凍結乾燥が、摩砕物を−18℃〜−35℃で20〜240時間凍結させたのち、真空下で凍結乾燥することにより行われる請求項1〜3のいずれか一項記載のミミズ乾燥粉末の製造方法。
- 前記金属の塩化物が、塩化ナトリウムである請求項1〜4のいずれか一項記載のミミズ乾燥粉末の製造方法。
- 前記ヒドロキシカルボン酸が、酢酸、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、マロン酸およびコハク酸からなる群から選ばれる少なくとも1種である請求項1〜5のいずれか一項記載のミミズ乾燥粉末の製造方法。
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