JP4808610B2 - 薬物および遺伝子のデリバリーシステムとしての多機能性デンドリマーおよびハイパーブランチポリマー - Google Patents
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Description
に解決または処理することを目指す。上記問題は、遺伝物質を細胞核に輸送する新規かつ有効な担体の開発を必要とする。具体的に言えば、これらの担体は、標的化能力と、生物系内での安定性と、結合した遺伝物質を細胞膜を介して有効に輸送する能力と、遺伝物質との複合体がエンドサイトーシス後にエンドソームから放出される可能性とを同時に備えていなければならない。
本発明は多機能性樹状ポリマーの製法を開示し、これらの樹状ポリマーは、負に荷電したDNAとの複合体を形成する正に荷電した表面に加えて、以下に説明するような、遺伝物質の輸送を促進する官能基を有する。
(a)デンドリマーポリマーまたはハイパーブランチポリマーの表面に官能基が存在すること。これらの官能基は段階的に導入し得る。
(b)ポリマー内部にナノ空間が存在し、ナノ空間内には、ナノ環境に応じて種々の化合物の封入が可能であること。これらの化合物のこのナノ環境特性によって、同化合物の薬物担体としての特定用途が決まる。
(c)遺伝子デリバリーに用いる場合、これらのポリマーは、負に荷電したDNAと相互
作用してそれぞれ複合体を形成するので、カチオン電荷の存在を必要とする。そのようにして形成された複合体は、エンドサイトーシスを介して遺伝子治療のために核内に導入され得る。
3つ以上の化学結合を形成し得る化学元素の少なくとも1つの原子と、
上記少なくとも1つの原子に結合する種々の異なる末端官能基であって、共同で、(a)低毒性または無毒性であり、(b)上記ポリマーの分子を細胞の相補的受容体が認識可能なものとし、(c)上記ポリマーを生体の生物学的環境内で安定にし、かつ(d)細胞膜を介した上記ポリマーの輸送を促進する末端官能基と
を呈示するように修飾されていることを特徴とする。
これらのポリマーは、デンドリマーの末端基に、アンモニウム基、第4級アンモニウム基またはグアニジニウム基を導入してカチオン化するのが便利である。
修飾デンドリマーポリマーは、ジアミノブタンポリプロピレンイミノ(DAB)デンドリマー、または類似構造を有する他のデンドリマー分子、例えばPAMAMデンドリマーであるのが好ましい。
修飾非対称ハイパーブランチポリマーは、グリシドールと1,1,1−トリヒドロキシメチルプロパン(PG−5)とのアニオン重合から誘導するのが便利である。
1つの標的化リガンド、例えば、グアニジニウム基、炭水化物(例えば、マンノース、グリコース、ガラクトース)、葉酸、RGD受容体、核酸塩基部分(例えば、アデニン、チミン、グアニン、シトシン)またはバルビツル酸を含む官能基を有するのが便利である。
修飾デンドリマーポリマーまたは修飾非対称ハイパーブランチポリマーによって担持される生物活性医薬化合物は、ベタメタゾンまたはベタメタゾン誘導体であるのが便利である。
(a)該表面のアミノ基または他の毒性基を、ヒドロキシ、カルボキシルもしくは第4級アンモニウム基、または他の無毒性基で置換するステップと、
(b)デンドリマー担体またはハイパーブランチポリマーを生体のMPS(単核食細胞系)から保護するために、これらのポリマーの表面に、例えばポリエチレングリコール(PEG化)などの多様な分子量の重合鎖を導入するステップと、
(c)担体の標的化能力を強化するために、受容体または組織に相補的で認識可能な基、すなわち、グアニジニウム基、炭水化物(例えば、マンノース、グリコース、ガラクトース)、葉酸もしくはRGD受容体、核酸塩基部分(例えば、アデニン‐チミン、グアニン‐シトシン)またはバルビツル酸基を導入するステップと、
(d)担体と担体に封入されている活性薬物成分の細胞膜を介した輸送を促進する基、例えば、グアニジニウム部分、オリゴアルギニンもしくはポリアルギニン誘導体またはポリプロピレンオキシド部分を導入するステップと
を含むステップで修飾することを特徴とする。
先ず、デンドリマーまたはハイパーブランチポリマーの表面アミノ基またはヒドロキシ基を、一方の末端に例えばイソシアネート、エポキシドまたはN−ヒドロキシスクシンイミドなどの反応基を持つ適切な保護ポリマーと反応させるステップと、
次いで、毒性アミノ基を置換するために、得られたポリマーの大部分のアミノ基をエチルイソシアネートと反応させるステップと、
次いで、アミノ基を例えばグアニジニウム基などの認識可能な基に変換するために、先に得られたポリマーを反応させるステップと、
次いで、細胞膜を介した担体輸送を促進する例えばポリアルギニンまたはプロピレンオキシド鎖などの1つ以上の基を導入するステップと
を含むのが好ましい。
有利には、この方法は、表面の毒性基がアミノ基のとき、その代替物として、8個未満の炭素原子、好ましくは2または3個の炭素原子を有する短鎖脂肪族を導入することを特徴とする。
法を提供し、この方法は、
対称デンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマーの表面を、(a)表面のアミノ基または他の毒性基を、ヒドロキシ、カルボキシルもしくは第4級アンモニウム基または他の無毒性基で置換するステップと、(b)デンドリマー担体またはハイパーブランチポリマーを生体のMPS(単核食細胞系)から保護するために、これらのポリマーの表面に、例えばポリエチレングリコール(PEG化)などの多様な分子量のポリマー鎖を導入するステップと、(c)担体の標的化能力を強化するために、受容体または組織に相補的で認識可能な基、すなわち、グアニジニウム基、炭水化物部分(例えば、マンノース、グリコース、ガラクトース)、葉酸もしくはRGD受容体、核酸塩基部分(アデニン−チミン、グアニン−シトシン)またはバルビツル酸基を導入するステップと、(d)担体と担体に封入された生物活性医薬化合物の細胞膜を介した輸送を促進する基、例えば、グアニジニウム部分、オリゴアルギニンもしくはポリアルギニン誘導体またはポリプロピレンオキシド部分を導入するステップとで修飾して、対称デンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマーを合成するステップと、
生物活性医薬化合物または遺伝物質を上記修飾ポリマーで封入するステップと
を含む。
生物活性医薬化合物を封入するか、遺伝物質を担持する修飾デンドリマーポリマーまたは修飾非対称ハイパーブランチポリマーは治療に用いると便利である。
生物活性医薬化合物を封入するか、遺伝物質を担持する修飾デンドリマーポリマーまたは修飾非対称ハイパーブランチポリマーは、前記医薬化合物または遺伝物質が治療に用いられるのと同じ病気または症状を治療するための薬剤の製造に用いると便利である。
環境に応じて多様な化合物を封入し得るポリマー内部のナノ空間の存在である。
本発明では、先ず、デンドリマーまたはハイパーブランチポリマーのナノ空間内部に生物活性化合物を導入し得る一方、ナノサイズ担体を形成するために、ポリマーの外表面には適切な機能性官能基を導入した。該官能基は、共同で、低毒性または無毒性であり、生物学的環境内で安定であり、かつ特定細胞の標的化能力および特定細胞への輸送能力を保有するという特性を有する。
(a)毒性末端基、例えばアミノ基を、無毒性の、例えば、ヒドロキシ、カルボキシルまたは第4級アンモニウム基により置換することと、
(b)デンドリマー担体またはハイパーブランチポリマーの表面に、例えばポリエチレングリコール(PEG化)などの多様な分子量の重合鎖を導入することにより、これらのポ
リマーを生体のMPS(単核食細胞系)から保護することと、
(c)担体の標的化能力を強化するために、細胞の受容体に相補的で認識可能な基、例えば、グアニジニウム基、炭水化物部分(例えば、マンノース、グリコース、ガラクトース)、葉酸もしくはRGD受容体、核酸塩基部分(例えば、アデニン、チミン、グアニン、シトシン)またはバルビツル酸基を導入することと、
(d)担体と担体に封入された薬物成分または遺伝子の細胞膜を介した輸送を促進する基、例えば、グアニジニウム部分、オリゴアルギニンもしくはポリアルギニン誘導体またはポリプロピレンオキシド部分を導入することと、遺伝物質(DNA、プラスミド、オリゴヌクレオシド)との複合体を形成するために、例えば、アンモニウム、第4級アンモニウム、グアニジニウムなどの正に荷電した部分を導入することと、
を達成するために、デンドリマーまたはハイパーブランチポリマーの表面末端基を適切に修飾する(一連の適切な反応において確立された有機合成化学プロセスに従うデンドリマーポリマーまたはハイパーブランチポリマー表面の分子操作)。
本発明に用い得る代表的なデンドリマーまたはハイパーブランチポリマーは、例えば、対称ジアミノブタンポリプロピレンイミノデンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマー、例えば、無水コハク酸、無水フタル酸もしくは無水テトラヒドロフタル酸とジイソプロピルアミンとの重縮合またはグリシドールと1,1,1−トリヒドロキシメチルプロパンとのアニオン重合から得られるポリマーである。
ム基である標的化リガンドの導入に関しては、当該デンドリマーの表面第1級アミノ基をグアニジニウム基に変換するために1H−ピラゾロ−1−カルボキサミジンヒドロクロリドを用い得る。グアニジニウム基と同様オリゴアルギニンおよびポリアルギニン部分も細胞膜を介した担体の輸送を促進する。遺伝子デリバリーに関して、複合体の調製およびその輸送が図5に図式で示されている。
出発デンドリマーポリマーとして、それぞれ表面に32個および64個のアミノ基を有する第4世代および第5世代のジアミノブタンポリプロピレンイミンデンドリマー(以下の図式に1として表示したDAB−32およびDAB−64、ディー・エス・エム・ファイン・ケミカルズ社(DSM Fine Chemicals))を用いた。
Polymers,INC ))、エチルイソシアネート(アルドリッチ社(Aldrich ))および1H−ピラゾロ−1−カルボキサミジンヒドロクロリド〔フルカ社(Fluka )〕(以下の図式に3として表示)を用いた。
[実施例I]
(ステップ1) 市販されている第5世代(または他の任意の世代)のジアミノブタンポリプロピレンイミノデンドリマー0.001モルと分子量5,000のメトキシポリエチレングリコール−イソシアネート0.004モルを水に溶解した。得られた溶液に少量のトリエチルアミン水溶液を添加して、pH13の溶液を得た。この溶液を室温下に数時間攪拌した。次いで、反応混合物からすべての低分子量不純物を除去するために、半透膜を介して24時間溶液を透析して精製した。ステップ1の結果生じたポリエチレングリコ
ール部分のデンドリマーへの導入はNMR分光法で証明された。
(ステップ1:ジアミノブタンポリプロピレンイミンデンドリマーの4級化)
ポリプロピレンイミンデンドリマーの部分4級化は以下のように実施した。10mlの水に溶かした0.113mmolのDAB−32(0.398g)の溶液に、1.938mmolのグリシジルトリメチルアンモニウムクロリド(260μl)を加えた。混合物を一晩反応させた。次いで、未反応エポキシドを除去するために、1,200カットオフ膜でH2Oに対して透析し、凍結乾燥した。第4級アンモニウムの導入は、D2O中で記録した1H NMRおよび13C NMRスペクトルで証明された。1H NMRスペクトルでは2.60ppm、3.16ppm、3.34ppmおよび4.26ppm、13C NMRスペクトルでは55.1ppm、56.9ppm、67.4ppmおよび71.8ppmに予測された4つの新規シグナルが出現したことにより、4級化が生じたことが確認された。さらに、13C NMRスペクトルでは、28.0ppmおよび49.5ppmに2つの新たなシグナルが出現したが、同シグナルは新規に形成された第2級アミノ基についてのαおよびβメチレン炭素に対応する。置換度は、デンドリマーの第3級、第2級および第1級アミノ基に結合したすべてのβメチレンプロトンに対応する1.58ppmのシグナルに対する、第4級メチルプロトンに対応する3.16ppmのシグナルの積分比から予測した。置換度は33%であると判明した。
これは、市販されていない有機中間体であり、以下の手順に従って多機能性デンドリマーを調製するための次のステップに必要である。7.5mlの無水DMSOに溶かした0.594mmolの葉酸を、1mlの無水溶媒中0.595mmolのTEA(82.5μl)および0.595mmolのDCC(0.123g)とアルゴン雰囲気下に1時間反応させた。混合物に、1mlの無水DMASO中0.594mmolのN−ヒドロキシスクシンイミドを加え、これを不活性条件下に一晩反応させた。DCUを濾去し、生成物を無水Et2Oに沈殿させ、濾過回収した。活性エステルを真空下にほぼ2時間乾燥し、次いで、先に得た4級化DAB−32との反応に用いた。
先に調製した葉酸活性エステルを、以下の手順に従ってデンドリマーに葉酸標的化リガンドを導入するための出発物質として用いる。7mlの無水DMSOに溶かした0.01
37mmolの4級化DAB−32の溶液を、1mlの同じ無水溶媒に溶かした0.0413mmolの葉酸−NHS活性エステルに加えた。5日後、生成物を無水Et2Oに沈殿させ、1200カットオフ膜を用いて、先ずpH7.4のリン酸緩衝液、次いで、脱イオン水に対して透析し、凍結乾燥した。
(ポリグリセロールPG−5のPEG化)
pH13のトリメチルアミン水溶液に溶かした水10ml中0.04094mmolのPG−5の溶液に、水10mlに溶かした0.1639mmolのメトキシポリエチレングリコール−イソシアネートを加えた。混合物を不活性雰囲気下に約4日間反応させ、未反応ポリマーとPEG−イソシアネートを除去するために12,400カットオフ膜で透析し、最後に、凍結乾燥、真空乾燥して、PEG化PG−5を得た。
1モル当量のジシクロヘキシルカルボジイミドおよびピリジンを含有する無水ジメチルスルホキシド中でポリオキシエチレン−ビス−アミン(ネクター(Nektar)、MW3,400)を等モル量の葉酸と反応させて、NH2−PEG−葉酸を合成した。反応混合物を室温下に暗所で一晩攪拌した。反応終了後、倍容量の水を加え、不溶性副生成物のジシクロヘキシル尿素を遠心分離により除去した。次いで、上澄みを5mMのNaHCO3緩衝液(pH9.0)、次いで脱イオン水に対して透析して、混合物中の未反応葉酸を除去した(1,200カットオフ)。次いで、過剰な5mMリン酸緩衝液(pH7.0)で予洗したセルロースリン酸カチオン交換樹脂を用いたバッチ吸着法により、微量の未反応ポリオキシエチレン−ビス−アミンを除去した。生成物NH2−PEG−葉酸を再度水に対して透析して、凍結乾燥し、その1Hおよび13C NMRスペクトルをD2O中で記録した。葉酸の存在は、生成物の1H NMRスペクトル中、プテリン環7位のメチン基に対応する8.64ppmの特性シグナルおよびベンジル部分の芳香族プロトンに対応する6.74ppmおよび7.60ppmの2つの2重線によって確認された。共役体1個当たりの平均葉酸分子数は、残留アミノ基の隣のα−メチレン基に対応する3.15ppmの
シグナルに対する、8.64ppmのシグナルの積分比から予測した。13C NMRスペクトル中で、α−メチレンのシグナルが30.4ppmから32.6ppmの新規ピークに入れ替わったことにより、葉酸のγ−カルボキシル基のみが反応した。
ポリグリセロール PG−5をDMF中過剰な無水コハク酸と微高温下に一晩反応させて、該ポリグリセロールのヒドロキシル基の5〜10%が反応するように、PG5−PEG−葉酸を合成した。反応生成物を水に対して透析し、その構造を1Hおよび13C NMR実験で確認した。1H NMRスペクトル中に、新規形成されたエステル結合に対するα−およびβ−メチレンに対応するそれぞれ2.5ppmと2.6ppmの2つの新規シグナルが出現した。さらに、上述のように、無水DMF中、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよびピリジンの存在下に、NH2−PEG−葉酸を修飾ポリグリセロールPG5と反応させてアミド結合を形成させた。反応生成物を水に対して透析し(5,000カットオフ)、この場合も葉酸の導入を1Hおよび13C NMR実験で確認した。ハイパーブランチポリマー上のPEG−葉酸の存在は、1H NMRスペクトル中8.64ppmの特性シグナルで確認された。共役体1個当たりの平均葉酸分子数は、ポリマーのコア基のメチル基に対応する0.82ppmのシグナルに対する、8.64ppmのシグナルの積分比から予測した。さらに、本発明の分子中の葉酸含有量も、PBS(pH7.4)中の該共役体の定量的UV分光分析により吸光係数値ε280=74620M−1cm−1を用いて測定した。
実施例1で調製した多機能性デンドリマーへのベタメタゾン誘導体の封入は、以下の方法を用いて実施した。デンドリマーと吉草酸ベタメタゾン誘導体をクロロホルム/エタノール混合物に溶解させた。溶媒を蒸留して薄膜を得、これを水中に分散させた。化合物を封入したデンドリマーは水性相に取り込まれたが、非封入物質は水に不溶のままであったので、遠心分離して除去した。多機能性デンドリマー内に封入された吉草酸ベタメタゾンの割合が表1に示されている。表には、比較のために、例えば周知のプローブであるピレンの封入データが入っている。
天然血清、塩化ナトリウム水溶液(300mM)、PPMI−1640などの種々の媒体中で、正に荷電した多機能性デンドリマーをプラスミドDNA(3〜7mg)に加え、デンドリマーとDNAの電荷比が3.5:1〜8.5:1となるようにした。
(図1) 本発明の1つの目的である対称デンドリマー構造を有する一般式Iの分子の構造を示す図。記号(●:黒く塗りつぶされた円)は、3つ以上の化学結合を形成し得る化学元素の原子(例えば窒素)、または適切な特性基であり、直線(─)は脂肪族鎖であり、表面官能基X、Y、Zは、共同で、(a)上記ポリマーの分子を細胞の相補的受容体によって認識可能なものとし、(b)上記ポリマーを生物学的環境内で安定にし、かつ(c)これらのポリマーの細胞膜を介した輸送を促進する基である。
第1段階では、デンドリマーの表面アミノ基またはヒドロキシ基を、例えばエポキシ−またはN−ヒドロキシスクシンイミドなどの反応基を持つ適切なポリマーと反応させる。
第2段階では、毒性アミノ基を置換するために、デンドリマー表面に残留するアミノ基の大部分を、例えばエチルイソシアネートと反応させる。
第3段階では、例えばグアニジニウム基などの認識基を導入する。
第4段階では、担体と担体に封入された化合物との細胞膜を介した移動を促進する基、例えば、グアニジニウム基、オリゴアルギニンまたはポリアルギニンなどを導入する。
(図6) 封入された吉草酸ベタメタゾンの放出を塩化ナトリウム水溶液の濃度の関数として示す図。
Claims (24)
- 対称化学構造を有するデンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマーであって、
3つ以上の化学結合を形成し得る化学元素の少なくとも1つの原子と、
前記少なくとも1つの原子に結合した種々の異なる末端官能基であって、該末端官能基は以下の官能基(i)〜(iv)を含む末端官能基と
(i)ヒドロキシ、カルボキシル、第4級アンモニウム基、およびグアニジニウム基から選択された少なくとも1つの基、
(ii)ポリアルキレングリコール、
(iii)炭水化物部分、葉酸、RGD受容体、核酸塩基部分、およびバルビツル酸基から選択された少なくとも1つの基、
(iv)グアニジニウム部分、オリゴアルギニン、ポリアルギニン誘導体、およびポリプロピレンオキシド部分から選択された、担体と担体に封入されている薬物成分の細胞膜を介した輸送を促進する少なくとも1つの基、
を備え、
前記末端官能基は、共同で、
(a)低毒性または無毒性であり、
(b)前記ポリマーの分子を細胞の相補的受容体が認識可能なものとし、
(c)前記ポリマーを生物学的環境内で安定にし、かつ
(d)細胞膜を介した前記ポリマーの輸送を促進する
ことを特徴とする末端官能基と
を含んでなるように修飾されていることを特徴とするデンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマー。 - 前記化合物を遺伝物質の担体とする場合、DNAとの複合体を形成するようにカチオン化される、請求項1に記載のデンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマー。
- デンドリマーの末端基に、アンモニウム、第4級アンモニウムまたはグアニジニウム基が導入されてカチオン化される、請求項2に記載のデンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマー。
- 3つ以上の化学結合を形成し得る化学元素の原子が、窒素、炭素またはケイ素である、請求項1に記載のデンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマー。
- 修飾ジアミノブタンポリプロピレンイミノデンドリマー(DAB)またはPAMAMデンドリマーである、請求項1に記載の修飾デンドリマー。
- 無水物と、ジアルキルアミンとの重縮合から誘導される、請求項1に記載の修飾非対称ハイパーブランチポリマー。
- エポキシド誘導体と1,1,1−トリヒドロキシアルキルプロパンとのアニオン重合から誘導される、請求項1に記載の修飾非対称ハイパーブランチポリマー。
- グリシドールと1,1,1−トリヒドロキシメチルプロパン(PG−5)とのアニオン重合から誘導される、請求項1に記載の修飾非対称ハイパーブランチポリマー。
- 生物活性医薬化合物が封入されているか、または遺伝物質を担持している、請求項1〜8のいずれか1項に記載のデンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマー。
- 生物活性医薬化合物がベタメタゾンまたはベタメタゾン誘導体である、請求項1〜8のいずれか1項に記載のデンドリマーまたは非対称ハイパーブランチポリマー。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の多機能性デンドリマーまたはハイパーブランチポリマーの合成法であって、これらのポリマーの表面を、
(a)該表面のアミノ基を、ヒドロキシ、カルボキシルもしくは第4級アンモニウム基で置換するステップと、
(b)デンドリマー担体またはハイパーブランチポリマー担体を生体のMPS(単核食細胞系)から保護するために、これらのポリマーの表面に、ポリアルキレングリコールを導入するステップと、
(c)グアニジニウム基、炭水化物部分、葉酸もしくはRGD受容体、核酸塩基部分およびバルビツル酸基から選択された、担体の標的化能力を強化するために、受容体または組織に相補的で認識可能な基を導入するステップと、
(d)グアニジニウム部分、オリゴアルギニン、ポリアルギニン誘導体、およびポリプロピレンオキシド部分から選択された、担体と担体に封入されている薬物成分の細胞膜を介した輸送を促進する基を導入するステップと
を含んでなるステップで修飾することを特徴とする方法。 - 前記ポリアルキレングリコールはポリエチレングリコールである請求項11に記載の方法。
- 前記炭化水素部分はマンノース、グリコース、およびガラクトースから選択される請求項11に記載の方法。
- 前記核酸塩基部分はアデニン、チミン、グアニン、およびシトシンから選択される請求項11に記載の方法。
- 先ず、デンドリマーまたはハイパーブランチポリマーの表面アミノ基またはヒドロキシ基を、一方の末端に反応基を持つ適切な保護ポリマーと反応させ、
次いで、毒性アミノ基を置換するために、得られたポリマーの大部分のアミノ基をエチルイソシアネートと反応させ、
次いで、アミノ基を前記認識可能な基に変換するために、先に得られたポリマーを反応させ、
次いで、細胞膜を介した担体輸送を促進するポリアルギニンおよびプロピレンオキシド鎖から選択された1つ以上の基を導入する、請求項11に記載の方法。 - 前記反応基はイソシアネート、エポキシドおよびN−ヒドロキシスクシンイミドから選択される請求項15に記載の方法。
- 前記認識可能な基はグアニジニウム基である請求項15に記載の方法。
- DNAとの複合体を形成するために前記ポリマーをカチオン化することを特徴とする、請求項11〜17のいずれか1項に記載の方法。
- 表面毒性基がアミノ基のとき、その置換基として、8個未満の炭素原子を有する脂肪族鎖を導入することを特徴とする、請求項11〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 前記脂肪族鎖が2または3個の炭素原子を有する請求項19に記載の方法。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の修飾多機能性デンドリマーまたは修飾多機能性非対称ハイパーブランチポリマー中に封入された生物活性医薬化合物または遺伝物質を含んでなることを特徴とする医薬製剤。
- 生物活性医薬化合物または遺伝物質を送達するための医薬製剤の製造法であって、請求項11〜20のいずれか1項に記載のポリマー合成法と、生物活性医薬化合物または遺伝物質を前記ポリマーで封入するステップとを含んでなる方法。
- 生物活性医薬化合物が封入されているか、または治療用の遺伝物質を担持している、請求項1〜10のいずれか1項に記載の修飾デンドリマーまたは修飾非対称ハイパーブランチポリマーの使用であって、医薬製剤を製造するための使用。
- 生物活性医薬化合物が封入されているか、または治療用の遺伝物質を担持している、請求項1〜10のいずれか1項に記載の修飾デンドリマーまたは修飾非対称ハイパーブランチポリマーの使用であって、前記生物活性医薬化合物または遺伝物質が治療に用いられるのと同じ病気または症状を治療するための薬剤の製造における使用。
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