JP4792845B2 - 口内炎改善剤 - Google Patents
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Description
また、キシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であっても良い。一般的には、天然物から製造するために、このような組成物として得られることが多く、以下、主として酸性キシロオリゴ糖組成物について説明する。
該組成物は、平均重合度で示す数値は正規分布または他の分布をとる酸性キシロオリゴ糖のキシロース鎖長の平均値で、2.0〜15.0が好ましく、5.0〜15.0がより好ましい。キシロース鎖長の上限と下限との差は15以下が好ましく、10以下がより好ましい。ウロン酸は天然では、ペクチン、ペクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、デルタマン硫酸等の種々の生理活性を持つ多糖の構成成分として知られている。本発明におけるウロン酸としては特に限定されないが、グルクロン酸もしくは4−O−メチル−グルクロン酸が好ましい。
なお、酸性キシロオリゴ糖は、他のオリゴ糖やキシロオリゴ糖と比較して、長鎖であっても耐酸性、耐熱性及び水溶性が非常に高いという特徴がある。
本発明の口内炎改善剤における酸性キシロオリゴ糖の含有率は0.01質量%以上であるが、好ましくは10質量%以上である。また、酸性キシロオリゴ糖とハタケシメジエキスを混合する場合は、口内炎改善剤中の該混合物合計の含有率は0.01質量%以上であるが、好ましくは10質量%以上である。
粉末にする場合は、酸性キシロオリゴ糖組成物溶液とハタケシメジ抽出液を夫々公知のスプレードライ法などにより粉末化し、適当な比率で混合して得られた混合粉末を、本発明の口内炎改善剤として使用することが出来る。その際に、取り扱いを容易にするために澱粉などの物質を混合しても良い。
(1) 全糖量の定量:
全糖量は検量線をD−キシロース(和光純薬工業(株)製)を用いて作製し、フェノール硫酸法(還元糖の定量法、学会出版センター発行)にて定量した。
還元糖量は検量線をD−キシロース(和光純薬工業(株)製)を用いて作製、ソモジ−ネルソン法(還元糖の定量法、学会出版センター発行)にて定量した。
ウロン酸は検量線をD−グルクロン酸(和光純薬工業(株)製)を用いて作製、カルバゾール硫酸法(還元糖の定量法、学会出版センター発行)にて定量した。
サンプル糖液を50℃に保ち15000rpmにて15分遠心分離し不溶物を除去し上清液の全糖量を還元糖量(共にキシロース換算)で割って平均重合度を求めた。
オリゴ糖鎖の分布はイオンクロマトグラフ(ダイオネクス社製、分析用カラム:Carbo Pac PA−10)を用いて分析した。分離溶媒には100mM NaOH溶液を用い、溶出溶媒には前述の分離溶媒に酢酸ナトリウムを500mMとなるように添加し、溶液比で、分離溶媒:溶出溶媒=10:0〜4:6となるような直線勾配を組み分離した。得られたクロマトグラムより、キシロース鎖長の上限と下限との差を求めた。
サンプル糖液を50℃に保ち15000rpmにて15分遠心分離し不溶物を除去し上清液のウロン酸量(D−グルクロン酸換算)を還元糖量(キシロース換算)で割ってオリゴ糖1分子あたりのウロン酸残基数を求めた。
酵素として用いたキシラナーゼの活性測定にはカバキシラン(シグマ社製)を用いた。酵素力価の定義はキシラナーゼがキシランを分解することで得られる還元糖の還元力をDNS法(還元糖の定量法、学会出版センター発行)を用いて測定し、1分間に1マイクロモルのキシロースに相当する還元力を生成させる酵素量を1ユニットとした。
混合広葉樹チップ(国内産広葉樹70%、ユーカリ30%)を原料として、クラフト蒸解及び酸素脱リグニン工程により、酸素脱リグニンパルプスラリー(カッパー価9.6、パルプ粘度25.1cps)を得た。スラリーからパルプを濾別、洗浄した後、パルプ濃度10%、pH8に調製したパルプスラリーを用いて以下のキシラナーゼによる酵素処理を行った。
バチルスsp.S−2113株(独立行政法人産業技術総合研究所特許微生物寄託センター、寄託菌株FERM BP-5264)の生産するキシラナーゼを1単位/パルプgとなるように添加した後、60℃で120分間処理した。その後、濾過によりパルプ残渣を除去し、酵素処理液1050Lを得た。
次に、得られた酵素処理液を濃縮工程、希酸処理工程、精製工程の順に供した。濃縮工程では、逆浸透膜(日東電工(株)製、RO NTR-7410)を用いて濃縮液(40倍濃縮)を調製した。希酸処理工程では、得られた濃縮液のpHを3.5に調製した後、121℃で60分間加熱処理し、リグニン等の高分子夾雑物の沈殿を形成させた。さらに、この沈殿をセラミックフィルター濾過で取り除くことにより、希酸処理溶液を得た。
精製工程では、限外濾過・脱色工程、吸着工程の順に供した。限外濾過・脱色工程では、希酸処理溶液を限外濾過膜(オスモニクス社製、分画分子量8000)を通過させた後、活性炭(和光純薬(株)製)770gの添加及びセラミックフィルター濾過により脱色処理液を得た。吸着工程では、脱色処理液を強陽イオン交換樹脂(三菱化学(株)製PK218)、強陰イオン交換樹脂(三菱化学(株)製PA408)、強陽イオン交換樹脂(三菱化学(株)製PK218)各100kgを充填したカラムに順次通過させた後、弱陰イオン交換樹脂(三菱化学(株)製WA30)100kgを充填したカラムに供した。この弱陰イオン交換樹脂充填カラムから75mM NaCl溶液によって溶出した溶液をスプレードライ処理することによって、酸性キシロオリゴ糖の粉末(全糖量353g、回収率13.1%)を得た。以下、この酸性キシロオリゴ糖をUX10とする。前述の測定方法により、UX10は平均重合度10.3、キシロース鎖長の上限と下限との差は10、酸性キシロオリゴ糖1分子あたりウロン酸残基を1つ含む糖組成化合物であった。
ハタケシメジエキスは以下のように調整した。乾燥させたハタケシメジ子実体約50kgに5kLのイオン交換水を加えて、一昼夜加熱抽出後、固液分離、抽出液を濃縮した。得られた濃縮液にデキストリンが33質量%となるようにデキストリンを添加し、スプレードライヤーで粉末化することで、10kg(ハタケシメジ抽出物含量67質量%)のハタケシメジエキス粉末を得た。
調整例1で得た酸性キシロオリゴ糖粉末250mgを1包として、本発明の口内炎改善剤1を1000包作成した。
調整例1で得た酸性キシロオリゴ糖粉末250mgと調整例2で得たハタケシメジエキス粉末160mgを混合した混合粉末を1包として、本発明の口内炎改善剤2を1000包作成した。
調整例2で得たハタケシメジエキス粉末160mgを1包として、ハタケシメジエキス粉末剤を1000包作成した。
口内炎に対する効果を確認する為に、獣医師による口内炎症状(流えん、口臭及び食欲等のQOL)の所見とウイルス抗体検査から難治性口内炎と診断された猫への投与試験を行い、実施例1とした。以下にその概要を示す。
口内炎症状の見られる5匹の猫(体重約3〜5kg、日本猫、3〜7歳)に調整例3記載の口内炎改善剤1を市販のキャットフードに混ぜて投与(1包/日)し、定期的に獣医師により経過観察を行った。投与開始後の各時期の獣医師による所見「著明改善(劇的に改善)、改善(明らかに改善)、やや改善(何らかの改善)、不変、悪化」をもとに、改善以上となった投与期間を示す(表1)。なお、著明改善の3日後からは口内炎改善剤の投与を中止した。
実施例1と同様に、調整例4記載の口内炎改善剤2を用いて猫への投与試験を行い、実施例2とした。以下にその結果を示す(表2)。
実施例1と同様に、調整例5記載のハタケシメジエキス粉末剤を用いて猫への投与試験を行い、比較例1とした。投与開始後の各時期の獣医師による所見「著明改善(劇的に改善)、改善(明らかに改善)、やや改善(何らかの改善)、不変、悪化」を示す(表3)。
調整例3の口内炎改善剤1と調整例4の口内炎改善剤2の60%水溶液を、それぞれ、ICR系マウス(雄、6週齢、日本チャールズリバー(株)製)に胃ゾンデを用いて、4週間、連日経口投与した(投与量:5g/マウス体重Kg/日、各群10匹)。投与期間及び投与後の4週間、マウス死亡例はなかった。また、ブランク(水投与群)と比較し、体重推移においても有意な差が認められなかった。これは、経口摂取における本発明の口内炎改善剤の安全性の高さを示す。
Claims (4)
- キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖単独、または酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを含有することを特徴とする口内炎改善剤。
- 該酸性キシロオリゴ糖はキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、キシロースの平均重合度が5.0〜15.0であることを特徴とする請求項1に記載の口内炎改善剤。
- 前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得る加水分解処理工程、加水分解処理工程で得られた処理液を濃縮する濃縮工程、濃縮工程で得られた濃縮液を酸加水分解処理し、酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖を含む希酸処理液を得る希酸処理工程、希酸処理工程で得られた希酸処理液から、酸性キシロオリゴ糖以外の成分を除去するために、限外濾過工程、脱色工程、吸着工程を経て得られたもの」であること特徴とする請求項1または請求項2に記載の口内炎改善剤。
- ウロン酸がグルクロン酸もしくは4−O−メチル−グルクロン酸であることを特徴とする請求項1〜請求項3のいずれかに記載の口内炎改善剤。
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