JP4686709B2 - マンノース発酵性ザイモバクター属形質転換微生物 - Google Patents
マンノース発酵性ザイモバクター属形質転換微生物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4686709B2 JP4686709B2 JP2005067661A JP2005067661A JP4686709B2 JP 4686709 B2 JP4686709 B2 JP 4686709B2 JP 2005067661 A JP2005067661 A JP 2005067661A JP 2005067661 A JP2005067661 A JP 2005067661A JP 4686709 B2 JP4686709 B2 JP 4686709B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dna
- mannose
- gene
- zymobacter
- microorganism
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
これまで、微生物を用いるセルロース系バイオマスからのエタノール生産の効率向上のために、セロビオース発酵酵母を用いる方法や、クロストリジウム(Clostridium)属の細菌を用いる方法(特許文献1および2参照)等が提案されている。
一方、遺伝子マーカーを付与の研究において、ザイモモナス属の細菌に微生物由来のホスホマンノースイソメラーゼとフルクトキナーゼの外来遺伝子を導入してマンノースでの生育を確認したことが報告されている(非特許文献1参照)。
まず、本発明者らは、マンノース分解能を有する微生物に注目し、種々スクリーニングを行ったところ、マンノースの代謝に関与するフルクトースキナーゼとホスホマンノースイソメラーゼの遺伝子を得ることができた。しかし、ザイモバクター属の細菌における宿主−ベクター系が確立されていなかったことから、ベクターの構築、形質転換法およびマンノースの代謝に関与する酵素の遺伝子のクローニングに努力を重ね、本発明を完成するに至った。
(1)マンノース代謝系酵素生産菌株をDNA供与体とし、そのDNA断片をベクターに結合させることによって得られる組換えDNAであって、フルクトースキナーゼおよびホスホマンノースイソメラーゼのうちの少なくとも1つの酵素の遺伝子を含有することを特徴とする組換えDNA、
(2)DNA供与体が、ザイモモナス属、エシェリヒア(Escherichia)属、キサントモナス(Xanthomonas)属、クレブシエラ(Klebsiella)属、ロドバクター(Rhodobacter)属、フラボバクテリウム(Flavobacterium)属、アセトバクター(Acetobacter)属、グルコノバクター(Gluconobacter)属、リゾビウム(Rhizobium)属、アブロバクテリウム(Abrobacterium)属、サルモネラ(Salmonella)属およびシウドモナス(Pseudomonas)属に属する微生物から選ばれる上記(1)記載の組換えDNA、
(3)フルクトースキナーゼおよびホスホマンノースイソメラーゼの遺伝子を含有する上記(1)記載の組換えDNA、
(4)DNA供与体が、ザイモモナス・モビリス(Zymomonas mobilis)およびエシェリヒア・コリ(Escherichia coli)である上記(3)記載の組換えDNA、
(5)遺伝子が配列表の配列番号9に示す配列を有する上記(3)記載の組換えDNA、
(6)フルクトースキナーゼおよびホスホマンノースイソメラーゼのうちの少なくとも1つの酵素の外来遺伝子が導入されたザイモバクター属の微生物であって、マンノースを基質としてエタノールを生産することができる形質転換微生物、
(7)外来遺伝子がフルクトースキナーゼおよびホスホマンノースイソメラーゼの遺伝子である上記(6)記載の形質転換微生物、
(8)遺伝子が配列表の配列番号9に示す塩基配列を有する上記(7)記載の形質転換微生物、
(9)Zymobactrer palmae T109/pMFY31-manA-frk(識別表示 Zb0501;FERM AP−20437)である上記(7)記載の形質転換微生物、
(10)以下の(a)または(b)のDNAからなる遺伝子、
(a)配列表の配列番号9に示す塩基配列からなるDNA
(b)(a)の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつフルクトースキナーゼおよびホスホマンノースイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードする微生物由来のDNA
(11)配列表の配列番号9に示す塩基配列である遺伝子を含有する組換えベクター、等を提供するものである。
ザイモバクター属の細菌の多くは、フルキトキナーゼとホスホマンノースイソメラーゼとの両者を欠損している場合が多いので、本発明においては、両方の遺伝子を導入することが好ましいが、フルクトキナーゼを有する菌株の存在も推定されており、そのような菌株では、ホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子の導入のみでマンノース発酵性を示す形質転換体が得られる。
まず、供与体微生物をグリシン0.5 %を含むイースト−スターチ培地(組成:イーストエキス0.2%、可溶性澱粉1.0%、pH7.3)などの適当な液体培地に接種し、4〜60℃、好ましくは30℃で8〜48 時間、好ましくは一夜攪拌培養する。培養終了後、固−液分離操作、例えば0〜50℃、好ましくは4℃で回転数3000〜15000rpm、好ましくは10000rpmの条件で遠心分離を行うことにより集菌する。これをVS緩衝液(0.15M NaCl、0.1M EDTA、pH8.0)に懸濁し、リゾチームを加えた後、4〜45℃、好ましくは37℃で0.5〜4時間、好ましくは1時間放置してプロトプラスト液を得る。該液に、TSS緩衝液(0.1Mトリス、0.1M NaCl、1%SDS、pH9.0)および5M NaClを加えてプロトプラストを溶解させる。ついで、TE溶液(10mMトリス、1mM EDTA、pH8.0)−飽和フェノールを加え、穏やかに、かつ十分に懸濁する。これを0〜50℃、好ましくは4℃で回転数3000〜15000rpm、好ましくは12000rpmで遠心分離し、得られた上層(水相)をクロロホルム液で懸濁する。さらに、これを0〜50℃、好ましくは4℃で回転数3000〜15000rpm、好ましくは12000rpmで遠心分離し、得られた上層(水相)を再度フェノールおよびクロロホルムを用いて懸濁処理する。ついで、冷エタノールを加え、生じた白濁の粗染色体DNAを回収し、該DNAをSSC緩衝液(0.15M NaCl、0.015Mクエン酸ナトリウム)に溶解し、SSC緩衝液に対して一晩透析する。この透析内液に、リボヌクレアーゼを終濃度1〜50μg/ml、好ましくは10μg/ml加え、4〜45℃、好ましくは37℃で0.5〜16時間、好ましくは2時間放置する。さらに、プロテアーゼを終濃度0.1〜10μg/ml、好ましくは1μg/ml加え、4〜45℃、好ましくは37℃で15分間〜8時間、好ましくは30 分間放置する。これを、上記と同様にフェノールおよびクロロホルムを用いて処理し、SSC 緩衝液に対して透析し、精製した供与体微生物の染色体DNA液とする。
ハイブリダイゼーションは、公知の方法、例えば、モレキュラー・クローニング(Molecular Cloning)3rd(J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 2001)に記載の方法などに従って行なうことができ、ストリンジェントな条件としては、例えば、ナトリウム濃度が約19〜40mM、好ましくは約19〜20mMで、温度が約50〜70℃、好ましくは約60〜65℃の条件が挙げられる。
こうして得られた形質転換微生物の増殖培地としては、例えばRM培地などが用いられる。培養温度等の培養条件は宿主微生物の性質に応じて適宜設定できる。また、用いたベクターDNA断片が、各種の抗生物質耐性遺伝子をコードしているものであれば、培地中に、相当する抗生物質を適量加えることで、組換えDNAをより安定的に保持することができる。さらに、用いたベクターDNA が、宿主微生物の栄養要求性を補う遺伝子をコードしているものであれば、その要求される栄養素を含まない培地を用いることにより、同様に組換えDNAの安定性が向上する。
以下に、実施例を用いて本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例においては、マンノースリン酸化反応を触媒することが報告されているザイモモナス由来のフルクトキナーゼ遺伝子をザイモモナス菌のゲノムDNA、また、ホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子をエシェリヒア・コリのゲノムDNAからPCRを用いてクローニングした。また、導入した2種の酵素遺伝子ザイモバクター・パルメ細胞内で発現させるために、ザイモバクター・パルメに近縁とされるザイモモナス・モビリス細胞内で大量発現が報告されているグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素の発現を制御するプロモーター遺伝子(GAPプロモーター)を利用した。
ザイモモナス菌由来のフルクトキナーゼ遺伝子はPCRによりクローニングした。すなわち、ザイモモナス・モビリス由来のグリセルアルデヒド−3−リン酸脱水素酵素遺伝子のプロモーター遺伝子の下流にフルクトキナーゼ遺伝子をタンデムに連結し、かつ、そのDNA断片の両末端にクローニングのためのBamHIとSalI制限酵素切断部位を付与したDNA断片を調製するために、公知のザイモモナズ・モビリス由来グリセルアルデヒド−3−リン酸脱水素酵素遺伝子配列(J. Bacteriol. Vol.169 (12), 5653-5662, 1987)と公知のザイモモナス・モビリス由来のフルクトキナーゼ遺伝子の塩基配列(J. Bacteriol. 174 (11), 3455-3460 (1992))に基づき、4種のPCRRプライマー
BZGf(配列番号1):CGCGGATCCGTTCGATCAACAACCCGAATCCTATC
GZFf(配列番号2):CTTAATAAGTTAGGAGAATAAACATGAAAAACGATAAAAAAATTTATGGA
GZFr(配列番号3):TCCATAAATTTTTTTATCGTTTTTCATGTTTATTCTCCTAACTTATTAAG
ZFSr(配列番号4):GGCGTCGACTTCCAAAATCCCTTTTCGGTTAAGAA
を設計した。一次PCRとして、ザイモモナス・モビリス菌体(Zymomonas mobiliz IFO 13756)から調製したゲノムDNAをテンプレートに、プライマーBZGfとGZFrを用いて、プロモーターとフルクトキナーゼ遺伝子のN末部位を含む約300bpDNA断片を増幅した。一方、エシェリヒア・コリのゲノムDNA(Escherichia coli K12)をテンプレートにプライマーGZFfとZFSrを用いて、プロモーター遺伝子の一部とフルクトキナーゼ遺伝子を含む約1.0kbpDNA断片を増幅した。つぎに、プロモーター遺伝子を含むDNA断片とフルクトキナーゼ遺伝子を含むDNA断片を混合して94℃で20分間加熱後、37℃で15分間保持することによりヘテロデュープレックスを形成させた後、TaqDNAポリメラーゼ存在下、72℃で3分間反応させた。この反応液に、プライマーBZGfとプライマーZFSrを添加して二次PCRを行い、Gapプロモーター遺伝子、フルクトキナーゼ遺伝子の順に連結した約1.3 kbpDNA断片を増幅させた。このDNA断片の両末端を平滑化反応後、エシェリヒア・コリ用ベクタープラスミドDNA、pUC118のHincII制限酵素切断片と混合してT4リガーゼにより連結させて組換えプラスミドDNAを作製した。作製した組換えプラスミドを用いてエシェリヒア・コリJM109を常法に従い形質転換した後、形質転換株を50μg/mlのアンピシリン、0.1mMイソプロピル−β−D−チオ−ガラクトシド、20 μg/mlの5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリル−β−D−ガラクトピラノシドを含むLB平板培地(1%バクトトリプトン(Bacto Tripton)、0.5%酵母エキス、1%NaCl、1.5%寒天)に塗布して、コロニーを形成させた。白色コロニーを形成した形質転換株から抽出した組換えプラスミドをpUC118−frkとした。
図2に得られた組換えプラスミドpUC118−frkの制限酵素地図を示す。
エエシェリヒア・コリ由来ホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子はPCRによりクローニングした。すなわち、ザイモモナス・モビリス由来グリセルアルデヒド−3−リン酸脱水素酵素遺伝子のプロモーター遺伝子の下流にホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子をタンデムに連結し、かつ、そのDNA断片の両末端にクローニングのためのEcoRIとBamHI制限酵素切断部位を付与したDNA断片を調製するために、公知のザイモモナス・モビリス由来のグリセルアルデヒド−3−リン酸脱水素酵素遺伝子配列と公知のエシェリヒア・コリ由来のホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子の塩基配列(Gene 32 (1-2), 41-48 (1984))に基づき、4種のPCRプライマー
EZGf(配列番号5):CGGAATTCGTTCGATCAACAACCCGAATCCTATCG
GEMf(配列番号6):CTTAATAAGTTAGGAGAATAAACATGCAAAAACTCATTAACTCAGTGCAA
GEMr(配列番号7):TTGCACTGAGTTAATGAGTTTTTGCATGTTTATTCTCCTAACTTATTAAG
Embr(配列番号8): CGCGGATCCTTACAGCTTGTTGTAAACACGCGCTA
を設計した。一次PCRとして、上記ザイモモナス・モビリス菌体から調製したゲノムDNAをテンプレートにプライマーEZGfとGEMrを用いて、プロモーターとホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子のN末部位を含み、そのプロモーター遺伝子上流末端にEcoRI制限酵素切断部位を付加した約300bpDNA断片を増幅した。一方、上記エシェリヒア・コリのゲノムDNAをテンプレートにプライマーGEMfとEMBrを用いて、プロモーター遺伝子の一部とホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子を含み、そのホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子のC末端にBamHI制限酵素切断部位を付加した約1.5kbpDNA断片を増幅した。つぎに、プロモーター遺伝子を含むDNA断片とホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子を含むDNA断片を混合して94℃で20分間加熱後、37℃で15分間保持することによりヘテロデュープレックスを形成させた後、TaqDNAポリメラーゼ存在下、72℃で3分間反応させた。この反応液に、プライマーEZGfとプライマーEMBrを添加して二次PCRを行い、Gapプロモーター遺伝子とホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子の順に連結した約1.5kbpDNA断片を増幅させた。このDNA断片の両末端を平滑化反応後、エシェリヒア・コリ用ベクタープラスミドDNA、pUC118のHincII制限酵素切断片と混合してT4リガーゼにより連結させて組換えプラスミドDNAを作製した。作製した組換えプラスミドを用いてエシェリヒア・コリJM109を常法に従い形質転換した後、形質転換株を50μg/mlのアンピシリン、0.1mMイソプロピル−β−D−チオ−ガラクトシド、20μg/mlの5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリル−β−D−ガラクトピラノシドを含むLB平板培地(1%バクト・トリプトン、0.5%酵母エキス、1%NaCl、1.5%寒天)に塗布して、コロニーを形成させた。白色コロニーを形成した形質転換株から抽出した組換えプラスミドをpUC118−manAとした。
図3に得られたpUC118−manAの制限酵素地図を示す。
2種のマンノース代謝系酵素遺伝子をザイモバクター・パルメに導入して発現させるために、これら遺伝子を広宿主域性プラスミドベクターに挿入して組換えプラスミドを作製した。組換えプラスミドpUC118−frkをBamI制限酵素とSalI制限酵素を用いて切断することにより、GAPプロモーター遺伝子、およびフルクトキナーゼ遺伝子を含む約1.3kbpDNA断片を調製した。また、組換えプラスミドpUC118−manAをEcoRI制限酵素とBamHI制限酵素を用いて切断することにより、GAPプロモーター遺伝子、およびホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子を含む約1.5kbpDNA断片を調製した。これら両DNA断片と広宿主域性ベクタープラスミドpMFY31(Agric. Boil. Chem., Vol.49(9), 2719-2724, 1985)をEcoRI制限酵素とSalI制限酵素により切断して調製した約11.6kbpDNA断片を混合してT4リガーゼにより連結させて組換えプラスミドDNAを作製した。作製した組換えプラスミドを用いてエシェリヒア・コリJM109を常法に従い形質転換した後、形質転換株を50μg/mlのアンピシリン、0.1mMイソプロピル−β−D−チオ−ガラクトシド、20μg/mlの5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリル−β−D−ガラクトピラノシドを含むLB平板培地(1%バクト・トリプトン、0.5%酵母エキス、1%NaCl、1.5%寒天)に塗布して、コロニーを形成させた。コロニーを形成した形質転換株から抽出した組換えプラスミドに、GAPプロモーター、ホスホマンノースイソメラーゼ遺伝子、フルクトキナーゼ遺伝子、GAPプロモーター、トランスアルドラーゼ遺伝子、トランスケトラーゼ遺伝子が、この順番で連結していることを確認して、pMFY31−manA−frkとした。
図4に得られたpMFY31−manA−frkの制限酵素地図を示す。
エシェリヒア・コリ内で構築した組換えプラスミドpMFY31−manA−frkをザイモバクター・パルメに形質転換した。ザイモバクター・パルメ(Zymobacter palmae T109)ATCC51623株をRM培地(2.0%グルコース、1.0%バクト酵母エキス、0.2%KH2PO4、pH6.0)で一晩静置培養した5mlの前培養液を、50mlのT培地(2.0%グルコース、1.0%バクト酵母エキス、1.0%KH2PO4、0.2%(NH4)2SO4、0.05%MgSO4・7H2O、pH6.0)に植え継ぎ、30℃で90分間培養した。培養液を4℃で、300rpmの10分間の遠心分離により菌体を集め、20mlの冷却した10%グリセロールを加え、懸濁・洗浄した。再び、4℃、3000rpmで10分間遠心してコンピテントセルとした。200μlのコンピテントセルと10μlのpMFY31−xtDNA溶液を氷上にて混合した後、エレクトロポレーション装置付属のキュベットに移して、電圧が200V、キャピタンシーが250μFD、抵抗値が200Ωの条件下で電気的パルスを陰荷した。直ちに1mlのT培地をキュベットに添加して、30℃で1時間静置培養した後、選択培地上でコロニーを形成させた。マンノース発酵性の形質転換体はマンノースを唯一の炭素源とし、100μg/mlのAmpを含むT寒天平板培地(2.0%マンノース、1.0%バクト酵母エキス、1.0%KH2PO4、0.2%(NH4)2SO4、0.05%MgSO4・7H2O、1.5%寒天、pH6.0)上で選択し、形質転換株細胞内での2種の酵素遺伝子の発現を確認した。得られた形質転換体は、Zymobactrer palmae T109/pMFY31-manA-frk(識別表示Zb0501)と命名し、平成17年3月4日から、茨城県つくば市東1−1−1 中央第6の、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに受託番号FERM AP−20437の下で寄託してある。
Zymobactrer palmae T109/pMFY31-manA-frkをT培地で培養した後、無細胞抽出液を調製して2種の酵素活性を測定した。結果を表1に示す。なお、対象菌株として、親株(Zymobactrer palmae T109)を用いて同様に活性測定を行い、比較した。
結果を図5に示す。図5から明らかなごとく、マンノースを唯一の炭素源とした培地ではグルコースのみに比べて生育速度は低下したものの、培養5日目で約2%を消費し、約1.0%のエタノールを生産しており、収率は95%以上であった。また、グルコース+マンノース培地では、培養5日目にはグルコースを完全に消費するとともに、1%のマンノースを消費して、理論収率に近いエタノールの生産に成功した。
配列番号2:ザイモモナス・モビリスのフルクトキナーゼをコードするDNA増幅用に設計したオルゴヌクレオチド・プライマー。
配列番号3:エシェリヒア・コリのフルクトキナーゼをコードするDNA増幅用に設計したオルゴヌクレオチド・プライマー。
配列番号4:エシェリヒア・コリのフルクトキナーゼをコードするDNA増幅用に設計したオルゴヌクレオチド・プライマー。
配列番号5:ザイモモナス・モビリスのホスホマンノースイソメラーゼをコードするDNA増幅用に設計したオルゴヌクレオチド・プライマー。
配列番号6:ザイモモナス・モビリスのホスホマンノースイソメラーゼをコードするDNA増幅用に設計したオルゴヌクレオチド・プライマー。
配列番号7:エシェリヒア・コリのホスホマンノースイソメラーゼをコードするDNA増幅用に設計したオルゴヌクレオチド・プライマー。
配列番号8:エシェリヒア・コリのホスホマンノースイソメラーゼをコードするDNA増幅用に設計したオルゴヌクレオチド・プライマー。
配列番号9:ザイモモナス・モビリス由来のフルクトキナーゼとエシェリヒア・コリ由来のホスホマンノースイソメラーゼとの両方をコードするために設計したDNA。
Claims (1)
- Zymobactrer palmae T109/pMFY31-manA-frk(識別表示 Zb0501;FERM AP−20437)である、マンノースを基質としてエタノールを生産することができる形質転換微生物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005067661A JP4686709B2 (ja) | 2005-03-10 | 2005-03-10 | マンノース発酵性ザイモバクター属形質転換微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005067661A JP4686709B2 (ja) | 2005-03-10 | 2005-03-10 | マンノース発酵性ザイモバクター属形質転換微生物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006246789A JP2006246789A (ja) | 2006-09-21 |
JP4686709B2 true JP4686709B2 (ja) | 2011-05-25 |
Family
ID=37087903
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005067661A Active JP4686709B2 (ja) | 2005-03-10 | 2005-03-10 | マンノース発酵性ザイモバクター属形質転換微生物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4686709B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009081941A1 (ja) * | 2007-12-25 | 2009-07-02 | National University Corporation Tottori University | 木質系および草本系バイオマス糖化液からのバイオエタノール並行発酵菌 |
-
2005
- 2005-03-10 JP JP2005067661A patent/JP4686709B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2006246789A (ja) | 2006-09-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0973915B1 (en) | Recombinant microorganisms capable of fermenting cellobiose | |
EP2227541B1 (en) | Recombinant microorganism having an ability of using sucrose as a carbon source | |
JP4124270B1 (ja) | グルコース・マンノース・キシロース並行発酵性菌およびそれを用いるバイオエタノールの製造方法 | |
BRPI0813710B1 (pt) | método de identificar um polipeptídeo heterólogo tendo atividade enzimática para converter piruvato, acetaldeído ou acetato em acetil-coa no citosol de uma célula de levedura, vetor para a expressão de polipeptídeos heterólogos em levedura, célula de levedura recombinante e método de produzir um produto de fermentação | |
BRPI0618074A2 (pt) | organismos termofìlicos para conversão de biomassa lignocelulósica em etanol | |
US20100105114A1 (en) | Methods and Compositions for Regulating Sporulation | |
JP2013545491A (ja) | バイオマス加水分解物培地中でのキシロース資化性ザイモモナス・モビリスによるエタノール産生の向上 | |
WO2008155665A2 (en) | Method for enhancing cellobiose utilization | |
US8629255B2 (en) | Nucleic acid molecules conferring enhanced ethanol tolerance and microorganisms having enhanced tolerance to ethanol | |
CN102119218A (zh) | 耐热酵母多形汉逊酵母在高温的产乙醇的木糖发酵 | |
CN109652434B (zh) | 一株以甘油为底物生产丁二酸的重组菌及其构建方法与应用 | |
CN103261397A (zh) | 木糖异构酶和木糖醇脱氢酶组合用于木糖发酵为乙醇,以及脆弱拟杆菌木糖脱氢酶 | |
He et al. | Direct production of ethanol from raw sweet potato starch using genetically engineered Zymomonas mobilis | |
JP4686709B2 (ja) | マンノース発酵性ザイモバクター属形質転換微生物 | |
EP2516621A1 (en) | Thermophilic thermoanaerobacter italicus subsp. marato having high alcohol productivity | |
WO2009081941A1 (ja) | 木質系および草本系バイオマス糖化液からのバイオエタノール並行発酵菌 | |
US9951359B2 (en) | Heat-stable, FE-dependent alcohol dehydrogenase for aldehyde detoxification | |
US7569379B2 (en) | Pentose-fermentative transformed zymobacter microorganisms | |
JP2005261421A (ja) | ペントース発酵性ザイモバクター属形質転換微生物 | |
JP4578170B2 (ja) | セロオリゴ糖発酵性ザイモバクター形質転換属微生物 | |
Ma et al. | Metabolic engineering of an ethanol-tolerant Escherichia coli MG1655 for enhanced ethanol production from xylose and glucose | |
US7323322B2 (en) | Ethanol production from transformed Zymobacter microorganisms | |
KR101254401B1 (ko) | 잔탄 생산능 및 생산성이 향상된 재조합 미생물 및 이를 이용하여 잔탄을 대량 생산하는 방법 | |
Arslan | Construction of amylolytic nuclear petite Saccharomyces cerevisiae strains for bioethanol production by SSF | |
JP2009060836A (ja) | 耐熱性エタノール生産細菌及び耐熱性エタノール生産細菌を用いたエタノール生産方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070607 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100427 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100601 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100601 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100907 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101207 |
|
A911 | Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20101221 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110118 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |