JP4686187B2 - キメラmhcタンパク質およびそのオリゴマー - Google Patents
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Description
上記の従来技術の不利益および欠点は、MHCペプチド鎖またはその機能的部分に由来する第1セクションおよびオリゴマーMHC複合体を形成するオリゴマー形成コイルドコイル(coiled-coil)タンパク質に由来するオリゴマー化ドメインを含む第2セクションとを含む少なくとも2つのキメラタンパク質を用いることで克服される。
(i)発明のオリゴマーMHC複合体とT細胞を含む浮遊液もしくは生物学的サンプルとを混合すること、および
(ii)上記複合体とT細胞の特異的結合の存在を検出すること、
を含む方法に関する。
(i)発明のオリゴマーMHC複合体とT細胞を含む浮遊液もしくは生物学的サンプルとを混合すること、および
(ii)上記複合体と結合したT細胞を未結合の細胞から分離すること、
を含む方法に関する。
発明のオリゴマーMHC複合体は、従来技術の不利益および欠点を解決するためのものである。より具体的には、発明者は上記オリゴマーMHC複合体が、例えばビオチンおよびストレプトアビジンを介した結合によるMHC複合体の4量体化によって得られるオリゴマーに比べて実質的に高いT細胞レセプターに対する親和性を獲得できることを見出した。理論と結びつける意図なしに、この親和性の上昇は3個またはそれ以上のMHC分子を実質的に同一面に配置し、全ての結合面を同一方向に向けた時に達成されると思われる。これに対し、ストレプトアビジン結合の4量体複合体は四面体配置を取っており、T細胞表面との接触に同時に利用できるMHC結合ドメインは3つまでである。発明の複合体はさらに選択した標識による活性MHCドメインへの干渉を最小限に留めたまま効率的な標識が可能であるが、これは標識がオリゴマー形成コイルドコイルドメインの反対端部に配置されるからである。
に由来するだろう。MHC分子はヒト型のオリゴマー形成コイルドコイルタンパク質のオリゴマー化ドメインと融合するのが好ましく、この場合複合体をヒトに投与した場合でも不要な免疫反応および/または拒絶反応は最小限に留められるだろう。
のオリゴマー化ドメインと融合する。
従って、第5の局面では、本発明は先に記載の上記オリゴマーMHC複合体を含む医薬用又は診断用組成物に関する。タンパク質を含む医薬用組成物は、例えば非経口投与、すなわち皮下内、筋肉内又は静脈内で使用できる。さらに、多くの新規な薬剤配送方法が開発されている。本発明の医薬組成物は、これらの新しい方法を使用して投与するのにも同様に適している。
作業はβ2mをpET−24cベクター内に連続的にクローニングすること、pETBMC01と称する構築体を獲得すること、続いてビオチン−タンパク質リガーゼBirAを用いて部位特異的にビオチン化するためのビオチンアクセプター配列(BP)と共に軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質(COMP)のオリゴマー化ドメインを挿入すること、pETBMC02と称する構築体を獲得することを包含する。ポリグリシンリンカーをβ2mとCOMPの間にクローニングし、pETBMC03と称する3番目の構築体を獲得し、部位指定突然変異導入法によりセリン残基、ポリグリシンリンカーの前に置かれたセリン残基を取り除いて、目的とするpETBMC04と称する(図3も参照)β2m−COMP/pET−24c構築体を得る。セリン残基の除去は、β2m分子がMHCクラスIα鎖タンパク質と会合した時に立体的な障害を起こさないように実施する。
β2mの供給源
β2mの細胞外部分はDNA配列の74bp〜370bpにコードされる99アミノ酸(成熟タンパク質のIle1〜Met99に等しい)を含む。β2m配列のこの領域は正常人リンパ細胞cDNAライブラリーより、それぞれNdeIおよびBamHI制限部位を組み込んでいるプライマーBMC#1(1μM)およびBMC#2(1μM)を用いたポリメラーゼチェインリアクション(PCR)により増幅した。(Sigma-Genosys、プライマー配列に関する補遺Iを参照)。増幅はプルーフリーディングDNAポリメラーゼ(Pfx、Invitrogen)(1.25U)を用い、2mM MgSO4および0.2mM dNTPsを追加したPfx増幅緩衝液中で、次の標準的なサーマルサイクル条件で実施した。ステップ1:94℃、4分間;ステップ2:94℃、1分間;ステップ3:55℃、1分間;ステップ4:72℃、30秒間;ステップ5:ステップ2に循環、34回;ステップ6:72℃、10分間。
β2mPCR産物を上記混合物よりQIAquick PCR精製キットを、製造元指示書(Qiagen)に従い使用して精製した。精製PCR産物200ngおよびpET−24cベクター(Novagen)1μgをそれぞれ、製造元指示書に従ってBamHI(10U)およびNdeI(10U)制限酵素(New England Biolabs、NEB)で4時間、37℃消化した。消化断片を1%アガロース(Bioline)を用いた水平式ゲル電気泳動で分離し、QIAEX IIゲル抽出キットを製造元指示書(Qiagen)に従い用いて精製した。
ゲル精製した挿入物およびベクターDNAをモル比1:3(ベクター:挿入物、50ng:7.5ng)でT4DNAリガーゼ(5U;Bioline)を用いT4DNAリガーゼ緩衝液(添付品)中で16時間、16℃で連結した。
続いて連結混合物および適当なコントロールをXL1−Blue株コンピテントE.coli細胞内に、製造元の指示書(Stratagene)に従って形質転換した。細胞をカナマイシン30μg/mlを含有するLuria-Bertani(LB)寒天プレート上に細胞を接種し、一晩37℃でインキュベーションして上手く形質転換した細胞を選別した。
細菌形質転換プレートから選択した単一コロニーを、クローニング部位に隣接するpETベクター領域に相補的であるT7プロモータ(1μM)およびT7ターミネータ(1μM)プライマー(Sigma Genosys、プライマー配列に関する補遺I参照)を用いたPCRでスクリーニングした。増幅はTaqDNAポリメラーゼ(1U、Bioline)を2mM MgSO4および0.2mM dNTPsを追加したTaq反応緩衝液(添付品)中に用い、上記25サーマルサイクル反応で実施した。形質転換細胞は約500bpのDNA断片を生成したが、これは1.5%アガロースゲル電気泳動で確認された。
正確な大きさのPCR産物を生成した形質転換細菌細胞を無菌のLB−カナマイシン培地6mlに接種し、200rpmで振盪しながら一晩、37℃でインキュベーションした。pETBMC01プラスミドDNAを菌培養物より、QIAprep Spin Mini-prepキットを製造元の指示書(Qiagen)に従い用いて回収した。これらプラスミド内にβ2m断片が存在することをさらに自動DNAにより確認した。pETBMC01の概略図を図3(b)に示すが、特に制限部位を明示している。
COMP−BPカセットの構築
COMPのオリゴマー化ドメインの配列はGenebankデータベース(登録番号1705995)より、そしてコイルドコイルドメイン(アミノ酸21〜85)はCOMPの自己会合実験(Efimovら、FEBS Letters 341: 54〜58(1994年))に基づき選択した。ビオチンアクセプタ配列「BP」;SLNDIFEAQKIEWHEをC末端に組み入れ、さらに14アミノ酸リンカー、即ちPQPQPKPQPKPEPETを加えてCOMPオリゴマー化ドメインとBPとの間を物理的に隔てた。
生成COMP−BP200ngおよびpETBMC01ベクター1μgを、1.1節に記載した様にHindIII(10U)およびXhoI(10U)制限酵素(NEB)を用いて、4時間、37℃で消化した。消化産物を1.1節同様に精製、連結、形質転換およびPCRスクリーニングした。スクリーニングの結果が陽性のプラスミドを精製し、1.1節同様に配列決定した。
ポリグリシンリンカーの合成
ポリグリシンリンカーを、重複するオリゴヌクレオチドBMC#9およびBMC#10(Sigma-Genosys、「PAGE-pure」、補遺I)をアニーリングして合成した。ポリグリシンリンカーは、正確なリーディングフレームにコードされている場合には、一文字アミノ酸コードで表される次のモチーフ:GS(GGGGS)4GGKを含んでいる。先頭の2個の残基はBamHI制限部位によりコードされたものであり、最後の残基はHindIII制限部位によりコードされたものである。ポリグリシンリンカーのヌクレオチド配列は切断されたBamHI制限部位の5’突出部と切断されたHindIIIヌクレオチド認識モチーフの3’突出部のみを組み込んでいることから、次の連結に好適な相補的な一本鎖突出部を作るためにアニーリング生成物をさらに消化する必要はない。オリゴヌクレオチドは1.2節に記載した様にリン酸化し、アニーリングした。
pETBMC02をBamHI(10U)およびHindIII(10U)で消化した。アニーリングしたポリグリシンリンカーのpETBMC02内への連結は、アニーリングしたオリゴヌクレオチド量を96fmole/μlとして前述同様(1.1節)に行った。形質転換およびPCRスクリーニング反応は1.1節に記した通りであるが、さらにPCRスクリーニング産物を制限酵素消化してSalI制限部位の有無を確認し、挿入されたリンカーが存在することを実証した。上手く形質転換した細胞は、プラスミドベクターの主鎖より部位が除かれているため、SalI消化に対し感受性ではない。pETBMC03の精製および自動配列決定は1.1節に記載の通りに行った。
pETBMC03の部位指定突然変異導入
MHCクラスI分子のX線結晶分析モデルの解析から、β2mのC末端はα鎖のα3ドメインに近接していることが示されている。従って、BamHI制限モチーフがコードするセリン残基を取り除き、G(GGGGS)4GGKを含むリンカーを作ることにより、ポリグリシンリンカーの開始点の柔軟度を最大にすることが望ましい。部位指定突然変異誘導キット(「QuickChange」、Stratagene)を製造元指示書に厳格に従って用い、BamHI認識モチーフ内にセリンをコードしているTCCトリプレットを取り除くことができるPCRプライマーBMC#11およびBMC#12(「PAGE-pure」、補遺I)を得た。この構築物が正確なものであることは、自動配列決定(1.1節)により実証され、pETBMC04と命名された。
2.1 pET−11dベクター内へのA*0201α鎖のクローニング
HLA−A*0201α鎖(EMBL M84379)の細胞外部分はメッセンジャーRNA配列の塩基73〜900がコードする276個のアミノ酸(成熟タンパク質のGly1〜Pro276に等しい)を含む。A*0201配列のこの領域は、正常人リンパ細胞cDNAライブラリーから、それぞれNcoIおよびBamHI制限部位を組み込んだプライマーA2S#1およびA2S#2を用いてPCRにより増幅された。A*0201挿入物をNcoI/BamHI消化したpET−11dベクター(Novagen)内にクローニングする方法は、1.1節でのβ2mに関する説明と実質同じである。
同じ操作を実行してβ2m−COMPまたはA*0201α鎖タンパク質を生成した。プラスミドDNAをE.coli宿主細胞内に形質転換し、大規模に細菌調製を行った。タンパク質は細菌細胞内に不溶性の封入体として生成されるので超音波処理して回収した。精製封入体を変性緩衝液内で可溶化し、必要時まで−80℃で保存した。特に記載しない限り、化学薬品はSigmaより得た。
E.coli宿主株BL21(DE3)pLysS内へのpETBMC04およびpETA2solの形質転換
精製したプラスミドDNAをEcoli株BL21(DE3)pLysS内に形質転換したが、この株はpETをベースとする構築物からタンパク質を発現させるのに必要なT7ポリメラーゼの染色体コピーを持っている。BL21(DE3)pLysSコンピテント細胞(Stratagene)内への形質転換は、製造元指示書に従い、各反応について精製プラスミドDNA0.5μgを用いて、適当なコントロールと共に実施した。形質転換に成功したものを、カナマイシン30μg/ml(pETBMC04)またはアンピシリン100μg/ml(pETA2sol)に加えてクロラムフェニコール34μg/mlを含有するLB−寒天プレートを用いて選択した。
単一の形質転換細菌コロニーを、選択に適した抗生物質を含有する無菌LB培地60mlに接種し、暖かな(〜24℃)部屋に一晩放置した。一晩培養した物をLB培地6リットルに加え、振盪しながら(〜240rpm)、対数期半ばまで(OD600=0.3〜0.4)増殖させた。タンパク質の発現の誘導は、この段階で各フラスコに1MのIPTG1mlを加えて行った。培養物はさらに振盪しながら4時間、37℃に放置し、その後細胞を遠心分離により集め、上清を廃棄した。
細菌細胞の沈殿を氷上に置いた小型のガラス製ビーカーの中で氷冷した緩衝塩類溶液に懸濁してから超音波処理して(XLシリーズ超音波装置;Misonix Inc.、USA)細胞を溶解し、タンパク質封入体を放出させた。細胞が完全に溶解した後、封入体をBeckmann高速遠心分離装置(J2シリーズ)を用いて15,000rpm、10分間遠心分離を行い、50mlのポリカーボネート製Oak Ridge遠心チューブの中に沈殿させた。次に封入体を冷したTriton洗浄緩衝液(0.5%Triton X-100、50mM Tris、pH8.0、100mM塩化ナトリウム、0.1%窒化ナトリウムおよび用時添加の2mMジチオスレイトール[DTT])で3回洗浄したが、洗浄が終わる度にハンドヘルド式のガラス製ホモジェナイザーを用いて沈殿を再懸濁した。最後に界面活性剤を含まない洗浄緩衝液で洗浄した。
4.1.β2m−COMPの5量体への集合
尿素可溶化封入体からのβ2m−COMPの集合は、0.2Mの塩化ナトリウムおよび1mMのEDTAを含む20mMのCAPS緩衝液、pH11.0にタンパク質を希釈して最終タンパク質濃度1.5mg/mlにすることで実施した。室温にて酸化および還元グルタチオンを最終濃度がそれぞれ20mMおよび2mMになるよう添加して、タンパク質を酸化した。一晩インキュベーションした後、10%ビス−トリシンゲル(Invitrogen)を用いた非還元型SDS−PAGEを用いてジスルフィド結合の形成について分析した。
ビオチン化したβ2m−COMP5量体は、Superdex200HR26/60カラム(Amersham Biosciences)分子篩クロマトグラフィー(SEC)を用い、S200緩衝液を流して精製した。カラムは前もって製造元指示書に従い校正してから使用し、135kDa領域の5量体を含有する分画を集めた。タンパク質回収量はBradfordアッセイを用いて決定し、ビオチン化効率はHABA試薬(Pierce)を製造元指示書に従い用いて決定した。
5.1.HLA−A*0201α鎖のビオチン化β2m−COMPおよびペプチドの再折り畳み
再折り畳み緩衝液500mlを次のようにして準備した:100mM Tris、pH8.0、400mM塩酸アルギニン、2mM EDTA、5mM還元グルタチオンおよび0.5mM酸化グルタチオンを脱イオン水に溶解し、4℃で攪拌し続けた。凍結乾燥した合成ペプチドGLCTLVAML15mgをジメチルスルホキシド0.5mlに溶解し、攪拌しながら再折り畳み緩衝液に加えた。ビオチン化した5量体のβ2m−COMP50mgおよびA*0201α鎖30mgを連続的に加え、適当な分散を確保するために強く攪拌している緩衝液の中に23ゲージの皮下注射用針を通して直接注入した。再折り畳み混合液はそのまま16時間、4℃で攪拌し続けた。
続いてタンパク質再折り畳み混合液を分子量カットオフ30kDのMini Kros中空糸限外濾過カートリッジ(Spectrum Labs、Rancho Dominguez、California)を用いて500mlから20mlに濃縮した。Centricon Plus-20遠心分離式濃縮装置(分子量カットオフ30kD)を製造元指示書通りに用いて複合体を20mlから5mlに更に濃縮し、続いて使い捨て式PD10脱塩カラム(Amersham Biosciences)を製造元指示書通りに用いて緩衝液をS200緩衝液に交換した。最終容積は7.5mlであった。濃縮したタンパク質再折り畳み混合液をまず4.2節同様にしてSuperdex 200 HR26/60ゲル濾過クロマトグラフィーカラムを用いたSECにより精製した。310kD領域のタンパク質複合体を含有する分画を集めた。
ストレプトアビジン分子はそれぞれ最大4個までのビオチンに結合できることから、フィコエリスリン(PE)標識ストレプトアビジンを用いた最終標識化は、4.2章でβ2m−COMPに対して行ったはじめのビオチン化効率を考慮に入れて、それぞれビオチン化5量体複合体に対するストレプトアビジンのモル比を1:0.8にして実施した。必要とされる5量体複合体全量を分割し(例えば5等分し)、ストレプトアビジン−PE内に連続的に滴下した。A*0201の5量体−ストレプトアビジン複合体の濃度を0.01%アジ化物および1%BSAを補充したリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で1mg/mlに調整した。こうして作製した蛍光試薬は4℃に保存した。
抹消血リンパ球(PBL)は、健康なA*0201陽性であり、GLCTLVAML抗原を用いて強い細胞傷害性T細胞反応を誘導されたことが前もって確認されているEBVキャリアから血液サンプルを採取して得た。PBLはFicoll(Amersham Biosciences)を用いた密度勾配遠心分離により単離してからPBS溶液で洗浄し、細胞数を計測した。各染色条件について1〜2×106個のリンパ細胞を割り当て、細胞を1回、洗浄緩衝液(0.1%アジ化ナトリウム、0.1%BSAのPBS溶液)で洗浄してから洗浄緩衝液50□lに再浮遊した。抗CD8抗体(Dako)と組み合わせてPE標識したA*0201/GLCTLVAML5量体1□gを用い、小分け細胞の単一群を染色して細胞傷害性T細胞集団であることを確認した。浮遊液を氷上、暗所にて少なくとも30分間インキュベーションし、その後暗所にて細胞を洗浄緩衝液で2回洗ってから固定液(1%ウシ胎児血清、2.5%ホルムアルデヒドのPBS溶液)内に保存した。その後サンプルを、CellQuestソフトウエアーを用い、Becton-Dickinson FACScan(商標)フローサイトメータで、当業者周知の標準的な方法に従い分析した。
Claims (19)
- 高いT細胞レセプターに対する親和性を有しそして5つのキメラタンパク質を含む5量体MHC複合体であって、前記キメラタンパク質が各々MHCペプチド鎖に由来する第1セクションおよび軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質(COMP)の5量体化ドメインに由来するオリゴマー化ドメインを含む第2セクションを含み、5量体MHC複合体の形成がキメラタンパク質のオリゴマー化ドメインでのオリゴマー化により生じる5量体MHC複合体。
- キメラタンパク質の第1セクションがMHCクラスIα鎖またはMHCクラスIIα鎖の細胞外部分に由来する、請求項1に記載の5量体MHC複合体。
- キメラタンパク質の第1セクションがMHCクラスIβ鎖またはMHCクラスIIβ鎖の細胞外部分に由来する、請求項1又は2に記載の5量体MHC複合体。
- キメラタンパク質の少なくとも1つの第2セクションに含まれるCOMPの5量体化ドメインがヒトCOMPのアミノ酸21〜85を含む請求項3に記載の5量体MHC複合体。
- キメラタンパク質の少なくとも1つの第2セクションに含まれるCOMPの5量体化ドメインがヒトCOMPのアミノ酸21〜85より成る請求項3に記載の5量体MHC複合体。
- キメラタンパク質の少なくとも1つがMHCペプチド鎖とオリゴマー化ドメインとの間に第1リンカーを更に含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載の5量体MHC複合体。
- キメラタンパク質の少なくとも1つが第2リンカー、タグ化ドメインおよび精製ドメインから成る群より選択される1またはそれ以上のドメインを更に含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の5量体MHC複合体。
- クラスI複合体に関してはMHCαIおよびα2ドメインにより、またはクラスII複合体に関してはMHCα1およびβ1ドメインにより形作られるグローブ内に、複合体のMHC部分に結合したペプチドを更に含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載の5量体MHC複合体。
- ペプチドが実質的に均一である、請求項8に記載の5量体MHC複合体。
- 標識を含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載の5量体MHC複合体。
- 標識が光検出標識、放射活性標識、酵素、エピトープ、レクチンまたはビオチンより成る群から選択される、請求項10に記載の5量体MHC複合体。
- MHCペプチド鎖に由来する第1セクション、および軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質(COMP)の5量体化ドメイン由来オリゴマー化ドメインを含む第2セクションを含むキメラタンパク質であって、該キメラタンパク質はキメラタンパク質のオリゴマー化ドメインでのオリゴマー化により高いT細胞レセプターに対する親和性を有しそして5つのキメラタンパク質を含む5量体MHC複合体を形成することができる、キメラタンパク質。
- オリゴマー化ドメインがヒトCOMPのアミノ酸21〜85を含む、請求項12に記載のキメラタンパク質。
- オリゴマー化ドメインがヒトCOMPのアミノ酸21〜85より成る、請求項12に記載のキメラタンパク質。
- 請求項12または13に記載のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結したプロモータ配列を含む組換え体発現カセット。
- 請求項15の組換え体発現カセットを含むベクター。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載の5量体MHC複合体を含み、医薬的に許容可能な担体をさらに含んでもよい、診断薬組成物。
- 抗原レセプターの特異性に基づいてインビトロで哺乳動物T細胞を標識および/または検出する方法であって、
(i)請求項1〜11のいずれか1項に記載の5量体MHC複合体とT細胞を含む浮遊液もしくは生物学的サンプルとを混合すること、および
(ii)上記複合体とT細胞との特異的結合の存在を検出することを含む方法。 - 抗原レセプターの特異性に基づいてインビトロで哺乳動物T細胞を分離する方法であって、
(i)請求項1〜11のいずれか1項に記載の5量体MHC複合体とT細胞を含む浮遊液もしくは生物学的サンプルとを混合すること、および
(ii)上記複合体に結合したT細胞を未結合細胞から分離することを含む方法。
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---|---|---|---|---|
US7070771B1 (en) * | 1996-12-09 | 2006-07-04 | Regents Of The University Of California | Methods of expressing chimeric mouse and human CD40 ligand in human CD40+ cells |
US7786282B2 (en) | 2001-12-06 | 2010-08-31 | The Regents Of The University Of California | Nucleic acid molecules encoding TNF-α ligand polypeptides having a CD154 domain |
US7495090B2 (en) * | 2002-05-23 | 2009-02-24 | The Regents Of The University Of California | Nucleic acids encoding chimeric CD154 polypeptides |
GB2408507B (en) * | 2003-10-06 | 2005-12-14 | Proimmune Ltd | Chimeric MHC protein and oligomer thereof for specific targeting |
GB2409456B (en) * | 2003-10-30 | 2006-01-04 | Proimmune Ltd | Oligomeric receptor ligand pair member complexes |
GB2422834B8 (en) * | 2005-02-04 | 2007-01-04 | Proimmune Ltd | MHC oligomer and method of making the same |
GB2424645B (en) | 2005-04-01 | 2007-06-06 | Proimmune Ltd | Method of producing a set of MHC molecules |
US8231872B2 (en) | 2005-04-25 | 2012-07-31 | The Trustees Of Dartmouth College | Regulatory T cell mediator proteins and uses thereof |
US20090061478A1 (en) * | 2006-01-30 | 2009-03-05 | Lene Have Poulsen | High-Speed Quantification of Antigen Specific T-Cells in Whole Blood by Flow Cytometry |
GB2442048B (en) * | 2006-07-25 | 2009-09-30 | Proimmune Ltd | Biotinylated MHC complexes and their uses |
WO2008116468A2 (en) | 2007-03-26 | 2008-10-02 | Dako Denmark A/S | Mhc peptide complexes and uses thereof in infectious diseases |
EP2167537A2 (en) | 2007-07-03 | 2010-03-31 | Dako Denmark A/S | Compiled methods for analysing and sorting samples |
US10611818B2 (en) | 2007-09-27 | 2020-04-07 | Agilent Technologies, Inc. | MHC multimers in tuberculosis diagnostics, vaccine and therapeutics |
EP2254592B1 (en) * | 2008-02-28 | 2019-06-05 | Dako Denmark A/S | Mhc multimers in borrelia diagnostics and disease |
US10968269B1 (en) | 2008-02-28 | 2021-04-06 | Agilent Technologies, Inc. | MHC multimers in borrelia diagnostics and disease |
WO2010009735A2 (en) | 2008-07-23 | 2010-01-28 | Dako Denmark A/S | Combinatorial analysis and repair |
GB0817244D0 (en) | 2008-09-20 | 2008-10-29 | Univ Cardiff | Use of a protein kinase inhibitor to detect immune cells, such as T cells |
WO2010037395A2 (en) * | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Dako Denmark A/S | Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring |
US11992518B2 (en) | 2008-10-02 | 2024-05-28 | Agilent Technologies, Inc. | Molecular vaccines for infectious disease |
US10369204B2 (en) | 2008-10-02 | 2019-08-06 | Dako Denmark A/S | Molecular vaccines for infectious disease |
DK2408913T3 (en) | 2009-03-18 | 2017-03-06 | Oncotherapy Science Inc | NEIL3 PEPTIDES AND VACCINES CONTAINING THESE |
TWI507204B (zh) | 2009-05-26 | 2015-11-11 | Oncotherapy Science Inc | Cdc45l胜肽與含此胜肽之疫苗 |
TW201136604A (en) | 2009-12-14 | 2011-11-01 | Oncotherapy Science Inc | TMEM22 peptides and vaccines including the same |
GB201002730D0 (en) * | 2010-02-18 | 2010-04-07 | Uni I Oslo | Product |
WO2011111392A1 (en) | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Oncotherapy Science, Inc. | Hjurp peptides and vaccines including the same |
US10745467B2 (en) | 2010-03-26 | 2020-08-18 | The Trustees Of Dartmouth College | VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders |
EP2552947A4 (en) | 2010-03-26 | 2013-11-13 | Dartmouth College | VISTA REGULATORY T CELL MEDIATOR PROTEIN, VISTA BINDING ACTIVE SUBSTANCES AND USE THEREOF |
US20150231215A1 (en) | 2012-06-22 | 2015-08-20 | Randolph J. Noelle | VISTA Antagonist and Methods of Use |
TW201627003A (zh) | 2010-04-02 | 2016-08-01 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | Ect2胜肽及含此胜肽之疫苗 |
WO2012122087A1 (en) * | 2011-03-05 | 2012-09-13 | Indiana University Research And Technology Corporation | Epitope fluctuation and immunogenicity |
US9427461B2 (en) | 2011-10-28 | 2016-08-30 | Oncotherapy Science, Inc. | TOPK peptides and vaccines including the same |
US9890215B2 (en) | 2012-06-22 | 2018-02-13 | King's College London | Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer |
EP2892558B1 (en) | 2012-09-07 | 2019-04-10 | The Trustees Of Dartmouth College | Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer |
WO2014058915A2 (en) | 2012-10-08 | 2014-04-17 | St. Jude Children's Research Hospital | Therapies based on control of regulatory t cell stability and function via a neuropilin-1:semaphorin axis |
TWI658049B (zh) | 2013-03-12 | 2019-05-01 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | Kntc2胜肽及含此胜肽之疫苗 |
US11014987B2 (en) | 2013-12-24 | 2021-05-25 | Janssen Pharmaceutics Nv | Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same |
ES2920677T3 (es) | 2013-12-24 | 2022-08-08 | Janssen Pharmaceutica Nv | Anticuerpos y fragmentos anti-VISTA |
EP3154585B1 (en) | 2014-06-11 | 2022-02-23 | Kathy A. Green | Use of vista agonists and antagonists to suppress or enhance humoral immunity |
EP4270006A3 (en) | 2014-06-13 | 2024-01-10 | Immudex ApS | General detection and isolation of specific cells by binding of labeled molecules |
AU2015357463B2 (en) | 2014-12-05 | 2021-10-07 | Immunext, Inc. | Identification of VSIG8 as the putative vista receptor and its use thereof to produce vista/VSIG8 modulators |
CN107922497B (zh) | 2015-06-24 | 2022-04-12 | 詹森药业有限公司 | 抗vista抗体和片段 |
MA45489A (fr) | 2015-10-22 | 2018-08-29 | Juno Therapeutics Gmbh | Procédés de culture de cellules, kits et appareil associés |
TWI756204B (zh) | 2016-02-12 | 2022-03-01 | 比利時商楊森製藥公司 | 抗vista抗體及片段、其用途及鑑定其之方法 |
CN118108843A (zh) | 2016-04-15 | 2024-05-31 | 伊穆奈克斯特股份有限公司 | 抗人vista抗体及其用途 |
WO2018013797A1 (en) | 2016-07-13 | 2018-01-18 | President And Fellows Of Harvard College | Antigen-presenting cell-mimetic scaffolds and methods for making and using the same |
US10294454B2 (en) | 2016-08-24 | 2019-05-21 | General Electric Company | Methods and kits for cell activation |
CN109963584B (zh) | 2016-09-06 | 2024-03-15 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 结合mhc的肽阵列及其使用方法 |
JP7339160B2 (ja) | 2017-04-27 | 2023-09-05 | ジュノ セラピューティクス ゲーエムベーハー | オリゴマー粒子試薬およびその使用方法 |
SG11201912480SA (en) * | 2017-06-23 | 2020-01-30 | Pathovax Llc | Chimeric virus-like particles and uses thereof as antigen-specific redirectors of immune responses |
WO2019018572A1 (en) * | 2017-07-18 | 2019-01-24 | Duke University | COMPOSITIONS AND METHODS COMPRISING SELF-ASSEMBLY PEPTIDE-POLYMER NANOFIBERS FOR SUBLINGUAL IMMUNIZATION |
EP3898666A2 (en) | 2018-12-17 | 2021-10-27 | Immudex ApS | Panel comprising borrelia mhc multimers |
KR20210110321A (ko) | 2018-12-27 | 2021-09-07 | 버이뮨 아이엔씨. | 접합된 바이러스-유사 입자 및 항-종양 면역 재유도제로서의 이의 용도 |
WO2021122185A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG | Reversible cell detection via mhc with conjugates having an enzymatically cleavable detection moiety |
US11858964B2 (en) | 2020-10-19 | 2024-01-02 | Verimmune Inc. | Virus-inspired compositions and methods of redirecting preexisting immune responses using the same for treatment of cancer |
WO2022109339A1 (en) | 2020-11-20 | 2022-05-27 | Becton, Dickinson And Company | Use of dextramer in single cell analysis |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002504342A (ja) * | 1998-02-19 | 2002-02-12 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | 一価mhc結合ドメイン融合タンパク質および接合体、多価mhc結合ドメイン融合タンパク質および接合体、ならびに多量体mhc結合ドメイン融合タンパク質および接合体、そしてそれらのための使用 |
US20020082411A1 (en) * | 2001-01-23 | 2002-06-27 | Darrick Carter | Immune mediators and related methods |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050003431A1 (en) * | 1996-08-16 | 2005-01-06 | Wucherpfennig Kai W. | Monovalent, multivalent, and multimeric MHC binding domain fusion proteins and conjugates, and uses therefor |
PT935607E (pt) * | 1996-08-16 | 2004-12-31 | Harvard College | Proteinas de fusao de classe ii do cph soluveis monovalentes e multivalentes, e suas utilizacoes |
CA2360374A1 (en) * | 1999-02-01 | 2000-08-03 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Comp/tsp-1, comp/tsp-2 and other tsp chimeric proteins |
EP1349569B1 (en) * | 2001-01-12 | 2007-04-18 | Becton Dickinson and Company | Intrinsically fluorescent, self-multimerizing mhc fusion proteins and complexes thereof |
GB2408507B (en) * | 2003-10-06 | 2005-12-14 | Proimmune Ltd | Chimeric MHC protein and oligomer thereof for specific targeting |
GB2409456B (en) * | 2003-10-30 | 2006-01-04 | Proimmune Ltd | Oligomeric receptor ligand pair member complexes |
-
2002
- 2002-08-21 GB GB0219459A patent/GB2392158B/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
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-
2008
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002504342A (ja) * | 1998-02-19 | 2002-02-12 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | 一価mhc結合ドメイン融合タンパク質および接合体、多価mhc結合ドメイン融合タンパク質および接合体、ならびに多量体mhc結合ドメイン融合タンパク質および接合体、そしてそれらのための使用 |
US20020082411A1 (en) * | 2001-01-23 | 2002-06-27 | Darrick Carter | Immune mediators and related methods |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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