JP4670318B2 - 穀物の遺伝子増幅法 - Google Patents
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Description
本発明において、「直接に」とは、「遺伝子増幅に先立って、生体試料から、核酸を精製、抽出する過程が不要である」という意味である。
本発明において、「試料として」とは、「遺伝子増幅反応において、反応液に添加する鋳型DNA、若しくはRNAとして」という意味である。
コメの水洗浄液とは、コメと水とを混合して攪拌したときに生成する白濁した液体である。したがって、コメを研ぐ際に生じるコメのとぎ汁も含む。
コメの水洗浄液には、コメの糠及び胚芽などが含まれている。一般にコメは、胚乳、糠、及び胚芽から構成されている。糠及び胚芽を構成する植物細胞には、イネの遺伝子を担う核酸が含まれている。
複数の個体に由来する穀物粒から得られる水洗浄液からも遺伝子の増幅が可能である。複数の個体に由来する穀物粒から得られる水洗浄液を試料とした場合には、それらの個体の平均的な遺伝子情報を得ることができる。例えば、どのような品種が主体であるか、遺伝子組み換え体が混入しているか、等である。
以下にコメの水洗浄液を直接に反応液に添加して、PCR法を用いてイネ遺伝子を増幅した例を示すが、本発明はこれにより限定されるものではない。
・フォワードプライマー(100μM) 0.25μl
・リバースプライマー(100μM) 0.25μl
・10X緩衝液 5μl
(100mM Tris−HCl緩衝溶液(pH 8.3)、500mM KCl、15mM MgCl2)
・dNTPs(2.5mM) 4μl
・DNAポリメラーゼ(5units/μl)0.25μl
(タカラバイオ社製、TaKaRa Taq、R001A)
反応液 1: 10μl
反応液 2: 5μl
反応液 3: 2.5μl
反応液 4: 1.3μl
反応液 5: 0.63μl
反応液 6: 0.31μl
反応液 7: 0.16μl
反応液 8: 0.08μl
反応液 9: 0.04μl
反応液10: 0.02μl
(反応液11: 0μl)
配列番号2は、プライマーの配列である。
Claims (4)
- コメ、コムギ、オオムギ及びライ麦からなる群から選ばれる穀物の種子の籾が籾摺りされた穀物粒の水洗浄液を直接に試料として用いて、穀物の遺伝子を増幅する遺伝子増幅法。
- 前記穀物粒の水洗浄液が、玄米又は精米の水洗浄液である、請求項1に記載の遺伝子増幅法。
- 前記穀物粒の水洗浄液が、単一の個体に由来する一粒又は複数粒の穀物粒から得られる、請求項1又は2に記載の遺伝子増幅法。
- 前記穀物粒の水洗浄液が、複数の個体に由来する穀物粒から得られる、請求項1又は2に記載の遺伝子増幅法。
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