JP4659453B2 - エンドトキシンを検出および除去する方法 - Google Patents
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Description
・陰イオン交換クロマトグラフィ
・逆相クロマトグラフィ;これは、全てのタンパク質に同等に適応せず、特に疎水性タンパク質の場合に問題があるという欠点を有する。さらに、この方法は、非常に時間がかかる。
・Rem Tox(Millipore Company):この方法は非常に長いインキュベーション期間に加えて、非特異的結合成分が高く、タンパク質の回収率がしばしば適切でないという欠点を有する。
a’)前記サンプルからバクテリオファージテールタンパク質−エンドトキシン複合体を分離する追加の工程を導入する。
エンドトキシン除去のために、全てのガラス容器を、200℃(4時間)での加熱によって発熱物質を除去し、発熱物質を全く含まないプラスチック材料(例えば、ピペットチップ、マイクロタイタープレート)を使用した。他の非加熱耐性装置または容器を、3%過酸化水素で処理するか、1%デオキシコール酸ナトリウムで洗浄した。その後、これらをエンドトキシンフリーの水でリンスした。十分にエンドトキシンを含まない緩衝液物質(Sigma)から緩衝液を作製し、エンドトキシンフリーの水と混合した。200℃で加熱することができる塩(例えば、NaCl)を加熱した(200℃、4時間)。クロマトグラフィ精製で使用する緩衝液を脱気および濾過した。
製造者の説明書にしたがって呈色LAL試験(リムルス変形細胞溶解物試験、Charles−River Endosafe,チャールストン,アメリカ合衆国)を使用してエンドトキシン対照試験を行った。濃度を決定するために、0.005〜50または0.02〜50EU/mlの範囲のエンドトキシン標準(Charles−River Endosafe,チャールストン,アメリカ合衆国)を使用した。温度制御マイクロタイタープレートリーダー(Genios,Tecan GmbH)で405nmでの吸光度を測定した。
ウェスタンブロットによってビーズで処理したサンプルの残渣中またはアフィニティクロマトグラフィの画分中のp12の検出を行った。NaDOC/TCA沈殿(デオキシコール酸ナトリウム/テトラクロロアセテート)によって事前にある程度タンパク質を濃縮した。この目的のために12%SDSゲルでの電気泳動によってサンプルを分離し、PVDFメンブレン(Immobilon,Millipore)に移した。メンブレンをPBSで30分間洗浄し、5%粉乳でブロッキングし(1時間)、その後ポリクローナル抗p12抗体(1時間、1000倍希釈)とインキュベートした。二次抗体(ヤギ抗ウサギIgG)とのインキュベーション後、アルカリフォスファターゼに抱合されてBCIP/NBT(5−ブロモ−4−クロロインドリルホスフェート/ニトロブルーテトラゾリウム塩)でサンプルを発色させた。
Galanos,C.,Luederitz,O.& Westphal,O.1969,Europ.J.Biochem.9,245−249の詳説にしたがって、エンドトキシンを精製した。
表面へのp12の有向結合を達成するために、実施例12に記載のように配列番号5のStrep−タグの3位のアミノ酸セリンをシステインに置換し、好ましくはスルフヒドリルフリーラジカルに結合するヨードアセチルラジカルを介してタンパク質を固定した。得られたp12をp12S3Cと呼んだ。
化合物由来のN−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)を第1級アミノラジカルと置換し、これを使用して表面にタンパク質を結合させる。NHS活性化セファロースカラム(HiTrap NHS−活性化HP、1ml、アマシャム−ファルマシア−バイオテック)を最初に6mlの氷冷1mM塩酸で洗浄した。その後、p12S3C(1.0〜3.5mg/ml)を含む10〜15mlの0.2M NaHCO3、0.5M NaCl(pH8.3)を、室温でカラム上に円形にポンピングした(流速0.8ml/分)。60分後、スルーフローを画分中に回収し、カラムを6ml緩衝液で洗浄した。これらの画分から、HiTrap脱塩カラム(5ml、アマシャム−ファルマシア−バイオテック)による溶液の脱塩によってNHSを分離し、その後280nmでの吸光度の測定によってp12量を決定した。20〜25mgのp12S3Cがカラムに結合した。結合後に製造者の説明書に従って6mlブロッキング緩衝液(0.5Mエタノールアミン、0.5M NaCl(pH8.3))および洗浄緩衝液(0.1M酢酸塩、0.5M NaCl(pH4.0))でそれぞれ繰り返しカラムをリンスした。その後、カラムを、6mlの使用可能な(usable)緩衝液(20mM hepes、150mM NaCl(pH7.5)または20mM tris、150mM NaCl(pH8.5))で平衡化した。
NaCl(pH7.5)または20mM tris、150mM NaCl(pH8.5))を使用して、このカラムによるエンドトキシンの除去を試験した。リゾチーム溶液にE.coli HMS174(約500EU/ml)由来のエンドトキシンを添加した。0.5mlタンパク質溶液をカラムに導入し、室温で1時間インキュベートし、その後カラムを緩衝液で洗浄した。画分中にリゾチームを回収し、カラム前後のエンドトキシン含有量を呈色LAL試験(Charles−River Endosafe,チャールストン,アメリカ合衆国)によって決定した。さらに、280nmでの吸光度の測定によってタンパク質回収率を決定した。図3Aに示すように、溶液から85〜90%のエンドトキシンが除去され、使用可能な緩衝液での洗浄によってカラムから85〜90%のリゾチームを再度溶離することができた(図3B)。その後、カラムを、6mlの5mM EDTA、20mM hepes、150mM NaCl(pH7.5)および6mlの1M NaClで洗浄した。p12の分離に起因するカラム通過後のタンパク質画分の夾雑物を除去するために、ウェスタンブロット技術によって画分をp12について試験した。画分中にp12を検出することができなかった。
クロマトグラフィキャリア材料への有向結合を達成するために、二官能性リンカーをNHS活性化表面に結合させ、リンカーによりp12S3Cのその遊離システインおよび二官能性リンカーのヨードアセチルラジカルを介した結合が可能になる。
製造者の説明書に従って、HiTrap−NHS活性化セファロース(アマシャムバイオサイエンス,ウプサラ スウェーデン)を第1級アミノ基を介して非特異的にp12と結合させた。それにより、8mgのp12/mlゲル材料が共有結合的に固定された。したがって、得られた1mlのクロマトグラフィカラムを、1ml/分の流速で10mlの緩衝液A(20mM hepes(pH7.5)、150mM NaCl、0.1mM CaCl2)で平衡化した。次に、4mlのBSA溶液(11.5mg BSA(Carl Roth GmbH,ドイツ)/ml緩衝液A)を適用し(注入:I)、スルーフロー(E)を2.5ml画分に回収した。次いで、カラムを15mlの緩衝液Aで洗浄し、カラムに結合したエンドトキシンを7mlの緩衝液B(20mM hepes(pH7.5)、150mM NaCl、2mM EDTA)で溶離した。洗浄および溶離時に、それぞれ2mlの画分を回収した。各試験後、カラムを、20mlの緩衝液C(20mM hepes(pH7.5)、150mM NaCl、2mM EDTA、0.1%デオキシコール酸ナトリウム)で再生した。製造者の説明書にしたがって、呈色リムルス変形細胞溶解物(LAL)(Charles−River Endosafe,チャールストン,アメリカ合衆国)によってエンドトキシン濃度を決定した。UV吸収の測定によってタンパク質濃度を決定した。エンドトキシンの除去率は95〜99%であり、タンパク質の喪失は約6〜10%であった。
20mlのNHS活性化セファロース4FastFlow(アマシャム バイオサイエンス)を最初に氷冷塩酸で洗浄し、その後292mgのp12(7mg/mlを含む25mMクエン酸(pH7.0))と撹拌しながら室温で4時間インキュベートした。その後、7×80mlの5mMクエン酸(pH2.0)でセファロースを洗浄し、それぞれ1mlの洗浄画分を5mMクエン酸(pH2.0)に対して透析した。これらの透析物を使用して、280nmでの吸光度の測定による洗浄画分中の過剰なp12を定量した。1mlセファロースあたりの8.7mgのp12の電荷密度を決定した。セファロースの1M tris(pH8.0)との12時間のインキュベーションによって非反応NHSラジカルを中和した。体積2mlのカラムにこのカラム材料を充填し、これを使用するまで20%4℃のエタノール中で保存した。
p12(3mg/mlを含むPBS、0.05% Tween20)を、スルホ−NHS−LCLC−ビオチン(Pierce)と1:10〜1:20の比にて室温で1時間インキュベートし、その後緩衝液(例えば、PBSまたは20mM hepes、150mM NaCl、5mM EDTA(pH7.5))に対して透析した。それによりNHS活性化ビオチンはp12の第1級アミノラジカルに結合する。その後、50μlのビオチン化p12(1mg/ml)を、1mlストレプトアビジンビーズ(MagPrepストレプトアビジンビーズ、Merck)に添加し、室温で2時間撹拌し、1.5mlの20mM tris、10mM EDTA(pH7.5)での4回の洗浄によって過剰のp12を除去した。
p12(3mg/mlを含むPBS、0.05%Tween20)を、スルホ−NHS−LC−LC−ビオチン(Pierce)と1:10〜1:20の比にて室温で1時間インキュベートし、その後緩衝液(例えば、PBSまたは20mM hepes、150mM NaCl、5mM EDTA(pH7.5))に対して透析した。それにより、NHS活性化ビオチンは、p12の第1級アミノラジカルに結合する。その後、ビオチン化p12を、ストレプトアビジンを負荷したクロマトグラフィ材料(ImmunoPure固定化ストレプトアビジン、6%架橋アガロースビーズ)と室温で1時間インキュベートし、PBSでの洗浄によって過剰なp12を除去する。
細胞外膜中のリポ多糖を介したエンドトキシンまたは細菌へのp12の結合を、表面プラズモン共鳴測定(Biacore J)によって試験した。解離定数(Kd)を決定するために、E.coli O55:B5(Sigma)由来のエンドトキシンを製造者の説明書にしたがって疎水性HPAチップ上に固定し、種々の濃度でp12を注射した(図6A)。相対「応答単位」(RU)において結合を測定し、結合したp12の濃度に対して平衡値をプロットした(図6B)。これらのデータへのラングミュア吸着等温式(RU=(RUmax *[p12])/([p12]+Kd))の適合により、Kd値を決定した(表1)。測定のためにエンドトキシンフリーの緩衝液を使用した。6と10との間のpH値について10-7〜10-9Mの範囲のKd値を決定した(表1)。1mMまたは5mMのEDTAの注入によって再度結合を破壊し、チップを再生させた。
1.N末端Strep−タグを含むp12(N−strep−p12)の構築:PCRによって、Strep−タグのヌクレオチド配列(米国特許第5,506,121号)を、T4p12遺伝子の5’末端に導入した。この目的のために、その5’末端にStrep−タグのヌクレオチド配列(配列中の斜体)を含み、右側のリーディンググリッド中の遺伝子を発現プラスミドに挿入することができるように接着末端(NdeI、配列中の下線部)を有するp12遺伝子の5’末端のプライマー(5’−GAA GGA ACT AGT CAT ATG GCT AGC TGG AGC CAC CCG CAG TTC GAA AAA GGC GCC AGT AAT AAT ACA TAT CAA CAC GTT−3’(配列番号1))を構築した。p12遺伝子の3’末端について、p12遺伝子の後ろにBamHI接着末端(配列中の斜体)を移入したプライマー(5’−ACG CGC AAA GCT TGT CGA CGG ATC CTA TCA TTC TTT TAC CTT AAT TAT GTA GTT−3’),(配列番号2))を構築した。PCRを40サイクル行った(95℃で1分、45℃で1分、72℃で1分)。PCRバッチを制限エンドヌクレアーゼNdeIおよびBamHIで切断し、アガロースゲルでのサイズ分画およびゲルからの溶離後、所望のフラグメントと発現プラスミドpET21aのNdeIおよびBamHI部位に挿入した。N−strep−p12遺伝子配列を、DNA配列決定によってその精度についてチェックした。T4p12p57についてBurda,M.R.&Miller,S.(Eur J Biochem.1999 265(2),771−778)に記載のように、プラスミドpNS−T4p12p57のためのさらなる工程を行った。次いで、プラスミドpNS−T4p12p57を、発現株BL21(DE3)に形質転換した。
Claims (15)
- a)2価のイオンの存在下、サンプルをバクテリオファージテールタンパク質とインキュベートする工程と、
b)前記バクテリオファージテールタンパク質に結合したエンドトキシンを検出する工程とを含む、エンドトキシンの検出方法。 - 工程a)の後且つ工程b)の前に、
a’)前記サンプルから前記バクテリオファージテールタンパク質−エンドトキシン複合体を分離する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記検出を分光学的方法によって実施する、請求項1または2に記載の方法。
- a)2価のイオンの存在下、サンプルを恒久的キャリア(permanent carrier)上に固定されたバクテリオファージテールタンパク質とインキュベートするか接触させる工程と、
b)前記サンプルから前記バクテリオファージテールタンパク質−エンドトキシン複合体を分離する工程を含む、サンプルからエンドトキシンを除去する方法。 - 工程a)およびb)をクロマトグラフィカラムスルーフロー(throughflow)法において実施する、請求項4に記載の方法。
- 前記恒久的キャリアが、濾過媒体、ガラス粒子、磁性粒子、遠心分離材料、沈殿材料、またはクロマトグラフィカラムのための充填材料である、請求項4に記載の方法。
- 前記バクテリオファージテールタンパク質を結合基を介して前記恒久的キャリア上に固定する、請求項4〜6のいずれかに記載の方法。
- 前記結合基がレクチン、受容体、またはアンチカリンである、請求項7に記載の方法。
- 前記結合基がストレプトアビジンまたはアビジンであり、前記バクテリオファージテールタンパク質がビオチンまたはStrep−タグに結合している、請求項7に記載の方法。
- 前記バクテリオファージテールタンパク質を化学結合を介して恒久的キャリア上に共有結合的に固定する、請求項4〜6のいずれかに記載の方法。
- 前記バクテリオファージテールタンパク質がStrep−タグまたはHis−タグを有する、請求項1〜10のいずれかに記載の方法。
- 前記タグが、配列番号5、6、または7に記載のアミノ酸配列を有する、請求項11に記載の方法。
- バクテリオファージテールタンパク質としてT4ファージのp12タンパク質を使用する、請求項11または12に記載の方法。
- 前記2価のイオンが、0.1μM〜10mMの濃度のCa 2+ またはMg 2+ である、請求項1〜13のいずれかに記載の方法。
- 標識したエンドトキシンがバクテリオファージテールタンパク質との結合から離れ、その後標識されたエンドトキシンが検出される、請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
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WO1999015676A1 (en) | 1997-09-19 | 1999-04-01 | National University Of Singapore | A novel generation of cloned horseshoe crab recombinant factor c for detection and removal of endotoxin |
WO2000008463A2 (de) | 1998-08-05 | 2000-02-17 | Bioserv Ag | Immunadsorber zur entfernung von endotoxinin |
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