JP4646514B2 - Ｈｃｖポリメラーゼ阻害剤を特定する競合的結合アッセイ - Google Patents

Ｈｃｖポリメラーゼ阻害剤を特定する競合的結合アッセイ Download PDF

Info

Publication number
JP4646514B2
JP4646514B2 JP2003519506A JP2003519506A JP4646514B2 JP 4646514 B2 JP4646514 B2 JP 4646514B2 JP 2003519506 A JP2003519506 A JP 2003519506A JP 2003519506 A JP2003519506 A JP 2003519506A JP 4646514 B2 JP4646514 B2 JP 4646514B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
alkyl
cycloalkyl
het
aryl
sup
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
JP2003519506A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2005500055A (ja
Inventor
ジョルジュ クコルジ
ピエール エル ボウリアー
ジネット マッケルシェール
Original Assignee
ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド filed Critical ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド
Publication of JP2005500055A publication Critical patent/JP2005500055A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP4646514B2 publication Critical patent/JP4646514B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/542—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with steric inhibition or signal modification, e.g. fluorescent quenching
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
    • G01N2333/91245—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/02—Screening involving studying the effect of compounds C on the interaction between interacting molecules A and B (e.g. A = enzyme and B = substrate for A, or A = receptor and B = ligand for the receptor)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/04—Screening involving studying the effect of compounds C directly on molecule A (e.g. C are potential ligands for a receptor A, or potential substrates for an enzyme A)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

発明の詳細な説明
発明の分野
本発明は一般にＨＣＶのＲＮＡ依存ＲＮＡポリメラーゼの阻害剤を特定する方法に関する。特に、本方法は競合アッセイで新規なプローブを用いてＨＣＶポリメラーゼ阻害剤を特定しさらに前記阻害剤の能力を決定する。より具体的には、本発明は、前記ポリメラーゼと特異的に結合し、さらに前記酵素の阻害剤で置き換えることができるプローブの使用に関する。
発明の背景
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、世界的に蔓延している輸血後および集団罹患性非Ａ非Ｂ型肝炎の主要な疫学因子である。概算では世界中で２億人が本ウイルスに感染している。保菌者は高い比率で慢性感染を示し、多くは慢性肝疾患（いわゆるＣ型慢性肝炎）に移行する。このグループは高リスクで順次重篤な肝疾患、例えば肝硬変、肝細胞癌、および死に至る末期肝疾患に向かう。ＨＣＶがウイルス存続を確立させ、高率で慢性肝疾患を惹起するメカニズムは完全には解明されていない。どのようにしてＨＣＶがホストの免疫系と相互作用し、これから逃れるかは明らかではない。
ＨＣＶはフラビウイルス科（Flaviviridae）のエンベロープを有するプラス鎖ＲＮＡウイルスである。一本鎖のＨＣＶＲＮＡゲノムはプラスの極性を有し、長さが約9600のヌクレオチドをもつ１つの開放読み枠を含む。前記ヌクレオチドは約3010個のアミノ酸を含む直鎖状のポリプロテインをコードする。感染細胞では、前記ポリプロテインは多数の部位で細胞性およびウイルス性プロテアーゼで切断され、構造タンパク質および非構造（ＮＳ）タンパク質を生じる。前記構造タンパク質（Ｃ、Ｅ１、Ｅ２およびＥ２−ｐ７）は、ウイルス粒子を構成するポリペプチドを含む（M. Hijikata et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88:5547-5551; A. Grakoui et al., 1993(a), J. Virol. 67:1385-1395）。前記非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、ＮＳ５Ｂ）は、ＨＣＶＲＮＡゲノムの複製を触媒および調節する酵素または補助因子をコードする。構造タンパク質のプロセッシングはホスト細胞のプロテアーゼによって触媒される（Hijikata et al., 1991, 上掲書）。成熟した非構造タンパク質の生成はウイルスによりコードされる２つのプロテアーゼによって触媒される。第一のプロテアーゼはＮＳ２／３亜鉛依存メタロプロテアーゼであり、前記はポリプロテインからＮＳ３タンパク質の遊離を自家触媒する。遊離されたＮＳ３はＮ−末端セリンプロテアーゼドメインを含み（A. Grakoui et al., 1993(b), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:10583-7: M. Hijikata et al., 1993, J. Virol. 67:4665-4675）、前記ポリプロテインから残りの切断を触媒する。遊離されるＮＳ４Ａタンパク質は少なくとも２つの役割を有する。第一に、ＮＳ３タンパク質との安定な複合体を形成してＮＳ３／ＮＳ４Ａ複合体の膜局在を促進し（Kim et al., 1999, Arch. Virol. 144:329-343）、第二には、ＮＳ３プロテアーゼ活性のための補助因子として機能する。前記の膜結合複合体は順にポリプロテインの残りの部位の切断を触媒し、したがってＮＳ４Ｂ、ＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂの遊離を達成する（R. Bartenschlager et al., 1993, J. Virol., 67:3835-3844; Grakoui et al., 1993(a) 上掲書；Hijikata et al., 1993上掲書；R.A. Love et al., 1996, Cell, 87:331-342; A.D. Kwong et al., 1998, Antivairal Res., 40:1-18）。ＮＳ３タンパク質のＣ−末端セグメントにはまたヌクレオシドトリホスファターゼおよびＲＮＡヘリカーゼ活性が存在する（D.W. Kim et al., 1995, biochem. Biophys. Res. Comm., 215:160-166）。タンパク質ＮＳ４Ｂの機能は明らかではない。ＮＳ５Ａ（高度にリン酸化されているタンパク質）は、種々のＨＣＶ遺伝子型のインターフェロン耐性に必要であるらしい（Gale Jr. et al., 1997, Virology 230:217; Reed et al., 1997, J. Virol. 71:7187）。ＮＳ５Ｂは、ＨＣＶの複製に必要なＲＮＡ依存ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）である。
ＨＣＶＲＮＡ複製メカニズムの更なる理解および適切なin vitro系の開発のために、ＮＳ５Ｂタンパク質の生化学的分析が実施された。完全長ＮＳ５Ｂが作製され、非融合タンパク質としてリコンビナントバキュロウイルス感染昆虫細胞から（S.-E. Behrens et al., 1996, EMBO J., 15:12-22; R. de Francesco et al., 1996, Methods Enzymol., 275:58-67）、または昆虫細胞（V. Lohmann et al., 1997, J. Virol., 71:8416-8428; V. Lohmann et al., 1998, Virology, 249:108-118）および大腸菌（Z.-H. Yuan et al., 1997, BBRC 232:231-235）の両方からタグ付加タンパク質として精製された。in vitroでは、リコンビナントＮＳ５ＢのＲｄＲｐ活性はＲＮＡ鋳型に依存し、プライマーとしてＲＮＡまたはＤＮＡを必要とする（S.-E. Behrens et al., 1996, EMBO J. 15:12-22; V. Lohmann et al., 1997, J. Virol., 71:8416-8428）。異種ポリマー配列で構成されたＲＮＡ鋳型では、鋳型の３’−ＯＨがプライマーとして用いられ、伸長は“スナップ−バック”メカニズムにより進行し、鋳型とＲＮＡ生成物が共有結合で連結された二本鎖分子が得られる（S.-E. Behrens et al., 1996, EMBO J. 15:12-22; V. Lohmann et al., 1998, Virology, 249:108-118; G. Luo et al., 2000, J. Virol. 74:851-863）。最近になって、いくつかのグループがまた、ＨＣＶＮＳ５Ｂタンパク質はＲＮＡ合成をde novoで開始させることができることを示した（J. Oh et al., 1999, J. Virol. 73:7694-7702; X. Sun et al., 2000, BBRC 268:798-803; W. Zhong et al., 2000, J. Virol. 74:2017-2022）。
ＮＳ５ＢのＲｄＲｐは結晶化されて、他の核酸ポリメラーゼを連想させる構造が明らかにされた（S. Bressaneili et al., 1999, PNAS USA 96:13034-13039; H. Ago et al., 1999, Structure 7:1417-1426; C.A. Lesburg et al., 1999, Nature Struct. Biol., 6:937-943）。ＨＣＶポリメラーゼと細胞ポリメラーゼとの間の相違を包括的に理解することによって、ＨＣＶ複製に特異的な阻害剤の考案が促進されるであろう。カイネティクスに関する詳細な情報もまた、ＮＳ５Ｂにより触媒されるヌクレオチド取り込みの分子的基礎およびそれに続く阻害剤の機械的特性の理解に役立つであろう。
以前の研究では（S.-E. Behrens et al., 1996, EMBO J. 15:12-22; R. de Francesco et al., 1996, Methods Enzymol. 275:58-67; V. Lohmann et al., 1997, J. Virol. 71:8416-8428; V. Lohmann et al., 1998, Virology 249:108-118）、触媒能力を有するポリメラーゼＲＮＡ複合体の割合に関する情報はほとんど提供されなかった。最近のいくつかの研究では、ＨＣＶのＮＳ５Ｂ誘導ＲＮＡ複製のための鋳型とプライマーの要件が調べられた。二次構造に束縛されない自由な３’−末端をもつ鋳型および長さが２または３ヌクレオチドの短いプライマーが効率的なＲＮＡ合成の開始に好ましいことが判明した（W. Zhong et al., 2000, J. Virol. 74:9134-9143）。de novoのＲＮＡ合成開始では、しかしながらＮＳ５Ｂは安定な二次構造をもつ鋳型および少なくとも１つの３’−シチジレートを含む一本鎖配列を必要とする。
ウイルスポリメラーゼはウイルスの複製を治療の目的で阻害するための重要な標的である。新規な抗ウイルス剤の発見は、しばしば多数のサンプルをin vitroまたはin vivoアッセイのいずれかを用いて標的活性の阻害についてスクリーニングすることが必要である。一般に、ポリメラーゼは、3Ｈ、α−32Ｐまたはα−33Ｐ標識モノヌクレオチドのいずれかのオリゴヌクレオチド生成物への取り込みをモニターすることによって、または５’−末端標識プライマーの伸長によってアッセイされる。伸長プライマーに取り込まれた生成物は一般的なフィルターアッセイ、酸沈澱または変性ゲル電気泳動によって捕捉または分離される。
ＨＣＶＮＳ５ＢポリメラーゼはＨＣＶ複製阻害剤の探索では第一の標的である。ＨＣＶポリメラーゼの種々の調製物は種々のＲＮＡ基質により多様な生成物産生効率を示す。さらにまた、精製したリコンビナントＮＳ５Ｂポリメラーゼの活性は、個々のＲＮＡ基質により顕著に変動する。さらに、ＮＳ５ＢのＲＮＡポリメラーゼ活性はin vitroではイオン強度に極めて高い感受性を示し、100ｍＭを越える塩濃度は反応を阻害する。したがって、種々の塩濃度で阻害剤の性能を決定する能力は、標準的な酵素反応のこの限界のために制限される。さらにまた、従来技術で開示されたＨＣＶポリメラーゼ酵素アッセイは、阻害剤の能力の代表的な測定値としてＩＣ50を提供する。ＲＮＡまたはＮＴＰのいずれかと競合する阻害剤の場合、ＩＣ50値はアッセイ中の基質の濃度に比例し、これらの成分の濃度にしたがって変動するであろう。
未だ最適の域に達していない、さらに十分に性状が明らかにされていないＲＮＡ基質を用いるＨＣＶポリメラーゼアッセイの前記限界を克服するために、本出願人らは、ＲＮＡに依存しない特異的なＨＣＶポリメラーゼ阻害剤を特定するアッセイを開発した。
したがって、本発明の利点は、基質の濃度に無関係に一定の条件下で阻害剤の能力（阻害剤の能力の明瞭な測定値としてＫｄ値で示される）を直接測定することを可能にするアッセイの提供である。
本発明の直接結合アッセイは、ＲＮＡの重合に要求される限界範囲を越える塩濃度またはｐＨレベルの調節に融通がきく。本アッセイタイプは高感度および高処理様式に適している。
本発明のさらに別の利点は、高い親和性でポリメラーゼと結合し、さらに前記酵素の阻害剤で置き換えることができるプローブの提供である。
さらに別の利点は、種々の遺伝子型のＨＣＶポリメラーゼに適用できるアッセイの提供である。
発明の要旨
本発明の第一の特徴では、以下の工程を含む、ＨＣＶポリメラーゼと結合する化合物を特定する方法が提供される：
ａ）前記ＨＣＶポリメラーゼまたはその類似体を、ＨＣＶポリメラーゼまたはその類似体と結合することができるプローブと接触させて（前記プローブは前記ポリメラーゼの阻害剤で置き換えられることができる）、前記ポリメラーゼと結合した前記プローブを含む複合体を形成し；
ｂ）前記複合体中の前記プローブから放出されるシグナルを測定して基線レベルを確立し；
ｃ）工程ａ）の生成物とテスト化合物をインキュベートし；
ｄ）前記複合体のシグナルを測定し；さらに
ｅ）工程ｄ）のシグナルと工程ｂ）のシグナルとを比較し；
それによって、前記シグナルの変動が前記テスト化合物と前記ポリメラーゼとの結合を示す。
好ましい特徴の第一の実施態様では、前記プローブは下記式（Ｉ）によって表されるプローブの異性体、鏡像体、ジアステレオ異性体または互変異性体から選択される：
Figure 0004646514
式中、ＡはＯ、Ｓ、Ｎ、ＮＲ1またはＣＲ1であり、ここでＲ1はＨ、（Ｃ1-6）アルキルから成る群から選択され、前記アルキルは場合によって以下で置換されてあり：−ハロゲン、ＯＲ11、ＳＲ11またはＮ（Ｒ12）2［ここでＲ11および各Ｒ12はそれぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−アリールまたは（Ｃ1-8）アルキル−Ｈｅｔ（前記アリールまたはＨｅｔは場合によってＲ10で置換される）であるか；または両Ｒ12は一緒に共有結合しさらにそれら両者が結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する］；
点線は単結合または二重結合のどちらかを表し；
Ｒ2は、Ｈ、ハロゲン、Ｒ21、ＯＲ21、ＳＲ21、ＣＯＯＲ21、ＳＯ2Ｎ（Ｒ22）2、Ｎ（Ｒ22）2、ＣＯＮ（Ｒ22）2、Ｎ（Ｒ22）Ｃ（Ｏ）Ｒ22またはＮ（Ｒ22）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ22）から選択され［ここでＲ21および各Ｒ22は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、ハロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ2-6）アルキニル、（Ｃ5-7）シクロアルケニル、６もしくは１０員アリールまたはＨｅｔ（前記Ｒ21およびＲ22は場合によってＲ20で置換される）であるか、または両Ｒ22は一緒に結合しそれらが結合している窒素とともに５、６または７員の飽和複素環を形成する］；
ＢはＮＲ3またはＣＲ3であり、ここでＲ3は、（Ｃ1-6）アルキル、ハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ6-10）ビシクロアルキル、６もしくは１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリール、または（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、ビシクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、アルキル−アリールおよびアルキル−Ｈｅｔは、場合によってハロゲンまたは以下のａ）−ｄ）から選択される１つから４つの置換基で置換されるが、ただしＡがＮではないときはＡまたはＢの１つはＣＲ1またはＣＲ3であることを条件とし：
ａ）場合によって以下で置換された（Ｃ1-6）アルキル：−ＯＲ31もしくはＳＲ31［ここでＲ31はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリールまたは（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔである］、または−Ｎ（Ｒ32）2［ここで各Ｒ32は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリールまたは（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔであるか、または両Ｒ32は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する］；
ｂ）ＯＲ33［ここでＲ33はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリールまたは（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔである］；
ｃ）ＳＲ34［ここでＲ34はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリールまたは（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔである］；および
ｄ）Ｎ（Ｒ35）2［ここで各Ｒ35はそれぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリールまたは（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔであるか、または両Ｒ35は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する］；
ＫはＮまたはＣＲ4であり、ここでＲ4はＨ、ハロゲン、（Ｃ1-6）アルキル、ハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；またはＲ4は、ＯＲ41またはＳＲ41、ＣＯＲ41またはＮＲ41ＣＯＲ41［ここで各Ｒ41は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルである］であるか；またはＲ4は、ＮＲ42Ｒ43［ここで各Ｒ42およびＲ43は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、またはＲ42およびＲ43の両者は、一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する］であり；
ＬはＮまたはＣＲ5であり、ここでＲ5は上記のＲ4と同じ定義を有し；
ＭはＮまたはＣＲ7であり、ここでＲ7は上記のＲ4と同じ定義を有し；
Ｒ5はＣ（Ｙ1）−Ｚであり、ここでＹ1はＯまたはＳであり；
ＺはＮ（Ｒ6a）Ｒ6またはＯＲ6であり、ここでＲ6aはＨもしくは（Ｃ1-6）アルキルまたはＮＲ61Ｒ62であり［ここでＲ61およびＲ62はそれぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；またはＲ61およびＲ62の両者は、一緒に共有結合しさらにそれら両者が結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成するか；またはＲ62はＣＯＯＲ63であるか（ここでＲ63は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-6）シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは場合によって６もしくは１０員のアリールまたはＨｅｔで置換される）；またはＲ62はＣＯＲ64であり（ここでＲ64は、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-6）シクロアルキル−６もしくは１０員アリールまたはＨｅｔである）］；さらに
Ｒ6は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-6）シクロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリール、（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔから成る群から選択されるか（ここで前記アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、Ｈｅｔ、アルキル−アリールまたはアルキル−Ｈｅｔは全て場合によってＲ60で置換される）；
またはＲ6は下記式であり；
Figure 0004646514
［式中、Ｒ7およびＲ8は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、ハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリール、（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔであるか（ここで前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリール、（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔは場合によってＲ70で置換される）；または、
Ｒ7およびＲ8は一緒に共有結合して第二の（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのへテロ原子をもつ４、５もしくは６員複素環を形成するか；またはＺがＮ（Ｒ6a）Ｒ6であるときは、Ｒ7またはＲ8のどちらかはＲ6aと共有結合して窒素含有５または６員複素環を形成する］；
Ｙ2はＯまたはＳであり；
Ｒ9は、Ｈ、（Ｃ1-6アルキル）、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリールまたは（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔであるか（前記の全ては場合によってＲ90で置換される）；またはＲ9は、Ｒ7またはＲ8のどちらかと共有結合して５または６員複素環を形成し；
Ｑは、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＮＨ−アリールまたは（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＮＨ−Ｈｅｔ（前記の全ては場合によって下記式：
Figure 0004646514
またはＲ100で置換される）、またはその塩もしくは誘導体であり；
前記において、Ｈｅｔは、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する５もしくは６員複素環、またはＯ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子をもつ９もしくは１０員複素二環と定義され；さらに
Ｒ10、Ｒ20、Ｒ60、Ｒ70、Ｒ90およびＲ100は各々以下のように定義され：
−ハロゲン、ＯＰＯ3Ｈ、ＮＯ2、シアノ、アジド、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ1-6）アルキルまたはＣ（＝ＮＨ）ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキルから選択される１つから４つの置換基；または
−下記のａ）−ｌ）から選択される１つから４つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｃ）ＯＣＯＲ105（ここでＲ105は、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｄ）ＳＲ108、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、Ｒ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121およびＲ122は、それぞれＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｌ）アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；さらに、
前記において、Ｒ150は以下のように定義される：
−ハロゲン、ＯＰＯ3Ｈ、ＮＯ2、シアノ、アジド、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ1-6）アルキルまたはＣ（＝ＮＨ）ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキルから選択される１つから３つの置換基；または
−下記のａ）−ｋ）から選択される１つから３つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｃ）ＯＣＯＲ105（ここでＲ105は、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｄ）ＳＲ108、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、Ｒ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか；またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121およびＲ122は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｊ）テトラゾール、ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
前記において、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義され：テトラゾール、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＳＯ3Ｈ、ＳＲ161、ＳＯ2Ｒ161、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2、ＳＯ2Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；または両Ｒ162は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する）、
前記第一の実施態様では、前記プローブは任意の適切な位置に結合させた検出可能な標識を含み、前記実施態様によって、前記プローブはＨＣＶポリメラーゼまたはその類似体と結合し、さらに前記ポリメラーゼの阻害剤によって置き換えられることができる。
前記第一の実施態様のまた別の態様にしたがえば、アッセイに用いられるプローブは検出可能な標識を含まず、測定されるシグナルは、前記プローブの存在下および非存在下におけるＨＣＶポリメラーゼに固有の蛍光の変化である。
本発明の第二の特徴にしたがえば、ＨＣＶポリメラーゼの阻害剤を特定するアッセイにおいて式（Ｉ）のプローブの使用が提供される。
本発明の第三の特徴にしたがえば、ＨＣＶポリメラーゼと結合する潜在能力をもつ化合物をテストするキットが提供される。前記キットは、式（Ｉ）のプローブおよび前記ポリメラーゼと結合するテスト化合物を特定するために前記プローブを使用する方法に関する指示物を含む。
発明の詳細な説明
定義
別に特定しないかぎり以下の定義が適用される：
“アフィニティー”タグという用語は、リガンドに対するその強い親和性を用いて、前記タグが結合されている物質を溶液から取り出すことができる成分を指す。前記のようなタグの例には、ビオチンまたはその誘導体、ヒスチジンポリペプチド、ポリアルギニン、アミロース糖成分、または特異的抗体によって認識可能な一定のエピトープが含まれる。前記のようなアフィニティータグは周知の方法によってプローブに結合される。対応するアフィニティーリガンドもまた当業者には周知である。
ＨＣＶのＮＳ５Ｂポリペプチドの“類似体”またはそのフラグメントは、例えば前記タンパク質をコードする核酸のマニピュレーションにより、または前記タンパク質自体の改変により前記タンパク質のアミノ酸配列を変更することによって改変されたポリペプチドを指す。前記のような天然のアミノ酸配列の類似体は、１つまたは２つ以上のアミノ酸の挿入、付加、欠失または置換を含むことができ、さらに、本来のＨＣＶＮＳ５Ｂポリペプチドの機能活性は変化していてもいなくてもよい。上記に記載したように、本発明のアッセイ／方法で用いられるＨＣＶＮＳ５Ｂポリペプチドまたはタンパク質には、ＨＣＶＮＳ５Ｂポリペプチドに由来し、さらにＨＣＶＮＳ５Ｂポリペプチドの少なくとも１つの特性または他の特徴を保持する、ＨＣＶに由来する任意のフラグメント、誘導体、変種または変異体が含まれる。
“検出可能標識”という用語は、本発明のプローブに連結された任意の基であって、前記プローブがポリメラーゼ標的と結合したとき、前記のような標識は、ポリメラーゼを検出、測定および定量できるようにプローブの直接的または間接的な認識を可能にすることができる任意の基を指す。前記のような“検出可能な標識”の例には、光反応基、蛍光標識、化学発光標識、比色標識、酵素マーカー、放射性同位元素が含まれるが、ただしこれらに限定されない。前記のような標識は周知の方法でプローブに結合される。
本明細書で用いられるように、“リンカー”という用語は、前記の標識を本発明のプローブに共有結合させる、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳから成る群から選択される１から２０個の原子の鎖を指す。そのような鎖の例には以下が含まれるが、ただしこれらに限定されない：
Figure 0004646514
上記のリンカーはまた１対のアフィニティータグ／アフィニティーリガンド（これらは一緒になって前記化合物を検出可能な標識に結合させる）を含むことができる。
“光反応基”という用語は、光による活性化に際して不活性基が活性種（例えば遊離ラジカル）に変換される基を指す。前記の例にはベンゾフェノン、アジ化物などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
本明細書で用いられるように、“プローブ”という用語は、共有結合的または非共有結合的態様でＨＣＶポリメラーゼと結合することができる式（Ｉ）の化合物を指す。プローブが非共有結合的態様で結合する場合、前記プローブはテスト化合物によって置き換えられることができる。共有結合的態様で結合する場合は、前記プローブは、ＨＣＶポリメラーゼ−プローブアダクツ生成を定量することができ、さらに前記をテスト化合物が阻害することができる架橋実験のために用いることができる。
本明細書で用いられるように、“（Ｃ1-3）アルキル”、“（Ｃ1-4）アルキル”または“（Ｃ1-6）アルキル”という用語は、単独または別のラジカルと組み合わされる、それぞれ３つ、４つおよび６つの炭素原子を含む非環式直鎖または分枝鎖アルキルラジカルを意味する。前記のようなラジカルの例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ヘキシル、１−メチルエチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルエチルが含まれる。
本明細書で用いられるように、“（Ｃ2-6）アルケニル”という用語は、単独または別のラジカルと組み合わされる、２つから６つの炭素原子を含む不飽和非環式直鎖ラジカルを意味する。
本明細書で用いられるように、“（Ｃ2-6）アルキニル”という用語は、単独または別の基と組み合わされる、２つから６つの炭素原子を含む不飽和非環式直鎖ｓｐ混成ラジカルを意味する。
本明細書で用いられるように、“（Ｃ3-7）シクロアルキル”という用語は、単独または別のラジカルと組み合わされる、３つから７つの炭素原子を含むシクロアルキルラジカルを意味し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルが含まれる。
本明細書で用いられるように、“（Ｃ5-7）シクロアルケニル”という用語は、単独または別のラジカル組み合わされる、５つから７つの炭素原子を含む不飽和環式ラジカルを意味する。
本明細書で用いられるように、“アリール”または“６または１０員アリール”という用語は、単独または別のラジカルと組み合わされる、６個から１０個の炭素原子を含む芳香族ラジカルを意味し、例えばフェニルまたはナフチルである。
本明細書で用いられるように、“ＣＯＯＨ”という用語はカルボン酸基を指す。カルボン酸基は官能基同等物で置換できることは当業者には周知である。本発明で意図される官能基同等物の例にはエステル、アミドまたはボロン酸が含まれるが、ただしこれらに限定されない。
本明細書で用いられるように、“官能基同等物”という用語は、類似の電子特性、ハイブリッド形成特性または結合特性を有する別の成分によって置き換えられることができる成分またはその置換派生物を指す。
本明細書で用いられるように、“ハロ”という用語はハロゲン原子を指し、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素が含まれる。
本明細書で用いられるように、“ハロアルキル”という用語は、上記に記載したアルキルであって、各水素原子が連続的にハロゲン原子で置き換えられているもの、例えばＣＨ2ＢｒまたはＣＦ3を指す。
本明細書で用いられるように、ヘテロ原子はＯ、ＳまたはＮを意味する。
本明細書で用いられるように、“複素環”という用語は、単独または別のラジカルと組み合わされる、窒素、酸素および硫黄から選択される１つから４つのヘテロ原子を含む５、６または７員の飽和または不飽和（芳香族を含む）複素環から水素を除去して誘導された一価ラジカルを指す。
さらにまた、本明細書で用いられるように、“複素二環式”という用語は、上記に定義した複素環が１つまたは２つ以上の他の環（複素環であれまたは他のいずれかの環であれ）と縮合したものを指す。前記のような複素環の例には、ピロリジン、テトロヒドロフラン、チアゾリジン、ピロール、チオフェン、クマリン、ヒダントイン、ジアゼピン、１Ｈ−イミダゾール、イソキサゾール、チアゾール、テトラゾール、ピペリジン、１，４−ジオキサン、４−モルフォリン、ピリジン、ピリジン−Ｎ−オキシド、ピリミジン、チアゾロ［４，５−ｂ］−ピリジン、キノリン、またはインドール、または以下の複素環が含まれるが、ただしこれらに限定されない：
Figure 0004646514
本明細書で用いられるように、“９または１０員複素二環”または“複素二環”という用語は、単独または別のラジカルと組み合わされる、１つまたは２つ以上の他の環（複素環であれまたは他のいずれかの環であれ）と縮合した上記で定義した複素環を意味する。前記のような複素二環にはチアゾロ［４，５−ｂ］−ピリジン、キノリンまたはインドール、または以下が含まれるが、ただしこれらに限定されない：
Figure 0004646514
本明細書で用いられるように、“Ｈｅｔ”という用語は、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つまたは４つのヘテロ原子を有する５または６員複素環、またはＯ、ＮおよびＳから選択される１つまたは４つのヘテロ原子を有する９または１０員複素二環を示す。
本明細書で用いられるように、“ＯＨ”という用語はヒドロキシル基を指す。ヒドロキシル基は官能基の同等物によって置換できることは当業者には周知である。本発明で意図される、前記のような官能基同等物の例にはエーテル、スルフヒドリルおよび第一、第二または第三アミンが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
本明細書で用いられるように、“ＳＨ”という用語はスルフヒドリル基を指す。本発明では、“ＳＨ”または“ＳＲ”基が存在するときはいつでも、前記基は他の任意の酸化状態、例えばＳＯＲ、ＳＯ2ＲまたはＳＯ3Ｒで置換できる。
“置換された”という用語は、２つ以上の成分を有するラジカル（例えばＣ1-6アルキル−アリールまたはＣ1-6アルキル−Ｈｅｔ）と一緒に用いられる場合は、そのような置換は両成分に適用される。すなわち、前記アルキルおよびアリールまたはＨｅｔ成分の両者を指定の置換基で置換することができる。
好ましい実施態様
好ましくは、本発明の第一の特徴にしたがえば、本発明は、以下の工程を含む、ＨＣＶポリメラーゼの阻害剤を特定する方法を提供する：
ａ）前記ＨＣＶポリメラーゼを式（Ｉ）のプローブと接触させて、前記ポリメラーゼと結合した前記プローブを含む複合体を形成し；
ｂ）前記複合体由来のシグナルを測定して基線レベルを確立し；
ｃ）工程ａ）の生成物とテスト化合物をインキュベートし；
ｄ）前記複合体由来のシグナルを測定し；さらに
ｅ）工程ｄ）のシグナルと工程ｂ）のシグナルとを比較し；
それによって、前記シグナルの減少は前記テスト化合物が前記ポリメラーゼの阻害剤であることを示す。
当業者には理解されるところであるが、本発明の特異的プローブとＮＳ５Ｂポリメラーゼとの結合は多様な方法で直接的または間接的に測定することができる。前記プローブおよびＮＳ５Ｂポリメラーゼは、それぞれ標識およびアフィニティータグ付加の必要はない。特異的プローブとＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼとの結合は、タグ付加または非付加ＮＳ５Ｂ蛋白質の固有のスペクトル特性の変化によって、および／または特異的プローブの固有のスペクトルの変化によって直接的にモニターおよび定量することができる。阻害剤−ＮＳ５Ｂ結合の直接測定はまた、これら２つの成分の１つをマトリックスに固定し、さらにプラズマ共鳴検出技術によって結合を測定することによって実施することができる。プローブ−ＮＳ５Ｂ複合体結合を定量するアッセイは、プローブ（例えば下記（ｖ）および（ｖｉ））上に光反応性標識（例えばフェニルアジドまたはベンゾフェノン）を取り込ませ、さらにプローブの光活性化に続いてＮＳ５Ｂ（アダクツ）に不可逆的に結合した標識の量を測定することができる。
好ましくは、本発明の第一の特徴にしたがえば、下記式のプローブまたはその塩が提供される：
Figure 0004646514
式中、
Ｒ1はＨまたは（Ｃ1-6）アルキルから成る群から選択され；
Ｒ2はＣＯＮ（Ｒ22）2（ここで各Ｒ22は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ5-7）シクロアルケニル、６もしくは１０員アリールまたはＨｅｔであるか、または両Ｒ22は一緒に結合しそれらが結合している窒素とともに５、６または７員飽和複素環を形成する）であるか；またはＲ2は、Ｈ、ハロゲン、（Ｃ1-6）アルキル、ハロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ5-7）シクロアルケニル、６もしくは１０員アリールまたはＨｅｔから選択され（ここで前記アルキル、ハロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ5-7）シクロアルケニル、アリールまたはＨｅｔの各々は場合によってＲ20で置換される）、ここでＲ20は以下のように定義され：
−ハロゲン、ＮＯ2、シアノ、アジド、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ1-6）アルキルまたはＣ（＝ＮＨ）ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキルから選択される１つから４つの置換基；または
−下記のａ）−ｌ）から選択される１つから４つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｃ）ＯＣＯＲ105（ここでＲ105は、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｄ）ＳＲ108、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、Ｒ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121およびＲ122は、それぞれＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｌ）アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
ここで、Ｒ150は好ましくは以下であり：
−ハロゲン、ＮＯ2、シアノまたはアジドから選択される１つから３つの置換基；または
−下記のａ）−ｋ）から選択される１つから３つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；
ｄ）ＳＲ108、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、Ｒ112はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキル、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルである）であるか；またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記（Ｃ1-6）アルキルおよび（Ｃ3-7）シクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記アルキルおよびシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルおよびシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；
ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記（Ｃ1-6）アルキルおよび（Ｃ3-7）シクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；さらに
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ここで、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義され：ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2、ＳＯ2Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；または両Ｒ162は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する）；
Ｒ3は、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ6-10）ビシクロアルキル、６もしくは１０員アリールまたはＨｅｔから選択され；
Ｒ5は−Ｃ（Ｏ）−Ｚであり、式中、
ＺはＯＲ6であり、ここでＲ6は以下で置換された（Ｃ1-6）アルキルであり：
−ＯＰＯ3Ｈ、ＮＯ2、シアノ、アジド、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ1-6）アルキルまたはＣ（＝ＮＨ）ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキルから選択される１つから４つの置換基；または
−下記のａ）−ｌ）から選択される１つから４つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｃ）ＯＣＯＲ105（ここでＲ105は、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｄ）ＳＲ108、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、さらにＲ112はＣＮ、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し、前記シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121およびＲ122は、それぞれＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｌ）アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
−ハロゲン、ＮＯ2、シアノ、アジドから選択される１つから３つの置換基；または
−下記のａ）−ｋ）から選択される１つから３つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｄ）ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、Ｒ112はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか；またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121は、Ｈ、場合によってＲ160で置換された（Ｃ1-6）アルキルであるか、またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｊ）テトラゾール、ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
前記において、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義され：テトラゾール、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｒ161、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2、ＳＯ2Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；または両Ｒ162は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する）；
または、ＺはＮ（Ｒ6a）Ｒ6であり（ここでＲ6aは、Ｈまたは（Ｃ1-6アルキル）である）；さらに、
Ｒ6は、場合によって下記で置換された（Ｃ1-6アルキル）であり：
−ＯＰＯ3Ｈ、ＮＯ2、シアノ、アジド、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ1-6）アルキルまたはＣ（＝ＮＨ）ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキルから選択される１つから４つの置換基；または
−下記のａ）−ｌ）から選択される１つから４つの置換基：
ａ）Ｒ150aで置換された（Ｃ1-6）アルキル、ハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ150で置換され、ここでＲ150aはＲ150と同じであるが、ただしハロゲンではない）、ＯＲ150b、ＣＯＯＲ150b、Ｎ（Ｒ150b）2（ここでＲ150bはＨまたはＣ1-6アルキルである）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｃ）ＯＣＯＲ105（ここでＲ105は、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｄ）ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、さらにＲ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ111はＨであり、さらにＲ112はＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121およびＲ122は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｌ）アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；さらに
前記において、Ｒ150は以下から選択される：
−ハロゲン、ＮＯ2、シアノ、アジドから選択される１つから３つの置換基；または
−以下のａ）−ｋ）から選択される１つから３つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｄ）ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、さらにＲ112はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121は、Ｈ、場合によってＲ160で置換された（Ｃ1-6）アルキルであるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｊ）テトラゾール、ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；および
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
前記においてＲ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義され：テトラゾール、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2（Ｒ161）、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2、ＳＯ2Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；または両Ｒ162は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する）；
またはＲ6は下記式であり；
Figure 0004646514
式中、好ましくはＲ7およびＲ8は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、ハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリール、（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔ（ここで前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6）アルキル−アリール、（Ｃ1-6）アルキル−Ｈｅｔは場合によってＲ70で置換される）であるか；または、
Ｒ7およびＲ8は一緒に共有結合して第二の（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから３つのへテロ原子をもつ４、５もしくは６員複素環を形成するか；またはＺがＮ（Ｒ6a）Ｒ6であるときは、Ｒ7またはＲ8のどちらかはＲ6aと共有結合して窒素含有５または６員複素環を形成する；
前記式中、好ましくは、Ｒ70は以下から選択され：
−ハロゲン、ＮＯ2、シアノ、アジドから選択される１つから４つの置換基；または
−下記のａ）−ｌ）から選択される１つから４つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｄ）ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、さらにＲ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であり、さらにＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｌ）アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
前記において好ましくは、Ｒ150は以下から選択され：
−ハロゲン、ＮＯ2、シアノ、アジドから選択される１つから３つの置換基；または
−下記のａ）−ｋ）から選択される１つから３つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルおよびシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；
ｄ）ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2（ここでＲ108は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、さらにＲ112はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか；またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキルまたは複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記アルキルまたはシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｊ）テトラゾール、ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記（Ｃ1-6）アルキルおよび（Ｃ3-7）シクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；および
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
前記において、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義され：テトラゾール、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨまたは（Ｃ1-6）アルキルであり；
Ｒ9はＨであるか；またはＲ9は、Ｒ7またはＲ6のどちらかと共有結合して５または６員複素環を形成し；さらに
Ｑは、６または１０員アリール、Ｈｅｔであり、前記の全ては場合によって下記式
Figure 0004646514
またはＲ100で置換され；
ここでＲ100は以下であり：
−ハロゲン、ＮＯ2、シアノまたはアジドから選択される１つから４つの置換基；または、
−下記のａ）−ｌ）から選択される１つから４つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ2-6アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、さらにＲ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、であるか、またはＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121およびＲ122は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｌ）アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；さらに
前記において、Ｒ150は以下から選択される：
−ハロゲン、ＮＯ2、シアノまたはアジドから選択される１つから３つの置換基；または
−以下のａ）−ｋ）から選択される１つから３つの置換基：
ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｄ）ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、Ｒ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）ＨｅｔまたはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか；またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121は、Ｈ、場合によってＲ160で置換された（Ｃ1-6）アルキルであるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
ｊ）テトラゾール、ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ160で置換される）；および
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
前記において、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義され：テトラゾール、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＳＯ3Ｈ、ＳＲ161、ＳＯ2Ｒ161、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2、ＳＯ2Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；または両Ｒ162は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する）、
前記第一の特徴では、前記プローブは任意の適切な位置に結合させた検出可能な標識を含み、前記第一の特長によって、前記プローブはＨＣＶポリメラーゼまたはその類似体と結合し、さらに前記ポリメラーゼの阻害剤によって置き換えられることができる。
より好ましくは、本発明のプローブは下記式の化合物またはその塩である：







Figure 0004646514
式中、
Ｒ1は（Ｃ5-6）シクロアルキルであり；
Ｒ2はフェニルまたＨｅｔであり、両者は場合によってＲ20で置換され；
Ｒ3、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ100およびＲ150は上記に定義したとおりであり；
Ｒ11は、ＯＰＯ3Ｈ、ＮＯ2、シアノ、アジド、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ1-6）アルキルまたはＣ（＝ＮＨ）ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキルであるか；または下記のａ）−ｌ）であり：
ａ）Ｒ150aで置換された（Ｃ1-6）アルキル、ハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ150で置換され、ここでＲ150aはＲ150と同じであるが、ただしハロゲンではない）、ＯＲ150b、ＣＯＯＲ150b、Ｎ（Ｒ150b）2（ここでＲ150bはＨまたはＣ1-6アルキルである）；
ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｃ）ＯＣＯＲ105（ここでＲ105は、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｄ）ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、さらにＲ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ111はＨであり、さらにＲ112はＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121およびＲ122は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
ｌ）アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
前記において、Ｒ150はここで定義されたとおりであり：
ここで前記化合物は以下のいずれかの状態である：
ａ）任意の適切な位置で放射性同位元素により標識されるか；
ｂ）Ｒ1およびＲ3を除く任意の適切な位置で適切なリンカーにより検出可能な成分に連結されるか；または
ｃ）Ｒ1およびＲ3を除く任意の適切な位置で親和性タグに連結される。
さらに好ましくは、本発明のプローブは下記式の化合物またはその塩である：
Figure 0004646514
式中、
Ｒ1は（Ｃ5-6）シクロアルキルであり；
Ｒ2はフェニルまたＨｅｔであり、両者は場合によってＲ20で置換され；
Ｒ3およびＲ150は上記に定義したとおりであり；
ここで前記化合物は場合よって、
ａ）任意の適切な位置で放射性同位元素により標識されるか；
ｂ）Ｒ1およびＲ3を除く任意の適切な位置で適切なリンカーにより検出可能な成分に連結されるか；または
ｃ）Ｒ1およびＲ3を除く任意の適切な位置で親和性タグに連結される。
特に本発明の第一の特徴にしたがえば、本発明のプローブは下記から成る群から選択される：



Figure 0004646514































Figure 0004646514










Figure 0004646514
本第一の実施態様のまた別の特徴にしたがえば、以下の工程を含む、ＨＣＶポリメラーゼを阻害する化合物を特定する方法が提供される：
ａ）前記ＨＣＶポリメラーゼまたはその類似体をここで定義したとおりのプローブと接触させて、前記ポリメラーゼと結合した前記プローブを含む複合体を形成し；
ｂ）前記複合体に由来するシグナルを測定して基線レベルを確立し；
ｃ）工程ａ）の生成物とテスト化合物をインキュベートし；
ｄ）前記複合体のシグナルを測定し；さらに
ｅ）工程ｄ）のシグナルと工程ｂ）のシグナルとを比較し；
それによって、前記シグナルの変動は前記テスト化合物が前記ポリメラーゼを阻害することを示す。
好ましくは、ＨＣＶポリメラーゼを阻害することができる化合物の特定方法は以下の工程を含む：
ｆ）高処理スクリーニングで上記に示した（ａ）から（ｅ）の工程を繰返す。
また別には、下記式（Ｉ）のプローブまたはその塩が提供される：
Figure 0004646514
式中、ＡはＯ、Ｓ、ＮＲ3またはＣＲ3であり；
ＢはＮＲ1またはＣＲ1であり（ただしＡがＣＲ3であるとき、ＢはＮＲ1であり、さらにＡがＯまたはＳであるとき、ＢはＣＲ1であることを条件とする）；
点線は単結合または二重結合のどちらかを表し；
Ｒ1は以下から成る群から選択され：場合によって（Ｃ1-6）アルキルで置換された（Ｃ4-7）シクロアルキル；ノルボルナン、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する５、６または７員複素環（前記の全ては場合によってハロ、ＯＨおよび場合によってヒドロキシで置換されたＣ1-6アルキルから成る群から選択される１つから４つの置換基で置換される）；
Ｒ2は、フェニル、ピリジン−Ｎ−オキシド、５または６員芳香族複素環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）および９または１０員芳香族複素二環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）から成る群から選択され（前記フェニル、ピリジン−Ｎ−オキシド、芳香族複素環および芳香族複素二環は場合によって、ハロゲン、Ｃ1-6ハロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、ＯＨ、場合によって（Ｃ1-6）アルキルで一置換または二置換されたアミノから成る群から選択される１つまたは４つの置換基で置換される）；
Ｒ3は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ1-6アルキル）−（Ｃ6-10アリール）、（Ｃ1-6アルキル）−５または６員複素環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）および５または６員複素環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）から成る群から選択され（ここで前記アリールおよび前記複素環は、場合によってＣＯＯＨ、ＣＯＯ（Ｃ1-6アルキル）、ハロゲンおよび（Ｃ1-6アルキル）から成る群から選択される１つまたは４つの置換基で置換される）；
Ｍは、Ｎ、ＣＲ4aまたはＣＯＲ4bであり（ここでＲ4aはＨ、ハロゲンおよび（Ｃ1-6アルキル）から成る群から選択され；さらにＲ4bは、Ｈおよび（Ｃ1-6アルキル）から成る群から選択される）；
ＫおよびＬはそれぞれ別個にＮまたはＣＲ6であり（ここでＲ6はＨ、ハロ、Ｃ1-6アルキル、ＯＨまたはＣ1-6アルコキシである）；
Ｒ5は−Ｃ（Ｙ）−Ｚであり（ここでＹはＯまたはＳで、ＺはＮＨＲ5aまたはＯＲ5aである）；
ここでＲ5aは以下から成る群から選択され：Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、場合によって（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ2-6）アルケニルで置換された（Ｃ3-6）シクロアルキル、場合によってＣ1-6アルキルまたはＣ2-6アルケニルで置換された（Ｃ6-10）アリール、Ｎ｛（Ｃ1-6）アルキル｝2、ＮＨＣＯＯ（Ｃ1-6）アルキル（Ｃ6-10）アリール、ＮＨＣＯ（Ｃ6-10）アリール、−５または６原子複素環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）、および−９または１０原子複素二環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）；
ここで前記アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、複素環または複素二環は全て場合によって下記から選択される1つから4つの置換基で置換され：ＯＨ、ＣＯＯＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ2-4）アルケニル、（Ｃ1-6）アルキル−ヒドロキシ、ＣＯＯ（Ｃ1-6）アルキル、Ｃ3-7シクロアルキル、ベンジルオキシ、ハロゲン、（Ｃ2-4）アルケニル−（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、クマリン、（Ｃ1-6）アルキル−アミノ、ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）、Ｃ（ハロゲン）3、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ1-4）アルキル、および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ6-10）アリール、５または６員複素環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）、９または１０員複素二環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）、および６または１０員アリール；
ここで前記アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、複素環および複素二環は全て場合によって下記から選択される1つから4つの置換基で置換され：ハロゲン、ＯＰＯ3Ｈ、スルホンアミド、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2ＣＨ3、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＣＨ3、（Ｃ1-3）アルキル、（Ｃ2-4アルケニル）ＣＯＯＨ、テトラゾリル、ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ2、トリアゾリル、ＯＨ、ＮＯ2、ＮＨ2、−Ｏ（Ｃ1-6アルキル）ＣＯＯＨ、ヒダントイン、ベンゾイレンウレア、（Ｃ1-4）アルコキシ、シアノ、アジド、−Ｏ−（Ｃ1-6）アルキルＣＯＯＨ、−Ｏ−（Ｃ1-6）アルキルＣＯＯ−（Ｃ1-6）アルキル、ＮＨＣＯ−（Ｃ1-6アルキル）、−ＮＨＣＯＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＣＯＮＨＯＨ、−ＮＨＣＯＣＯＮＨ2、−ＮＨＣＯＣＯＮＨＣＨ3、−ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯ（Ｃ3-7）シクロアルキル−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ6-10）アリール−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ6-10）アリール−ＣＯＯ（Ｃ1-6）アルキル、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯ（Ｃ1-6）アルキル、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ2-6）アルケニル−ＣＯＯＨ、−ＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ6-10）アリール−Ｏ（Ｃ1-6）アルキルＣＯＯＨ、−ＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ6-10）アリール−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＨ2ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）ヒドロキシアルキルＣＯＯＨ、−ＯＣＯ（Ｃ1-6）ヒドロキシアルキルＣＯＯＨ、（Ｃ3-6）シクロアルキルＣＯＯＨ、下記式：
Figure 0004646514
−ＮＨＣＮ、−ＮＨＣＨＯ、−ＮＨＳＯ2ＣＨ3、−ＮＨＳＯ2ＣＦ3および−Ｏ（Ｃ1-6アルキル）−テトラゾール；
またはＲ5aは下記式であり：
Figure 0004646514
式中、Ｒ7およびＲ8はそれぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6アルキル）フェニル、（Ｃ1-6アルキル）−（Ｃ3-7シクロアルキル）、（Ｃ3-7シクロアルキル）−（Ｃ1-6アルキル）、（Ｃ3-7シクロアルキル）−（Ｃ2-4アルケニル）、（Ｃ1-6アルキル）−ＯＨ、フェニル、ＣＨ2ビフェニル、５または６員複素環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）、９または１０員複素二環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）、（Ｃ1-6アルキル）−５もしくは６員複素環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）または（Ｃ1-6アルキル）−９もしくは１０員複素二環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）であるか；
または、Ｒ7およびＲ8は一緒に共有結合して、（Ｃ3-7シクロアルキル）、４、５または６員複素環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）を形成するか；
または、Ｒ7またはＲ8の１つはＲ9と共有結合してピロリジンを形成し（ここで、前記アルキル、シクロアルキル、複素環、複素二環、フェニルは場合によって以下から成る群から選択される１つから４つの置換基で置換される：ＯＨ、ＣＯＯＨ、（Ｃ1-6アルキル）、（Ｃ2-4アルケニル）、ＣＯＮＨ2、ＮＨ2、ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）、Ｎ（Ｃ1-6アルキル）2、ＮＨＣＯＣＯＯＨ、ＮＨＣＯＣＯＮ（Ｃ1-6アルキル）2、ＮＨＣＯＣＯＮＨ（Ｃ1-6アルキル）、ＳＨ、Ｓ（Ｃ1-6アルキル）、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ2、ハロゲンおよびＣＯＯ（Ｃ1-6アルキル））；
Ｒ9はＨまたは（Ｃ1-6アルキル）であり；さらに
Ｑは、（Ｃ1-3）ＣＯＮＨアリール、６または１０員アリール、ビフェニル、５または６原子複素環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）、９または１０員複素二環（Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する）から成る群から選択され、ここで、前記アリール、ビフェニル、複素環および複素二環は全て場合によって以下から選択される１つから４つの置換基で置換され：ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ（Ｃ1-6アルキル）、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ1-6）アルキルＣＯＯＨ、（Ｃ1-6アルキル）（Ｃ2-4アルキニル）、（Ｃ1-6）アルキル−ヒドロキシ、フェニル、ベンジルオキシ、ハロゲン、（Ｃ2-4）アルケニル、（Ｃ2-4）アルケニル−（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有する５または６員の第二の複素環、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１つから４つのヘテロ原子を有するＮＨ−５員または６員の第二の複素環［ここで前記第二の複素環およびフェニルは場合によって、（Ｃ1-6アルキル）、ＣＦ3、ＯＨ、（Ｃ1-6アルキル）ＣＯＯＨ、Ｏ（Ｃ1-6アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ1-6アルキル）ＣＯＯ（Ｃ1-6アルキル）、ＣＨ2フェニル、ＣＯＯ（Ｃ1-6アルキル）、（Ｃ1-6アルキル）Ｏ（Ｃ1-6アルキル）、ＣＯＯＨ、ＮＣＨ（Ｃ1-6アルキル）2、ＮＣＯ（Ｃ1-6アルキル）、ＮＨ2、ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）、ハロゲン、Ｎ（Ｃ1-6アルキル）2およびＣ2-6アルケニル−ＣＯＯＨから選択される１つから４つの置換基で置換される］、ハロゲン、ＯＰＯ3Ｈ、ベンジル、スルホンアミド、ＳＨ、ＳＯＣＨ3、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2ＣＨ3、Ｓ（Ｃ1-6アルキル）ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＣＨ3、（Ｃ1-3）アルキル、（Ｃ2-4アルケニル）ＣＯＯＨ［ここで前記アルケニルは場合によって１つから２つの（Ｃ1-6アルキル）置換基で置換される］、（Ｃ2-4アルケニル）ＣＯＯ（Ｃ1-6アルキル）、テトラゾリル、ＣＯＯＨ、トリアゾリル、ＯＨ、ＮＯ2、ＮＨ2、−Ｏ（Ｃ1-6アルキル）ＣＯＯＨ、ヒダントイン、ベンゾイレンウレア、（Ｃ1-4）アルコキシ、（Ｃ1-4）アルコキシ（Ｃ1-6アルキル）ＣＯＯＨ、シアノ、アジド、−Ｏ−（Ｃ1-6）アルキルＣＯＯＨ、−Ｏ−（Ｃ1-6）アルキルＣＯＯ−（Ｃ1-6）アルキル、−ＮＨＣＯＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＣＯＮＨＯＨ、−ＮＨＣＯＣＯＮＨ2、−ＮＨＣＯＣＯＮＨＣＨ3、−ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯ（Ｃ3-7）シクロアルキル−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ6-10）アリール−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ6-10）アリール−ＣＯＯ（Ｃ1-6）アルキル、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯ（Ｃ1-6）アルキル、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ2-6）アルケニル−ＣＯＯＨ、−ＮＨ（Ｃ1-6）アルキル）−（Ｃ6-10）アリール−Ｏ（Ｃ1-6）アルキルＣＯＯＨ、−ＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ6-10）アリール−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＨ2ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）ヒドロキシアリールＣＯＯＨ、−ＯＣＯ（Ｃ1-6）ヒドロキシアルキルＣＯＯＨ、（Ｃ3-6）シクロアルキルＣＯＯＨ、下記式：
Figure 0004646514
−ＮＨＣＮ、−ＮＨＣＨＯ、−ＮＨＳＯ2ＣＨ3、−ＮＨＳＯ2ＣＦ3、クマリン、（Ｃ1-6）アルキル−アミノ、ＮＨ（Ｃ1-6アルキル）2、Ｃ（ハロゲン）3、−ＮＨ（Ｃ2-4）アシル、−ＮＨ（Ｃ6-10）アロイル、−ＣＯＮＨ（Ｃ1-6アルキル）、−ＣＯ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、−ＣＯ−ＮＨ−アラニル、−ＣＯＮＨ（Ｃ2-4）アルキルＮ（Ｃ1-6アルキル）2、−ＣＯＮＨ（Ｃ2-4）アルキル−Ｈｅｔ、−ＣＯＮＨ（Ｃ2-4）アルキル−（ＣＯＯＨ）−Ｈｅｔ、−ＣＯＮＨ（Ｃ1-2アルキル）（ＯＨ）（Ｃ1-2アルキル）ＯＨ、−ＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ（Ｃ6-10アリール）、−ＣＯＮＨ−Ｈｅｔ、−ＣＯＮＨ（Ｃ6-10）アリール−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ（Ｃ6-10）アリール−ＣＯＯ（Ｃ1-6）アルキル、−ＣＯＮＨ（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯ（Ｃ1-6）アルキル、−ＣＯＮＨ（Ｃ6-10）アリール−（Ｃ1-6）アルキル−ＣＯＯＨ、および−ＣＯＮＨ（Ｃ6-10）アリール−（Ｃ2-6）アルケニル−ＣＯＯＨ；
前記のプローブは検出可能な標識を含み、前記実施態様によって、前記プローブはＨＣＶポリメラーゼまたはその類似体と結合し、さらに前記ポリメラーゼの阻害剤によって置き換えられることができる。
プローブ内に取り込まれた標識は、タグ付加ＮＳ５Ｂポリメラーゼに結合させた適切な標識と対を形成し、その結果プローブ−ポリメラーゼ結合時の前記２つの標識対の接近によって測定可能なシグナルが発生する。前記のような検出技術の例には、蛍光共鳴エネルギー移転（ＦＲＥＴ）および時間決定蛍光（time resolved fluorescence）（ＴＲＦ）が含まれるが、ただしこれらに限定されない。
好ましくは、検出可能な標識は以下から成る群から選択される：蛍光標識（例えばフルオレセイン、オレゴングリーン、ダンシル、ローダミン、テキサスレッド、フィコエリスリンまたはＥｕ3-）、放射性原子（例えば3Ｈ、14Ｃ、125Ｉ）、化学発光標識（例えばルシフェラーゼ）、酵素マーカーにより生成される発色（例えばβ−ガラクトシダーゼまたはセイヨウワサビペルオキシダーゼ）。
また別には、蛍光レポーターまたはクェンチャーを標識対として用い、プローブとＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼとの結合をモニターしてもよい。一般的に知られているレポーター／クェンチャー対は例えば以下から選択できる：ＥＤＡＮＳ／ＤＡＢＣＹＬ、トリプトファン／２，４−ジニトロフェニル、トリプトファン／ＤＡＮＳＹＬ、７−メトキシクマリン／２，４−ジニトロフェニル、２−アミノベンゾイル／２，４−ジニトロフェニルおよび２−アミノベンゾイル／３−ニトロチロシン。
当業者には容易に理解されるところであるが、放射性標識は式Ｉのプローブ内の任意の適切な位置に取り込ませることができる。例えば、3Ｈまたは14Ｃ同位元素は前記分子内に存在する任意の水素または炭素と置き換えることができる。同様に125Ｉ同位元素を任意の芳香環で置換させることができる。
原則として、これらのトレーサー手技は高容積スクリーニングに容易に適合させることができる。放射能検出のためのシンチレーションプロクシミティーアッセイ（ＳＰＡ）法が開発され、前記は分離工程を必要とせず、自動化およびマイクロタイター形式に容易に適合する。
好ましくは、検出可能標識は蛍光標識または化学発光標識である。より好ましくは、前記標識は蛍光標識である。もっとも好ましくは前記検出可能標識はフルオレセインである。
放射能標識試薬およびそれらの廃棄に関連するコストのために、非放射性検出方法がますます広がりつつある。蛍光分光分析はもっとも一般的な非放射性検出方法の１つである。蛍光が用いられるアッセイタイプの１つは蛍光偏光である。偏光は総蛍光強度に左右されず、したがってこの方法は蛍光振幅測定のように干渉の影響を受けない。本明細書に開示するように、開発した新規なアッセイタイプではフルイレセイン標識阻害剤が用いられるが、他の蛍光標識または非蛍光性技術もまた用いることができる。
好ましくは、本アッセイで用いられるポリメラーゼはアフィニティータグを含み、それによってポリメラーゼを固相に結合させることができ、さらにプローブは検出可能なシグナルを提供できるように標識することができる。プローブに取り込ませるアフィニティータグはビオチンでもよく、このビオチンにより、アビジン結合検出技術を副次的に使用して前記ビオチン付加プローブとＮＳ５Ｂポリメラーゼとの結合を間接的に測定することができる。
好ましくは、本アッセイで用いられるＨＣＶポリメラーゼは、ＭＳ５Ｂ；ＮＳ５ＢΔ２１；ＮＳ５ＢΔ５７または多様な遺伝子型（ＨＣＶ−１ａまたは１ｂ株を含む）に由来するその類似体から成る群から選択され、前記は場合によってそのＮまたはＣ末端のどちらかにヒスチジンタグを有する。特に当業者に理解されるところであるが、本結合アッセイは、本発明にしたがってそのような結合アッセイを実施するために最適または機能的なＮＳ５Ｂのポリメラーゼ活性を必要としない。
実施例
実施例１Ａ）
プローブ（iii）：（Ｓ）−３−（５−カルボキシメトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）−２−（｛１−［１−シクロヘキシル−２−（４−｛［２−（５−ジメチルアミノ−ナフタレン−１−スルホニルアミノ）−エチルカルバモイル］−メトキシ｝−フェニル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］−メタノイル｝−アミノ）−プロピオン酸
Figure 0004646514
ａ）４−クロロ−３−ニトロ安息香酸（40.40ｇ，0.20mole）を３滴のＤＭＦを含むＤＣＭ(100mL)に懸濁した。塩化オキザリル（1.5当量、0.3mole，27ｍL）を少量づつ添加し、混合物を室温で一晩攪拌した。さらに１時間還流させて反応を完了させた後、揮発物を減圧下で除去し、残留物を２回ヘキサンとともに同時蒸発させて表題の化合物を明黄色固体として得た。
ｂ）（Ｓ）−５−ヒドロキシトリプトファンメチルエステルヒドロクロリド（1.55ｇ，５mmol）を８０％のＭｅＣＮ水溶液（25mL）に溶解し，前記溶液を氷で冷却した。重曹（0.850ｇ，10mmol）を、続いてジ−tert−ブチルジカーボネート（1.10ｇ，5.1mmol）を添加した。前記混合物を室温で２時間攪拌し、水（200mL）に注ぎ入れてＥｔＯＡｃ（３Ｘ）で抽出した。一緒にした抽出物を水およびブラインで洗浄し、（ＭｇＳＯ4）で乾燥させて濃縮し,ベージュ色の固体を得た（1.65ｇ）。上記の粗生成物（1.50ｇ，4.83mmol）をアセトン（20mL）および炭酸カリウム無水物（1.5ｇ，11mmol）に溶解し、さらにメチルブロモアセテート（0.76ｇ，５mmol）を添加した。その後前記混合物を４時間還流し、さらにメチルブロモアセテートを添加し反応を完了させた（HPLCによって完了するまで15mgずつ添加）。続いて反応混合物を冷却し、ろ過して固形物を除去した。ろ液を蒸発させて所望のカルバメートを油（2.0ｇ）として得た。上記の粗カルバメート（2.0ｇ）を４NのHCｌ−ジオキサンとともに室温で1時間攪拌することによって脱保護した。真空中で揮発物を除去して所望のトリプトファンエステル誘導体を褐色の固体（1.51ｇ）として得た。
ｃ）工程ｂ）のトリプトファン誘導体（0.343ｇ，１mmol）を80％のＭｅＣＮ水溶液（10mL）に溶解し、重曹（３当量、0.260ｇ）を添加した。前記溶液を氷中で冷却し、工程ａ）の４−クロロ−３−ニトロベンゾイルクロリド（0.220ｇ，１mmol）を添加した。前記混合物を室温で1時間攪拌し、減圧下で濃縮し、さらに残留物をフラッシュクロマトグラフィー（溶離液として１：２ヘキサン／ＥｔＯＡＣ）によって精製し、化合物ｃ）を黄色の泡沫（0.391ｇ）として得た。
ｄ）上記の４−クロロベンズアミド誘導体（0.214ｇ，0.45mmol）をＤＭＳＯ（１mL）に溶解し、ＤＩＥＡ（0.2mL）を加え、続いてシクロヘキシルアミン（３当量、0.16mL）を加えた。前記混合物を60から65℃で４時間攪拌し、続いて水で希釈した。形成されたオレンジ色の沈殿物を採集し、水で洗浄し乾燥させた（0.200ｇ）。
ｅ）上記の粗生成物（0.200ｇ，0.36mmol）をＭｅＯＨ（15ｍＬ）中の木炭（60mg）上の20％Ｐｄ（ＯＨ）2で水素添加した（１気圧のＨ2）。２時間後、懸濁物をろ過して触媒を除き、in vacuoで濃縮して泡沫として表題化合物（0.16ｇ）を得た。
ｆ）４−ホルミルフェノキシ酢酸（0.306ｇ，1.70mmol）をＤＣＭ（５mL）に溶解した。ＤＩＥＡ（0.524ｇ，４mmol）およびＴＢＴＵ（0.550ｇ，1.70mmol）を添加し、続いてtert−ブチルＮ−（２−アミノエチル）カルバメート（0.250ｇ，1.56mmol）を添加した。前記混合物を２時間室温で攪拌し、ＥｔＯＡｃに溶解し、５％Ｋ2ＣＯ3、ＫＨＳＯ4水溶液、水およびブラインで連続的に洗浄した。抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ4）,減圧下で濃縮して黄色の固体（0.350ｇ）を得た。
ｇ）工程ｅ）のジアミン誘導体（0.026ｇ，0.05mmol）および工程ｆ）のアルデヒド（0.020ｇ，0.06mmol）をＤＭＦ（３mL）に溶解し、水（0.03mL）を添加し、続いてオキソン（oxone（登録商標））（0.024ｇ，0.04mmol）を添加した。前記混合物を室温で1時間攪拌し、続いて水で希釈した。生じた沈殿物をろ過で採集し、水で洗浄し乾燥させてベージュ色の固体（0.020ｇ）を得た。
ｈ）上記の粗カルバメートをＴＦＡで30分室温で攪拌した。揮発物を減圧下で除去し、残留物を調製用Ｃ１８逆相ＨＰＬＣで精製しビスＴＦＡ塩を得た。
ｉ）アミン塩（0.019ｇ，0.02mmol）をＤＭＳＯ（0.3mL）に溶解し、ＤＩＥＡ（0.06mL）を添加し、続いて塩化ダンシル（0.065ｇ，0.02mmol）を添加した。前記混合物を室温で1時間攪拌した。５ＮのＮａＯＨ（0.12mL）および水（0.05mL）を添加し、鹸化を室温で１時間進行させた。ＴＦＡで酸化した後、プローブ（iii）を調製用Ｃ１８逆相ＨＰＬＣによって前記反応混合物から直接単離した：ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ９３０（ＭＨ＋）。
実施例１Ｂ）
プローブ（ii）：５−（３−｛２−［２−（４−｛５−［（Ｓ）−１−カルボキシ−２−（５−カルボキシメトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）−エチルカルバモイル］−１−シクロヘキシル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−フェノキシ）−エタノイルアミノ］−エチル｝−チオウレイド）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸
Figure 0004646514
実施例１Ａの工程ｈ）のアミン塩（0.06mmol）をＤＭＳＯ（0.6mL）に溶解し、さらにＤＩＥＡ（0.3mL）、続けてフルオレセインイソチオシアネート異性体１（0.026ｇ，0.066mmol）を添加した。前記混合物を室温で1時間攪拌した。５ＮのＮａＯＨ（0.3mL）および水（0.15mL）を添加し、攪拌をさらに30分再開した。ＴＦＡで酸性化した後、プローブ（ii）を調製用Ｃ１８逆相ＨＰＬＣにより直接単離した：ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ１０８６（ＭＨ＋）。
実施例１Ｃ）
プローブ（ｖ）：（Ｓ）−２−｛［１−（２−｛４−［（２−｛［１−（４−アジド−フェニル）−メタノイル］−アミノ｝−エチルカルバモイル）−メトキシ］−フェニル｝−１−シクロヘキシル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−メタノイル］−アミノ｝−３−（５−カルボキシメトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピオン酸
Figure 0004646514
ａ）４−アジド安息香酸（0.160ｇ，１mmol）をＤＣＭ（３mL）に溶解した。ＤＩＥＡ（0.5mL，2.5mmol）およびＴＢＴＵ（0.337ｇ，1.05mmol）を添加し、続いてtert−ブチルＮ−（２−アミノエチル）カルバメート（0.165ｇ，1.03mmol）を添加した。前記混合物を2.5時間室温で攪拌し、ＥｔＯＡｃに溶解し、５％Ｋ2ＣＯ3、ＫＨＳＯ4水溶液、水およびブラインで連続的に洗浄した。抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で濃縮して黄色の固体（0.257ｇ）を得た。粗カルバメート（0.257ｇ，0.84mmol）を４NのHCｌ−ジオキサン（15ｍL）中で室温で２時間攪拌することによって脱保護した。減圧下で揮発物を除去して桃色の固体を得た。
ｂ）４−ホルミルフェノキシ酢酸（0.200ｇ，1.1mmol）をＤＣＭ（３mL）に溶解し、ＤＩＥＡ（0.5ｍLl）、続いてＴＢＴＵ（0.350ｇ，1.1mmol）および上記のアミン塩（0.240ｇ，１mmol）を添加した。前記混合物を４時間室温で攪拌し、ＥｔＯＡｃに溶解し、５％Ｋ2ＣＯ3、ＫＨＳＯ4水溶液、水およびブラインで連続的に洗浄した。抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で濃縮して灰白色の固体（0.162ｇ）を得た。
ｃ）上記のベンズアルデヒド誘導体（0.044ｇ，0.12mmol）および実施例１Ａ工程ｅ）のジアミン誘導体（0.052ｇ，0.1mmol）をＤＭＦ（0.6mL）および水（0.1mL）に溶解した。オキソン（登録商標）（0.050ｇ，0.8mmol）を添加し、前記混合物を室温で1時間攪拌した。５ＮのＮａＯＨ（0.2mL）および水（0.1mL）を添加し、鹸化を１時間進行させた。プローブ（v）を調製用Ｃ１８逆相ＨＰＬＣ（12.5mg）によって直接単離した：ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ８４２（ＭＨ＋）。
実施例１D）
プローブ（vi）：（Ｓ）−３−（５−カルボキシメトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）−２−（｛１−［１−シクロヘキシル−２−（４−｛［２−（｛１−［４−（１−フェニル−メタノイル）−フェニル］−メタノイル｝−アミノ）−エチルカルバモイル］−メトキシ｝−フェニル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］−メタノイル｝−アミノ）−プロピオン酸
Figure 0004646514
実施例１Cのプローブ（v）の方法にしたがい、ただし４−ベンゾイル安息香酸を４−アジド安息香酸の代わりに使用してプローブ（vi）を得た：ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ９０５（ＭＨ＋）。
実施例１Ｅ）
プローブ（iv）：（Ｓ）−３−（５−カルボキシメトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）−２−｛［１−（１−シクロヘキシル−２−｛４−［２−（５−ジメチルアミノ−ナフタレン−１−スルホニルアミノ）−エチルカルバモイル］−フェニル｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−メタノイル］−アミノ｝−プロピオン酸
Figure 0004646514
ａ）実施例１Ａの工程ｆ）の方法にしたがい、４−カルボキシベンズアルデヒドをtert−ブチルＮ−（２−アミノエチル）カルバメートと共役させた。
ｂ）実施例１Ａ工程ｇ）で述べたように、オキソン（登録商標）を用いて実施例１Ａ工程ｅ）のジアミン誘導体および上記のアルデヒドによりベンゾイミダゾール環を形成させた後、Ｂｏｃ保護基を除去し、生じたアミンを実施例１Ａ工程ｉ）で述べたように塩化ダンシルで濃縮した。
ｃ）プローブ（iv）は、通常の条件下でのエステル基の鹸化および調製用Ｃ１８逆相ＨＰＬＣによる単離の後で得られた：ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ９００（ＭＨ＋）。
実施例１Ｆ）
プローブ（ｉ）：５−［３−（２−｛［１−（４−｛５−［（Ｓ）−１−カルボキシ−２−（５−カルボキシメトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）−エチルカルバモイル］−１−シクロヘキシル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−フェニル）−メタノイル］アミノ｝−エチル）−チオウレイド］−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−安息香酸

Figure 0004646514
実施例１Ｅで述べたプローブ（v）の方法を用いたが、ただし塩化ダンシルの代わりにフルオレセインイソチオシアネート異性体１を使用した。プローブ（ｉ）は調製用Ｃ１８逆相ＨＰＬＣで精製した後で得られた：ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ１０５６（ＭＨ＋）。
実施例２
ＨＣＶＮＳ５ＢポリメラーゼΔ２１−Ｈｉｓの製造と精製
リコンビナントＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼは、成熟ＮＳ５Ｂで通常見出されるＣ末端21アミノ酸を欠く変種を発現させることにより可溶形として製造できる（Yamashita et al. 1998, J. Biol. Chem. 273:15479-15486; Ferrari et al. 1999, J. Virol. 73:1649-1654）。我々は、Ｃ末端６ヒスチジンタグ（ＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓ（配列番号１）と称する）およびＮ末端６ヒスチジンタグ（Ｈｉｓ−ＮＳ５ＢΔ２１（配列番号２）と称する）を有する前記いわゆるＮＳ５ＢΔ２１を発現させた（どちらの蛋白質も“ｈｉｓタグＮＳ５Ｂ”と称される）。大腸菌株ＪＭ１０９（ＤＥ３）でのｐＥＴベクターからの前記遺伝子の発現は、0.4ｍＭのＩＰＴＧを用いて22℃で３時間誘発した。細胞を採集し、溶解緩衝液（トリス−ＨＣｌ（pH7.5）、10％グリセロール、１mMＥＤＴＡ、２mMの２−メルカプトエタノール、500mMのＮａＣｌ、１mMのＰＭＳＦ、１μｇ／mLのアンチパイン、１μg／mLのペプスタチンＡおよび１μｇ／mLのロイペプチン）中でミクロ流動化装置で溶解させた。前記溶解物を30000ｇで遠心して清澄化し、続いてイミダゾールを最終濃度10mMで添加した。続いて前記溶解物を予め緩衝液Ａ（トリス−ＨＣｌ（pH7.5）、10％グリセロール、500mMのＮａＣｌ、10mMイミダゾール）で平衡化させた金属キレート樹脂（Ni-NTA；Qiagen）にロードし、さらに十分に洗浄し500mMのイミダゾールを含む緩衝液Ａのグラジエントを用いて前記タンパク質を溶出させた。ｈｉｓタグＮＳ５ＢΔ２１を含むピーク分画をプールし、緩衝液Ｃ（20mMのトリス−ＨＣｌ（pH7.5）、10％グリセロール、５mMのＤＴＴ）で希釈してＮａＣｌ濃度を300mMに低下させ、続いてＤＥＡＥセファロースに適用して一切の核酸を除去した。セファロースカラムのフロースルー物を緩衝液Cで希釈してＮａＣｌを200mMに減少させ、続いてヘパリン−セファロースカラムに適用した。200mMから１ＭのＮａＣｌグラジエントを含む緩衝液ＣでｈｉｓタグＮＳ５Ｂをヘパリン−セファロースから溶出させる。ｈｉｓタグＮＳ５Ｂを含むピーク分画をプールし、さらに緩衝液Ｃで希釈してＮａＣｌの最終濃度を200mMにし、リソースＳカラムにロードした。濃縮ｈｉｓタグＮＳ５ＢをリソースＳから溶出させ、スーパーデックス200カラムで300mMのＮａＣｌを含む緩衝液Ｃにロードしサイズ分画した。ピーク分画は高度に純粋なｈｉｓタグＮＳ５Ｂを含有し、前記を−80℃で使用まで保存する。
実施例３
蛍光異方性分析
酵素による本プローブの力価測定は以下のように実施した：
フルオレセイン標識プローブを、20mMのトリス−ＨＣｌ（pH7.5）、１mMのＥＤＴＡ、５mMのＭｇＣｌ2、１mMのＤＴＴおよび10％のＤＭＳＯで所望の濃度に希釈した。ＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓタンパク質を、25mMのトリス−ＨＣｌ（pH7.5）、300mMのＮａＣｌ、５mMのＤＴＴ、１mMのＥＤＴＡ、30％のグリセロールおよび0.1％のＩＧＥＰＡＬで段階希釈した。反応総容積は500μＬで、最終アッセイ緩衝液は、20mMのトリス−ＨＣｌ（pH7.5）、１mMのＥＤＴＡ、５mMのＭｇＣｌ2、１mMのＤＴＴ、30mMのＮａＣｌ、３％グリセロール、0.01％ＩＧＥＰＡＬおよび５％ＤＭＳＯであった。異方性の測定は、４５０−ＷキセノンアークランプおよびＴ−オプティクスコンフィギュレーションを備えたＳＬＭアミコ（Amico）８１００スペクトロフルオロメーターで実施した。励起波長は493ｎｍで、放射は530ｎｍでモニターした。各異方性測定において、バックグラウンド緩衝液の水平および垂直強度をサンプルの測定値から差し引いて異方性を算出した。データは非直線回帰のためにＳＡＳプログラム（SAS Institute Inc., NC, USA）で処理し、直接結合平衡定数および他のパラメーター並びに実験データに対する回帰フィット曲線を入手した。プローブ（ｉ）で得られた力価曲線の例は図1に示されている。本ポリメラーゼによるプローブ（ｉ）および（ii）のＫd値はそれぞれ15ｎＭおよび６ｎＭであった。
実施例４
96ウェルプレートによる偏光アッセイ
これらプローブと競合する種々の化合物（テスト化合物）のＫd値を得るために、このアッセイをより扱いやすい形式に変更し、結合アッセイを96ウェルマイクロプレート読取装置に適合させた。プローブを希釈して所望の最終濃度を得た（酵素に対するそのＫdおよびアッセイ条件に応じて４から25ｎＭの濃度）。被検化合物を20mMのトリス−ＨＣｌ（pH7.5）、１mMのＥＤＴＡ、５mMのＭｇＣｌ2、１mMのＤＴＴおよび15％ＤＭＳＯで２または３倍ずつ段階希釈した。アッセイでのＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓ濃度は、70％のプローブ結合を得ることができるように計算した（これらの条件はテスト化合物によるプローブの置換を可能にした）。最終的に、アッセイ反応物は、96ウェルの黒色プレート（Packard）に移した被検化合物の段階希釈物50μＬを含んでいた（しかしながら、陽性コントロール値を入手し、さらに実験で結合したプローブの真のパーセントを実証するために1列だけは化合物を含まなかった）。続いて、ブランク差し引き用の１つのカラムを除き、50μＬのプローブを各ウェルに添加した。最後に、０％および100％結合値を決定するために使用する１列を除き、150μＬの酵素を全てのウェルに添加した。８ウェルを含む前記の１列には、酵素緩衝液を最初の４ウェルに添加し（遊離プローブの異方性値またはｒfの決定用）、さらにアッセイで使用した酵素濃度の10倍過剰を他の４ウェルに添加した（プローブの100％が結合したときの異方性値（すなわちｒb値）の決定用）。これらの値はＫd値の計算に必要であった。アッセイの最終緩衝液条件はＫd決定で用いたものと同一であった（すなわち下記のとおり：20mMのトリス−ＨＣｌ（pH7.5）、１mMのＥＤＴＡ、５mMのＭｇＣｌ2、１mMのＤＴＴ、30mMのＮａＣｌ、３％グリセロール、0.01％ＩＧＥＰＡＬおよび５％ＤＭＳＯ）。反応物は暗所で室温で90分インキュベートした。続いて、高エネルギーキセノンフラッシュランプを搭載したポーラースターギャラクシー（POLARstar Galaxy）で485ｎｍの励起フィルターおよび520ｎｍの放射フィルターを用いて偏光の読み取りを実施した。偏光値は以下の計算により異方性値に容易に変換できる（Owicki et al. 2000, J. Biomol. Screen. 5:297-306）：
ａ＝２ｘＰ／（３−Ｐ）
（式中、ａ：異方性値、Ｐ：偏光値）
続いて、異方性値を用いて、ＳＡＳ非直線回帰分析に適合させた２つのタイプの結果を得て、陽性コントロールとしての計算のためには約７０％結合での異方性値を、さらに陰性コントロールとしては下記の異方性等式に適合させた遊離プローブの異方性値（ｒf）を用いて見かけのＫd値を得ることができる：




Figure 0004646514
式中、ａ：異方性、Ｋd：阻害剤の解離定数、Ｉ：被検化合物（または阻害剤）の濃度、Ｅo：ＮＳ５Ｂの濃度（Ｅoは＞＞［プローブ］でなければならない）、Ｑ＝Ｑb／Ｑf＝100％プローブ結合の総蛍光／遊離プローブの総蛍光、ｒb：プローブが100％結合したときの異方性値、ｒf：プローブが遊離しているときの異方性値、Ｋp：プローブの解離定数である。
本高処理アッセイは統計パラメーターＺ’の決定によって評価し有効性が確認された（J.-H. Zhang et al. 1999, J. Biomol. Screening, 4:67-73）。本実験の結果は図２に示されている。一連の陽性および陰性コントロールの異方性値は非常に類似し、以下のように非常に低い標準偏差をもたらした： 陽性コントロールの場合0.2186±0.0036Ａ単位および陰性コントロールの場合0.0738±0.0037Ａ単位。前記アッセイで得られるＺ’値は0.85で、我々は、本プローブと競合する化合物の検出を目的とする優れた条件を有することが示唆される。
実施例５
阻害剤のテスト
我々は、本結合アッセイで効果的にプローブと置換されれる強力な化合物を特定した。図３および４は、31ｎＭから１μＭの範囲のＫdを有する、前記のうちのいくつかの例を示している。異方性等式はグラフィトソフト（Grafit Software）（Erithacus Software Ltd., UK）で示されているが、阻害剤濃度はＸ軸で変化し、異方性はＹ軸で変化する（前記ソフトで算出されるパラメーターは阻害剤のＫdおよびＱb／Ｑf＝比であった）。供給される定数は、Ｋp、Ｅo、ｒbおよびｒfであった。
実施例６
偏光アッセイのための改変条件
本偏光アッセイの有用性は、化合物の結合を種々の条件下で調べる必要がある場合に明らかである。例えば、プローブの結合定数は異なる塩濃度およびｐＨで決定された。図５から８は、30ｍＭから200ｍＭの範囲の最終ＮａＣｌ濃度でのプローブ（ｉ）の結合曲線を示している。本アッセイにおける他の全ての試薬は標準プロトコル（実施例３）で述べたとおりであった。これらの図に示されているように、Ｋd値は、塩濃度にしたがってＫd＝15ｎＭ（30ｍＭのＮａＣｌ）からＫd＝122ｎＭ（200ｍＭのＮａＣｌ）に徐々に増加する。ｐＨ6.5での実験もまたより低いｐＨでのプローブ（ｉ）のＫdを決定するために実施した。これらのアッセイでは、ｐＨ6.5の20ｍＭリン酸緩衝液をトリスの代わりに用い、他の全てのアッセイ試薬は９６ウェルの偏光アッセイ（実施例４）で述べたとおりであった。これらのタイプの実験例は図9に示されている。プローブ（ｉ）を用いてｐＨ6.5で得られたＫd値は33ｎＭであった。種々の実験条件下でこれらのＫd値を確立すれば、70％のプローブ結合を得るために用いるべきプローブおよび酵素濃度を平衡等式から決定することは簡単である。いったんこれらの値を得たら、問題の化合物を新しい条件下で容易に検査してそれらのＫd値を決定することができる。
実施例７
改変酵素による蛍光偏光アッセイ
我々のＨＣＶポリメラーゼ酵素の他の構築物による蛍光偏光アッセイもまた使用した。Ｃ末端にタグが付加されたＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓポリメラーゼの他に、ＨｉｓタグをＮ末端に有するＮＳ５Ｂ酵素もまた本蛍光偏光アッセイで使用した。この酵素によるプローブ（ｉ）のＫd値の決定を、標準的な96ウェル様式のアッセイで述べた条件と同じ条件を用いて実施した。図10は、プローブ（ｉ）を用いて得られたＫdは同じ（すなわち18ｎＭ）であることを示している。３つの化合物のＩＣ50およびＫdについて２つの異なる酵素構築物（ＮＳ５ＢΔ２１−ＨｉｓおよびＨｉｓ−ＮＳ５ＢΔ２１）を用いて比較した。
ＩＣ50は、以下のアッセイにしたがいシンチレーションプロクシミティアッセイ（ＳＰＡ）を用いて決定した：
基質は以下のとおりである：（ｉ）その遊離５’Ｃ−位をビオチンで改変されている１２ヌクレオチドＲＮＡオリゴウリジレート（またはオリゴウリジン一リン酸（オリゴＵ）プライマー；（ii）長さが種々（1000から10000ヌクレオチド）の相補性ポリアデニレート（またはアデノシン一リン酸）（ポリＡ）鋳型；および（iii）ＵＴＰ−［５，６3Ｈ］。ポリメラーゼ活性は、オリゴＵプライマーから伸長される鎖へのＵＭＰ−［５，６3Ｈ］の取り込みとして測定される。3Ｈ標識反応生成物をストレプトアビジン被覆ＳＰＡ−ビーズで捕捉し、トップカウント（TopCount; Packard）で定量する。阻害剤は以下を含む反応物中で種々の濃度で調べる：１から５ｎＭのｈｉｓタグ付加ＮＳ５Ｂ、１μｇ／mLのビオチン付加オリゴUプライマー、10μg／ｍLのポリＡ鋳型、20mMのトリス−ＨＣｌ（pH7.5）、５mMのＭｇＣｌ2、25ｍMのＫＣｌ、１mMのＥＤＴＡ、１mMのＤＴＴ、0.33％のｎ−ドデシルマルトシド、および５％のＤＭＳＯ、0.0083μCi／μL［0.25μM］ＵＴＰ−［５，６3Ｈ］、0.75μＭのＵＴＰ、1.67Ｕ／μＬのＲＮＡsin（登録商標）。前記反応物を室温で1.5時間インキュベートした。ＳＴＯＰ溶液（20μＬ；0.5MのＥＤＴＡ、150ｎｇ／μLのｔＲＮＡ）を添加し、続いて30μLのストレプトアビジン被覆ＰＶＴビーズ（20ｍＭのトリス−ＨＣｌ（pH7.5）、25ｍMのＫＣｌ、0.025％のＮａＮ3中に８ｍｇ／ｍＬ）を添加した。続いてプレートを30分振盪した。ＣｓＣｌの溶液を添加し（70μＬ，５Ｍ）ＣｓＣｌ濃度を1.95Ｍにした。続いて前記混合物を1時間静置した。続いてビーズをヒューレットパッカードのトップカウント（登録商標）で計測した。異なる10のテスト化合物濃度での結果を基にして、標準濃度−％阻害曲線を作成して分析し、化合物のＩＣ50を決定した。
本実験の結果は表Ｉに示されている。Ｋd値はテストした３つの化合物について両酵素で類似していたが、２つの酵素で得られたＩＣ50値は顕著な相違を示し、基質親和性の違いを示している。
実施例８
蛍光偏光アッセイの特異性
関係が薄い別のウイルスポリメラーゼおよび近縁の遺伝子型（１ａ）のＨＣＶポリメラーゼを用いて蛍光偏光アッセイの有用性を調べた。
ＧＢＶ−Ｂポリメラーゼ酵素（ＧＢＶ−ＢΔ２３−Ｈｉｓ（配列番号３）と称される（J.N. Simons et al. 1995, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:3401-3405; J. Bukh et al. 1999, Virology 262:470-478）を、以下の改変を加えながら実施例２に記載したように作製し精製した：
大腸菌株JM109(DE3)でｐＥＴベクターから遺伝子を発現させるために0.5mMのＩＰＴＧで22℃で３時間誘発した。細胞を採集し、緩衝液Ａ（トリス−ＨＣｌ（pH7.5）、10％グリセロール、１mMＥＤＴＡ、２mMの２−メルカプトエタノール、500mMのＮａＣｌ、１mMのＰＭＳＦ、１μｇ／mLのアンチパイン、１μg／mLのペプスタチンＡ、１μｇ／mLのロイペプチンおよび0.5％のドデシル−β−Ｄ−マルトシド）中でミクロ流動化装置で溶解させた。前記溶解物を30000ｇで遠心して清澄化し、続いてイミダゾールを最終濃度10mMで添加した。続いて10mMイミダゾールを含む緩衝液Ａで予め平衡化させた金属キレート樹脂（Ni-NTA；Qiagen）に前記溶解物をロードし、さらに十分に洗浄し、続いて500mMのイミダゾールを含む緩衝液Ａのグラジエントを用いて前記タンパク質を溶出させた。ｈｉｓタグＧＢＶ−ＢΔ２３を含むピーク分画をプールし、緩衝液Ｃ（20mMのトリス−ＨＣｌ（pH7.5）、10％グリセロール、５mMのＤＴＴ、0.01％のドデシル−β−Ｄ−マルトシド）で希釈してＮａＣｌ濃度を300mMに低下させ、続いてＤＥＡＥセファロースに適用して一切の核酸を除去した。ＤＥＡＥセファロースカラムのフロースルー物を緩衝液Cで希釈してＮａＣｌを200mMに減少させ、続いてヘパリン−セファロースカラムに適用した。200mMから１ＭのＮａＣｌグラジエントを含む緩衝液ＣでｈｉｓタグＧＢＶ−Ｂをヘパリン−セファロースから溶出させた。続いて、純粋なｈｉｓタグＧＢＶ−Ｂを含むピーク分画をプールし、−80℃で使用まで保存した。
ＨＣＶの遺伝子型１ａのＮＳ５Ｂポリメラーゼ（Ｈｉｓ−ＮＳ５ＢΔ２１（H177c, 1a）（配列番号４）と称される（M. Yanagi et al. 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:8738-8743））を以下のような改変を加えながら実施例２に記載したように製造し精製した：
大腸菌株JM109(DE3)でｐＥＴベクターから遺伝子を発現させるために0.4mMのＩＰＴＧで22℃で３時間誘発した。細胞を採集し、緩衝液Ａ（トリス−ＨＣｌ（pH8.0）、10％グリセロール、１mMＥＤＴＡ、２mMの２−メルカプトエタノール、500mMのＮａＣｌ、１mMのＰＭＳＦ、１μｇ／mLのアンチパイン、１μg／mLのペプスタチンＡ、１μｇ／mLのロイペプチン、１％のドデシル−β−Ｄ−マルトシド、１％トリトンX−100および0.1％ＣＨＡＰＳ）中でミクロ流動化装置により溶解させた。前記溶解物を30000ｇで遠心して清澄化し、続いてイミダゾールを最終濃度10mMで添加した。続いて10mMイミダゾール、0.1％ＮＰ−40、（ＣＨＡＰＳは含まない）および低濃度の他の洗剤（0.2％ドデシル−β−Ｄ−マルトシド、0.05％トリトンX−100）を含む緩衝液Ａで予め平衡化させた金属キレート樹脂（Ni-NTA；Qiagen）に前記溶解物をロードし、さらに十分に洗浄した後、500mMのイミダゾールを含む緩衝液Ａのグラジエントを用いて前記タンパク質を溶出させた。ｈｉｓタグＮＳ５ＢΔ２１（H77c, 1a）を含むピーク分画をプールし、緩衝液Ｃ（20mMのトリス−ＨＣｌ（pH8.0）、10％グリセロール、５mMのＤＴＴ、0.2％のドデシル−β−Ｄ−マルトシド）で希釈してＮａＣｌ濃度を300mMに低下させ、続いてＤＥＡＥセファロースに適用して一切の核酸を除去した。ＤＥＡＥセファロースカラムのフロースルー物を緩衝液Cで希釈してＮａＣｌを200mMに減少させ、続いてヘパリン−セファロースカラムに適用した。200mMから１ＭのＮａＣｌグラジエントを含む緩衝液ＣでｈｉｓタグＮＳ５ＢΔ２１（H77c, 1a）をヘパリン−セファロースから溶出させた。続いて前記ポリメラーゼを含むピーク分画をプールし、さらに緩衝液Ｃで希釈してＮａＣｌの最終濃度を200mMにし、リソースＳカラムにロードした。ｈｉｓタグＮＳ５Ｂ（H77c, 1a）を含むピーク分画をプールし、スーパーロース12カラムで600mMのＮａＣｌを含む緩衝液Ｃにロードしサイズ分画した。ピーク分画は高度に純粋なｈｉｓタグＮＳ５Ｂを含有し、前記をプールして−80℃で使用まで保存した。
実施例３に記載したプロトコルによりＧＢＶ−ＢおよびＨＣＶ１ａポリメラーゼを用いてプローブ（ii）の力価を測定した。図11および12は、それぞれＧＢＶ−ＢポリメラーゼおよびＮＳ５Ｂ（H77c, 1a）ポリメラーゼで観察された力価曲線を示している。ＧＢＶ−Ｂ酵素に対するプローブ（ii）のＫd値は1.8μＭ（不完全曲線および0.21のｒb値を用いて得られた概算値）であり、この関係の薄いポリメラーゼと本プローブとの弱い結合を示した。対照的に、ＨＣＶ１ａポリメラーゼに対するＫdは18ｎＭで、１ａ遺伝子型酵素はＨＣＶ１ｂ遺伝子型のポリメラーゼと同じ親和性でプローブ（ii）と結合することを示した。一連の化合物に対するＫd値は、これら２つのＨＣＶ（遺伝子型１ａおよび１ｂ）ポリメラーゼを用い実施例4に記載したアッセイ形式で決定した。
本実験の結果を表２に示す。これらの結果は本阻害剤シリーズに対するＫd値は、遺伝子型が関連する２つのＨＣＶ酵素について同じ範囲内に存在することを示している。



表１
２つの異なるＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼに対する化合物のＫdおよびＩＣ50値の比較
Figure 0004646514
表２
２つのＨＣＶ遺伝子型由来ＮＳ５Ｂポリメラーゼに対する化合物のＫd値の比較
Figure 0004646514
考察
ＨＣＶＮＳ５ＢポリメラーゼはＨＣＶ複製阻害剤の探索において第一の目標である。ＨＣＶＮＳ５Ｂの酵素活性は種々のＲＮＡ基質を用いてin vitroで調べられてきた（Behrens et al. 1996; およびその後の多くの文献）。別個のＨＣＶポリメラーゼ調製物は，多様なＲＮＡ基質により多様な生成物形成効率を示す。概算によれば、通常の精製リコンビナントＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼ調製物のごくわずかな部分（＜１％）だけがＲＮＡ基質と相互作用し、プロセッシング可能なＲＮＡ生成物の合成を再構成することができる（S.S. Carroll et al. 2000, Biochemistry, 39:8243-8249）。さらにまた、精製されたリコンビナントＮＳ５Ｂポリメラーゼの活性は個々のＲＮＡ基質について顕著に変動する（前記は、おそらくこれらの基質により生産能力をもつ複製能保持複合体を形成することができるＮＳ５Ｂの性能を反映する特性である）（W. Zhong et al. 2000, J. Virol. 74:9134-9143）。
未だ最適ではなく、さらに性状があまり明らかではないＲＮＡ基質を用いるＨＣＶポリメラーゼアッセイの限界を克服するために、本出願人らは、ＲＮＡの存在に左右されないＨＣＶポリメラーゼの特異的阻害剤のためのアッセイを開発した。本アッセイは、ＨＣＶポリメラーゼに特異的で性状が明らかな阻害剤を用いることを基本にしている。上記に提示した実施例では、阻害剤は蛍光性分で標識され、本プローブとＮＳ５Ｂとの相互作用は蛍光偏光によって測定および定量される。しかしながら、前記相互作用はまた、放射能標識または阻害剤に付加した他の一般的な標識を使用し、さらに前記標識プローブと適切なタグを付加したＨＣＶポリメラーゼとの結合を判定する一般的な技術を用いることによって測定することもできる。フルオレセイン標識プローブの結合平衡は、実施例３で結合プローブの割合がＨＣＶポリメラーゼの量とともに増大するので極めて明瞭である。平衡状態にある成分を含むＨＣＶポリメラーゼアッセイは、ＲＮＡ基質を用いる従来のアッセイより有利である。なぜならば、生産能力をもつ複合体中でＲＮＡ基質と安定に結合する活性なＨＣＶポリメラーゼは容易に解離することはないからである（S.S. Carroll et al. 2000, Biochemistry 39:8243-8249; W. Zhong et al. 2000, J. Virol. 74:9134-9143; L. Tomei et al. 2000, J. Gen. Virol. 81:759-767）。これらの標識プローブがＨＣＶポリメラーゼから容易に解離するとはいっても、それらプローブは低ｎＭ解離定数でＨＣＶポリメラーゼから容易に解離し、強力で特異的な阻害剤の検出に必要な感度を提供する。本アッセイ形式は、実施例４で示したように96ウェル（またはより高密度）のプレートでのスクリーニングに応用することができる。この高処理スクリーニング形式の特に有利な点は、本アッセイが特に簡便な非放射能形式で提供する極めて安定なシグナルおよび小さなウェル間の変動である。本アッセイにより、ＨＣＶポリメラーゼに特異的な阻害剤が特定され、さらに潜在能力が容易に判定された（図３および４）。
本明細書に開示した直接結合アッセイは酵素によるＨＣＶポリメラーゼアッセイの限界を克服した。ＮＳ５Ｂのin vitroＲＮＡポリメラーゼ活性はイオン強度に極めて感受性が高く、さらに100ｍＭを越えるＫＣｌおよびＮａＣｌ濃度は反応を抑制する（V. Lohman et al. 1998, Virology 249:108-118; G. Luo et al. 2000, J. Virol. 74:851-63）。したがって、種々の塩濃度で阻害剤の潜在能力を決定する能力は、この標準的な酵素反応の限界によって制限される。本発明の直接結合アッセイは、実施例６に示したように塩濃度またはｐＨレベルの調節に適応させやすい。ＮＳ５Ｂ標的に対する特異的阻害剤の能力および反応は、酵素によるＲＮＡ重合反応実験では適切でない条件下（例えば二価陽イオンの非存在下）でも容易に判定することができる。
これまでのＨＣＶポリメラーゼ酵素アッセイは、阻害剤の能力の代表的な測定値としてＩＣ50を提供する。ＲＮＡまたはＮＴＰのどちらかと競合する阻害剤の場合、ＩＣ50値はアッセイ中の基質濃度と比例し、前記の成分の濃度にしたがって変化するであろう。本明細書に開示したアッセイは、基質の濃度に関係なく一定の条件下で阻害剤の能力（Ｋd値によって表される）の直接測定を可能にする。Ｎ末端タグＨｉｓ−ＮＳ５ＢΔ２１またはＣ末端タグＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓのどちらかを用いる酵素反応では、顕著に異なるＩＣ50値が、同一の条件下でアッセイした同一の化合物について得られる。Ｈｉｓ−ＮＳ５ＢΔ２１またはＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓポリメラーゼはプライマー／鋳型ＲＮＡ基質に対し異なる親和性を有し、それにより同一の化合物について異なるＩＣ50をもたらす（実施例７、表１）。本発明で開示した直接結合アッセイによって実証された主要な利点は、前記相違は、個々の阻害剤が２つの異なるＨＣＶポリメラーゼにより示す比較的類似するＫd値によって調整されるということである。
本発明で開示した直接結合アッセイはまたＨＣＶポリメラーゼ酵素に特異的であることが示された。プローブ（ii）に対して少なくとも100倍高いＫdがＢＧＶ−Ｂポリメラーゼについて得られた実施例８は、このポリメラーゼと前記プローブの弱い結合およびＨＣＶポリメラーゼとの特異的な結合を明示した。さらに、実施例８はまた、異なっているが臨床的に関連性を有する２つのＨＣＶ遺伝子型から得られたポリメラーゼは同様な親和性でプローブと結合することを示した。本発明の阻害剤直接結合アッセイは、これまでに記載されてきた通常のＨＣＶポリメラーゼ酵素アッセイの多くの制限を緩和する。本出願人らは、競合プローブとして性状の明らかな阻害剤の使用が、ＮＳ５Ｂポリメラーゼに特異的な阻害剤の探索においてどのように多くの改良および利点を提供するかを立証した。本アッセイはＨＣＶ関連疾患の治療を目的とする候補薬剤の特定および性状決定を加速することができる。
図１は、はＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓポリメラーゼによるプローブ（ｉ）の力価測定を示す。蛍光異方性分析のための標準的な条件は実施例３に記載されている。前記ポリメラーゼに対するプローブ（ｉ）のＫd決定値は12.6ｎＭである。 図２は、は蛍光偏光アッセイに対するＺ’の評価を示す。標準条件を用いて、一連の陽性および陰性コントロールを96ウェルプレートによる変更アッセイで調べ、両コントロールの標準偏差（ＳＤ）を決定した。続いてＺ’値を以下の計算から得た： Ｚ’＝１−（陽性コントロールの３ＳＤ＋陰性コントロールの３ＳＤ） 平均陽性コントロール−平均陰性コントロール 図３は、蛍光偏光アッセイを用いた化合物ＡおよびＢのＫd決定を示す。96ウェルプレートによる偏光アッセイ（実施例４参照）の標準的条件を使用して化合物のＫd値を決定した。化合物ＡおよびＢについて得られたＫd値はそれぞれ31および41ｎＭで、Ｑb／Ｑf値は0.67および0.72である。 図４は、蛍光偏光アッセイを用いた化合物ＣおよびＤのＫd決定を示す。96ウェルプレートによる偏光アッセイ（実施例４参照）の標準的条件を使用して化合物のいくつかのＫd値を決定した。化合物ＣおよびＤについて得られたＫd値はそれぞれ231ｎＭおよび1.08μＭで、Ｑb／Ｑf値は0.74および0.66である。 図５は、ＮａＣｌ濃度（30mM）中でＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓを用いた場合のプローブ（ｉ）の力価測定を示す。蛍光異方性分析の標準的条件は実施例３に記載されている。このポリメラーゼについて得られたＫd値は15.3nM（30mMのNaCl）である。 図６は、ＮａＣｌ濃度（100mM）中でＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓを用いた場合のプローブ（ｉ）の力価測定を示す。蛍光異方性分析の標準的条件は実施例３に記載されている。このポリメラーゼについて得られたＫd値は39nM（100ｍMのNaCl）である。 図７は、ＮａＣｌ濃度（150ｍM）中でＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓを用いた場合のプローブ（ｉ）の力価測定を示す。蛍光異方性分析の標準的条件は実施例３に記載されている。このポリメラーゼについて得られたＫd値は78nM（150ｍMのNaCl）である。 図８は、ＮａＣｌ濃度（200ｍM）中でＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓを用いた場合のプローブ（ｉ）の力価測定を示す。蛍光異方性分析の標準的条件は実施例３に記載されている。このポリメラーゼについて得られたＫd値は122nM（200ｍMのNaCl）である。 図９は、リン酸緩衝液（pH6.5）でのＮＳ５ＢΔ２１−Ｈｉｓポリメラーゼによるプローブ（ｉ）の力価測定を示す。蛍光異方性分析の標準的な条件は実施例３に記載されている。前記ポリメラーゼに対するプローブ（ｉ）のＫd値はこれらの条件下で33ｎＭである。 図１０は、はＨｉｓ−ＮＳ５ＢΔ２１ポリメラーゼによるプローブ（ｉ）の力価測定を示す。蛍光異方性分析のための標準的な条件は実施例３に記載されている。N末端にタグを有するこのポリメラーゼに対するプローブ（ｉ）のＫd値は18.1ｎＭである。 図１１は、はＧＢＶ−ＢΔ２３−Ｈｉｓポリメラーゼによるプローブ（ii）の力価測定を示す。蛍光異方性分析のための標準的な条件は実施例３に記載されている。関係の薄い前記ポリメラーゼに対するプローブ（ii）のＫd値は1.79μMである（不完全曲線により概算した値）。 図１２は、Ｈｉｓ−ＮＳ５ＢΔ２１（Ｈ７７ｃ，ＨＣＶ遺伝子型１ａ）ポリメラーゼによるプローブ（ii）の力価測定を示す。蛍光異方性分析のための標準的な条件は実施例３に記載されている。このＨＣＶ遺伝子型１ａポリメラーゼに対するプローブ（ii）のＫd値は18.2nMである。
配列表
Figure 0004646514
Figure 0004646514
Figure 0004646514
Figure 0004646514
Figure 0004646514
Figure 0004646514
Figure 0004646514
Figure 0004646514
Figure 0004646514

Claims (19)

  1. ＨＣＶポリメラーゼ阻害剤を特定する方法であって、
    ａ）ＨＣＶポリメラーゼを、ＨＣＶポリメラーゼと結合することができるプローブと接触させ、前記ポリメラーゼと結合した前記プローブを含む複合体を形成する工程であって、前記プローブは前記ポリメラーゼの阻害剤で置き換えられることができる工程、
    ｂ）前記複合体中の前記プローブから放出されるシグナルを測定して基線レベルを確立する工程、
    ｃ）工程ａ）の生成物とテスト化合物をインキュベートする工程、
    ｄ）前記複合体のシグナルを測定する工程、及び
    ｅ）工程ｄ）のシグナルと工程ｂ）のシグナルとを比較する工程であって、それによって、前記シグナルの変動が前記テスト化合物と前記ポリメラーゼとの結合を示す工程
    を含み、
    前記プローブが下記式（IIa）：
    Figure 0004646514
    （式中、
    Ｒ1は（Ｃ5-6）シクロアルキルであり；
    Ｒ2はフェニルまたＨｅｔであり、両者は場合によってＲ20で置換され；
    Ｒ20は以下のように定義され：
    −ハロゲン、ＮＯ2、シアノ、アジド、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ1-6）アルキルまたはＣ（＝ＮＨ）ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキルから選択される１つから４つの置換基；または
    −下記のａ）−ｌ）から選択される１つから４つの置換基：
    ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
    ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｃ）ＯＣＯＲ105（ここでＲ105は、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｄ）ＳＲ108、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、Ｒ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔまたは複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121およびＲ122は、それぞれＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｌ）アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記の全ては場合によってＲ150で置換される）；
    Ｒ150は以下であり：
    −ハロゲン、ＮＯ2、シアノまたはアジドから選択される１つから３つの置換基；または
    −下記のａ）−ｋ）から選択される１つから３つの置換基：
    ａ）（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）；
    ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；
    ｄ）ＳＲ108、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
    ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、Ｒ112はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキル、ＣＯＯＲ115またはＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルである）であるか；またはＲ111およびＲ112は両者が一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
    ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記（Ｃ1-6）アルキルおよび（Ｃ3-7）シクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；
    ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
    ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121は、Ｈ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記アルキルおよびシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
    ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルおよびシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；
    ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記（Ｃ1-6）アルキルおよび（Ｃ3-7）シクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）；さらに
    ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキルおよび複素環は場合によってＲ160で置換される）；
    ここで、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義され：ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2、ＳＯ2Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；または両Ｒ162は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する）；
    Ｒ11は、ＯＰＯ3Ｈ、ＮＯ2、シアノ、アジド、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ1-6）アルキルまたはＣ（＝ＮＨ）ＮＨＣＯ（Ｃ1-6）アルキルであるか；または下記のａ）−ｌ）であり：
    ａ）Ｒ150aで置換された（Ｃ1-6）アルキル、ハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｃ3-7スピロシクロアルキル（場合によって１つまたは２つのへテロ原子を含む）、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ150で置換され、ここでＲ150aはＲ150と同じであるが、ただしハロゲンではない）、ＯＲ150b、ＣＯＯＲ150b、Ｎ（Ｒ150b）2（ここでＲ150bはＨまたはＣ1-6アルキルである）；
    ｂ）ＯＲ104（ここでＲ104は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｃ）ＯＣＯＲ105（ここでＲ105は、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｄ）ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｎ（Ｒ108）2またはＳＯ2Ｎ（Ｒ108）Ｃ（Ｏ）Ｒ108（ここで各Ｒ108は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、または両Ｒ108は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｅ）ＮＲ111Ｒ112（ここでＲ111は、Ｒ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、さらにＲ112はＨ、ＣＮ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ111はＨであり、さらにＲ112はＳＯ2Ｒ115（ここでＲ115は（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔである）であるか、またはＲ111およびＲ112は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｆ）ＮＲ116ＣＯＲ117（ここでＲ116およびＲ117は各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｇ）ＮＲ118ＣＯＮＲ119Ｒ120（ここでＲ118、Ｒ119およびＲ120は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ118はＲ119と共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成するか；またはＲ119およびＲ120は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し；前記アルキル、シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールもしくは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ、または複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｈ）ＮＲ121ＣＯＣＯＲ122（ここでＲ121およびＲ122は、各々Ｈ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、６または１０員アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であるか；またはＲ122はＯＲ123またはＮ（Ｒ124）2であり、ここでＲ123および各Ｒ124は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、または（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ124はＯＨまたはＯ（Ｃ1-6アルキル）であるか、または両Ｒ124は一緒に共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｉ）ＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｊ）ＣＯＯＲ128（ここでＲ128は、ＨまたはＲ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）；
    ｋ）ＣＯＮＲ129Ｒ130（ここでＲ129およびＲ130は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであるか、またはＲ129およびＲ130の両方は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員飽和複素環を形成し、前記アルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリール、（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔおよび複素環は場合によってＲ150で置換される）；
    ｌ）アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔ（前記の全ては場合によってＲ150で置換される））
    によって表される化合物、その塩、鏡像体、ジアステレオ異性体または互変異性体から選択され、
    前記化合物が場合によって、
    ａ）任意の適切な位置で放射性同位元素により標識されるか；
    ｂ）Ｒ1を除く任意の適切な位置で適切なリンカーにより検出可能な成分に連結されるか；または
    ｃ）Ｒ1を除く任意の適切な位置で親和性タグに連結される
    ことを特徴とする方法。
  2. 前記プローブが、請求項１に示される式（IIa）（式中、
    Ｒ1は（Ｃ5-6）シクロアルキルであり；
    Ｒ2はフェニルまたＨｅｔであり；
    Ｒ11はＣＯＲ127（ここでＲ127はＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）又はＣＯＯＲ128（ここでＲ128は、ＨまたはＲ150で置換された（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールまたは（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔであり、前記（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル、アリール、Ｈｅｔ、（Ｃ1-6アルキル）アリールおよび（Ｃ1-6アルキル）Ｈｅｔは場合によってＲ150で置換される）であり；
    Ｒ150は（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）又はＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）であり；
    ここで、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義される：ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2、ＳＯ2Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；または両Ｒ162は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する））
    を有する化合物又はその塩であり、
    前記化合物が場合によって、
    ａ）任意の適切な位置で放射性同位元素により標識されるか；
    ｂ）Ｒ1を除く任意の適切な位置で適切なリンカーにより検出可能な成分に連結されるか；または
    ｃ）Ｒ1を除く任意の適切な位置で親和性タグに連結される
    ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  3. 前記プローブが下記式（IIa’）：
    Figure 0004646514
    （式中、
    Ｒ1は（Ｃ5-6）シクロアルキルであり；
    Ｒ2はフェニルまたＨｅｔであり、両者は場合によってＲ20で置換され（Ｒ20は請求項１で定義されたとおりである）；
    Ｒ150は（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）又はＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）であり；
    ここで、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義される：ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2、ＳＯ2Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；または両Ｒ162は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する））
    を有する化合物又はその塩であり、
    前記化合物が場合によって、
    ａ）任意の適切な位置で放射性同位元素により標識されるか；
    ｂ）Ｒ1を除く任意の適切な位置で適切なリンカーにより検出可能な成分に連結されるか；または
    ｃ）Ｒ1を除く任意の適切な位置で親和性タグに連結される
    ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  4. 前記プローブが下記式：
    Figure 0004646514
    （式中、
    Ｒ150は（Ｃ1-6）アルキルまたはハロアルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキル、（Ｃ2-6）アルケニル、（Ｃ2-8）アルキニル、（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキル（前記の全ては場合によってＲ160で置換される）又はＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）であり；
    ここで、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義される：ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＲ161、ＯＲ161、Ｎ（Ｒ162）2、ＳＯ2Ｎ（Ｒ162）2またはＣＯＮ（Ｒ162）2（ここでＲ161および各Ｒ162は、それぞれ別個にＨ、（Ｃ1-6）アルキル、（Ｃ3-7）シクロアルキルまたは（Ｃ1-6）アルキル−（Ｃ3-7）シクロアルキルであるか；または両Ｒ162は一緒に共有結合しさらにそれらが結合している窒素と共有結合して５、６または７員の飽和複素環を形成する））
    を有する化合物又はその塩であり、
    前記化合物が場合によって、
    ａ）任意の適切な位置で放射性同位元素により標識されるか；
    ｂ）任意の適切な位置で適切なリンカーにより検出可能な成分に連結されるか；または ｃ）任意の適切な位置で親和性タグに連結される
    ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  5. 前記プローブが下記式：
    Figure 0004646514
    （式中、
    Ｒ150はＯＲ104（ここでＲ104はＨ、（Ｃ1-6）アルキルまたは（Ｃ3-7）シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは場合によってＲ160で置換される）であり；
    ここで、Ｒ160は以下から選択される１つまたは２つの置換基と定義される：ハロゲン、ＣＮ、Ｃ1-6アルキル、ハロアルキル、ＣＯＯＨ、ＯＨ、ＮＨ2、ＳＯ2ＮＨ2またはＣＯＮＨ2である）
    の化合物又はその塩であり、
    前記化合物が場合によって、
    ａ）フェニル中の任意の適切な位置で放射性同位元素により標識されるか；
    ｂ）フェニル基中の任意の適切な位置で適切なリンカーにより検出可能な成分に連結されるか；または
    ｃ）フェニル基中の任意の適切な位置で親和性タグに連結される
    ことを特徴とする、請求項４に記載の方法。
  6. 前記検出可能な標識が、蛍光標識、放射性原子、化学発光標識および発色標識から成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
  7. 前記標識が蛍光標識または化学発光標識である、請求項６に記載の方法。
  8. 前記蛍光標識が、フルオレセイン、オレゴングリーン、ダンシル、ローダミン、テキサスレッド、フィコエリスリンおよびＥｕ3+から成る群から選択される、請求項７に記載の方法。
  9. 前記蛍光標識がフルオレセインである、請求項１に記載の方法。
  10. 前記検出可能標識が蛍光レポーター／クエンチャー対である、請求項１に記載の方法。
  11. 前記レポーター／クエンチャー対が、ＥＤＡＮＳ／ＤＡＢＣＹＬ、トリプトファン／２，４−ジニトロフェニル、トリプトファン／ＤＡＮＳＹＬ、７−メトキシクマリン／２，４−ジニトロフェニル、２−アミノベンゾイル／２，４−ジニトロフェニルおよび２−アミノベンゾイル／３−ニトロチロシンから成る群から選択される、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記放射性原子が3Ｈ、14Ｃおよび125Ｉから選択される、請求項６に記載の方法。
  13. 前記プローブが下記から選択される請求項２に記載の方法：
    Figure 0004646514
    Figure 0004646514
    Figure 0004646514
  14. ＨＣＶポリメラーゼの阻害剤を特定するアッセイの開発における、請求項２に記載の式IIaのプローブの使用。
  15. ＨＣＶポリメラーゼを阻害する化合物を特定する方法であって、
    ａ）前記ＨＣＶポリメラーゼを請求項１３に記載のプローブと接触させて、前記ポリメラーゼと結合した前記プローブを含む複合体を形成する工程、
    ｂ）前記複合体のシグナルを測定して基線レベルを確立する工程、
    ｃ）工程ａ）の生成物とテスト化合物をインキュベートする工程、
    ｄ）前記複合体のシグナルを測定する工程、及び
    ｅ）工程ｄ）のシグナルと工程ｂ）のシグナルとを比較する工程であって、それによって、前記シグナルの変動は前記テスト化合物が前記ポリメラーゼを阻害することを示す工程、
    を含むことを特徴とする方法。
  16. 以下の工程を含むＨＣＶポリメラーゼを阻害することができる化合物を特定する方法： ｆ）請求項１５に記載の工程（ａ）から（ｅ）を高処理スクリーニングで繰返す工程。
  17. ＨＣＶポリメラーゼが、ＮＳ５Ｂ、ＮＳ５ＢΔ２１およびＮＳ５ＢΔ５７並びにＨＣＶポリメラーゼ活性を有するそれらの類似体から成る群から選択される、請求項１５に記載の方法。
  18. 前記ＨＣＶポリメラーゼがＨＣＶ−１ａまたはＨＣＶ−１ｂ遺伝子型株から得られ、前記が場合によってそのＮまたはＣ末端のどちらかにヒスチジンタグを有する請求項１５に記載の方法。
  19. ＨＣＶポリメラーゼと結合する潜在能力を有する化合物をテストするキットであって、前記キットが、請求項２に記載の式（IIa）のプローブおよび、前記ポリメラーゼと結合するテスト化合物を特定するために前記プローブを使用する態様についての指示を含むことを特徴とする前記キット。
JP2003519506A 2001-08-07 2002-08-05 Ｈｃｖポリメラーゼ阻害剤を特定する競合的結合アッセイ Expired - Fee Related JP4646514B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31027201P 2001-08-07 2001-08-07
PCT/CA2002/001214 WO2003014377A2 (en) 2001-08-07 2002-08-05 Competitive binding assay for identifying inhibitors of hcv polymerase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2005500055A JP2005500055A (ja) 2005-01-06
JP4646514B2 true JP4646514B2 (ja) 2011-03-09

Family

ID=23201740

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2003519506A Expired - Fee Related JP4646514B2 (ja) 2001-08-07 2002-08-05 Ｈｃｖポリメラーゼ阻害剤を特定する競合的結合アッセイ

Country Status (13)

Country Link
US (1) US7294457B2 (ja)
EP (1) EP1417493B1 (ja)
JP (1) JP4646514B2 (ja)
AT (1) ATE475095T1 (ja)
CA (1) CA2450142C (ja)
DE (1) DE60237089D1 (ja)
DK (1) DK1417493T3 (ja)
ES (1) ES2347954T3 (ja)
HU (1) HUP0400670A3 (ja)
IL (1) IL159981A0 (ja)
MX (1) MXPA04001127A (ja)
NZ (2) NZ554933A (ja)
WO (1) WO2003014377A2 (ja)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2335700A1 (en) * 2001-07-25 2011-06-22 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C virus polymerase inhibitors with a heterobicylic structure
GB0215293D0 (en) 2002-07-03 2002-08-14 Rega Foundation Viral inhibitors
US7098231B2 (en) * 2003-01-22 2006-08-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
US7223785B2 (en) * 2003-01-22 2007-05-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
US7592352B2 (en) 2003-05-06 2009-09-22 Smithkline Beecham Corporation Substituted thieno and furo-pyridines
US7511145B2 (en) 2003-08-01 2009-03-31 Genelabs Technologies, Inc. Bicyclic heteroaryl derivatives
USRE47600E1 (en) 2003-11-10 2019-09-10 STATS ChipPAC Pte. Ltd. Semiconductor device and method of forming electrical interconnect with stress relief void
US8216930B2 (en) 2006-12-14 2012-07-10 Stats Chippac, Ltd. Solder joint flip chip interconnection having relief structure
WO2005048311A2 (en) 2003-11-10 2005-05-26 Chippac, Inc. Bump-on-lead flip chip interconnection
US8574959B2 (en) 2003-11-10 2013-11-05 Stats Chippac, Ltd. Semiconductor device and method of forming bump-on-lead interconnection
US9029196B2 (en) 2003-11-10 2015-05-12 Stats Chippac, Ltd. Semiconductor device and method of self-confinement of conductive bump material during reflow without solder mask
US8026128B2 (en) 2004-11-10 2011-09-27 Stats Chippac, Ltd. Semiconductor device and method of self-confinement of conductive bump material during reflow without solder mask
US8129841B2 (en) 2006-12-14 2012-03-06 Stats Chippac, Ltd. Solder joint flip chip interconnection
EP1688420A4 (en) * 2003-11-19 2008-10-22 Japan Tobacco Inc 5-5 LOW-CONDENSED HETEROCYCLIC COMPOUND AND THEIR USE AS HCV POLYMERASE INHIBITOR
PL1706403T3 (pl) * 2003-12-22 2012-07-31 K U Leuven Res & Development Związki imidazo[4,5-c]pirydynowe i sposoby leczenia przeciwwirusowego
KR20120091276A (ko) * 2004-02-20 2012-08-17 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 바이러스 폴리머라제 억제제
US20070049593A1 (en) 2004-02-24 2007-03-01 Japan Tobacco Inc. Tetracyclic fused heterocyclic compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
ATE428714T1 (de) * 2004-02-24 2009-05-15 Japan Tobacco Inc Kondensierte heterotetracyclische verbindungen und deren verwendung als hcv-polymerase-inhibitor
BRPI0511834A (pt) * 2004-07-14 2008-01-08 Ptc Therapeutics Inc métodos por tratar hepatite c
DE602005013580D1 (de) * 2004-12-21 2009-05-07 Leuven K U Res & Dev Imidazoä4,5-cüpyridinverbindung und verfahren zur antiviralen behandlung
US8703795B2 (en) 2005-03-02 2014-04-22 Fibrogen, Inc. Thienopyridine compounds, and methods of use thereof
JP2008535225A (ja) 2005-03-25 2008-08-28 スタッツ チップパック リミテッド 基板上に狭い配線部分を有するフリップチップ配線
US8841779B2 (en) 2005-03-25 2014-09-23 Stats Chippac, Ltd. Semiconductor device and method of forming high routing density BOL BONL and BONP interconnect sites on substrate
CA2618682C (en) * 2005-08-12 2011-06-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
EP2044028B1 (en) 2006-01-27 2012-05-16 Fibrogen, Inc. Cyanoisoquinoline compounds that stabilize hypoxia inducible factor (hif)
WO2007115315A2 (en) * 2006-04-04 2007-10-11 Fibrogen, Inc. Pyrrolo- and thiazolo-pyridine compounds as hif modulators
TWI360549B (en) * 2006-07-07 2012-03-21 Gilead Sciences Inc Novel pyridazine compound and use thereof
UA99466C2 (en) 2007-07-06 2012-08-27 Гилиад Сайенсиз, Инк. Crystalline pyridazine compound
WO2010056767A1 (en) 2008-11-14 2010-05-20 Fibrogen, Inc. Thiochromene derivatives as hip hydroxylase inhibitors
RU2015114772A (ru) 2012-09-21 2016-11-10 Санофи Производные амида бензоимидазол-карбоновой кислоты в качестве модуляторов рецептора apj
AU2014209319B2 (en) 2013-01-24 2018-04-19 Fibrogen, Inc. Crystalline forms of {[1-cyano-5-(4-chlorophenoxy)-4-hydroxy-isoquinoline-3-carbonyl]-amino}-acetic acid
CR20180413A (es) 2016-02-05 2018-12-04 Denali Therapeutics Inc Inhibidores de la proteína quinasa 1 que interactua con el receptor
WO2018107060A1 (en) 2016-12-09 2018-06-14 Denali Therapeutics Inc. Compounds, compositions and methods
TW202334089A (zh) 2021-11-02 2023-09-01 美商夫雷爾醫療公司 Ｐｐａｒｇ反向激動劑及其用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001069995A (ja) * 1999-07-02 2001-03-21 Japan Tobacco Inc 結晶構造解析に適したｈｃｖポリメラーゼ及びその利用方法
WO2001047883A1 (en) * 1999-12-27 2001-07-05 Japan Tobacco Inc. Fused-ring compounds and use thereof as drugs

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2334161A1 (en) * 1998-07-20 2000-01-27 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Use of nucleic acid molecules as antiviral agents
US6770666B2 (en) * 1999-12-27 2004-08-03 Japan Tobacco Inc. Fused-ring compounds and use thereof as drugs
US6448281B1 (en) * 2000-07-06 2002-09-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Viral polymerase inhibitors
JP2004520839A (ja) 2001-03-08 2004-07-15 ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド Ｈｃｖのｒｎａ依存性ｒｎａポリメラーゼ（ｎｓ５ｂ）の阻害剤を同定するための分析法
WO2003007945A1 (en) 2001-07-20 2003-01-30 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Viral polymerase inhibitors
EP2335700A1 (en) 2001-07-25 2011-06-22 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C virus polymerase inhibitors with a heterobicylic structure

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001069995A (ja) * 1999-07-02 2001-03-21 Japan Tobacco Inc 結晶構造解析に適したｈｃｖポリメラーゼ及びその利用方法
WO2001047883A1 (en) * 1999-12-27 2001-07-05 Japan Tobacco Inc. Fused-ring compounds and use thereof as drugs

Also Published As

Publication number Publication date
NZ554933A (en) 2009-01-31
HUP0400670A3 (en) 2006-06-28
IL159981A0 (en) 2004-06-20
JP2005500055A (ja) 2005-01-06
EP1417493B1 (en) 2010-07-21
US20030108862A1 (en) 2003-06-12
ATE475095T1 (de) 2010-08-15
ES2347954T3 (es) 2010-11-26
DK1417493T3 (da) 2010-10-04
NZ531488A (en) 2008-06-30
WO2003014377A2 (en) 2003-02-20
MXPA04001127A (es) 2004-07-08
DE60237089D1 (de) 2010-09-02
US7294457B2 (en) 2007-11-13
CA2450142A1 (en) 2003-02-20
EP1417493A2 (en) 2004-05-12
CA2450142C (en) 2009-12-22
HUP0400670A2 (en) 2006-03-28
WO2003014377A3 (en) 2003-12-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4646514B2 (ja) Ｈｃｖポリメラーゼ阻害剤を特定する競合的結合アッセイ
EP2224013B1 (en) Methods for the determination of telomerase activity using click chemistry
US6825176B2 (en) E2 displacement assay for identifying inhibitors of HPV
US9150922B2 (en) Cyanine compounds and their application as quenching compounds
JP2007183284A (ja) 蛍光検出法および試薬
JP2003529372A (ja) ユビキチンリガーゼアッセイ
US20040110126A1 (en) Hcv polymerase inhibitor assay
Berdichevsky et al. A novel high throughput screening assay for HCV NS3 serine protease inhibitors
EP2118658A2 (en) Improved homogeneous luminescence bioassay
US6770451B2 (en) Screening for enzyme inhibitors
US7537910B2 (en) Lactamase amplification substrate
JP2021526530A (ja) Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の阻害剤
AU2007229369B2 (en) Competitive binding assay for identifying inhibitors of HCV polymerase
AU2002322243A1 (en) Competitive binding assay for identifying inhibitors of HCV polymerase
Belon et al. Hepatitis C virus NS3 helicase inhibitors
AU2002244566B2 (en) Assay for identifying inhibitors of the RNA dependent RNA polymerase (NS5B) of HCV
O'Shea et al. Homogeneous time-resolved fluorescence assays for the detection of activity and inhibition of phosphatase enzymes employing phosphorescently labeled peptide substrates
AU2002244566A1 (en) Assay for identifying inhibitors of the RNA dependent RNA polymerase (NS5B) of HCV

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20050325

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20080121

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20080421

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20080428

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20080722

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20090622

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20090917

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20090929

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20091222

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20100510

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20100804

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20100811

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20101012

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20101108

A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20101207

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131217

Year of fee payment: 3

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees