JP4646491B2

JP4646491B2 - イソフラボンおよび多価不飽和脂肪酸の組合せを含む、骨粗鬆症を予防するための組成物

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Publication number: JP4646491B2
Application number: JP2002573015A
Authority: JP
Inventors: クラメール，シュテファニー; リッゲール，クリストフ; シュラッハター，マンフレート; ヴェーバー，ペーター
Original assignee: DSM IP Assets BV
Current assignee: DSM IP Assets BV
Priority date: 2001-03-15
Filing date: 2002-03-11
Publication date: 2011-03-09
Anticipated expiration: 2022-03-11
Also published as: WO2002074308A1; EP1854462A1; US20040082523A1; JP2004532829A; BRPI0208103B1; BRPI0208103B8; ES2289097T3; BR0208103A; US7635692B2; KR100875800B1; CA2440261C; DE60221367T2; CA2440261A1; EP1852115A1; MXPA03008137A; CN100389765C; CN1501799A; DE60221367D1; EP1370257A1; ATE367810T1

Description

本発明は、濃縮物の形態、または強化食品、強化飼料および飲料のような食餌組成物の形態、または錠剤、カプセル剤に充填される顆粒剤、もしくは発泡処方物のような異なる生薬処方物の形態の、骨粗鬆症の予防のための組成物に関する。

骨は、大部分は、コラーゲンおよびリン酸カルシウムでできている。コラーゲンは、軟らかい骨組みを与え、リン酸カルシウムは、強さを加え、この骨組みを硬化させる無機質である。コラーゲンとカルシウムの組合せは、骨を、応力に抗するよう強く、しかも柔軟にさせる。

生涯を通じて、古い骨は再吸収され、新たな骨が形成されている。子供時代および１０代の間は、新たな骨は、古い骨が除去されるより速く加えられる。しかし、ほぼ２５〜３０才の年齢を過ぎると、骨の再吸収は、徐々に、骨形成を上回り始めて、骨損失へと導き、それは、最終的には骨粗鬆症を生じる。

骨損失は、男性よりも、女性において際立っている。女性では、骨損失は、エストロゲン欠乏のために、閉経期直後の１０年間に加速されるが、骨粗鬆症は、両性に対して年齢にも関連し、骨質量の低下と、骨組織の微細構造上の劣化とを招く全身性骨格疾患であって、骨の脆弱化を生じ、骨折しやくすなる。上記と同じ閉経期の状態は、雌の愛玩動物、たとえばイヌまたはネコに、その去勢後に認められて、エストロゲン欠乏による骨損失へと導く。

本発明者らは、イソフラボンをＬＣ−多価不飽和脂肪酸、いわゆるＰＵＦＡと組み合わせて含有する組成物が、骨粗鬆症を予防し、骨形成を刺激する有意な相加的かつ相乗的効果を有することをここに見出した。この効果は、該組成物がビタミンＤおよびビタミンＫを規定量で含有するならば、さらに増強される。ゲニステイン、ＰＵＦＡ、および規定量のビタミンＫおよびビタミンＤの組み合わされた摂取は、驚異的にも、ＯＶＸラットモデルにおけるエストロゲン欠乏によって誘導される骨無機質密度の損失を完全に予防する。

イソフラボンは、３−フェニルベンゾ−γ−ピロンである。天然に見出されるようなイソフラボンは、概してヒドロキシルまたはメトキシで置換されている。本発明の範囲内の好適なイソフラボンは、ゲニステインであって、それは、式（Ｉ）：

で示される４’，５，７−トリヒドロキシイソフラボンであり、そのグリコシドの形態のゲニスチンとしても、たとえばダイズ（たとえばSoya hispida）に見出される。多価不飽和脂肪酸は、それ自体は公知である（E.A. Trautwein, Eur. J. Lipid Sci. Technol., 103, 2001, p.45-55）。

本発明は、請求項に定義されている。本発明は、具体的には、骨粗鬆症の予防に有用な組成物であって、

（ａ）少なくとも一種類のイソフラボンおよび／またはイソフラボングリコシド、好ましくはゲニステインおよび／またはゲニスチンと；

（ｂ）少なくとも一種類の多価不飽和脂肪酸と
を含み、そのため、場合により、

（ｃ）ビタミンＤおよび／もしくは１種類もしくはそれ以上のその誘導体、ならびに／またはビタミンＫおよび／もしくは１種類もしくはそれ以上のその誘導体と；

（ｄ）必要に応じた量、好ましくは該組成物の総重量を基準として０．１〜２０重量％の範囲内の量のアジュバントまたは賦形剤と
をさらに含むことを特徴とする、組成物を意味する。

前記組成物は、濃縮物、たとえばその成分の単純な粉末混合物の形態で、またはたとえば成分の水性スラリーを噴霧乾燥することによって、もしくは混合物を押出しすることによって得られるような、顆粒剤の形態で、または粉末を慣用の打錠の方法および機械を用いて錠剤に圧縮することによって得られる錠剤の形態で、またはハードもしくはソフトゼラチンカプセルに充填されたペースト剤として、あるいは発泡処方物として与えられ得る。本発明は、さらに、該組成物を製造する方法も意味する。

本発明は、さらに、食餌組成物または生薬形態の調製品を製造するための濃縮物の形態での該組成物の使用に関し、そのため、該食餌組成物は、好ましくは、強化食品、強化飼料、飲料であり、該生薬形態は、好ましくは、錠剤、ハードまたはソフトゼラチンカプセルに充填された顆粒剤もしくはペースト剤、あるいは発泡処方物である。

本発明は、さらに、好ましくは強化食品、強化飼料もしくは飲料である食餌組成物、あるいは好ましくは錠剤、ハードまたはソフトゼラチンカプセルに充填された顆粒剤もしくはペースト剤、または発泡処方物である生薬処方物であって、上記に定義されたとおりの成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）をそれぞれ含有する、該食餌組成物および該生薬処方物に関する。

本発明は、さらに、たとえばヒト、ならびにネコおよびイヌを包含するが、これらに限定されない愛玩動物のような、哺乳動物における骨粗鬆症を予防し、骨形成を刺激するための該組成物の使用に関する。

本発明は、さらに、上記に定義されたとおりの哺乳動物における骨粗鬆症を予防し、骨形成を刺激するための方法であって、該組成物の有効量を哺乳動物に投与することを含む方法に関する。

異なるイソフラボン、たとえばダイゼイン、グリシテインまたはゲニステインが公知である。ゲニステインは、たとえばダイズ中の、そのグリコシドの形態でのゲニスチンとして見出される。本発明によれば、イソフラボン自体、またはイソフラボンを生じるイソフラボン誘導体、たとえばグリコシドを、活性成分［成分（ａ）］として該組成物に用いてよい。

好ましくは、該組成物は、１日消費が１〜５００mg、好ましくは５〜１００mgの範囲内になるような濃度のイソフラボンおよび／またはその誘導体を含有する。

多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）は、それ自体は公知である。好適なＰＵＦＡは、１６〜２４個の炭素原子、好ましくは１８〜２４個の炭素原子、より好ましくは１８、２０または２２個の炭素原子を有し、複数の不飽和炭素−炭素二重結合を含むものである。

そのような多価不飽和脂肪酸の例は、公知のｎ−３ＰＵＦＡである。好ましいのは、たとえば、リノール酸、たとえば（cis, cis, cis−）９，１２，１５−オクタデカトリエン酸、リノレン酸、たとえば（cis, cis, cis−）６，９，１２−オクタデカトリエン酸のような、１８個の炭素原子を有するＰＵＦＡ、さらにエイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸、たとえば（cis−）５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸、（cis−）５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸および／または（cis−）４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸などである。

好ましくは、該組成物は、ＰＵＦＡを、１日消費が５０〜８，０００mg、好ましくは５００〜２，０００mgの範囲内になるような濃度で含有する。好ましくは、該組成物は、イソフラボンまたはイソフラボン誘導体［成分（ａ）］１mgあたり約５〜２００mg、好ましくは約２０〜５０mgの多価不飽和脂肪酸［成分（ｂ）］を含有する。

ビタミンＤの活性代謝物（カルシトリオール）は、カルシウムの腸管吸収を増大させることが公知であり、新たな骨の正常な無機質化に重要である。ビタミンＤ、好ましくはビタミンＤ₃の存在は、本発明による組成物の効果を有意に向上させる。好ましくは、該組成物は、ビタミンＤ、より好ましくはビタミンＤ₃を、それぞれビタミンＤおよびビタミンＤ₃について知られている濃度で含有する。この濃度は、消費が、１日あたり、それぞれ５〜５０μgのビタミンＤおよびビタミンＤ₃の範囲内にある濃度を生じるようにしなければならない。

ビタミンＫの古典的な役割は、抗出血因子としてのそれである。しかし、ビタミンＫは、選ばれたタンパク質とも作用し合い、骨形成に役割を果たすこれらのタンパク質に対する補助因子である。ビタミンＫ、好ましくはビタミンＫ₁の存在は、本発明による組成物の効果を向上させる。好ましくは、該組成物は、ビタミンＫを、ビタミンＫについてそれ自体は公知である濃度で含有する。ビタミンＫおよびビタミンＫ₁の濃度は、それぞれ、消費が、１日あたり、０．０５０〜１０mg、好ましくは０．１〜１．０mgの範囲内にある濃度を生じるようにしなければならない。

本明細書に用いられる用語「ビタミンＤ」は、ビタミンＤおよびビタミンＤ₃の双方ばかりでなく、それぞれの誘導体も意味する。用語「ビタミンＫ」は、ビタミンＫおよびビタミンＫ₁の双方、および対応するそれぞれの誘導体を意味する。

佐剤は、場合により加えてもよい。適切なアジュバントは、たとえば、澱粉、澱粉誘導体、セルロース、セルロース誘導体［たとえばヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）］、およびポリオールである。好ましくは、該濃縮物には、佐剤を全く加えない。

本発明の組成物は、公知のいかなる方法によって製造してもよい。成分を、慣用の方法によって、単純に混合してよい。しかし、該濃縮物は、好ましくは、散剤の形態で、または顆粒剤の形態で製造する。好ましいのは、流動層造粒、高剪断造粒、押出し、噴霧乾燥または湿式造粒である。

本発明の組成物を噴霧乾燥によって得るには、すべての成分の水性スラリーを調製するのが好都合である。スラリーは、好ましくは、約１０〜７０重量％、より好ましくは約２５〜５０重量％の固体含量を有する。次いで、スラリーを、それ自体は公知である方式で噴霧乾燥する。本発明の濃縮物を流動層造粒によって得るには、噴霧手段を取り付けた流動層乾燥装置を含み、当業者には公知である方式で操作される、公知の流動層造粒装置を用いるのが好都合である。

該濃縮物は、さらに、強化食品、強化飼料または飲料のような食餌組成物の製造に用いてもよい。そのような強化食品、強化飼料または飲料は、文献に公知であり、当業者に公知である。

該濃縮物は、さらに、慣用の打錠方法および機械を用いて錠剤へと圧縮してもよい。場合により、散剤または顆粒剤は、さらに、錠剤へと圧縮する前に、ステアリン酸の金属塩、ステアリン酸、水素化植物油（Sterotex）、モノステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリル、タルク、トウモロコシ澱粉、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムおよび糖エステルを包含するが、これらに限定されない、慣用の潤滑剤と混合してもよい。さらに可能であるのは、散剤または顆粒剤を、そのような潤滑剤の混合物と混合し、次いで錠剤へと圧縮することである。

ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤に充填されるペースト剤、および発泡処方物は、慣用の方式で製造し、それによって、これらの単回単位は、表に示されたのと同じ用量を含有する。

実験のセクション
以下の実験セクションでは、二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＸＡ）を用いて、骨無機質密度を測定した。

オステオカルシンは、骨形成についての生化学的マーカーであって、もっぱら、骨芽細胞、すなわち骨形成細胞で分泌される骨特異性タンパク質である。血清オステオカルシンを、骨形成についてのマーカーとして測定した。

デオキシピリジノリン（ＤＰＤ）架橋の排出は、骨吸収に高度に特異的なマーカーを与える。ＤＰＤ架橋の排出を、骨吸収についてのマーカーとして測定した。値は、当技術分野において公知であるとおり、クレアチニン測定によって、尿中濃度に補正しなければならない。

実験の設定では、卵巣切除ラット骨粗鬆症（ＯＶＸ）モデルを用いて、工夫してデータを得た。このモデルは、骨粗鬆症へと導く、閉経後の女性、または去勢後の雌の愛玩動物に見出されるとおりのエストロゲン欠乏を模倣する。健全な卵巣を有する擬似手術群を、対照としてした。試験群は、それぞれ、１０〜１２匹の動物で構成した。用いた飼料は、たとえばゲニステインのようなイソフラボンを含まなかった。試験化合物は、表１に示したとおりの様々な組合せで、飼料混合物によって投与した。ラットでは、１日あたり１５mg/kgBWのゲニステイン投与量により、伝統的な食餌による日本人に見出される血漿ゲニステインレベル、すなわち２８０nMに匹敵する血漿ゲニステインレベルとなる。２０μg／kg飼料の量のビタミンＫ₁の投与は、ビタミンＫ₁の推定１日必要量である、約１μg/kgBWの１日投与量に相当する。ビタミンＤ₃の量は、５００IU／kg飼料であって、推定１日必要量である、２５IU/kgBWの１日投与量に相当する。強化のために、表１に示したとおりの、飼料中１％のＰＵＦＡ強化に相当する、ＰＵＦＡ（５％ROPUFA "30" n-3 Food Oil）を飼料に加えた。骨無機質密度、オステオカルシンおよびデオキシピリジノリンを、介入の８４日後に測定した。

ＯＶＸラットの大腿骨における骨無機質密度（ＢＭＤ）測定
群１の擬似手術された動物に比して、高または低ビタミンＫおよびＤ食餌による群２または３の卵巣切除動物は、期待されたとおりのＢＭＤの有意な減少を示した。高ビタミンＫおよびＤの飼料による群２は、低ビタミンＫおよびＤ飼料による群３の動物より有意に良好にはＢＭＤを保持しなかった。

ＰＵＦＡで補充した低ビタミンＫおよびＤ飼料による群４の動物は、低ビタミンＫおよびＤ飼料による群３に比して、ＢＭＤの有意な保持を示した。しかし、この群は、ＰＵＦＡ補充なしの高ビタミンＫおよびＤ飼料による群２より、有意に良好に機能しなかった。同時に、群４のＢＭＤは、擬似手術された動物のＢＭＤと有意には異ならなかった。同じ結果が、ゲニステイン補充した低ビタミンＫおよびＤ飼料による群５で得られた。ＰＵＦＡおよびゲニステインを組み合わせて補充した高ビタミンＫおよびＤ飼料による群６は、群２および３に比して有意に向上したＢＭＤを示した。対照群１に比して、ＢＭＤの有意な差は全く見出されなかった。結果を表２に示す。ｎ−３ＰＵＦＡまたはゲニステインの補充は、対照値までＢＭＤを向上させたが、ビタミンＤおよびビタミンＫ補充の効果を有意に超えることはなかった。ビタミンＫおよびＤをｎ−３ＰＵＦＡおよびゲニステインと組み合わせての補充により、ＢＭＤは最大に回復し、それは、ビタミンＤおよびＫ補充の効果を有意に超え、擬似手術された対照動物におけるＢＭＤを僅かに超えさえした。

ＯＶＸラットにおける血清オステオカルシン（骨形成マーカー）
エストロゲン欠乏は、より高レベルの血清オステオカルシンを生じる骨代謝回転の増大を招く。対照群に比して、群２および３は、有意に上昇したオステオカルシンレベルを示したが、低ビタミンＫおよびＤ飼料によった群３の血清オステオカルシンレベルも、やはり、高ビタミンＫおよびＤレベルによる群２の血清オステオカルシンレベルより有意に高かった。低ビタミンＫおよびＤレベルにｎ−３ＰＵＦＡまたはゲニステインを補充したところ、すなわち群４および５では、対照値までオステオカルシンレベルが低下した。ｎ−３ＰＵＦＡとゲニステインとの間には、効果における有意差は皆無であった。ｎ−３ＰＵＦＡおよびゲニステインを含有する高ビタミンＫおよびＤ飼料による群６は、最も優れた結果、すなわちオステオカルシンレベルに対する最も優れた効果を示し、群４より有意に良好であった。結果を表３に示す。

ＯＶＸラットにおけるデオキシピリジノリン（骨吸収マーカー）の測定
エストロゲン欠乏は、デオキシピリジノリン（ＤＰＤ）排出の有意な増大を生じて、それは、低ビタミンＫおよびＤ飼料による群では、高ビタミンＫおよびＤ含量の飼料によるそれに比して有意に高かった。ｎ−３ＰＵＦＡ補充の効果は、高ビタミンＫおよびＤ飼料のそれに匹敵した。低ビタミンＫおよびＤレベルのゲニステイン含有飼料（群５）は、ＤＰＤ排出を対照群の値まで回復した。群６は、群５に比して、有意なそれ以上の向上を示さなかった。結果を表４に示すが、これは、試験された化合物のうちでは、ゲニステインが対照ＤＰＤ排出値を回復するのに最も効果的な化合物であり（群５）、一方、飼料へのｎ−３ＰＵＦＡの添加（群４）は、高ビタミンＫおよびＤ食餌によって得られた効果（群２）を超えなかった。

上に示した実験データから、ゲニステイン、ｎ−３ＰＵＦＡ、および多量のビタミンＫおよびＤを組み合わせた摂取は、驚異的にも、エストロゲン欠乏が誘導する骨無機質密度の損失を十分に予防すると結論付けることができる。

Claims

下記の成分：
（ａ）少なくとも一種類のイソフラボン、一種類のイソフラボングリコシド、またはそれらの混合物；
（ｂ）少なくとも一種類の多価不飽和脂肪酸；ならびに
（ｃ）場合により、ビタミンＤ、ビタミンＤ誘導体、ビタミンＫ、ビタミンＫ誘導体、およびそれらの混合物からなる群より選択されるビタミン；
からなる骨粗鬆症の予防に有用な組成物。
成分（ａ）が、ダイゼイン、ダイゼイングリコシド、グリシテイン、グリシテイングリコシド、ゲニステインおよびゲニステイングリコシドからなる群より選択される、請求項１記載の組成物。
成分（ａ）がゲニステイン、ゲニスチンまたはそれらの混合物である、請求項１または２記載の組成物。
成分（ｂ）が、１６〜２４個の炭素原子を有し、複数の不飽和炭素−炭素二重結合を含む、多価不飽和脂肪酸である、請求項１〜３のいずれか一項記載の組成物。
１８〜２２個の炭素原子を有する多価不飽和脂肪酸による、請求項４記載の組成物。
１８、２０または２２個の炭素原子を有する多価不飽和脂肪酸による、請求項４記載の組成物。
多価不飽和脂肪酸がｎ−３多価不飽和脂肪酸である、請求項４記載の組成物。
成分（ｂ）が、リノール酸、リノレン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸からなる群より選択される、請求項１〜６のいずれか一項記載の組成物。
成分（ｂ）が、（cis, cis, cis-）９，１２，１５−オクタデカトリエン酸、（cis, cis, cis-）６，９，１２−オクタデカトリエン酸、（cis-）５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸、（cis-）５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸および（cis-）４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸からなる群より選択される、請求項１〜８のいずれか一項記載の組成物。
成分（ａ）１ｍｇあたり５〜２００ｍｇの成分（ｂ）を含む、請求項１〜９のいずれか一項記載の組成物。
成分（ａ）１ｍｇあたり２０〜５０ｍｇの成分（ｂ）を含む、請求項１〜９のいずれか一項記載の組成物。
成分（ｃ）が、ビタミンＤ３、ビタミンＫ１およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１〜１１のいずれか一項記載の組成物。
該組成物の総重量を基準として０．１〜２０重量％の範囲内の量の佐剤または賦形剤が添加された、請求項１〜１２のいずれか一項記載の組成物。
成分（ｄ）が、澱粉、澱粉誘導体、セルロース、セルロース誘導体、ポリオールおよびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１３記載の組成物。
セルロース誘導体がヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）またはそれらの混合物である、請求項１４記載の組成物。
濃縮物、顆粒剤、錠剤、ハードまたはソフトゼラチンカプセルに充填されたペースト剤、および発泡処方物からなる群より選択される形態で与えられる、請求項１〜１５のいずれか一項記載の組成物。
成分の単純な粉末混合物である濃縮物の形態である、請求項１６記載の組成物。
流動層造粒、高剪断造粒、押出し、噴霧乾燥または湿式造粒によって得られ得る、請求項１６または１７記載の散剤もしくは顆粒剤の形態の組成物。
食餌組成物または生薬処方物を製造するための請求項１〜１８のいずれか一項記載の組成物の使用。
強化食品、強化飼料、飲料、錠剤、顆粒剤、ハードまたはソフトゼラチンカプセルに充填されたペースト剤、および発泡処方物からなる群より選択される該組成物もしくは該処方物を製造するための請求項１〜１８のいずれか一項記載の組成物の使用。
請求項１〜１８のいずれか一項記載の組成物を含む食餌組成物。
強化食品、強化飼料または飲料の形態である、請求項２１記載の食餌組成物。
錠剤、顆粒剤、ハードもしくはソフトゼラチンカプセルに充填されたペースト剤、または発泡処方物の形態の、請求項１〜１８のいずれか一項記載の組成物を含有する生薬処方物。
哺乳動物における骨粗鬆症を予防し、骨形成を刺激するための予防用の、請求項１〜２３のいずれか一項記載の組成物。
哺乳動物における骨粗鬆症の治療又は予防、および骨形成に用いるための組成物であって、下記の成分：
（ａ）１日あたり５〜１００ｍｇの範囲内にある消費を生じるような濃度であるゲニステイン；
（ｂ）リノール酸、リノレン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸からなる群より選択される多価不飽和脂肪酸；
（ｃ）ビタミンＤ、ビタミンＤ３およびそれらの混合物からなる群より選択されるビタミンであって、１日あたり５〜５０μｇの範囲内にある消費を生じるような濃度であるビタミン；
（ｄ）ビタミンＫ、ビタミンＫ1およびそれらの混合物からなる群より選択されるビタミンであって、１日あたり０．０５０〜１０ｍｇの範囲内にある消費を生じるような濃度であるビタミン；ならびに
（ｅ）場合により、該組成物の総重量を基準として０．１〜２０重量％の範囲内の量の佐剤または賦形剤
からなる組成物。