JP4615966B2 - 蛋白質の検出方法 - Google Patents
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Description
(1)アルカリ性溶液が注入された耐アルカリ性の袋の中に医療器具を入れ、この袋を恒温水槽に浸漬して蛋白質を抽出する工程と、前記蛋白質抽工程で得られた抽出液と、クーマシーブリリアントブルーG−250とを接触させる工程と、前記工程で得られた接触液の吸光度を測定する工程と、
を有することを特徴とする蛋白質の検出方法、
(2)前記アルカリ性溶液が、水酸化ナトリウム及び/又は水酸化カリウムの溶液であることを特徴とする(1)に記載の蛋白質の検出方法、
(3)前記アルカリ性溶液の濃度が、0.05〜2Nであることを特徴とする前記(1)又は(2)に記載の蛋白質の検出方法、
(4)前記蛋白質抽出工程が、25〜90℃において行われることを特徴とする前記(1)〜(3)のいずれかに記載の蛋白質の検出方法、
に関する。
2mg/mlの牛血清アルブミン溶液〔和光純薬工業株式会社製〕を、表1に示す各濃度となるように、0.2Nの水酸化ナトリウム水溶液で希釈し、各希釈液を得た。次いで、95%エタノール50mlに、クーマシーブリリアントブルーG−250を100mg溶解し、この溶液に85%(w/v)の燐酸100mlを加え、更に水を加えて全体量を1lとし、pH1.43(25℃)のクーマシーブリリアントブルーG−250溶液を調製した。このようにして得られたクーマシーブリリアントブルーG−250溶液3ml中に、得られた各希釈液1mlを添加して、25℃で20分間反応させた後、得られた接触液の595nmにおける吸光度を測定した。表1にこの結果を示し、図1に、表1の測定結果から作成した検量線を示す。
1.0Nの水酸化ナトリウム〔和光純薬工業株式会社製〕を蒸留水で希釈し、表2に示す濃度のアルカリ性溶液を調製し、得られたアルカリ性溶液10mlと、ステンレス板(15×50mm)に擬似血液(牛血精製物:アルブミン、ヘモグロビン、フィブリノーゲン、トロンビン)を付着させた洗浄度評価インジケーター〔Pereg社製、商品名:TOSI〕(以下、「TOSI」という。)を、ポリエチレン製の袋(寸法:240×340mm、厚さ:0.04mm、チャック付き)に入れ、この袋を、50℃に保たれた恒温水槽〔TAITEC社製、品番:SM−05R〕に浸漬した。そして、TOSIをアルカリ性溶液中で浸漬振盪を行い、蛋白質の抽出を行った。抽出時間については、表2に示すとおりである。
アルカリ性溶液(0.2N水酸化ナトリウム水溶液)10mlと、TOSIを、ポリエチレン製の袋に入れ、この袋を、各温度(25,30,50,70℃)に保たれた恒温水槽に浸漬した。そして、TOSIをアルカリ性溶液中で30分間浸漬振盪を行い、蛋白質の抽出を行った。
アルカリ性溶液(0.2N水酸化ナトリウム水溶液)10mlと、TOSIを、ポリエチレン製の袋に入れ、この袋を、50℃に保たれた恒温水槽に浸漬し、TOSIをアルカリ性溶液中で30分間浸漬振盪を行い、蛋白質の抽出を行った。こうして蛋白質の抽出を行ったTOSIについて、前記の1回目の抽出条件と同様の条件にて、2回目の抽出を行った。
(洗浄剤)
S1:酵素配合洗浄剤〔株式会社イヌイメデイックス製、商品名:メディポールEX−1〕
S2:酵素、界面活性剤配合洗浄剤〔株式会社イヌイメデイックス株式会社製、商品名:メディポールEX−2〕
S3:アルカリ系界面活性剤配合洗浄剤〔株式会社イヌイメデイックス株式会社製、商品名:メディポールF〕
S4:アルカリ系界面活性剤非配合洗浄剤〔株式会社イヌイメデイックス株式会社製、商品名:メディポールZT〕
(消毒剤)
D1:アルキルジアミノエチルグリシン15%液〔日本油脂株式会社製、商品名:ニッサンアノン#300〕と蒸留水を、0.3:99.7の重量比で混合したもの
D2:グルコン酸クロルヘキシジン0.2%液〔サラヤ株式会社製、商品名:ヒビスコール〕
D3:ポピドンヨード10%液〔明治製菓株式会社製、商品名:イソジン液〕
D4:グルタルアルデヒド3.5%液〔ジョンソン&ジョンソン株式会社製、商品名:サイデックスプラス28〕
剪刀(全長約15cm)に、人血0.5mlを塗布した後、表7に示すように、様々な条件のもとで洗浄を行った。洗浄後の剪刀と、アルカリ性溶液(0.2N水酸化ナトリウム水溶液)10mlを、ポリエチレン製の袋に入れ、この袋を、50℃に保たれた恒温水槽に浸漬し、剪刀をアルカリ性溶液中で30分間浸漬振盪を行い、蛋白質(人血)の抽出を行った。こうして得られた抽出液1mlを、上述したように、クーマシーブリリアントブルーG−250溶液3ml中に添加して、25℃で20分間反応させた後、得られた接触液の595nmにおける吸光度測定を行った。この吸光度測定の結果から得られた蛋白質量を表7に示す。
処理1:血液凝固防止剤〔株式会社イヌイメデイックス製、商品名:メディポールPS〕を噴霧する。
処理2:酵素系界面活性剤配合洗浄剤〔株式会社イヌイメデイックス製、メディポールEX−1〕と水道水を、0.5:99.5の重量比で混合した洗浄液を、超音波洗浄機〔シャープ株式会社製、品番:MU−624〕に入れ、40℃とされた洗浄液中に剪刀を浸漬し、10分間超音波洗浄を行う。
表7に示す洗浄条件4は、人血0.5mlを塗布した剪刀を処理1、処理2を行わずに、洗浄前に付着している蛋白質を定量したものである。
吸引嘴管(全長約12cm、先端径約3mm)の内腔部分に、人血0.5mlを塗布し、12時間放置後、表8に示すように、様々な条件のもとで洗浄を行った。洗浄処理後の吸引嘴管と、アルカリ性溶液(0.2N水酸化ナトリウム水溶液)10mlを、ポリエチレン製の袋に入れ、この袋を、50℃に保たれた恒温水槽に浸漬し、吸引嘴管をアルカリ性溶液中で30分間浸漬振盪を行い、蛋白質の抽出を行った。こうして得られた抽出液1mlを、上述したように、クーマシーブリリアントブルーG−250溶液3ml中に添加して、25℃で20分間反応させた後、得られた接触液の595nmにおける吸光度測定を行い、この吸光度測定の結果から得られた蛋白質量を表8に示す。
処理3:酵素系界面活性剤配合洗浄剤〔株式会社イヌイメデイックス製、商品名:メディポールEX−1〕と水道水を、0.5:99.5の重量比で混合した洗浄液を40℃とし、この中で、30分間浸漬する。
処理4:アルカリ系洗浄剤〔株式会社イヌイメデイックス製、メディポールF〕と水道水を、0.5:99.5の重量比で混合した洗浄液を、超音波洗浄機に入れ、40℃とされた洗浄液中に吸引嘴管を浸漬し、10分間超音波洗浄を行う。
実際に、手術で使用した止血鉗子(全長約14cm)を、表9に示すように、様々な条件のもとで洗浄を行った。洗浄処理後の止血鉗子と、アルカリ性溶液(0.2N水酸化ナトリウム水溶液)10mlを、ポリエチレン製の袋に入れ、この袋を、50℃に保たれた恒温水槽に浸漬し、止血鉗子をアルカリ性溶液中で30分間浸漬振盪を行い、蛋白質の抽出を行った。こうして得られた抽出液1mlを、上述したように、クーマシーブリリアントブルーG−250溶液3ml中に添加して、25℃で20分間反応させた後、得られた接触液の595nmにおける吸光度測定を行い、この吸光度測定の結果から得られた蛋白質量を表9に示す。
処理5:血液凝固防止剤〔株式会社イヌイメデイックス製、商品名:メディポールPS〕を噴霧する。
処理6:ブラッシング
処理7:アルカリ系洗浄剤〔株式会社イヌイメデイックス製、メディポールF〕と水道水を、0.5:99.5の重量比で混合した洗浄液を、超音波洗浄機に入れ、40℃とされた洗浄液中に吸引嘴管を浸漬し、15分間超音波洗浄を行う。
Claims (4)
- アルカリ性溶液が注入された耐アルカリ性の袋の中に医療器具を入れ、この袋を恒温水槽に浸漬して蛋白質を抽出する工程と、
前記蛋白質抽出工程で得られた抽出液と、クーマシーブリリアントブルーG−250とを接触させる工程と、
前記工程で得られた接触液の吸光度を測定する工程と、
を有することを特徴とする蛋白質の検出方法。 - 前記アルカリ性溶液が、水酸化ナトリウム及び/又は水酸化カリウムの溶液であることを特徴とする請求項1に記載の蛋白質の検出方法。
- 前記アルカリ性溶液の濃度が、0.05〜2Nであることを特徴とする請求項1又は2に記載の蛋白質の検出方法。
- 前記蛋白質抽出工程が、25〜90℃において行われることを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の蛋白質の検出方法。
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