JP4610345B2 - 医薬品化合物のための改善されたリンカー - Google Patents
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Description
本発明は、新規リンカーを用いて、診断薬もしくは治療薬部分を標的部分に結合させるか、または2つの診断薬もしくは治療薬部分を互いに結合させるか、または1つの診断薬部分を治療薬部分に結合させることにより、診断薬または治療薬として有用な医薬品化合物の半減期を改善するための、新規かつ改善された方法に関する。
癌を検出および治療するための医薬品(例えば診断用イメージング剤、治療薬などとして)の使用はよく知られている。より近年では、癌の検出および/または治療のための部位特異的放射性医薬品の発見が評判を得、そのような化合物の特異性、有効性および有用性を医療専門家がより十分に認識するように成長し続けている。
本発明の典型的な具体的態様にて、診断的使用または治療的使用のための医薬品化合物の半減期を改善するための新規かつ改善された方法、ならびにそのような改善された半減期を示す化合物を提供する。ある具体的態様にて、診断薬または治療薬(例えば医学的に有用な金属イオンまたは放射性核種(金属キレート剤)または光学標識物(optical label)と錯体化することが可能な化学的部分)を本発明のリンカー基またはスペーサー基により標的ペプチドに結合させる。あるいは放射性ハロゲンを、本発明のリンカー基またはスペーサー基により標的ペプチドに結合させる。
M−N−O−P−Q
[式中、
Mは診断薬または治療薬であり、
N−O−Pはリンカーであり、そして
Qは標的部分である]
を有することができる。ある具体的態様にて、Mは金属放射性核種と錯体化するか、またはそうではない形態にて金属キレート剤であることができる。あるいは、Mは金属キレート剤のかわりに、放射性ハロゲンであることがある。
M−N−O−P−M
[式中、Mは上に定義のとおり、診断薬または治療薬であり、N−O−Pは上に定義のとおり、リンカーである]
を有することができる。
次の記載にて、本発明の種々の態様をさらに詳述する。説明のために、具体的な立体配置および詳細を、本発明の徹底的な理解を提供するために説明する。しかし、本発明が具体的な詳説なしで実践することができることはまた当業者に明白であろう。さらによく知られた特徴は、本発明を不明瞭にしないために、省略して単純化することができる。
M−N−O−P−Q
[式中、Mは診断薬または治療薬であり、N−O−Pはリンカーであり、そしてQは標的部分である]
で示される化合物を含む。以下により詳細に説明するように、MおよびQはリンカーのいずれかの端(例えば本発明のコール酸誘導体のアミノ基またはカルボン酸基)にて結合していてもよく、またはMおよびQはともにリンカーの同じ端(例えば本発明のコール酸誘導体リンカーのアミノ基またはカルボン酸基にともに)に結合していてもよい。
M−N−O−P−M
[式中、Mは上に定義のとおり、診断薬または治療薬であり、そしてN−O−Pは上に定義のとおり、リンカーである]
を有することができる。以下により詳細に説明するように、Mはそれぞれ、リンカーのいずれかの端(例えば本発明のコール酸誘導体リンカーのアミノ基またはカルボン酸基)にて結合していてもよく、またはMはともに、リンカーの同じ端(例えばともに、本発明のコール酸誘導体リンカーのアミノ基またはカルボン酸基に結合している)に結合していてもよい。
N−O−P
[式中、N、OおよびPはそれぞれ、明細書を通じて定義される]
を有することができる。
用語「金属キレート剤」は、金属原子との錯体を形成する分子を意味し、ここに、該錯体は生理条件下、安定である。つまり金属が、インビボにてキレート剤骨格と錯体化したままであろう。より詳細には、金属キレート剤は、放射性核種金属と錯体化して生理条件下、安定な金属錯体を形成する分子であり、リンカーN−O−Pとのコンジュゲーションのための少なくとも1つの反応性官能基も有する分子である。金属キレート剤Mは、医学的に有用な金属イオンまたは放射性核種を錯体化させるための当業者に知られている金属キレート剤のいずれかであることができる。金属キレート剤は、金属放射性核種と錯体化してもよく、またはしなくてもよい。さらに金属キレート剤は、例えば金属と錯体化しないが、金属キレート剤とリンカーの間に物理的分離を作り出す単一のアミノ酸(例えばGly)のような任意のスペーサーを含むことができる。
別の具体的態様にて、本発明化合物は、金属放射性核種を結合させる金属キレート剤を用いるかわりに、18F、124I、125I、131I、123I、77Brおよび76Brのような放射性核種を用いたハロゲン化により標識することができる。金属またはハロゲン放射性核種の選択は、所望の治療的適用または診断的適用に基づいて決定されるだろう。
別の具体的態様にて、本発明化合物は、以下により詳細に記載のとおり、x線、磁気共鳴イメージング、超音波、蛍光および他の光学的イメージング法などの技術により化合物の検出を可能にする物質のような他の診断薬部分を包含することができる。診断薬部分の選択は、所望の適用に基づいて決定されるだろう。ある具体的態様にて、本発明化合物は広範囲の非局在化環系および400〜1500nmの範囲での吸収または放出最大値を有する有機発色団または蛍光プローブなどの光学染料のような光標識物とコンジュゲートすることができる。あるいは本発明化合物は、生物発光分子と誘導体化することができる。好ましい範囲の光標識のための吸収最大値は、ヘモグロビンからのシグナルによる干渉を最小化する600〜1000nmの間である。好ましい光吸収標識は、大きなモル吸光係数、例えば>105cm-1M-1を有する一方、蛍光光学染料は高い定量的収率を有するだろう。光学染料の例としては、WO 98/18497、WO 98/18496、WO 98/18495、WO 98/18498、WO 98/53857、WO 96/17628、WO 97/18841、WO 96/23524、WO 98/47538および該文献に引用されている参考文献に記載のものが挙げられるが、これらに限定されない。例えば光標識は、本発明化合物、例えば標的ペプチドまたは診断薬もしくは治療薬部分および本発明のリンカーからなる化合物に直接、共有的に連結することができる。電磁スペクトルの可視光および近赤外領域において光を吸収および放射するいくつかの染料は、それらの生体適合性、高モル吸光係数および/または高蛍光定量収率により、種々の生物医学的適用のために使用されている。造影剤としての染料と関連した高感度の光学モダリティは、核医学のものと同等であり、電離放射線の望ましくない効果なしで器官および組織の視覚化を可能にする。近赤外(NIR)領域において強烈な吸収および放出を伴うシアニン染料は、生物組織がこの領域で光学的に透明であるので特に有用である。例えばNIR領域にて吸収および放出するインドシアニン・グリーンは、心拍出量、肝機能および肝臓血流量をモニターするために使用されており、その官能基化された誘導体は診断目的で生体分子をコンジュゲートさせるために使用されている(R. B. Mujumdar, L. A. Ernst, S. R. Mujumdarら, Cyanine dye labeling reagents: Sulfoindocyanine succinimidyl esters. Bioconjugate Chemistry, 1993, 4(2), 105-111、Linda G. Lee and Sam L. Woo.「N-Heteroaromatic ion and iminium ion substituted cyanine dyes for use as fluorescent labels」, 米国特許番号5,453,505、Eric Hohenschuhら「Light imaging contrast agents」, WO 98/48846、Jonathan Turnerら「Optical diagnostic agents for the diagnosis of neurodegenerative diseases by means of near infra-red radiation」, WO 98/22146、Kai Lichaら「In-vivo diagnostic process by near infrared radiation」, WO 96/17628、Robert A. Snowら, Compounds, WO 98/48838)。種々のイメージング法および試薬は、米国特許6,663,847、6,656,451、6,641,798、6,485,704、6,423,547、6,395,257、6,280,703、6,277,841、6,264,920、6,264,919、6,228,344、6,217,848、6,190,641、6,183,726、6,180,087、6,180,086、6,180,085、6,013,243に記載されており、米国特許出願2003185756、20031656432、2003158127、2003152577、2003143159、2003105300、2003105299、2003072763、2003036538、2003031627、2003017164、2002169107、2002164287および2002156117に刊行されている。
別の具体的態様にて、本発明化合物は以下に詳述するように、抗生剤、ホルモン、酵素、抗体、成長因子のような他の治療薬部分を包含することができる。あるいは本発明化合物は、治療薬部分と組み合わせて投与することができる。治療薬部分の選択は、所望の適用に基づいて決定されるだろう。適切な治療薬部分としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない: 白金化合物(例えばスピロプラチン、シスプラチンおよびカルボプラチン)、メトトレキセート、アドリアマイシン、マイトマイシン、アンサマイトシン、ブレオマイシン、シトシン、アラビノシド、アラビノシルアデニン、メルカプトポリリジン、ビンクリスチン、ブスルファン、クロラムブシル、メルファラン(例えばPAM、a、L−PAMまたはフェニルアラニンマスタード)、メルカプトプリン、ミトタン、プロカルバジン塩酸塩、ダクチノマイシン(アクチノマイシンD)、ダウノルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩、タキソール、マイトマイシン、プリカマイシン(ミトラマイシン)、アミノグルテチミド、リン酸エストラムスチンナトリウム、フルタミド、酢酸ロイプロリド、酢酸メゲストロール、クエン酸タモキシフェン、テストラクトン、トリロスタン、アムサクリン(m−AMSA)、アスパラギナーゼ(L−アスパラギナーゼ)、Erwinaアスパラギナーゼ、エトポシド(VP−16)、インターフェロンα−2a、インターフェロンα−2b、テニポシド(VM−26)、ビンブラスチン硫酸塩(VLB)およびアラビノシルのような抗腫瘍薬; 非経口鉄、ヘミン、ヘマトポルフィリンおよびそれらの誘導体のような血液製剤; ムラミール−ジペプチド、ムラミール−トリペプチドのような生物反応修飾物質; 微生物細胞壁構成成分; リンフォカイン(例えば、リポ多糖類、マクロファージ活性因子のような細菌内毒素); バクテリアのサブユニット(例えばマイコバクテリア、コリネバクテリア); 合成ジペプチドN−アセチル−ムラミル−L−アラニル−I)−イソグルタミン; ケトコナゾール、ナイスタチン、グリセオフルビン、フルシトシン(5−fc)、ミコナゾール、アムホテリシンB、リシンおよびβ−ラクタム抗生剤(例えばスルファゼシン)のような抗真菌薬; 成長ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、エストラジオール、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、酢酸ベタメタゾンおよびリン酸ベタメタゾンナトリウム、リン酸ベタメタゾン二ナトリウム、リン酸ベタメタゾンナトリウム、酢酸コルチゾン、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルニソリド、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン・キューピオネート、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、酢酸プレドニゾロン、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロン・テブタート、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンジアセテート、トリアムシノロンヘキサアセトニドおよび酢酸フルドロコルチゾンのようなホルモン; シアノコバラミン・ネイノイック酸、レチノイドおよびレチノールパルミテートのような誘導体、およびα−トコフェロールのようなビタミン; マンガンスーパーオキシドジスムターゼまたはアルカリ性ホスファターゼのような酵素; アンレキサノクスのような抗アレルギー薬; フェンプロクモンおよびヘパリンのような抗凝固剤; プロプラノロールのような循環薬; グルタチオンのような代謝増強剤; パラ−アミノサリチル酸、イソニアジド、硫酸カプレオマイシン、サイクロセリン、塩酸エタンブトール、エチオナミド、ピラジナミド、リファンピンおよび硫酸ストレプトマイシンのような抗結核薬; アシクロビル、アマンタジンアジドチミジン(AZTまたはジドブジン)、リバビリンおよびビダラビン一水和物(アデニンアラビノシド、ara−A)のような抗ウィルス薬; ジルチアゼム、ニフェジピン、ベラパミル、四硝酸エリトリトール、二硝酸イソソルビド、ニトログリセリン(三硝酸グリセリル)および四硝酸五エリトリトールのような抗狭心症薬; ジフルニサル、イブプロフェン、インドメタシン、メクロフェナメート、メフェナム酸、ナプロキセン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、アスピリンおよびサリチル酸のような抗生剤、抗炎症薬; クロロキン、ヒドロキシクロロキン、メトロニダゾール、キニーネおよびアンチモン酸メグルミンのような抗原虫剤; ペニシラミンのような抗リウマチ薬; パレゴリックのような麻薬; コデイン、ヘロイン、メタドン、モルヒネおよびアヘンのような麻酔剤; デスラノシド、ジギトキシン、ジゴキシン、ジギタリンおよびジギタリスのような強心配糖体; メシル酸アトラクリウム、ガラミン・トリエチオダイド、ヘキサフルオレニウムブロミド、ヨウ化メトクリン、臭化パンクロニウム、スクシニルコリンクロリド(スキサメトニウムクロリド)、塩化ツボクラリンおよび臭化ベクロニウムのような神経筋遮断薬; アモバルビタール、アモバルビタール・ナトリウム、アプロバルビタール、ブタバルビタール・ナトリウム、抱水クロラール、エスクロルビノール、エチナメート、塩酸フルラゼパム、グルテチミド、塩酸メトトリメプラジン、メチプリロン、塩酸ミダゾラム、パラアルデヒド、ペントバルビタール、ペントバルビタール・ナトリウム、フェノバルビタール・ナトリウム、セコバルビタール・ナトリウム、タルブタール、テマゼパムおよびトリアゾラムのような鎮静剤(睡眠薬); 塩酸ブピバカイン、塩酸クロロプロカイン、塩酸エチドカイン、塩酸リドカイン、塩酸メピバカイン、塩酸プロカインおよび塩酸テトラカインのような局部麻酔薬; ならびにドロペリドール、エトミデート、ドロペリドールを伴ったクエン酸フェンタニル、塩酸ケタミン、メトヘキシタール・ナトリウムおよびチオペンタール・ナトリウムのような全身麻酔薬。特定の具体的態様にて、治療は、メラノーマ抗原に結合可能であるモノクローナル抗体のようなモノクローナル抗体であることができる。
本発明の典型的な具体的態様にて、リンカーN−O−Pは少なくとも1つの置換胆汁酸を含む。従ってこのリンカーN−O−Pの具体的態様にて、Nは0(ここに、0は存在しないことを意味する)、アルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、そしてPは0、アルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、ここに、N、OまたはPのうち少なくとも1つは置換胆汁酸である。
(3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸;
(3β,5β,12α)−3−アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸;
(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸;
Lys−(3,6,9)−トリオキサウンデカン−1,11−ジカルボニル−3,7−ジデオキシ−3−アミノコール酸;
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシ−12−オキソコラン−24−酸; および
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシコラン−24−酸。
リンカーN−O−Pに用いることができる他の連結基は、診断薬または治療薬部分を標的ペプチドまたは他の診断薬もしくは治療薬部分に連結させるために機能する一方で、標的ペプチドの標的機能または診断薬もしくは治療薬部分の診断もしくは治療機能のいずれかに悪影響を及ぼさない化学基を含む。適切な他の連結基としては、ペプチド(すなわち一緒に連結したアミノ酸)のみ、非ペプチド基(例えば炭化水素鎖)またはアミノ酸配列と非ペプチドスペーサーの組合せが挙げられる。
LP1: リンカーの少なくとも2つの位置にて同じ求電子剤E1または同じ求核剤Nu1を有するリンカー前駆体、
LP2: 求電子剤E1を有し、リンカーの別の位置にて異なる求電子剤E2を有するリンカー前駆体、
LP3: 求核剤Nu1を有し、リンカーの別の位置にて異なる求核剤Nu2を有するリンカー前駆体、または
LP4: 求電子剤E1で官能基化された1つの末端を有し、求核剤Nu1で官能基化された他の末端を有するリンカー前駆体。
標的部分(すなわち式M−N−O−P−Q中のQ)は、特定の部位への結合親和力または特異的代謝機能を有するいずれかの分子である。標的部分は、本発明化合物を適当な部位に導くか、または反応における化合物に関与し、ここに、所望の診断もしくは治療活性が発生するだろう。典型的な具体的態様にて、標的部分は、特定の部位に結合するリガンドとして機能するペプチド、その同等物、誘導体または類似体であってもよい。別の典型的な具体的態様にて、標的部分は、酵素または酵素に結合する分子であってもよい。別の典型的な具体的態様にて、標的部分は抗生剤であってもよい。
PGlu−His−Trp−W−Tyr−DLys−X−Y−Pro−Z
[式中、
W=Ser、NMeSerまたはThr、
X=Leu、NMeLeu、t−ブチルGly、
Y=Arg、Arg(Et2)、Cit、Lys(イソプロピル)、
Z=Gly−NH2、NHエチル、アザgly−NH2である]
で示されるLHRH類似体である。
グリシンおよびDリジンに連結している本発明のリンカーは、6位にてLHRH類似体に結合することができる。この具体的態様は、式:
PGlu−His−Trp−W−Tyr−DLys(M−N−O−P)−X−Y−Pro−Z
[式中、
W=Ser、NMeSerまたはThr、
X=Leu、NMeLeu、t−ブチルGly、
Y=Arg、Arg(Et2)、Cit、Lys(イソプロピル)、
Z=Gly−NH2、NHエチル、アザgly−NH2、
Mは本明細書に定義の金属キレート剤であり、そして
N−O−Pは本発明のリンカーである]
で示される化合物を含む。
PGlu−His−Trp−W−Tyr−DLys(DOTA−Gly−コール酸誘導体)−X−Y−Pro−Z
[式中、
W=Ser、NMeSerまたはThr、
X=Leu、NMeLeu、t−ブチルGly、
Y=Arg、Arg(Et2)、Cit、Lys(イソプロピル)、
Z=Gly−NH2、NHエチル、アザgly−NH2である]
で示される化合物を含む。
ここに、DOTA−GlyはM(金属キレート剤およびGlyスペーサー)であり、N−O−Pは本発明のリンカー(例えばコール酸誘導体)であり、QはDLys6を含むLHRHおよび上記の他の置換基である。
第1表
1 HPLC法は、HPLC勾配について10分の時間を意味する。
2 HPLC RTは、HPLCにおける化合物の保持時間を意味する。
3 MSは、分子量が質量/単位電荷(m/e)から計算される質量スペクトルを意味する。
4 IC50は、細胞においてヨウ化ボンベシンのGRP受容体への結合を50%阻害するための化合物の濃度を意味する。
本発明の放射性医薬品コンジュゲート中の金属の取り込みは、配位化学の分野で一般に知られている種々の方法により達成することができる。金属が99mTc、診断用イメージングに好ましい放射性核種である場合、テクネチウム錯体を形成するために次の一般的手順を使用することができる。ペプチド−キレート剤コンジュゲート溶液は始めに、水、希釈酸またはエタノールのようなアルコールの水溶液にコンジュゲートを溶解させることにより形成させる。次いで溶液を適宜脱気し、溶解した酸素を除去する。−SH基がペプチドに存在する場合、Acm(アセトアミドメチル)、トリチルのようなチオール保護基または他のチオール保護基を、酸化からチオールを保護するために適宜用いてもよい。チオール保護基は、例えば水酸化ナトリウムのような適切な試薬で除去した後、酢酸のような有機酸(pH6.0〜6.5)で中和する。あるいはチオール保護基は、テクネチウムキレート化の間に系中にて除去することができる。標識工程にて、モリブデンジェネレータから得られた過テクネチウム酸ナトリウムは、十分な量の塩化第一スズのような還元剤とのコンジュゲートの溶液に加えてテクネチウムを還元し、室温にて放置するか、または加熱のいずれかを行う。標識コンジュゲートはクロマトグラフ的に、例えばC-18 Sep Pakカートリッジ[Millipore Corporation, Waters Chromatography Division, 34 Maple Street, Milford, Massachusetts 01757]により、または当業者に知られている方法を用いたHPLCにより、99mTcO4 -およびコロイド状の99mTcO2の混合物から分離することができる。
実施例により詳細に説明するように、本発明の新規リンカーを含む化合物は血清アルブミンへの増大した親和力を示し、これは化合物についての排泄速度を減少させる。従ってこれらの化合物は、本発明のリンカーをもたない化合物よりも長い半減期を示す。驚くべきことに、この特性は、標的ペプチドが本発明のコール酸誘導体リンカーのアミノ基に結合している化合物、および標的ペプチドがコール酸誘導体リンカーのカルボン酸基により結合している化合物の両方により示される。
診断薬および/または治療薬部分(例えば診断的または治療的に有用な金属)で標識される場合、本発明化合物は、診断用イメージング、放射線診断および放射線治療の分野にて確立された手順により、腫瘍などの癌のような疾患を治療および/または検出するために使用することができる[Bushbaum, 1995; Fischmanら, 1993; Schubigerら, 1996; Lowbertzら, 1994; Krenningら, 1994]。
本発明に従って、多くの光学パラメータが用いられ、光学的に標識された本発明化合物を対象に注射した後、インビボ光イメージングにより標的の位置を決定することができる。イメージの製造にて検出される光学パラメータは、透過放射線、吸収、蛍光またはリン光放出、光反射、吸光度振幅または最大値の変化、および弾性散乱線を含むことができる。例えば生物組織は、650〜1000nmの近赤外(NIR)波長帯の光に比較的透過である。NIR放射線は、インビボにて含標的組織をイメージするための本発明化合物の使用を可能にし、数センチメータまで組織を突き抜けることができる。可視光および近赤外光(NIR)の臨床実践における使用は、急速に成長している。電磁スペクトルの可視光、NIRまたは長波長(UV−A、>350nm)領域において吸光または放射する化合物は、光学断層イメージング、内視鏡視覚化および光線療法に潜在的に有用である。
本発明化合物は、MRIに用いるための造影剤を形成させるために、1つ以上の常磁性金属キレート剤と有利にコンジュゲートすることができる。好ましい常磁性金属イオンは、原子番号21〜29、42、44または57〜83を有する。これは、1つの、より好ましくは5つ以上の、不対電子および少なくとも1.7ボーア磁子の磁気モーメントを有する遷移金属またはランタニド系列のイオンを含む。好ましい常磁性金属としては、クロム(III)、マンガン(II)、マンガン(III)、鉄(II)、鉄(III)、コバルト(II)、ニッケル(II)、銅(II)、プラセオジム(III)、ネオジム(III)、サマリウム(III)、ガドリニウム(III)、テルビウム(III)、ジスプロシウム(III)、ホルミウム(III)、エルビウム(III)、ユウロピウム(III)およびイッテルビウム(III)が挙げられるが、これらに限定されない。さらに本発明化合物はまた、1つ以上の超常磁性粒子とコンジュゲートしていてもよい。
超音波が物質を透過するとき、その物質の音響特性は透過速度および物質の密度に依存するだろう。音響特性における変化は、異なる物質(固体、液体、気体)の接合部分においてもっとも顕著であろう。超音波造影剤は、薬剤と周囲の組織間の音響上の相違のため、強烈な音波反射体である。気体含有または気体生成超音波造影剤は、液体(例えば血液)と気体含有または気体生成超音波造影剤間の音響上の相違のために特に有用である。マイクロバブル(microbubble)、マイクロバルーン(microballoon)などを含む超音波造影剤は、その大きさのため、他の検出可能部分よりも注射後、血流中に長時間とどまることができ、従って標的超音波薬剤は、標的を発現し、または含む組織の優れたイメージングを明らかにすることができる。
放射性同位体治療は、標的組織を損傷させるか、または破壊するのに十分な量における放射性標識化合物の投与に関与する。化合物の投与後(例えば静脈内、皮下または腹腔内注射による)、放射性標識医薬品は疾患部位(この場合には標的を発現する腫瘍または他の組織)にて優先的に局在化する。局在化すると、次いで放射性標識化合物は、投与される同位体の放射性崩壊の間に放出されるエネルギーで病的組織を損傷させるか、または破壊する。
1. 疾患部位に放射線を照射するために適当な標的基の選択;
2. 実質的に隣接する正常組織を損傷せずに、その疾患部位を損傷させるために十分なエネルギーを放出する適当な放射性核種の選択; および
3. 疾患部位にて局在化するためのコンジュゲートの能力に悪影響を及ぼさない、標的基と放射性核種の適当な組合せの選択。これは、放射性金属について、キレートを標的基と結合させるリンカーと組み合わさった放射性核種にしっかりと配位し、そして標的組織への吸収を最大限にし、正常非標的組織への吸収を最小限にする化合物の全般的生体内分布に影響するキレート基に関与することが多い。
a. 物理的半減期−これは、放射性金属およびコンジュゲートからの放射線治療構築物の合成および精製、および注射前の有意の放射性崩壊なしで、上記構築物の注射部位への照射を可能にするのに十分に長いものであるべきである。好ましい放射性核種は、約0.5〜8日の間の物理的半減期を有するべきである。
b. 放射性核種からの放出エネルギー−粒子放射体(例えばアルファ線放射体、ベータ線放射体およびオージェ電子放射体)である放射性核種は、短い期間にわたってそれらのエネルギーを堆積させる高エネルギーの粒子を放出し、それにより高く局在化された損傷を生成するので特に有用である。ベータ線放出放射性核種は、これらの同位体からのベータ粒子放出からのエネルギーが5〜約150細胞直径内に堆積されるので、特に好ましい。これらの核種から製造される放射性医薬品は、その局在化部位に比較的近い異常細胞を殺すことが可能であるが、長い距離を移動して骨髄のような隣接した正常組織を損傷することができない。
c. 特異的活性(すなわち放射性核種の質量あたりの放射線)−高特異的活性を有する放射性核種(例えば、ジェネレータ生成90−Y、111−In、177−Lu)が特に好ましい。放射性核種の特異的活性は、放射性核種の生成の方法、それを生成するために使用される特定の標的および問題の同位体の特性により決定される。
本発明化合物についての適切な投与計画は、当業者に知られている。単回または複数回の静脈内または腹腔内注射を含むがこれらに限定されない多くの方法を用いて、化合物を投与することができる。本発明の放射性医薬品について、イメージングを可能にするか、または放射線治療の場合、標的GRP−R結合組織の損傷もしくはアブレーション(ablation)を引き起こすのに十分であるが、実質的な損傷を非標的(正常組織)に引き起こさない量の放射線を投与する。シンチグラフィック・イメージングに必要な量および線量は上述した。放射線治療に必要な量および線量はまた、用いられる同位体のエネルギーおよび半減期、体からの薬剤の摂取および除去の程度ならびに腫瘍の質量に依存し、構築物によって異なる。一般に線量は、約30〜50mCiの単回線量から約3キュリー(Curies)の累積線量の範囲であることができる。
本発明の光学的イメージング化合物は、それのみで、または賦形剤、希釈剤、ラジカル捕捉剤、安定剤およびキャリアのような、当業者に知られている他の構成成分を含む組成物の一部として、患者に投与することができる。光学的イメージング化合物は静脈内または腹腔内のいずれかにて患者に投与することができる。投与される化合物の量は、典型的に患者の体重の約0.01mg/kg〜10.0mg/kgの範囲であろう。
本発明化合物は、選択された診断薬または治療薬部分に依存する種々の方法により製造することができる。本化合物のペプチド部分は、一般に確立されており、ペプチド合成の分野で知られている技術、例えば固相ペプチド合成(SPPS)アプローチによりもっとも利便的に製造することができる。別法のFMOC保護および脱保護の使用は、固相合成に影響を受けやすいので、短いペプチドの製造方法に好ましい。組換えDNA法はタンパク質およびその長いフラグメントを製造するために好ましい。
A. 用いられる略語の定義
次の共通の略語は本明細書を通して用いる。
1,1−ジメチルエトキシカルボニル(BocまたはBoc);
9−フルオレニルメチルオキシカルボニル(Fmoc);
1−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT);
N,N’−ジイソプロピルカルボジイミド(DIC);
N−メチルピロリジノン(NMP);
無水酢酸(Ac2O);
(4,4−ジメチル−2,6−ジオキソシクロヘキサ−1−イリデン)−3−メチルブチル(iv−Dde);
トリフルオロ酢酸(TFA);
試薬B(TFA:水:フェノール:トリイソプロピルシラン、88:5:5:2);
ジイソプロピルエチルアミン(DIEA);
O−(1H−ベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート(HBTU);
O−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート(HATU);
N−ヒドロキシスクシンイミド(NHS);
固相ペプチド合成(SPPS);
ジメチルスルホキシド(DMSO);
ジクロロメタン(DCM);
ジメチルホルムアミド(DMF);
ジメチルアセトアミド(DMA);
イソブチルクロロホルメート(IBCF)
1,4,7,10−テトラアザシクロテトラデカン−1,4,7,10−四酢酸(DOTA);
トリイソプロピルシラン(TIPS);
1,4,7,10−テトラアザシクロテトラデカン−1,4,7,10−四酢酸(DOTA)
(1R)−1−[1,4,7,10−テトラアザ−4,7,10−トリス(カルボキシメチル)シクロドデシル]エタン−1,2−ジカルボン酸(CMDOTA);
ウシ胎仔血清(FBS);
ヒト血清アルブミン(HSA);
ヒト前立腺癌細胞株(PC3);
放射化学的純度(RCP);
高速液体クロマトグラフィー(HPLC)および
磁気共鳴映像法(MRI)。
用いられるFmoc保護アミノ酸は、Nova-Biochem(San Diego, CA, USA)、Advanced Chem Tech(Louisville, KY., USA)、Chem-Impex International(Wood Dale Ill., USA)およびMultiple Peptide Systems(San Diego, CA., USA)から購入した。合成のための他の化学薬品、試薬および吸着剤は、Aldrich Chemical Co.(Milwaukee, WI, USA)およびVWR Scientific Products(Bridgeport, NJ., USA)から入手した。ペプチド合成のための溶媒は、Pharmco Co.(Brookfield CT., USA)から得た。HPLC分析および精製のためのカラムは、Waters Co.(Milford, MA., USA)から得た。商業的に入手可能でないものについての実験的詳説を以下に示す。
ペプチドは、Advanced ChemTech 496 Ω MOS合成装置、Advanced ChemTech 357 FBS合成装置を用いて、および/または手動のペプチド合成により製造した。しかし、用いられる反復脱保護および鎖伸長についてのプロトコールは、すべてについて同じであった。
分析用HPLCは、システム制御、データ収集およびポストラン処理のためにShimadzu-ClassVPソフトウェア・バージョン4.1を用いたShimadzu-LC-10A複式ポンプ勾配分析用LC系を用いて行った。質量スペクトルは、Waters Associates XTerra MS C18カラム(4.6 mm x 50 mm, 5μ粒子, 120Åポア(pore))上へのフローインジェクションまたはインジェクションのいずれかに適合したAgilent Technologies 1100シリーズオートサンプラーを備えたHewlett-Packardシリーズ1100複式ポンプ勾配HPLC系と接続させたHewlett-Packardシリーズ1100 MSD質量分析計により得た。機器は、サンプル寄託について「MSD Anyone」ソフトウェアを用い、機器制御およびデータ収集についてHP Chemstationソフトウェアを用いてHP Kayakワークステーションにより駆動させた。たいていの場合、サンプルは、1mg/mLの濃度におけるサンプル溶液5μLインジェクションを用いた直接的インジェクションにより導入し、構造確認のためのm/eおよびm/z(多価)イオンを得るために陽イオンエレクトロスプレーを用いて分析した。1H-NMRスペクトルは、500 MHzにおけるVarian Innova分光計により得た。13C-NMRスペクトルは、125.73 MHzにおける同じ機器により得た。一般に、残存1H吸収、または13C-NMRの場合には、用いられる溶媒の13C吸収を内部標準として用い、他の場合にはテトラメチルシラン(δ = 0.00 ppm)を用いた。共鳴値はδ単位で得た。微量分析データは、Quantitative Technologies Inc. Whitehouse NJにより得た。分取用HPLCは、システム制御、データ収集、フラクション収集およびポストラン処理のためにShimadzu-ClassVPソフトウェア・バージョン4.3を用いてShimadzu-LC-8A複式ポンプ勾配分取用HPLC系により行った。
Rinkアミド−Novagel HL樹脂(0.6 mmol/g)を固相担体として用いた。
典型的な実験において、最初のアミノ酸を樹脂0.1g(0.06mmol)に充填した。NMP(0.25M溶液)0.960mL中の適当なFmocアミノ酸を樹脂に加えた後、N−ヒドロキシベンゾトリアゾール(NMP中0.5M)0.48mLを加え、反応ブロック(自動化ペプチド合成の場合)または個々の反応容器(手動ペプチド合成の場合)を約2分間振盪した。上記混合物に、ジイソプロピルカルボジイミド(NMP中0.5M)0.48mLを加え、反応混合物を常温にて4時間振盪した。次いで反応ブロックまたは個々の反応容器を、陽圧の乾燥窒素を用いることにより反応物をパージした。
反応ブロックの各ウェルをNMP1.2mLで充填し、ブロックを5分間振盪した。溶液を陽圧の窒素雰囲気下、排出した。この手順を3回繰り返した。個々の容器を用いた手動合成の場合に、適当な容積のNMPで同じ手順を用いた。
Fmoc保護アミノ酸を含む樹脂をDMF(v/v)中の20%ピペリジン1.5mLで処理し、反応ブロックまたは個々の手動合成容器を15分間振盪した。溶液を樹脂から排出した。この手順をもう一度繰り返し、上記洗浄手順を用いて樹脂を洗浄した。
樹脂に結合したペプチドリンカー構築物のN末端アミノ基を脱保護し、樹脂を洗浄した。所望のリガンドおよびHBTUの0.25M NMP溶液を製造し、2倍当量のDIEAで処理した。活性化リガンドの得られた溶液を樹脂1.972mL(0.48mmol)に加え、反応混合物を常温にて24〜30時間振盪した。溶液を排出し、樹脂を洗浄した。樹脂の最終洗浄をジクロロメタン1.5mL(3X)で行った。
試薬Bの溶液2mL(88:5:5:2−TFA:フェノール:水:TIPS)を樹脂に加え、反応ブロックまたは個々の容器を常温にて4.5時間振盪した。脱保護したペプチドを含む得られた溶液をバイアルに排出した。この手順を試薬B1mLでさらに2回繰り返した。Genevac HT-12シリーズII遠心濃縮器を用いて、集めたろ液を減圧濃縮した。次いで各バイアルにおける残渣をジエチルエーテル2mLでトリチュレーションし、上清をデカンテーションした。この手順を2回繰り返し、ペプチドを無色固体として得た。粗製のペプチドを水/アセトニトリルに溶解し、Waters XTerra MS C18カラム(50 mm x 19 mm, 5ミクロン粒子サイズ, 120Åポアサイズ)またはWaters-YMC C18 ODSカラム(250 mm x 30 mm内径, 10ミクロン粒子サイズ, 120Åポアサイズ)のいずれかを用いて精製した。生成物のフラクションを集め、HPLCにより分析した。>95%純度のフラクションを集め、凍結乾燥によりペプチドを単離した。
分取用HPLC(Waters XTerraカラム)についての条件:
溶離速度: 50 mL/分
検出: UV, λ = 220 nm
溶離液A: 0.1%水性TFA; 溶媒B: アセトニトリル(0.1%TFA)
HPLC分析についての条件:
カラム: Waters XTerra(Waters Co..; 4.6 x 50 mm; MS C18; 5ミクロン粒子, 120Åポア)
溶離速度: 3 mL/分; 検出: UV, λ = 220 nm.
溶離液A: 0.1%水性TFA; 溶媒B: アセトニトリル(0.1%TFA)
4−[[(3β,5β,12α)−23−[1,1−ジメチルエタン−1−(オキシカルボニル)]カルボキシ−12−ヒドロキシ−24−ノルコラン−3−イル]アミノ]−4−オキソブタン酸N−ヒドロキシスクシンイミジルエステル(化合物A−OSu)の合成
デオキシコール酸をR. P. Bonar-Lawら(J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 2245, 1990)に記載のコール酸のエステル化についての手順に従い、対応するt−ブチルエステル1に変換した。化合物1をP. L. Anelliら(Synth. Commun. 1998, 28, 109-117)により開発されたワンポットMitsunobu-Staudinger手順を適用して3β−アミノ誘導体2に変換し、3β−アミノデオキシコール酸メチルを製造した。
ウシNεB29−[4−[[(3β,5β,12α−23−カルボキシ−12−ヒドロキシ−24−ノルコラン−3−イル]アミノ]−4−オキソブタノイル]インスリン(化合物B)の合成
Naithani V.K.&Gattner H.-G.: Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 349, 373-384, 1968に従い、NαA1,NαA2−ジシトラコニル−インスリン(ウシ)を製造した。NαA1,NαA2−ジシトラコニル−インスリン14μmolのジメチルホルムアミド24mL溶液に、ジメチルホルムアミド1.2mL中のトリエチルアミン92.7μmolを加えた。ジメチルホルムアミド1mL中の化合物A−OSu79μmolを加え、反応混合物を室温にて30分間反応させた。反応混合物を1M酢酸で酸性化し、1M酢酸中のSephadex G-25(2x70 cm)でクロマトグラフィーした。タンパク質ピークフラクションを集め、凍結乾燥した。ギ酸中pH3.5、72時間で脱シトラコニル化を達成した後、再び凍結乾燥した。ゲル媒質を洗浄したUltradex(登録商標)(Amersham Biosciences Inc.)を用いたことを除き、Radola: Biochim. Biophys. Acta 295, 412-428, 1973に従い、平床式(flat-bed)ゲル安定化層中の分取等電点電気泳動法により、物質をフラクションに分けた。ゲルを5M尿素(混床式樹脂で精製)に懸濁させ、キャリア両性電解質(2%、pH4〜6)を加えた。スラリー210mLをフラット(flat)プレート(Desaga/Brinkmann)(20x20 cm)に置き、サンプルを陰極から2cmに適用し、電気泳動を25〜30V/cmにて18〜24時間1〜4℃冷却プレート(Hormuth/Brinkmann)上にて達成した。可視(屈折性)バンドが形成され、水中のゲルサンプルの希釈後、バンド中のpHを決定した。主なバンドはpH5.1に対応し、これはLysεB29の化合物Aでの選択的改変を有するインスリンについて予想されるpHである。主なバンドからの物質は、3倍の床容積の1M酢酸での溶出によりゲルから回収される。Sephadex G-25(2.5x70 cm)上の1M酢酸でのクロマトグラフィーにより尿素を除去し、タンパク質フラクションを凍結乾燥した。タンパク質を溶解し、DEAE-セルロースDE52(0.9x25 cm)のクロマトグラフィーカラムに7M尿素、0.01MTris/塩酸、pH8.3、室温にて充填した。カラムを直線勾配の塩化ナトリウム(0〜0.15M)を形成する同じ緩衝液で溶出した。6.1mLのフラクションを集めた。主なピークを集め、Sephadex G-25(2.5x70 cm)のカラムで1M酢酸により脱塩し、タンパク質フラクションを凍結乾燥した。t−ブチルエステルをトリフルオロ酢酸中での分解により開裂させた。トリフルオロ酢酸の留去後、タンパク質(化合物B)を1M酢酸に溶解し、凍結乾燥した。Davis B.J.: Ann. N. Y. Acad. Sci. 121, 404-427, 1964による分析用ポリアクリルアミドディスクゲル電気泳動は、物質の同質性を示した。イオンスプレー質量分析により、予想される化合物Bの正確な分子量が示された。化合物Bは、本発明のコール酸誘導体リンカーに結合した治療薬部分(インスリン分子)を含む。
A. (3β,5β,12α)−3−[[3,5−ビス[[4−[(2,5−ジオキソ−1−ピロリジニル)オキシ]−1,4−ジオキソブチル]アミノ]ベンゾイル]アミノ]−12−ヒドロキシコラン−24−酸1,1−ジメチルエチルエステル(化合物C−(OSu)2)の合成
3,5−ジニトロベンゾイルクロリド1(市販の化合物)のエタノール不含クロロホルム溶液を(3β,5β,12α)−3−アミノ−12−ヒドロキシコラン酸t−ブチルエステル2のエタノール不含クロロホルムおよびトリエチルアミンの溶液に滴加した。反応完了後、混合物を水で洗浄し、乾燥(硫酸ナトリウム)し、ろ過して溶媒を留去した。シリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィーにより粗製のろ液を精製し、純粋な化合物3を得、これをエタノール中パラジウム(活性化炭素上10%)で水素化し、化合物4を得た。化合物4をジクロロメタンに溶解し、2モル等量の無水コハク酸と反応させた。次いで中間体二酸をエタノール不含クロロホルム中1−[3−(ジメチルアミノ)プロピル]−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDC)および4−ジメチルアミノピリジン(DMAP)の存在下、N−ヒドロキシスクシンイミド(HOSu)と反応させた。反応完了後、混合物を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を留去して化合物5=C−(OSu)2を得た。
NαA1,NαA2−ジシトラコニル−インスリン(ウシ)は、Naithani V.K.&Gattner H.-G.: Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 349, 373-384, 1968により製造した。NαA1,NαA2−ジシトラコニル−インスリン28μmolのジメチルホルムアミド48mL溶液に、ジメチルホルムアミド2.4mL中のトリエチルアミン185μmolを加えた。ジメチルホルムアミド2mL中の化合物C−(OSu)214μmolを加え、反応混合物を室温にて30分間反応させた。反応混合物を1M酢酸で酸性化し、1M酢酸でのSephadex G-25(2x70 cm)でクロマトグラフィーした。タンパク質ピークフラクションを集め、凍結乾燥した。脱シトラコニル化は、ギ酸pH3.5中72時間で達成した後、再び凍結乾燥を開始した。t−ブチルエステルをトリフルオロ酢酸中での解離により開裂させた。トリフルオロ酢酸を留去した後、タンパク質を1M酢酸に溶解し、1M酢酸でのSephadex G-50でクロマトグラフィーによりフラクションに分けた。最も大きいサイズの分子のタンパク質ピークを集め、凍結乾燥した。物質をもう一度同じカラムでフラクションに分けた。フラクションに分けられたタンパク質を凍結乾燥した。イオンスプレー質量分析により予想された化合物Dの正確な分子量が示された。化合物Dは本発明のリンカーに結合した治療薬部分(インスリン分子)を含み、これは別の治療薬部分(インスリン分子)に結合している。
化合物BおよびDの125Iによる標識
化合物BおよびDの125Iによる標識をLipkin E.W., Teller D.C.&de Haen C.: J. Biol. Chem. 261, 1694-1701, 1986に記載の方法または本明細書に記載のように達成した。
化合物BおよびDのヒト血清アルブミンへの結合
ヒト血清アルブミンへの結合は、125I標識インスリンでスパイクされた(spiked)0.6mMヒト血清アルブミン中1nMウシインスリン溶液を適用し、Whitlam J.B.&Brown K.F.: J. Pharm. Sci. 70, 146-150, 1981による限外ろ過法により決定した。95%のインスリンが結合した。そのようなアルブミンへの結合が非改変インスリンと比較して改変インスリン(化合物BおよびD)の腎臓での除去を軽減することは明らかである。
化合物BおよびDの生物活性
ビオチンにより占められている4つのビオチン結合部位のうちの3つによる、アビジンおよびフェリチンの1:1コンジュゲートに結合したNεB29−ビオチニルインスリンは、ラット精巣上体脂肪細胞におけるグルコース酸化の活性化についてのインスリンと同じ用量反応曲線を有することが知られている(May J.M., Williams R.H.&de Haen C.: J. Biol. Chem. 253, 686-690, 1978)。含血清アルブミン緩衝液へのインキュベーションに関与する上記文献に記載の脂肪細胞アッセイを用いて、化合物BおよびDはまた、非改変インスリンと同一の活性を有することも示される。この特性は、軽減される腎臓での除去と組み合わせて、本発明のリンカーを含まない化合物と比較して改善された薬物動態特性を提供する長期の血漿半減期を有するインスリンの化合物BおよびD形態を提供する。
111In標識インスリンデオキシコール酸コンジュゲート(化合物111In−F)の合成
A. ウシ1−[[(3β,5β,12α)−23−[(1,1−ジメチル)エトキシカルボニル]−12−ヒドロキシ−24−ノルコラン−3−イル]アミノ]カルボニル−3−[[4−(インスリン−NεB29−イル)−1,4−ジオキソブチル]アミノ]−5−[[[[2−[[[4,7,10−トリス(カルボキシメチル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデシル]アセチル]アミノ]エチル]アミノ]−1,4−ジオキソブチル]アミノ]ベンゼン(化合物F)の合成
N1,N4,N7−トリアセテート−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−N10−(2−アセトアミドエチルアミン)(化合物E、図5A)をMargerum, L.; Campion, B.; Fellmann, J. D.; Garrithy, M.; Varadarajan, J. PCT Int. Appl. WO9528967)により合成した。NαA1,NαA2−ジシトラコニル−インスリン(ウシ)をNaithani V.K.&Gattner H.-G.: Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 349, 373-384, 1968により製造した。NαA1,NαA2−ジシトラコニル−インスリン28μmolのジメチルホルムアミド48mL溶液に、ジメチルホルムアミド2.4mL中のトリエチルアミン185μmolを加えた。ジメチルホルムアミド2mL中の化合物C−(OSu)2(実施例IIIを参照のこと)140μmolを加え、反応を室温にて30分間進行させた。次いでジメチルホルムアミド2mL中の化合物E280μmolを加え、反応を室温にて30分間進行させた。反応混合物は、名目上の切断分子量1000の透析膜を用い、1M酢酸に対して徹底的に透析した1M酢酸で酸性化した。残留物を凍結乾燥した。脱シトラコニル化をギ酸pH3.5中72時間で達成した後、再び凍結乾燥を開始した。t−ブチルエステルをトリフルオロ酢酸中での解離により開裂させた。トリフルオロ酢酸を留去した後、タンパク質を1M酢酸に溶解し、1M酢酸でのSephadex G-50のクロマトグラフィーによりフラクションに分けた。主なタンパク質ピークを集め、凍結乾燥した。次いで物質をもう一度同じカラムによりフラクションに分けた。フラクションに分けたタンパク質を凍結乾燥した。イオンスプレー質量分析により、予想される化合物Fについての正確な分子量が示された(図5B)。化合物Fはコール酸誘導体リンカーに結合した治療薬部分(インスリン分子)を含み、これは診断薬部分(金属キレート剤)に結合している。
400μLオートサンプラー挿入部を備えた5mLガラス製バイアルに、0.2M酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.8)およびDMFの9:1混合物に溶解した化合物Fの1mg/mL溶液100μLを加えた。0.05N塩酸中の111InCl3[1.5mCi]を加え、反応バイアルをクリンプシール(crimp-sealed)し、溶液を45℃にて30分間加熱した。室温まで冷却した後、標識混合物のアリコートを水中0.1%トリフルオロ酢酸/アセトニトリル中0.085%トリフルオロ酢酸の水性/有機勾配を用いたVydac C-18ペプチドおよびタンパク質カラム[4.6x250 mm; ポアサイズ: 5ミクロン; 流速: 30℃にて1.5 mL/分]での逆相HPLCにより精製した。111In標識化合物Fに対応するピークを0.2%ヒト血清アルブミンを含むpH5.7の50mMクエン酸緩衝液0.5mL中に集めた後、Savant Speed真空装置を用いて減圧でアセトニトリルを除去した。
L62の合成
概括: 図6A−Bに示されるように、次の工程を用いてL62を製造した: (3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸メチルエステルAの水酸化ナトリウムでの加水分解により対応する酸Bを得、次いでこれをFmoc−Clと反応させて中間体Cを得た。オクタペプチドGln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−Met−NH2(BBN[7−14][配列番号1])で官能基化されたRinkアミド樹脂をC、Fmoc−グリシンおよびDOTAトリ−t−ブチルエステルと連続的に反応させた。試薬Bによる開裂および脱保護の後、粗製物を分取用HPLCにより精製し、L62を得た。総収率: 2.5%。より詳細には、以下に記載する:
固相ペプチド合成容器(同封物番号1を参照のこと)に、Fmoc−アミノ酸24mmol、N−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)3.67g(24mmol)およびN,N’−ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)3.75mL(24mmol)をRinkアミドNovaGel(登録商標)樹脂10g(6.0mmol)AのDMF45mL懸濁液に連続的に加えた。ベンチトップ型(bench top)シェーカーを用い、混合物を室温にて3時間振盪した後、溶液を除去し、樹脂をDMF(5x45mL)で洗浄した。樹脂を25%ピペリジン/DMF45mLで4分間振盪し、溶液を除去し、新たに25%ピペリジン/DMF45mLを加えた。懸濁液を10分間振盪した後、溶液を除去し、樹脂をDMF(5x45mL)で洗浄した。
B. 中間体BおよびCの製造:
1. (3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸(B)の合成
1M水酸化ナトリウム溶液16.6mL(16.6mmol)を(3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸メチルエステル5.0g(12.8mmol)のメタノール65mL溶液に45℃にて滴加した。45℃にて3時間撹拌後、混合物を25mLに濃縮し、水40mLおよび1M塩酸22mLを加えた。析出した固体をろ過し、水(2x50mL)で洗浄し、真空乾燥してBを白色固体5.0g(13.3mmol)として得た。収率80%。
2. (3β,5β)−3−(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノコラン−24−酸(C)の合成
9−フルオレニルメトキシカルボニルクロリド0.76g(2.93mmol)の1,4−ジオキサン9mL溶液を(3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸B1.0g(2.66mmol)の10%水性炭酸ナトリウム16mLおよび1,4−ジオキサン9mL懸濁液に滴加し、0℃にて撹拌した。室温にて6時間撹拌後、水90mLを加え、水相をジエチルエーテル(2x90mL)で洗浄した後、2M塩酸15mLを加えた(最終pH: 1.5)。水相を酢酸エチル(2x100mL)で抽出し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、Cを白色固体1.2g(2.0mmol)として得た。収率69%。
C. L62(N−[(3β,5β)−3−[[[[[4,7,10−トリス(カルボキシメチル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカ−1−イル]アセチル]アミノ]アセチル]アミノ]コラン−24−イル]−L−グルタミニル−L−トリプトフィル−L−アラニル−L−バリル−グリシル−L−ヒスチジル−L−ロイシル−L−メチオニンアミド)の合成:
樹脂A0.5g(0.3mmol)を固相ペプチド合成容器中にて50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加えた。懸濁液を20分間振盪した後、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。(3β,5β)−3−(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノコラン−24−酸C0.72g(1.2mmol)、N−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)0.18g(1.2mmol)、N,N’−ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)0.19mL(1.2mmol)およびDMA7mLを樹脂に加え、混合物を室温にて24時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。次いで樹脂を50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加え、混合物をさらに20分間振盪した。溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。N−α−Fmoc−グリシン0.79g(1.2mmol)、HOBT0.18g(1.2mmol)、DIC0.19mL(1.2mmol)およびDMA7mLを樹脂に加えた。混合物を3時間室温にて振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。次いで樹脂を50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加え、混合物をさらに20分間振盪した。溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した後、1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸トリス(1,1−ジメチルエチル)エステル付加体を塩化ナトリウム0.79g(1.2mmol)、HOBT0.18g(1.2mmol)、DIC0.19mL(1.2mmol)、DIEA0.40mL(2.4mmol)およびDMA7mLとともに樹脂に加えた。混合物を室温にて24時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)、CH2Cl2(5x7mL)で洗浄し、真空乾燥した。樹脂をフラスコ中にて試薬B25mLと4.5時間振盪した。樹脂をろ過し、溶液を減圧留去して油状粗製物を得、これをジエチルエーテル20mLでトリチュレーションした。沈殿物を遠心分離により集め、ジエチルエーテル(3x20mL)で洗浄した後、HPLCにより分析し、分取用HPLCにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥し、L62(6.6mg、3.8x10-3mmol)を白色固体として得た。収率4.5%。
L67の合成
概括: (3β,5β)−3−アミノ−12−オキソコラン−24−酸メチルエステルAの水酸化ナトリウムとの加水分解により対応する酸Bを得た後、これをFmoc−グリシンと反応させて中間体Cを得た。オクタペプチドGln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−Met−NH2(BBN[7−14][配列番号1])で官能基化したRinkアミド樹脂を続けてCおよびDOTAトリ−t−ブチルエステルと反応させた。試薬Bによる開裂および脱保護の後、粗製物を分取用HPLCにより精製し、L67を得た。総収率: 5.2%。
A. (3β,5β)−3−アミノ−12−オキソコラン−24−酸(B)の合成(図7A)
水酸化ナトリウム6.6mL(6.6mmol)の1M溶液を(3β,5β)−3−アミノ−12−オキソコラン−24−酸メチルエステルA2.1g(5.1mmol)のメタノール15mL溶液に45℃にて滴加した。45℃にて3時間撹拌後、混合物を25mLまで濃縮し、次いで水25mLおよび1M塩酸8mLを加えた。析出した固体をろ過し、水(2x30mL)で洗浄し、真空乾燥してBを白色固体1.7g(4.4mmol)として得た。収率88%。
B. (3β,5β)−3−[[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ]アセチル]アミノ−12−オキソコラン−24−酸(C)の合成(図7A)
トリブチルアミン0.7mL(3.1mmol)をN−α−Fmoc−グリシン0.9g(3.1mmol)のTHF25mL溶液に滴加し、0℃にて撹拌した。イソブチルクロロホルメート0.4mL(3.1mmol)を続けて加え、10分後、トリブチルアミン0.6mL(2.6mmol)および(3β,5β)−3−アミノ−12−オキソコラン−24−酸B1.0g(2.6mmol)のDMF30mL懸濁液を冷却した溶液に1時間かけて滴加した。混合物を昇温させ、6時間後、溶液を40mLに濃縮した後、水50mLおよび1N塩酸10mLを加えた(最終pH: 1.5)。析出した固体をろ過し、水(2x50mL)で洗浄し、真空乾燥し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製してCを白色固体1.1g(1.7mmol)として得た。収率66%。
C. L67(N−[(3β,5β)−3−[[[[[4,7,10−トリス(カルボキシメチル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカ−1−イル]アセチル]アミノ]アセチル]アミノ]−12,24−ジオキソコラン−24−イル]−L−グルタミニル−L−トリプトフィル−L−アラニル−L−バリル−グリシル−L−ヒスチジル−L−ロイシル−L−メチオニンアミド)の合成(図7Bおよび7E)
樹脂D0.5g(0.3mmol)を固相ペプチド合成容器中にて50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加えた。懸濁液を20分間撹拌した後、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。(3β,5β)−3−[[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ]アセチル]アミノ]−12−オキソコラン−24−酸C0.80g(1.2mmol)、N−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)0.18g(1.2mmol)、N,N’−ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)0.19mL(1.2mmol)およびDMA7mLを樹脂に加え、混合物を室温にて24時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。樹脂を50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加え、混合物を20分間振盪した。溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸トリス(1,1−ジメチルエチル)エステル付加体を塩化ナトリウム0.79g(1.2mmol)、HOBT0.18g(1.2mmol)、DIC0.19mL(1.2mmol)、DIEA0.40mL(2.4mmol)およびDMA7mLとともに樹脂に加えた。混合物を室温にて24時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)、CH2Cl2(5x7mL)で洗浄し、真空乾燥した。樹脂をフラスコ中にて試薬B25mLと4.5時間振盪した。樹脂をろ過し、溶液を減圧留去して油状粗製物を得、これをジエチルエーテル20mLでトリチュレーションした。L67はコール酸誘導体リンカーに結合した診断薬部分(金属キレート剤)を含み、これは標的ペプチド(BBN[7−14])に結合している。
L63およびL64の合成
概括: (3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸メチルエステル1bの水酸化ナトリウムによる加水分解により中間体2bを得、次いでこれをFmoc−グリシンと反応させて3bを得た。オクタペプチドGln−Trp−Ala−Val−Gly−His−Leu−Met−NH2(BBN[7−14][配列番号1])で官能基化したRinkアミド樹脂を3b、次いでDOTAトリ−t−ブチルエステルと反応させた。試薬Bによる開裂および脱保護の後、粗製物を分取用HPLCにより精製し、L64を得た。既に入手可能な中間体2aから出発して同じ手順を繰り返し、L63を得た。総収率: それぞれ9および4%。
A. (3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸(2b)の合成(図8A)
水酸化ナトリウム130mL(0.13mol)の1M溶液を(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸メチルエステル1b42.1g(0.10mol)のメタノール300mL溶液に滴加し、45℃にて加熱した。45℃にて3時間撹拌後、混合物を150mLに濃縮し、水350mLを加えた。CH2Cl2(2x100mL)で抽出後、水溶液を200mLに濃縮し、1M塩酸150mLを加えた。析出した固体をろ過し、水(2x100mL)で洗浄し、真空乾燥して2bを白色固体34.8g(0.08mol)として得た。収率80%。
B. (3β,5β,12α)−3−[[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ]アセチル]アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸(3a)の合成(図8A)
トリブチルアミン4.8mL(20.2mmol)をN−α−Fmoc−グリシン6.0g(20.2mmol)のTHF120mL溶液に滴加し、0℃にて撹拌した。イソブチルクロロホルメート2.6mL(20.2mmol)を続けて加え、10分後トリブチルアミン3.9mL(16.8mmol)および(3β,5β,12α)−3−アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸2a6.6g(16.8mmol)のDMF120mL懸濁液を冷却した溶液に1時間かけて滴加した。混合物を昇温させ、6時間後、溶液を150mLに濃縮し、次いで水250mLおよび1N塩酸40mLを加えた(最終pH: 1.5)。析出した固体をろ過し、水(2x100mL)で洗浄し、真空乾燥し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して3aを白色固体3.5g(5.2mmol)として得た。収率31%。
C. (3β,5β,7α,12α)−3−[[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ]アセチル]アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸(3b)の合成(図8B)
トリブチルアミン3.2mL(13.5mmol)をN−α−Fmoc−グリシン4.0g(13.5mmol)のTHF80mL溶液に滴加し、0℃にて撹拌した。イソブチルクロロホルメート1.7mL(13.5mmol)を続けて加え、10分後トリブチルアミン2.6mL(11.2mmol)および(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸3a4.5g(11.2mmol)のDMF80mL懸濁液を冷却した溶液に1時間かけて滴加した。混合物を昇温させ、6時間後、溶液を120mLに濃縮し、次いで水180mLおよび1N塩酸30mLを加えた(最終pH: 1.5)。析出した固体をろ過し、水(2x100mL)で洗浄し、真空乾燥し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して3aを白色固体1.9g(2.8mmol)として得た。収率25%。
別法にて、(3β,5β,7α,12α)−3−[[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ]アセチル]アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸3bを次のように製造することができる:
N−ヒドロキシスクシンイミド1.70g(14.77mmol)およびDIC1.87g(14.77mmol)を続けてFmoc−Gly−OH4.0g(13.45mmol)の撹拌したジクロロメタン15mL溶液に加え、得られた混合物を室温にて4時間撹拌した。形成されたN,N’−ジイソプロピルウレアをろ過により取り除き、固体をエーテル20mLで洗浄した。揮発物を取り除き、形成された固体Fmoc−Gly−スクシンイミジルエステルをエーテル(3x20mL)で洗浄した。次いでFmoc−Gly−スクシンイミジルエステルを乾燥DMF15mLに再溶解し、3−アミノデオキシコール酸5.21g(12.78mmol)を透明溶液に加えた。反応混合物を室温にて4時間撹拌し、水200mLを加え、析出した固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィー(TLC(シリカ): (Rf: 0.50, シリカゲル, CH2Cl2/CH3OH, 9:1)(溶離液: CH2Cl2/CH3OH, 9:1)により精製して(3β,5β,7α,12α)−3−[[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ]アセチル]アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸(3b)Fmoc−Gly−3−アミノコール酸を無色固体として得た。収率: 7.46g(85%)。
D. L63(N−[(3β,5β,12α)−3−[[[[[4,7,10−トリス(カルボキシメチル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカ−1−イル]アセチル]アミノ]アセチル]アミノ]−12−ヒドロキシ−24−オキソコラン−24−イル]−L−グルタミニル−L−トリプトフィル−L−アラニル−L−バリル−グリシル−L−ヒスチジル−L−ロイシル−L−メチオニンアミド)の合成(図8Bおよび8G)
樹脂A0.5g(0.3mmol)を固相ペプチド合成容器中にて50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加えた。懸濁液を20分間撹拌した後、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。(3β,5β,12α)−3−[[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ]アセチル]アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸3a0.82g(1.2mmol)、N−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)0.18g(1.2mmol)、N,N’−ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)0.19mL(1.2mmol)およびDMA7mLを樹脂に加え、混合物を室温にて24時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。次いで樹脂を50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加え、混合物を20分間振盪した。溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸トリス(1,1−ジメチルエチル)エステル付加体を塩化ナトリウム0.79g(1.2mmol)、HOBT0.18g(1.2mmol)、DIC0.19mL(1.2mmol)、DIEA0.40mL(2.4mmol)およびDMA7mLとともに樹脂に加えた。混合物を室温にて24時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)、CH2Cl2(5x7mL)で洗浄し、真空乾燥した。樹脂をフラスコ中にて試薬B25mLと4時間振盪した。樹脂をろ過し、溶液を減圧留去し、油状粗製物を得、これをジエチルエーテル5mLで処理した後、沈殿物を得た。沈殿物を遠心分離により集め、ジエチルエーテル(5x5mL)で洗浄した後、HPLCにより分析して精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥し、L63を白色綿状固体12.8mg(0.0073mmol)として得た。収率9%。L63はコール酸誘導体リンカーに結合した診断薬部分(金属キレート剤)を含み、これは標的ペプチド(BBN[7−14])に結合している。
E. L64(N−[(3β,5β,7α,12α)−3−[[[[[4,7,10−トリス(カルボキシメチル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカ−1−イル]アセチル]アミノ]アセチル]アミノ]−7,12−ジヒドロキシ−24−オキソコラン−24−イル]−L−グルタミニル−L−トリプトフィル−L−アラニル−L−バリル−グリシル−L−ヒスチジル−L−ロイシル−L−メチオニンアミド)の合成(図8Cおよび8H)
樹脂A0.5g(0.3mmol)を固相ペプチド合成容器中にて50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加えた。懸濁液を20分間撹拌し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。(3β,5β,7α,12α)−3−[[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ]アセチル]アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸3b0.81g(1.2mmol)、HOBT0.18g(1.2mmol)、DIC0.19mL(1.2mmol)およびDMA7mLを樹脂に加え、混合物を室温にて24時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。樹脂を50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加え、混合物を20分間振盪した。溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸トリス(1,1−ジメチルエチル)エステル付加体を塩化ナトリウム0.79g(1.2mmol)、HOBT0.18g(1.2mmol)、DIC0.19mL(1.2mmol)、DIEA0.40mL(2.4mmol)およびDMA7mLとともに樹脂に加えた。混合物を室温にて24時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)、CH2Cl2(5x7mL)で洗浄し、真空乾燥した。樹脂をフラスコ中にて試薬B25mLと4時間振盪した。樹脂をろ過し、溶液を減圧留去し、油状粗製物を得、これをジエチルエーテル5mLでトリチュレーションした。沈殿物を遠心分離により集め、ジエチルエーテル(5x5mL)で洗浄した。次いでこれを水20mLに溶解し、炭酸ナトリウム0.10g(0.70mmol)を加え、得られた混合物を室温にて4時間撹拌した。この溶液をHPLCにより精製し、生成物を含むフラクションを凍結乾燥してL64を白色綿状固体3.6mg(0.0021mmol)として得た。収率4%。L64はコール酸誘導体リンカーに結合した診断薬部分(金属キレート剤)を含み、これは標的ペプチド(BBN[7−14])に結合している。
本化合物は、L64リガンド10μg(1mg/mL水溶液10μL)、酢酸アンモニウム緩衝液100μL(0.2M、pH5.2)および〜1−2mCiの177LuCl3/0.05N塩酸(MURR)を90℃にて15分間インキュベーションすることにより合成した。1%Na2EDTA.2H2O(Aldrich)の水溶液20μLを加えることにより遊離177Luを捕捉した。得られた放射化学的純度(RCP)は〜95%であった。YMC塩基性C8カラム[4.6 x 150 mm](カラム温度30℃および流速1mL/分)を68%A/32%B〜66%A/34%B(ここに、Aはクエン酸緩衝液(0.02M、pH3.0)であり、Bは80%アセトニトリル/20%メタノールである)の30分にわたる濃度勾配で用いたHPLCにより、放射標識生成物を非標識リガンドおよび他の不純物から分離した。単離された化合物は〜100%のRCPを有し、23.4分のHPLC保持時間を有した。
本化合物は、L64リガンド70μg(1mg/mL水溶液70μL)、酢酸アンモニウム緩衝液200μL(0.2M、pH5.2)および〜30−40mCiの177LuCl3/0.05N塩酸(MURR)を85℃にて10分間インキュベーションすることにより合成した。室温まで冷却した後、2%Na2EDTA.2H2O(Aldrich)の水溶液20μLを加えることにより遊離177Luを捕捉した。得られた放射化学的純度(RCP)は〜95%であった。水、50%アセトニトリル/水、次いで1g/L酢酸アンモニウム水溶液で流速1mL/分にて続けて溶出した300VHPアニオン交換カラム(7.5 x 50 mm)(Vydac)を用いたHPLCにより、放射標識生成物を非標識リガンドおよび他の不純物から分離した。所望の化合物を50%アセトニトリルでカラムから溶出し、5%アスコルビン酸、0.2%HSAおよび0.9%(v:v)ベンジルアルコールを含む〜1mLのクエン酸緩衝液(0.05M、pH5.3)と混合した。単離されたフラクションの有機部分をスピンバキューム(spin vacuum)により40分間除去し、濃縮溶液(〜20−25mCi)をインビボ研究の30分以内に、5%アスコルビン酸、0.2%HSAおよび0.9%(v:v)ベンジルアルコールを含むクエン酸緩衝液(0.05M、pH5.3)を用いて7.5mCi/mLの濃度に調節した。得られた化合物は>95%のRCPを有した。
本化合物は、L64リガンド10μg(0.01N塩酸中2mg/mL溶液5μL)、エタノール60μL、1.12mCiの111InCl3/0.05N塩酸80μLおよび酢酸ナトリウム緩衝液155μL(0.5M、pH4.5)を85℃にて30分間インキュベーションすることにより合成した。1%Na2EDTA.2H2O(Aldrich)の水溶液20μLを加えることにより遊離111Inを捕捉した。得られた放射化学的純度(RCP)は87%であった。75%A/25%B〜65%A/35%Bの20分にわたる濃度勾配(ここに、Aは0.1%TFA/水であり、Bは0.085%TFA/アセトニトリルである)のVydac C18カラム[4.6x250 mm](カラム温度50℃および流速1.5 mL/分)を用いたHPLCにより、放射標識生成物を非標識リガンドおよび他の不純物から分離した。本系にて111In−L64についての保持時間は15.7分であった。単離された化合物は96.7%のRCPを有した。
ペプチドの原液をL63リガンド(引用されている米国特許出願番号2002/0054855およびWO 02/87637に記載のように製造)を0.01N塩酸に溶解し、1mg/mLの濃度とすることにより製造した。177Lu−L63を次の試薬を示した順で混合することにより製造した。
0.2M酢酸アンモニウム、pH6.8 100μl
0.01N塩酸中ペプチド原液1mg/mL 5μl
0.05M塩酸中177LuCl3(MURR) 1.2μl(1.4mCi)
Gd−L64は約10.45mM-1s-1のHEPESにて緩和能を示し、これは分子量に基づいて予想された値と一致する。
実施例XVI−インビボ薬物動態研究
A. 追跡用量の生体内分布:
低用量薬物動態研究(例えば生体内分布研究)は、以下に識別される本発明化合物および異種移植片である対照のL134、PC3腫瘍保持マウス([Ncr]−Foxn1<nu>)を用いて行った。L134はDO3Aモノアミド−アミノオクタニル−BBN[7−14]である。すべての研究において、群(n=3〜4)あたり1および24時間の滞留時間で、177Lu標識試験化合物100μLを200μCi/kgにて静脈注射によりマウスに投与した。適切な基準でLKB 1282 CompuGammaカウンターにて組織を分析した。
第2表
Lu−177標識本発明化合物の対照と比較したPC3腫瘍保持ヌードマウス(200μCi/kg; %ID/gとしての値)における1時間と24時間における薬物動態的比較
実施例XVII−放射線治療研究−図12A−B
A. 短期間有効性研究:
PC3腫瘍保持ヌードマウスモデルを用いた放射線治療研究を行った。本発明のLu−177標識化合物L64、L63および治療対照化合物L134を未治療対照群と比較した(各治療群についてn=12であり、未治療対照群についてn=36である)。最初の研究について、無菌条件下、本発明の177Lu標識化合物100μLを30mCi/kgにてマウスに静脈注射または皮下注射により投与した。30日まで対象を仕切った環境で飼育した。体重および腫瘍サイズ(キャリパー測定(caliper measurement)による)を研究期間中、各対象にて毎週3回集めた。期限前終了についての基準としては次が挙げられる: 死亡; 総体重(TBW)の20%以上の欠乏; 2cm3以上の腫瘍サイズ。結果を図12Aに示す。これらの結果により、L64またはL63で治療された動物は、未治療の対照動物および同用量のL134を投与された動物よりも生存期間が増大したことが示された。
繰り返し研究は、前と同じ用量のL64を用いて行ったが、化合物あたりより多くの動物(n=46)を用い、より長い期間用いた。繰り返し研究の結果を図12Bに示した。前と同じ対照(n=36)と比較して、L64治療は有意に生存期間を増大させた(p<0.0001)。
LHRHペプチドの合成
直線状ペプチドは、Applied Biosystemsペプチド合成装置モデル433Aを用いて合成した。Fmoc−Pal−Peg−PS樹脂を、直交型Fmoc戦略を適用したペプチド合成のために用いた。アミノ側鎖は、トリチル−(ヒスチジンについて)、t−ブチル−(SerおよびTyrについて)、boc−(Trpについて)、メチルトリチル−(D−Lysについて)およびPmc−(Argについて)基で保護した。ペプチドの開裂および反応停止処理は次のように行った: 問題のペプチドと充填した樹脂の88%トリフルオロ酢酸(TFA)/5%フェノール/5%水/2%トリイソプロピルシラン(TIS)(試薬「B」)により室温にて4時間処理した後、溶媒を留去し、ジエチルエーテル中の沈殿により粗製のペプチドを得た。次いで灰白色固体を水に溶解し、ろ過し、水と0.1%TFAを含むアセトニトリルを溶離液として用いた逆相C-18カラム(YMC-Pack ODS/Aカラム)を有するShimadzu Systemを用いたHPLCにより精製した。
(3β,5β,7α,12α)−3−[[9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ]アセチル]アミノ−7−12−ジヒドロキシコラン−24−酸
Fmoc−Gly−OH4.0g(13.45mmol)のジクロロメタン15mL溶液に、N−ヒドロキシスクシンイミド1.70g(14.77mmol)、次いでDIC(ジイソプロピル−カルボジイミド)1.87g(14.77mmol)を加え、室温にて4時間撹拌した。形成された尿素をろ過により取り除き、固体をエーテル20mLで洗浄した。集めたろ液の溶媒をロータリーエバポレーターで留去し、形成された固体Fmoc−Gly−スクシンイミジルエステルをエーテル(3x20mL)で洗浄した。次いでFmoc−Gly−スクシンイミジルエステルを乾燥DMF15mLに再溶解した後、3−アミノデオキシコール酸5.21g(12.78mmol)を透明な溶液に加えた。反応混合物を室温にて4時間撹拌した後、混合物を水200mLに加え、析出した固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィー(Rf: 0.50, シリカゲル, CH2Cl2/CH3OH, 9:1、溶離液: CH2Cl2/CH3OH, 9:1)により精製し、Fmoc−Gly−3−アミノデオキシコール酸を無色固体として得た。収率: 7.46 g (85 %)
MS (API-ES, +ve ion): 710.2 (M + Na), 687.7 (M + H).
Fmoc−Gly−3−アミノデオキシコール酸20mg(0.029mmol)のジクロロメタン0.2mL溶液に、N−ヒドロキシスクシンイミド4.0mg(0.035mmol)、次いでDIC(ジイソプロピルカルボジイミド)5.0mg(0.039mmol)を加え、室温にて4時間撹拌した。溶媒を留去した後、固体をジエチルエーテル(5x1.0mL)で洗浄し、乾燥した。次いでFmoc−Gly−3−アミノデオキシコール酸スクシンイミジルエステルの固体を乾燥DMF0.5mLに溶解し、透明な溶液に純粋なH−Pyr−His−Trp−Ser−Tyr−DLys−Leu−Arg−Pro−Gly−NH230mg(0.024mmol)およびジイソプロピルエチルアミン7.5mg(0.058mmol)を加え、反応混合物を室温にて18時間撹拌した。反応混合物にピペリジン0.1mLを加え、20分間撹拌し、Fmoc保護基を除去した。水で希釈し、溶液をTFAでpH4.0に酸性化し、YMC-Pack ODS/A, 30 x 250 mmカラムに充填した。水と0.1%TFAを含むアセトニトリルを溶離液として用いたカラムを溶出し、必要なペプチドを含むフラクション(MS結果に基づく)を集め、凍結乾燥し、純粋なPyr−His−Trp−Ser−Tyr−DLys(H−Gly−Adca3)−Leu−Arg−Pro−Gly−NH215mg(41%)を無色綿状固体として得た。
MS (API-ES, 陽イオン): 1700.4 (M + H), 851.5 [M + H]/2.
MS (API-ES, 陽イオン): 2086.5 (M + H), 1044.3 [M + H]/2
当業者に知られている標識および精製手順またはその適切な改変を用い、本発明化合物を例えば125I、131Iまたは123Iのような放射性ハロゲンで標識することができる。Bolton-Hunter試薬、ラクトペルオキシダーゼ(Lactoperoxidase)、ヨードゲンおよびクロラミンT試薬を用いた放射性ヨウ素(または他の放射性ハロゲン)で標識する典型的な手順は、A. E. Bolton, Comparative Methods For The Radiolabeling Of Peptides, in「Methods in Enzymology」, 1986, Vol. 124, p. 18-29により記載されている。例えば本発明化合物は、(例えば)少量のホウ酸塩緩衝液またはDMF(例えば先にジイソプロピルアミンを用いてpH8.5〜9.0に調節する)中にて非標識化合物を乾燥したBolton-Hunter試薬と反応させることにより、125Iで標識することができる。バイアルを振盪した後、氷上で約30分間、時々振盪しながらインキュベーションした。この後場合により(例えば)グリシンの溶液で反応を停止させることができ、次いで例えば逆相HPLCを用いて精製し、不純物および非標識化合物から遊離標識化合物を取り出した。あるいは、化合物をリン酸緩衝液に溶解してpHをほぼ7とすることができ、ヨウ化物(Na125Iとして)を加え、溶液をクロラミンTの緩衝溶液で処理してヨウ素化させることができ、次いでメタ亜硫酸水素ナトリウムのような還元剤で処理して反応を停止させた。遊離I-をイオン交換クロマトグラフィーにより除去することができ、C8またはC18逆相クロマトグラフィーのようなHPLC法を用いて非標識化合物を放射標識化合物から分離することができる。
概括: (3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸AのFmoc−Clとの反応により中間体Bを得た。オクタペプチドGlnTrpAlaValGlyHisLeuMetNH2(BBN[7−14])(A)で官能基化されたRinkアミド樹脂をB、Fmoc−8−アミノ−3,6−ジオキサオクタン酸およびDOTAトリ−t−ブチルエステルと連続的に反応させた。試薬B(2)による開裂および脱保護の後、粗製物を分取用HPLCにより精製し、L69を得た。総収率: 4.2%。
9−フルオレニルメトキシカルボニルクロリド1.4g(5.4mmol)の1,4−ジオキサン18mL溶液を(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸A2.0g(4.9mmol)(3)の10%水性炭酸ナトリウム30mLおよび1,4−ジオキサン18mL懸濁液に滴加し、0℃にて撹拌した。室温にて6時間撹拌した後、水100mLを加え、水相をジエチルエーテル(2x90mL)で洗浄した後、2M塩酸15mLを加えた(最終pH: 1.5)。析出した固体をろ過し、水(3x100mL)で洗浄し、真空乾燥した後、フラッシュクロマトグラフィー(4)により精製し、Bを白色固体2.2g(3.5mmol)として得た。収率71%。
樹脂A0.5g(0.3mmol)(6)を固相ペプチド合成容器中にて50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加えた。懸濁液をさらに20分間撹拌した後、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。(3β,5β,7α,12α)−3−(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸B0.75g(1.2mmol)、N−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)0.18g(1.2mmol)、N,N’−ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)0.19mL(1.2mmol)およびDMA7mLを樹脂に加え、混合物を室温にて24時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。次いで樹脂を50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加え、混合物をさらに20分間振盪した。溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。Fmoc−8−アミノ−3,6−ジオキサオクタン酸0.79g(1.2mmol)(7)、HOBt0.18g(1.2mmol)、DIC0.19mL(1.2mmol)およびDMA7mLを樹脂に加えた。混合物を室温にて3時間振盪し、溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。次いで樹脂を50%モルホリン/DMA7mLと10分間振盪し、溶液を除去し、新たに50%モルホリン/DMA7mLを加え、混合物をさらに20分間振盪した。溶液を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)で洗浄した。1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸トリス(1,1−ジメチルエチル)エステル付加体を塩化ナトリウム0.79g(1.2mmol)、HOBt0.18g(1.2mmol)、DIC0.19mL(1.2mmol)、N−エチルジイソプロピルアミン0.40mL(2.4mmol)およびDMA7mLとともに樹脂に加えた。混合物を室温にて24時間振盪し、溶媒を除去し、樹脂をDMA(5x7mL)、CH2Cl2(5x7mL)で洗浄し、真空乾燥した。樹脂をフラスコ中にて試薬B25mL(2)と4.5時間振盪した。樹脂をろ過し、溶液を減圧留去して油状粗製物を得、これをジエチルエーテル20mLで処理した後、沈殿物を得た。沈殿物を遠心分離により集め、ジエチルエーテル(3x20mL)で洗浄し、固体248mgを得、これをHPLCにより分析した。粗製物50mgを分取用HPLCにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥し、L69(6.5mg、3.5x10-3mmol)(図13B)を白色固体として得た。収率5.8%。
Claims (51)
- 一般式:
M−N−O−P−Q
[式中、
Mは診断薬部分であり、
Nは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、
Pは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Qは標的ペプチドであり、そしてここに、N、OまたはPのうちの少なくとも1つは置換胆汁酸であり、
前記置換胆汁酸は7位および12位にて水素、ヒドロキシルまたはケト官能基で適宜置換されていてもよい3−アミノ、24−カルボキシル官能基を有する胆汁酸であり、
前記他の連結基は2以上のアミノ酸、R 1 −(CH 2 ) n −R 2 またはその組合せからなる群から選択され、ここに、nは0〜10であり、R 1 はH 2 N−、HS−または−COOHであり、R 2 は活性化されたCOOH基であり、
前記標的ペプチドは前記置換胆汁酸のアミノ基または前記置換胆汁酸のカルボキシル基に結合している]
で示される化合物。 - 標的ペプチドが置換胆汁酸のアミノ基に結合している、請求項1記載の化合物。
- 標的ペプチドが置換胆汁酸のカルボキシル基に結合している、請求項1記載の化合物。
- 診断薬部分が置換胆汁酸のアミノ基に結合し、標的ペプチドが置換胆汁酸のカルボキシル基に結合している、請求項1記載の化合物。
- 診断薬部分が置換胆汁酸のカルボキシル基に結合し、標的ペプチドが置換胆汁酸のアミノ基に結合している、請求項1記載の化合物。
- 診断薬部分が置換胆汁酸のアミノ基に結合し、標的ペプチドがこの置換胆汁酸のアミノ基に結合している、請求項1記載の化合物。
- Mがx線イメージング剤、磁気共鳴イメージング剤、超音波イメージング剤、蛍光剤、放射性核種イメージング剤および光学的イメージング剤からなる群から選択される、請求項1〜6のいずれかに記載の化合物。
- Mが光学的イメージング剤である、請求項7記載の化合物。
- 一般式:
M−N−O−P−Q
[式中、
Mは治療薬部分であり、
Nは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、
Pは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Qは標的ペプチドであり、そしてここに、N、OまたはPのうちの少なくとも1つは置換胆汁酸であり、
前記置換胆汁酸は7位および12位にて水素、ヒドロキシルまたはケト官能基で適宜置換されていてもよい3−アミノ、24−カルボキシル官能基を有する胆汁酸であり、
前記他の連結基は2以上のアミノ酸、R 1 −(CH 2 ) n −R 2 またはその組合せからなる群から選択され、ここに、nは0〜10であり、R 1 はH 2 N−、HS−または−COOHであり、R 2 は活性化されたCOOH基であり、
前記標的ペプチドは前記置換胆汁酸のアミノ基または前記置換胆汁酸のカルボキシル基に結合している]
で示される化合物。 - 標的ペプチドが置換胆汁酸のアミノ基に結合している、請求項9記載の化合物。
- 標的ペプチドが置換胆汁酸のカルボキシル基に結合している、請求項9記載の化合物。
- 治療薬部分が置換胆汁酸のアミノ基に結合し、標的ペプチドが置換胆汁酸のカルボキシル基に結合している、請求項9記載の化合物。
- 治療薬部分が置換胆汁酸のカルボキシル基に結合し、標的ペプチドが置換胆汁酸のアミノ基に結合している、請求項9記載の化合物。
- 治療薬部分が置換胆汁酸のアミノ基に結合し、標的ペプチドがこの置換胆汁酸のアミノ基に結合している、請求項9記載の化合物。
- Mが放射性医薬品、光線療法剤、抗生剤、ホルモン、酵素、抗体および成長因子からなる群から選択される、請求項9〜14のいずれかに記載の化合物。
- Mがインスリンである、請求項15記載の化合物。
- 一般式:
M−N−O−P−M
[式中、
Mはそれぞれ、独立して診断薬または治療薬部分であり、
Nは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、
Pは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、そしてここに、N、OまたはPのうちの少なくとも1つは置換胆汁酸であり、
前記置換胆汁酸は7位および12位にて水素、ヒドロキシルまたはケト官能基で適宜置換されていてもよい3−アミノ、24−カルボキシル官能基を有する胆汁酸であり、
前記他の連結基は2以上のアミノ酸、R 1 −(CH 2 ) n −R 2 またはその組合せからなる群から選択され、ここに、nは0〜10であり、R 1 はH 2 N−、HS−または−COOHであり、R 2 は活性化されたCOOH基であり、
一方のMは置換胆汁酸のアミノ基に結合し、二番目のMは置換胆汁酸のカルボキシル基に結合している]
で示される化合物。 - 最初のMが置換胆汁酸のアミノ基に結合し、二番目のMがこの置換胆汁酸のアミノ基に結合している、請求項17記載の化合物。
- 最初のMおよび二番目のMが同じまたは異なる、請求項17記載の化合物。
- 最初のMおよび二番目のMが同じである、請求項17記載の化合物。
- 最初のMおよび二番目のMが異なる、請求項17記載の化合物。
- 医薬品化合物の半減期を改善するために、式:
N−O−P
[式中、
Nは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、
Pは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、そして
ここに、N、OまたはPのうちの少なくとも1つは置換胆汁酸であり、
前記置換胆汁酸は7位および12位にて水素、ヒドロキシルまたはケト官能基で適宜置換されていてもよい3−アミノ、24−カルボキシル官能基を有する胆汁酸であり、
前記他の連結基は2以上のアミノ酸、R 1 −(CH 2 ) n −R 2 またはその組合せからなる群から選択され、ここに、nは0〜10であり、R 1 はH 2 N−、HS−または−COOHであり、R 2 は活性化されたCOOH基である]
を有するリンカーを用いて診断薬部分、治療薬部分、金属キレート剤または放射性ハロゲンを標的ペプチドに結合させる方法。 - 置換胆汁酸が以下の化合物:
(3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸、
(3β,5β,12α)−3−アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸、
(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸、
Lys−(3,6,9)−トリオキサウンデカン−1,11−ジカルボニル−3,7−ジデオキシ−3−アミノコール酸、
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシ−12−オキソコラン−24−酸および
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシコラン−24−酸
からなる群から選択される、請求項22記載の方法。 - 一般式:
M−N−O−P−Q
[式中、
Mは金属キレート剤であり、
Nは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、
Pは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Qは標的ペプチドであり、そして
ここに、N、OまたはPのうちの少なくとも1つは置換胆汁酸であり、
前記置換胆汁酸は7位および12位にて水素、ヒドロキシルまたはケト官能基で適宜置換されていてもよい3−アミノ、24−カルボキシル官能基を有する胆汁酸であり、
前記他の連結基は2以上のアミノ酸、R 1 −(CH 2 ) n −R 2 またはその組合せからなる群から選択され、ここに、nは0〜10であり、R 1 はH 2 N−、HS−または−COOHであり、R 2 は活性化されたCOOH基であり、
前記標的ペプチドは前記置換胆汁酸のアミノ基または前記置換胆汁酸のカルボキシル基に結合している]
で示される化合物。 - QがLHRH、インスリン、オキシトシン、ソマトスタチン、NK−1、VIP、P物質、NPY、エンドセリンA、エンドセリンB、ブラジキニン、インターロイキン−1、EGF、CCK、ガラナン、MSH、ランレオチド、オクトレオチド、マルトースおよびアルギニン−バソプレシンからなる群から選択されるペプチドホルモンである、請求項24記載の化合物。
- 置換胆汁酸が以下の化合物:
(3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸、
(3β,5β,12α)−3−アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸、
(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸、
Lys−(3,6,9)−トリオキサウンデカン−1,11−ジカルボニル−3,7−ジデオキシ−3−アミノコール酸、
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシ−12−オキソコラン−24−酸および
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシコラン−24−酸
からなる群から選択される、請求項24記載の化合物。 - 一般式:
M−N−O−P−Q
[式中、
Mは金属キレート剤であり、
Nは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、
Pは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Qは式:
PGlu−His−Trp−W−Tyr−DLys−X−Y−Pro−Z
(ここに、
W=Ser、NMeSerまたはThr
X=Leu、NMeLeu、t−ブチルGly
Y=Arg、Arg(Et 2 )、Cit、Lys(イソプロピル)および
Z=Gly−NH 2 、NHエチル、アザgly−NH 2 )
で示されるLHRHペプチドであり、そして
ここに、N、OまたはPのうちの少なくとも1つは置換胆汁酸であり、
前記置換胆汁酸は7位および12位にて水素、ヒドロキシルまたはケト官能基で適宜置換されていてもよい3−アミノ、24−カルボキシル官能基を有する胆汁酸であり、
前記他の連結基は2以上のアミノ酸、R 1 −(CH 2 ) n −R 2 またはその組合せからなる群から選択され、ここに、nは0〜10であり、R 1 はH 2 N−、HS−または−COOHであり、R 2 は活性化されたCOOH基である]
で示される化合物。 - 一般式:
Glu−His−Trp−W−Tyr−DLys(M−N−O−P)−X−Y−Pro−Z
[式中、
Mはキレート剤であり、
Nは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、
Pは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
W=Ser、NMeSerまたはThr
X=Leu、NMeLeu、t−ブチルGly
Y=Arg、Arg(Et2)、Cit、Lys(イソプロピル)
Z=Gly−NH2、NHエチル、アザgly−NH2
ここに、N、OまたはPのうちの少なくとも1つは置換胆汁酸であり、
前記置換胆汁酸は7位および12位にて水素、ヒドロキシルまたはケト官能基で適宜置換されていてもよい3−アミノ、24−カルボキシル官能基を有する胆汁酸であり、
前記他の連結基は2以上のアミノ酸、R 1 −(CH 2 ) n −R 2 またはその組合せからなる群から選択され、ここに、nは0〜10であり、R 1 はH 2 N−、HS−または−COOHであり、R 2 は活性化されたCOOH基である]
で示される化合物。 - MがDOTA−Glyである、請求項27記載の化合物。
- 置換胆汁酸が以下の化合物:
(3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸、
(3β,5β,12α)−3−アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸、
(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸、
Lys−(3,6,9)−トリオキサウンデカン−1,11−ジカルボニル−3,7−ジデオキシ−3−アミノコール酸、
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシ−12−オキソコラン−24−酸および
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシコラン−24−酸
からなる群から選択される、請求項27または28記載の化合物。 - 少なくとも1つのMがインスリンである、請求項19記載の化合物。
- Qがインスリンである、請求項24記載の化合物。
- ウシNεB29−[4−[[(3β,5β,12α)−23−カルボキシ−12−ヒドロキシ−24−ノルコラン−3−イル]アミノ]−4−オキソブタノイル]インスリン化合物。
- 4−[[(3β,5β,12α)−23−カルボキシ−12−ヒドロキシ−24−ノルコラン−3−イル]アミノ]−4−オキソブタン酸N−ヒドロキシスクシンイミジルエステル化合物。
- ウシ1−[[(3β,5β,12α)−23−[(1,1−ジメチル)エトキシカルボニル]−12−ヒドロキシ−24−ノルコラン−3−イル]アミノ]カルボニル−3,5−ビス[[4−(インスリン−NεB29−イル)−1,4−ジオキソブチル]アミノ]ベンゼン化合物。
- ウシ1−[[(3β,5β,12α)−23−[(1,1−ジメチル)エトキシカルボニル]−12−ヒドロキシ−24−ノルコラン−3−イル]アミノ]カルボニル−3−[[4−(インスリン−NεB29−イル)−1,4−ジオキソブチル]アミノ]−5−[[[[2−[[[4,7,10−トリス(カルボキシメチル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデシル]アセチル]アミノ]エチル]アミノ]−1,4−ジオキソブチル]アミノ]ベンゼン化合物。
- 111インジウムで標識されている、請求項36記載の化合物。
- 一般式:
M−N−O−P−Q
[式中、
Mは放射性ハロゲンであり、
Nは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、
Pは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Qは標的ペプチドであり、そしてここに、N、OまたはPのうちの少なくとも1つは置換胆汁酸であり、
前記置換胆汁酸は7位および12位にて水素、ヒドロキシルまたはケト官能基で適宜置換されていてもよい3−アミノ、24−カルボキシル官能基を有する胆汁酸であり、
前記他の連結基は2以上のアミノ酸、R 1 −(CH 2 ) n −R 2 またはその組合せからなる群から選択され、ここに、nは0〜10であり、R 1 はH 2 N−、HS−または−COOHであり、R 2 は活性化されたCOOH基であり、
前記標的ペプチドは前記置換胆汁酸のアミノ基または前記置換胆汁酸のカルボキシル基に結合している]
で示される化合物。 - QがLHRH、インスリン、オキシトシン、ソマトスタチン、NK−1、VIP、P物質、NPY、エンドセリンA、エンドセリンB、ブラジキニン、インターロイキン−1、EGF、CCK、ガラナン、MSH、ランレオチド、オクトレオチド、マルトースおよびアルギニン−バソプレシンからなる群から選択されるペプチドホルモンである、請求項38記載の化合物。
- 置換胆汁酸が以下の化合物:
(3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸、
(3β,5β,12α)−3−アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸、
(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸、
Lys−(3,6,9)−トリオキサウンデカン−1,11−ジカルボニル−3,7−ジデオキシ−3−アミノコール酸、
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシ−12−オキソコラン−24−酸および
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシコラン−24−酸
からなる群から選択される、請求項38記載の化合物。 - Qがインスリンである、請求項38記載の化合物。
- 診断用放射性核種と錯体化した請求項19または30記載の化合物を含む診断用イメージング剤。
- 診断用イメージング剤を製造する方法であって、注射用媒体に、請求項23または26記載の化合物を含む物質を加える工程を含む方法。
- 診断用イメージング剤を製造するキットであって、注射用医薬媒体を含む第一バイアルおよび請求項23記載の化合物を含む第二バイアルを含むキット。
- 医療用放射性核種と錯体化した請求項23または26記載の化合物を含む放射性医薬品を含有する医薬組成物。
- 放射性医薬品を製造する方法であって、注射用医薬媒体に、請求項23または26記載の化合物を含む物質を加える工程を含む方法。
- 放射性医薬品を製造するキットであって、注射用医薬媒体を含む第一バイアルおよび請求項23記載の化合物を含む第二バイアルを含むキット。
- さらに治療薬を含む請求項45記載の医薬組成物。
- 置換胆汁酸が以下の化合物:
(3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸、
(3β,5β,12α)−3−アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸、
(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸、
Lys−(3,6,9)−トリオキサウンデカン−1,11−ジカルボニル−3,7−ジデオキシ−3−アミノコール酸、
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシ−12−オキソコラン−24−酸および
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシコラン−24−酸
からなる群から選択される、請求項1記載の化合物。 - 医薬品化合物の半減期を改善するために、式:
N−O−P
[式中、
Nは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
Oはアルファアミノ酸または置換胆汁酸であり、
Pは存在しないか、あるいはアルファアミノ酸、置換胆汁酸または他の連結基であり、
ここに、N、OまたはPのうちの少なくとも1つは置換胆汁酸であり、
前記置換胆汁酸は7位および12位にて水素、ヒドロキシルまたはケト官能基で適宜置換されていてもよい3−アミノ、24−カルボキシル官能基を有する胆汁酸であり、
前記他の連結基は2以上のアミノ酸、R 1 −(CH 2 ) n −R 2 またはその組合せからなる群から選択され、ここに、nは0〜10であり、R 1 はH 2 N−、HS−または−COOHであり、R 2 は活性化されたCOOH基である]
を有するリンカーを診断薬部分、治療薬部分、金属キレート剤または放射性ハロゲンに結合させる方法。 - 置換胆汁酸が以下の化合物:
(3β,5β)−3−アミノコラン−24−酸、
(3β,5β,12α)−3−アミノ−12−ヒドロキシコラン−24−酸、
(3β,5β,7α,12α)−3−アミノ−7,12−ジヒドロキシコラン−24−酸、
Lys−(3,6,9)−トリオキサウンデカン−1,11−ジカルボニル−3,7−ジデオキシ−3−アミノコール酸、
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシ−12−オキソコラン−24−酸および
(3β,5β,7α)−3−アミノ−7−ヒドロキシコラン−24−酸
からなる群から選択される、請求項50記載の方法。
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