JP4606015B2 - ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体の新規医薬用途 - Google Patents
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Description
本発明は［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体又はそれらの医薬上許容される塩を有効成分とする細胞増殖阻害剤，抗癌剤，耐性癌細胞増殖抑制剤，多剤耐性癌治療に用いる抗癌剤又は血管新生阻害剤に関する。
従来，抗癌剤としては，非特許文献１に示されているようにアドリアマイシン，シスプラチン，タキソール，ビンクリスチン等が知られている。特に，アドリアマイシンを始めとするアンスラサイクリン系化合物は代表的な抗癌剤として広く臨床で使用されているが，十分な治療効果を示しているとはいえず，その他の抗癌剤においても効果は十分ではない。
さらに癌の化学療法においては，作用点や構造にあまり共通点が認められない各種の抗癌剤に対して癌細胞が同時に耐性を示す現象，即ち多剤耐性が知られており，又，治療中に抗癌剤の効果がなくなる"獲得耐性"が重要な問題となっている。多剤耐性の機構には，膜輸送蛋白質であるＰ−糖蛋白質（Ｐ−ｇｐ）や多剤耐性蛋白質（ＭＲＰ）１が関与していることが判明し，それらの分子レベルでの機能の解析が進められている。Ｐ−ｇｐとＭＲＰ１は，ＡＢＣトランスポーターファミリーのメンバーであり，薬剤耐性に関与するＡＢＣトランスポーターとしては他にＭＲＰ２〜ＭＲＰ５やＡＢＣ２が知られている。
一方，癌の増殖と血管新生とは密接な関係にあることが明らかとなってきた。即ち，癌の部位に血管新生が生じないと癌は微小な状態（ｄｏｒｍａｎｔ ｔｕｍｏｒ）にとどまっているが，血管新生が生じると腫瘍に酸素や栄養分が補給され癌の増殖や転移が促進されて，臨床的に悪性化することが解ってきた。
最近，前臨床段階では血管新生阻害剤が移植癌モデルでの癌増殖を抑制し，さらには縮小させ得ること，耐性癌が生じないことが実験的に証明され，臨床段階では血管新生と乳癌，前立腺癌，肺癌，大腸癌等多くの固形癌の悪性化との相関が示されている。
最近，前臨床段階では血管新生阻害剤が移植癌モデルでの癌増殖を抑制し，さらには縮小させ得ること，耐性癌が生じないことが実験的に証明され，臨床段階では血管新生と乳癌，前立腺癌，肺癌，大腸癌等多くの固形癌の悪性化との相関が示されている。
又，血管新生阻害剤は，糖尿病血管合併症の一つである糖尿病網膜症等の治療薬となる可能性があると言われている。現在，糖尿病網膜症に対する治療は対照療法的な側面が強く，治療が後手にまわり盲目に至る場合もある。
非特許文献２にはＮ−アルケニル基置換の２−アミノ−７−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンの合成が記載されているが，Ｎ−カルボニル基結合の２−アミノ−７−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体についても，それを用いた医薬についても記載されていない。
塚越 茂，癌化学療法の変遷，癌と化学療法 ２６：Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １，２３−３１（１９９９）
Ａｌｌｅｎ，Ｃ．Ｆ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４，ｐ７９６−８０１（１９５９）
これまでの抗癌剤には臨床現場で満足すべき治療効果を示すものはなく，新しい抗癌剤が求められている。
又，様々な作用機構による血管新生阻害剤が研究及び臨床段階にあるが，前臨床段階での抗腫瘍効果が不十分であり，臨床での有用性に疑問が持たれている。更に，糖尿病血管合併症の一つである糖尿病網膜症に対する有効な治療・予防薬が求められており，確実な効果が期待される新規血管新生阻害剤が望まれている。
又，様々な作用機構による血管新生阻害剤が研究及び臨床段階にあるが，前臨床段階での抗腫瘍効果が不十分であり，臨床での有用性に疑問が持たれている。更に，糖尿病血管合併症の一つである糖尿病網膜症に対する有効な治療・予防薬が求められており，確実な効果が期待される新規血管新生阻害剤が望まれている。
本発明者等は上記課題を解決すべく鋭意研究を行なった結果，［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体に細胞増殖阻害活性及び血管新生阻害作用を見出し，本発明を完成するに至った。
即ち，本発明は以下の１）〜８）に関する。
１）一般式（１）
即ち，本発明は以下の１）〜８）に関する。
１）一般式（１）
［式中，Ａｒは置換基を有していてもよいフェニル基若しくは置換基を有していてもよいＮ，Ｏ及びＳから選択される１個のヘテロ原子を含有する５〜６員の芳香族複素環基を示し，該フェニル基若しくは該芳香族複素環基はハロゲノ基，水酸基，シアノ基，ニトロ基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基及びアルキレンジオキシ基からなる置換基群より選ばれる同一又は異なった１又は２個の基で置換されていてもよく，Ｙは置換基を有していてもよいフェニル基又はＲＮＨ基を示し，Ｒはハロゲノ基，水酸基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基，（Ｃ１〜Ｃ７）アシルオキシ基，トリフルオロメチル基及びトリフルオロメトキシ基からなる置換基群より選ばれる同一又は異なった１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基又は
一般式（２）
一般式（２）
｛式中，Ｒ１は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し，Ｒ２は水素原子又はメチル基を示し，Ｒ３は水素原子，フェニル基（当該フェニル基はハロゲノ基，水酸基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基及び（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基からなる群から選ばれる１個の基で置換されていてもよい）又は（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル基（当該アルキル基は，ハロゲノ基，水酸基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基，（Ｃ１〜Ｃ７）アシルオキシ基及びトリフルオロメチル基からなる群から選ばれる同一又は異なった１又は２個の基で置換されていてもよい）を示す｝を示す］
で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体又はそれらの医薬上許容される塩を有効成分とする細胞増殖阻害剤。
で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体又はそれらの医薬上許容される塩を有効成分とする細胞増殖阻害剤。
２）一般式（１）のＡｒがフルオロ基，クロロ基，水酸基，メチル基，シアノ基，メトキシ基，エトキシ基，イソプロポキシ基，シクロプロピルオキシ基，イソブトキシ基及びメチレンジオキシ基からなる置換基群から選ばれる同一若しくは異なった１若しくは２個の基で置換されていてもよいフェニル基，ピリジン−３−イル基，ピリジン−４−イル基，チオフェン−２−イル基又はチオフェン−３−イル基であり，Ｙがフルオロ基，クロロ基，水酸基，メチル基，メトキシ基，エトキシ基，イソプロポキシ基及びメチレンジオキシ基からなる置換基群から選ばれる同一若しくは異なった１若しくは２個の基で置換されていてもよいフェニル基又はＲＮＨ基であり，Ｒがハロゲノ基，水酸基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基及び（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基からなる置換基群より選ばれる同一若しくは異なった１若しくは２個の基で置換されていてもよいフェニル基あるいは一般式（２）においてＲ１が水素原子であり，Ｒ２がメチル基であり，Ｒ３が（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル基（当該アルキル基はハロゲノ基，水酸基及び（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基からなる群から選ばれる１個の基で置換されていてもよい）又はＲ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり，Ｒ２が水素原子であり，Ｒ３がフェニル基（当該フェニル基は水酸基及び（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選ばれる１個の基で置換されていてもよい）である上記１）記載の細胞増殖阻害剤。
３）一般式（１）のＡｒが４−ヒドロキシフェニル基，４−メトキシフェニル基，３，４−メチレンジオキシフェニル基又はチオフェン−２−イル基であり，Ｙが４−クロロ−２−メトキシフェニル基又はＲＮＨ基であり，Ｒが２−メトキシフェニル基，イソプロピル基，１，５−ジメチルヘキシル基，４−ヒドロキシ−１，４−ジメチルペンチル基，５−ヒドロキシ−１，５−ジメチルヘキシル基，５−メトキシ−１，５−ジメチルヘキシル基，１−フェニルエチル基，１−（３−ヒドロキシフェニル）エチル基又は１−（３−メトキシフェニル）エチル基である上記１）記載の細胞増殖阻害剤。
４）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体が
（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−ヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，（Ｓ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア，４−クロロ−２−メトキシ−Ｎ−（７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ベンズアミド，（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，１−（２−メトキシフェニル）−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，１−イソプロピル−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，（Ｒ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア又は（Ｒ）−１−（５−ヒドロキシ−１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレアである上記１）記載の細胞増殖阻害剤。
（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−ヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，（Ｓ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア，４−クロロ−２−メトキシ−Ｎ−（７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ベンズアミド，（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，１−（２−メトキシフェニル）−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，１−イソプロピル−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，（Ｒ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア又は（Ｒ）−１−（５−ヒドロキシ−１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレアである上記１）記載の細胞増殖阻害剤。
５）上記１）〜４）のいずれか１項に記載の化合物を有効成分とする抗癌剤。
６）上記１）〜４）のいずれか１項に記載の化合物を有効成分とする耐性癌細胞増殖抑制剤。
７）上記１）〜４）のいずれか１項に記載の化合物を有効成分とする多剤耐性癌治療に用いる抗癌剤。
８）上記１）〜４）のいずれか１項に記載の化合物を有効成分とする血管新生阻害剤。
６）上記１）〜４）のいずれか１項に記載の化合物を有効成分とする耐性癌細胞増殖抑制剤。
７）上記１）〜４）のいずれか１項に記載の化合物を有効成分とする多剤耐性癌治療に用いる抗癌剤。
８）上記１）〜４）のいずれか１項に記載の化合物を有効成分とする血管新生阻害剤。
［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体又はそれらの薬理学上許容される塩は，様々な癌種に対して細胞増殖抑制作用を示し，抗癌剤，特に多剤耐性能を示す癌に対する化学療法剤等として利用可能である。又，該化合物は血管内皮細胞に対して増殖抑制活性を示し，血管新生阻害剤としても利用可能である。
［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体又はそれらの医薬上許容される塩を有効成分とする本発明の細胞増殖阻害剤，抗癌剤，耐性癌細胞増殖抑制剤，多剤耐性癌治療に用いる抗癌剤又は血管新生阻害剤は，上記一般式（１）で表される。
上記一般式（１）の置換基においてハロゲノ基とは，フルオロ基，クロロ基，ブロモ基又はヨード基であり，好ましくはフルオロ基又はクロロ基である。
上記一般式（１）の置換基において（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基とは，炭素数１〜６の直鎖，分枝鎖又は環状アルキル基を示し，例えば，メチル基，エチル基，ｎ−プロピル基，イソプロピル基，ｎ−ブチル基，イソブチル基，ｔ−ブチル基，ｎ−ペンチル基，イソペンチル基，２−メチルブチル基，ネオペンチル基，１−エチルプロピル基，ｎ−ヘキシル基，４−メチルペンチル基，３−メチルペンチル基，２−メチルペンチル基，１−メチルペンチル基，３，３−ジメチルブチル基，２，２−ジメチルブチル基，１，１−ジメチルブチル基，１，２−ジメチルブチル基，１，３−ジメチルブチル基，２，３−ジメチルブチル基，２−エチルブチル基，シクロプロピル基，シクロペンチル基又はシクロヘキシル基が挙げられる。好ましくはメチル基，エチル基，ｎ−プロピル基，イソプロピル基，ｎ−ブチル基，イソブチル基，ｔ−ブチル基，ｎ−ペンチル基又はｎ−ヘキシル基である。
上記一般式（１）の置換基において（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基としては，上記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基が酸素原子に結合した基が挙げられ，例えば，メトキシ基，エトキシ基，ｎ−プロポキシ基，イソプロポキシ基，ｎ−ブトキシ基，イソブトキシ基，ｔ−ブトキシ基，ｎ−ペンチルオキシ基，イソペンチルオキシ基，２−メチルブチルオキシ基，ネオペンチルオキシ基，１−エチルプロピルオキシ基，ｎ−ヘキシルオキシ基，４−メチルペンチルオキシ基，３−メチルペンチルオキシ基，２−メチルペンチルオキシ基，１−メチルペンチルオキシ基，３，３−ジメチルブチルオキシ基，２，２−ジメチルブチルオキシ基，１，１−ジメチルブチルオキシ基，１，２−ジメチルブチルオキシ基，１，３−ジメチルブチルオキシ基，２，３−ジメチルブチルオキシ基，２−エチルブチルオキシ基，シクロプロピルオキシ基，シクロペンチルオキシ基又はシクロヘキシルオキシ基が挙げられる。好ましくはメトキシ基，エトキシ基，ｎ−プロポキシ基，イソプロポキシ基，ｎ−ブトキシ基，イソブトキシ基又はｔ−ブトキシ基であり，より好ましくはメトキシ基又はエトキシ基である。
上記一般式（１）の置換基において（Ｃ１〜Ｃ７）アシルオキシ基としては，水素原子又は上記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基が結合したカルボニルオキシ基が挙げられ，例えば，ホルミルオキシ基，アセトキシ基，プロピオニルオキシ基，ブチリルオキシ基，イソブチリルオキシ基，バレリルオキシ基，イソバレリルオキシ基，ピバロイルオキシ基，ヘキサノイルオキシ基，シクロプロピルカルボニルオキシ基，シクロペンチルカルボニルオキシ基又はシクロヘキサンカルボニルオキシ基が挙げられる。好ましくはアセトキシ基，プロピオニルオキシ基又はピバロイルオキシ基であり，より好ましくはアセトキシ基である。
上記一般式（１）におけるＡｒとしての「置換基を有していてもよいＮ，Ｏ及びＳから選択される１個のヘテロ原子を含有する５〜６員の芳香族複素環基」においてＮ，Ｏ及びＳから選択される１個のヘテロ原子を含有する５〜６員の芳香族複素環基として具体的には，例えば，フラン−２−イル基，フラン−３−イル基，チオフェン−２−イル基，チオフェン−３−イル基，オキサゾール−５−イル基，イソキサゾール−５−イル基，チアゾール−５−イル基，ピリジン−２−イル基，ピリジン−３−イル基，ピリジン−４−イル基，ピリミジン−４−イル基又はピラジン−２−イル基が挙げられる。好ましくはフラン−２−イル基，フラン−３−イル基，チオフェン−２−イル基，チオフェン−３−イル基，ピリジン−３−イル基，ピリジン−４−イル基又はピリミジン−４−イル基であり，より好ましくはチオフェン−２−イル基，ピリジン−３−イル基又はピリジン−４−イル基であり，特にチオフェン−２−イル基が好ましい。
上記一般式（１）におけるＡｒとしての「置換基を有していてもよいフェニル基若しくは置換基を有していてもよいＮ，Ｏ及びＳから選択される１個のヘテロ原子を含有する５〜６員の芳香族複素環基」において置換基としては，ハロゲノ基，水酸基，シアノ基，ニトロ基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基及びアルキレンジオキシ基からなる置換基群より選ばれる同一又は異なった１又は２個の基が挙げられ，具体的には，フルオロ基，クロロ基，水酸基，メチル基，シアノ基，メトキシ基，エトキシ基，イソプロポキシ基，シクロプロピルオキシ基，イソブトキシ基及びメチレンジオキシ基からなる置換基群から選ばれる同一又は異なった１又は２個の基が挙げられる。
上記一般式（１）におけるＡｒとして具体的には，４−ヒドロキシフェニル基，４−メトキシフェニル基，３，４−メチレンジオキシフェニル基又はチオフェン−２−イル基等が挙げられる。
上記一般式（１）におけるＹとしてのＲＮＨ基においてＲとしては，「ハロゲノ基，水酸基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基，（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基，（Ｃ１〜Ｃ７）アシルオキシ基，トリフルオロメチル基及びトリフルオロメトキシ基からなる置換基群より選ばれる同一又は異なった１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル基」又は一般式（２）で表される基が挙げられる。
一般式（２）のＲ３における（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル基としては，炭素数１〜１０の直鎖，分枝鎖又は環状アルキル基が挙げられ，具体的には，上記の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基で挙げている基以外にｎ−ヘプチル基，１−メチルヘキシル基，２−メチルヘキシル基，３−メチルヘキシル基，４−メチルヘキシル基，５−メチルヘキシル基，１−プロピルブチル基，１，３−ジメチルペンチル基，１，４−ジメチルペンチル基，４，４−ジメチルペンチル基，オクチル基，１−メチルヘプチル基，２−メチルヘプチル基，３−メチルヘプチル基，４−メチルヘプチル基，５−メチルヘプチル基，６−メチルヘプチル基，１−プロピルペンチル基，２−エチルヘキシル基，１，３−ジメチルヘキシル基，１，４−ジメチルヘキシル基，１，５−ジメチルヘキシル基，５，５−ジメチルヘキシル基，ｎ−ノニル基，３−メチルオクチル基，４−メチルオクチル基，５−メチルオクチル基，６−メチルオクチル基，１−プロピルヘキシル基，２−エチルヘプチル基，１，３−ジメチルヘプチル基，１，４−ジメチルヘプチル基，１，５−ジメチルヘプチル基，１，６−ジメチルヘプチル基，６，６−ジメチルヘプチル基，ｎ−デシル基，１−メチルノニル基，３−メチルノニル基，８−メチルノニル基，３−エチルオクチル基，３，７−ジメチルオクチル基，７，７−ジメチルオクチル基，シクロプロピル基，シクロペンチル基，シクロヘキシル基，シクロヘキシルエチル基，４−メチルシクロヘキシル基，２，６−ジメチルシクロヘキシル基，４，４−ジメチルシクロヘキシル基，シクロヘプチル基，アダマンタン−１−イル基又はアダマンタン−２−イル基等を挙げることができ，上記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基の好ましい基に加えて，１−メチルヘキシル基，１，４−ジメチルペンチル基，１−メチルヘプチル基，１，４−ジメチルヘキシル基，１，５−ジメチルヘキシル基，１，６−ジメチルヘプチル基等が好ましく，上記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基のより好ましい基に加えて，１，４−ジメチルペンチル基，１，５−ジメチルヘキシル基等がより好ましい。
一般式（２）として好ましくはＲ１が水素原子であり，Ｒ２がメチル基であり，Ｒ３がハロゲノ基，水酸基及び（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシル基からなる群から選ばれる１個の基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル基，又は，Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり，Ｒ２が水素原子であり，Ｒ３が水酸基及び（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選ばれる１個の基で置換されていてもよいフェニル基である。
上記一般式（１）におけるＹとして具体的には，４−クロロ−２−メトキシフェニル基，又は，Ｒが２−メトキシフェニル基，イソプロピル基，１，５−ジメチルヘキシル基，４−ヒドロキシ−１，４−ジメチルペンチル基，５−ヒドロキシ−１，５−ジメチルヘキシル基，５−メトキシ−１，５−ジメチルヘキシル基，１−フェニルエチル基，１−（３−ヒドロキシフェニル）エチル基又は１−（３−メトキシフェニル）エチル基であるＲＮＨ基が挙げられる。
本発明に使用される一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体としては，例えば，
（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−ヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，
（Ｓ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア，
４−クロロ−２−メトキシ−Ｎ−（７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ベンズアミド，
（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，
１−（２−メトキシフェニル）−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，
１−イソプロピル−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，
（Ｒ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア，
（Ｒ）−１−（５−ヒドロキシ−１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア等が挙げられる。
（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−ヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，
（Ｓ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア，
４−クロロ−２−メトキシ−Ｎ−（７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ベンズアミド，
（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，
１−（２−メトキシフェニル）−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，
１−イソプロピル−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，
（Ｒ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア，
（Ｒ）−１−（５−ヒドロキシ−１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア等が挙げられる。
本発明に使用される一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体の製造法としては，Ｙが置換基を有していてもよいフェニル基の場合，例えば，置換［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン化合物を置換安息香酸又はその誘導体によりアシル化すればよい。具体的には，（財）日本化学会編 新実験化学講座第１４巻 有機化合物の合成と反応ＩＩ（発行所；丸善株式会社，１９７７年）ｐ．１１３６〜１１５４に記載の種々の合成法を応用したり，後記の参考例に示す方法等が挙げられる。
又，ＹがＲＮＨ基である［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンの尿素誘導体の製造法としては，例えば，置換［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン化合物をアミノカルボニル化反応に付せばよい。具体的には，（財）日本化学会編 新実験化学講座第１４巻 有機化合物の合成と反応ＩＩＩ（発行所；丸善株式会社，１９７７年）ｐ．１６２９〜１６３９に記載の種々の合成法を応用したり，後記の参考例に示す方法等が挙げられる。
該置換［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン化合物は，公知の［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体を製造する方法，例えば，特開平０４−０９９７７５号公報，米国特許第４４４４７７４号公報，レイター等の「テトラヘドロン」ペルガモン・ジャーナルズ １９８７年 第４３巻１１号 ｐ．２４９７−２５０４（Ｒｅｉｔｅｒ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４３，２４９７−２５０４（１９８７））等に記載の方法に準じて調製できる。例えば，具体的には後記の参考例に示す。
本発明における医薬上許容される塩とは，通常取り得る塩であれば特に限定されないが，例えば，アルカリ金属との塩，即ち，ナトリウム塩，カリウム塩等，又は酸との塩，即ち，塩酸塩，硫酸塩，燐酸塩等が好ましい。
一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体又はその医薬上許容される塩のプロドラッグとは，生体内における生理条件下で酵素や胃酸等による反応により一般式（１）の化合物に変換する化合物，即ち酵素的に酸化，還元，加水分解等を起こして化合物（１）に変化する化合物，胃酸等により加水分解等を起こして化合物（１）に変化する化合物や，「医薬品の開発」第７巻 分子設計（広川書店，１９９０年）ｐ．１６３−１９８に記載されているような，生理的条件で化合物（１）に変化する化合物であってもよく，これらのプロドラッグの本発明の医薬としての使用も本発明に含まれる。
本発明には，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体に異性体が存在する場合，それらの異性体及びその混合物も全て含まれる。
次に，本発明の薬理活性について説明する。一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体は，後記実施例に示すように，各種の培養されたヒト癌細胞，即ち，ヒト腎臓癌細胞ＵＯ−３１，ヒト乳癌細胞Ｔ４７Ｄ，ヒト腎臓癌細胞Ａ４９８，ヒト肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０，ヒト前立腺癌細胞ＰＣ−３，ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１，ヒトメラノーマＭＡＬＭＥ−３Ｍ又はヒト神経膠腫細胞Ｕ２５１等に対して強い増殖抑制作用を有する。このことは，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体が様々なヒトの固形癌に対して有効な治療剤として使用できることを示している。
又，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体は，例えば，バーキットリンパ腫細胞Ｄａｕｄｉ，急性リンパ性白血病細胞ＭＯＬＴ−３，急性前骨髄性白血病細胞ＨＬ−６０，慢性骨髄性白血病細胞Ｋ５６２，急性リンパ芽球性白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ，幼弱好塩基球由来慢性骨髄性白血病細胞ＫＵ８１２Ｆ，組織球性リンパ腫細胞Ｕ９３７又は急性単球骨髄性白血病細胞ＴＨＰ−１等に対して著しく強い増殖抑制作用を示す。従って，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体は様々なヒトの血液癌に対しても治療剤として使用可能である。
本発明の一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体を有効成分とする抗癌剤は，例えば，脳腫瘍，肺癌，膵臓癌，胃癌，大腸癌，前立腺癌，乳癌，卵巣癌，肝癌等の固形癌及びホジキン氏病，リンパ腫，白血病等の血液癌等の治療に使用できる。
又，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体はアドリアマイシン耐性癌細胞に対して増殖抑制作用を示すことから，多剤耐性に関与しているＰ−糖蛋白質（Ｐ−ｇｐ）や多剤耐性蛋白質（ＭＲＰ）等に作用していると考えられ，該誘導体は多剤耐性癌治療に用いる抗癌剤としても有用である。
さらに一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）又は塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）で刺激した血管内皮細胞に対して増殖抑制作用を示し，血管新生阻害剤として使用できる。従って，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体は，過度の血管新生がその発症原因の一つとして関与する各種疾患の予防及び／又は治療のための医薬として有用である。例えば，関節リウマチ，リウマチ様関節炎，糖尿病，心筋梗塞，潰瘍性大腸炎，乾癬症，強皮症，血管新生緑内障，糖尿病血管合併症である糖尿病網膜症等の予防及び／又は治療のためにヒトを含む哺乳類動物に使用可能である。又，癌の血管新生を阻害することにより，癌の増殖及び転移を抑制する薬剤としても有用である。
一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体又はその医薬上許容される塩は，そのまま投与することも，又，医薬上許容できる物質と混合した薬学的組成物として投与することもできる。薬学的組成物の剤型はいかなるものでもよい。又，これらの製剤は，治療上価値ある他の成分を含有してもよい。
薬学的組成物中の一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体又はその医薬上許容される塩の割合は，通常１〜９９重量％，好ましくは１〜８０重量％程度である。
投与方法としては，経口，注射，直腸内投与，門脈内投与，臓器の灌流，臓器への局所投与等いずれの投与方法でも可能である。
投与量は，投与方法，患者の状態，年齢，体重等により異なるが，通常の投与量は，０．０１ｍｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ，好ましくは，０．０５ｍｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを１日１回又は数回に分ける。又，この投与は１日若しくは連日行なうこともできるが，数日から数ヶ月の間をおいて反復投与を行なっても良い。必要に応じて上記以外の投与方法，投与量，投与スケジュールを用いることができる。
投与量は，投与方法，患者の状態，年齢，体重等により異なるが，通常の投与量は，０．０１ｍｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ，好ましくは，０．０５ｍｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを１日１回又は数回に分ける。又，この投与は１日若しくは連日行なうこともできるが，数日から数ヶ月の間をおいて反復投与を行なっても良い。必要に応じて上記以外の投与方法，投与量，投与スケジュールを用いることができる。
以下に実施例及び参考例を示し，本発明を更に詳細に説明するが，本発明の範囲はこれらに限定するものではない。
参考例において水素核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ）は，２００ＭＨｚにてＴＭＳを基準にしたδ値である。多重度は通常の表記法に従った。
又，ＭＳはマススペクトルによる分子イオンピーク値等を示し，ＥＳＩとはＥｌｅｃｔｒｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎの，ＡＰＣＩとはＡｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎの略でイオン化法の１つである。
本実施例に使用する一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体を表１に示す。
参考例において水素核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ）は，２００ＭＨｚにてＴＭＳを基準にしたδ値である。多重度は通常の表記法に従った。
又，ＭＳはマススペクトルによる分子イオンピーク値等を示し，ＥＳＩとはＥｌｅｃｔｒｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎの，ＡＰＣＩとはＡｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎの略でイオン化法の１つである。
本実施例に使用する一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体を表１に示す。
表１
表中，構造式の前に「（Ｓ）−」あるいは「（Ｒ）−」の記載があるものは，化合物が光学活性体であり，それぞれ（Ｓ）−体あるいは（Ｒ）−体であることを示す。
実施例１：細胞増殖抑制作用（１）
１０％牛胎児血清（Ｍｏｒｅｇａｔｅ社製）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（イワキ社製）を用いて，ヒト腎臓癌細胞ＵＯ−３１，ヒト乳癌細胞Ｔ４７Ｄ，ヒト腎臓癌細胞Ａ４９８，ヒト肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０，ヒト前立腺癌細胞ＰＣ−３，ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１，ヒトメラノーマＭＡＬＭＥ−３Ｍ，又はヒト神経膠腫細胞Ｕ２５１を３７℃，５％ＣＯ２下で培養した。これらの細胞を９６穴プレートへ播種し，１日間培養した後，本化合物を添加した。又，対照としてシスプラチン（ＣＤＤＰ）を添加した。更に３日間培養した後，細胞をメタノールで固定し，メチレンブルー色素を用いて染色した。染色後色素を０．３％塩酸水にて抽出し，６６０ｎｍの吸光度を測定した。増殖阻害活性は，化合物非添加群の吸光度に対する化合物添加群の吸光度の減少率で表し，化合物の濃度を変えて求めた吸光度の減少率と化合物の濃度をプロットした用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め，その値を表２に示した。
１０％牛胎児血清（Ｍｏｒｅｇａｔｅ社製）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（イワキ社製）を用いて，ヒト腎臓癌細胞ＵＯ−３１，ヒト乳癌細胞Ｔ４７Ｄ，ヒト腎臓癌細胞Ａ４９８，ヒト肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０，ヒト前立腺癌細胞ＰＣ−３，ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１，ヒトメラノーマＭＡＬＭＥ−３Ｍ，又はヒト神経膠腫細胞Ｕ２５１を３７℃，５％ＣＯ２下で培養した。これらの細胞を９６穴プレートへ播種し，１日間培養した後，本化合物を添加した。又，対照としてシスプラチン（ＣＤＤＰ）を添加した。更に３日間培養した後，細胞をメタノールで固定し，メチレンブルー色素を用いて染色した。染色後色素を０．３％塩酸水にて抽出し，６６０ｎｍの吸光度を測定した。増殖阻害活性は，化合物非添加群の吸光度に対する化合物添加群の吸光度の減少率で表し，化合物の濃度を変えて求めた吸光度の減少率と化合物の濃度をプロットした用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め，その値を表２に示した。
表２
結果から明らかなように，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体は様々な癌種の癌細胞に対して細胞増殖抑制作用を示した。
実施例２：細胞増殖抑制作用（２）
１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用いて，バーキットリンパ腫細胞Ｄａｕｄｉ，急性リンパ性白血病細胞ＭＯＬＴ−３，急性前骨髄性白血病細胞ＨＬ−６０，慢性骨髄性白血病細胞Ｋ５６２，急性リンパ芽球性白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ，幼弱好塩基球由来慢性骨髄性白血病細胞ＫＵ８１２Ｆ，組織球性リンパ腫細胞Ｕ９３７，又は急性単球骨髄性白血病細胞ＴＨＰ−１を，３７℃，５％ＣＯ２下で培養した。この細胞を９６穴プレートへ播種した後，本化合物又は対照としてのアドリアマイシン（ＡＤＲ）を添加し３日間培養した後，ＷＳＴ−１（０．１６ｍｇ／ｍＬ）及び１−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍ ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ（３．３μｇ／ｍＬ）を培養液に加え，４時間培養した。４５０ｎｍの吸光度から６６０ｎｍの吸光度を減じた値を求めた。増殖阻害活性は，化合物非添加群の値に対する化合物添加群の値の減少率で表し，化合物の濃度を変えて求めた減少率と化合物の濃度をプロットした用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め，その値を表３に示した。
１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用いて，バーキットリンパ腫細胞Ｄａｕｄｉ，急性リンパ性白血病細胞ＭＯＬＴ−３，急性前骨髄性白血病細胞ＨＬ−６０，慢性骨髄性白血病細胞Ｋ５６２，急性リンパ芽球性白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ，幼弱好塩基球由来慢性骨髄性白血病細胞ＫＵ８１２Ｆ，組織球性リンパ腫細胞Ｕ９３７，又は急性単球骨髄性白血病細胞ＴＨＰ−１を，３７℃，５％ＣＯ２下で培養した。この細胞を９６穴プレートへ播種した後，本化合物又は対照としてのアドリアマイシン（ＡＤＲ）を添加し３日間培養した後，ＷＳＴ−１（０．１６ｍｇ／ｍＬ）及び１−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍ ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ（３．３μｇ／ｍＬ）を培養液に加え，４時間培養した。４５０ｎｍの吸光度から６６０ｎｍの吸光度を減じた値を求めた。増殖阻害活性は，化合物非添加群の値に対する化合物添加群の値の減少率で表し，化合物の濃度を変えて求めた減少率と化合物の濃度をプロットした用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め，その値を表３に示した。
表３
結果から明らかなように，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体は様々なリンパ系腫瘍に対しても細胞増殖抑制作用を示した。
実施例３：細胞増殖抑制作用（３）
１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用いて，マウス白血病由来癌細胞Ｐ３８８又はそのアドリアマイシン耐性株Ｐ３８８／ＡＤＲを，３７℃，５％ＣＯ２下で培養した。この細胞を９６穴プレートへ播種し，１日間培養した後，本化合物又はＡＤＲを添加した。更に２日間培養した後，ＷＳＴ−１（０．１６ｍｇ／ｍＬ）及び１−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍ ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ（３．３μｇ／ｍＬ）を培養液に加え，４時間培養した。４５０ｎｍの吸光度から６６０ｎｍの吸光度を減じた値を求めた。増殖阻害活性は，化合物非添加群の値に対する化合物添加群の値の減少率で表し，化合物の濃度を変えて求めた減少率と化合物の濃度をプロットした用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め，その値を表４に示した。
１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用いて，マウス白血病由来癌細胞Ｐ３８８又はそのアドリアマイシン耐性株Ｐ３８８／ＡＤＲを，３７℃，５％ＣＯ２下で培養した。この細胞を９６穴プレートへ播種し，１日間培養した後，本化合物又はＡＤＲを添加した。更に２日間培養した後，ＷＳＴ−１（０．１６ｍｇ／ｍＬ）及び１−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍ ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ（３．３μｇ／ｍＬ）を培養液に加え，４時間培養した。４５０ｎｍの吸光度から６６０ｎｍの吸光度を減じた値を求めた。増殖阻害活性は，化合物非添加群の値に対する化合物添加群の値の減少率で表し，化合物の濃度を変えて求めた減少率と化合物の濃度をプロットした用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め，その値を表４に示した。
表４
結果から明らかなように，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体は多剤耐性癌細胞（Ｐ３８８／ＡＤＲ）に対しても感受性細胞（Ｐ３８８）とほぼ同程度の細胞増殖阻害作用を示した。
実施例４：血管内皮細胞に対する作用
２０％牛胎児血清，ヘパリン（６Ｕ／ｍＬ），ｅｎｄｏｔｈｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＥＣＧＦ）（３０μｇ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（培養液Ａ）に懸濁させたヒト臍帯静脈由来内皮細胞（ＨＵＶＥＣ；大日本製薬製）を５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製した。予め培養液Ａを１００μＬ／ｗｅｌｌ添加しておいた９６穴プレートに細胞懸濁液を１００μＬずつ加えた。３７℃，５％ＣＯ２下で１日間培養した後，ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄し，１％牛胎児血清，ヘパリン（６Ｕ／ｍＬ），ｅｎｄｏｔｈｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＥＣＧＦ）（１μｇ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（培養液Ｂ）を１６０μＬ／ｗｅｌｌ加えた。
試験化合物は，培養液Ｂにて希釈し，終濃度０．０１６から５０μＭになるように２０μＬ／ｗｅｌｌずつ添加した。さらに培養液Ｂでｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＶＥＧＦ又はｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂＦＧＦを終濃度１０ｎｇ／ｍＬ又は５ｎｇ／ｍＬとなるように２０μＬ／ｗｅｌｌずつ添加した。又，対照としてウッドら、キャンサー リサーチ 第６０巻 ２１７８頁（２００２年）（Ｗｏｏｄ Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．６０，ｐ．２１７８，（２００２））記載の現在臨床試験が進められているＶＥＧＦレセプターの選択的チロシンキナーゼ阻害剤であるＰＴＫ７８７を添加した。
更に２日間培養した後，ＷＳＴ−１（０．１６ｍｇ／ｍＬ）及び１−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍ ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ（３．３μｇ／ｍＬ）を培養液に加え，３時間培養した。４５０ｎｍの吸光度から６６０ｎｍの吸光度を減じた値を求めた。増殖阻害活性は，ＶＥＧＦ又はｂＦＧＦ添加時の吸光度を１００％，ＶＥＧＦ又はｂＦＧＦ非添加時の吸光度を０％とし，化合物の濃度を変えて求めた値と化合物の濃度をプロットした用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め，その値を表５に示した。
２０％牛胎児血清，ヘパリン（６Ｕ／ｍＬ），ｅｎｄｏｔｈｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＥＣＧＦ）（３０μｇ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（培養液Ａ）に懸濁させたヒト臍帯静脈由来内皮細胞（ＨＵＶＥＣ；大日本製薬製）を５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製した。予め培養液Ａを１００μＬ／ｗｅｌｌ添加しておいた９６穴プレートに細胞懸濁液を１００μＬずつ加えた。３７℃，５％ＣＯ２下で１日間培養した後，ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄し，１％牛胎児血清，ヘパリン（６Ｕ／ｍＬ），ｅｎｄｏｔｈｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＥＣＧＦ）（１μｇ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（培養液Ｂ）を１６０μＬ／ｗｅｌｌ加えた。
試験化合物は，培養液Ｂにて希釈し，終濃度０．０１６から５０μＭになるように２０μＬ／ｗｅｌｌずつ添加した。さらに培養液Ｂでｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＶＥＧＦ又はｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂＦＧＦを終濃度１０ｎｇ／ｍＬ又は５ｎｇ／ｍＬとなるように２０μＬ／ｗｅｌｌずつ添加した。又，対照としてウッドら、キャンサー リサーチ 第６０巻 ２１７８頁（２００２年）（Ｗｏｏｄ Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．６０，ｐ．２１７８，（２００２））記載の現在臨床試験が進められているＶＥＧＦレセプターの選択的チロシンキナーゼ阻害剤であるＰＴＫ７８７を添加した。
更に２日間培養した後，ＷＳＴ−１（０．１６ｍｇ／ｍＬ）及び１−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍ ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ（３．３μｇ／ｍＬ）を培養液に加え，３時間培養した。４５０ｎｍの吸光度から６６０ｎｍの吸光度を減じた値を求めた。増殖阻害活性は，ＶＥＧＦ又はｂＦＧＦ添加時の吸光度を１００％，ＶＥＧＦ又はｂＦＧＦ非添加時の吸光度を０％とし，化合物の濃度を変えて求めた値と化合物の濃度をプロットした用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め，その値を表５に示した。
表５
これより，一般式（１）で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体は，各血管新生因子で刺激したＨＵＶＥＣ細胞に対して細胞増殖抑制作用を示すことから，血管新生阻害作用を有するといえる。
参考例１ ７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミンの合成
市販の２−アセチルチオフェン（８．２０ｇ）と市販のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジエチルアセタール（１３．６ｍＬ）を，キシレン（１３ｍＬ）中１３０℃にて２日間加熱還流した。反応液を減圧下濃縮し，更にトルエンにて共沸処理した後，トルエン−ヘキサン混合溶媒にて結晶化して３−ジメチルアミノ−１−チオフェン−２−イルプロペノン（１１．５２ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：２．８０−３．３０（６Ｈ，ｍ），５．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．４），７．０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，５．０），７．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．１，５．０），７．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．１，３．７），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．４）
得られた３−ジメチルアミノ−１−チオフェン−２−イルプロペノン（１０．７８ｇ）をトルエン（１６０ｍＬ）に溶解し，３，５−ジアミノ−１，２，４−トリアゾール（１４．１５ｇ）を加えて１００℃にて撹拌した。１０−カンファースルホン酸（１３．８２ｇ）を加えた後，１．５時間加熱還流した。室温まで放冷した後，上清を除去した（デカント）。残渣を５％炭酸ナトリウム−１０％エタノール水溶液，１０％エタノール水，エタノール，塩化メチレンの順で懸濁洗浄後，減圧下乾燥して標記化合物（８．５５ｇ）を得た。
市販の２−アセチルチオフェン（８．２０ｇ）と市販のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジエチルアセタール（１３．６ｍＬ）を，キシレン（１３ｍＬ）中１３０℃にて２日間加熱還流した。反応液を減圧下濃縮し，更にトルエンにて共沸処理した後，トルエン−ヘキサン混合溶媒にて結晶化して３−ジメチルアミノ−１−チオフェン−２−イルプロペノン（１１．５２ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：２．８０−３．３０（６Ｈ，ｍ），５．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．４），７．０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，５．０），７．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．１，５．０），７．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．１，３．７），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．４）
得られた３−ジメチルアミノ−１−チオフェン−２−イルプロペノン（１０．７８ｇ）をトルエン（１６０ｍＬ）に溶解し，３，５−ジアミノ−１，２，４−トリアゾール（１４．１５ｇ）を加えて１００℃にて撹拌した。１０−カンファースルホン酸（１３．８２ｇ）を加えた後，１．５時間加熱還流した。室温まで放冷した後，上清を除去した（デカント）。残渣を５％炭酸ナトリウム−１０％エタノール水溶液，１０％エタノール水，エタノール，塩化メチレンの順で懸濁洗浄後，減圧下乾燥して標記化合物（８．５５ｇ）を得た。
参考例２ ７−（４−ベンジルオキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミンの合成
参考例１における２−アセチルチオフェンの代わりに４’−ベンジルオキシアセトフェノンを用いることにより標記化合物を得た。
参考例１における２−アセチルチオフェンの代わりに４’−ベンジルオキシアセトフェノンを用いることにより標記化合物を得た。
参考例３ ７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミンの合成
参考例１における２−アセチルチオフェンの代わりに４’−メトキシアセトフェノンを用いることにより標記化合物を得た。
参考例１における２−アセチルチオフェンの代わりに４’−メトキシアセトフェノンを用いることにより標記化合物を得た。
参考例４ （Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−ヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア（表１の化合物番号００１）の合成
参考例２で得られた７−（４−ベンジルオキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（８．００ｇ）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（７．６２ｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（１００ｍＬ）に溶解した。氷冷後，ピリジン（３．１ｍＬ）を加え，同温で４０分撹拌した。（Ｓ）−（＋）−２−アミノ−６−メチルヘプタン（６．４ｍＬ）を加えて室温に昇温後，一晩撹拌した。溶媒を減圧下留去し，残渣に塩化メチレン（１００ｍＬ）を加え溶解した。１Ｍ塩酸水溶液（１００ｍＬ×３），５％炭酸カリウム水溶液（１００ｍＬ×５），飽和食塩水（２００ｍＬ）にて順次洗浄後，有機層を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチル（２８６ｍＬ）に溶解し，ヘキサン（４２９ｍＬ）に滴下した。沈殿物をろ取し，さらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１％メタノール−塩化メチレンにて溶出）にて精製し，（Ｓ）−１−［７−（４−ベンジルオキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１，５−ジメチルヘキシル）ウレア（７．３９ｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）：４７３（Ｍ＋Ｈ）＋
次いで、（Ｓ）−１−［７−（４−ベンジルオキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１，５−ジメチルヘキシル）ウレア（７．１ｇ）及び５０％含水パラジウム炭素を酢酸（５７０ｍＬ）に懸濁し，水素雰囲気下室温にて５日間撹拌した。反応液をろ過剤（Ｃｅｌｉｔｅ）にてろ過し，ろ取物をメタノールで洗浄した。ろ液と洗浄液をあわせて減圧下濃縮後，得られた残渣を塩化メチレン（１５０ｍＬ）に溶解した。飽和食塩水（１００ｍＬ）で２回洗浄した。２回目の飽和食塩水層を塩化メチレン（７０ｍＬ×３）にて抽出した。有機層をあわせて減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１〜２％メタノール−塩化メチレンにて溶出）にて精製し，標記化合物（４．７２ｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）：３８３（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例２で得られた７−（４−ベンジルオキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（８．００ｇ）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（７．６２ｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（１００ｍＬ）に溶解した。氷冷後，ピリジン（３．１ｍＬ）を加え，同温で４０分撹拌した。（Ｓ）−（＋）−２−アミノ−６−メチルヘプタン（６．４ｍＬ）を加えて室温に昇温後，一晩撹拌した。溶媒を減圧下留去し，残渣に塩化メチレン（１００ｍＬ）を加え溶解した。１Ｍ塩酸水溶液（１００ｍＬ×３），５％炭酸カリウム水溶液（１００ｍＬ×５），飽和食塩水（２００ｍＬ）にて順次洗浄後，有機層を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチル（２８６ｍＬ）に溶解し，ヘキサン（４２９ｍＬ）に滴下した。沈殿物をろ取し，さらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１％メタノール−塩化メチレンにて溶出）にて精製し，（Ｓ）−１−［７−（４−ベンジルオキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１，５−ジメチルヘキシル）ウレア（７．３９ｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）：４７３（Ｍ＋Ｈ）＋
次いで、（Ｓ）−１−［７−（４−ベンジルオキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１，５−ジメチルヘキシル）ウレア（７．１ｇ）及び５０％含水パラジウム炭素を酢酸（５７０ｍＬ）に懸濁し，水素雰囲気下室温にて５日間撹拌した。反応液をろ過剤（Ｃｅｌｉｔｅ）にてろ過し，ろ取物をメタノールで洗浄した。ろ液と洗浄液をあわせて減圧下濃縮後，得られた残渣を塩化メチレン（１５０ｍＬ）に溶解した。飽和食塩水（１００ｍＬ）で２回洗浄した。２回目の飽和食塩水層を塩化メチレン（７０ｍＬ×３）にて抽出した。有機層をあわせて減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１〜２％メタノール−塩化メチレンにて溶出）にて精製し，標記化合物（４．７２ｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）：３８３（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例５ （Ｓ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア（表１の化合物番号００２）の合成
参考例３で得られた７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（４８３ｍｇ）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（６０５ｍｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（２０ｍＬ）に溶解した。氷冷後，ピリジン（０．２４３ｍＬ）を加え，同温で３０分撹拌した。（Ｓ）−１−フェニルエチルアミン（０．７８ｍＬ）を加えて室温に昇温後，１時間撹拌した。反応液に塩化メチレン（１００ｍＬ）を加え，４Ｍ塩酸水溶液（６０ｍＬ×３），蒸留水（８０ｍＬ），５％炭酸カリウム水溶液（８０ｍＬ）にて順次洗浄後，有機層を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）に溶解し，ヘキサン（１００ｍＬ）に滴下した。沈殿物を分取し，さらにエタノールにて懸濁後ろ取して，標記化合物（４１２ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．４７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０），３．８７（３Ｈ，ｓ），４．９７（１Ｈ，ｍ），７．１４（２Ｈ，ｍ），７．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９），８．２１（２Ｈ，ｍ），８．５７（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝７．７），８．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０），１０．１４（１Ｈ，ｂｒｓ）
ＭＳ（ＥＳＩ）：３８９（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例３で得られた７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（４８３ｍｇ）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（６０５ｍｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（２０ｍＬ）に溶解した。氷冷後，ピリジン（０．２４３ｍＬ）を加え，同温で３０分撹拌した。（Ｓ）−１−フェニルエチルアミン（０．７８ｍＬ）を加えて室温に昇温後，１時間撹拌した。反応液に塩化メチレン（１００ｍＬ）を加え，４Ｍ塩酸水溶液（６０ｍＬ×３），蒸留水（８０ｍＬ），５％炭酸カリウム水溶液（８０ｍＬ）にて順次洗浄後，有機層を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）に溶解し，ヘキサン（１００ｍＬ）に滴下した。沈殿物を分取し，さらにエタノールにて懸濁後ろ取して，標記化合物（４１２ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．４７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０），３．８７（３Ｈ，ｓ），４．９７（１Ｈ，ｍ），７．１４（２Ｈ，ｍ），７．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９），８．２１（２Ｈ，ｍ），８．５７（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝７．７），８．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０），１０．１４（１Ｈ，ｂｒｓ）
ＭＳ（ＥＳＩ）：３８９（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例６ ４−クロロ−２−メトキシ−Ｎ−（７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ベンズアミド（表１の化合物番号００３）の合成
市販の４−クロロ−２−メトキシ安息香酸（２２．４ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に溶解し，市販の（Ｄｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｓｕｌｆｕｒ ｔｒｉｆｌｕｏｒｉｄｅ（ＤＡＳＴ，１５．８μＬ，０．１２ｍｍｏｌ）を加え，室温にて１時間撹拌して，酸フロリドを調製した。参考例１で得られた７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（２１．７ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に懸濁し，ヘキサメチルジシラザンリチウム塩（１Ｍテトラヒドロフラン溶液，０．２ｍＬ）を加えて室温にて１０分間撹拌した。この反応液に，先に調製した酸フロリド溶液を加えて室温にて１５分間撹拌した。蒸留水（１ｍＬ）を加えて１時間撹拌後，塩化メチレン（４ｍＬ）及びメタノール（１ｍＬ）にて希釈し，４Ｍ塩酸水溶液（３ｍＬ×２），蒸留水（３ｍＬ），５％炭酸カリウム水溶液（３ｍＬ×２），ついで蒸留水（３ｍＬ）の順にて洗浄した。減圧下溶媒を留去して，標記化合物（１５．４ｍｇ）を得た。
市販の４−クロロ−２−メトキシ安息香酸（２２．４ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に溶解し，市販の（Ｄｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｓｕｌｆｕｒ ｔｒｉｆｌｕｏｒｉｄｅ（ＤＡＳＴ，１５．８μＬ，０．１２ｍｍｏｌ）を加え，室温にて１時間撹拌して，酸フロリドを調製した。参考例１で得られた７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（２１．７ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に懸濁し，ヘキサメチルジシラザンリチウム塩（１Ｍテトラヒドロフラン溶液，０．２ｍＬ）を加えて室温にて１０分間撹拌した。この反応液に，先に調製した酸フロリド溶液を加えて室温にて１５分間撹拌した。蒸留水（１ｍＬ）を加えて１時間撹拌後，塩化メチレン（４ｍＬ）及びメタノール（１ｍＬ）にて希釈し，４Ｍ塩酸水溶液（３ｍＬ×２），蒸留水（３ｍＬ），５％炭酸カリウム水溶液（３ｍＬ×２），ついで蒸留水（３ｍＬ）の順にて洗浄した。減圧下溶媒を留去して，標記化合物（１５．４ｍｇ）を得た。
参考例７ （Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア（表１の化合物番号００４）の合成
参考例３で得られた７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（３００ｍｇ）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（４１８ｍｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（１０ｍＬ）に溶解した。氷冷後，ピリジン（０．１６８ｍＬ）を加え，同温で１時間撹拌した。（Ｓ）−１，５−ジメチルヘキシルアミン（０．６９８ｍＬ）を加えて４時間３０分撹拌した。反応液を氷冷撹拌下の蒸留水（３００ｍＬ）に滴下し，塩化メチレン（５００ｍＬ）にて抽出した。有機層を５％炭酸カリウム水溶液（２００ｍＬ）及び蒸留水（２００ｍＬ×２）にて洗浄後，減圧下溶媒留去した。得られた油状の残渣を撹拌下の蒸留水（１５０ｍＬ）に滴下し，析出した固体をろ取後，冷メタノールにて洗浄して，標記化合物（２２７ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：０．８１（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６），１．０５−１．２１（６Ｈ，ｍ），３．７８（１Ｈ，ｍ），３．８９（３Ｈ，ｓ），７．１３−７．２３（２Ｈ，ｍ），７．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７），８．１７−８．２７（２Ｈ，ｍ），８．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９），１０．０１（１Ｈ，ｂｒｓ）
ＭＳ（ＥＳＩ）：３９７（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例３で得られた７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（３００ｍｇ）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（４１８ｍｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（１０ｍＬ）に溶解した。氷冷後，ピリジン（０．１６８ｍＬ）を加え，同温で１時間撹拌した。（Ｓ）−１，５−ジメチルヘキシルアミン（０．６９８ｍＬ）を加えて４時間３０分撹拌した。反応液を氷冷撹拌下の蒸留水（３００ｍＬ）に滴下し，塩化メチレン（５００ｍＬ）にて抽出した。有機層を５％炭酸カリウム水溶液（２００ｍＬ）及び蒸留水（２００ｍＬ×２）にて洗浄後，減圧下溶媒留去した。得られた油状の残渣を撹拌下の蒸留水（１５０ｍＬ）に滴下し，析出した固体をろ取後，冷メタノールにて洗浄して，標記化合物（２２７ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：０．８１（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６），１．０５−１．２１（６Ｈ，ｍ），３．７８（１Ｈ，ｍ），３．８９（３Ｈ，ｓ），７．１３−７．２３（２Ｈ，ｍ），７．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７），８．１７−８．２７（２Ｈ，ｍ），８．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９），１０．０１（１Ｈ，ｂｒｓ）
ＭＳ（ＥＳＩ）：３９７（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例８ １−（２−メトキシフェニル）−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア（表１の化合物番号００５）の合成
参考例１で得られた７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（２１７ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１２ｍＬ）に懸濁し，ヘキサメチルジシラザンリチウム塩（１Ｍテトラヒドロフラン溶液，２ｍＬ）を加えて室温にて５分間撹拌後，イソシアン酸２−メトキシフェニル（０．１３３ｍＬ）を加えて２０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（０．２ｍＬ）を加えて撹拌後，反応液を塩化メチレン（２０ｍＬ）にて希釈した．４Ｍ塩酸水溶液（１０ｍＬ×３），５％炭酸カリウム水溶液（１２ｍＬ），蒸留水にて順次洗浄後，無水硫酸ナトリウムにて乾燥し，減圧下溶媒留去した。残渣をメタノール，塩化メチレンの順に懸濁洗浄して，標記化合物（１２３ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．８８（３Ｈ，ｓ），６．９０−７．１４（３Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ）７．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．９，５．０），７．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１），８．１６−８．２６（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），８．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．９），８．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２），１０．５３（１Ｈ，ｂｒｓ），１０．６４（１Ｈ，ｂｒｓ）
参考例１で得られた７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（２１７ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１２ｍＬ）に懸濁し，ヘキサメチルジシラザンリチウム塩（１Ｍテトラヒドロフラン溶液，２ｍＬ）を加えて室温にて５分間撹拌後，イソシアン酸２−メトキシフェニル（０．１３３ｍＬ）を加えて２０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（０．２ｍＬ）を加えて撹拌後，反応液を塩化メチレン（２０ｍＬ）にて希釈した．４Ｍ塩酸水溶液（１０ｍＬ×３），５％炭酸カリウム水溶液（１２ｍＬ），蒸留水にて順次洗浄後，無水硫酸ナトリウムにて乾燥し，減圧下溶媒留去した。残渣をメタノール，塩化メチレンの順に懸濁洗浄して，標記化合物（１２３ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．８８（３Ｈ，ｓ），６．９０−７．１４（３Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ）７．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．９，５．０），７．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１），８．１６−８．２６（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ），８．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２，３．９），８．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２），１０．５３（１Ｈ，ｂｒｓ），１０．６４（１Ｈ，ｂｒｓ）
参考例９ １−イソプロピル−３−（７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア（表１の化合物番号００６）の合成
参考例１で得られた７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（９．７３ｇ）をテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）に懸濁し，ヘキサメチルジシラザンリチウム塩（１．７３Ｍテトラヒドロフラン溶液，５１．８ｍＬ）を加えて室温にて１０分間撹拌後，イソシアン酸イソプロピル（７．０４ｍＬ）を加えて３０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（１０ｍＬ）を加えて１５分間撹拌後，反応液を塩化メチレン（５００ｍＬ）にて希釈した．２Ｍ塩酸水溶液（６００ｍＬ×２），５％炭酸カリウム水溶液（６００ｍＬ），飽和食塩水（５００ｍＬ）にて順次洗浄後，無水硫酸ナトリウムにて乾燥し，減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３．６φ×２５ｃｍ，０〜２％メタノール−塩化メチレンにて溶出）にて精製後，酢酸エチルより結晶化して，標記化合物（８．４０ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．２５（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６），３．９６（１Ｈ，ｍ），７．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，４．９），７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２），７．９７（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝７．４），８．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．０，５．１），８．５５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．１，３．９），８．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２），１０．１７（１Ｈ，ｂｒｓ）
ＭＳ（ＥＳＩ）：３０３（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例１で得られた７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（９．７３ｇ）をテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）に懸濁し，ヘキサメチルジシラザンリチウム塩（１．７３Ｍテトラヒドロフラン溶液，５１．８ｍＬ）を加えて室温にて１０分間撹拌後，イソシアン酸イソプロピル（７．０４ｍＬ）を加えて３０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（１０ｍＬ）を加えて１５分間撹拌後，反応液を塩化メチレン（５００ｍＬ）にて希釈した．２Ｍ塩酸水溶液（６００ｍＬ×２），５％炭酸カリウム水溶液（６００ｍＬ），飽和食塩水（５００ｍＬ）にて順次洗浄後，無水硫酸ナトリウムにて乾燥し，減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３．６φ×２５ｃｍ，０〜２％メタノール−塩化メチレンにて溶出）にて精製後，酢酸エチルより結晶化して，標記化合物（８．４０ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．２５（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６），３．９６（１Ｈ，ｍ），７．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，４．９），７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２），７．９７（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝７．４），８．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．０，５．１），８．５５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．１，３．９），８．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２），１０．１７（１Ｈ，ｂｒｓ）
ＭＳ（ＥＳＩ）：３０３（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例１０ （Ｒ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア（表１の化合物番号００７）の合成
参考例３で得られた７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（４８３ｍｇ）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（６０５ｍｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（２０ｍＬ）に溶解した。氷冷後，ピリジン（０．２４３ｍＬ）を加え，同温で３０分撹拌した。（Ｒ）−１−フェニルエチルアミン（０．７８ｍＬ）を加えて室温に昇温後，１時間撹拌した。反応液に塩化メチレン（１００ｍＬ）を加え，４Ｍ塩酸水溶液（６０ｍＬ×３），蒸留水（８０ｍＬ），５％炭酸カリウム水溶液（８０ｍＬ）にて順次洗浄後，有機層を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）に溶解し，ヘキサン（１００ｍＬ）に滴下した。沈殿物を分取し，さらにエタノールにて懸濁後ろ取して，標記化合物（３９８ｍｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）：３８９（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例３で得られた７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（４８３ｍｇ）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（６０５ｍｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（２０ｍＬ）に溶解した。氷冷後，ピリジン（０．２４３ｍＬ）を加え，同温で３０分撹拌した。（Ｒ）−１−フェニルエチルアミン（０．７８ｍＬ）を加えて室温に昇温後，１時間撹拌した。反応液に塩化メチレン（１００ｍＬ）を加え，４Ｍ塩酸水溶液（６０ｍＬ×３），蒸留水（８０ｍＬ），５％炭酸カリウム水溶液（８０ｍＬ）にて順次洗浄後，有機層を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）に溶解し，ヘキサン（１００ｍＬ）に滴下した。沈殿物を分取し，さらにエタノールにて懸濁後ろ取して，標記化合物（３９８ｍｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）：３８９（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例１１ （Ｒ）−１−（５−ヒドロキシ−１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア（表１の化合物番号００８）の合成
参考例３で得られた７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（７２．４ｍｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（ＤＭＩ，３ｍＬ）に溶解し，クロロギ酸４−ニトロフェニル（９０．７ｍｇ）を加えて氷冷下撹拌後，ピリジン（３６．４μＬ）を加えて氷冷下４５分間撹拌した。（Ｒ）−６−アミノ−２−メチル−２−ヘプタノール（１７５ｍｇ）を加え，撹拌しながら一晩で徐々に室温まで昇温した。反応液にイソプロピルエーテル（１０ｍＬ）を加え，生成した油状沈殿物を分離後，更にイソプロピルエーテルで洗浄した。残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）にて溶解し，５％炭酸カリウム水溶液（１５ｍＬ）及び蒸留水にて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後，減圧下溶媒留去した。得られた残渣をゲルろ過カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０，２．１φ×１１０ｃｍ，メタノールにて溶出）にて精製し，標記化合物（４３．０ｍｇ）を得た。
ＭＳ（ＡＰＣＩ）：４１３（Ｍ＋Ｈ）＋
参考例３で得られた７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イルアミン（７２．４ｍｇ）を１，３−ジメチルイミダゾリジン−２−オン（ＤＭＩ，３ｍＬ）に溶解し，クロロギ酸４−ニトロフェニル（９０．７ｍｇ）を加えて氷冷下撹拌後，ピリジン（３６．４μＬ）を加えて氷冷下４５分間撹拌した。（Ｒ）−６−アミノ−２−メチル−２−ヘプタノール（１７５ｍｇ）を加え，撹拌しながら一晩で徐々に室温まで昇温した。反応液にイソプロピルエーテル（１０ｍＬ）を加え，生成した油状沈殿物を分離後，更にイソプロピルエーテルで洗浄した。残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）にて溶解し，５％炭酸カリウム水溶液（１５ｍＬ）及び蒸留水にて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後，減圧下溶媒留去した。得られた残渣をゲルろ過カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０，２．１φ×１１０ｃｍ，メタノールにて溶出）にて精製し，標記化合物（４３．０ｍｇ）を得た。
ＭＳ（ＡＰＣＩ）：４１３（Ｍ＋Ｈ）＋
Claims (3)
- 一般式（１）
一般式（２）
で表される［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体又はそれらの医薬上許容される塩を有効成分とする多剤耐性癌治療に用いる抗癌剤。 - 一般式（１）のＡｒが４−ヒドロキシフェニル基，４−メトキシフェニル基，３，４−メチレンジオキシフェニル基又はチオフェン−２−イル基であり，Ｙが４−クロロ−２−メトキシフェニル基又はＲＮＨ基であり，Ｒが２−メトキシフェニル基，イソプロピル基，１，５−ジメチルヘキシル基，４−ヒドロキシ−１，４−ジメチルペンチル基，５−ヒドロキシ−１，５−ジメチルヘキシル基，５−メトキシ−１，５−ジメチルヘキシル基，１−フェニルエチル基，１−（３−ヒドロキシフェニル）エチル基又は１−（３−メトキシフェニル）エチル基である請求項１記載の多剤耐性癌治療に用いる抗癌剤。
- ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体が
（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−ヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，（Ｓ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア，４−クロロ−２−メトキシ−Ｎ−（７−チオフェン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ベンズアミド，（Ｓ）−１−（１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレア，１−（２−メトキシフェニル）−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，１−イソプロピル−３−（７−チオフェン−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル）ウレア，（Ｒ）−１−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］−３−（１−フェニルエチル）ウレア又は（Ｒ）−１−（５−ヒドロキシ−１，５−ジメチルヘキシル）−３−［７−（４−メトキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル］ウレアである請求項１記載の多剤耐性癌治療に用いる抗癌剤。
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