JP4481535B2 - 血小板捕捉フィルターおよび血小板因子回収装置 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血小板捕捉フィルターおよび血小板因子回収装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、血小板由来の因子を採取する場合には、遠心分離法により全血血液から血小板を分離した後に、トロンビン等の血小板活性化剤を血小板に添加して、血小板を活性化させることにより、血小板から放出される因子（以下、「血小板因子」と言う。）を回収することが行なわれている。
【０００３】
この血小板因子としては、例えば、血小板由来増殖因子（Platelet derived growth factor ; PDGF）、トランスフォーミング成長因子（Transforming growth factor ; TGF）、上皮細胞成長因子（Epidermal growth factor ; EGF）、インスリン様増殖因子（Insulin like growth factor ; IGF）等が挙げられる。
【０００４】
そして、回収されたこれらの血小板因子は、創傷治療促進剤の原料として用いられている。
【０００５】
従来、血小板を活性化させる操作を行なう際には、その操作に先立って、▲１▼遠心分離操作により、多血小板血漿（ＰＲＰ）、濃厚血小板（ＰＣ）のような血漿中に血小板が浮遊した状態のもの（血小板浮遊液）を調整し、さらに、▲２▼前記血小板浮遊液において、血小板を沈降させた後、上清血漿を洗浄除去する前操作（前処理）が行なわれているが、この前処理には、多大な手間と時間とを要とするという問題点があった。
【０００６】
この問題点を解決するものとして、特表平７−５０７５５８号公報には、遠心分離法により分離された血小板浮遊液をフィルターに通して濾過し、フィルターで捕捉された血小板にトロンビン等の血小板活性化剤を添加して、血小板を活性化させることにより血小板因子を回収する方法が記載されている。
【０００７】
この方法は、比較的短時間で血小板因子を回収することができるが、この方法に用いられるフィルターは、本来、白血球を主として、白血球および血小板を捕捉するためのものである。このため、特に、全血血液を濾過した場合には、フィルターに、血小板とともに多量の白血球も捕捉される。
【０００８】
このため、捕捉された白血球により、経時的にフィルターの流路（細孔）が狭くなり、この流路の狭窄により、フィルターに捕捉された血小板は、刺激を受け、活性化されてしまう。
【０００９】
その結果、血小板から放出された血小板因子が、濾液と一緒にフィルターを通過してしまい、血小板因子の回収率が低下するという問題がある。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、例えば全血血液のような血小板を含む被処理液を濾過した際に、血小板の捕捉率が高く、かつ、白血球の捕捉率が低い血小板捕捉フィルターを提供すること、また、容易かつ短時間で、血小板から血小板因子を回収することができる血小板因子回収装置を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
このような目的は、下記（１）〜（２８）の本発明により達成される。
【００１４】
（１） 血小板を含む被処理液から前記血小板を捕捉する血小板捕捉フィルターであって、
流入口と流出口とを備えるハウジング内に、多孔質体で構成され、その表面をアルコキシアルキル（メタ）アクリレートとアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとを主とする共重合体で被覆されたフィルター部材を含むフィルターを収納してなり、
前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートは、２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）または２−メトキシエチルメタクリレート（ＭＥＭＡ）であり、
前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートは、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルアクリレート（ＤＭＡＥＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルアクリレート（ＤＭＡＰＡ）、および２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルメタアクリレート（ＤＭＡＰＭＡ）の中から選択された１つであり、
前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートと前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとの組成比は、８５：１５〜５０：５０であることを特徴とする血小板捕捉フィルター。
【００１５】
（２） 前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートは、前記２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）であり、
前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートは、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）である上記（１）に記載の血小板捕捉フィルター。
（３） 前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートと前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとの組成比は、８０：２０〜６０：４０である上記（１）または（２）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００１６】
（４） 前記フィルター部材は、その平均孔径が５〜２０μｍである上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００１７】
（５） 前記フィルター部材は、膜状多孔質体で構成され、それらを複数積層してなるものである上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００１８】
（６） 前記フィルター部材を構成する複数の前記膜状多孔質体は、それぞれ、不織布または発泡体で構成されている上記（５）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００１９】
（７） 前記フィルターは、その平均孔径または表面のゼータ電位のいずれか一方が、前記フィルター部材と異なるプレフィルター部材を含み、
該プレフィルター部材は、前記ハウジング内の前記フィルター部材より前記流入口側に位置している上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００２０】
（８） 前記プレフィルター部材は、その平均孔径が、３０〜１００μｍである上記（７）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００２１】
（９） 前記プレフィルター部材は、その表面のゼータ電位が、０〜２５ｍＶである上記（７）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００２２】
（１０） 前記プレフィルター部材は、膜状多孔質体で構成され、それらを複数積層してなるものである上記（７）ないし（９）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００２３】
（１１） 前記プレフィルター部材を構成する複数の前記膜状多孔質体は、それぞれ、不織布または発泡体で構成されている上記（１０）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００２４】
（１２） 前記フィルター全体に対する前記フィルター部材の占める体積率は、５０％以上である上記（１）ないし（１１）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００２５】
（１３） 上記（１）ないし（１２）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルターと、
前記流入口に接続され、前記血小板捕捉フィルター内に、前記被処理液を供給する第１のラインと、
前記流出口に接続され、前記血小板捕捉フィルター内を通過した液体を回収する第２のラインと、
前記血小板捕捉フィルターにより捕捉された血小板を活性化させ、該血小板から放出される血小板因子を回収する血小板因子回収手段とを有することを特徴とする血小板因子回収装置。
【００２６】
（１４） 前記血小板回収手段は、前記血小板を物理的刺激により活性化させる上記（１３）に記載の血小板因子回収装置。
【００２７】
（１５） 前記血小板因子回収手段は、前記第１のラインおよび／または前記第２のラインの一部を共用するよう構成されている上記（１３）または（１４）に記載の血小板因子回収装置。
【００２８】
（１６） 前記血小板因子回収手段は、前記血小板捕捉フィルターを介して設置された一対の容器を有し、このうち、第１の容器は、前記第１のラインに接続され、第２の容器は、前記第２のラインに接続されている上記（１３）ないし（１５）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００２９】
（１７） 前記第１のラインの途中には、第１の流路切替器具が設置され、該第１の流路切替器具を介して、前記第１の容器が前記第１のラインに接続されている上記（１６）に記載の血小板因子回収装置。
【００３０】
（１８） 前記第２のラインの途中には、第２の流路切替器具が設置され、該第２の流路切替器具を介して、前記第２の容器が前記第２のラインに接続されている上記（１６）または（１７）に記載の血小板因子回収装置。
【００３１】
（１９） 前記第１の容器と前記第２の容器との間で、血小板に刺激を与えるための液体を移動させることにより、前記血小板捕捉フィルターに捕捉された血小板と接触させ、これにより、前記血小板を活性化させる上記（１６）ないし（１８）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００３２】
（２０） 前記液体の移動は、少なくとも１往復行なわれる上記（１９）に記載の血小板因子回収装置。
【００３３】
（２１） 前記血小板の活性化操作時における前記液体の流量は、０．５〜１０ｍＬ／secである上記（１９）または（２０）に記載の血小板因子回収装置。
【００３４】
（２２） 前記第１の容器および前記第２の容器は、それぞれ、シリンジである上記（１６）ないし（２１）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００３５】
（２３） 前記血小板捕捉フィルター内に、洗浄液を供給する第３のラインを有する上記（１３）ないし（２２）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００３６】
（２４） 前記第３のラインは、前記血小板因子回収手段の上流側に接続されている上記（２３）に記載の血小板因子回収装置。
【００３７】
（２５） 前記第３のラインは、前記第１のラインの途中に接続されている上記（２３）または（２４）に記載の血小板因子回収装置。
【００３８】
（２６） 前記血小板捕捉フィルター内を通過した後の前記洗浄液を回収する第４のラインを有する上記（２３）ないし（２５）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００３９】
（２７） 前記第４のラインは、前記第２のラインの途中に接続されている上記（２６）に記載の血小板因子回収装置。
【００４０】
（２８） 前記被処理液は、全血血液である上記（１３）ないし（２７）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００４１】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の血小板捕捉フィルターおよび血小板因子回収装置を添付図面に示す好適実施形態に基づいて詳細に説明する。
【００４２】
図１は、本発明の血小板因子回収装置の全体構成を示す概略図であり、図２は、本発明の血小板捕捉フィルターの構成を示す分解斜視図（一部断面で示す）である。
【００４３】
図１に示す血小板因子回収装置１は、血小板を含む被処理液から血小板を捕捉し、かかる血小板から放出される血小板因子（以下、単に、「血小板因子」と言う。）を回収するための装置であり、本発明の血小板捕捉フィルター７と、第１のライン（被処理液供給ライン）２と、第３のライン（洗浄液供給ライン）３と、第２のライン（濾過済液回収ライン）４と、第４のライン（洗浄済液回収ライン）５と、血小板因子回収手段６とを有している。以下、各部の構成について、順次説明する。
【００４４】
なお、以下の説明では、血小板を含む被処理液として、全血血液を処理する場合を代表に説明する。
【００４５】
まず、本発明の血小板捕捉フィルター７から説明する。
本発明者は、鋭意検討を重ねた結果、血小板のフィルターへの吸着率は、白血球のそれよりも、フィルターの表面のゼータ電位の影響を受け易いことを見い出した。すなわち、本発明者は、フィルターの表面のゼータ電位を適宜設定することにより、フィルターに血小板をより選択的に捕捉させることができることを見い出した。
本発明は、このような知見に基づいてなされたものである。
【００４６】
図２に示す血小板捕捉フィルター７は、全血血液から血小板を捕捉する機能を有するものであり、ハウジング８と、ハウジング８内に設置されたフィルター９と、フィルター９の支持部材１０ａ、１０ｂとで構成されている。換言すれば、血小板捕捉フィルター７は、ハウジング８内に、フィルター９および支持部材１０ａ、１０ｂを収納してなるものである。
なお、以下の説明では、図２中、上側を「上部」、下側を「下部」と言う。
【００４７】
ハウジング８は、有底筒状をなす第１のハウジング部材（下部ハウジング部材）８１と、第１のハウジング部材８１に装着（固定）される天板部（天井）を有し、ほぼ筒状をなす第２のハウジング部材（上部ハウジング部材）８２とで構成されている。
【００４８】
第１のハウジング部材８１の底部には、ハウジング８内に連通する流出口（液体排出口）８１１が突出形成されている。
【００４９】
第１のハウジング部材８１の内側下部には、内腔部８１２を縮径した縮径部８１３が形成されている。第１のハウジング部材８１に第２のハウジング部材８２を装着し、内部にフィルター９および支持部材１０ａ、１０ｂを収納した状態（以下、この状態を、「血小板捕捉フィルター７の組み立て状態」と言う。）では、縮径部８１３に支持部材１０ａが設置（収納）される。
【００５０】
また、血小板捕捉フィルター７の組み立て状態では、内腔部８１２と後述する第２のハウジング部材８２の内腔部８２２とで画成される空間には、フィルター９が設置（収納）される。
【００５１】
また、第１のハウジング部材８１の上部には、外周に沿って、ほぼ円筒状をなす嵌合部８１４が形成されている。血小板捕捉フィルター７の組み立て状態では、この嵌合部８１４の内側に、第２のハウジング部材８２の嵌合部８２４が挿入される。
【００５２】
第２のハウジング部材８２の天板部には、ハウジング８内に連通する流入口（液体導入口）８２１が突出形成されている。
【００５３】
第２のハウジング部材８２の内側上部には、内腔部８２２を縮径した縮径部８２３が形成されている。血小板捕捉フィルター７の組み立て状態では、縮径部８２３に支持部材１０ｂが設置される。
【００５４】
また。第２のハウジング部材８２の下部には、内周に沿って、ほぼ円筒状をなす嵌合部８２４が形成されている。血小板捕捉フィルター７の組み立て状態では、この嵌合部８２４が嵌合部８１４の内側に挿入され、これらが嵌合することにより、第１のハウジング部材８１と第２のハウジング部材８２とが固定される。
【００５５】
ハウジング８の構成材料としては、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ−（４−メチルペンテン−１）、ポリカーボネート、アクリル樹脂、アクリルニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体、ポリエチレンテレフタレート等のポリエステル、ブタジエン−スチレン共重合体、ポリアミド（例えば、ナイロン６、ナイロン６・６、ナイロン６・１０、ナイロン１２）のような各種樹脂が挙げられる。
【００５６】
フィルター９は、それぞれ、多孔質体で構成されるフィルター部材９１およびプレフィルター部材９２とを有している。
【００５７】
フィルター部材９１は、血小板を捕捉する主たる部分であり、複数のほぼ円盤状をなす多孔質膜（膜状多孔質体）９１１を積層してなるものである。
【００５８】
各多孔質膜９１１としては、それぞれ、例えば、ポリウレタン、ポリビニルアルコール、ポリプロピレン、ポリエーテルポリアミド、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート等の合成樹脂からなる不織布、発泡体（連通孔を有するスポンジ状多孔質体）、織布、メッシュ等が挙げられるが、これらの中でも、特に、不織布または発泡体を用いるのが好ましい。各多孔質膜９１１として、前記合成樹脂からなる不織布または発泡体を用いることにより、孔径のコントロール等が容易であり、生産性に優れるという利点がある。
【００５９】
各多孔質膜９１１の平均厚さは、その構成材料、形態等により適宜設定され、特に限定されないが、例えば、０．０５〜５ｍｍ程度とするのが好ましく、０．１〜３ｍｍ程度とするのがより好ましい。
【００６０】
また、多孔質膜９１１の設置数としては、平均厚さにより適宜設定され、特に限定されないが、例えば、２〜１００枚程度とするのが好ましく、３〜８０枚程度とするのが好ましい。
【００６１】
フィルター部材９１（各多孔質膜９１１）は、その表面のゼータ電位が、例えば、２６〜３８ｍＶ程度とされているのが好ましく、２９〜３５ｍＶ程度とされているのがより好ましい。フィルター部材９１の表面のゼータ電位を前記範囲内とすることにより、血小板捕捉フィルター７では、血小板の捕捉率を向上させることができるとともに、白血球の捕捉率を低下させることができる。
【００６２】
このため、血小板捕捉フィルター７では、血小板をより選択的に捕捉することができるので、白血球の捕捉量の増加に伴う経時的なフィルター部材９１の流路（細孔）の狭窄（以下、単に、「目詰まり」と言う。）を好適に防止（抑制）することができる。その結果、血小板捕捉フィルター７では、フィルター部材９１に捕捉された血小板が、この目詰まりにより刺激を受け、活性化されるのを好適に防止（抑制）することができる。
【００６３】
なお、フィルター部材９１の表面のゼータ電位が低すぎると、フィルター部材９１の平均孔径等によっては、血小板の捕捉率を十分にできない場合があり、一方、フィルター部材９１の表面のゼータ電位が高すぎると、血小板の捕捉時に、血小板が活性化してしまう場合がある。
【００６４】
このようなフィルター部材９１の表面のゼータ電位の調整方法としては、例えば、▲１▼〜▲３▼の方法が挙げられる。
【００６５】
▲１▼ フィルター部材９１の表面を、ゼータ電位を調整可能な物質（例えばアミノ基のようなカチオン性官能基を有する物質）で後処理（例えば、被覆等）する方法。
【００６６】
▲２▼ フィルター部材９１の構成材料として、それ自体が前記範囲内のゼータ電位を有するものを使用する方法。
【００６７】
▲３▼ フィルター部材９１の構成材料中に、予めゼータ電位を調整可能な物質を含有または結合させておき、かかる材料を用いてフィルター部材９１を形成する方法。
【００６８】
これらの中でも、フィルター部材９１の表面のゼータ電位の調整方法としては、フィルター部材９１の表面を、ゼータ電位を調整可能な物質で被覆する方法を用いるのが好ましい。この方法によれば、フィルター部材９１の構成材料の選択の幅を広げることができるとともに、フィルター部材９１の表面のゼータ電位を、より容易かつ確実に調整することができる。
【００６９】
ゼータ電位を調整可能な物質としては、フィルター部材９１の表面のゼータ電位を前記範囲内に調整可能な物質であれば、いかなるものを用いてもよいが、例えば、アルコキシアルキル（メタ）アクリレートと、塩基性官能基を有するアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとを主とする共重合体を用いるのが好ましい。この共重合体は、その付着量や、それらを構成するモノマーの組成比等を適宜設定することにより、容易にフィルター部材９１の表面のゼータ電位を調整することができる。
【００７０】
アルコキシアルキル（メタ）アクリレートとしては、例えば、２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）、２−メトキシエチルメタクリレート（ＭＥＭＡ）等を用いることができる。
【００７１】
一方、アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとしては、例えば、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルアクリレート（ＤＭＡＥＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルアクリレート（ＤＭＡＰＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルメタアクリレート（ＤＭＡＰＭＡ）等を用いることができる。
【００７２】
主として、これらのモノマーで構成される共重合体で被覆されたフィルター部材９１を用いることにより、血小板捕捉フィルター７では、血小板の捕捉率をより向上させることができるとともに、白血球の捕捉率をより確実に低下させることができる。
【００７３】
また、アルコキシアルキル（メタ）アクリレートとアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとの組成比は、特に限定されないが、例えば、８５：１５〜５０：５０程度であるのが好ましく、８０：２０〜６０：４０程度であるのがより好ましい。各モノマーの組成比を前記範囲内とすることにより、血小板捕捉フィルター７には、優れた血小板の捕捉率と、血小板の捕捉時における血小板の活性化の優れた抑制効果とを両立させることができる。
【００７４】
なお、各モノマーの組成比が前記下限値未満であると、アルコキシアルキル（メタ）アクリレートおよび／またはアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートの種類等によっては、フィルター部材９１の血小板の捕捉率を十分にすることができない場合があり、一方、これらの組成比が前記上限値を超えると、アルコキシアルキル（メタ）アクリレートおよび／またはアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートの種類等によっては、フィルター部材９１の血小板の捕捉時における血小板の活性化の抑制効果を十分にすることができない場合がある。
【００７５】
また、フィルター部材９１（各多孔質膜９１１）の平均孔径としては、特に限定されないが、例えば、５〜２０μｍ程度とするのが好ましく、８〜１５μｍ程度とするのがより好ましい。フィルター部材９１の平均孔径が前記下限値未満の場合、フィルター部材９１の流入口８２１側の面（図２中、上部の面）に、白血球が非特異的に捕捉されることがあり、その結果、目詰まりにより、捕捉された血小板が刺激を受け、活性化されることがある。一方、フィルター部材９１の平均孔径が前記上限値を超えた場合、フィルター部材９１では、血小板の捕捉率が低下することがある。
【００７６】
換言すれば、フィルター部材９１の平均孔径を前記範囲内とすることにより、フィルター部材９１では、白血球の非特異的な捕捉の増大（増加）と、血小板の捕捉率の低下とを好適に防止（抑制）することができる。
【００７７】
ハウジング８内には、フィルター部材９１より流入口８２１側に、プレフィルター部材９２が設置されている。
【００７８】
プレフィルター部材９２は、フィルター部材９１の流路（細孔）に、主に白血球による目詰まりが生じるのを防止（抑制）する機能を有するものであり、複数の多孔質膜（膜状多孔質体）９２１を積層してなるものである。
【００７９】
各多孔質膜９２１は、それぞれ、前記多孔質膜９１１と同様の合成樹脂からなる不織布または発泡体で構成され、その形状や寸法等は、前記多孔質膜９１１と同様のものとすることができる。
【００８０】
また、多孔質膜９２１の設置数としては、平均厚さにより適宜設定され、特に限定されないが、例えば、１〜３０枚程度とするのが好ましく、２〜１０枚程度とするのが好ましい。
【００８１】
このプレフィルター部材９２（各多孔質膜９２１）は、前記フィルター部材９１と、その平均孔径や表面のゼータ電位が異なるものを用いるのが好ましい。
【００８２】
平均孔径を異なるものとする場合には、プレフィルター部材９２の平均孔径は、フィルター部材９１の平均孔径より大きく設定され、具体的には、３０〜１００μｍ程度とするのが好ましく、５０〜８０μｍ程度とするのがより好ましい。
【００８３】
一方、表面のゼータ電位を異なるものとする場合には、プレフィルター部材９２の表面のゼータ電位は、フィルター部材９１の表面のゼータ電位より小さく設定され、具体的には、０〜２５ｍＶ程度とするのが好ましく、５〜１５ｍＶ程度とするのがより好ましい。
【００８４】
このような構成とすることにより、プレフィルター部材９２は、フィルター部材９１の目詰まりを、より確実に防止（抑制）することができる。
【００８５】
このプレフィルター部材９２の表面のゼータ電位の調整方法としては、前記フィルター部材９１で挙げたものと同様の方法を用いることができる。
【００８６】
なお、プレフィルター部材９２（各多孔質膜９２１）は、前記フィルター部材９１と、その平均孔径および表面のゼータ電位のいずれか一方が異なるものであっても、双方が異なるものであってもよい。
【００８７】
このようなフィルター９では、その全体に対するフィルター部材９１の占める体積率が、例えば、５０％以上程度であるのが好ましく、７０％以上程度であるのがより好ましい。このような体積率の範囲内において、フィルター部材９１とプレフィルター部材９２とは、それぞれ、その機能を如何なく発揮することができる。
【００８８】
フィルター９の下部および上部には、それぞれ、支持部材１０ａ、１０ｂが装着され、この状態でハウジング８内に収納される。支持部材１０ａ、１０ｂは、それぞれ、フィルター９の支持部材としての機能を有する他、フィルター９への液体の供給、フィルター９からの液体の排出を円滑に行なうための機能を有するものである。すなわち、支持部材１０ａ、１０ｂは、それぞれ、流路確保部材ということもできる。
【００８９】
これらの支持部材１０ａ、１０ｂとしては、例えばシリコーン等の柔軟性を有する材料で構成されたリング１０１と、このリング１０１の内側に挿入されたメッシュ（拡散部材）１０２とで構成されている。リング１０１は、例えば０．１〜２ｍｍ程度の厚さを有している。
【００９０】
支持部材１０ｂの設置により、そのリング１０１の内側に流入口８２１に連通する空間が形成され、流入口８２１から流入した液体のフィルター９への流路が確保され、支持部材１０ａの設置により、そのリング１０１の内側に流出口８１１に連通する空間が形成され、フィルター９から流出口８１１へ排出される液体の流路が確保される。すなわち、前記フィルター９は、流入口８２１に連通する空間と流出口８１１に連通する空間とを区画するようハウジング８内に設置される。
【００９１】
また、支持部材１０ａ、１０ｂにおいて、リング１０１の内側にメッシュ１０２を設置したことにより、リング１０１の内側空間を液体が通過する際に、均一分散（拡散）され、濾過、血小板の捕捉、洗浄等の効率を向上させることができる。
【００９２】
なお、支持部材１０ａ、１０ｂとしては、前記構成に限定されず、例えば、各種セラミックス材料等からなる多孔質体等であってもよい。
【００９３】
また、これらの支持部材１０ａ、１０ｂは、必要に応じて（例えば、ハウジング８の流出口８１１および流入口８２１の内径の寸法等により）、省略することもできる。
【００９４】
以上説明したように、本発明の血小板捕捉フィルター７は、血小板の捕捉率が極めて高く、白血球の捕捉率が極めて低い。このため、本発明の血小板捕捉フィルター７では、全血血液を遠心分離等の前処理を施すことなくそのまま処理することができるいう利点（特徴）がある。
【００９５】
次に、血小板捕捉フィルター７が組み込まれた血小板因子回収装置１全体について説明する。
【００９６】
第１のライン２は、血小板捕捉フィルター７内に全血血液（被処理液）を供給するためのラインであり、主に、チューブ２１と、チューブ２１の一端に接続された針管２２とで構成されている。チューブ２１の他端は、血小板捕捉フィルター７（第２のハウジング部材８２）の流入口８２１に接続されている。
【００９７】
針管２２は、瓶針で構成されており、全血血液（被処理液）が収納された血液バッグ（図示せず）のゴム栓（栓体）を刺通することができる。針管２２で前記ゴム栓を刺通することにより、血小板捕捉フィルター７内と血液バッグ（容器）内とを連通して、全血血液を血小板捕捉フィルター７内へ供給することができる。
【００９８】
チューブ２１の途中には、チューブ２１の内部流路を遮断・開放し得る流路開閉手段としてのクランプ２４が設置されている。
【００９９】
また、チューブ２１の途中には、血小板捕捉フィルター７の近傍に、後述する血小板因子回収手段６を構成するシリンジ６１を接続する第１の三方活栓（第１の流路切替器具）６２が設置されている。
【０１００】
なお、本実施形態では、チューブ２１の一端には、針管２２が接続されているが、これに代わり、直接、前記血液バッグが接続されていてもよい。
【０１０１】
また、針管２２は、例えば翼状針等の穿刺針で構成されていてもよい。この場合、穿刺針を供血者（ドナー）の血管に穿刺して、直接、供血者から血小板捕捉フィルター７内に採血血液を供給することができる。なお、この場合、第１のラインの途中には、採血血液中に抗凝固剤を添加するための抗凝固剤供給ラインを接続しておくようにするのが好ましい。
【０１０２】
第３のライン３は、血小板捕捉フィルター７内に洗浄液を供給するためのラインであり、主に、チューブ３１と、チューブ３１の一端に接続された針管３２とで構成されている。チューブ３１の他端は、Ｙ字状の分岐コネクタ３３を介して、チューブ２１の途中に接続されている。すなわち、第３のライン３は、第１のライン２の途中に接続されている。
【０１０３】
針管３２は、瓶針で構成されており、洗浄液が収納された洗浄液バッグ（図示せず）のゴム栓（栓体）を刺通することができる。針管３２で前記ゴム栓を刺通することにより、血小板捕捉フィルター７内と洗浄液バッグ（容器）内とを連通して、洗浄液を血小板捕捉フィルター７内へ供給することができる。
【０１０４】
チューブ３１の途中には、このチューブ３１の内部流路を遮断・開放し得る流路開閉手段としてのクランプ３４が設置されている。
【０１０５】
また、前記分岐コネクタ３３は、後述する血小板因子回収手段６の第１の三方活栓６２より上流側に設置されている。すなわち、第３のライン３は、血小板因子回収手段６の上流側に接続されている。
【０１０６】
第３のライン３により供給される洗浄液としては、例えば、生理食塩水、ハンクス平衡塩溶液、ダルベッコ平衡塩溶液のような各種電解質液、または、ブドウ糖液のような糖液や、ＡＣＤ−Ａ液、ＣＰＤＡ−１液のような血液保存液等が好適に使用される。
【０１０７】
なお、本実施形態では、チューブ３１の一端には、針管３２が接続されているが、これに代わり、直接、前記洗浄液バッグが接続されていてもよい。
【０１０８】
また、チューブ３１の他端は、直接、血小板捕捉フィルター７に接続されていてもよい。
【０１０９】
さらに、第３のライン３は、必要に応じて、省略することもできる。この場合、第１のライン２の針管２１を前記洗浄液バッグに繋ぎ換えて用いるようにすればよい。
【０１１０】
第２のライン４は、血小板捕捉フィルター７内を通過した後の全血血液（被処理液：液体）、すなわち、血小板が捕捉された後の全血血液（処理済液）を回収するためのラインであり、主に、一端が血小板捕捉フィルター７（第１のハウジング部材８１）の流出口８１１に接続され、他端が処理済液回収バッグ４０内に連通するよう接続されたチューブ４１で構成されている。
【０１１１】
チューブ４１の途中には、チューブ４１の内部流路を遮断・開放し得る流路開閉手段としてのクランプ４４が設置されている。
【０１１２】
また、チューブ４１の途中には、血小板捕捉フィルター７の近傍に、後述する血小板因子回収手段６を構成するシリンジ６３を接続する第２の三方活栓（第２の流路切替器具）６４が設置されている。
【０１１３】
本実施形態では、チューブ４１の他端には、処理済液回収バッグ４０が接続されているが、これに代わり、例えば、返血ラインおよび返血用ポンプ等で構成される返血手段を設け、処理済液が、直接、供血者に返血されるようにしてもよい。
【０１１４】
第４のライン５は、血小板捕捉フィルター７内を通過した後の洗浄液（洗浄済液）を回収するためのラインであり、主に、一端がチューブ４１の途中に設置されたＹ字状をなす分岐コネクタ５３に接続され、他端が洗浄済液回収バッグ５０内に連通するよう接続されたチューブ５１で構成されている。すなわち、第４のライン５は、第２のライン４の途中に接続されている。
【０１１５】
チューブ５１の途中には、このチューブ５１の内部流路を遮断・開放し得る流路開閉手段としてのクランプ５４が設置されている。
【０１１６】
また、前記分岐コネクタ５３は、後述する血小板因子回収手段６の第２の三方活栓６４より下流側に設置されている。
【０１１７】
なお、チューブ５１の一端は、直接、血小板捕捉フィルター７に接続されていてもよい。
【０１１８】
また、第４のライン５は、必要に応じて、省略することもできる。この場合、前記洗浄済液は、第２のライン４を用いて回収するようにすればよい。
【０１１９】
血小板因子回収手段６は、血小板捕捉フィルター７により捕捉された血小板を活性化させ、この血小板から放出される血小板因子を回収する機能を有するものであり、主に、血小板捕捉フィルター７を介して設置された一対のシリンジ（第１の容器および第２の容器）６１、６３で構成されている。
【０１２０】
このうち、シリンジ（第１の容器）６１は、第１の三方活栓（第１の流路切替器具）６２を介して、チューブ２１（第１のライン２）の途中に接続され、また、シリンジ（第２の容器）６３は、第２の三方活栓（第２の流路切替器具）６４を介して、チューブ４１（第２のライン４）の途中に接続されている。
【０１２１】
血小板因子回収手段６では、第１の三方活栓６２および第２の三方活栓６４の流路の切替により、シリンジ６１とシリンジ６３との間で、交互に液体を移動させることができる。すなわち、血小板因子回収手段６は、液体が移動可能な流路（液流通手段）を有しており、本実施形態では、この流路が第１のライン２および第２のライン４の一部を共用するよう構成されている。これにより、血小板因子回収装置１の簡略化および小型化を図ることができる。
【０１２２】
また、本実施形態では、この流路の上流側に第３のライン３が接続されているため、後述するように、血小板因子の回収操作に先立って、流路内が洗浄液で洗浄されることとなる。このため、得られる血小板因子への不要性分（特に、白血球）等の混入をより低下させることができる。
【０１２３】
なお、血小板因子回収手段６は、第１のライン２および第２のライン４のいずれか一方と、その一部を共用するよう構成されていてもよいし、また、第１のライン２および第２のライン４と、別途、独立して設けられていてもよい。
【０１２４】
このような血小板因子回収手段６では、シリンジ６１、６３との間で、血小板に刺激を与えるための液体を移動させることにより、血小板捕捉フィルター７に捕捉された血小板と接触させ、これにより、血小板を活性化させる。すなわち、血小板因子回収手段６は、血小板を物理的刺激により活性化させるよう構成されている。
【０１２５】
そして、このとき、血小板因子回収手段６では、血小板から放出される血小板因子を、前記液体とともに、シリンジ６１またはシリンジ６３に回収する。
【０１２６】
血小板の活性化の方法としては、例えば、トロンビンのような惹起物質の血小板への接触によって行なうこともできるが、物理的刺激で血小板を活性化させるのが好ましい。これにより、血小板の活性化にあたり、生体由来の惹起物質を用いる場合に比べ、得られる血小板因子中へ細菌やウィルス等が混入する危険性をより確実に回避することができるという利点がある。
【０１２７】
使用する液体としては、血小板因子に悪影響を与えず、かつ、生体に対しても悪影響を与えることのないものであれば、特に限定されず、例えば、生理食塩水、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液等を用いることができる。
【０１２８】
血小板の活性化操作時における液体の流量としては、特に限定されないが、例えば、０．５〜１０ｍＬ／sec程度であるのが好ましく、１〜５ｍＬ／sec程度であるのがより好ましい。これにより、血小板をさらに確実に活性化させることができる。
【０１２９】
なお、血小板の活性化に用いる物理的刺激としては、血小板への液体の接触による刺激の他、例えば、超音波、電気、温度変化等による各種刺激が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。血小板の活性化に用いる物理的刺激として、超音波、電気、温度変化等による各種刺激を用いる場合には、血小板因子回収手段６には、これらの各種刺激を、血小板（血小板捕捉フィルター７）に付与することができる各種手段を設けるようにすればよい。
【０１３０】
前記各チューブ２１、３１、４１、５１の構成材料としては、特に限定されないが、例えば、ポリ塩化ビニルを用いるのが好ましい。これらのチューブがポリ塩化ビニル製であれば、十分な可撓性、柔軟性が得られるので取り扱いがし易く、また、クレンメ等による閉塞にも適するからである。
【０１３１】
また、前記各分岐コネクタ３３、５３の構成材料についても、それぞれ、前記チューブで挙げた構成材料と同様のものを用いることができる。
【０１３２】
また、前記処理済液回収バッグ４０および洗浄済液回収バッグ５０の構成材料としては、それぞれ、例えば、軟質ポリ塩化ビニルが好適に使用される。
【０１３３】
次に、血小板因子回収装置１の使用方法の一例について説明する。
［１］ まず、図１に示すように、第１のライン２および第３のライン３が、それぞれ血小板捕捉フィルター７より鉛直上方に位置し、また、第３のライン４および第４のライン５が、それぞれ血小板捕捉フィルター７より鉛直下方に位置するようにして設置する。
【０１３４】
また、第１の三方活栓６２および第２の三方活栓６４の部分においては、それぞれ、チューブ２１、４１の内部流路が連通した状態としておく。
【０１３５】
なお、このとき、各クランプ２４、３４、４４、５４は、それぞれ、閉状態とされており、かかる部分において、各チューブ２１、３１、４１、５１は、それぞれ、その内部流路が閉塞されている。
【０１３６】
次いで、この状態で、全血血液が収納された血液バッグ（図示せず）の排出口に、第１のライン２の針管２２を、また、洗浄液が収納された洗浄液収納バッグ（図示せず）のゴム栓に、第３のライン３の針管３２を、それぞれ刺通する。
【０１３７】
［２］ 次に、クランプ２４、４４を、それぞれ開状態として、チューブ２１、４１の内部流路を開放して、血液バッグ内の全血血液を、チューブ２１を介して、血小板捕捉フィルター７内へ供給し、血小板捕捉フィルター７内を通過した後の全血血液（処理済液）をチューブ４１を介して処理済液回収バッグ４０内へ回収する。
【０１３８】
より具体的には、血液バッグ内の全血血液を、落差（自重）によりチューブ２１を介して移送し、ハウジング８（第２のハウジング部材８２）の流入口８２１から血小板捕捉フィルター７内へ供給する。全血血液は、支持部材１０ｂのリング１０１内を通過する際に、その流れがフィルター９の中央部から放射状に均一に分散され、プレフィルター部材９２を構成する各多孔質膜９２１およびフィルター部材９１を構成する各多孔質膜９１１を、それぞれ通過する。このとき、血小板は、主にフィルター部材９１において捕捉され、その他の成分（不要成分）は、フィルター部材９１を通過し、支持部材１０ａを経て、ハウジング８（第１のハウジング部材８１）の流出口８１１から排出される。そして、処理済液（血小板が捕捉された後の全血血液）を、落差（自重）によりチューブ４１を介して移送し、処理済液回収バッグ４０内へ回収する。
このようにして、全血血液中より血小板が濾別・分離される。
【０１３９】
血小板の捕捉が終了したら、クランプ２４、４４を、それぞれ閉状態として、チューブ２１、４１の内部流路を閉塞する。
【０１４０】
［３］ 次に、クランプ３４、５４を、それぞれ開状態として、チューブ３１、５１の内部流路を開放して、洗浄液バッグ内の洗浄液を、チューブ３１を介して、血小板捕捉フィルター７内へ供給し、血小板捕捉フィルター７内を通過した後の洗浄液（洗浄済液）をチューブ５１を介して洗浄済液回収バッグ５０内へ回収する。
【０１４１】
より具体的には、洗浄液バッグ内の洗浄液を、落差（自重）によりチューブ３１を介して移送し、ハウジング８の流入口８２１から血小板捕捉フィルター７内へ供給して、ハウジング８内、特に、フィルター９を洗浄する。これにより、ハウジング８の内面やフィルター９等に付着している不要成分（特に、赤血球、白血球）が洗い流され、ハウジング８の流出口８１１より排出される。そして、洗浄済液を、落差（自重）によりチューブ５１を介して移送し、洗浄液回収バッグ５０内へ回収する。
【０１４２】
このような洗浄を行なうことにより、得られる血小板因子への不要成分の混入を、より確実に低下させることができる。
なお、このような洗浄は、任意であり、省略することもできる。
【０１４３】
血小板捕捉フィルター７内の洗浄が終了したら、クランプ３４、５４を、それぞれ閉状態として、チューブ３１、５１の内部流路を閉塞する。
【０１４４】
［４］ 次に、第１の三方活栓６２および第２の三方活栓６４を操作して、シリンジ６１の内部空間とシリンジ６３の内部空間とが連通するようにする。
【０１４５】
ここで、本実施形態では、シリンジ６１内に、血小板に刺激を与えるための液体が収納されているものとする。
【０１４６】
この状態で、シリンジ６１のプランジャを、内部空間の容積が減少する方向に移動操作すると、シリンジ６１内から前記液体が排出され、第１の三方活栓６２を経て、血小板捕捉フィルター７内へ供給される。かかる液体は、血小板捕捉フィルター７内において、フィルター９に捕捉された血小板と接触する。なお、液体の流量は、前述したような範囲に設定される。これにより、血小板は、活性化され、血小板因子を放出する。
【０１４７】
血小板から放出された血小板因子は、前記液体とともに、ハウジング８の流出口８１１より排出され、第２の三方活栓６４を経て、シリンジ６３内に収納される。なお、このとき、シリンジ６３の内部空間の容積が増大し、これに伴ってシリンジ６３のプランジャも移動する。
【０１４８】
このような操作（液体の移動）は、１回のみでもよいが、例えば、少なくとも１往復行なうのが好ましく、３〜１５往復程度行なうのがより好ましい。これにより、血小板をより確実に活性化させることができ、その結果、血小板因子の収率を増大させることができる。
【０１４９】
このようにして、シリンジ６１またはシリンジ６３に、例えば、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＴＧＦ）のような血小板因子を含む液体を回収する。
【０１５０】
以上、本発明の血小板捕捉フィルターおよび血小板因子回収装置を図示の実施形態について説明したが、本発明は、これに限定されるものではない。
【０１５１】
フィルター部材およびプレフィルター部材は、それぞれ、複数の多孔質膜（膜状多孔質体）を積層してなるものに代わり、例えばブロック状（塊状）等の多孔質体で構成されたものであってもよい。
【０１５２】
また、フィルターは、プレフィルター部材を、必要に応じて省略して、フィルター部材のみで構成されたものであってもよい。
【０１５３】
また、フィルターは、フィルター部材およびプレフィルター部材と異なる他の部材を、さらに含む（有する）ものであってもよい。
【０１５４】
また、血小板因子回収手段が有する第１の容器および第２の容器は、それぞれシリンジに代わり、例えば、可撓性を有するバック（容器）等で構成されていてもよい。
【０１５５】
また、前記実施形態では、被処理液として、全血血液を代表に説明したが、本発明では、例えば、多血小板血漿、濃厚血小板のような血小板懸濁液等を処理できることは言うまでもない。
【０１５６】
【実施例】
次に、本発明の具体的実施例について説明する。
【０１５７】
（実施例１Ａ〜１Ｄ）
まず、フィルターの表面のゼータ電位を調整するための物質（共重合体）を合成した。
【０１５８】
２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）４０ｇと、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）１２ｇとを、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２４０ｇに溶解した。
【０１５９】
この溶解液に、アゾイソブチルニトリル（ＡＩＢＮ）５２ｍｇを加え、窒素雰囲気下、７５℃で６時間、反応させた。
【０１６０】
反応終了後、反応液を濃縮し、かかる濃縮物をアセトン約２００ｍＬに溶解し、約３Ｌのヘキサン中に滴下し、精製した。
【０１６１】
この精製操作を３回繰り返した後、析出物を約１５０ｍＬのメタノールに溶解し、濃縮、真空乾燥を行い、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１６２】
この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１６３】
次に、２種類のポリエステル不織布（目付：３０g/m2、厚さ：０．２５ｍｍ、平均孔径：５７．４μｍ、および、目付：２０g/m2、厚さ：０．１５ｍｍ、平均孔径：１０．７μｍ）を用意し、かかるポリエステル不織布を、前記共重合体１％のメタノール溶液に浸漬した。なお、ポリエステル不織布の平均孔径は、パームポロメータ（ＰＭＩ社製）により測定した。
【０１６４】
浸漬終了後、５０℃に保持したＲＯ水でシャワー洗浄を行い、７０℃で乾燥し、前記共重合体でコーティングしたポリエステル不織布（コーティング済ポリエステル不織布）を得た。
【０１６５】
コーティング済ポリエステル不織布の表面のゼータ電位を、０．００１ＮのＫＣｌ水溶液を媒液とし、流動電位測定装置（（株）島津製作所社製「ＺＰ２０Ｈ」）で測定したところ、３４．１ｍＶであった。
【０１６６】
このコーティング済ポリエステル不織布を、それぞれ直径１９ｍｍに切断（カット）した。
【０１６７】
ハウジング内に、プレフィルター部材として、平均孔径５７．４μｍのコーティング済ポリエステル不織布７枚を流入口側に、フィルター部材として、平均孔径１０．７μｍのコーティング済ポリエステル不織布５６枚を流出口側に、それぞれ設置した（有効膜面積：２．２７ｃｍ２、体積：２．２７ｃｍ３、フィルター全体に対するフィルター部材の体積率：８２．８％）。
【０１６８】
また、フィルターの両面に、シリコーンゴム製リング（外径：１７ｍｍ、内径１５ｍｍ、厚さ：０．５ｍｍ）と、該リング内に挿入されたポリプロピレン製メッシュ（厚さ：０．２５ｍｍ）とを装着し、図２に示すような血小板捕捉フィルターを作成した。
【０１６９】
さらに、この血小板捕捉フィルターを用いて、図１に示すような血小板因子回収装置を４つ組み立てた。
【０１７０】
（実施例２）
前記共重合体の０．５％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１７１】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が２９．６ｍＶであった。
【０１７２】
（実施例３）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１７３】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１７４】
かかる共重合体の０．５％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１７５】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が２７．４ｍＶであった。
【０１７６】
（実施例４）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１７７】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１７８】
かかる共重合体の１．５％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１７９】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が３７．２ｍＶであった。
【０１８０】
（実施例５）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１８１】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１８２】
次に、ポリウレタン発泡体（目付：１３０g/m2、厚さ：０．６ｍｍ、平均孔径：８．０μｍ）を用意し、かかるポリウレタン発泡体の一部のものを、前記共重合体０．２％のメタノール溶液に浸漬した。なお、ポリウレタン発泡体の平均孔径は、前記実施例１と同様にして測定した。
【０１８３】
浸漬終了後、５０℃に保持したＲＯ水でシャワー洗浄を行い、７０℃で乾燥し、前記共重合体でコーティングしたポリウレタン発泡体（コーティング済ポリウレタン発泡体）を得た。
【０１８４】
コーティング済ポリウレタン発泡体および未コーティングのポリウレタン発泡体の表面のゼータ電位を、それぞれ、前記実施例１と同様にして測定したところ、３３．５ｍＶおよび４．７ｍＶであった。
【０１８５】
これらのコーティング済ポリウレタン発泡体および未コーティングのポリウレタン発泡体を、それぞれ直径１９ｍｍに切断（カット）した。
【０１８６】
ハウジング内に、プレフィルター部材として、未コーティングのポリウレタン発泡体２枚を流入口側に、フィルター部材として、コーティング済ポリウレタン発泡体８枚を流出口側に、それぞれ設置した（有効膜面積：２．２７ｃｍ２、体積：１．３６ｃｍ３、フィルター全体に対するフィルター部材の体積率：８０．０％）。
【０１８７】
また、フィルターの両面に、前記実施例１と同様のシリコーンゴム製リングと、ポリアミド製メッシュとを装着し、図２に示すような血小板捕捉フィルターを作成した。
【０１８８】
さらに、この血小板捕捉フィルターを用いて、図１に示すような血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１８９】
（比較例１）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１９０】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１９１】
かかる共重合体の０．３％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１９２】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が２４．９ｍＶであった。
【０１９３】
（比較例２）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１９４】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１９５】
かかる共重合体の２．０％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１９６】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が３９．２ｍＶであった。
【０１９７】
（比較例３Ａ〜３Ｄ）
市販の赤血球製剤用白血球除去フィルター（旭メディカル社製、「セパセルＲＺ」）に用いられているフィルターを用意した（目付：４１．３g/m2、厚さ：０．２ｍｍ、平均孔径：３．０μｍ）。なお、フィルターの平均孔径は、前記実施例１と同様にして測定した。
【０１９８】
フィルターの表面のゼータ電位を、前記実施例１と同様にして測定したところ、４５．０ｍＶであった。
このフィルターを、それぞれ直径１９ｍｍに切断（カット）した。
【０１９９】
ハウジング内に、かかるフィルターを、２４枚設置した（有効膜面積：２．２７ｃｍ２、体積：１．０９ｃｍ３）。
【０２００】
また、フィルターの両面に、前記実施例１と同様のシリコーンゴム製リングと、ポリプロピレン製メッシュとを装着し、図２に示すような血小板捕捉フィルターを作成した。
【０２０１】
さらに、この血小板捕捉フィルターを用いて、図１に示すような血小板因子回収装置を４つ組み立てた。
【０２０２】
［評価１］
実施例１Ａ〜実施例４および比較例１〜３Ａの血小板因子回収装置を用いて、それぞれ、クエン酸で抗凝固した健常人（ドナーＤ１）末梢血に対して、以下に示す処理を行ない、ＰＤＧＦ（血小板因子）を回収した。
【０２０３】
まず、ドナーＤ１末梢血（被処理液）３５ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２０４】
次いで、血小板捕捉フィルターに、２ｍＬの生理食塩水を２ｍＬ／secの流量で１０往復通液して、回収液３ｍＬを得た。
【０２０５】
実施例１Ａ〜実施例４および比較例１〜３Ａの血小板因子回収装置における処理時間（血液濾過時間）、白血球通過率、血小板捕捉率、ＰＤＧＦ濃度（濾液、洗浄済液、回収液）、ＰＤＧＦ回収総量および血小板１０９個当たりのＰＤＧＦ回収量を、それぞれ表１に示す。
【０２０６】
なお、白血球通過率および血小板捕捉率は、それぞれ、末梢血（被処理液）および濾液（処理済液）をサンプリングし、これらに含まれる白血球数および血小板数を、多項目自動血球分析装置（Ｓｙｓｍｅｘ社製、「Ｓｙｓｍｅｘ ＳＥ−９０００」）により、それぞれ測定し、その測定結果に基づいて算出した。
【０２０７】
また、ＰＤＧＦ濃度は、ＥＬＩＳＡ法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製、「Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ｈｕｍａｎＰＤＧＦ ｋｉｔ」により測定した。
【０２０８】
【表１】
【０２０９】
表１に示す結果から、フィルター部材の表面のゼータ電位を２６〜３８ｍＶに設定した本発明（実施例１Ａ〜実施例４）の血小板因子回収装置では、いずれも、処理時間が短いものであった。
【０２１０】
また、本発明の血小板因子回収装置では、いずれも、血小板捕捉率が極めて高く、かつ、白血球通過率が極めて高い（白血球捕捉率が極めて低い）ものであり、その結果、フィルター部材の白血球による目詰まりにより、血小板が活性化されるのを抑制することができ、濾液中および洗浄済液中への血小板因子の混入が極めて低いものであることが確認された。
【０２１１】
また、本発明の血小板因子回収装置では、いずれも、物理的刺激により、効率良く血小板因子を回収できることが確認された。
【０２１２】
特に、フィルター部材の表面のゼータ電位を２９〜３５ｍＶに設定した本発明（実施例１Ａ、２）の血小板因子回収装置では、いずれも、前記結果がより優れるものであった。
【０２１３】
これに対し、比較例１の血小板因子回収装置では、フィルター部材の表面のゼータ電位が低いことにより、血小板捕捉率が極めて低いものであった。
【０２１４】
一方、比較例２、３Ａの血小板因子回収装置では、フィルター部材の表面のゼータ電位が高いことにより、白血球通過率が極めて低いもの、すなわち、血小板捕捉フィルターへの白血球の捕捉が過度に起こるものであった。
【０２１５】
このようなことから、比較例１〜３Ａの血小板因子回収装置では、いずれも、血小板因子を効率よく回収できないものであることが確認された。
【０２１６】
［評価２］
実施例１Ｂおよび比較例３Ｂ、３Ｃの血小板因子回収装置を用いて、それぞれ、クエン酸で抗凝固した健常人（ドナーＤ２）末梢血に対して、以下に示す処理を行ない、ＰＤＧＦ（血小板因子）を回収した。
【０２１７】
（実施例１Ｂ）
まず、ドナーＤ２末梢血（被処理液）３５ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水５ｍＬで洗浄した。
【０２１８】
次いで、血小板捕捉フィルターに、２ｍＬの生理食塩水を２ｍＬ／secの流量で１０往復通液して、回収液３ｍＬを得た。
【０２１９】
（比較例３Ｂ）
まず、ドナーＤ２末梢血（被処理液）３５ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２２０】
次いで、血小板捕捉フィルターに、トロンビン１Ｕ／１０ｅ８血小板となるように調製したトロンビン添加ＨＥＰＥＳ水溶液を添加し、１０分間放置した後、かかるＨＥＰＥＳ緩衝液を回収して、回収液３ｍＬを得た。
【０２２１】
（比較例３Ｃ）
まず、ドナーＤ２末梢血（被処理液）３５ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２２２】
次いで、血小板捕捉フィルターに、トロンビン１Ｕ／ｍＬのトロンビン添加ＨＥＰＥＳ緩衝液２４ｍＬを通液しつつ回収して、回収液２５ｍＬを得た。
【０２２３】
実施例１Ｂおよび比較例３Ｂ、３Ｃの血小板因子回収装置における処理時間（血液濾過時間）、白血球通過率、血小板捕捉率、ＰＤＧＦ濃度（濾液、洗浄済液、回収液）、ＰＤＧＦ回収総量および血小板１０９個当たりのＰＤＧＦ回収量を、それぞれ表２に示す。
【０２２４】
なお、白血球通過率、血小板捕捉率およびＰＤＧＦ濃度は、それぞれ、前記評価１と同様にして測定した。
【０２２５】
【表２】
【０２２６】
表２に示す結果から、本発明（実施例１Ｂ）の血小板因子回収装置では、物理的刺激による血小板因子の回収により、トロンビン刺激による場合（比較例３Ｂ、３Ｃ）を上回るだけの血小板因子の回収量を得ることが可能であった。
【０２２７】
［評価３］
実施例１Ｃおよび比較例３Ｄの血小板因子回収装置を用いて、それぞれ、クエン酸で抗凝固した健常人（ドナーＤ３）末梢血に対して、以下に示す処理を行ない、ＰＤＧＦ（血小板因子）を回収した。
【０２２８】
（実施例１Ｃ）
まず、ドナーＤ３末梢血（被処理液）５０ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２２９】
次いで、血小板捕捉フィルターに、２ｍＬの生理食塩水を２ｍＬ／secの流量で１０往復通液して、回収液３ｍＬを得た。
【０２３０】
（比較例３Ｄ）
まず、ドナーＤ３末梢血（被処理液）５０ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２３１】
次いで、血小板捕捉フィルターに、トロンビン１Ｕ／１０ｅ８血小板となるように調製したトロンビン添加ＨＥＰＥＳ緩衝液を添加し、１０分間放置した後、かかるＨＥＰＥＳ溶液を回収して、回収液３ｍＬを得た。
【０２３２】
実施例１Ｃおよび比較例３Ｄの血小板因子回収装置における処理時間（血液濾過時間）、白血球通過率、血小板捕捉率、ＰＤＧＦ濃度（濾液、洗浄済液、回収液）、ＰＤＧＦ回収総量および血小板１０９個当たりのＰＤＧＦ回収量を、それぞれ表３に示す。
【０２３３】
なお、白血球通過率、血小板捕捉率およびＰＤＧＦ濃度は、それぞれ、前記評価１と同様にして測定した。
【０２３４】
【表３】
【０２３５】
表３に示す結果から、本発明（実施例１Ｃ）の血小板因子回収装置では、被処理液量（末梢血血液量）が５０ｍＬの場合でも、３５ｍＬの場合（評価１における実施例１Ａを参照）と同様の性能が確認された。
【０２３６】
これに対し、比較例３Ｄの血小板因子回収装置では、被処理液量が５０ｍＬの場合、３５ｍＬの場合（評価２における比較例３Ｂを参照）と比較して、明らかに、その性能が低下するものであった。
【０２３７】
［評価４］
実施例１Ｄ、５および６の血小板因子回収装置を用いて、それぞれ、クエン酸で抗凝固した健常人（ドナーＤ４）末梢血に対して、以下に示す処理を行ない、ＰＤＧＦ（血小板因子）を回収した。
【０２３８】
まず、ドナーＤ４末梢血（被処理液）１０ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２３９】
次いで、血小板捕捉フィルターに、２ｍＬの生理食塩水を２ｍＬ／secの流量で１０往復通液して、回収液２ｍＬを得た。
【０２４０】
実施例１Ｄ、５および６の血小板因子回収装置における処理時間（血液濾過時間）、白血球通過率、血小板捕捉率、ＰＤＧＦ濃度（濾液、洗浄済液、回収液）、ＰＤＧＦ回収総量および血小板１０９個当たりのＰＤＧＦ回収量を、それぞれ表４に示す。
【０２４１】
なお、白血球通過率、血小板捕捉率およびＰＤＧＦ濃度は、それぞれ、前記評価１と同様にして測定した。
【０２４２】
【表４】
【０２４３】
表４に示す結果から、フィルター部材の表面のゼータ電位を２６〜３８ｍＶに設定した本発明（実施例１Ｄ、５および６）の血小板因子回収装置では、いずれも、処理時間が短いものであった。
【０２４４】
また、本発明の血小板因子回収装置では、いずれも、血小板捕捉率が極めて高く、かつ、白血球通過率が極めて高い（白血球捕捉率が極めて低い）ものであり、その結果、フィルター部材の白血球による目詰まりにより、血小板が活性化されるのを抑制することができ、濾液中および洗浄済液中への血小板因子の混入が極めて低いものであることが確認された。
【０２４５】
また、本発明の血小板因子回収装置では、いずれも、物理的刺激により、効率良く血小板因子を回収できることが確認された。
【０２４６】
＜まとめ＞
本発明の血小板因子回収装置（血小板捕捉フィルター）では、短時間で血小板を捕捉することが可能であった。
【０２４７】
また、本発明では、濾液中および洗浄済液中での血小板因子の濃度が極めて低いことから、濾過中のフィルターの目詰まりによる血小板への刺激を抑制することができるものであることが確認された。
【０２４８】
さらに、本発明では、血小板への刺激を抑制しつつ、血小板を捕捉することができるため、物理的な刺激のみで容易に血小板を活性化させることができ、十分量の血小板因子を確実に回収することができた。
【０２４９】
一方、比較例の血小板因子回収装置（血小板捕捉フィルター）では、血小板捕捉率が極めて低いものか、あるいは、血小板捕捉率は十分であるが、白血球の捕捉率が極めて高いものであった。
【０２５０】
特に、後者の場合、血液濾過時間が極めて長くなるとともに、経時的なフィルターの目詰まりにより血小板が刺激され、これにより、濾液や洗浄済液中に血小板因子が流出することが確認された。また、この場合、フィルターに捕捉されている血小板には、既に刺激が与えられていることから、トロンビン刺激によっても、十分量の血小板因子を回収することができなかった。
【０２５１】
【発明の効果】
以上述べたように、本発明によれば、血小板をより選択的に捕捉することができ、容易かつ短時間で、血小板から十分量の血小板因子を回収することができる。
【０２５２】
フィルター部材の表面のゼータ電位や平均孔径の設定、プレフィルター部材の設置、洗浄液を供給する第３のラインの設置等により、前記効果をより向上させることができる。
【０２５３】
また、本発明では、濾過法の利点である無菌的処理が可能であるとともに、大量で迅速な処理が可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の血小板因子回収装置の全体構成を示す概略図である。
【図２】本発明の血小板捕捉フィルターの構成を示す分解斜視図（一部断面で示す）である。
【符号の説明】
１ 血小板因子回収装置
２ 第１のライン
２１ チューブ
２２ 針管
２４ クランプ
３ 第３のライン
３１ チューブ
３２ 針管
３３ 分岐コネクタ
３４ クランプ
４ 第２のライン
４０ 処理済液回収バッグ
４１ チューブ
４４ クランプ
５ 第４のライン
５０ 洗浄済液回収バッグ
５１ チューブ
５３ 分岐コネクタ
５４ クランプ
６ 血小板因子回収手段
６１ シリンジ
６２ 第１の三方活栓
６３ シリンジ
６４ 第２の三方活栓
７ 血小板捕捉フィルター
８ ハウジング
８１ 第１のハウジング部材
８１１ 流出口
８１２ 内腔部
８１３ 縮径部
８１４ 嵌合部
８２ 第２のハウジング部材
８２１ 流入口
８２２ 内腔部
８２３ 縮径部
８２４ 嵌合部
９ フィルター
９１ フィルター部材
９１１ 多孔質膜
９２ プレフィルター部材
９２１ 多孔質膜
１０ａ、１０ｂ 支持部材
１０１ リング
１０２ メッシュ
【発明の属する技術分野】
本発明は、血小板捕捉フィルターおよび血小板因子回収装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、血小板由来の因子を採取する場合には、遠心分離法により全血血液から血小板を分離した後に、トロンビン等の血小板活性化剤を血小板に添加して、血小板を活性化させることにより、血小板から放出される因子（以下、「血小板因子」と言う。）を回収することが行なわれている。
【０００３】
この血小板因子としては、例えば、血小板由来増殖因子（Platelet derived growth factor ; PDGF）、トランスフォーミング成長因子（Transforming growth factor ; TGF）、上皮細胞成長因子（Epidermal growth factor ; EGF）、インスリン様増殖因子（Insulin like growth factor ; IGF）等が挙げられる。
【０００４】
そして、回収されたこれらの血小板因子は、創傷治療促進剤の原料として用いられている。
【０００５】
従来、血小板を活性化させる操作を行なう際には、その操作に先立って、▲１▼遠心分離操作により、多血小板血漿（ＰＲＰ）、濃厚血小板（ＰＣ）のような血漿中に血小板が浮遊した状態のもの（血小板浮遊液）を調整し、さらに、▲２▼前記血小板浮遊液において、血小板を沈降させた後、上清血漿を洗浄除去する前操作（前処理）が行なわれているが、この前処理には、多大な手間と時間とを要とするという問題点があった。
【０００６】
この問題点を解決するものとして、特表平７−５０７５５８号公報には、遠心分離法により分離された血小板浮遊液をフィルターに通して濾過し、フィルターで捕捉された血小板にトロンビン等の血小板活性化剤を添加して、血小板を活性化させることにより血小板因子を回収する方法が記載されている。
【０００７】
この方法は、比較的短時間で血小板因子を回収することができるが、この方法に用いられるフィルターは、本来、白血球を主として、白血球および血小板を捕捉するためのものである。このため、特に、全血血液を濾過した場合には、フィルターに、血小板とともに多量の白血球も捕捉される。
【０００８】
このため、捕捉された白血球により、経時的にフィルターの流路（細孔）が狭くなり、この流路の狭窄により、フィルターに捕捉された血小板は、刺激を受け、活性化されてしまう。
【０００９】
その結果、血小板から放出された血小板因子が、濾液と一緒にフィルターを通過してしまい、血小板因子の回収率が低下するという問題がある。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、例えば全血血液のような血小板を含む被処理液を濾過した際に、血小板の捕捉率が高く、かつ、白血球の捕捉率が低い血小板捕捉フィルターを提供すること、また、容易かつ短時間で、血小板から血小板因子を回収することができる血小板因子回収装置を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
このような目的は、下記（１）〜（２８）の本発明により達成される。
【００１４】
（１） 血小板を含む被処理液から前記血小板を捕捉する血小板捕捉フィルターであって、
流入口と流出口とを備えるハウジング内に、多孔質体で構成され、その表面をアルコキシアルキル（メタ）アクリレートとアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとを主とする共重合体で被覆されたフィルター部材を含むフィルターを収納してなり、
前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートは、２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）または２−メトキシエチルメタクリレート（ＭＥＭＡ）であり、
前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートは、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルアクリレート（ＤＭＡＥＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルアクリレート（ＤＭＡＰＡ）、および２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルメタアクリレート（ＤＭＡＰＭＡ）の中から選択された１つであり、
前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートと前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとの組成比は、８５：１５〜５０：５０であることを特徴とする血小板捕捉フィルター。
【００１５】
（２） 前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートは、前記２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）であり、
前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートは、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）である上記（１）に記載の血小板捕捉フィルター。
（３） 前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートと前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとの組成比は、８０：２０〜６０：４０である上記（１）または（２）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００１６】
（４） 前記フィルター部材は、その平均孔径が５〜２０μｍである上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００１７】
（５） 前記フィルター部材は、膜状多孔質体で構成され、それらを複数積層してなるものである上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００１８】
（６） 前記フィルター部材を構成する複数の前記膜状多孔質体は、それぞれ、不織布または発泡体で構成されている上記（５）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００１９】
（７） 前記フィルターは、その平均孔径または表面のゼータ電位のいずれか一方が、前記フィルター部材と異なるプレフィルター部材を含み、
該プレフィルター部材は、前記ハウジング内の前記フィルター部材より前記流入口側に位置している上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００２０】
（８） 前記プレフィルター部材は、その平均孔径が、３０〜１００μｍである上記（７）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００２１】
（９） 前記プレフィルター部材は、その表面のゼータ電位が、０〜２５ｍＶである上記（７）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００２２】
（１０） 前記プレフィルター部材は、膜状多孔質体で構成され、それらを複数積層してなるものである上記（７）ないし（９）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００２３】
（１１） 前記プレフィルター部材を構成する複数の前記膜状多孔質体は、それぞれ、不織布または発泡体で構成されている上記（１０）に記載の血小板捕捉フィルター。
【００２４】
（１２） 前記フィルター全体に対する前記フィルター部材の占める体積率は、５０％以上である上記（１）ないし（１１）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
【００２５】
（１３） 上記（１）ないし（１２）のいずれかに記載の血小板捕捉フィルターと、
前記流入口に接続され、前記血小板捕捉フィルター内に、前記被処理液を供給する第１のラインと、
前記流出口に接続され、前記血小板捕捉フィルター内を通過した液体を回収する第２のラインと、
前記血小板捕捉フィルターにより捕捉された血小板を活性化させ、該血小板から放出される血小板因子を回収する血小板因子回収手段とを有することを特徴とする血小板因子回収装置。
【００２６】
（１４） 前記血小板回収手段は、前記血小板を物理的刺激により活性化させる上記（１３）に記載の血小板因子回収装置。
【００２７】
（１５） 前記血小板因子回収手段は、前記第１のラインおよび／または前記第２のラインの一部を共用するよう構成されている上記（１３）または（１４）に記載の血小板因子回収装置。
【００２８】
（１６） 前記血小板因子回収手段は、前記血小板捕捉フィルターを介して設置された一対の容器を有し、このうち、第１の容器は、前記第１のラインに接続され、第２の容器は、前記第２のラインに接続されている上記（１３）ないし（１５）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００２９】
（１７） 前記第１のラインの途中には、第１の流路切替器具が設置され、該第１の流路切替器具を介して、前記第１の容器が前記第１のラインに接続されている上記（１６）に記載の血小板因子回収装置。
【００３０】
（１８） 前記第２のラインの途中には、第２の流路切替器具が設置され、該第２の流路切替器具を介して、前記第２の容器が前記第２のラインに接続されている上記（１６）または（１７）に記載の血小板因子回収装置。
【００３１】
（１９） 前記第１の容器と前記第２の容器との間で、血小板に刺激を与えるための液体を移動させることにより、前記血小板捕捉フィルターに捕捉された血小板と接触させ、これにより、前記血小板を活性化させる上記（１６）ないし（１８）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００３２】
（２０） 前記液体の移動は、少なくとも１往復行なわれる上記（１９）に記載の血小板因子回収装置。
【００３３】
（２１） 前記血小板の活性化操作時における前記液体の流量は、０．５〜１０ｍＬ／secである上記（１９）または（２０）に記載の血小板因子回収装置。
【００３４】
（２２） 前記第１の容器および前記第２の容器は、それぞれ、シリンジである上記（１６）ないし（２１）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００３５】
（２３） 前記血小板捕捉フィルター内に、洗浄液を供給する第３のラインを有する上記（１３）ないし（２２）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００３６】
（２４） 前記第３のラインは、前記血小板因子回収手段の上流側に接続されている上記（２３）に記載の血小板因子回収装置。
【００３７】
（２５） 前記第３のラインは、前記第１のラインの途中に接続されている上記（２３）または（２４）に記載の血小板因子回収装置。
【００３８】
（２６） 前記血小板捕捉フィルター内を通過した後の前記洗浄液を回収する第４のラインを有する上記（２３）ないし（２５）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００３９】
（２７） 前記第４のラインは、前記第２のラインの途中に接続されている上記（２６）に記載の血小板因子回収装置。
【００４０】
（２８） 前記被処理液は、全血血液である上記（１３）ないし（２７）のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
【００４１】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の血小板捕捉フィルターおよび血小板因子回収装置を添付図面に示す好適実施形態に基づいて詳細に説明する。
【００４２】
図１は、本発明の血小板因子回収装置の全体構成を示す概略図であり、図２は、本発明の血小板捕捉フィルターの構成を示す分解斜視図（一部断面で示す）である。
【００４３】
図１に示す血小板因子回収装置１は、血小板を含む被処理液から血小板を捕捉し、かかる血小板から放出される血小板因子（以下、単に、「血小板因子」と言う。）を回収するための装置であり、本発明の血小板捕捉フィルター７と、第１のライン（被処理液供給ライン）２と、第３のライン（洗浄液供給ライン）３と、第２のライン（濾過済液回収ライン）４と、第４のライン（洗浄済液回収ライン）５と、血小板因子回収手段６とを有している。以下、各部の構成について、順次説明する。
【００４４】
なお、以下の説明では、血小板を含む被処理液として、全血血液を処理する場合を代表に説明する。
【００４５】
まず、本発明の血小板捕捉フィルター７から説明する。
本発明者は、鋭意検討を重ねた結果、血小板のフィルターへの吸着率は、白血球のそれよりも、フィルターの表面のゼータ電位の影響を受け易いことを見い出した。すなわち、本発明者は、フィルターの表面のゼータ電位を適宜設定することにより、フィルターに血小板をより選択的に捕捉させることができることを見い出した。
本発明は、このような知見に基づいてなされたものである。
【００４６】
図２に示す血小板捕捉フィルター７は、全血血液から血小板を捕捉する機能を有するものであり、ハウジング８と、ハウジング８内に設置されたフィルター９と、フィルター９の支持部材１０ａ、１０ｂとで構成されている。換言すれば、血小板捕捉フィルター７は、ハウジング８内に、フィルター９および支持部材１０ａ、１０ｂを収納してなるものである。
なお、以下の説明では、図２中、上側を「上部」、下側を「下部」と言う。
【００４７】
ハウジング８は、有底筒状をなす第１のハウジング部材（下部ハウジング部材）８１と、第１のハウジング部材８１に装着（固定）される天板部（天井）を有し、ほぼ筒状をなす第２のハウジング部材（上部ハウジング部材）８２とで構成されている。
【００４８】
第１のハウジング部材８１の底部には、ハウジング８内に連通する流出口（液体排出口）８１１が突出形成されている。
【００４９】
第１のハウジング部材８１の内側下部には、内腔部８１２を縮径した縮径部８１３が形成されている。第１のハウジング部材８１に第２のハウジング部材８２を装着し、内部にフィルター９および支持部材１０ａ、１０ｂを収納した状態（以下、この状態を、「血小板捕捉フィルター７の組み立て状態」と言う。）では、縮径部８１３に支持部材１０ａが設置（収納）される。
【００５０】
また、血小板捕捉フィルター７の組み立て状態では、内腔部８１２と後述する第２のハウジング部材８２の内腔部８２２とで画成される空間には、フィルター９が設置（収納）される。
【００５１】
また、第１のハウジング部材８１の上部には、外周に沿って、ほぼ円筒状をなす嵌合部８１４が形成されている。血小板捕捉フィルター７の組み立て状態では、この嵌合部８１４の内側に、第２のハウジング部材８２の嵌合部８２４が挿入される。
【００５２】
第２のハウジング部材８２の天板部には、ハウジング８内に連通する流入口（液体導入口）８２１が突出形成されている。
【００５３】
第２のハウジング部材８２の内側上部には、内腔部８２２を縮径した縮径部８２３が形成されている。血小板捕捉フィルター７の組み立て状態では、縮径部８２３に支持部材１０ｂが設置される。
【００５４】
また。第２のハウジング部材８２の下部には、内周に沿って、ほぼ円筒状をなす嵌合部８２４が形成されている。血小板捕捉フィルター７の組み立て状態では、この嵌合部８２４が嵌合部８１４の内側に挿入され、これらが嵌合することにより、第１のハウジング部材８１と第２のハウジング部材８２とが固定される。
【００５５】
ハウジング８の構成材料としては、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ−（４−メチルペンテン−１）、ポリカーボネート、アクリル樹脂、アクリルニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体、ポリエチレンテレフタレート等のポリエステル、ブタジエン−スチレン共重合体、ポリアミド（例えば、ナイロン６、ナイロン６・６、ナイロン６・１０、ナイロン１２）のような各種樹脂が挙げられる。
【００５６】
フィルター９は、それぞれ、多孔質体で構成されるフィルター部材９１およびプレフィルター部材９２とを有している。
【００５７】
フィルター部材９１は、血小板を捕捉する主たる部分であり、複数のほぼ円盤状をなす多孔質膜（膜状多孔質体）９１１を積層してなるものである。
【００５８】
各多孔質膜９１１としては、それぞれ、例えば、ポリウレタン、ポリビニルアルコール、ポリプロピレン、ポリエーテルポリアミド、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート等の合成樹脂からなる不織布、発泡体（連通孔を有するスポンジ状多孔質体）、織布、メッシュ等が挙げられるが、これらの中でも、特に、不織布または発泡体を用いるのが好ましい。各多孔質膜９１１として、前記合成樹脂からなる不織布または発泡体を用いることにより、孔径のコントロール等が容易であり、生産性に優れるという利点がある。
【００５９】
各多孔質膜９１１の平均厚さは、その構成材料、形態等により適宜設定され、特に限定されないが、例えば、０．０５〜５ｍｍ程度とするのが好ましく、０．１〜３ｍｍ程度とするのがより好ましい。
【００６０】
また、多孔質膜９１１の設置数としては、平均厚さにより適宜設定され、特に限定されないが、例えば、２〜１００枚程度とするのが好ましく、３〜８０枚程度とするのが好ましい。
【００６１】
フィルター部材９１（各多孔質膜９１１）は、その表面のゼータ電位が、例えば、２６〜３８ｍＶ程度とされているのが好ましく、２９〜３５ｍＶ程度とされているのがより好ましい。フィルター部材９１の表面のゼータ電位を前記範囲内とすることにより、血小板捕捉フィルター７では、血小板の捕捉率を向上させることができるとともに、白血球の捕捉率を低下させることができる。
【００６２】
このため、血小板捕捉フィルター７では、血小板をより選択的に捕捉することができるので、白血球の捕捉量の増加に伴う経時的なフィルター部材９１の流路（細孔）の狭窄（以下、単に、「目詰まり」と言う。）を好適に防止（抑制）することができる。その結果、血小板捕捉フィルター７では、フィルター部材９１に捕捉された血小板が、この目詰まりにより刺激を受け、活性化されるのを好適に防止（抑制）することができる。
【００６３】
なお、フィルター部材９１の表面のゼータ電位が低すぎると、フィルター部材９１の平均孔径等によっては、血小板の捕捉率を十分にできない場合があり、一方、フィルター部材９１の表面のゼータ電位が高すぎると、血小板の捕捉時に、血小板が活性化してしまう場合がある。
【００６４】
このようなフィルター部材９１の表面のゼータ電位の調整方法としては、例えば、▲１▼〜▲３▼の方法が挙げられる。
【００６５】
▲１▼ フィルター部材９１の表面を、ゼータ電位を調整可能な物質（例えばアミノ基のようなカチオン性官能基を有する物質）で後処理（例えば、被覆等）する方法。
【００６６】
▲２▼ フィルター部材９１の構成材料として、それ自体が前記範囲内のゼータ電位を有するものを使用する方法。
【００６７】
▲３▼ フィルター部材９１の構成材料中に、予めゼータ電位を調整可能な物質を含有または結合させておき、かかる材料を用いてフィルター部材９１を形成する方法。
【００６８】
これらの中でも、フィルター部材９１の表面のゼータ電位の調整方法としては、フィルター部材９１の表面を、ゼータ電位を調整可能な物質で被覆する方法を用いるのが好ましい。この方法によれば、フィルター部材９１の構成材料の選択の幅を広げることができるとともに、フィルター部材９１の表面のゼータ電位を、より容易かつ確実に調整することができる。
【００６９】
ゼータ電位を調整可能な物質としては、フィルター部材９１の表面のゼータ電位を前記範囲内に調整可能な物質であれば、いかなるものを用いてもよいが、例えば、アルコキシアルキル（メタ）アクリレートと、塩基性官能基を有するアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとを主とする共重合体を用いるのが好ましい。この共重合体は、その付着量や、それらを構成するモノマーの組成比等を適宜設定することにより、容易にフィルター部材９１の表面のゼータ電位を調整することができる。
【００７０】
アルコキシアルキル（メタ）アクリレートとしては、例えば、２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）、２−メトキシエチルメタクリレート（ＭＥＭＡ）等を用いることができる。
【００７１】
一方、アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとしては、例えば、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルアクリレート（ＤＭＡＥＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルアクリレート（ＤＭＡＰＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルメタアクリレート（ＤＭＡＰＭＡ）等を用いることができる。
【００７２】
主として、これらのモノマーで構成される共重合体で被覆されたフィルター部材９１を用いることにより、血小板捕捉フィルター７では、血小板の捕捉率をより向上させることができるとともに、白血球の捕捉率をより確実に低下させることができる。
【００７３】
また、アルコキシアルキル（メタ）アクリレートとアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとの組成比は、特に限定されないが、例えば、８５：１５〜５０：５０程度であるのが好ましく、８０：２０〜６０：４０程度であるのがより好ましい。各モノマーの組成比を前記範囲内とすることにより、血小板捕捉フィルター７には、優れた血小板の捕捉率と、血小板の捕捉時における血小板の活性化の優れた抑制効果とを両立させることができる。
【００７４】
なお、各モノマーの組成比が前記下限値未満であると、アルコキシアルキル（メタ）アクリレートおよび／またはアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートの種類等によっては、フィルター部材９１の血小板の捕捉率を十分にすることができない場合があり、一方、これらの組成比が前記上限値を超えると、アルコキシアルキル（メタ）アクリレートおよび／またはアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートの種類等によっては、フィルター部材９１の血小板の捕捉時における血小板の活性化の抑制効果を十分にすることができない場合がある。
【００７５】
また、フィルター部材９１（各多孔質膜９１１）の平均孔径としては、特に限定されないが、例えば、５〜２０μｍ程度とするのが好ましく、８〜１５μｍ程度とするのがより好ましい。フィルター部材９１の平均孔径が前記下限値未満の場合、フィルター部材９１の流入口８２１側の面（図２中、上部の面）に、白血球が非特異的に捕捉されることがあり、その結果、目詰まりにより、捕捉された血小板が刺激を受け、活性化されることがある。一方、フィルター部材９１の平均孔径が前記上限値を超えた場合、フィルター部材９１では、血小板の捕捉率が低下することがある。
【００７６】
換言すれば、フィルター部材９１の平均孔径を前記範囲内とすることにより、フィルター部材９１では、白血球の非特異的な捕捉の増大（増加）と、血小板の捕捉率の低下とを好適に防止（抑制）することができる。
【００７７】
ハウジング８内には、フィルター部材９１より流入口８２１側に、プレフィルター部材９２が設置されている。
【００７８】
プレフィルター部材９２は、フィルター部材９１の流路（細孔）に、主に白血球による目詰まりが生じるのを防止（抑制）する機能を有するものであり、複数の多孔質膜（膜状多孔質体）９２１を積層してなるものである。
【００７９】
各多孔質膜９２１は、それぞれ、前記多孔質膜９１１と同様の合成樹脂からなる不織布または発泡体で構成され、その形状や寸法等は、前記多孔質膜９１１と同様のものとすることができる。
【００８０】
また、多孔質膜９２１の設置数としては、平均厚さにより適宜設定され、特に限定されないが、例えば、１〜３０枚程度とするのが好ましく、２〜１０枚程度とするのが好ましい。
【００８１】
このプレフィルター部材９２（各多孔質膜９２１）は、前記フィルター部材９１と、その平均孔径や表面のゼータ電位が異なるものを用いるのが好ましい。
【００８２】
平均孔径を異なるものとする場合には、プレフィルター部材９２の平均孔径は、フィルター部材９１の平均孔径より大きく設定され、具体的には、３０〜１００μｍ程度とするのが好ましく、５０〜８０μｍ程度とするのがより好ましい。
【００８３】
一方、表面のゼータ電位を異なるものとする場合には、プレフィルター部材９２の表面のゼータ電位は、フィルター部材９１の表面のゼータ電位より小さく設定され、具体的には、０〜２５ｍＶ程度とするのが好ましく、５〜１５ｍＶ程度とするのがより好ましい。
【００８４】
このような構成とすることにより、プレフィルター部材９２は、フィルター部材９１の目詰まりを、より確実に防止（抑制）することができる。
【００８５】
このプレフィルター部材９２の表面のゼータ電位の調整方法としては、前記フィルター部材９１で挙げたものと同様の方法を用いることができる。
【００８６】
なお、プレフィルター部材９２（各多孔質膜９２１）は、前記フィルター部材９１と、その平均孔径および表面のゼータ電位のいずれか一方が異なるものであっても、双方が異なるものであってもよい。
【００８７】
このようなフィルター９では、その全体に対するフィルター部材９１の占める体積率が、例えば、５０％以上程度であるのが好ましく、７０％以上程度であるのがより好ましい。このような体積率の範囲内において、フィルター部材９１とプレフィルター部材９２とは、それぞれ、その機能を如何なく発揮することができる。
【００８８】
フィルター９の下部および上部には、それぞれ、支持部材１０ａ、１０ｂが装着され、この状態でハウジング８内に収納される。支持部材１０ａ、１０ｂは、それぞれ、フィルター９の支持部材としての機能を有する他、フィルター９への液体の供給、フィルター９からの液体の排出を円滑に行なうための機能を有するものである。すなわち、支持部材１０ａ、１０ｂは、それぞれ、流路確保部材ということもできる。
【００８９】
これらの支持部材１０ａ、１０ｂとしては、例えばシリコーン等の柔軟性を有する材料で構成されたリング１０１と、このリング１０１の内側に挿入されたメッシュ（拡散部材）１０２とで構成されている。リング１０１は、例えば０．１〜２ｍｍ程度の厚さを有している。
【００９０】
支持部材１０ｂの設置により、そのリング１０１の内側に流入口８２１に連通する空間が形成され、流入口８２１から流入した液体のフィルター９への流路が確保され、支持部材１０ａの設置により、そのリング１０１の内側に流出口８１１に連通する空間が形成され、フィルター９から流出口８１１へ排出される液体の流路が確保される。すなわち、前記フィルター９は、流入口８２１に連通する空間と流出口８１１に連通する空間とを区画するようハウジング８内に設置される。
【００９１】
また、支持部材１０ａ、１０ｂにおいて、リング１０１の内側にメッシュ１０２を設置したことにより、リング１０１の内側空間を液体が通過する際に、均一分散（拡散）され、濾過、血小板の捕捉、洗浄等の効率を向上させることができる。
【００９２】
なお、支持部材１０ａ、１０ｂとしては、前記構成に限定されず、例えば、各種セラミックス材料等からなる多孔質体等であってもよい。
【００９３】
また、これらの支持部材１０ａ、１０ｂは、必要に応じて（例えば、ハウジング８の流出口８１１および流入口８２１の内径の寸法等により）、省略することもできる。
【００９４】
以上説明したように、本発明の血小板捕捉フィルター７は、血小板の捕捉率が極めて高く、白血球の捕捉率が極めて低い。このため、本発明の血小板捕捉フィルター７では、全血血液を遠心分離等の前処理を施すことなくそのまま処理することができるいう利点（特徴）がある。
【００９５】
次に、血小板捕捉フィルター７が組み込まれた血小板因子回収装置１全体について説明する。
【００９６】
第１のライン２は、血小板捕捉フィルター７内に全血血液（被処理液）を供給するためのラインであり、主に、チューブ２１と、チューブ２１の一端に接続された針管２２とで構成されている。チューブ２１の他端は、血小板捕捉フィルター７（第２のハウジング部材８２）の流入口８２１に接続されている。
【００９７】
針管２２は、瓶針で構成されており、全血血液（被処理液）が収納された血液バッグ（図示せず）のゴム栓（栓体）を刺通することができる。針管２２で前記ゴム栓を刺通することにより、血小板捕捉フィルター７内と血液バッグ（容器）内とを連通して、全血血液を血小板捕捉フィルター７内へ供給することができる。
【００９８】
チューブ２１の途中には、チューブ２１の内部流路を遮断・開放し得る流路開閉手段としてのクランプ２４が設置されている。
【００９９】
また、チューブ２１の途中には、血小板捕捉フィルター７の近傍に、後述する血小板因子回収手段６を構成するシリンジ６１を接続する第１の三方活栓（第１の流路切替器具）６２が設置されている。
【０１００】
なお、本実施形態では、チューブ２１の一端には、針管２２が接続されているが、これに代わり、直接、前記血液バッグが接続されていてもよい。
【０１０１】
また、針管２２は、例えば翼状針等の穿刺針で構成されていてもよい。この場合、穿刺針を供血者（ドナー）の血管に穿刺して、直接、供血者から血小板捕捉フィルター７内に採血血液を供給することができる。なお、この場合、第１のラインの途中には、採血血液中に抗凝固剤を添加するための抗凝固剤供給ラインを接続しておくようにするのが好ましい。
【０１０２】
第３のライン３は、血小板捕捉フィルター７内に洗浄液を供給するためのラインであり、主に、チューブ３１と、チューブ３１の一端に接続された針管３２とで構成されている。チューブ３１の他端は、Ｙ字状の分岐コネクタ３３を介して、チューブ２１の途中に接続されている。すなわち、第３のライン３は、第１のライン２の途中に接続されている。
【０１０３】
針管３２は、瓶針で構成されており、洗浄液が収納された洗浄液バッグ（図示せず）のゴム栓（栓体）を刺通することができる。針管３２で前記ゴム栓を刺通することにより、血小板捕捉フィルター７内と洗浄液バッグ（容器）内とを連通して、洗浄液を血小板捕捉フィルター７内へ供給することができる。
【０１０４】
チューブ３１の途中には、このチューブ３１の内部流路を遮断・開放し得る流路開閉手段としてのクランプ３４が設置されている。
【０１０５】
また、前記分岐コネクタ３３は、後述する血小板因子回収手段６の第１の三方活栓６２より上流側に設置されている。すなわち、第３のライン３は、血小板因子回収手段６の上流側に接続されている。
【０１０６】
第３のライン３により供給される洗浄液としては、例えば、生理食塩水、ハンクス平衡塩溶液、ダルベッコ平衡塩溶液のような各種電解質液、または、ブドウ糖液のような糖液や、ＡＣＤ−Ａ液、ＣＰＤＡ−１液のような血液保存液等が好適に使用される。
【０１０７】
なお、本実施形態では、チューブ３１の一端には、針管３２が接続されているが、これに代わり、直接、前記洗浄液バッグが接続されていてもよい。
【０１０８】
また、チューブ３１の他端は、直接、血小板捕捉フィルター７に接続されていてもよい。
【０１０９】
さらに、第３のライン３は、必要に応じて、省略することもできる。この場合、第１のライン２の針管２１を前記洗浄液バッグに繋ぎ換えて用いるようにすればよい。
【０１１０】
第２のライン４は、血小板捕捉フィルター７内を通過した後の全血血液（被処理液：液体）、すなわち、血小板が捕捉された後の全血血液（処理済液）を回収するためのラインであり、主に、一端が血小板捕捉フィルター７（第１のハウジング部材８１）の流出口８１１に接続され、他端が処理済液回収バッグ４０内に連通するよう接続されたチューブ４１で構成されている。
【０１１１】
チューブ４１の途中には、チューブ４１の内部流路を遮断・開放し得る流路開閉手段としてのクランプ４４が設置されている。
【０１１２】
また、チューブ４１の途中には、血小板捕捉フィルター７の近傍に、後述する血小板因子回収手段６を構成するシリンジ６３を接続する第２の三方活栓（第２の流路切替器具）６４が設置されている。
【０１１３】
本実施形態では、チューブ４１の他端には、処理済液回収バッグ４０が接続されているが、これに代わり、例えば、返血ラインおよび返血用ポンプ等で構成される返血手段を設け、処理済液が、直接、供血者に返血されるようにしてもよい。
【０１１４】
第４のライン５は、血小板捕捉フィルター７内を通過した後の洗浄液（洗浄済液）を回収するためのラインであり、主に、一端がチューブ４１の途中に設置されたＹ字状をなす分岐コネクタ５３に接続され、他端が洗浄済液回収バッグ５０内に連通するよう接続されたチューブ５１で構成されている。すなわち、第４のライン５は、第２のライン４の途中に接続されている。
【０１１５】
チューブ５１の途中には、このチューブ５１の内部流路を遮断・開放し得る流路開閉手段としてのクランプ５４が設置されている。
【０１１６】
また、前記分岐コネクタ５３は、後述する血小板因子回収手段６の第２の三方活栓６４より下流側に設置されている。
【０１１７】
なお、チューブ５１の一端は、直接、血小板捕捉フィルター７に接続されていてもよい。
【０１１８】
また、第４のライン５は、必要に応じて、省略することもできる。この場合、前記洗浄済液は、第２のライン４を用いて回収するようにすればよい。
【０１１９】
血小板因子回収手段６は、血小板捕捉フィルター７により捕捉された血小板を活性化させ、この血小板から放出される血小板因子を回収する機能を有するものであり、主に、血小板捕捉フィルター７を介して設置された一対のシリンジ（第１の容器および第２の容器）６１、６３で構成されている。
【０１２０】
このうち、シリンジ（第１の容器）６１は、第１の三方活栓（第１の流路切替器具）６２を介して、チューブ２１（第１のライン２）の途中に接続され、また、シリンジ（第２の容器）６３は、第２の三方活栓（第２の流路切替器具）６４を介して、チューブ４１（第２のライン４）の途中に接続されている。
【０１２１】
血小板因子回収手段６では、第１の三方活栓６２および第２の三方活栓６４の流路の切替により、シリンジ６１とシリンジ６３との間で、交互に液体を移動させることができる。すなわち、血小板因子回収手段６は、液体が移動可能な流路（液流通手段）を有しており、本実施形態では、この流路が第１のライン２および第２のライン４の一部を共用するよう構成されている。これにより、血小板因子回収装置１の簡略化および小型化を図ることができる。
【０１２２】
また、本実施形態では、この流路の上流側に第３のライン３が接続されているため、後述するように、血小板因子の回収操作に先立って、流路内が洗浄液で洗浄されることとなる。このため、得られる血小板因子への不要性分（特に、白血球）等の混入をより低下させることができる。
【０１２３】
なお、血小板因子回収手段６は、第１のライン２および第２のライン４のいずれか一方と、その一部を共用するよう構成されていてもよいし、また、第１のライン２および第２のライン４と、別途、独立して設けられていてもよい。
【０１２４】
このような血小板因子回収手段６では、シリンジ６１、６３との間で、血小板に刺激を与えるための液体を移動させることにより、血小板捕捉フィルター７に捕捉された血小板と接触させ、これにより、血小板を活性化させる。すなわち、血小板因子回収手段６は、血小板を物理的刺激により活性化させるよう構成されている。
【０１２５】
そして、このとき、血小板因子回収手段６では、血小板から放出される血小板因子を、前記液体とともに、シリンジ６１またはシリンジ６３に回収する。
【０１２６】
血小板の活性化の方法としては、例えば、トロンビンのような惹起物質の血小板への接触によって行なうこともできるが、物理的刺激で血小板を活性化させるのが好ましい。これにより、血小板の活性化にあたり、生体由来の惹起物質を用いる場合に比べ、得られる血小板因子中へ細菌やウィルス等が混入する危険性をより確実に回避することができるという利点がある。
【０１２７】
使用する液体としては、血小板因子に悪影響を与えず、かつ、生体に対しても悪影響を与えることのないものであれば、特に限定されず、例えば、生理食塩水、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液等を用いることができる。
【０１２８】
血小板の活性化操作時における液体の流量としては、特に限定されないが、例えば、０．５〜１０ｍＬ／sec程度であるのが好ましく、１〜５ｍＬ／sec程度であるのがより好ましい。これにより、血小板をさらに確実に活性化させることができる。
【０１２９】
なお、血小板の活性化に用いる物理的刺激としては、血小板への液体の接触による刺激の他、例えば、超音波、電気、温度変化等による各種刺激が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。血小板の活性化に用いる物理的刺激として、超音波、電気、温度変化等による各種刺激を用いる場合には、血小板因子回収手段６には、これらの各種刺激を、血小板（血小板捕捉フィルター７）に付与することができる各種手段を設けるようにすればよい。
【０１３０】
前記各チューブ２１、３１、４１、５１の構成材料としては、特に限定されないが、例えば、ポリ塩化ビニルを用いるのが好ましい。これらのチューブがポリ塩化ビニル製であれば、十分な可撓性、柔軟性が得られるので取り扱いがし易く、また、クレンメ等による閉塞にも適するからである。
【０１３１】
また、前記各分岐コネクタ３３、５３の構成材料についても、それぞれ、前記チューブで挙げた構成材料と同様のものを用いることができる。
【０１３２】
また、前記処理済液回収バッグ４０および洗浄済液回収バッグ５０の構成材料としては、それぞれ、例えば、軟質ポリ塩化ビニルが好適に使用される。
【０１３３】
次に、血小板因子回収装置１の使用方法の一例について説明する。
［１］ まず、図１に示すように、第１のライン２および第３のライン３が、それぞれ血小板捕捉フィルター７より鉛直上方に位置し、また、第３のライン４および第４のライン５が、それぞれ血小板捕捉フィルター７より鉛直下方に位置するようにして設置する。
【０１３４】
また、第１の三方活栓６２および第２の三方活栓６４の部分においては、それぞれ、チューブ２１、４１の内部流路が連通した状態としておく。
【０１３５】
なお、このとき、各クランプ２４、３４、４４、５４は、それぞれ、閉状態とされており、かかる部分において、各チューブ２１、３１、４１、５１は、それぞれ、その内部流路が閉塞されている。
【０１３６】
次いで、この状態で、全血血液が収納された血液バッグ（図示せず）の排出口に、第１のライン２の針管２２を、また、洗浄液が収納された洗浄液収納バッグ（図示せず）のゴム栓に、第３のライン３の針管３２を、それぞれ刺通する。
【０１３７】
［２］ 次に、クランプ２４、４４を、それぞれ開状態として、チューブ２１、４１の内部流路を開放して、血液バッグ内の全血血液を、チューブ２１を介して、血小板捕捉フィルター７内へ供給し、血小板捕捉フィルター７内を通過した後の全血血液（処理済液）をチューブ４１を介して処理済液回収バッグ４０内へ回収する。
【０１３８】
より具体的には、血液バッグ内の全血血液を、落差（自重）によりチューブ２１を介して移送し、ハウジング８（第２のハウジング部材８２）の流入口８２１から血小板捕捉フィルター７内へ供給する。全血血液は、支持部材１０ｂのリング１０１内を通過する際に、その流れがフィルター９の中央部から放射状に均一に分散され、プレフィルター部材９２を構成する各多孔質膜９２１およびフィルター部材９１を構成する各多孔質膜９１１を、それぞれ通過する。このとき、血小板は、主にフィルター部材９１において捕捉され、その他の成分（不要成分）は、フィルター部材９１を通過し、支持部材１０ａを経て、ハウジング８（第１のハウジング部材８１）の流出口８１１から排出される。そして、処理済液（血小板が捕捉された後の全血血液）を、落差（自重）によりチューブ４１を介して移送し、処理済液回収バッグ４０内へ回収する。
このようにして、全血血液中より血小板が濾別・分離される。
【０１３９】
血小板の捕捉が終了したら、クランプ２４、４４を、それぞれ閉状態として、チューブ２１、４１の内部流路を閉塞する。
【０１４０】
［３］ 次に、クランプ３４、５４を、それぞれ開状態として、チューブ３１、５１の内部流路を開放して、洗浄液バッグ内の洗浄液を、チューブ３１を介して、血小板捕捉フィルター７内へ供給し、血小板捕捉フィルター７内を通過した後の洗浄液（洗浄済液）をチューブ５１を介して洗浄済液回収バッグ５０内へ回収する。
【０１４１】
より具体的には、洗浄液バッグ内の洗浄液を、落差（自重）によりチューブ３１を介して移送し、ハウジング８の流入口８２１から血小板捕捉フィルター７内へ供給して、ハウジング８内、特に、フィルター９を洗浄する。これにより、ハウジング８の内面やフィルター９等に付着している不要成分（特に、赤血球、白血球）が洗い流され、ハウジング８の流出口８１１より排出される。そして、洗浄済液を、落差（自重）によりチューブ５１を介して移送し、洗浄液回収バッグ５０内へ回収する。
【０１４２】
このような洗浄を行なうことにより、得られる血小板因子への不要成分の混入を、より確実に低下させることができる。
なお、このような洗浄は、任意であり、省略することもできる。
【０１４３】
血小板捕捉フィルター７内の洗浄が終了したら、クランプ３４、５４を、それぞれ閉状態として、チューブ３１、５１の内部流路を閉塞する。
【０１４４】
［４］ 次に、第１の三方活栓６２および第２の三方活栓６４を操作して、シリンジ６１の内部空間とシリンジ６３の内部空間とが連通するようにする。
【０１４５】
ここで、本実施形態では、シリンジ６１内に、血小板に刺激を与えるための液体が収納されているものとする。
【０１４６】
この状態で、シリンジ６１のプランジャを、内部空間の容積が減少する方向に移動操作すると、シリンジ６１内から前記液体が排出され、第１の三方活栓６２を経て、血小板捕捉フィルター７内へ供給される。かかる液体は、血小板捕捉フィルター７内において、フィルター９に捕捉された血小板と接触する。なお、液体の流量は、前述したような範囲に設定される。これにより、血小板は、活性化され、血小板因子を放出する。
【０１４７】
血小板から放出された血小板因子は、前記液体とともに、ハウジング８の流出口８１１より排出され、第２の三方活栓６４を経て、シリンジ６３内に収納される。なお、このとき、シリンジ６３の内部空間の容積が増大し、これに伴ってシリンジ６３のプランジャも移動する。
【０１４８】
このような操作（液体の移動）は、１回のみでもよいが、例えば、少なくとも１往復行なうのが好ましく、３〜１５往復程度行なうのがより好ましい。これにより、血小板をより確実に活性化させることができ、その結果、血小板因子の収率を増大させることができる。
【０１４９】
このようにして、シリンジ６１またはシリンジ６３に、例えば、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＴＧＦ）のような血小板因子を含む液体を回収する。
【０１５０】
以上、本発明の血小板捕捉フィルターおよび血小板因子回収装置を図示の実施形態について説明したが、本発明は、これに限定されるものではない。
【０１５１】
フィルター部材およびプレフィルター部材は、それぞれ、複数の多孔質膜（膜状多孔質体）を積層してなるものに代わり、例えばブロック状（塊状）等の多孔質体で構成されたものであってもよい。
【０１５２】
また、フィルターは、プレフィルター部材を、必要に応じて省略して、フィルター部材のみで構成されたものであってもよい。
【０１５３】
また、フィルターは、フィルター部材およびプレフィルター部材と異なる他の部材を、さらに含む（有する）ものであってもよい。
【０１５４】
また、血小板因子回収手段が有する第１の容器および第２の容器は、それぞれシリンジに代わり、例えば、可撓性を有するバック（容器）等で構成されていてもよい。
【０１５５】
また、前記実施形態では、被処理液として、全血血液を代表に説明したが、本発明では、例えば、多血小板血漿、濃厚血小板のような血小板懸濁液等を処理できることは言うまでもない。
【０１５６】
【実施例】
次に、本発明の具体的実施例について説明する。
【０１５７】
（実施例１Ａ〜１Ｄ）
まず、フィルターの表面のゼータ電位を調整するための物質（共重合体）を合成した。
【０１５８】
２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）４０ｇと、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）１２ｇとを、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２４０ｇに溶解した。
【０１５９】
この溶解液に、アゾイソブチルニトリル（ＡＩＢＮ）５２ｍｇを加え、窒素雰囲気下、７５℃で６時間、反応させた。
【０１６０】
反応終了後、反応液を濃縮し、かかる濃縮物をアセトン約２００ｍＬに溶解し、約３Ｌのヘキサン中に滴下し、精製した。
【０１６１】
この精製操作を３回繰り返した後、析出物を約１５０ｍＬのメタノールに溶解し、濃縮、真空乾燥を行い、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１６２】
この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１６３】
次に、２種類のポリエステル不織布（目付：３０g/m2、厚さ：０．２５ｍｍ、平均孔径：５７．４μｍ、および、目付：２０g/m2、厚さ：０．１５ｍｍ、平均孔径：１０．７μｍ）を用意し、かかるポリエステル不織布を、前記共重合体１％のメタノール溶液に浸漬した。なお、ポリエステル不織布の平均孔径は、パームポロメータ（ＰＭＩ社製）により測定した。
【０１６４】
浸漬終了後、５０℃に保持したＲＯ水でシャワー洗浄を行い、７０℃で乾燥し、前記共重合体でコーティングしたポリエステル不織布（コーティング済ポリエステル不織布）を得た。
【０１６５】
コーティング済ポリエステル不織布の表面のゼータ電位を、０．００１ＮのＫＣｌ水溶液を媒液とし、流動電位測定装置（（株）島津製作所社製「ＺＰ２０Ｈ」）で測定したところ、３４．１ｍＶであった。
【０１６６】
このコーティング済ポリエステル不織布を、それぞれ直径１９ｍｍに切断（カット）した。
【０１６７】
ハウジング内に、プレフィルター部材として、平均孔径５７．４μｍのコーティング済ポリエステル不織布７枚を流入口側に、フィルター部材として、平均孔径１０．７μｍのコーティング済ポリエステル不織布５６枚を流出口側に、それぞれ設置した（有効膜面積：２．２７ｃｍ２、体積：２．２７ｃｍ３、フィルター全体に対するフィルター部材の体積率：８２．８％）。
【０１６８】
また、フィルターの両面に、シリコーンゴム製リング（外径：１７ｍｍ、内径１５ｍｍ、厚さ：０．５ｍｍ）と、該リング内に挿入されたポリプロピレン製メッシュ（厚さ：０．２５ｍｍ）とを装着し、図２に示すような血小板捕捉フィルターを作成した。
【０１６９】
さらに、この血小板捕捉フィルターを用いて、図１に示すような血小板因子回収装置を４つ組み立てた。
【０１７０】
（実施例２）
前記共重合体の０．５％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１７１】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が２９．６ｍＶであった。
【０１７２】
（実施例３）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１７３】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１７４】
かかる共重合体の０．５％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１７５】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が２７．４ｍＶであった。
【０１７６】
（実施例４）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１７７】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１７８】
かかる共重合体の１．５％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１７９】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が３７．２ｍＶであった。
【０１８０】
（実施例５）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１８１】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１８２】
次に、ポリウレタン発泡体（目付：１３０g/m2、厚さ：０．６ｍｍ、平均孔径：８．０μｍ）を用意し、かかるポリウレタン発泡体の一部のものを、前記共重合体０．２％のメタノール溶液に浸漬した。なお、ポリウレタン発泡体の平均孔径は、前記実施例１と同様にして測定した。
【０１８３】
浸漬終了後、５０℃に保持したＲＯ水でシャワー洗浄を行い、７０℃で乾燥し、前記共重合体でコーティングしたポリウレタン発泡体（コーティング済ポリウレタン発泡体）を得た。
【０１８４】
コーティング済ポリウレタン発泡体および未コーティングのポリウレタン発泡体の表面のゼータ電位を、それぞれ、前記実施例１と同様にして測定したところ、３３．５ｍＶおよび４．７ｍＶであった。
【０１８５】
これらのコーティング済ポリウレタン発泡体および未コーティングのポリウレタン発泡体を、それぞれ直径１９ｍｍに切断（カット）した。
【０１８６】
ハウジング内に、プレフィルター部材として、未コーティングのポリウレタン発泡体２枚を流入口側に、フィルター部材として、コーティング済ポリウレタン発泡体８枚を流出口側に、それぞれ設置した（有効膜面積：２．２７ｃｍ２、体積：１．３６ｃｍ３、フィルター全体に対するフィルター部材の体積率：８０．０％）。
【０１８７】
また、フィルターの両面に、前記実施例１と同様のシリコーンゴム製リングと、ポリアミド製メッシュとを装着し、図２に示すような血小板捕捉フィルターを作成した。
【０１８８】
さらに、この血小板捕捉フィルターを用いて、図１に示すような血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１８９】
（比較例１）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１９０】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１９１】
かかる共重合体の０．３％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１９２】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が２４．９ｍＶであった。
【０１９３】
（比較例２）
前記実施例１と同様にして、ＭＥＡ／ＤＭＡＥＭＡ共重合体を得た。
【０１９４】
なお、この共重合体において、ＭＥＡとＤＭＡＥＭＡとの組成比は、ＮＭＲで確認したところ、７５：２５であった。
【０１９５】
かかる共重合体の２．０％メタノール溶液を用いて、ポリエステル不織布のコーティングを行なった以外は、前記実施例１と同様にして、コーティング済ポリエステル不織布を得、血小板捕捉フィルターを作成し、血小板因子回収装置を組み立てた。
【０１９６】
なお、コーティング済ポリエステル不織布は、その表面のゼータ電位が３９．２ｍＶであった。
【０１９７】
（比較例３Ａ〜３Ｄ）
市販の赤血球製剤用白血球除去フィルター（旭メディカル社製、「セパセルＲＺ」）に用いられているフィルターを用意した（目付：４１．３g/m2、厚さ：０．２ｍｍ、平均孔径：３．０μｍ）。なお、フィルターの平均孔径は、前記実施例１と同様にして測定した。
【０１９８】
フィルターの表面のゼータ電位を、前記実施例１と同様にして測定したところ、４５．０ｍＶであった。
このフィルターを、それぞれ直径１９ｍｍに切断（カット）した。
【０１９９】
ハウジング内に、かかるフィルターを、２４枚設置した（有効膜面積：２．２７ｃｍ２、体積：１．０９ｃｍ３）。
【０２００】
また、フィルターの両面に、前記実施例１と同様のシリコーンゴム製リングと、ポリプロピレン製メッシュとを装着し、図２に示すような血小板捕捉フィルターを作成した。
【０２０１】
さらに、この血小板捕捉フィルターを用いて、図１に示すような血小板因子回収装置を４つ組み立てた。
【０２０２】
［評価１］
実施例１Ａ〜実施例４および比較例１〜３Ａの血小板因子回収装置を用いて、それぞれ、クエン酸で抗凝固した健常人（ドナーＤ１）末梢血に対して、以下に示す処理を行ない、ＰＤＧＦ（血小板因子）を回収した。
【０２０３】
まず、ドナーＤ１末梢血（被処理液）３５ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２０４】
次いで、血小板捕捉フィルターに、２ｍＬの生理食塩水を２ｍＬ／secの流量で１０往復通液して、回収液３ｍＬを得た。
【０２０５】
実施例１Ａ〜実施例４および比較例１〜３Ａの血小板因子回収装置における処理時間（血液濾過時間）、白血球通過率、血小板捕捉率、ＰＤＧＦ濃度（濾液、洗浄済液、回収液）、ＰＤＧＦ回収総量および血小板１０９個当たりのＰＤＧＦ回収量を、それぞれ表１に示す。
【０２０６】
なお、白血球通過率および血小板捕捉率は、それぞれ、末梢血（被処理液）および濾液（処理済液）をサンプリングし、これらに含まれる白血球数および血小板数を、多項目自動血球分析装置（Ｓｙｓｍｅｘ社製、「Ｓｙｓｍｅｘ ＳＥ−９０００」）により、それぞれ測定し、その測定結果に基づいて算出した。
【０２０７】
また、ＰＤＧＦ濃度は、ＥＬＩＳＡ法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製、「Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ｈｕｍａｎＰＤＧＦ ｋｉｔ」により測定した。
【０２０８】
【表１】
表１に示す結果から、フィルター部材の表面のゼータ電位を２６〜３８ｍＶに設定した本発明（実施例１Ａ〜実施例４）の血小板因子回収装置では、いずれも、処理時間が短いものであった。
【０２１０】
また、本発明の血小板因子回収装置では、いずれも、血小板捕捉率が極めて高く、かつ、白血球通過率が極めて高い（白血球捕捉率が極めて低い）ものであり、その結果、フィルター部材の白血球による目詰まりにより、血小板が活性化されるのを抑制することができ、濾液中および洗浄済液中への血小板因子の混入が極めて低いものであることが確認された。
【０２１１】
また、本発明の血小板因子回収装置では、いずれも、物理的刺激により、効率良く血小板因子を回収できることが確認された。
【０２１２】
特に、フィルター部材の表面のゼータ電位を２９〜３５ｍＶに設定した本発明（実施例１Ａ、２）の血小板因子回収装置では、いずれも、前記結果がより優れるものであった。
【０２１３】
これに対し、比較例１の血小板因子回収装置では、フィルター部材の表面のゼータ電位が低いことにより、血小板捕捉率が極めて低いものであった。
【０２１４】
一方、比較例２、３Ａの血小板因子回収装置では、フィルター部材の表面のゼータ電位が高いことにより、白血球通過率が極めて低いもの、すなわち、血小板捕捉フィルターへの白血球の捕捉が過度に起こるものであった。
【０２１５】
このようなことから、比較例１〜３Ａの血小板因子回収装置では、いずれも、血小板因子を効率よく回収できないものであることが確認された。
【０２１６】
［評価２］
実施例１Ｂおよび比較例３Ｂ、３Ｃの血小板因子回収装置を用いて、それぞれ、クエン酸で抗凝固した健常人（ドナーＤ２）末梢血に対して、以下に示す処理を行ない、ＰＤＧＦ（血小板因子）を回収した。
【０２１７】
（実施例１Ｂ）
まず、ドナーＤ２末梢血（被処理液）３５ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水５ｍＬで洗浄した。
【０２１８】
次いで、血小板捕捉フィルターに、２ｍＬの生理食塩水を２ｍＬ／secの流量で１０往復通液して、回収液３ｍＬを得た。
【０２１９】
（比較例３Ｂ）
まず、ドナーＤ２末梢血（被処理液）３５ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２２０】
次いで、血小板捕捉フィルターに、トロンビン１Ｕ／１０ｅ８血小板となるように調製したトロンビン添加ＨＥＰＥＳ水溶液を添加し、１０分間放置した後、かかるＨＥＰＥＳ緩衝液を回収して、回収液３ｍＬを得た。
【０２２１】
（比較例３Ｃ）
まず、ドナーＤ２末梢血（被処理液）３５ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２２２】
次いで、血小板捕捉フィルターに、トロンビン１Ｕ／ｍＬのトロンビン添加ＨＥＰＥＳ緩衝液２４ｍＬを通液しつつ回収して、回収液２５ｍＬを得た。
【０２２３】
実施例１Ｂおよび比較例３Ｂ、３Ｃの血小板因子回収装置における処理時間（血液濾過時間）、白血球通過率、血小板捕捉率、ＰＤＧＦ濃度（濾液、洗浄済液、回収液）、ＰＤＧＦ回収総量および血小板１０９個当たりのＰＤＧＦ回収量を、それぞれ表２に示す。
【０２２４】
なお、白血球通過率、血小板捕捉率およびＰＤＧＦ濃度は、それぞれ、前記評価１と同様にして測定した。
【０２２５】
【表２】
表２に示す結果から、本発明（実施例１Ｂ）の血小板因子回収装置では、物理的刺激による血小板因子の回収により、トロンビン刺激による場合（比較例３Ｂ、３Ｃ）を上回るだけの血小板因子の回収量を得ることが可能であった。
【０２２７】
［評価３］
実施例１Ｃおよび比較例３Ｄの血小板因子回収装置を用いて、それぞれ、クエン酸で抗凝固した健常人（ドナーＤ３）末梢血に対して、以下に示す処理を行ない、ＰＤＧＦ（血小板因子）を回収した。
【０２２８】
（実施例１Ｃ）
まず、ドナーＤ３末梢血（被処理液）５０ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２２９】
次いで、血小板捕捉フィルターに、２ｍＬの生理食塩水を２ｍＬ／secの流量で１０往復通液して、回収液３ｍＬを得た。
【０２３０】
（比較例３Ｄ）
まず、ドナーＤ３末梢血（被処理液）５０ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２３１】
次いで、血小板捕捉フィルターに、トロンビン１Ｕ／１０ｅ８血小板となるように調製したトロンビン添加ＨＥＰＥＳ緩衝液を添加し、１０分間放置した後、かかるＨＥＰＥＳ溶液を回収して、回収液３ｍＬを得た。
【０２３２】
実施例１Ｃおよび比較例３Ｄの血小板因子回収装置における処理時間（血液濾過時間）、白血球通過率、血小板捕捉率、ＰＤＧＦ濃度（濾液、洗浄済液、回収液）、ＰＤＧＦ回収総量および血小板１０９個当たりのＰＤＧＦ回収量を、それぞれ表３に示す。
【０２３３】
なお、白血球通過率、血小板捕捉率およびＰＤＧＦ濃度は、それぞれ、前記評価１と同様にして測定した。
【０２３４】
【表３】
表３に示す結果から、本発明（実施例１Ｃ）の血小板因子回収装置では、被処理液量（末梢血血液量）が５０ｍＬの場合でも、３５ｍＬの場合（評価１における実施例１Ａを参照）と同様の性能が確認された。
【０２３６】
これに対し、比較例３Ｄの血小板因子回収装置では、被処理液量が５０ｍＬの場合、３５ｍＬの場合（評価２における比較例３Ｂを参照）と比較して、明らかに、その性能が低下するものであった。
【０２３７】
［評価４］
実施例１Ｄ、５および６の血小板因子回収装置を用いて、それぞれ、クエン酸で抗凝固した健常人（ドナーＤ４）末梢血に対して、以下に示す処理を行ない、ＰＤＧＦ（血小板因子）を回収した。
【０２３８】
まず、ドナーＤ４末梢血（被処理液）１０ｍＬを血小板捕捉フィルターで濾過した後、血小板捕捉フィルターを生理食塩水１０ｍＬで洗浄した。
【０２３９】
次いで、血小板捕捉フィルターに、２ｍＬの生理食塩水を２ｍＬ／secの流量で１０往復通液して、回収液２ｍＬを得た。
【０２４０】
実施例１Ｄ、５および６の血小板因子回収装置における処理時間（血液濾過時間）、白血球通過率、血小板捕捉率、ＰＤＧＦ濃度（濾液、洗浄済液、回収液）、ＰＤＧＦ回収総量および血小板１０９個当たりのＰＤＧＦ回収量を、それぞれ表４に示す。
【０２４１】
なお、白血球通過率、血小板捕捉率およびＰＤＧＦ濃度は、それぞれ、前記評価１と同様にして測定した。
【０２４２】
【表４】
表４に示す結果から、フィルター部材の表面のゼータ電位を２６〜３８ｍＶに設定した本発明（実施例１Ｄ、５および６）の血小板因子回収装置では、いずれも、処理時間が短いものであった。
【０２４４】
また、本発明の血小板因子回収装置では、いずれも、血小板捕捉率が極めて高く、かつ、白血球通過率が極めて高い（白血球捕捉率が極めて低い）ものであり、その結果、フィルター部材の白血球による目詰まりにより、血小板が活性化されるのを抑制することができ、濾液中および洗浄済液中への血小板因子の混入が極めて低いものであることが確認された。
【０２４５】
また、本発明の血小板因子回収装置では、いずれも、物理的刺激により、効率良く血小板因子を回収できることが確認された。
【０２４６】
＜まとめ＞
本発明の血小板因子回収装置（血小板捕捉フィルター）では、短時間で血小板を捕捉することが可能であった。
【０２４７】
また、本発明では、濾液中および洗浄済液中での血小板因子の濃度が極めて低いことから、濾過中のフィルターの目詰まりによる血小板への刺激を抑制することができるものであることが確認された。
【０２４８】
さらに、本発明では、血小板への刺激を抑制しつつ、血小板を捕捉することができるため、物理的な刺激のみで容易に血小板を活性化させることができ、十分量の血小板因子を確実に回収することができた。
【０２４９】
一方、比較例の血小板因子回収装置（血小板捕捉フィルター）では、血小板捕捉率が極めて低いものか、あるいは、血小板捕捉率は十分であるが、白血球の捕捉率が極めて高いものであった。
【０２５０】
特に、後者の場合、血液濾過時間が極めて長くなるとともに、経時的なフィルターの目詰まりにより血小板が刺激され、これにより、濾液や洗浄済液中に血小板因子が流出することが確認された。また、この場合、フィルターに捕捉されている血小板には、既に刺激が与えられていることから、トロンビン刺激によっても、十分量の血小板因子を回収することができなかった。
【０２５１】
【発明の効果】
以上述べたように、本発明によれば、血小板をより選択的に捕捉することができ、容易かつ短時間で、血小板から十分量の血小板因子を回収することができる。
【０２５２】
フィルター部材の表面のゼータ電位や平均孔径の設定、プレフィルター部材の設置、洗浄液を供給する第３のラインの設置等により、前記効果をより向上させることができる。
【０２５３】
また、本発明では、濾過法の利点である無菌的処理が可能であるとともに、大量で迅速な処理が可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の血小板因子回収装置の全体構成を示す概略図である。
【図２】本発明の血小板捕捉フィルターの構成を示す分解斜視図（一部断面で示す）である。
【符号の説明】
１ 血小板因子回収装置
２ 第１のライン
２１ チューブ
２２ 針管
２４ クランプ
３ 第３のライン
３１ チューブ
３２ 針管
３３ 分岐コネクタ
３４ クランプ
４ 第２のライン
４０ 処理済液回収バッグ
４１ チューブ
４４ クランプ
５ 第４のライン
５０ 洗浄済液回収バッグ
５１ チューブ
５３ 分岐コネクタ
５４ クランプ
６ 血小板因子回収手段
６１ シリンジ
６２ 第１の三方活栓
６３ シリンジ
６４ 第２の三方活栓
７ 血小板捕捉フィルター
８ ハウジング
８１ 第１のハウジング部材
８１１ 流出口
８１２ 内腔部
８１３ 縮径部
８１４ 嵌合部
８２ 第２のハウジング部材
８２１ 流入口
８２２ 内腔部
８２３ 縮径部
８２４ 嵌合部
９ フィルター
９１ フィルター部材
９１１ 多孔質膜
９２ プレフィルター部材
９２１ 多孔質膜
１０ａ、１０ｂ 支持部材
１０１ リング
１０２ メッシュ
Claims (11)
- 血小板を含む被処理液から前記血小板を捕捉する血小板捕捉フィルターであって、
流入口と流出口とを備えるハウジング内に、多孔質体で構成され、その表面をアルコキシアルキル（メタ）アクリレートとアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとを主とする共重合体で被覆されたフィルター部材を含むフィルターを収納してなり、
前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートは、２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）または２−メトキシエチルメタクリレート（ＭＥＭＡ）であり、
前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートは、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルアクリレート（ＤＭＡＥＡ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルアクリレート（ＤＭＡＰＡ）、および２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルメタアクリレート（ＤＭＡＰＭＡ）の中から選択された１つであり、
前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートと前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとの組成比は、８５：１５〜５０：５０であることを特徴とする血小板捕捉フィルター。 - 前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートは、前記２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）であり、
前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートは、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）である請求項１に記載の血小板捕捉フィルター。 - 前記アルコキシアルキル（メタ）アクリレートと前記アルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートとの組成比は、８０：２０〜６０：４０である請求項１または２に記載の血小板捕捉フィルター。
- 前記フィルター部材は、その平均孔径が５〜２０μｍである請求項１ないし３のいずれかに記載の血小板捕捉フィルター。
- 請求項１ないし４のいずれかに記載の血小板捕捉フィルターと、
前記流入口に接続され、前記血小板捕捉フィルター内に、前記被処理液を供給する第１のラインと、
前記流出口に接続され、前記血小板捕捉フィルター内を通過した液体を回収する第２のラインと、
前記血小板捕捉フィルターにより捕捉された血小板を活性化させ、該血小板から放出される血小板因子を回収する血小板因子回収手段とを有することを特徴とする血小板因子回収装置。 - 前記血小板回収手段は、前記血小板を物理的刺激により活性化させる請求項５に記載の血小板因子回収装置。
- 前記血小板因子回収手段は、前記第１のラインおよび／または前記第２のラインの一部を共用するよう構成されている請求項５または６に記載の血小板因子回収装置。
- 前記血小板因子回収手段は、前記血小板捕捉フィルターを介して設置された一対の容器を有し、このうち、第１の容器は、前記第１のラインに接続され、第２の容器は、前記第２のラインに接続されている請求項５ないし７のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
- 前記第１のラインの途中には、第１の流路切替器具が設置され、該第１の流路切替器具を介して、前記第１の容器が前記第１のラインに接続されている請求項８に記載の血小板因子回収装置。
- 前記第２のラインの途中には、第２の流路切替器具が設置され、該第２の流路切替器具を介して、前記第２の容器が前記第２のラインに接続されている請求項８または９に記載の血小板因子回収装置。
- 前記第１の容器と前記第２の容器との間で、血小板に刺激を与えるための液体を移動させることにより、前記血小板捕捉フィルターに捕捉された血小板と接触させ、これにより、前記血小板を活性化させる請求項８ないし１０のいずれかに記載の血小板因子回収装置。
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