JP4451115B2 - ミツバチの病気の抑制方法 - Google Patents
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アメリカ腐蛆病菌は、活発な蜂児生産時期の間にいつでも発生する。最初は罹病群の蜂数に顕著な減少は見られなく、少数の死亡した幼虫や蛹が存在するだけである。しかしながら、次の時期には、病気によって深刻な弱群となり、蜂群は死滅することになる。
しかしながら、前記の方法では、ミツバチから採取してくる蜂蜜の品質に影響を与えてしまう恐れがあり、また、この方法で集団飼育の環境にあるミツバチ全体に対して病気の予防効果を期待することは困難である。
また、本発明において特に好ましいのは、油溶性甘草エキス、甘草エキス、甘草乾燥エキスのいずれかである甘草、もしくは厚朴乾燥エキスである。
本発明の抗菌剤の有効成分である生薬(甘草及び厚朴)、ヒノキチオール及びローヤルゼリー抽出物のアメリカ腐蛆病菌(Paenibacillus larvae)及びその類縁菌である枯草菌(Bacillus subtilis)に対する、抗菌効果(静菌作用及び抗菌効果)について調査した。
名称:油溶性甘草エキス。
性状等:黄褐色の粉状で、水に不溶、アルコールに可溶性物質。
保管条件:冷暗所。
名称:新疆産甘草。
性状等:黄褐色の粉状で、水に可溶性物質。
保管条件:冷暗所
名称:甘草乾燥エキス。
性状等:灰褐色の粉状で、水に可溶性物質。
保管条件:冷暗所
名称:甘草エキス。
性状等:褐色のペースト状で、水に可溶性物質である。
保管条件:冷暗所
名称:厚朴乾燥エキス。
性状等:灰褐色の粉状で、水に可溶性物質。
保管条件:冷暗所
名称:ヒノキチオール。
性状等:白色の粉状で、水に不溶、アルコールに可溶性物質。
保管条件:冷暗所。
名称:ローヤルゼリー抽出物。
性状等:白色の固形で、水に不溶、アルコールに可溶性物質。
被験物質1−7のPaenibacillus larvaeに対する抗菌効果及び対照株のBacillus subtilisに対する抗菌効果を調査した。
可溶性溶媒を用いて、濃厚な溶液(以下「原液」という。)を調製した。なお、原液においては、以下の事項について予め調査を行い、抗菌効果を評価する際の参考資料とした。
(1)-1 原液中の細菌及び真菌の有無について、
(1)-2 それぞれの被験物質を使用して培地を調製した際の pHを測定した。
(3) それぞれの菌株で以下に示す培地を使用して測定用培地を用意した。
(3)-1 Paenibacillus larvae
J培地 酵母エキス 10g
トリプトン 5g
リン酸水素二カリウム 3g
寒天末 15g
精製水 1000mL
(3)-2 Bacillus subtilis
ミュラーヒントン寒天培地(BBL社製)
被験物質1〜5の培地中最終濃度は、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56、5.12及び10.24%の11段階とした。
被験物質6の培地中最終濃度は、1、2、4、8、16、32、64、128、256、512及び1024ppmの11段階とした。
被験物質7の培地中最終濃度は、1、2.5、5、10、15及び20%の6段階とした。
増殖用培地として上記(3)に示すぞれぞれの培地の寒天末を含まない培地を用いた。Paenibacillus larvaeは、微好気環境(37℃、5%CO2)下で48時間培養して、107CFU/mLになるように調製した。Bacillus subtilisは、37℃、好気環境下で培養して、106CFU/mLになるように調製した。
(7) 以下のように判定した。
各被験物質を含有する培地に供試菌を接種し、Paenibacillus larvaeについては2日培養、Bacillus subtilisについては1日培養後に発育の有無を観察し、発育を抑制した最小濃度(Minimum Inhibitory Concentration、以下「MIC」という。)を判定した。
薬剤感受性試験において、菌の発育が抑制された培地上における接種部位周辺の寒天を採取し、被験物質を含有しない培地に移植して培養し、培養開始から7日間、菌の発育の有無を観察した。最終日に発育が認められなかった被験物質の最小濃度(Minimum Bactericidal Concentration、以下「MBC」という。)を判定した。
調査方法は、被験物質原液を培地に塗布して本試験の供試菌の発育条件で培養した時、発育する細菌及び真菌が存在するか否かを調査した。
細菌混在の確認には、トリプチケースソイ寒天培地(37℃、好気培養)及びハートインフュージョン寒天培地(37℃、微好気培養)、真菌混在の確認には、クロラムフェニコール添加サブロー寒天培地(37℃、好気培養)を使用した。なお、真菌の培養温度条件は通常25℃であるが、本試験では供試菌の培養が37℃であるため真菌混在の確認も37℃で行った。
その結果、各培養条件で、培養後7日までに菌の発育が認められなかったことから、今回供試した被験物質には試験に影響を及ぼす細菌及び真菌の混在はないことが確認された。
使用した培地は、J培地で被験物質無添加ではpH 7.1であった。被験物質1及び6は、最高濃度添加培地のpHが6.8であり、ほとんど変化は認められなかった。被験物質2〜5では、最高濃度添加培地のpHが5.3〜5.9で、多少酸性に傾いていたが、2.56% 添加培地ではpH6.5〜6.8の中性であった。
P. larvaeと対照株のB. subtilisのMIC値は被検物質1、3、4、5及び7では極めて近似した値を示した。
なお、薬剤感受性試験の接種菌液中濃度は、P. larvaeで1.8〜4.4×107 CFU/mL、B. subtilisで2.2×106CFU/mLであった。
Paenibacillus larvaeの薬剤感受性試験では、全被験物質で今回設定した濃度範囲内の低濃度でMIC値を示した。また、対照菌のBacillus subtilisでも同様の傾向が確認された。MIC試験で陰性を示した株を再度培養・観察した結果は、Paenibacillus larvaeではほとんどの株で増殖が確認され、被験物質1〜4及び6ではMBC値が最高濃度添加量以上となった。被験物質5のMBC値は、設定濃度範囲の中間である0.64%添加濃度であった。
このことから、今回の被験物質はPaenibacillus larvaeに対する静菌効果は期待できるが、被験物質5以外の被験物質の抗菌効果はあまり期待できないと推測された。
Claims (8)
- アメリカ腐蛆病菌及びその類縁菌である枯草菌に対する抗菌効果を有する生薬を有効成分とする抗菌剤をミツバチの巣箱に添加、塗布、噴霧するいずれかもしくはそれらの組合せによって、アメリカ腐蛆病菌及びその類縁菌である枯草菌による病気を抑制するミツバチの病気の抑制方法。
- アメリカ腐蛆病菌及びその類縁菌である枯草菌に対する抗菌効果を有するヒノキチオールを有効成分とする抗菌剤をミツバチの巣箱に添加、塗布、噴霧するいずれかもしくはそれらの組合せによって、アメリカ腐蛆病菌及びその類縁菌である枯草菌による病気を抑制するミツバチの病気の抑制方法。
- アメリカ腐蛆病菌及びその類縁菌である枯草菌に対する抗菌効果を有するローヤルゼリー抽出物を有効成分とする抗菌剤をミツバチの巣箱に添加、塗布、噴霧するいずれかもしくはそれらの組合せによって、アメリカ腐蛆病菌及びその類縁菌である枯草菌による病気を抑制するミツバチの病気の抑制方法。
- 前記生薬が、甘草または厚朴もしくはその両方であることを特徴とする請求項1に記載のミツバチの病気の抑制方法。
- 前記甘草が、油溶性甘草エキスであることを特徴とする請求項4に記載のミツバチの病気の抑制方法。
- 前記甘草が、甘草乾燥エキスもしくは甘草エキスのいずれかであることを特徴とする請求項4に記載のミツバチの病気の抑制方法。
- 前記厚朴が、厚朴乾燥エキスであることを特徴とする請求項4に記載のミツバチの病気の抑制方法。
- 前記抗菌効果が、静菌作用及び抗菌作用であることを特徴とする請求項1乃至7に記載のミツバチの病気の抑制方法。
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