KR101230975B1

KR101230975B1 - 꿀벌 부저병 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101230975B1
Application number: KR1020100101829A
Authority: KR
Inventors: 김권회; 황대우; 김곤섭; 조성수; 김태균
Original assignee: 김권회; (주)양성그린바이오
Priority date: 2010-10-19
Filing date: 2010-10-19
Publication date: 2013-02-07
Also published as: KR20120040421A

Abstract

본 발명은 유효성분으로 가자 추출물, 감초 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 함유하는 꿀벌 부저병 예방 또는 치료용 조성물 및 유효성분으로 가자 추출물, 감초 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 꿀벌에 처리하는 단계를 포함하는 꿀벌 부저병을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

꿀벌 부저병 예방 및 치료용 조성물{Composition for prevention and treatment of foulbrood in honey bee}

본 발명은 꿀벌 부저병 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 유효성분으로 가자 추출물, 감초 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 함유하는 꿀벌 부저병 예방 또는 치료용 조성물 및 유효성분으로 가자 추출물, 감초 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 꿀벌에 처리하는 단계를 포함하는 꿀벌 부저병을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

미국부저병( American foulbrood , AFB )

미국부저병(American foulbrood, AFB)은 꿀벌의 질병 중 병원성이 가장 강한 질병으로 알려져 있으며, 그 방제가 대단히 어렵다. 미국부저병의 병원체는 패니바실러스 라바에 (Paenibacillus larvae)이며, 간균이고 아포(spore)를 형성한다. 꿀벌의 유충은 이 병원체의 유일한 숙주로 알려져 있다. 간상의 식물형(vegetative form)이나 아포형(spore form)은 현미경하에서 관찰할 수 있는데, 그 크기는 간상의 식물형은 2.5 ~ 5.0 × 0.5 ~ 0.8 ㎛이며, 아포형은 1.1 ~ 1.9 × 0.6 ~ 0.7 ㎛이다.

아포는 햇볕, 건조, 열, 냉동 및 화학약품에 대한 저항성이 강한 것으로 알려져 있는데, 5% 석탄산에서 2개월, 끓는 물에서 15분에도 저항성이 있으며, 꿀에 있는 아포는 100℃에서 30분간의 조건에서도 감염력을 가질 정도이다. 밀랍 속에 있는 것은 100℃에서 5일간 가열해도 발아력을 가지는 것이 있으나, 30분간 이상 끓는 조건에서는 감염력이 감소했다는 보고들이 있다.

상기 부저병은 아포의 전파에 의하여 한 유충에서 다른 유충으로, 한 봉군에서 다른 봉군으로, 한 양봉장에서 이웃 양봉장으로 전염되어 간다. 또는, 외부에서 오염된 화분, 소비와 소상 등을 구입하여 사용했을 경우와 같은 밀원에 여러 봉장에서 모여든 성충의 감염된 몸체에 의하여 전염될 수 있다. 아포는 오염된 먹이와 함께 건전한 유충의 위에 들어가서 발아하여 증식하면서 아포를 형성하면서 유충을 부패케 한다. 이 부패한 유충을 제거하는 일벌 등의 입이나 다리, 또는 부저병에 걸려있는 벌통에서 채밀한 꿀에 의하여 다른 유충이나 다른 봉군, 또는 점차 넓은 지역에 점진적으로 옮겨간다. 즉, 오염된 밀원(꽃), 오염된 양봉기구, 오염된 소비의 사용과 그들의 교환에 의하여 전파되며 병든 벌통에서의 도봉들에 의하여 전염되고 있다.

상기 부저병은 모든 벌의 유충이나 번데기에 감염되나 주로 일벌의 유충과 번데기에서 발병하며, 발병시기는 주로 봄에서 가을이다. 병에 걸린 봉개는 벌방쪽으로 약간 움푹 들어가 있으며, 작은 구멍이 나 있다. 유충 초기에 감염된 것은 봉개이전 유충이 부패하여 소방밑으로 가라앉아있다. 병에 걸린 유충의 초기증상은 머리에 흑색반점이 나타나는 것이다. 갓 죽은 것은 황갈색이지만 점차 흑갈색으로 변한다. 미국부저병의 검사방법은 상기 균의 식물형은 아닐린(Anilin) 색소에, 아포형은 니그로신(Nigrosine) 색소에 염색하여 현미경으로 관찰하는 방법이 있으며, 상기 병에 걸린 유충 또는 번데기에 함유된 효소가 우유에 있는 카제인(Casein)을 녹이는 성질을 이용한 우유시험법이 있다.

미국부저병의 예방은 상기 병이 벌의 유충에만 걸리고 성충에는 걸리지 않으므로 병세가 나타난 벌통에서 벌이 붙은 소비를 꺼내어 다른 새 벌통에 털어 담고 오염된 소비를 태우는 방법이 있으나, 이 방법은 일벌의 몸에 아포가 붙어 있을 가능성이 있고 아포를 제거할 수 없으므로 재발의 여지가 많다. 상기 병은 아직 완전한 방제법이 없으며, 전염성이 강하여 일단 발병된 봉군은 벌을 죽인 다음 소비와 벌을 소각하여, 다른 봉군에의 전파를 예방하여야 한다. 다양한 양봉 산물 채취기구(꽃가루 채취기, 봉독 채취기 등)를 여러 벌통으로 옮겨 사용하기 때문에, 질병의 예방을 위하여, 오염된 기구는 불꽃 소독이나 10% 포르말린 소독(48시간 침지 또는 살포)을 실시한 후 사용해야 한다.

상기 부저병에 걸린 봉군의 치료를 위하여 설파제와 같은 항생제를 많이 사용하여 왔으나, 내성 문제로 인하여 치료가 잘 되지 않고 있으며, 벌꿀의 항생제 오염문제도 심각하다. 또한 이러한 약제들은, 아포가 체내에서 발아하여 증식형으로 되었을 때, 그 발육을 저지하는 효과는 있으나, 아포를 죽일 수는 없으므로 이병의 완치는 기대할 수 없으며, 약제의 사용을 중지하면, 재발하는 것이 보통이다. 따라서, 상기 미국부저병을 완전히 치료할 수 있는 약제는 없으므로, 본 발명자들은 천연물질 조성물을 이용하여 미국부저병을 예방 및 치료하고자 하였다.

유럽부저병 ( European foulbrood , EFB )

유럽부저병은 미국부저병에 비하면 병상이 가볍고, 일반적으로 흑색종과 그 외의 잡종벌, 특히 약한 봉군에서 큰 피해를 일으키는 질병이다. 병원균은 Bacillus alvei Cheshire-Cheyne와 Bacillus pluton White이며, 간균으로서 아포를 형성한다. 상기 병은 주로 일벌과 도봉들에 의하여 전파되는 것으로 알려져 있으며, 그 밖의 전파는 미국부저병과 유사하다. 상기 병에 걸린 유충은 머리 근방에 황색점이 나타나고, 병세가 진행됨에 따라 몸 전체가 황색, 회갈색, 흑갈색 및 흑색으로 변하면서 부패한다. 상기 병은 약한 봉군에서 발병하기 쉬우므로, 봉군의 세력만 강하면 봄, 여름에 감염되는 일은 드물기 때문에 이른 봄철에 풍부한 양질의 꿀 및 화분을 급여해서 봉군의 세력을 강화시켜주는 것이 필요하다. 항생제 사용이 일반적인 방제 방법이지만 내성 문제와 양봉 산물에 항생제 잔류에 의한 인체에 미치는 영향이 크므로 문제점이 많다.

한국등록특허 제10-0946592호에는 초액이 함유된 꿀벌 사료용 조성물이 개시되어 있으며, 한국공개특허 제2010-0032850호에는 꿀벌 부저병 예방용 양봉조성물이 개시되어 있다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 꿀벌 부저병 원인체에 대해 항균력을 가지는 천연물 추출물을 스크리닝하고, 상기 추출물을 투여한 꿀벌에서 부저병의 감염이 억제된 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 유효성분으로 가자 추출물, 감초 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 함유하는 꿀벌 부저병 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 유효성분으로 가자 추출물, 감초 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 꿀벌에 처리하는 단계를 포함하는 꿀벌 부저병을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 꿀벌 부저병 예방 및 치료용 조성물을 이용하면, 미국부저병을 효과적으로 예방 및 치료가 가능하므로 꿀벌 농가의 생산성을 높이는데 유용할 것으로 사료된다. 또한, 상기 조성물은 인체에 무해한 천연약용식물들을 이용한 것이므로, 생체내에서 독성이 없고 안전성이 높다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 유효성분으로 가자 추출물, 감초 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 함유하는 꿀벌 부저병 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 꿀벌 부저병 예방 또는 치료용 조성물은 유효성분으로 가자 추출물, 감초 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물 각각을 함유할 수도 있고, 상기 추출물의 2가지, 3가지, 4가지의 혼합물을 함유할 수도 있고, 5가지 추출물 모두를 함유할 수도 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분 외에도 꿀벌 부저병의 예방 또는 치료에 효과적인 것으로 기존에 알려진 성분을 추가로 함유할 수도 있다.

상기 5가지 추출물은 에탄올 추출과정, 메탄올 추출과정 또는 열수 추출과정에 의해 제조될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 상기 에탄올 추출과정, 메탄올 추출과정 또는 열수 추출과정은 당업계에 주지되어 있다. 바람직하게는 상기 5가지 추출물은 에탄올 추출물 또는 열수 추출물이다.

상기 꿀벌 부저병은 미국부저병 또는 유럽부저병일 수 있으며, 바람직하게는 미국부저병일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 가자의 원식물은 사군자과(Combretaceae)에 속하는 낙엽교목인 가자 또는 이의 변종인 융모가자의 성숙한 과실일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 상기 가자는 가을 및 겨울에 채취하여 핵을 제거하고 과육만 쇄건한 것을 사용할 수 있다.

상기 감초의 원식물은 콩과(Leguminosae)에 속하는 다년생 숙근초본인 감초(우랄감초) 또는 장과감초(미감초)의 근 및 근경일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 상기 감초는 봄과 가을에 채취하여 수근을 제거하고 쇄건한 것을 사용할 수 있다.

상기 고삼의 원식물은 콩과(Leguminosae)에 속하는 다년생 초본인 고삼의 근일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 상기 고삼은 봄과 가을에 채취하여 쇄건한 것을 사용할 수 있다. 더욱 바람직하게는 상기 고삼은 가을에 채취한 것을 사용할 수 있다.

상기 오갈피의 원식물은 두릅나무과에 속하는 갈잎떨기나무, 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorus Seem), 서울오갈피(Acanthopanax seoulense Nakai), 지리산오갈피(Acanthopanax chilisanesis Nakai), 오가나무(Acanthopanax sieboldianum Makino) 또는 섬오갈피(Acanthopanax koreanum Nakai)의 뿌리껍질과 나무껍질일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

상기 오배자는 옻나무과에 속하는 갈잎떨기나무 또는 붉나무(Rhus javanica Linne)의 잎에 오배자진딧물이 기생하여 생긴 벌레집일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

상기 조성물은 분무용 조성물, 인공화분 조성물 또는 설탕사양액 조성물로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 상기 조성물에 유효성분으로서 포함된 각 추출물의 양은 그 사용 목적(예방 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

또한, 본 발명은 유효성분으로 가자 추출물, 감초 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 꿀벌에 처리하는 단계를 포함하는 꿀벌 부저병을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 추출물의 처리 방법은 생약추출물의 분무 방법, 생약추출물을 첨가한 인공화분 조성물 투여 방법, 생약추출물을 첨가한 설탕사양액 조성물 투여 방법 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

1. 천연약용식물의 추출

가. 생약재의 선정

꿀벌의 부저병을 일으키는 패니바실러스 라바에(Paenibacillus larvae) 균에 대한 항균성 측정시험 결과 시험결과가 우수한 가자, 감초, 고삼, 오가피 및 오배자를 선정하였다.

나. 생약재 처리

천연약용식물인 생약재의 재료는 깨끗한 물로 2회 이상 씻어준 다음, 열풍 건조 또는 자연건조시킨 후 열수 추출 또는 에탄올 추출을 하였다.

다. 생약재의 열수 추출

생약재를 분쇄기를 이용하여 분쇄한 다음, 분쇄된 생약재 100g에 증류수 1,000 ㎖를 넣고, 60℃에서 16시간 동안 추출 후, 다시 100℃에서 30분간 동안 추출하였다. 상기 추출액은 Advantec 1번 Filter paper를 이용하여 1차 여과 후 5,000 rpm에서 30분간 원심분리되었다. 상기 상등액을 Advantec 1.0 ㎛ Membrane filter를 이용하여 여과한 후, 진공농축기(EYELA SB1000^TM)를 이용 80℃ 온탕수조에서 10배로 감압 농축하였다.

라. 생약재의 에탄올 추출

생약재를 분쇄기를 이용하여 분쇄한 다음, 70% 에탄올 1,000 ㎖에 생약재 100g을 넣고 60℃에서 4시간 동안 가열하여 각각 추출하였으며, 상기 추출액은 Advantec 1번 Filter paper를 이용한 1차 여과 후, 5,000 rpm에서 30분간 원심분리되었다. 상기 상등액을 Advantec 1.0 ㎛ Membrane filter를 이용하여 다시 여과한 후 진공농축기(EYELA SB1000^TM)를 이용하여 80℃ 온탕수조에서 10배로 감압 농축하였다.

2. 천연약용식물에 대한 항균성 측정

가. 항균성 실험에 사용한 병원체

생약성분의 항균성 측정을 위하여 꿀벌에서 부저병을 일으키는 패니바실러스 라바에(Paenibacillus larvae) 균에 대한 항균성 측정 실험을 하였다.

나. 항균성 실험에 사용한 페이퍼 디스크

천연약용식물인 가자, 감초, 고삼, 오가피 및 오배자를 각각 에탄올 추출 또는 열수 추출하여 10배 농축된 용액으로 항균성을 측정하였다. 페이퍼 디스크(ADVANTEC AD49005040^TM, 6 ㎜)에 상기 농축된 생약 추출액을 20 ㎕씩 흡식시킨 다음, 50℃ 건조기에서 충분히 건조시킨 후 항균성 실험에 사용하였다.

3. 분무용 추출조성물 조성과정과 투여방법

가. 가자추출물 조성과정

천연식물 가자를 상기한 방법에 따라 에탄올 추출 또는 열수 추출하여 10배로 감압 농축시켰다. 그 다음, 혼합기(MIxer)에 증류수 900 ㎖를 넣고, 상기 농축된 가자 추출용액 100 ㎖를 서서히 넣으면서 10분간 혼합하여 총액을 1L로 조성하였다. 조성된 추출액은 고압증기멸균기(Autoclave)를 이용하여 100℃에서 15분간 멸균하였다.

나. 감초추출물 조성과정

천연식물 감초를 상기한 방법에 따라 에탄올 추출 또는 열수 추출하여 10배로 감압 농축시켰다. 그 다음, 혼합기(MIxer)에 증류수 900 ㎖를 넣고, 상기 농축된 감초 추출용액 100 ㎖를 서서히 넣으면서 10분간 혼합하여 총액을 1L로 조성하였다. 조성된 추출액은 고압증기멸균기(Autoclave)를 이용하여 100℃에서 15분간 멸균하였다.

다. 고삼추출물 조성과정

천연식물 고삼을 상기한 방법에 따라 에탄올 추출 또는 열수 추출하여 10배로 감압 농축시켰다. 그 다음, 혼합기(MIxer)에 증류수 900 ㎖를 넣고, 상기 농축된 고삼 추출용액 100 ㎖를 서서히 넣으면서 10분간 혼합하여 총액을 1L로 조성하였다. 조성된 추출액은 고압증기멸균기(Autoclave)를 이용하여 100℃에서 15분간 멸균하였다.

라. 오갈피추출물 조성과정

천연식물 오갈피를 상기한 방법에 따라 에탄올 추출 또는 열수 추출하여 10배로 감압 농축시켰다. 그 다음, 혼합기(MIxer)에 증류수 900 ㎖를 넣고, 상기 농축된 오갈피 추출용액 100 ㎖를 서서히 넣으면서 10분간 혼합하여 총액을 1L로 조성하였다. 조성된 추출액은 고압증기멸균기(Autoclave)를 이용하여 100℃에서 15분간 멸균하였다.

마. 오배자추출물 조성과정

천연식물 오배자를 상기한 방법에 따라 에탄올 추출 또는 열수 추출하여 10배로 감압 농축시켰다. 그 다음, 혼합기(MIxer)에 증류수 900 ㎖를 넣고, 상기 농축된 오배자 추출용액 100 ㎖를 서서히 넣으면서 10분간 혼합하여 총액을 1L로 조성하였다. 조성된 추출액은 고압증기멸균기(Autoclave)를 이용하여 100℃에서 15분간 멸균하였다.

바. 생약 5종 혼합 추출조성물 조성과정

가자 20g, 감초 20g, 고삼 20g, 오갈피 20g 및 오배자 20g을 상기한 방법에 따라 에탄올 추출 또는 열수 추출하여 10배로 감압 농축시켰다. 그 다음, 혼합기(Mixer)에 증류수 900 ㎖를 넣고 상기 농축된 추출용액 100 ㎖를 서서히 넣으면서 10분간 혼합하여 조성하였다. 조성된 추출액은 100℃에서 15분간 고압증기멸균하였다.

사. 분무용 추출조성물 투여방법

상기 각각의 추출조성물을 200 ㎖용 분무기에 각각 넣은 다음, 부저병에 감염된 소비에 직접 분무하여 각각의 생약추출물과 생약 5종 혼합 추출조성물의 치료효과 시험을 실시하였다.

4. 인공화분조성물 제조과정과 사양방법

가. 가자추출물과 인공화분 조성물

(1) 대두분 20 kg, 효모 5 kg 및 설탕 45 kg을 V형 혼합기를 이용하여 혼합한다.

(2) 정제수 2 L에 상기 분무용 가자추출물 200 ㎖를 혼합기에 넣고 5분간 혼합한 후, 정제수 15 L를 혼합기에 서서히 가하면서 10분간 혼합한다.

(3) 천연화분 20 kg을 반죽기에 넣고 상기 (2) 단계의 혼합물을 서서히 넣으면서 반죽한다. 그 다음, 상기 (1) 단계의 혼합물을 조금씩 서서히 넣으면서 30분 동안 반죽을 하면서 화분떡을 조성한다.

(4) 사양방법: 상기 조성된 화분떡을 넓게 펴서 만들어서 소비 10장을 기준하여 1통에 700g ~ 1200g을 소비위에 올려놓고 급이하였다.

나. 감초추출물과 인공화분 조성물

(2) 정제수 2 L에 상기 분무용 감초추출물 200 ㎖를 혼합기에 넣고 5분간 혼합한 후, 정제수 15 L를 혼합기에 서서히 가하면서 10분간 혼합한다.

다. 고삼추출물과 인공화분 조성물

(2) 정제수 2 L에 상기 분무용 고삼추출물 200 ㎖를 혼합기에 넣고 5분간 혼합한 후, 정제수 15 L를 혼합기에 서서히 가하면서 10분간 혼합한다.

라. 오갈피추출물과 인공화분 조성물

(2) 정제수 2 L에 상기 분무용 오갈피추출물 200 ㎖를 혼합기에 넣고 5분간 혼합한 후, 정제수 15 L를 혼합기에 서서히 가하면서 10분간 혼합한다.

마. 오배자추출물과 인공화분 조성물

(2) 정제수 2 L에 상기 분무용 오배자추출물 200 ㎖를 혼합기에 넣고 5분간 혼합한 후, 정제수 15 L를 혼합기에 서서히 가하면서 10분간 혼합한다.

바. 생약 5종 혼합 추출조성물과 인공화분 조성물

(2) 정제수 2 L에 상기 분무용 생약 5종 혼합 추출조성물 200 ㎖를 혼합기에 넣고 5분간 혼합한 후, 정제수 15 L를 혼합기에 서서히 가하면서 10분간 혼합한다.

5. 설탕사양액 조성물 제조과정과 사양방법

가. 가자추출물과 설탕사양액 조성물

(1) 정제수 2 L에 상기 분무용 가자추출물 200 ㎖를 첨가하여, 혼합기를 이용하여 5분간 혼합한다.

(2) 상기 (1) 단계의 조성물을 정제수 20 L에 혼합한 다음, 다시 정제수 18 L를 가하여 균일하게 혼합한다.

(3) 상기 (2) 단계의 혼합물을 용해탱크에 넣고 60℃에서 설탕 45 kg을 각반하면서 조금씩 넣으면서 서서히 용해시킨다.

(4) 완전히 용해시킨 후 10 ~ 15℃로 온도를 조절한다.

(5) 조성한 설탕사양액을 소비 10매의 벌통 1개에 사양액 1,700 ㎖를 소상내 사양기에 주전자를 이용하여 사양액을 1주일에 1회씩 3회 넣어 주었다.

나. 감초추출물과 설탕사양액 조성물

(1) 정제수 2 L에 상기 분무용 감초추출물 200 ㎖를 첨가하여, 혼합기를 이용하여 5분간 혼합한다.

(4) 완전히 용해시킨 후 10 ~ 15℃로 온도를 조절한다.

다. 고삼추출물과 설탕사양액 조성물

(1) 정제수 2 L에 상기 분무용 고삼추출물 200 ㎖를 첨가하여, 혼합기를 이용하여 5분간 혼합한다.

(4) 완전히 용해시킨 후 10 ~ 15℃로 온도를 조절한다.

라. 오갈피추출물과 설탕사양액 조성물

(1) 정제수 2 L에 상기 분무용 오갈피추출물 200 ㎖를 첨가하여, 혼합기를 이용하여 5분간 혼합한다.

(4) 완전히 용해시킨 후 10 ~ 15℃로 온도를 조절한다.

마. 오배자추출물과 설탕사양액 조성물

(1) 정제수 2 L에 상기 분무용 오배자추출물 200 ㎖를 첨가하여, 혼합기를 이용하여 5분간 혼합한다.

(4) 완전히 용해시킨 후 10 ~ 15℃로 온도를 조절한다.

바. 생약 5종 혼합추출조성물과 설탕사양액 조성물

(1) 정제수 2 L에 상기 분무용 생약 5종 혼합추출조성물 200 ㎖를 첨가하여, 혼합기를 이용하여 5분간 혼합한다.

(4) 완전히 용해시킨 후 10 ~ 15℃로 온도를 조절한다.

실시예 1: 항균성 실험

부저병의 원인체에 대한 항균성 실험을 실시하기 위하여, -80℃에 보관중인 균주를 TSB(Tryptic Soy Broth) 한천 평판 배지에서 25℃로 배양한 다음, 상기 배양된 콜로니를 TSB 배지에 접종하여 25℃에서 배양하였다. 상기 배양액의 균 증식은 분광광도계 (Beckman DU650^TM)를 이용하여 410 nm의 파장에서 O.D(Optical density) 값을 측정함으로써 확인되었는데, 상기 배양액의 O.D값을 1.0로 조정하여 사용하였다. 페트리디쉬(87 × 15 ㎜)에 TSB 한천 배지를 15 ㎖ 가하여 제조된 평판배지에 상기 균액 100 ㎕를 골고루 도말하고, 그 위에 각각의 생약재 페이퍼 디스크를 올려놓고 25℃ 인큐베이터에서 배양하였다. 그 후, 디스크 주변에 형성된 클리어존(clear zone: 균 증식이 억제되어 투명하게 형성된 지역)의 직경을 측정하였다(표 1).

부저병 원인균인 패니바실러스 라바에에 대한 항균성 실험 결과

균주명	클리어존
균주명	가자추출물	감초추출물	고삼추출물	오갈피추출물	오배자추출물
패니바실러스 라바에	1.0㎜	2.2㎜	2.0㎜	1.0㎜	2.5㎜

실시예 2: 생약추출물 분무 후, 각 조성물의 투여효과

생약추출물의 부저병 감염군에 대한 효능시험을 실시하기 위하여, 부저병에 감염된 7개 군을 선정하여, 생약추출물 분무군 5개 군과 5종의 생약추출물 혼합 분무군 1개 군, 그리고 생약추출물 미분무군을 대조군으로 하여 시험을 실시하였다. 그 결과, 대조군에서는 21일 후에 60% ~ 70% 이상이 감염되었으나, 감초 추출물, 오배자 추출물 및 5종 혼합추출물 시험군에서는 분무 3일 후부터 치료효과가 나타났다. 특히 오배자 추출물과 5종 혼합 추출물 시험군에서는 3일 후부터 그 치료 효과가 현저했으며, 21일 후에는 모든 시험군에서 100% 치료효과가 있었다(표 2).

각 생약추출물 분무 후, 치료효과 시험 결과

구 분	관찰기간	시험군						대조군
구 분	관찰기간	가자 추출물	감초 추출물	고삼 추출물	오갈피 추출물	오배자 추출물	5종혼합 추출물	대조군
부저병 감염군	생약추출물 처치전	+++	++	+++	++	+++	+++	+++
생약 추출물 분무 후	3일 후	++	++	+++	++	++	++	+++
	7일 후	+	+/-	+	+	+/-	+/-	++++
	21일 후	0	0	0	0	0	0	++++++

0: 100% 치료효과, +/-: 소비면적의 0.5% ~ 1% 감염, +: 소비면적의 10% 감염, ++: 소비면적의 20% 감염, +++: 소비면적의 30% 감염, ++++: 소비면적의 40% 감염, ++++++: 소비면적의 60% 감염

실시예 3: 생약추출물을 첨가한 인공화분 조성물 투여효과

생약추출물을 첨가한 인공화분 조성물 투여에 의한 효능시험을 실시하기 위하여, 부저병에 감염된 7개 군을 선정하여, 생약추출물을 첨가한 인공화분을 투여한 5개 군과 생약추출물 혼합 인공화분투여군 1개 군, 그리고 생약추출물 첨가하지 않은 인공화분첨가군을 대조군으로 하여 시험을 실시하였다. 대조군에서는 60% ~ 70% 이상이 감염되었으나, 5종 혼합추출물의 경우 3일 후부터 치료효과가 나타났으며, 7일 후에는 거의 모든 시험군에서 치료효과가 관찰되기 시작하여, 21일 후에는 100% 증상이 관찰되지 않았다(표 3).

생약추출물을 첨가한 인공화분 조성물 투여에 의한 효능시험결과

구분	관찰기간	시험군						대조군
구분	관찰기간	가자 조성물	감초 조성물	고삼 조성물	오갈피 조성물	오배자 조성물	5종혼합 조성물	대조군
부저병 감염군	생약추출물 처치전	+++	++	+++	++	+++	+++	+++
생약 추출물 분무 후	3일 후	+++	++	+++	++	++	++	+++
	7일 후	++	+/-	+	+	+	+/-	++++
	21일 후	0	0	0	0	0	0	++++++

0: 100% 치료효과, +/-: 소비면적의 0.5% ~ 1% 감염, +: 소비면적의 10% 감염, ++: 소비면적의 20% 감염, +++: 소비면적의 30% 감염, ++++: 소비면적의 40% 감염, ++++++: 소비면적의 60% 감염, 급이량: 자유급식

실시예 4: 생약추출물을 첨가한 설탕사양액 조성물 투여효과

생약추출물을 첨가한 설탕사양액 조성물 투여에 의한 효능시험을 실시하기 위하여, 부저병에 감염된 7개 군을 선정하여, 5종의 생약추출물 투여군 5개 군과 생약추출물 5종을 함유한 혼합 투여군 1개 군, 그리고 생약추출물 미첨가군을 대조군으로 하여 시험한 결과, 대조군에서는 60% ~ 70%이상 감염되었으나, 5종 혼합시험군은 3일 후부터 치료효과가 있었으며, 7일 후에는 거의 모든 생약조성물 군에서 효과가 양호하였으며, 21일 후에는 모든 시험군에서 거의 100% 치료효과가 있었다(표 4).

생약추출물을 첨가한 설탕사양액 조성물 치료효과시험 결과

구분	관찰기간	시험군						대조군
구분	관찰기간	가자 조성물	감초 조성물	고삼 조성물	오갈피 조성물	오배자 조성물	5종혼합 조성물	대조군
부저병 감염군	생약추출물 처치전	+++	++	+++	++	+++	+++	++
생약 추출물 분무 후	3일 후	+++	++	+++	++	+++	++	++
	7일 후	++	+/-	+	+	+	+/-	++++
	21일 후	0	0	0	0	0	0	+++++

Claims

유효성분으로 가자 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 함유하는 미국부저병 예방 또는 치료용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 4가지 추출물은 에탄올 추출물 또는 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 미국부저병 예방 또는 치료용 조성물.
삭제
유효성분으로 가자 추출물, 고삼 추출물, 오갈피 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 꿀벌에 처리하는 단계를 포함하는 미국부저병을 예방 또는 치료하는 방법.