KR102477969B1 - 어류 기생충 구제용 조성물 - Google Patents
어류 기생충 구제용 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102477969B1 KR102477969B1 KR1020220071211A KR20220071211A KR102477969B1 KR 102477969 B1 KR102477969 B1 KR 102477969B1 KR 1020220071211 A KR1020220071211 A KR 1020220071211A KR 20220071211 A KR20220071211 A KR 20220071211A KR 102477969 B1 KR102477969 B1 KR 102477969B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- death
- extract
- fish
- chumokpi
- composition
- Prior art date
Links
- 244000045947 parasite Species 0.000 title claims abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 32
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims abstract description 26
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 claims description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 45
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 11
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 abstract description 7
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 abstract description 3
- 240000004528 Catalpa ovata Species 0.000 abstract 1
- 235000010005 Catalpa ovata Nutrition 0.000 abstract 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 8
- 230000002940 repellent Effects 0.000 description 8
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 7
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 7
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 7
- 231100000111 LD50 Toxicity 0.000 description 6
- 241000269980 Pleuronectidae Species 0.000 description 6
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 6
- 241000269908 Platichthys flesus Species 0.000 description 5
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 5
- 238000011047 acute toxicity test Methods 0.000 description 5
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 5
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 4
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 4
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 235000006667 Aleurites moluccana Nutrition 0.000 description 3
- 240000007049 Juglans regia Species 0.000 description 3
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000036281 parasite infection Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000497908 Miamiensis avidus Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000006049 herbal material Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 2
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 2
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 2
- 102000014898 transaminase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 1
- 235000014653 Carica parviflora Nutrition 0.000 description 1
- 244000132059 Carica parviflora Species 0.000 description 1
- 241001478240 Coccus Species 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000269979 Paralichthys olivaceus Species 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 238000003287 bathing Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 230000001886 ciliary effect Effects 0.000 description 1
- -1 coumarin, lignan Chemical class 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000002816 gill Anatomy 0.000 description 1
- 210000004965 gill epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 239000012676 herbal extract Substances 0.000 description 1
- 230000003118 histopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000077 insect repellent Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 238000004898 kneading Methods 0.000 description 1
- 229930013686 lignan Natural products 0.000 description 1
- 235000009408 lignans Nutrition 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000009372 pisciculture Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/52—Juglandaceae (Walnut family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
Abstract
본 발명은 추목피 추출물을 유효성분으로 함유하는 어류 기생충 구제용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따르면, 종래 어류의 스쿠티카병 구제를 위하여 사용되었던 유해성이 높은 포르말린을 대신하여, 천연물 유래 추출물을 이용하여, 안전하고 효과적으로 스쿠티카충을 구제할 수 있다.
Description
본 발명은 생약제 추출물을 유효성분으로 함유하는 어류 기생충 구제용 조성물에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 추목피 추출물을 유효성분으로 함유하는 어류 기생충 구제용 조성물에 관한 것이다.
우리나라 양식생산량은 매년 증가하고 있으나, 양식장의 밀집, 노후화 및 연안 오염으로 수산생물의 질병문제는 우리나라 양식 수산업이 직면한 주요 현안문제 중 하나로 등극을 하였다. 그 중 대표 양식어종인 넙치는 2020년도 국내 어류 양식생산량 882백톤 중 438백톤으로 전체 생산량의 50%를 차지하는(통계청, 2021)하는 반면에 스쿠티카병(50.5%), 여윔증(19.3%), 연쇄구균병(15.7%) 등 질병으로 인해 연중 생산량의 15.1% 정도가 폐사하는 것으로 확인되었다(국립수산과학원, 2020).
스쿠티카병은 1990년 제주지역의 양식넙치에서 최초로 확인된 이후, 매년 전국 넙치 양식장에서 주로 치어기에 감염되어 대량폐사를 유발하였고, 근래에는 넙치 크기에 상관없이 심각한 경제적 피해를 일으켜 누적폐사가 46~57%까지 이르고 있다(국립수산과학원, 2016). 스쿠티카충은 스쿠티카병을 일으키는 섬모충류 기생충으로 현재 20여 종이 있으며, 그 중에서 넙치에 강한 병원성을 가지는 Miamiensis avidus가 우점종으로 밝혀졌다(Song et al., Dis. Aquat. Org., 83, 133, 2009). M. avidus는 혈청형 타입이 Ⅰ, Ⅱ가 있는 것으로 알려져 있으며, 타입별 특성이 다르다고 추정된다.
현재 국내에서 스쿠티카병을 치료하기 위해 허가받은 수산용 구충제는 포르말린과 과산화수소(’15년 품목허가)의 2개 유효성분이 있다. 그 중 수산용 포르말린은 2006년도에 최초로 5개의 제품이 품목허가를 받은 후, 2020년에 11개의 제품이 시판되고 있어 사용량이 가장 많다. 하지만 수산용 포르말린은 약욕제로 허가되어 있고, 스쿠티카충이 초기 체표 감염을 시작으로 뇌까지 감염되어 대량폐사를 일으킬 경우, 약욕으로는 치료가 어려워 수산용 포르말린의 약욕효능성에 대한 의문이 제기되고 있다.
세계보건기구(WHO) 산하 국제암연구소(International agency for Research on Cancer, IARC)에서는 포르말린(formaldehyde: CAS No. 50-00-0)을 흡입하거나 인체에 직접 노출 시 발암물질(Group 1)로 규정하고 있다. 그렇지만 미국식품의약국(FDA)은 포르말린(37% formaldehyde)이 수산질병 치료를 목적으로 사용하는 농도에서는 인체 및 수산식품의 안전성에 문제가 없다는 수산용 포르말린 승인에 근거하여 안전성 및 유효성에 대한 조사 후에 수산용 구충제로 사용승인을 받았으나, 포르말린이 가지는 이미지로 인해 언론과 환경단체에서 수산용 포르말린을 발암물질 및 환경파괴 물질로 규정하고 있다. 양식현장에서도 공업용 포르말린과의 구분 없이 사용함으로써 수산물에 대한 부정적인 이미지를 심화시켰다. 수산용 포르말린은 유해화학물질관리법(환경부)에 따라 유독물질로 분류되지 않지만, 공업용 포르말린과 유효성분이 같아 공업용 포르말린의 불법사용은 향후 지속적으로 발생할 개연성이 높다.
이러한 문제들로 인해 포르말린이 아닌 천연물 및 화학제제를 이용한 포르말린 대체제 개발 연구가 진행되어 왔으나, 대부분 백신 및 화학제제와 천연물제제에 대한 연구논문 및 특허등록 기술로 백신은 상품화 전단계이나, 화학제제 및 천연물제제 제품은 없다. 국내외에서 화학제제 사용으로 인해 발생하는 많은 부작용 때문에 천연물을 이용한 연구가 활성화되고 있으며, 특히 국내에서 2024년도부터는 농약허용물질목록관리시스템(Positive List System, PLS) 도입으로 인해 화학제제에 대한 규제가 더욱 강화될 예정이다.
이에, 본 발명자들은 이러한 문제들을 해결하기 위해 잔류문제에서 자유롭고, 안전하고 효능성이 높은 천연물을 대상으로 스쿠티카충 감염에 대하여 구충효능을 나타내는 포르말린 대체제를 개발하고자 예의 노력한 결과, 추목피 추출물이 스쿠티카충에 대하여 우수한 사멸효과를 가지는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 안전하고 효능성이 높은 천연물 추출물을 유효성분으로 함유하는 어류 기생충 구제용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 어류 기생충 감염 구제용 조성물을 이용한 어류 기생충의 구제방법을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 추목피 추출물을 유효성분으로 함유하는 어류 기생충 구제용 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 어류 기생충 감염 구제용 조성물을 경구 투여 또는 약욕 투여하는 단계를 포함하는 어류 기생충의 구제방법을 제공한다.
본 발명에 따르면, 종래 어류의 스쿠티카병 구제를 위하여 사용되었던 유해성이 높은 포르말린을 대신하여, 천연물 유래 추출물을 이용하여, 안전하고 효과적으로 스쿠티카충을 구제할 수 있다.
도 1은 수산용 구충제 스크리닝을 위하여 사용된 생약소재를 나타낸 것이다.
도 2는 추목피 추출물의 에탄올 추출 농도별 세포독성을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 추목피 추출물의 넙치 투여에 따른 폐사율(A; LC50, B; LD50)을 나타낸 것이다.
도 4는 추목피 추출물의 넙치 약욕에 따른 급성독성시험(LC50)의 혈액생화학적 분석 결과를 나타낸 것이다(ALP, alanine aminotransferase; GOT, glutamic oxalacetic transaminase; GPT, glutamic pyruvate transaminase; GLU, glucose; BUN, blood urea nitrogen).
도 5는 넙치에서 추목피 추출물의 투여방법별 스쿠티카충 구제효과를 나타낸 것이다.
도 2는 추목피 추출물의 에탄올 추출 농도별 세포독성을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 추목피 추출물의 넙치 투여에 따른 폐사율(A; LC50, B; LD50)을 나타낸 것이다.
도 4는 추목피 추출물의 넙치 약욕에 따른 급성독성시험(LC50)의 혈액생화학적 분석 결과를 나타낸 것이다(ALP, alanine aminotransferase; GOT, glutamic oxalacetic transaminase; GPT, glutamic pyruvate transaminase; GLU, glucose; BUN, blood urea nitrogen).
도 5는 넙치에서 추목피 추출물의 투여방법별 스쿠티카충 구제효과를 나타낸 것이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명에서는 양식 넙치에서 대량 폐사를 유발하는 어류의 기생충인 스쿠티카충을 잔류문제에서 자유롭고, 안전하고 효능성이 높은 천연물 추출물을 이용하여 구제하기 위하여, 생약제 추출물을 제작하고, 스쿠티카충에 대한 사멸능을 가지는 추출물을 스크리닝 하였으며, 추목피의 에탄올 추출물이 높은 스쿠티카충 사멸활성을 나타내는 것을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, 추목피 추출물을 유효성분으로 함유하는 어류 기생충 구제용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 어류 기생충은 스쿠티카충인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 추목피 추출물은 에탄올, 메탄올, 클로로포름 및 물로 구성된 군에서 선택되는 용매 추출물인 것을 특징으로 할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.
본 발명의 추목피 에탄올 추출물은 100~10% 에탄올 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 90~20% 에탄올 추출물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 80~30% 에탄올 추출밀일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 70~40% 에탄올 추출물인 것이 바람직하며, 더더욱 바람직하게는 60~45% 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.
본 발명에서 상기 추목피(楸木皮)는 가래나무(Junlans mandshyrica)의 나무껍질로, 가래나무‘과’와 가래나무 ‘속 ’은 전 세계적으로 15종, 우리나라에는 재배하는 것까지 합쳐서 4종이 있다.
우리나라에서 재배하는 4가지 종류로는 가래나무(가래추나무, 산추나무, 산추자나무), 호두나무(호도나무, 추자나무), 쪽가래나무, 섬가래나무(산호두나무)가 있다. 가래나무는 유글론(hydrojuglone)과 탄닌(tannin)계열의 성분이 다량 함유되어 있으며, 이외 퀴논, 페놀, 플라보노이드, 쿠마린, 리그난, 스테로이드 계열의 성분이 주요 함유되어 있으며, 가래나무 수피, 뿌리, 잎, 덜 익은 열매껍질 등이 살충, 살균효과를 나타내며, 특히 뿌리에서 분비되는 유글론은 세포독성, 항염증작용을 하고, 탄닌은 수렴작용으로 항균과 항염증 작용을 하는 것으로 알려져 있다.
다른 관점에서, 본 발명은 상기 어류 기생충 감염 구제용 조성물을 경구 투여 또는 약욕 투여하는 단계를 포함하는 어류 기생충의 구제방법에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 어류 기생충은 스쿠티카충인 것을 특징으로 할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 천연물 유래 수산용 구충제 후보물질 제작
생약제와 해조류를 대상으로 수산용 구충제 후보물질로 선정하여 추출을 하였다. 생약제는 용매별(열수 및 에탄올)로 추출물을 제작하였다. 생약제 50 g에 용매를 넣고 초음파 추출(3회 반복)하여 감압농축 후, 추출용매의 영향이 없어지도록 동결건조하였다. 마지막으로 Dimethyl sulfoxide (DMSO)에 녹여 농도별 투여하여 항기생충 효능성 측정에 사용하였다.
항기생충 효능이 알려진 생약소재 15종(도 1)을 대상으로 용매별(에탄올 및 열수)로 추출물을 제작하여, 감압농축 및 동결건조 후, 농도별(0~10,000 mg/L)로 스쿠티카충에 대한 효능성을 조사한 결과, 항기생충 효능성은 강활, 추목피, 사상자, 학슬에서 확인하였고, 효능성의 기준은 수산용 포르말린 투여 농도와 유사한 100 mg/L으로 나타났다(표 1).
실시예 2: 생약소재의 항기생충 효능성 확인 및 약물효력 농도 조사
실시예 1에서 제작한 생약 추출물의 스쿠타카충에 대한 사멸능을 확인하였다.
스쿠티카충에 감염된 개체 복강에서 충을 분리하여 어류주화세포(hirame natural embryo cell, HINAE)에 접종하고, 1% antibiotics(Gibco)와 10% FBS(Gibco)를 첨가한 MEM(Minimium essential media, Welgene) 배지를 이용하여 20℃ 인큐베이터에서 배양하였다. 3~4일 정도 배양하여 완전히 증식한 스쿠티카충은 3000 g, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 제거하여 스쿠티카충을 분리하였고, 96well에 1ㅧ104/well로 스쿠티카충을 분주해서 실험에 사용하였다. 배양된 스쿠티카충에 추출물을 농도별로 첨가하여 20℃ 배양기에서 10분, 30분, 1시간, 2시간 4시간 간격으로 살충여부(충체의 사멸정도, 움직임, 세포질 파괴정도)를 관찰하였다.
스쿠티카충 효능성에서는 강활이 가장 효과가 높게 나타났으나, 강활 경구투여에서 강한 어체독성을 확인하여 병리조직 검사결과, 아가미 상피의 탈락, 신장의 공포변성, 간에 위축증상을 나타내며, 전반적으로 약물독성반응이 나타났으며, 최종적으로 추목피>학슬>강활 순서대로 선정되었다.
| 후보물질 | 처리시간 | 대조구 | 100% EtOH 추출물 투여농도(mg/L) | ||||
| 1 | 10 | 100 | 1,000 | 10,000 | |||
| 강활 | 10 min | 100% | 100% | 100% | 80% | 사멸 | 사멸 |
| 30 min | 100% | 100% | 100% | 50% | 사멸 | 사멸 | |
| 1 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 2 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 4 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 추목피 | 10 min | 100% | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 |
| 30 min | 100% | 100% | 100% | 50% | 사멸 | 사멸 | |
| 1 h | 100% | 100% | 100% | 10% | 사멸 | 사멸 | |
| 2 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 4 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 사상자 | 10 min | 100% | 100% | 100% | 100% | 100% | 사멸 |
| 30 min | 100% | 100% | 100% | 100% | 50% | 사멸 | |
| 1 h | 100% | 100% | 100% | 50% | 50% | 사멸 | |
| 2 h | 100% | 100% | 100% | 30% | 사멸 | 사멸 | |
| 4 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 학슬 | 10 min | 100% | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 |
| 30 min | 100% | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | |
| 1 h | 100% | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | |
| 2 h | 100% | 100% | 100% | 50% | 사멸 | 사멸 | |
| 4 h | 100% | 100% | 100% | 50% | 사멸 | 사멸 | |
최종적으로 후보물질은 추목피 추출물로 선정하였으며, 수산용 구충제로의 안전성 및 주정법으로 제품화하기 위해서 50% 에탄올 추출물로 최종 선정하였다.
| 후보물질 | 처리시간 | 대조구 | 100% EtOH 추출물 투여농도(mg/L) | ||||
| 1 | 10 | 100 | 1,000 | 10,000 | |||
| 추목피 100% EtOH | 10 min | 100% | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 |
| 30 min | 100% | 100% | 100% | 70% | 사멸 | 사멸 | |
| 1 h | 100% | 100% | 100% | 20% | 사멸 | 사멸 | |
| 2 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 4 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 추목피 70% EtOH | 10 min | 100% | 100% | 100% | 20% | 사멸 | 사멸 |
| 30 min | 100% | 100% | 100% | 20% | 사멸 | 사멸 | |
| 1 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 2 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 4 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 추목피 50% EtOH | 10 min | 100% | 100% | 100% | 20% | 사멸 | 사멸 |
| 30 min | 100% | 100% | 100% | 20% | 사멸 | 사멸 | |
| 1 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 2 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 4 h | 100% | 100% | 100% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
추목피 50% 에탄올 추출물의 세부활성농도를 측정하기 위해서 재실험을 실시하여, 최종 40 mg/L에서 스쿠티카충이 사멸됨을 확인하여 최종적으로 40 mg/L으로 실험을 진행하였다.
| 후보물질 | 처리시간 | 대조구 | 50% EtOH 추출물 투여농도(mg/L) | ||||||
| 10 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 | 200 | |||
| 추목피 50% EtOH | 10 min | 100% | 100% | 100% | 100% | 90% | 90% | 60% | 60% |
| 30 min | 100% | 100% | 90% | 60% | 50% | 40% | 50% | 50% | |
| 1 h | 100% | 100% | 80% | 50% | 30% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 2 h | 100% | 100% | 80% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
| 4 h | 100% | 100% | 80% | 사멸 | 사멸 | 사멸 | 사멸 | 사멸 | |
실시예 3: 생약제 추출물의 세포독성 확인
어류주화세포(HINAE 세포)를 이용하여 제작한 추출물의 세포독성을 측정하였다. 1ㅧ105/well의 세포를 24시간 동안 20℃에서 배양하여 80% density를 확인 후, 추출물을 농도별(0~1,000 mg/L)로 처리하였다. 48시간 동안 인큐베이션 후, 세포독성 측정약물(CCK-8, Dojindo)을 처리하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 추목피 100% 에탄올 추출물의 경우 40 mg/L 이상의 농도에서 세포독성을 나타내었으나, 추목피 50% 에탄올 추출물의 경우 200 mg/L 농도에서도 세포독성을 나타내지 않았다.
실시예 4: 천연물 수산용 구충제의 어류 급성독성 시험
추목피의 안전성 평가를 위하여, 실험구별 10마리의 넙치(13.9±0.9 cm, 27.1±4.6 g)에서 약욕 및 경구 투여에 따른 급성독성시험(Lethal concentraion 50%; LC50, Lethal dose 50%; LD50)을 실시하였다. 추목피 50% 에탄올 추출물을 0~1,000 mg/L으로 제작하였고, 약욕 투여에서는 대조구 포함 1,000 mg/L까지 투여하였고, 경구 투여에서는 400 mg/kg/B.W.까지 농도별로 제작하여 투여하였다. 농도별로 추출물을 투여 후 96시간 동안 매일 폐사량을 조사하였고, 생존개체의 혈액 및 병리조직학적 검사를 실시하였다. 병리조직학 분석은 실험어의 아가미, 심장, 장, 신장, 간, 비장을 10%의 중성 포르말린에 고정 후, 탈수, 파라핀 포매과정을 수행하고, 자른 조직에 헤마톡실린-에오신(H＆E) 염색하여 조직을 검경하였다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, LC50(96h)은 509.06 mg/L으로 나타났으며, LD50(96h)은 805.8 mg/kg B.W.로 나타났다.
약욕에 따른 급성독성시험(LC50)의 혈액생화학적 분석 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 약물독성에 의한 주요 표적 장기인 간과 신장기능의 지표가 되는 항목들은 대조구와 비교하여 차이가 없었다. 그 중 GOT와 GPT 수치는 40 mg/L에서 현저히 감소하는 경향을 보이는데, 이는 추목피가 가지고 있는 효능 중 간보호 효과와 밀접한 관계가 있을 것으로 판단되었다.
급성독성평가 결과, 추목피 추출물의 넙치 약욕 및 경구투여에 따른 급성독성시험(LC50, LD50)에서 160 mg/L과 160 mg/kg/B.W.에서는 혈액생화학적 및 병리조직학적으로 유해한 영향이 나타나지 않아 안전함을 확인하였다.
실시예 5: 추목피 추출물의 구충제로서의 효능성 확인
질병에 걸리지 않은 건강한 넙치를 충청남도 태안의 넙치 양식장에서 구입하여, 해수유수식 육상수조에서 수온 20±1℃로 2주 동안 순치 후 실험어로 사용하였다. 실험어를 10마리씩 국립수산과학원 병리연구과에서 보존 중인 스쿠티카충(Ⅰ,Ⅱ) 1*105 cell/fish로 인위감염 시킨 후(스쿠티카충 타입 Ⅰ,Ⅱ) 2일째 40 mg/L 농도로 사료환에 첨가하여 어류 마취 후 1회 또는 2회 경구 및 약욕투여를 실시하였다. 이를 위하여 배합 분말사료에 반죽하여 사료환(약 0.25g)으로 제작 후, 40 mg/kg/B.W. 이 되도록 추목피 분말을 첨가하고, 한번 더 사료반죽으로 코딩하였다. 경구 투여 대조구는 추출물이 첨가되지 않은 동일 방법으로 제작된 사료환을 어류 마취 후 경구 투여하였다. 그래서 최종적으로 스쿠티카충에 의한 폐사를 확인하였다.
스쿠티카충 구제효과 조사 결과를 도 5에 나타내었다. 스쿠티카충의 타입차이에 의한 병원성은 크게 없었으며, 17일동안 스쿠티카충에 의한 폐사를 조사한 결과, 경구 투여구는 60~80% 상대생존율을 나타냈고, 약욕 투여구는 50~80%의 상대생존율을 확인하였다.
이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시예일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다. 본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 이용될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.
Claims (6)
- 추목피 추출물을 유효성분으로 함유하는 스쿠티카충 구제용 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 추목피 추출물은 에탄올, 메탄올, 클로로포름 및 물로 구성된 군에서 선택되는 용매 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추목피 추출물은 에탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항의 스쿠티카충 구제용 조성물을 경구 투여 또는 약욕 투여하는 단계를 포함하는 어류 기생충의 구제방법.
- 삭제
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220071211A KR102477969B1 (ko) | 2022-06-13 | 2022-06-13 | 어류 기생충 구제용 조성물 |
| US18/327,798 US20230398167A1 (en) | 2022-06-13 | 2023-06-01 | Composition for exterminating fish parasites |
| JP2023096789A JP2023181998A (ja) | 2022-06-13 | 2023-06-13 | 魚類寄生虫駆除用組成物｛Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｅｘｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ Ｆｉｓｈ Ｐａｒａｓｉｔｅｓ｝ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220071211A KR102477969B1 (ko) | 2022-06-13 | 2022-06-13 | 어류 기생충 구제용 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR102477969B1 true KR102477969B1 (ko) | 2022-12-15 |
Family
ID=84439628
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020220071211A KR102477969B1 (ko) | 2022-06-13 | 2022-06-13 | 어류 기생충 구제용 조성물 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20230398167A1 (ko) |
| JP (1) | JP2023181998A (ko) |
| KR (1) | KR102477969B1 (ko) |
-
2022
- 2022-06-13 KR KR1020220071211A patent/KR102477969B1/ko active IP Right Grant
-
2023
- 2023-06-01 US US18/327,798 patent/US20230398167A1/en active Pending
- 2023-06-13 JP JP2023096789A patent/JP2023181998A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Li F. et al, Journal of Ethnopharmacology 285 114887(2021.12. 2.)* * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2023181998A (ja) | 2023-12-25 |
| US20230398167A1 (en) | 2023-12-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Al-Sieni | The antibacterial activity of traditionally used Salvadora persica L.(miswak) and Commiphora gileadensis (palsam) in Saudi Arabia | |
| US9320771B2 (en) | TTO-based wide spectrum therapeutics, disinfectants and anesthetics for use in aquaculture | |
| KR100365151B1 (ko) | 어류 병원성 세균과 바이러스의 감염 예방 및 치료를 위한δ-아미노레불린산의 신규한 용도 | |
| Albuquerque et al. | Medicinal plants and animals of an important seasonal dry forest in Brazil. | |
| Shareef et al. | Neem (Azadirachta indica) and its potential for safeguarding health, prevention and treatment of diseases | |
| Mostafa et al. | Anti-saprolegnia potency of some plant extracts against Saprolegnia diclina, the causative agent of saprolengiasis | |
| Goto et al. | Antiparasitic effects of Sophora flavescens root extracts on the ciliate, Cryptocaryon irritans | |
| KR102477969B1 (ko) | 어류 기생충 구제용 조성물 | |
| CN111317000A (zh) | 一种中草药消毒剂及其制备方法和应用 | |
| KR20200071360A (ko) | 로즈힙을 활성성분으로 함유하는 치약 조성물 | |
| Azizi et al. | The effect of aquatic and alcoholic extracts of Citrullus colocynthis on growth of the Saprolegnia parasitica | |
| DE19917836A1 (de) | Konservierungsmittel auf Citrusfruchtbasis und/oder Flavonoidbasis | |
| KR101904371B1 (ko) | 새우의 급성간췌장괴사증후군 치료 또는 예방용 조성물 | |
| KR20220091177A (ko) | 난청의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| Kalia et al. | Efficacy of different extracts of propolis against Salmonella enterica serovar Typhimurium: In vitro and in vivo study | |
| KR101850697B1 (ko) | 어류의 스쿠티카충 감염 질병 예방 또는 치료용 약학 조성물, 및 이를 포함하는 천연 사료 | |
| KR100784917B1 (ko) | 부틸알데하이드를 이용한 스쿠티카충 살충용 조성물 | |
| CN108837029B (zh) | 一种防治水产动物水霉病的药物组合物及其制备方法 | |
| CN103444794A (zh) | 一种植物提取液制备的杀菌剂 | |
| Bhamare et al. | Neem: As a natural medicine | |
| KR101230975B1 (ko) | 꿀벌 부저병 예방 및 치료용 조성물 | |
| KR102010724B1 (ko) | 천연추출물을 포함하는 점액포자충 감염 예방 또는 치료를 위한 수산 동물 양식용 약학적조성물. | |
| Rosidah et al. | Potential of Aloe vera for treatment of infection with Aeromonas hydrophila bacteria on koi fry | |
| CN106177861A (zh) | 杀除鱼体内害虫的方法 | |
| Hsu et al. | Protective Role of Vernonia Amygdalina Leaf Aqueous Extract Against Neomycin-Induced Hair Cell Damage in Transgenic Zebrafish. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |