JP4376189B2 - 生理活性物質rs−k3574から成る、ユビキチン活性化酵素の阻害剤、ならびに生理活性物質rs−k3574から成る、細胞内タンパク質のユビキチン化の阻害剤 - Google Patents
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Description
で表されるパネポキシドン(panepoxydone)が知られる〔Biochemical and Biophysical Research Communications. 226号214〜221頁(1996)〕。そして、この文献には、パネポキシドンが炎症の惹起に関与するNF-κB転写因子の活性化を阻害できる活性をもつことが記載されるが、パネポキシドンは細胞内のタンパク質、RNAまたはDNAの生合成を阻害する活性を示さないことが記載される。パネポキシドン分子の立体的化学構造の研究は、Helvetica Chimica Acta, 53巻Fasc.7(1970), 第186号1577〜1597頁に記載されてあり、この後者の文献1578頁の表2および1579頁の記載によれば、パネポキシドンは比旋光度[α]D 20 −61°(溶媒、ジクロロメタン)を示す淡黄色の粘稠な油状物質である。
すなわち、第1の本発明においては、次式(I)
〔式中、2位、3位、4位および7位の立体配置はそれぞれS、S、R、Sである〕で表されるRS-K3574物質であって、しかも比旋光度〔α〕D 26 −62.3°(c 1.0, ジクロロメタン)を示す無色粘稠な油状物質であって、またシリカゲル薄層クロマトグラフィーでクロロホルム−メタノール(10:1)よりなる展開溶媒で展開して測定した場合に本RS-K3574物質は0.39のRf値を示し、さらに本RS-K3574物質のメタノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルにおける主なピークはλmax nm(ε); 209(8300)および241(5700)にあり;赤外線吸収スペクトル(KBr錠剤法)における主な吸収帯はνmax(cm−1); 3300〜3500、2979、2911、1681、1446、1379、1043、995、850、817、570にあり; 重クロロホルムCDCl3溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で125MHzで測定したRS-K3574物質のプロトン核磁気共鳴(1H-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は3.47(dd, J=3.9Hz, J=1.0Hz)、3.81(ddd, J=3.9Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、4.69(br s, J=1.2Hz, J=5.0Hz, J=1.0Hz)、6.71(ddd, J=5.0Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、5.29(br d, J=9.0Hz, J=1.2Hz)、5.02(dt, 9.0Hz, J=1.2Hz, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)であり、また重クロロホルムCDCl3溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で125MHzで測定したRS-K3574物質の炭素13核磁気共鳴(13C-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は、194.6(s)、53.9(d)、57.7(d)、63.2(d)、137.8(d)、139.0(s)、65.3(s)、123.6(d)、138.4(s)、25.8(q)、18.4(q)であることを特徴とする、生理活性物質RS-K3574から成る、ユビキチン活性化酵素の阻害剤が提供される。
次式(I)
〔式中、2位、3位、4位および7位の立体配置はそれぞれS、S、R、Sである〕で表される化合物であるRS-K3574物質であって、
しかも比旋光度〔α〕 D 26 −62.3°(c 1.0, ジクロロメタン)を示す無色粘稠な油状物質であって、
またシリカゲル薄層クロマトグラフィーでクロロホルム−メタノール(10:1)よりなる展開溶媒で展開して測定した場合に本RS-K3574物質は0.39のRf値を示し、
さらに本RS-K3574物質のメタノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルにおける主なピークはλ max nm(ε); 209(8300)および241(5700)にあり;
赤外線吸収スペクトル(KBr錠剤法)における主な吸収帯はν max (cm −1 ); 3300〜3500、2979、2911、1681、1446、1379、1043、995、850、817、570にあり;
重クロロホルムCDCl 3 溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で500MHzで測定したRS-K3574物質のプロトン核磁気共鳴( 1 H-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は3.47(dd, J=3.9Hz, J=1.0Hz)、3.81(ddd, J=3.9Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、4.69(br s, J=1.2Hz, J=5.0Hz, J=1.0Hz)、6.71(ddd, J=5.0Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、5.29(br d, J=9.0Hz, J=1.2Hz)、5.02(dt, J=9.0Hz, J=1.2Hz, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)であり、
また重クロロホルムCDCl 3 溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で125MHzで測定したRS-K3574物質の炭素13核磁気共鳴( 13 C-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は、194.6(s)、53.9(d)、57.7(d)、63.2(d)、137.8(d)、139.0(s)、65.3(s)、123.6(d)、138.4(s)、25.8(q)、18.4(q)であることを特徴とする生理活性物質RS-K3574から成る、細胞内タンパク質のユビキチン化の阻害剤が提供される。
シリカゲル(Art.105715、メルク社製)の薄層クロマトグラフィーでクロロホルム−メタノール(10:1)よりなる展開溶媒で展開して測定した場合
なお、M+は観察されず、(M−18)+が観察された。
(i)メタノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは添付図面の第1図に示す。主なピークは次のとおりである。
λmax nm(ε): 209(8300)、241(5700)
(ii)メタノール−HCl溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは添付図面の第2図に示す。主なピークは次のとおりである。
λmax nm(ε): 205(14200)、240(sh 5500)
(iii)メタノール−NaOH溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは添付図面の第3図に示す。主なピークは次のとおりである。
λmax nm(ε): 206(16400)、240(sh 5300)、304(2400)
νmax(cm−1): 3300〜3500、2979、2911、1681、1446、1379、1043、995、 850、817、570
重クロロホルムCDCl3溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で500MHzで測定したRS-K3574物質のプロトン核磁気共鳴(1H-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は3.47(dd, J=3.9Hz, J=1.0Hz)、3.81(ddd, J=3.9Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、4.69(br s, J=1.2Hz, J=5.0Hz, J=1.0Hz)、6.71(ddd, J=5.0Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、5.29(br d, J=9.0Hz, J=1.2Hz)、5.02(dt, J=9.0Hz, J=1.2Hz, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)である。
重クロロホルムCDCl3溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で125MHzで測定したRS-K3574物質の炭素13核磁気共鳴(13C-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は、194.6(s)、53.9(d)、63.2(d)、137.8(d)、139.0(s)、65.3(s)、123.6(d)、138.4(s)、25.8(q)、18.4(q)である。
前記の式(A)
のパネポキシドン(panepoxydone)の立体的化学構造と比較すると、本発明における生理活性物質RS-K3574は、既知の物質パネポキシドンの新しい立体異性体(7-エピマー)(もしくはエナンチオマーの可能性もある)であると認められる。
本発明における生理活性物質RS-K3574のユビキチン活性化酵素に対する阻害活性は、RS-K3574物質の100μg/ml以上の濃度でユビキチン活性化酵素を完全に阻害する強さをもつ。
ユビキチン活性化酵素に対するRS-K3574物質の阻害活性は、J. Nat., 65巻,1491−1493(2002)に記載の方法に準じて測定した。すなわち、ヒト由来のユビキチン活性化酵素を、組換遺伝子工学法で大腸菌に発現させ、この大腸菌からユビキチン活性化酵素を採取および精製することによってユビキチン活性化酵素試料を調製した。またウシ由来のユビキチンをビオチン化することによって調製されたビオチン化ユビキチンを、基質として用いた。前記のユビキチン活性化酵素と前記の基質をATP(アデノシン−5’−3リン酸)とともに、供試のRS-K3574物質の存在下または非存在下で37℃にて15分間反応させた。
得られた反応液をポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけて、ゲル内の分画されたところの、ビチオン化ユビキチンと結合した酵素タンパク質を、エレクトロブロットによりポリビニリデンジフロライド膜に吸着させた。この膜上におけるビオチン化ユビキチンに結合した酵素タンパク質の量をECL法(「Clin. Chem.」25巻、1531〜1546頁(1979年)参照)を用いて検定した。RS-K3574物質の存在下に上記の酵素反応を行った試験区において検出されたビオチン化ユビキチンに結合した酵素タンパク質の量と、RS-K3574物質の非存在下で酵素反応を行った対照試験区において検出されたビオチン化ユビキチンに結合した酵素タンパク質の量との比較によって、ビオチン化ユビキチンに結合したユビキチン活性化酵素の結合生成物の生成量がRS-K3574物質によって抑制される程度を判定した。
細胞内におけるタンパク質ユビキチン化に対する本発明における生理活性物質RS-K3574の阻害活性は、2μg/ml以上の濃度のRS-K3574物質で細胞内に惹起されるユビキチン化タンパク質の生成を完全に阻害する強さをもつ。
この細胞内でのユビキチン化タンパク質の生成は次のようにして検出した。すなわち、ヒト乳癌細胞MCF7を含む培地中にあらかじめRS-K3574物質を各種濃度で添加した。その添加から30分経過後、さらに癌細胞内のプロテアソームに対する阻害物質であるMG-132を1μMの濃度で培地に添加した(MG-132の添加により、プロテアソームを完全に阻害し、このことにより、プロテアソームにより分解されるべきユビキチン化タンパク質が細胞に蓄積できる)。その後、培地で3時間癌細胞を培養した後に、癌細胞を可溶化した。得られた細胞可溶性画分をポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけた。ゲル内の分画されたタンパク質をエレクトロブロットによりポリビニリデンジフロライド膜に吸着させ、この膜上の吸着されてあるユビキチン化されたタンパク質を、抗ユビキチン抗体と反応させることにより選択的に検出した。検出にはECL法(「Clin. Chem.」25巻、1531〜1546頁(1979年)参照)を用いた。
また、ヒト乳癌細胞MCF7を含む培地にRS-K3574物質を添加することなく、上記と同様に試験した。この後者の対照試験のように、RS-K3574物質の非存在下で試験した場合には、ユビキチン化されたタンパク質が蓄積してくるが、前記の培地にRS-K3574物質を添加してその存在下に試験を行った場合に、RS-K3574物質の存在下でその濃度に依存して、ユビキチン化されたタンパク質の蓄積が抑えられたことが確認された。このことから明らかなように、RS-K3574物質は、細胞内でユビキチン化されることによって直接または間接的に制御される性質をもつ機能性の細胞内タンパク質の生成を抑制することに有効である。
本発明における生理活性物質RS-K3574は癌または腫瘍細胞の増殖を抑制する活性を有する。RS-K3574物質が各種癌細胞の増殖を50%抑制する濃度(IC50値)を、MTT法(「Journal of Immunological Methods」65巻、55〜60頁(1983年)参照)で測定した。その結果を次の表1に示す。
本発明における生理活性物質RS-K3574は、制癌活性を有する。RS-K3574物質は例えばエーリッヒ(Ehrlich)腹水癌を移植したマウスに対して延命効果を有する。この担癌マウスにRS-K3574物質を1日あたり250μg/mouseの投与量で連続9日間投与した場合、RS-K3574物質を投与しない場合に比べて延命効果が200%に達する。この延命効果は以下のようにして判定した。
すなわち、4週齢のICRマウスにEhrlich癌細胞の2×106個を腹腔に移植し、翌日から生理活性物質RS-K3574を1日あたり250または62.5μg/匹の投与量を腹腔に9日間毎日投与し続けた。無投与群では、腹腔内にEhrlich癌に誘因された腹水が溜まり全例が約2週間後に死亡した。そこでRS-K3574物質を投与した処理群の平均生存日数を、無投与群の平均生存日数で除した商の値で延命効果を評価した。RS-K3574物質による処理群では、腹水の蓄積が顕著に抑制され、その結果、1日あたり250μg/mouseの投与量で9日間投与した場合に200%の延命効果が、また62.5μg /mouseの投与量で9日間投与した場合でも160%以上の延命効果が認められた。
この結果から明らかなように、生理活性物質RS-K3574は生体での癌または腫瘍の悪性化に対する抑制効果を有するのであり、このことから、抗腫瘍剤、抗癌剤、または抗悪疫質剤として有用である。
本発明における生理活性物質RS-K3574は、抗腫瘍剤または抗癌剤が癌細胞に対して有するアポトーシスの効果を増強し、抗腫瘍剤または抗癌剤または癌治療用に照射される放射線、例えばg線、X線、a線の抗腫瘍または抗癌活性を増大させる活性を有する。
試験管内でヒト白血病細胞U937を、これに殺細胞性抗癌剤であるTNF(tumor necrosis factor)を10ng/mlの濃度で加えて4時間処理した場合にはU937細胞のアポトーシスは観察されない。他方、生理活性物質RS-K3574の5μg/mlであらかじめU937細胞を処理した上で、TNFの10ng/mlでU937細胞を処理する場合には、4時間後に顕著なアポトーシスがU937細胞で観察される。
このアポトーシスは、アポトーシスに特徴的であるDNAの段階的な分解(ladder formation)をBBRC. vol. 209, 907-915頁(1995)に用いられた方法で測定することにより確認した。TNFによる癌細胞アポトーシスに対するRS-K3574物質の増強活性は、TNFに代えてTNF様アポトーシス誘導物質(TRAIL; TNF-related apoptosis-inducing ligand)を用いて試験した場合でも、全く同様に認められる。
また、ヒト子宮癌由来HeLa細胞を、殺細胞性抗癌剤として用いられるアドリアマイシンで処理して試験管内でアポトーシスに導く際、RS-K3574物質を同時に加えることによりHeLa細胞の生存細胞数を顕著に減少させることができる。すなわち、HeLa細胞をアドリアマイシンの1μg/mlで24時間処理した場合の生存細胞数が100%であるのに対し、RS-K3574物質の5μg/mlとアドリアマイシンの1μg/mlとで同時にHeLa細胞を処理した場合では、生存細胞数は50%にまで減少する。
これらの結果から明らかなように、生理活性物質RS-K3574は、癌細胞に対する殺細胞性抗腫瘍剤または抗癌剤のアポトーシス誘発作用を増強する活性を有し、このことで抗腫瘍剤または抗癌剤の抗腫瘍効果を増大させる。また、癌治療用に照射される放射線による癌細胞アポトーシスを同様に増強させる作用をRS-K3574物質が有すると期待できる。従って抗腫瘍剤または抗癌剤または癌治療用に照射される放射線のアポトーシス誘発作用の増強剤として利用でき、癌治療において抗腫瘍剤または抗癌剤の治療効果を増強するための併用剤として、RS-K3574物質は有用である。
Biochemical and Biophysical Research Communications 226巻、214-221頁(1996)で述べられる通り、既知物質パネポキシドンはタンパク質、RNA、DNAのいずれの生合成も阻害しない。本発明におけるRS-K3574物質は細胞内のタンパク質生合成を顕著にかつ特異的に阻害する活性を有する。その阻害活性は、RS-K3574物質の50%阻害濃度が4.5μg/mlである強さのものである。その阻害活性は次のように測定した。
すなわち、ヒト乳癌由来MCF7細胞2×105を、血清含有培地を入れた24穴プレートに撒き、24時間培養した。血清を含まない培地に交換し、各種の濃度のRS-K3574物質を添加した。ここに、トリチウム標識したロイシンを1μCi/mlの濃度で加えた。さらに1時間培養すると、この間にロイシンが細胞に取りこまれ、細胞内でタンパク質の生合成が進む。そののち、培地を除去し、培養されたMCF7細胞に対して氷冷した10%トリフルオロ酢酸水溶液を加えた。培養プレートを氷上で30分間放置した後、氷冷した10%トリフルオロ酢酸水溶液で2回洗浄した。この操作で細胞は破壊された。この洗浄後に、不溶性であったタンパク質を含む画分を集めて、0.1Nの水酸化ナトリウム水で溶解し、得られた溶液の放射活性を測定した。
この得られた溶液の放射活性測定値は、細胞内で生合成されたタンパク質の生成量を指示するものである。添加されたRS-K3574物質の10μg/mlの濃度の存在下にMCF7細胞を培養する上記の試験を行った場合には、放射活性の測定値は180cpmであった。これに比較して、RS-K3574物質の非存在下でMCF7細胞を培養して対照試験を行った場合には、放射活性の測定値は700cpmであった。これらの結果から、MCF7細胞内のタンパク質生合成を50%阻害するRS-K3574物質の濃度(IC50値)は4.5μg/mlであると計算された。
生理活性物質RS-K3574は、NF-κB転写因子の活性化を4μg/mlの濃度で完全に阻害する活性を有する。この活性は以下のように判定した。
すなわち、ヒト乳癌細胞MCF7の培養培地中に炎症性サイトカインとして作用するTNFを10ng/mlの濃度で、またはInterleukin-1(IL-1)を2ng/mlの濃度で添加すると、約1時間後にNF-κB転写因子の活性化が観察される。このNF-κB転写因子の活性化は、その活性化に伴って発現するところの遺伝子であるMAD-3(Cell, vol. 65, 1281-1289頁、1991)のmRNAが特異的に増加していることをRT-PCR法によって測定することで確認できる。この時、RS-K3574物質を4μg/mlの濃度で培養培地中にあらかじめ添加すると、遺伝子MAD-3の発現は全く見られず、NF-κB転写因子の活性化を完全に阻害できた。この結果から、RS-K3574物質は急性および慢性の炎症の惹起に必要であるNF-κB転写因子の活性化を阻害する活性を有することが認められ、抗炎症剤として有用である。
また、第2の本発明では、前記の生理活性物質RS-K3574から成る、細胞内タンパク質のユビキチン化の阻害剤が提供される。
第1の本発明によるユビキチン活性化酵素の阻害剤および第2の本発明による細胞内タンパク質のユビキチン化阻害剤は、それぞれRS-K3574物質の単独から成るものである。
さらに、前記の生理活性物質RS-K3574を有効成分として含有し、これに混合されて製薬学的に許容できる担体を含有する抗炎症剤組成物が提供され得る。
また、前記の生理活性物質RS-K3574を有効成分として含有し、これに混合されて製薬学的に許容できる担体を含有する抗ウィルス剤組成物が提供され得る。
前記抗腫瘍剤組成物、前記抗炎症剤組成物ならびに前記抗ウィルス剤組成物は、それぞれ、その有効成分であるRS-K3574物質を、製薬学的に許容できる常用の固体または液体担体、例えばエタノール、水、デンプン、結晶セルロース等と混合してなる組成物の形であることができる。
また、生理活性物質RS-K3574から成る、癌細胞内のタンパク質生合成の阻害剤が提供され得る。
さらに、生理活性物質RS-K3574から成る、炎症性サイトカインによるNF-κB転写因子の活性化に対する阻害剤が提供され得る。
グルコース1%、ポリペプトン0.5%、酵母エキス0.3%、KH2PO4 0.3%、MgSO4・7H2O 0.1%、を含む液体培地(pH無調整)を振盪フラスコ(500ml容)に200mlずつ分注し、常法により120℃で20分滅菌した。滅菌された該液体培地に対して、寒天斜面培地に培養したヒラタケ科カワキタケ属アラゲカワキタケ(Panus rudis)K-3574株(FERM BP-8265)の菌糸を接種した。その後に、液体培地中で、27℃で3日間静置培養した。その後に、27℃で2日間にわたり回転攪拌下に培養した。ここで得た培養液を種母培養液として次に用いた。
グルコース1%、ポリペプトン0.5%、酵母エキス0.3%、KH2PO4 0.3%、MgSO4・7H2O 0.1%、を含む液体培地(pH無調整)を振盤フラスコ(500ml容)に200mlずつ分注し、常法により120℃で20分間滅菌した。その後、滅菌された液体培地に、上記で得た種母培養液をそれぞれ7mlずつ接種し、27℃で15日間静置培養した。
このようにして得られた培養液10L(リットル)をろ過し、培養ろ液を分離した。培養ろ液を酢酸エチルで抽出し、その酢酸エチル層を減圧下に濃縮乾固した。得られた残渣をクロロホルムに溶かした溶液を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(80g)に付し、クロロホルム−メタノール(100:0〜50:1、容量比)、により段階的に溶出した。クロロホルム−メタノール(200:1〜100:1)で溶出された画分にRS-K3574物質が含まれた。RS-K3574物質を含む画分を集めて濃縮乾固して粗精製物1.17gを得た。この粗精製物を、さらにクロロホルム−メタノール−水(5:6:4)からなる液相を用いた上昇法による液々遠心分配クロマトグラフィー(250mL容)に付し、溶出液を10ml−画分で集めて、それによって不要な成分と所要な成分とを分離した。RS-K3574物質を含む画分は10mlづつ分画した時に、24〜27番目の画分として得られた。これら活性画分を、減圧下で濃縮乾固して、本発明のRS-K3574物質の精製品の716mgを得た。
前記生理活性物質RS-K3574は、抗腫瘍剤、抗癌剤、抗炎症剤あるいは抗ウイルス剤として有用である。
Claims (2)
- 次式(I)
〔式中、2位、3位、4位および7位の立体配置はそれぞれS、S、R、Sである〕で表される化合物であるRS-K3574物質であって、
しかも比旋光度〔α〕D 26 −62.3°(c 1.0, ジクロロメタン)を示す無色粘稠な油状物質であって、
またシリカゲル薄層クロマトグラフィーでクロロホルム−メタノール(10:1)よりなる展開溶媒で展開して測定した場合に本RS-K3574物質は0.39のRf値を示し、
さらに本RS-K3574物質のメタノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルにおける主なピークはλmax nm(ε); 209(8300)および241(5700)にあり;
赤外線吸収スペクトル(KBr錠剤法)における主な吸収帯はνmax(cm− 1); 3300〜3500、2979、2911、1681、1446、1379、1043、995、850、817、570にあり;
重クロロホルムCDCl3溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で500MHzで測定したRS-K3574物質のプロトン核磁気共鳴(1H-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は3.47(dd, J=3.9Hz, J=1.0Hz)、3.81(ddd, J=3.9Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、4.69(br s, J=1.2Hz, J=5.0Hz, J=1.0Hz)、6.71(ddd, J=5.0Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、5.29(br d, J=9.0Hz, J=1.2Hz)、5.02(dt, J=9.0Hz, J=1.2Hz, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)であり、
また重クロロホルムCDCl3溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で125MHzで測定したRS-K3574物質の炭素13核磁気共鳴(13C-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は、194.6(s)、53.9(d)、57.7(d)、63.2(d)、137.8(d)、139.0(s)、65.3(s)、123.6(d)、138.4(s)、25.8(q)、18.4(q)であることを特徴とする生理活性物質RS-K3574から成る、ユビキチン活性化酵素の阻害剤。 - 次式(I)
〔式中、2位、3位、4位および7位の立体配置はそれぞれS、S、R、Sである〕で表される化合物であるRS-K3574物質であって、
しかも比旋光度〔α〕D 26 −62.3°(c 1.0, ジクロロメタン)を示す無色粘稠な油状物質であって、
またシリカゲル薄層クロマトグラフィーでクロロホルム−メタノール(10:1)よりなる展開溶媒で展開して測定した場合に本RS-K3574物質は0.39のRf値を示し、
さらに本RS-K3574物質のメタノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルにおける主なピークはλmax nm(ε); 209(8300)および241(5700)にあり;
赤外線吸収スペクトル(KBr錠剤法)における主な吸収帯はνmax(cm− 1); 3300〜3500、2979、2911、1681、1446、1379、1043、995、850、817、570にあり;
重クロロホルムCDCl3溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で500MHzで測定したRS-K3574物質のプロトン核磁気共鳴(1H-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は3.47(dd, J=3.9Hz, J=1.0Hz)、3.81(ddd, J=3.9Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、4.69(br s, J=1.2Hz, J=5.0Hz, J=1.0Hz)、6.71(ddd, J=5.0Hz, J=1.2Hz, J=2.5Hz)、5.29(br d, J=9.0Hz, J=1.2Hz)、5.02(dt, J=9.0Hz, J=1.2Hz, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)、1.72(d, J=1.2Hz)であり、
また重クロロホルムCDCl3溶液(内部標準としてテトラメチルシランを使用)中で125MHzで測定したRS-K3574物質の炭素13核磁気共鳴(13C-NMR)スペクトルにおいて、δ値(ppm)は、194.6(s)、53.9(d)、57.7(d)、63.2(d)、137.8(d)、139.0(s)、65.3(s)、123.6(d)、138.4(s)、25.8(q)、18.4(q)であることを特徴とする生理活性物質RS-K3574から成る、細胞内タンパク質のユビキチン化の阻害剤。
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