JP4369116B2 - コンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法および微量元素製剤 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明はコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法および微量元素製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
長期にわたる高カロリー輸液療法により、鉄や亜鉛、銅、マンガン、ヨウ素、コバルト、セレンなどの人体必須微量元素の欠乏症が引き起こされることがあるのはよく知られている。この欠乏症の発症予防のため、前記必須微量元素を含有した静脈注射用の微量元素製剤が用いられる。そして、当該微量元素製剤には、鉄コロイドとして安定化したコンドロイチン硫酸ナトリウム・鉄コロイドが配合される。
【０００３】
コンドロイチン硫酸・鉄コロイドは、通例、コンドロイチン硫酸ナトリウム水溶液に、塩化第二鉄水溶液と水酸化ナトリウムなどのアルカリ水溶液を交互に混合撹拌して製造される。図５は、従来のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法を示すフロー図、図６は当該製造工程における混合液のｐＨの推移およびコロイド平均粒子径の推移の一例（従来例１に相当する。）を示した図である。この方法では、混合液のｐＨが約７〜１４のアルカリ側において、所定濃度のコンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液に塩化第二鉄水溶液とアルカリ水溶液とを交互に加えて攪拌混合し、最後に混合液のｐＨが７〜１０となるように調整している。より具体的に説明すれば、コンドロイチン硫酸ナトリウム水溶液に、所定量の塩化第二鉄水溶液を添加した後、所定量のアルカリを加えて液のｐＨを７以上の中性付近に初期調整した上で、さらに所定量のアルカリを加え、鉄コロイドが十分に形成される強アルカリ性（ｐＨ１２付近）としている。そして、必要とされる鉄イオン含量となるまで、塩化第二鉄水溶液とアルカリ水溶液とを交互に添加している。この間、塩化第二鉄混合後のｐＨは約７〜１０の中性に近いアルカリ域にあり、また、アルカリ混合後のｐＨは、塩化第二鉄混合後のｐＨよりも高い約１２〜１４の強アルカリ域にある。このように、混合液のｐＨが７〜１４のアルカリ側において、約１０〜１４の強アルカリ域と約７〜１０のアルカリ域との間を交互に推移しながら、平均粒子径が１００ｎｍ以下のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドが製造される。なお、この製造方法では、初期調整として、アルカリを添加してｐＨをひとまず７〜１０に調整した後、さらにアルカリを添加している。これは、製造工程全体を通じて毎回添加するアルカリ量および塩化第二鉄量を一定にするためであって、初回アルカリを加えた際に混合液のｐＨを当該範囲に調整しておくと、以後ｐＨ７〜１４の範囲内においてアルカリと塩化第二鉄の添加混合を容易に行える。
【０００４】
一方、特公昭３６−１５２９６号公報（特許文献１）や特開２０００−１７８１８１号公報（特許文献２）、特開２００２−１９３８１６号公報（特許文献３）などにもその製造方法が記載されているが、最終調整ｐＨや製造工程中におけるｐＨ範囲が記載されているにすぎず、その詳細な製造方法については触れられてはいない。
【０００５】
【特許文献１】
特公昭３６−１５２９６号公報、第１〜２頁
【特許文献２】
特開２０００−１７８１８１号公報、第３頁
【特許文献３】
特開２００２−１９３８１６号公報、第４頁
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、原料となるコンドロイチン硫酸ナトリウムの品質が異なると、例えば図７（従来例２に相当する。）に示すように、上記方法では平均粒子径１００ｎｍ以下のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドが得られないことが分かってきた。すなわち、現在まで使用されてきたコンドロイチン硫酸のほとんどがウシ由来のものであったが、原料の入手困難などの理由からサメやサケなどウシ以外の由来のものに移りつつあり、これらウシ由来以外のコンドロイチン硫酸を用いた場合、上記の製造方法では平均粒子径が１００ｎｍ、場合によっては２００ｎｍを超えるものしか得られない場合がある。このような大きな平均粒子径のものは静脈注射用の製剤原料として不適切である。
【０００７】
そこで、本発明者らが鋭意努力したところ、コンドロイチン硫酸ナトリウムを溶解した後、初期調整時のｐＨを従来よりも酸性側にした後、強アルカリ側と酸性側とで混合液のｐＨが推移するようにアルカリと塩化第二鉄とを交互に添加調整することで、所望する１００ｎｍ以下の平均粒子径であるコンドロイチン硫酸・鉄コロイドが得られることを見出し、本願発明を完成するに至った。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法は、コンドロイチン硫酸の水溶液に、塩化第二鉄およびアルカリを混合攪拌して微量元素製剤用のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを製造する方法において、前記コンドロイチン硫酸が、分子量（プルラン標準品を用いた液体クロマトグラフ法による）が１５,０００〜４０,０００で、その二糖組成比としてΔＤｉ-６Ｓが５０〜８５重量％かつΔＤｉ-４Ｓが１０〜３０重量％および２硫酸totalが５〜１５重量％であって、前記コンドロイチン硫酸の水溶液に、塩化第二鉄を加えた後、アルカリを加えて撹拌混合して液のｐＨを３〜７に初期調整した後、アルカリ添加後のｐＨが７〜１４のアルカリ側、塩化第二鉄添加後のｐＨが３〜７の酸性側となるようにアルカリおよび塩化第二鉄を添加混合することを特徴としている。
【００１０】
また、本発明のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法は、前記アルカリが、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化カリウムのいずれかであることを特徴としている。
【００１１】
さらに、本発明のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法は、上記製造方法において、得られたコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの平均粒子径が１００ｎｍ以下であることを特徴としている。
【００１３】
本発明の微量元素製剤は、上記本発明のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法により得られたコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを含有することを特徴としている。
【００１４】
【発明の実施の形態】
図１は本発明の製造方法を示すフロー図であり、図２〜４はそれぞれ当該製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図（実施例１〜３に相当する。）である。以下、各図を参照しながら、本発明について詳細に説明する。
【００１５】
本発明の製造方法は、コンドロイチン硫酸の水溶液に所定量の塩化第二鉄を加えた後、アルカリを加えて攪拌混合して液のｐＨを３〜７の酸性側に初期調整した後、液のｐＨが３〜１４の範囲内でアルカリおよび塩化第二鉄を添加混合することを特徴としている。より具体的に言うと、初期調整時における混合液のｐＨを３〜７の酸性側に一旦調整した後、さらにアルカリを加えて混合液のｐＨを７〜１４のアルカリ側とし、再び塩化第二鉄を添加した場合に混合液のｐＨが３〜７の酸性側となるようにアルカリと塩化第二鉄を添加混合することを特徴とする。
【００１６】
本発明の製造方法は、従来の方法では適用できなかったサメ由来、サケ由来のものに適用でき、特にサメ由来やサケ由来のコンドロイチン硫酸のように、以下に述べる不飽和二糖の６位に硫酸が結合したΔＤｉ-６Ｓを多く含有するものを用いる場合に好適である。
【００１７】
コンドロイチン硫酸は、二糖体であるＮ−アセチルコンドロイシンを基本単位とするムコ多糖の硫酸化体であって、通常、二糖単位当たり１モルの硫酸が結合している。また、コンドロイチナーゼ処理は、種々の不飽和二糖を生成し、不飽和二糖の４位に硫酸が結合したもの（ΔＤｉ-４Ｓ）、６位に硫酸が結合したもの（ΔＤｉ-６Ｓ）、不飽和二糖に２モルの硫酸が結合したもの（ΔＤｉ-ｄｉＳＤ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＢ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＥ）などを生成する。これらのうち、ΔＤｉ-６Ｓを多く含むコンドロイチン硫酸は通常タイプＣと呼ばれ、ΔＤｉ-４Ｓを多く含むコンドロイチン硫酸は通常タイプＡと呼ばれる。
【００１８】
コンドロイチン硫酸は、通常水に溶解しやすい塩の形で用いられ、コンドロイチン硫酸のナトリウム塩が汎用される。その分子量は制約されるものではないが、好ましくは１０,０００〜５０,０００、さらに好ましくは１５,０００〜４０,０００、より望ましくは２０,０００〜２５,０００である。大きな分子量のものは得られるコロイド粒子の平均粒子径が大きくなり、小さすぎるとコロイド粒子の安定性が低下する傾向にある。
【００１９】
また、本発明においては、ΔＤｉ-６Ｓを多く含有するいわゆるタイプＣが好ましく用いられるが、その中でもある一定範囲の二糖体組成比を有するコンドロイチン硫酸ナトリウム、特に一定範囲量の二硫酸結合体（２硫酸total）を含有するコンドロイチン硫酸が好ましく用いられる。同じタイプＣのものであっても、二硫酸結合体含量が多い場合には得られたコロイド粒子の平均粒子径が大きくなる傾向にあり、１０重量％を超えると得られたコロイド粒子の平均粒子径が１００ｎｍを上回る場合がある。
【００２０】
従って、これらを勘案すれば、本発明に最適なコンドロイチン硫酸は、分子量が１５,０００〜４０,０００、二糖組成比としてΔＤｉ-４Ｓの含有量が１０〜３０重量％、ΔＤｉ-６Ｓの含有量が５０〜８５重量％、かつ２硫酸totalすなわち結合位置を問わず２モルの硫酸が結合した二硫酸結合体（本発明においては、ΔＤｉ-ｄｉＳＤ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＢ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＥの合計量をいう。）含有量が５〜１５重量％、さらに望ましくは５〜１０重量％のものである。なお、コンドロイチン硫酸の分子量や二糖組成比は実施例に記載された方法により測定されたものを意味する。
【００２１】
本発明の製造方法は、従来方法とほぼ同様の製造方法であるが、異なるのはコンドロイチン硫酸の溶液にアルカリを加えて初期調整時における混合液のｐＨを３〜７の中性から酸性側にする点と、アルカリを加えて強アルカリ側にした混合液に、所定量の塩化第二鉄を加えて液のｐＨを再び３〜７の酸性側にする点である。このとき用いられるアルカリは特に制約されるものではないが、得られたコンドロイチン硫酸・鉄コロイドが製剤原料として用いられる観点から水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化カリウムが好ましく、さらに望ましくは水酸化ナトリウムである。もちろん、医療用薬剤に用いられるアルカリであれば、これらに限定されるものではない。
【００２２】
引き続き本発明の製造方法についてさらに具体的に説明する。まず、コンドロイチン硫酸ナトリウムを水に溶解する。その初期濃度は約０.１〜５w/v％であり、好ましくは約０.５〜３w/v％である。これに所定量の塩化第二鉄を加え攪拌混合する。一回に加える塩化第二鉄量は、所望する鉄イオンの最終含有量および添加混合する回数によって適宜定められる。そして、アルカリを添加して液のｐＨを酸性域である３〜７、好ましくは４〜６の範囲内に初期調整する。その後、さらにアルカリを添加して混合する。このときの混合液のｐＨを７〜１４、好ましくは１０〜１３のアルカリ域に調整する。このとき、本発明において重要なのは、コンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液に、多量のアルカリを一度に加えて液を（強）アルカリ性にせず、多くない量のアルカリを加えて液を酸性側に維持することである。すなわち、コンドロイチン硫酸ナトリウムを水に溶解した液のｐＨは通例３〜４の酸性域にあるが、本発明では最初に酸性域を保てる程度でアルカリを加え、液のｐＨを溶解時のｐＨよりもややアルカリ側にすることが必要である。そうしないと、次工程から添加するアルカリ量および塩化第二鉄量を変更する必要が生じる。
【００２３】
アルカリ側にした後再び所定量の塩化第二鉄を加え、混合液のｐＨを３〜７、好ましくは４〜６の酸性域に調整する。このとき、先に加えたのとほぼ同量の塩化第二鉄を加えればこのｐＨ域内に液のｐＨを調整できる。そして、再びアルカリを加えて、混合液のｐＨを７〜１４、好ましくは１０〜１３のアルカリ域に調整する。
【００２４】
こうして、初期調整した後からアルカリを加えては液のｐＨを７〜１４、好ましくは１０〜１３のアルカリ側にし、その後塩化第二鉄を加えては液のｐＨを３〜７、好ましくは４〜６の酸性側にしながら、必要量の塩化第二鉄を加える。そして、必要量の塩化第二鉄を加え終わると、混合液のｐＨを最終目標値である７〜１０にアルカリを加えて調整し、平均粒子径１００ｎｍ以下のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを調製する。その後、必要があれば液量調整、加熱滅菌を行う。
【００２５】
このように本発明では、初期調整時にアルカリを添加混合して混合液のｐＨを３〜７、好ましくは４〜６の酸性側に調整した後、ｐＨ３〜１４の範囲内でアルカリと塩化第二鉄を交互に加えているので、従来のウシとは異なるサメやサケ等を由来とするコンドロイチン硫酸を用いても、ほぼ従来と同じ工程にて１００ｎｍ以下の平均粒子径のコンドロイチン硫酸・コロイド鉄を得ることができる。
【００２６】
添加する塩化第二鉄およびアルカリは、通常各々水溶液として用いられる。塩化第二鉄水溶液の濃度および一回当たりの添加量は、好ましくは毎回の添加量がほぼ等量となるように定められ、アルカリ添加後に塩化第二鉄を加えた後の混合液のｐＨが３〜７、好ましくは４〜６の範囲内となるように設定される。また、アルカリ水溶液の濃度および添加量は、塩化第二鉄を加えた後の混合液のｐＨが７〜１４、好ましくは１０〜１３の範囲内になるように設定される。こうすれば、第２回目以降塩化第二鉄を加え攪拌混合した後には、混合液のｐＨは７未満の酸性側に傾き、アルカリを加えた際には、混合液のｐＨは７より高いアルカリ側に傾く。なお、塩化第二鉄水溶液および水酸化ナトリウム水溶液の濃度や一回当たりの添加量は従来例を参考にして容易に決定でき、初期調整時のｐＨを調整さえすれば原料の変更に容易に対応できる。
【００２７】
【実施例】
以下、次の実施例に基づいて本発明についてさらに詳細に説明する。
【００２８】
（実施例１）
コンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ株式会社製、Lot.PUC-791,サメ由来）の３w/v％水溶液９００mLに、塩化第二鉄水溶液（Ｆｅ2Ｃｌ3・６Ｈ2Ｏ ７.９w/v％）を４５mL加え攪拌した（図２：Fe-1）。次に、水酸化ナトリウム水溶液（１０.６w/v％）を１０mL加えて攪拌して初期調整をした後（図２：OH-1）、さらに、同濃度の水酸化ナトリウム水溶液１５mLを加えて攪拌した（図２：OH-2）。なお初期調整した後のｐＨは約４.０であった。そして、先と同濃度の塩化第二鉄水溶液を４５mL加えた後（図２：Fe-2）、水酸化ナトリウム水溶液１５mLと塩化第二鉄水溶液４５mLをそれぞれ６回交互に添加混合し（図２：OH-3,Fe-3・・・OH-8,Fe-8）、水酸化ナトリウム水溶液を加えて混合液のｐＨを７.７に調整した上で最後に水を加えて全量を１.５Ｌとした。この間、操作は常温下で行い、回転数３,５００rpmで攪拌をし続けた。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図２に示す。
【００２９】
用いたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、平均分子量２１,５００、ΔＤｉ-６Ｓが７４.６重量％、ΔＤｉ-４Ｓが１６.５重量％、２硫酸totalが７.３重量％であった。
【００３０】
〔コンドロイチン硫酸ナトリウムの平均分子量の測定〕
コンドロイチン硫酸ナトリウム２０mgを精密に量り、移動相で正確に１０mLとして試料溶液とした。別にプルラン標準品（分子量20,000）２０mgを精密に量り、移動相で正確に２０mLとして標準溶液とした。試料溶液および標準溶液３００μLにつき、次の操作条件で液体クロマトグラフ法により試験を行い、光散乱データ処理 GPC LALLSプログラムにより試料の平均分子量を算出した。
試験条件
HLC-8120GPCシステム
検出器：示差屈折計、光散乱光度計
カラム：TOSOH TSK-GEL G3000PWXL 7.8mm×300mm
カラム温度：４０℃
移動相：０.２mol/L NaNO3水溶液
流量：０.８mL/min
【００３１】
〔不飽和二糖の測定〕
コンドロイチン硫酸ナトリウム５mgにコンドロイチナーゼＡＢＣ溶液０.５mLを加え溶解させ、３７℃の恒温槽中で４時間反応させた。反応後、沸騰水浴中で１分間加熱したものを試料溶液とした。別に標準となるΔＤｉ-ＨＡ、ΔＤｉ-０Ｓ、ΔＤｉ-ＵＡ２Ｓ、ΔＤｉ-６Ｓ、ΔＤｉ-４Ｓ、ΔＤｉ-ｄｉＳＤ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＢおよびΔＤｉ-ｄｉＳＥそれぞれ２５０μgを０.０５Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８.０）０.２５mLに溶解させ、それぞれ２０μLを合わせて標準溶液とした。試料溶液及び標準溶液１０μLにつき、下記の操作条件で液体クロマトグラフ法により試験した。
試験条件
検出器：SPD-10A 測定波長：２３２ｎｍ
カラム：TOSOH TSKgel Amido80（4.6×250mm）
温度：７０℃
移動相：アセトニトリル／メタノール／ギ酸アンモニウム緩衝液＝６０／２５／１５
流量：１mL／min
Integrator：Class LC10
〔試液の調整〕
コンドロイチナーゼＡＢＣ溶液：コンドロイチナーゼＡＢＣ（生化学工業社製）に０.０５Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８.０）を加えて溶かし、２Ｕ/mLとする。
ギ酸アンモニウム緩衝液：０.５mol/Lギ酸アンモニウム溶液にギ酸を加えてｐＨ４.８に調整する。
【００３２】
〔コンドロイチン硫酸・鉄コロイドの平均粒子径の測定〕
１０mmのセルにコンドロイチン硫酸・鉄コロイド溶液を１mL入れ、蒸留水を加えて４mLとし試料溶液とした。この試料溶液を光散乱光度計 ELS8000 （大塚電子株式会社）にて平均粒子径を測定した。ただし、濃度が薄いまたは濃い場合には、試料をさらに加えるかまたは希釈して再度測定した。
【００３３】
（実施例２）
平均分子量２４,１００、ΔＤｉ-６Ｓが６８.４重量％、ΔＤｉ-４Ｓが２０.５重量％、２硫酸totalが９.２重量％のコンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ株式会社製、Lot.PUC-794,サメ由来）１.５w/v％の水溶液１,８００mLに、塩化第二鉄水溶液（Ｆｅ2Ｃｌ3・６Ｈ2Ｏ ７.９w/v％）を４５mL加え、攪拌した（図３：Fe-1）。次に、水酸化ナトリウム水溶液（１０.６w/v％）を１２mL加えて攪拌して初期調整をした後（図３：OH-1）、最終ｐＨを約８.１に調整すると共に全量を水で３Ｌとした他は実施例１と同様に行った。なお初期調整後のｐＨは約４.４であった。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図３に示す。
【００３４】
（実施例３）
平均分子量２４,１００、ΔＤｉ-６Ｓが５６.０重量％、ΔＤｉ-４Ｓが２８.３重量％、２硫酸totalが１０.３重量％のコンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ株式会社製、Lot.PUC-790,サメ由来）３.０w/v％の水溶液を用い、最終ｐＨを約７.９に調整した以外は実施例１と同様に行った。なお初期調整後のｐＨは約４.０であった。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図４に示す。
【００３５】
（実施例４）微量元素製剤の製造
実施例１で得たコンドロイチン硫酸・鉄コロイド溶液５Ｌに水１３Ｌを加えた。この溶液に、攪拌しながら２w/v％塩化マンガン溶液０.１Ｌ、３５w/v％硫酸亜鉛溶液０.５Ｌ、２５w/v％硫酸銅溶液０.０５Ｌおよび１７w/v％ヨウ化カリウム溶液０.０１Ｌを順次加えた。さらに１％w/v水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６に調整し、蒸留水で全量を２０Ｌにした。この溶液を２mLずつガラス容器に充填・密封した後、加熱滅菌して微量元素製剤を得た。この製剤中のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの平均粒子径は５５ｎｍであった。この製剤を６０℃で３週間保存すると共に１週間経過毎に平均粒子径および外観試験を実施したところ、いずれの時点においても製造直後と差はほとんどなく、安定な微量元素製剤が得られた。
【００３６】
（従来例１）
コンドロイチン硫酸ナトリウム（生化学工業株式会社製、Lot.BN-3342,ウシ由来）の３w/v％水溶液９００mLに、塩化第二鉄水溶液（Ｆｅ2Ｃｌ3・６Ｈ2Ｏ ７.９w/v％）を４５mL加え、攪拌した（図６：Fe-1）。次に、水酸化ナトリウム水溶液（１０.６w/v％）を１５mL加えて攪拌して初期調整をした後（図６：OH-1）、さらに同濃度の水酸化ナトリウム水溶液１５mLを加えて攪拌した（図６：OH-2）。なお初期調整した後のｐＨは８.０であった。そして、先と同濃度の塩化第二鉄水溶液を４５mL加えた後（図６：Fe-2）、水酸化ナトリウム水溶液１５mLと塩化第二鉄水溶液４５mLをそれぞれ６回交互に添加混合し（図６：OH-3,Fe-3・・・OH-8,Fe-8）、水酸化ナトリウム水溶液を加えて混合液のｐＨを７.９に調整した上で最後に水を加えて全量を１.５Ｌとした。この間、操作は常温下で行い、回転数３,５００rpmで攪拌をし続けた。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図６に示す。
【００３７】
用いたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、平均分子量１９,０００、ΔＤｉ-６Ｓが３３.０重量％、ΔＤｉ-４Ｓが６１.０重量％、２硫酸totalが１.０重量％であった。
【００３８】
（従来例２）
平均分子量２１,５００、ΔＤｉ-６Ｓが７４.６重量％、ΔＤｉ-４Ｓが１６.５重量％、２硫酸totalが７.３重量％のコンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ株式会社製、Lot.PUC-791,サメ由来）を用いた以外は、最終ｐＨを約９.７に調整した以外は従来例１と同様に行った。なお初期調整後のｐＨは約９.２であった。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図７に示す。
【００３９】
【発明の効果】
本発明によれば、従来法では製造できなかったウシ以外の由来によるコンドロイチン硫酸を用いて、平均粒子径１００ｎｍ以下のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを製造できる。また、当該方法は、従来法とほぼ同様な手順であり、用いる塩化第二鉄水溶液とアルカリ水溶液の濃度調整や添加量調整をして混合液のｐＨ調整を行うだけで、コンドロイチン硫酸原料の変更に容易に対応できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の製造工程を示すフロー図である。
【図２】実施例１における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
【図３】実施例２における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
【図４】実施例３における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
【図５】従来の製造工程を示すフロー図である。
【図６】従来例１における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
【図７】従来例２における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
【発明が属する技術分野】
本発明はコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法および微量元素製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
長期にわたる高カロリー輸液療法により、鉄や亜鉛、銅、マンガン、ヨウ素、コバルト、セレンなどの人体必須微量元素の欠乏症が引き起こされることがあるのはよく知られている。この欠乏症の発症予防のため、前記必須微量元素を含有した静脈注射用の微量元素製剤が用いられる。そして、当該微量元素製剤には、鉄コロイドとして安定化したコンドロイチン硫酸ナトリウム・鉄コロイドが配合される。
【０００３】
コンドロイチン硫酸・鉄コロイドは、通例、コンドロイチン硫酸ナトリウム水溶液に、塩化第二鉄水溶液と水酸化ナトリウムなどのアルカリ水溶液を交互に混合撹拌して製造される。図５は、従来のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法を示すフロー図、図６は当該製造工程における混合液のｐＨの推移およびコロイド平均粒子径の推移の一例（従来例１に相当する。）を示した図である。この方法では、混合液のｐＨが約７〜１４のアルカリ側において、所定濃度のコンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液に塩化第二鉄水溶液とアルカリ水溶液とを交互に加えて攪拌混合し、最後に混合液のｐＨが７〜１０となるように調整している。より具体的に説明すれば、コンドロイチン硫酸ナトリウム水溶液に、所定量の塩化第二鉄水溶液を添加した後、所定量のアルカリを加えて液のｐＨを７以上の中性付近に初期調整した上で、さらに所定量のアルカリを加え、鉄コロイドが十分に形成される強アルカリ性（ｐＨ１２付近）としている。そして、必要とされる鉄イオン含量となるまで、塩化第二鉄水溶液とアルカリ水溶液とを交互に添加している。この間、塩化第二鉄混合後のｐＨは約７〜１０の中性に近いアルカリ域にあり、また、アルカリ混合後のｐＨは、塩化第二鉄混合後のｐＨよりも高い約１２〜１４の強アルカリ域にある。このように、混合液のｐＨが７〜１４のアルカリ側において、約１０〜１４の強アルカリ域と約７〜１０のアルカリ域との間を交互に推移しながら、平均粒子径が１００ｎｍ以下のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドが製造される。なお、この製造方法では、初期調整として、アルカリを添加してｐＨをひとまず７〜１０に調整した後、さらにアルカリを添加している。これは、製造工程全体を通じて毎回添加するアルカリ量および塩化第二鉄量を一定にするためであって、初回アルカリを加えた際に混合液のｐＨを当該範囲に調整しておくと、以後ｐＨ７〜１４の範囲内においてアルカリと塩化第二鉄の添加混合を容易に行える。
【０００４】
一方、特公昭３６−１５２９６号公報（特許文献１）や特開２０００−１７８１８１号公報（特許文献２）、特開２００２−１９３８１６号公報（特許文献３）などにもその製造方法が記載されているが、最終調整ｐＨや製造工程中におけるｐＨ範囲が記載されているにすぎず、その詳細な製造方法については触れられてはいない。
【０００５】
【特許文献１】
特公昭３６−１５２９６号公報、第１〜２頁
【特許文献２】
特開２０００−１７８１８１号公報、第３頁
【特許文献３】
特開２００２−１９３８１６号公報、第４頁
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、原料となるコンドロイチン硫酸ナトリウムの品質が異なると、例えば図７（従来例２に相当する。）に示すように、上記方法では平均粒子径１００ｎｍ以下のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドが得られないことが分かってきた。すなわち、現在まで使用されてきたコンドロイチン硫酸のほとんどがウシ由来のものであったが、原料の入手困難などの理由からサメやサケなどウシ以外の由来のものに移りつつあり、これらウシ由来以外のコンドロイチン硫酸を用いた場合、上記の製造方法では平均粒子径が１００ｎｍ、場合によっては２００ｎｍを超えるものしか得られない場合がある。このような大きな平均粒子径のものは静脈注射用の製剤原料として不適切である。
【０００７】
そこで、本発明者らが鋭意努力したところ、コンドロイチン硫酸ナトリウムを溶解した後、初期調整時のｐＨを従来よりも酸性側にした後、強アルカリ側と酸性側とで混合液のｐＨが推移するようにアルカリと塩化第二鉄とを交互に添加調整することで、所望する１００ｎｍ以下の平均粒子径であるコンドロイチン硫酸・鉄コロイドが得られることを見出し、本願発明を完成するに至った。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法は、コンドロイチン硫酸の水溶液に、塩化第二鉄およびアルカリを混合攪拌して微量元素製剤用のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを製造する方法において、前記コンドロイチン硫酸が、分子量（プルラン標準品を用いた液体クロマトグラフ法による）が１５,０００〜４０,０００で、その二糖組成比としてΔＤｉ-６Ｓが５０〜８５重量％かつΔＤｉ-４Ｓが１０〜３０重量％および２硫酸totalが５〜１５重量％であって、前記コンドロイチン硫酸の水溶液に、塩化第二鉄を加えた後、アルカリを加えて撹拌混合して液のｐＨを３〜７に初期調整した後、アルカリ添加後のｐＨが７〜１４のアルカリ側、塩化第二鉄添加後のｐＨが３〜７の酸性側となるようにアルカリおよび塩化第二鉄を添加混合することを特徴としている。
【００１０】
また、本発明のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法は、前記アルカリが、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化カリウムのいずれかであることを特徴としている。
【００１１】
さらに、本発明のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法は、上記製造方法において、得られたコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの平均粒子径が１００ｎｍ以下であることを特徴としている。
【００１３】
本発明の微量元素製剤は、上記本発明のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法により得られたコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを含有することを特徴としている。
【００１４】
【発明の実施の形態】
図１は本発明の製造方法を示すフロー図であり、図２〜４はそれぞれ当該製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図（実施例１〜３に相当する。）である。以下、各図を参照しながら、本発明について詳細に説明する。
【００１５】
本発明の製造方法は、コンドロイチン硫酸の水溶液に所定量の塩化第二鉄を加えた後、アルカリを加えて攪拌混合して液のｐＨを３〜７の酸性側に初期調整した後、液のｐＨが３〜１４の範囲内でアルカリおよび塩化第二鉄を添加混合することを特徴としている。より具体的に言うと、初期調整時における混合液のｐＨを３〜７の酸性側に一旦調整した後、さらにアルカリを加えて混合液のｐＨを７〜１４のアルカリ側とし、再び塩化第二鉄を添加した場合に混合液のｐＨが３〜７の酸性側となるようにアルカリと塩化第二鉄を添加混合することを特徴とする。
【００１６】
本発明の製造方法は、従来の方法では適用できなかったサメ由来、サケ由来のものに適用でき、特にサメ由来やサケ由来のコンドロイチン硫酸のように、以下に述べる不飽和二糖の６位に硫酸が結合したΔＤｉ-６Ｓを多く含有するものを用いる場合に好適である。
【００１７】
コンドロイチン硫酸は、二糖体であるＮ−アセチルコンドロイシンを基本単位とするムコ多糖の硫酸化体であって、通常、二糖単位当たり１モルの硫酸が結合している。また、コンドロイチナーゼ処理は、種々の不飽和二糖を生成し、不飽和二糖の４位に硫酸が結合したもの（ΔＤｉ-４Ｓ）、６位に硫酸が結合したもの（ΔＤｉ-６Ｓ）、不飽和二糖に２モルの硫酸が結合したもの（ΔＤｉ-ｄｉＳＤ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＢ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＥ）などを生成する。これらのうち、ΔＤｉ-６Ｓを多く含むコンドロイチン硫酸は通常タイプＣと呼ばれ、ΔＤｉ-４Ｓを多く含むコンドロイチン硫酸は通常タイプＡと呼ばれる。
【００１８】
コンドロイチン硫酸は、通常水に溶解しやすい塩の形で用いられ、コンドロイチン硫酸のナトリウム塩が汎用される。その分子量は制約されるものではないが、好ましくは１０,０００〜５０,０００、さらに好ましくは１５,０００〜４０,０００、より望ましくは２０,０００〜２５,０００である。大きな分子量のものは得られるコロイド粒子の平均粒子径が大きくなり、小さすぎるとコロイド粒子の安定性が低下する傾向にある。
【００１９】
また、本発明においては、ΔＤｉ-６Ｓを多く含有するいわゆるタイプＣが好ましく用いられるが、その中でもある一定範囲の二糖体組成比を有するコンドロイチン硫酸ナトリウム、特に一定範囲量の二硫酸結合体（２硫酸total）を含有するコンドロイチン硫酸が好ましく用いられる。同じタイプＣのものであっても、二硫酸結合体含量が多い場合には得られたコロイド粒子の平均粒子径が大きくなる傾向にあり、１０重量％を超えると得られたコロイド粒子の平均粒子径が１００ｎｍを上回る場合がある。
【００２０】
従って、これらを勘案すれば、本発明に最適なコンドロイチン硫酸は、分子量が１５,０００〜４０,０００、二糖組成比としてΔＤｉ-４Ｓの含有量が１０〜３０重量％、ΔＤｉ-６Ｓの含有量が５０〜８５重量％、かつ２硫酸totalすなわち結合位置を問わず２モルの硫酸が結合した二硫酸結合体（本発明においては、ΔＤｉ-ｄｉＳＤ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＢ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＥの合計量をいう。）含有量が５〜１５重量％、さらに望ましくは５〜１０重量％のものである。なお、コンドロイチン硫酸の分子量や二糖組成比は実施例に記載された方法により測定されたものを意味する。
【００２１】
本発明の製造方法は、従来方法とほぼ同様の製造方法であるが、異なるのはコンドロイチン硫酸の溶液にアルカリを加えて初期調整時における混合液のｐＨを３〜７の中性から酸性側にする点と、アルカリを加えて強アルカリ側にした混合液に、所定量の塩化第二鉄を加えて液のｐＨを再び３〜７の酸性側にする点である。このとき用いられるアルカリは特に制約されるものではないが、得られたコンドロイチン硫酸・鉄コロイドが製剤原料として用いられる観点から水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化カリウムが好ましく、さらに望ましくは水酸化ナトリウムである。もちろん、医療用薬剤に用いられるアルカリであれば、これらに限定されるものではない。
【００２２】
引き続き本発明の製造方法についてさらに具体的に説明する。まず、コンドロイチン硫酸ナトリウムを水に溶解する。その初期濃度は約０.１〜５w/v％であり、好ましくは約０.５〜３w/v％である。これに所定量の塩化第二鉄を加え攪拌混合する。一回に加える塩化第二鉄量は、所望する鉄イオンの最終含有量および添加混合する回数によって適宜定められる。そして、アルカリを添加して液のｐＨを酸性域である３〜７、好ましくは４〜６の範囲内に初期調整する。その後、さらにアルカリを添加して混合する。このときの混合液のｐＨを７〜１４、好ましくは１０〜１３のアルカリ域に調整する。このとき、本発明において重要なのは、コンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液に、多量のアルカリを一度に加えて液を（強）アルカリ性にせず、多くない量のアルカリを加えて液を酸性側に維持することである。すなわち、コンドロイチン硫酸ナトリウムを水に溶解した液のｐＨは通例３〜４の酸性域にあるが、本発明では最初に酸性域を保てる程度でアルカリを加え、液のｐＨを溶解時のｐＨよりもややアルカリ側にすることが必要である。そうしないと、次工程から添加するアルカリ量および塩化第二鉄量を変更する必要が生じる。
【００２３】
アルカリ側にした後再び所定量の塩化第二鉄を加え、混合液のｐＨを３〜７、好ましくは４〜６の酸性域に調整する。このとき、先に加えたのとほぼ同量の塩化第二鉄を加えればこのｐＨ域内に液のｐＨを調整できる。そして、再びアルカリを加えて、混合液のｐＨを７〜１４、好ましくは１０〜１３のアルカリ域に調整する。
【００２４】
こうして、初期調整した後からアルカリを加えては液のｐＨを７〜１４、好ましくは１０〜１３のアルカリ側にし、その後塩化第二鉄を加えては液のｐＨを３〜７、好ましくは４〜６の酸性側にしながら、必要量の塩化第二鉄を加える。そして、必要量の塩化第二鉄を加え終わると、混合液のｐＨを最終目標値である７〜１０にアルカリを加えて調整し、平均粒子径１００ｎｍ以下のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを調製する。その後、必要があれば液量調整、加熱滅菌を行う。
【００２５】
このように本発明では、初期調整時にアルカリを添加混合して混合液のｐＨを３〜７、好ましくは４〜６の酸性側に調整した後、ｐＨ３〜１４の範囲内でアルカリと塩化第二鉄を交互に加えているので、従来のウシとは異なるサメやサケ等を由来とするコンドロイチン硫酸を用いても、ほぼ従来と同じ工程にて１００ｎｍ以下の平均粒子径のコンドロイチン硫酸・コロイド鉄を得ることができる。
【００２６】
添加する塩化第二鉄およびアルカリは、通常各々水溶液として用いられる。塩化第二鉄水溶液の濃度および一回当たりの添加量は、好ましくは毎回の添加量がほぼ等量となるように定められ、アルカリ添加後に塩化第二鉄を加えた後の混合液のｐＨが３〜７、好ましくは４〜６の範囲内となるように設定される。また、アルカリ水溶液の濃度および添加量は、塩化第二鉄を加えた後の混合液のｐＨが７〜１４、好ましくは１０〜１３の範囲内になるように設定される。こうすれば、第２回目以降塩化第二鉄を加え攪拌混合した後には、混合液のｐＨは７未満の酸性側に傾き、アルカリを加えた際には、混合液のｐＨは７より高いアルカリ側に傾く。なお、塩化第二鉄水溶液および水酸化ナトリウム水溶液の濃度や一回当たりの添加量は従来例を参考にして容易に決定でき、初期調整時のｐＨを調整さえすれば原料の変更に容易に対応できる。
【００２７】
【実施例】
以下、次の実施例に基づいて本発明についてさらに詳細に説明する。
【００２８】
（実施例１）
コンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ株式会社製、Lot.PUC-791,サメ由来）の３w/v％水溶液９００mLに、塩化第二鉄水溶液（Ｆｅ2Ｃｌ3・６Ｈ2Ｏ ７.９w/v％）を４５mL加え攪拌した（図２：Fe-1）。次に、水酸化ナトリウム水溶液（１０.６w/v％）を１０mL加えて攪拌して初期調整をした後（図２：OH-1）、さらに、同濃度の水酸化ナトリウム水溶液１５mLを加えて攪拌した（図２：OH-2）。なお初期調整した後のｐＨは約４.０であった。そして、先と同濃度の塩化第二鉄水溶液を４５mL加えた後（図２：Fe-2）、水酸化ナトリウム水溶液１５mLと塩化第二鉄水溶液４５mLをそれぞれ６回交互に添加混合し（図２：OH-3,Fe-3・・・OH-8,Fe-8）、水酸化ナトリウム水溶液を加えて混合液のｐＨを７.７に調整した上で最後に水を加えて全量を１.５Ｌとした。この間、操作は常温下で行い、回転数３,５００rpmで攪拌をし続けた。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図２に示す。
【００２９】
用いたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、平均分子量２１,５００、ΔＤｉ-６Ｓが７４.６重量％、ΔＤｉ-４Ｓが１６.５重量％、２硫酸totalが７.３重量％であった。
【００３０】
〔コンドロイチン硫酸ナトリウムの平均分子量の測定〕
コンドロイチン硫酸ナトリウム２０mgを精密に量り、移動相で正確に１０mLとして試料溶液とした。別にプルラン標準品（分子量20,000）２０mgを精密に量り、移動相で正確に２０mLとして標準溶液とした。試料溶液および標準溶液３００μLにつき、次の操作条件で液体クロマトグラフ法により試験を行い、光散乱データ処理 GPC LALLSプログラムにより試料の平均分子量を算出した。
試験条件
HLC-8120GPCシステム
検出器：示差屈折計、光散乱光度計
カラム：TOSOH TSK-GEL G3000PWXL 7.8mm×300mm
カラム温度：４０℃
移動相：０.２mol/L NaNO3水溶液
流量：０.８mL/min
【００３１】
〔不飽和二糖の測定〕
コンドロイチン硫酸ナトリウム５mgにコンドロイチナーゼＡＢＣ溶液０.５mLを加え溶解させ、３７℃の恒温槽中で４時間反応させた。反応後、沸騰水浴中で１分間加熱したものを試料溶液とした。別に標準となるΔＤｉ-ＨＡ、ΔＤｉ-０Ｓ、ΔＤｉ-ＵＡ２Ｓ、ΔＤｉ-６Ｓ、ΔＤｉ-４Ｓ、ΔＤｉ-ｄｉＳＤ ,ΔＤｉ-ｄｉＳＢおよびΔＤｉ-ｄｉＳＥそれぞれ２５０μgを０.０５Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８.０）０.２５mLに溶解させ、それぞれ２０μLを合わせて標準溶液とした。試料溶液及び標準溶液１０μLにつき、下記の操作条件で液体クロマトグラフ法により試験した。
試験条件
検出器：SPD-10A 測定波長：２３２ｎｍ
カラム：TOSOH TSKgel Amido80（4.6×250mm）
温度：７０℃
移動相：アセトニトリル／メタノール／ギ酸アンモニウム緩衝液＝６０／２５／１５
流量：１mL／min
Integrator：Class LC10
〔試液の調整〕
コンドロイチナーゼＡＢＣ溶液：コンドロイチナーゼＡＢＣ（生化学工業社製）に０.０５Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８.０）を加えて溶かし、２Ｕ/mLとする。
ギ酸アンモニウム緩衝液：０.５mol/Lギ酸アンモニウム溶液にギ酸を加えてｐＨ４.８に調整する。
【００３２】
〔コンドロイチン硫酸・鉄コロイドの平均粒子径の測定〕
１０mmのセルにコンドロイチン硫酸・鉄コロイド溶液を１mL入れ、蒸留水を加えて４mLとし試料溶液とした。この試料溶液を光散乱光度計 ELS8000 （大塚電子株式会社）にて平均粒子径を測定した。ただし、濃度が薄いまたは濃い場合には、試料をさらに加えるかまたは希釈して再度測定した。
【００３３】
（実施例２）
平均分子量２４,１００、ΔＤｉ-６Ｓが６８.４重量％、ΔＤｉ-４Ｓが２０.５重量％、２硫酸totalが９.２重量％のコンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ株式会社製、Lot.PUC-794,サメ由来）１.５w/v％の水溶液１,８００mLに、塩化第二鉄水溶液（Ｆｅ2Ｃｌ3・６Ｈ2Ｏ ７.９w/v％）を４５mL加え、攪拌した（図３：Fe-1）。次に、水酸化ナトリウム水溶液（１０.６w/v％）を１２mL加えて攪拌して初期調整をした後（図３：OH-1）、最終ｐＨを約８.１に調整すると共に全量を水で３Ｌとした他は実施例１と同様に行った。なお初期調整後のｐＨは約４.４であった。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図３に示す。
【００３４】
（実施例３）
平均分子量２４,１００、ΔＤｉ-６Ｓが５６.０重量％、ΔＤｉ-４Ｓが２８.３重量％、２硫酸totalが１０.３重量％のコンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ株式会社製、Lot.PUC-790,サメ由来）３.０w/v％の水溶液を用い、最終ｐＨを約７.９に調整した以外は実施例１と同様に行った。なお初期調整後のｐＨは約４.０であった。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図４に示す。
【００３５】
（実施例４）微量元素製剤の製造
実施例１で得たコンドロイチン硫酸・鉄コロイド溶液５Ｌに水１３Ｌを加えた。この溶液に、攪拌しながら２w/v％塩化マンガン溶液０.１Ｌ、３５w/v％硫酸亜鉛溶液０.５Ｌ、２５w/v％硫酸銅溶液０.０５Ｌおよび１７w/v％ヨウ化カリウム溶液０.０１Ｌを順次加えた。さらに１％w/v水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６に調整し、蒸留水で全量を２０Ｌにした。この溶液を２mLずつガラス容器に充填・密封した後、加熱滅菌して微量元素製剤を得た。この製剤中のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの平均粒子径は５５ｎｍであった。この製剤を６０℃で３週間保存すると共に１週間経過毎に平均粒子径および外観試験を実施したところ、いずれの時点においても製造直後と差はほとんどなく、安定な微量元素製剤が得られた。
【００３６】
（従来例１）
コンドロイチン硫酸ナトリウム（生化学工業株式会社製、Lot.BN-3342,ウシ由来）の３w/v％水溶液９００mLに、塩化第二鉄水溶液（Ｆｅ2Ｃｌ3・６Ｈ2Ｏ ７.９w/v％）を４５mL加え、攪拌した（図６：Fe-1）。次に、水酸化ナトリウム水溶液（１０.６w/v％）を１５mL加えて攪拌して初期調整をした後（図６：OH-1）、さらに同濃度の水酸化ナトリウム水溶液１５mLを加えて攪拌した（図６：OH-2）。なお初期調整した後のｐＨは８.０であった。そして、先と同濃度の塩化第二鉄水溶液を４５mL加えた後（図６：Fe-2）、水酸化ナトリウム水溶液１５mLと塩化第二鉄水溶液４５mLをそれぞれ６回交互に添加混合し（図６：OH-3,Fe-3・・・OH-8,Fe-8）、水酸化ナトリウム水溶液を加えて混合液のｐＨを７.９に調整した上で最後に水を加えて全量を１.５Ｌとした。この間、操作は常温下で行い、回転数３,５００rpmで攪拌をし続けた。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図６に示す。
【００３７】
用いたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、平均分子量１９,０００、ΔＤｉ-６Ｓが３３.０重量％、ΔＤｉ-４Ｓが６１.０重量％、２硫酸totalが１.０重量％であった。
【００３８】
（従来例２）
平均分子量２１,５００、ΔＤｉ-６Ｓが７４.６重量％、ΔＤｉ-４Ｓが１６.５重量％、２硫酸totalが７.３重量％のコンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ株式会社製、Lot.PUC-791,サメ由来）を用いた以外は、最終ｐＨを約９.７に調整した以外は従来例１と同様に行った。なお初期調整後のｐＨは約９.２であった。この製造工程におけるｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を図７に示す。
【００３９】
【発明の効果】
本発明によれば、従来法では製造できなかったウシ以外の由来によるコンドロイチン硫酸を用いて、平均粒子径１００ｎｍ以下のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを製造できる。また、当該方法は、従来法とほぼ同様な手順であり、用いる塩化第二鉄水溶液とアルカリ水溶液の濃度調整や添加量調整をして混合液のｐＨ調整を行うだけで、コンドロイチン硫酸原料の変更に容易に対応できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の製造工程を示すフロー図である。
【図２】実施例１における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
【図３】実施例２における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
【図４】実施例３における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
【図５】従来の製造工程を示すフロー図である。
【図６】従来例１における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
【図７】従来例２における混合液のｐＨの推移とコロイド平均粒子径の推移を示す図である。
Claims (4)
- コンドロイチン硫酸の水溶液に、塩化第二鉄およびアルカリを混合攪拌して微量元素製剤用のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを製造する方法において、
前記コンドロイチン硫酸が、分子量（プルラン標準品を用いた液体クロマトグラフ法による）が１５,０００〜４０,０００で、その二糖組成比としてΔＤｉ-６Ｓが５０〜８５重量％かつΔＤｉ-４Ｓが１０〜３０重量％および２硫酸totalが５〜１５重量％であって、
前記コンドロイチン硫酸の水溶液に、塩化第二鉄を加えた後、アルカリを加えて撹拌混合して液のｐＨを３〜７に初期調整した後、アルカリ添加後のｐＨが７〜１４のアルカリ側、塩化第二鉄添加後のｐＨが３〜７の酸性側となるようにアルカリおよび塩化第二鉄を添加混合することを特徴とするコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法。 - 前記アルカリが、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化カリウムのいずれかであることを特徴とする請求項１に記載のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法。
- 得られたコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの平均粒子径が１００ｎｍ以下であることを特徴とする請求項１又は２に記載のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法。
- 請求項１〜３のいずれかに記載のコンドロイチン硫酸・鉄コロイドの製造方法により得られたコンドロイチン硫酸・鉄コロイドを含有することを特徴とする微量元素製剤。
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