JP4345425B2 - クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素遺伝子 - Google Patents
クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素遺伝子 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4345425B2 JP4345425B2 JP2003347866A JP2003347866A JP4345425B2 JP 4345425 B2 JP4345425 B2 JP 4345425B2 JP 2003347866 A JP2003347866 A JP 2003347866A JP 2003347866 A JP2003347866 A JP 2003347866A JP 4345425 B2 JP4345425 B2 JP 4345425B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- acid sequence
- chlorohydrin
- seq
- base sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- XENVCRGQTABGKY-ZHACJKMWSA-N chlorohydrin Chemical compound CC#CC#CC#CC#C\C=C\C(Cl)CO XENVCRGQTABGKY-ZHACJKMWSA-N 0.000 title claims description 32
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 25
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 title claims description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 75
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 73
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 54
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 40
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 39
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 30
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 26
- -1 hydroxycarboxylic acid ester Chemical class 0.000 claims description 25
- SYTBZMRGLBWNTM-SNVBAGLBSA-N (R)-flurbiprofen Chemical compound FC1=CC([C@H](C(O)=O)C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 SYTBZMRGLBWNTM-SNVBAGLBSA-N 0.000 claims description 23
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 23
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 19
- FUDDLSHBRSNCBV-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxyoxolan-2-one Chemical compound OC1COC(=O)C1 FUDDLSHBRSNCBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 13
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 10
- UJJLJRQIPMGXEZ-UHFFFAOYSA-N tetrahydro-2-furoic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCO1 UJJLJRQIPMGXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 9
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 claims description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 7
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 7
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 5
- 230000036647 reaction Effects 0.000 claims description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 15
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 47
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 47
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 22
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- LZCLXQDLBQLTDK-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-hydroxypropanoate Chemical compound CCOC(=O)C(C)O LZCLXQDLBQLTDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- OMSUIQOIVADKIM-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-hydroxybutyrate Chemical compound CCOC(=O)CC(C)O OMSUIQOIVADKIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 16
- WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N R3HBA Natural products CC(O)CC(O)=O WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 229940116333 ethyl lactate Drugs 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 7
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 7
- WMRINGSAVOPXTE-UHFFFAOYSA-N methyl 4-chloro-3-hydroxybutanoate Chemical compound COC(=O)CC(O)CCl WMRINGSAVOPXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 6
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 6
- QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic anhydride Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OC(=O)C(F)(F)F QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 6
- 241000147019 Enterobacter sp. Species 0.000 description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- ZJYKSSGYDPNKQS-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-hydroxy-4-phenylbutanoate Chemical compound CCOC(=O)C(O)CCC1=CC=CC=C1 ZJYKSSGYDPNKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 4
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 4
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N NADP zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 4
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- KWWOQRSLYPHAMK-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-hydroxybutanoate Chemical compound CCOC(=O)C(O)CC KWWOQRSLYPHAMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000007671 pyg medium Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000010931 ester hydrolysis Methods 0.000 description 3
- OHLRLMWUFVDREV-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-chloro-3-oxobutanoate Chemical compound CCOC(=O)CC(=O)CCl OHLRLMWUFVDREV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 3
- IXHZGHPQQTXOKV-UHFFFAOYSA-N methyl oxolane-2-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1CCCO1 IXHZGHPQQTXOKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AKDAXGMVRMXFOO-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound ClCC(O)CC(O)=O AKDAXGMVRMXFOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000204946 Halobacterium salinarum Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010065081 Phosphorylase b Proteins 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 2
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- ZAJNMXDBJKCCAT-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-chloro-3-hydroxybutanoate Chemical compound CCOC(=O)CC(O)CCl ZAJNMXDBJKCCAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OBNCKNCVKJNDBV-UHFFFAOYSA-N ethyl butyrate Chemical compound CCCC(=O)OCC OBNCKNCVKJNDBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 2
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VNBFUGOVQMFIRN-UHFFFAOYSA-N 1-chlorobutan-2-ol Chemical compound CCC(O)CCl VNBFUGOVQMFIRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JGHSBPIZNUXPLA-UHFFFAOYSA-N 2-Hydroxyhexadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)=O JGHSBPIZNUXPLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNJCEALGCZSIGB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-4-phenylbutanoic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CCC1=CC=CC=C1 JNJCEALGCZSIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-M 2-hydroxybutyrate Chemical compound CCC(O)C([O-])=O AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybutyric acid Chemical compound CCC(O)C(O)=O AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N Acetoacetic acid Natural products CC(=O)CC(O)=O WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589220 Acetobacter Species 0.000 description 1
- 102000005751 Alcohol Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108010031132 Alcohol Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 108010053754 Aldehyde reductase Proteins 0.000 description 1
- 102100027265 Aldo-keto reductase family 1 member B1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000589151 Azotobacter Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003846 Carbonic anhydrases Human genes 0.000 description 1
- 108090000209 Carbonic anhydrases Proteins 0.000 description 1
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000738557 Enterobacter sp. DS-S-75 Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 108090000698 Formate Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 241000589236 Gluconobacter Species 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108020005350 Initiator Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- LDLDJEAVRNAEBW-UHFFFAOYSA-N Methyl 3-hydroxybutyrate Chemical compound COC(=O)CC(C)O LDLDJEAVRNAEBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRQNANDWMGAFTP-UHFFFAOYSA-N Methylacetoacetic acid Chemical compound COC(=O)CC(C)=O WRQNANDWMGAFTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- MSUOLNSQHLHDAS-UHFFFAOYSA-N R-2-Hydroxytetracosanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)=O MSUOLNSQHLHDAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 1
- 241000187561 Rhodococcus erythropolis Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 240000004922 Vigna radiata Species 0.000 description 1
- 235000010721 Vigna radiata var radiata Nutrition 0.000 description 1
- 235000011469 Vigna radiata var sublobata Nutrition 0.000 description 1
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 108010058834 acylcarnitine hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 229960004424 carbon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000006298 dechlorination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000000058 esterolytic effect Effects 0.000 description 1
- XWWGVYVLALKWDS-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-chloro-3-hydroxybutanoate Chemical compound CCOC(=O)C(Cl)C(C)O XWWGVYVLALKWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 108010052305 exodeoxyribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000005262 ferroelectric liquid crystals (FLCs) Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 159000000014 iron salts Chemical class 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 150000003903 lactic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002696 manganese Chemical class 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000001426 native polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- DVDUMIQZEUTAGK-UHFFFAOYSA-N p-nitrophenyl butyrate Chemical compound CCCC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 DVDUMIQZEUTAGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000004804 winding Methods 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
(a)配列番号1に記載の塩基配列、
(b)配列番号1に記載の塩基配列において、1から複数個の塩基が欠失、付加又は置換されている塩基配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するタンパク質をコードする塩基配列、
(c)配列番号1に記載の塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であってクロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するタンパク質をコードする塩基配列、
(d)配列番号2に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列、
(e)配列番号2に記載のアミノ酸配列において1から複数個のアミノ酸が欠失、付加又は置換されているアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、又は
(f)配列番号2に記載のアミノ酸配列と少なくとも60%以上の相同性を有するアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
のいずれかの塩基配列からなる遺伝子が提供される。
また、本発明によれば、下記のアミノ酸配列:
(a)配列番号2に記載のアミノ酸配列
(b)配列番号2に記載のアミノ酸配列において1から複数個のアミノ酸が欠失、付加又は置換されているアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列、又は
(c)配列番号2に記載のアミノ酸配列と少なくとも60%以上の相同性を有するアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列
のいずれかのアミノ酸配列からなるタンパク質が提供される。
また、本発明によれば、本発明の形質転換体を用いた休止菌体反応のための、配列番号7のアミノ酸配列からなるシグナルペプチドが提供される。
また、本発明によれば、配列番号8の塩基配列からなるシグナルペプチドをコードするDNAが提供される。
また、本発明によれば、本発明の遺伝子を含むベクターが提供される。好ましくは、ベクターは、シグナルペプチドをコードするDNAを含み、さらに好ましくは、プラスミドpKK−EnHCH1である。
また、本発明によれば、上記のベクターを含む形質転換体が提供される。好ましくは、宿主は、大腸菌であり、より好ましくは、大腸菌JM109株又はDH5α株である。
また、本発明によれば、本発明の遺伝子又はタンパク質を用いることを含む、本発明のタンパク質の製造方法が提供される。
さらに、本発明によれば、本発明のタンパク質、形質転換体を用いた光学活性体の製造方法が提供される。
本発明によれば、下記の塩基配列:
(a)配列番号1に記載の塩基配列、
(b)配列番号1に記載の塩基配列において、1から複数個の塩基が欠失、付加又は置換されている塩基配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するタンパク質をコードする塩基配列、
(c)配列番号1に記載の塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であってクロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するタンパク質をコードする塩基配列、
(d)配列番号2に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列、
(e)配列番号2に記載のアミノ酸配列において1から複数個のアミノ酸が欠失、付加又は置換されているアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、又は
(f)配列番号2に記載のアミノ酸配列と少なくとも60%以上の相同性を有するアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
のいずれかの塩基配列からなる遺伝子に関する。
式〔1〕:
に示すようなラセミ体クロロヒドリンを立体選択的に脱クロルおよび加水分解して、式〔2〕:
に示すような、ラセミ体ヒドロキシカルボン酸エステルを立体選択的に加水分解して、光学活性ヒドロキシカルボン酸を生成し、その対掌体エステルを残存させる。さらに下記式〔4〕:
に示すような、ラセミ体テトラヒドロフラン−2−カルボン酸エステルを立体選択的に加水分解して、R体テトラヒドロフラン−2−カルボン酸エステルを残存させる作用をいう。
(a)配列番号2に記載のアミノ酸配列
(b)配列番号2に記載のアミノ酸配列において1から複数個のアミノ酸が欠失、付加又は置換されているアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列、又は
(c)配列番号2に記載のアミノ酸配列と少なくとも60%以上の相同性を有するアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列からなるタンパク質にも関する。
酵素活性の測定は0.5Mリン酸カリウム緩衝液(pH7.15)に1%(v/v)4−クロロ−3−ヒドロキシブタン酸メチルを基質とし、30℃で反応を行ない、遊離したクロルイオンを岩崎らの方法(Bull.chem.soc.Japan, 25, 226(1952))に従って比色定量した。1分間に1μmolのクロルイオンを遊離させる酵素量を1Uとした。タンパク質の定量は、280nmにおける吸収を測定して行なった。
精製したEnHCH酵素45μgをキモトリプシンで37℃1時間処理した。12.5%分離ゲルを用いてSDS−PAGEを行ない、PVDF膜に転写し、N末端および内部部分アミノ酸配列をアミノ酸シークエンサーによって決定した。決定されたアミノ酸配列を配列番号3および4に示した。
(1)エンテロバクター属からの染色体DNAの調製
エンテロバクター属DS−S−75株(FERM BP−5494)をPYG培地5ml中で20時間培養し、遠心分離により菌体を回収した。菌体を490mlのTE溶液(10mMトリス−塩酸 pH8.0、1mM EDTA)に懸濁し、10%SDSを30ml、20mg/mlプロテアーゼKを50ml添加し、50℃で1時間反応させた。その後、等量のフェノール:クロロホルム:イソアミルアルコール(25:24:1)による抽出を行なった後、0.1倍量の3M酢酸ナトリウム溶液を添加し、0.6倍量の2−プロパノールを静かに重層した。その結果、界面に生じたDNAをガラス棒で糸状に巻きつけて回収した。
アミノ酸シークエンサーで決定した配列番号3および4のアミノ酸配列から予想されるDNA配列をコドン縮重を考慮してPCRプライマーを合成し(配列番号5及び6に示す)、(1)で抽出した染色体DNA50ngを鋳型にしてExTaqDNAポリメラーゼ(宝酒造株式会社製)を用いてPCR(熱変性96℃、30秒、アニーリング50℃、1分、伸長反応72℃、1分)を40サイクル行ない、4℃まで冷却後アガロースゲル電気泳動により増幅DNAを確認し、DNA断片を常法によりアガロースゲルより回収した。次いで、そのDNA断片をpUC118(宝酒造株式会社製)にサブクローニングし、塩基配列をDNAシークエンサーで決定した。その結果、決定したDNA塩基配列中に、あらかじめ決定した部分アミノ酸配列(配列番号3および4)をコードする領域を確認できたので、得られた増幅DNAを常法に従って32Pでラベルし、プローブDNAとした。
抽出したDS−S−75株の染色体DNAを種々の制限酵素で切断し、1%アガロースゲルを用いて電気泳動後、ニトロセルロースメンブレンに転写させた。風乾後、(2)で作製したプローブを用いて、65℃で20時間ハイブリダイゼーション反応を行なった。
(3)で作製した制限酵素地図から目的とするEnHCH遺伝子の全長が含まれることを考慮して、プラスミドpBluescriptII KS(東洋紡績株式会社製)のEcoRI部位に約6000塩基対のDS−S−75株の染色体DNAに由来する多種類のDNA断片を挿入したゲノムライブラリーを作製した。これを大腸菌DH5α株に導入して得られた形質転換体160個体をニトロセルロースメンブレンにレプリカした後、0.5N NaOHにメンブレンを浸して溶菌し、1M トリス塩酸(pH7.5)にメンブレンを浸して中和した。風乾後、(2)で作製したプローブを用いて、65℃で20時間ハイブリダイゼーション反応を行なった。
上記陽性株から常法によりプラスミドを抽出し、pBl−EnHCHを得た。これを、エキソヌクレアーゼIIIおよびマングマメのエンドヌクレアーゼ(mung bean endonuclease)により挿入遺伝子断片を種々欠失させ、それぞれの試料の塩基配列をジデオキシ法により決定し、得られた配列を重ね合わせ、BamHI−PstI間で塩基配列を決定した。決定した塩基配列とその塩基配列から推定されるアミノ酸配列を配列表の配列番号1に示す。またpBl−EnHCHの模式図を図1に示す。
EnHCH遺伝子の開始コドンと推定されるATG配列は3個所に存在した。プラスミドpKK223−3のtacプロモーターの支配下に連結し、上記の各開始コドンおよび精製酵素のN末端から翻訳させる様に以下の手順で構築を行なった(図2、図3)。これら各々のATG配列のすぐ上流にEcoRI認識配列を付与するため、配列番号9〜12に示すPCRプライマーを設計し、M13プライマーを組み合わせて、pBl−EnHCH1 50ngを鋳型にしてPCR(熱変性96℃、30秒、アニーリング50℃、30秒、伸長反応72℃、1分)を30サイクル行なった(精製酵素のN末端については、メチオニンに置換した(図2))。4℃まで冷却後、アガロースゲル電気泳動により増幅DNAを確認し、各種DNA断片を常法によりアガロースゲルより回収した。次いで、そのDNA断片をBKLキット(宝酒造株式会社製)を用いて平滑、リン酸化後、pUC118のHincII制限酵素部位にサブクローニングし、各々について、上流約400塩基の配列をDNAシークエンサーで決定した。
大腸菌JM109およびDH5αのコンピテントセルを調製し、pKK−EnHCHで形質転換することにより、組換え大腸菌JM109(pKK−EnHCH1)、DH5α(pKK−EnHCH1)を得た。なおDH5α(pKK−EnHCH2)は得ることができなかった。また対照試料としてベクターのみで形質転換したJM109(pKK−223−3)、DH5α(pKK223−3)も得た。
(1)培養液の調製
実施例5で得た形質転換体を試験管に5ml入ったLB培地(1%ポリペプトン、0.5%酵母エキス、1%塩化ナトリウム)で、20時間、37℃で好気的に培養した。なお、対照としてpKK223−3で形質転換したJM109株、DH5α株も同様に培養した。また、エンテロバクター属DS−S−75株については、試験管に5ml入ったPYG培地(1%ポリペプトン、1%酵母エキス、1%グリセリン)を20時間30℃で好気的に種培養し、各種株から培養液試料を得た。
250mM トリス硫酸緩衝液に終濃度0.05%(v/v)になるようにp−ニトロフェニルブチレートを添加し、反応液とした。この3mlに上記で調製した培養液試料20mlを添加し、30℃で反応させて加水分解反応により生成するp−ニトロフェノールに由来する400nmの吸光度の増大を測定した。結果を表2に示す。なお1Uは、30℃で1分間あたりに1μmolのp−ニトロフェノールの生成量を表わし、調製した培養液あたりの比活性を算出した。
(1)で調製したJM109(pKK−EnHCH1)、JM109(pKK−EnHCH2)、JM109(pKK−EnHCH3)、JM109(pKK−EnHCH4)の培養液試料を遠心分離により集菌し、20mMリン酸カリウム緩衝液で懸濁後、超音波破砕した。各5μgの抽出タンパク質試料およびエンテロバクター属DS−S−75株から精製したEnHCHをSDS−PAGE(10%分離ゲル)に共し、クマシーブリリアントグリーンによる染色を行なった。その結果、いずれの組換え大腸菌の組換え酵素でもエンテロバクター属DS−S−75株から精製したEnHCHと同じ位置にバンドが確認された(図4)。用いた分子量マーカーと分子量を下記に記す。ホスホリラーゼB(97,400)、ウシ血清アルブミン(66,200)、オボアルブミン(45,000)、カルボニックアンヒドラーゼ(31,000)、トリプシンインヒビター(21,500)。
(1)で調製したJM109(pKK−EnHCH1)の細胞破砕液の20%−50%硫安沈殿試料を透析し、10%分離ゲルを用いてSDS−PAGEを行ない、PVDF膜に転写し、N末端配列をアミノ酸シークエンサーによって決定した。10残基決定した結果、エンテロバクター属DS−S−75株から精製したEnHCHのN末端配列と一致した。また、(3)のSDS−PAGEの結果、バンドが同じ位置にあることから、大腸菌においてもシグナルペプチドの切断が行われていることが明らかとなった。また、JM109(pKK−EnHCH1)、JM109(pKK−EnHCH2)の活性がJM109(pKK−EnHCH3)、JM109(pKK−EnHCH4)と比較して高いことから、本シグナルペプチドは、大腸菌での安定な発現に重要であることがいえる。
(1)4−クロロ−3−ヒドロキシブタン酸メチルの光学分割
300ml容の三角フラスコにアンピシリンを含むLB培地60mlを調製し、DH5α(pKK−EnHCH1)を37℃で16時間振とう培養した。また、対照としてベクターのみで形質転換させたDH5α(pKK223−3)を調製した。また、エンテロバクター属DS−S−75株については、PYG培地60mlで培養した。各々の培養液に最終濃度が5%(w/v)になるように炭酸カルシウムと8%(w/v)になるようにラセミ体4−クロロ−3−ヒドロキシブタン酸メチルエステルを基質として加え、30℃で1時間振とう反応させた。また、エンテロバクター属DS−S−75株については、同様に最終濃度2%の基質で24時間振とう反応もあわせて行なった。反応終了後、遠心分離にて除菌し、反応液中に残存する4−クロロ−3−ヒドロキシブタン酸メチルエステルの濃度をガスクロマトグラフィー(カラム担体:PEG20M、60−80メッシュ)で分析した。さらに、上記除菌液から等量の酢酸エチルで抽出し、アステック社製のG−TA(0.25mm×30m)を用いたガスクロマトグラフィーにより、残存していた4−クロロ−3−ヒドロキシブタン酸メチルの光学純度を測定した。その結果、リテンションタイムはR体14.7分、S体15.7分であった。分析条件:カラム温度110℃、検出器温度200℃、キャリアーガス 窒素;流速、0.8ml/分、検出器FID;スプリット比100/1。
実施例7の(1)と同様に菌体各種を培養し、各々の培養液に最終濃度が5%(w/v)になるように炭酸カルシウムと8%(w/v)になるようにラセミ体3−ヒドロキシブタン酸エチルを基質として加え、30℃で1時間振とう反応させた。また、エンテロバクター属DS−S−75株については、同様に4時間振とう反応もあわせて行なった。反応終了後、菌体を遠心分離により除去した。
ラセミ体3−ヒドロキシブタン酸エチルをラセミ体2−ヒドロキシブタン酸エチルに変えた以外は実施例7の(2)と同様の方法で反応した。ただし、反応時間は組換え大腸菌は24時間、DS−S−75株は24および36時間とした。反応終了後、実施例7の(2)と同様の方法で、濃度、光学純度の解析を行なった。リテンションタイムはR体7.4分、S体7.8分であった。光学純度分析条件:カラム温度90℃、検出器温度200℃、キャリアーガス 窒素;流速、0.7ml/分、検出器FID;スプリット比100/1。
実施例7の(1)と同様に菌体各種を培養し、各々の培養液に最終濃度が5%(w/v)になるように炭酸カルシウムと1%(w/v)になるようにラセミ体テトラヒドロフラン−2−カルボン酸メチルを基質として加え、30℃で2時間振とう反応させた。また、エンテロバクター属DS−S−75株については、同様に4時間および24時間振とう反応させた。反応終了後、菌体を遠心分離により除去した。
実施例7の(1)と同様に菌体各種を培養し、各々の培養液に最終濃度が5%(w/v)になるように炭酸カルシウムと6%(w/v)になるようにラセミ体乳酸エチルを基質として加え、30℃で24時間振とう反応させた。また、エンテロバクター属DS−S−75株については、同様に48時間および100時間振とう反応させた。反応終了後、菌体を遠心分離により除去した。
実施例7の(1)と同様に菌体各種を培養し、各々の培養液に最終濃度が5%(w/v)になるように炭酸カルシウムと2%(w/v)になるようにラセミ体4−フェニル−2−ヒドロキシブタン酸エチルを基質として加え、30℃で24時間振とう反応させた。また、エンテロバクター属DS−S−75株については、同様に48時間および100時間振とう反応させた。反応終了後、菌体を遠心分離により除去した。
Claims (13)
- 下記の塩基配列:
(a)配列番号1に記載の塩基配列、
(b)配列番号1に記載の塩基配列において、1から複数個の塩基が欠失、付加又は置換されている塩基配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するタンパク質をコードする塩基配列、
(c)配列番号1に記載の塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であってクロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するタンパク質をコードする塩基配列、
(d)配列番号2に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列、
(e)配列番号2に記載のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、付加又は置換されているアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、又は
(f)配列番号2に記載のアミノ酸配列と少なくとも90%以上の同一性を有するアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
のいずれかの塩基配列からなる遺伝子、
ここで、該クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性は、
式〔1〕:
(式中、R 1 はC1〜C4のアルキル基である。)
に示すようなラセミ体クロロヒドリンを立体選択的に脱クロルおよび加水分解して、式〔2〕:
に示すS体3−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを生成し、R体クロロヒドリンを残存させるか、下記式〔3〕:
(式中、R 1 はC1〜C4のアルキル基であり、R 2 は、メチル基またはベンジル基であり、R 2 が、メチル基のときは、mが0のときnは0または1であり、mが1のときnは0である。R 2 がベンジル基のとき、mが0でありnは1である。)
に示すような、ラセミ体ヒドロキシカルボン酸エステルを立体選択的に加水分解して、光学活性ヒドロキシカルボン酸を生成し、その対掌体エステルを残存させるか、または下記式〔4〕:
(式中、R 1 は、C1〜C4のアルキル基である。)
に示すような、ラセミ体テトラヒドロフラン−2−カルボン酸エステルを立体選択的に加水分解して、R体テトラヒドロフラン−2−カルボン酸エステルを残存させる作用をいう。 - 下記のアミノ酸配列:
(a)配列番号2に記載のアミノ酸配列
(b)配列番号2に記載のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、付加又は置換されているアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列、又は
(c)配列番号2に記載のアミノ酸配列と少なくとも90%以上の同一性を有するアミノ酸配列であって、クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性を有するアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列からなるタンパク質、
ここで、該クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素活性は、
式〔1〕:
(式中、R 1 はC1〜C4のアルキル基である。)
に示すようなラセミ体クロロヒドリンを立体選択的に脱クロルおよび加水分解して、式〔2〕:
に示すS体3−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンを生成し、R体クロロヒドリンを残存させるか、また、下記式〔3〕:
(式中、R 1 はC1〜C4のアルキル基であり、R 2 は、メチル基またはベンジル基であり、R 2 が、メチル基のときは、mが0のときnは0または1であり、mが1のときnは0である。R 2 がベンジル基のとき、mが0でありnは1である。)
に示すような、ラセミ体ヒドロキシカルボン酸エステルを立体選択的に加水分解して、光学活性ヒドロキシカルボン酸を生成し、その対掌体エステルを残存させるか、または下記式〔4〕:
(式中、R 1 は、C1〜C4のアルキル基である。)
に示すような、ラセミ体テトラヒドロフラン−2−カルボン酸エステルを立体選択的に加水分解して、R体テトラヒドロフラン−2−カルボン酸エステルを残存させる作用をいう。 - 配列番号7のアミノ酸配列からなる、請求項2に記載のタンパク質を用いた休止菌体反応のための、シグナルペプチド。
- 配列番号8の塩基配列からなる、請求項3に記載のシグナルペプチドをコードするDNA。
- 請求項1に記載の遺伝子を含む、ベクター。
- さらに、請求項4に記載のDNAを含む、請求項5に記載のベクター。
- プラスミドpKK−EnHCH1(受託番号:FERM BP−08466)である、請求項6に記載のベクター。
- 請求項1に記載の遺伝子又は請求項5〜7のいずれか1項に記載のベクターを含む、非ヒト形質転換体。
- 宿主が、大腸菌である、請求項8に記載の非ヒト形質転換体。
- 宿主が、大腸菌JM109株又はDH5α株である、請求項9に記載の非ヒト形質転換体。
- 請求項1に記載の遺伝子を用いることを含む、請求項2に記載のタンパク質の製造方法。
- 請求項2に記載のタンパク質を用いることを含む、光学活性体の製造方法。
- 請求項8〜10のいずれか1項に記載の形質転換体を用いることを含む、光学活性体の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003347866A JP4345425B2 (ja) | 2002-10-07 | 2003-10-07 | クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素遺伝子 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2002293512 | 2002-10-07 | ||
JP2003347866A JP4345425B2 (ja) | 2002-10-07 | 2003-10-07 | クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素遺伝子 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004147646A JP2004147646A (ja) | 2004-05-27 |
JP4345425B2 true JP4345425B2 (ja) | 2009-10-14 |
Family
ID=32473474
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003347866A Expired - Fee Related JP4345425B2 (ja) | 2002-10-07 | 2003-10-07 | クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素遺伝子 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4345425B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10327454A1 (de) * | 2003-06-18 | 2005-01-20 | Juelich Enzyme Products Gmbh | Oxidoreduktase aus Pichia capsulata |
JP4565335B2 (ja) * | 2005-07-29 | 2010-10-20 | ダイソー株式会社 | 光学活性グリセロールアセトナイドエステルの製造方法 |
-
2003
- 2003-10-07 JP JP2003347866A patent/JP4345425B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2004147646A (ja) | 2004-05-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4934037B2 (ja) | ニトリラーゼ突然変異体を使用した3−ヒドロキシカルボン酸の生成 | |
KR20020008116A (ko) | 신규 카르보닐 환원효소, 그의 유전자, 및 그의 이용 방법 | |
JP4809660B2 (ja) | 3−キヌクリジノン還元酵素およびこれを用いる(r)−3−キヌクリジノールの製造方法 | |
WO2008143150A1 (ja) | 遺伝子破壊株、組換えプラスミド、形質転換体、及び3-カルボキシムコノラクトンの製造方法 | |
JP4345425B2 (ja) | クロロヒドリン及びヒドロキシカルボン酸エステル不斉加水分解酵素遺伝子 | |
US7335502B2 (en) | Chlorohydrin and hydroxycarboxylic ester asymmetric hydrolase gene | |
JP5226509B2 (ja) | 改良型ハロヒドリンエポキシダーゼ | |
US7060477B2 (en) | Epoxide hydrolases of aspergillus origin | |
JP5284947B2 (ja) | 新規アミダーゼ、その遺伝子、ベクター、形質転換体、及びそれらを利用した光学活性カルボン酸アミド及び光学活性カルボン酸の製造方法 | |
JP4880859B2 (ja) | 新規カルボニル還元酵素、その遺伝子、およびその利用法 | |
CN110951711B (zh) | 一种具有降解手性酯活性的酯酶及其编码基因和应用 | |
JP5175845B2 (ja) | 光学活性1,2−ジオール類の製造に用いられる不斉酸化酵素 | |
WO2005123921A1 (ja) | 新規グリセロール脱水素酵素、その遺伝子、及びその利用法 | |
JP2008212144A (ja) | アルコール脱水素酵素、これをコードする遺伝子、およびそれを用いた光学活性(r)−3−キヌクリジノールの製造方法 | |
JPWO2010123062A1 (ja) | (r)−3−キヌクリジノールの製造方法 | |
JP5030067B2 (ja) | 新規アルカンポリオール脱水素酵素 | |
JP2008194037A (ja) | 生体触媒による4−ハロ−3−ヒドロキシ酪酸エステルの光学分割法 | |
JP4274767B2 (ja) | (r)−体のアミド結合を選択的に加水分解するアミダーゼ遺伝子及びその利用 | |
JP2011205921A (ja) | ロドコッカス(Rhodococcus)属細菌組換体及びそれを用いた光学活性(R)−3−キヌクリジノールの製造方法 | |
KR20230083821A (ko) | D형 젖산 생산능이 향상된 균주 및 이를 이용한 d형 젖산의 생산 방법 | |
WO2008047819A1 (fr) | Nouvelle ester hydrolase, gène codant pour ladite enzyme et utilisation | |
JP2012228221A (ja) | 改良型ハロヒドリンエポキシダーゼ | |
JP4601049B2 (ja) | バチルス・サチルス由来のエポキシドハイドロラーゼを発現する微生物およびそれを用いたエポキシドハイドロラーゼの製造方法 | |
JPWO2003018796A1 (ja) | 光学活性1,2−ジオールおよびハロゲノヒドリンの合成に有用な酸化的脱ハロゲン化酵素遺伝子およびその大量発現法 | |
JP2013070675A (ja) | アルキルジオールを産生する組換え菌の培養方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050921 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080311 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080509 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090623 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090706 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4345425 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120724 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120724 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130724 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140724 Year of fee payment: 5 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |