JP4317083B2 - 質量分析方法及び質量分析システム - Google Patents
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Description
実施例1
本発明にかかる質量分析システムの実施例について図1〜図5を用いて以下に説明する。図1に示す質量分析システムは試料導入系101、液体クロマトグラフィー装置(LC)102、タンデム型MS103、制御装置104、コンピュータ201、出力装置としてのディスプレイ装置202、入力装置としてのキーボード203、およびこれらを接続する信号線で構成される。本実施例で用いるタンデム型MS103はイオントラップ型の装置であり、イオン化方法はエレクトロスプレーイオン化を用いる。また、本実施例における使用条件では、タンデム型MS103の質量測定誤差δは約0.5Daである。ここでDaは原子量単位で、1Da=1原子質量である。
(1)MSで測定したピークのLCリテンションタイム。
(2)選定したMS1のm/zの値。
(3)選定したMS1のP1/P2の値。
(4)データベースサーチの結果:候補アミノ酸配列をランキング順に表示。
(5)上記(4)の候補アミノ酸配列を含むタンパク質の名前。
本発明にかかる質量分析システムの実施例について図6を用いて説明する。図6のシステムは上記実施例1のシステムにクラスター型計算機204、データストレージ205およびネットワークサーバ206を接続したものである。
実施例1では判定式としてP1/P2<rを用いたが、以下のような判定式を用いてもよい。
(1)P1/P2>r
(2)P1−P2>r2またはP1−P2<r2
(3)P1×P2>r3またはP1×P2<r3
(4)r4>P1/P2>r5
上記(1)はP1>P2となることが明らかな場合に用いる。また(2)はスペクトル強度の差に意味がある場合、例えばP1−P2の値が投薬量に関係している場合などに用いる。また(3)はスペクトル強度の積に意味がある場合に用いる。また、(4)は二つの検体A、Bに含まれるタンパク質が実際に同じタンパク質起源のピークであるかどうか確認する場合に用いる。
実施例4
上記実施例における判定式を複数組み合わせ、あるいは任意の判定式を設定する方法について以下に説明する。本実施例では測定を開始する以前、もしくは測定を開始してMS1が実行される以前に図1におけるコンピュータ201、ディスプレイ装置202、キーボード203を用いて判定式の条件を設定する。判定式の設定を指定すると、ディスプレイ装置202には図7に示したような入力画面が表示される。入力画面にはチェックボックス51、判定式52、判定値入力フィールド53、AND/OR設定フィールド54、任意判定式入力フィールド59が用意されている。
上記実施例における検体A、Bがタンパク質、あるいはタンパク質を分解したペプチド、化学修飾されたペプチド、糖類または核酸いずれかであってもよい。検体A、Bが糖類である場合には特定の単糖に特異的に結合する同位体試薬を用いる。また、核酸の場合には特定の塩基もしくは塩基配列に対して特異的に結合する同位体試薬を用いる。
上記実施例におけるタンパク質、あるいはタンパク質を分解したペプチド、化学修飾されたペプチドに対して、アミノ配列中に含まれるトリプトファンに特異的に結合する同位体試薬を用いてもよい。トリプトファンは生体起源のタンパク質に含まれる頻度が最も低い(存在比1.18%、Swissprot protein knowledge databaseによる)のでスペクトル解析が単純となる利点がある。
上記実施例で用いた一般的な同位体試薬では炭素もしくは水素の同位体を含む試薬を使うが、酸素の同位体、炭素の同位体、窒素の同位体、リンの同位体あるいはこれらの組み合わせを含む試薬であっても上記実施例と同様の効果を得ることができる。
81〜84…質量分析スペクトルのピーク、91〜94…質量分析スペクトルのピーク。
Claims (8)
- 分子量の異なる化学構造が同一の2つの同位体試薬によってラベリングされた2つの検体を含む試料を準備するステップ、
該試料をクロマトグラフィーにより分離するステップ、
多段階の質量分析を行なうタンデム型質量分析計により質量分析するステップ、
質量分析結果を実時間で解析するステップ、
上記2つの同位体試薬の分子量の差をΔmとしたとき、1段階目の質量分析の計測で得られたスペクトル中においてn×Δm/z(z:イオンの電荷、n:正の整数)だけ離れたピークのペアを抽出するステップ、及び
抽出したピークのスペクトル強度の相互関係に基づいて、2段階目以降の質量分析で測定するピークを選択するステップを含む質量分析方法であって、
上記ピークのペアにおいて、質量数の高い同位体でラベリングされたピークの強度をP1、質量数の低い同位体でラベリングされたピークの強度をP2とし、P1>P2又はP1<P2であり、としたとき、P1とP2の比、差又は積が、測定者が設定した値との関係式を満たすピークのペアのうち片方もしくは両方を2段階目以降の測定で解離させることを特徴とする質量分析方法。 - P1とP2との比と測定者が設定した値rとで決まる判定式P1/P2>rもしくはP1/P2<rを満たすピークのペアのうち片方もしくは両方を2段階目以降の測定で解離させることを特徴とする請求項1記載の質量分析方法。
- P1とP2との差と測定者が設定した値r2とで決まる判定式P1−P2>r2もしくはP1−P2<r2を満たすピークのペアのうち片方もしくは両方を2段階目以降の測定で解離させることを特徴とする請求項1記載の質量分析方法。
- P1とP2との積と測定者が設定した値r3とで決まる判定式P1×P2>r3もしくはP1×P2<r3を満たすピークのペアのうち片方もしくは両方を2段階目以降の測定で解離させることを特徴とする請求項1記載の質量分析方法。
- P1とP2との比と測定者が設定した値r4、r5とで決まる判定式r4>P1/P2>r5もしくはr4<P1/P2<r5を満たすピークのペアのうち片方もしくは両方を2段階目以降の測定で解離させることを特徴とする請求項1記載の質量分析方法。
- 上記検体がタンパク質、タンパク質を分解したペプチド、化学修飾されたペプチド、糖類及び核酸からなる群から選ばれた1種以上であることを特徴とする請求項1〜5のいずれかに記載の質量分析方法。
- 上記タンパク質、タンパク質を分解したペプチド、化学修飾されたペプチド、糖類及び核酸からなる群から選ばれた1種以上を同位体ラベリングする際、該タンパク質及び/又はタンパク質を分解したペプチド及び/又は化学修飾されたペプチドに含まれるシステイン又はトリプトファンに特異的に結合する同位体試薬を用いることを特徴とする請求項1〜5のいずれかに記載の質量分析方法。
- 上記同位体試薬が水素の同位体、酸素の同位体、炭素の同位体、窒素の同位体、リンの同位体からなる群から選ばれた少なくとも1つを含むことを特徴とする請求項1〜5のいずれかに記載の質量分析方法。
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