JP4243191B2 - 変異型ablキナーゼドメイン - Google Patents
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Description
発明の分野:
本発明は、天然のヒトAblキナーゼドメインのアミノ酸配列またはその本質的に類似の配列(ここで、Met244、Leu248、Gly250、Glu252、Tyr253、Val256、Glu258、Phe311、Ile313、Phe317、Met318、Met351、Glu355、Phe359、Ile360、His361、Leu370、Asp381、Phe382、His396、Ser417、Glu459およびPhe486から選択される少なくとも1つのアミノ酸が別のアミノ酸により置換され、該変異型機能的キナーゼドメインがN−[4−メチル−3−(4−ピリジン−3−イル−ピリミジン−2−イルアミノ)−フェニル]−4−(4−メチル−ピペラジン−1−イルメチル)−ベンズアミドまたはその塩による該チロシンキナーゼ活性の阻害に対して抵抗性である)を含む機能的キナーゼドメインを含む単離ポリペプチド、該ポリペプチドのチロシンキナーゼ活性を阻害する化合物のスクリーニングのための該ポリペプチドの使用、該ポリペプチドをコード化する核酸分子、該核酸分子を含む組み換えベクターおよび宿主細胞、および該ポリペプチドのチロシンキナーゼ活性を阻害する化合物のスクリーニングで使用する該ポリペプチドの生成での該核酸分子の使用に関する。
9番および22番染色体の長腕間の相互転座[Rowley J.D., Nature 243, 290-293 (1973)]によるフィラデルフィア染色体の形成から生じる常時活性型チロシンキナーゼであるBcr−Abl[Nowell P.C. and Hungerford D.A., Science 132, 1497 (1960)]は、慢性骨髄性白血病(CML)の実質的全類型および成人急性リンパ芽球性白血病(ALL)の最大20%に存在する特徴的分子異常として示された[Faderl S. et al., N Engl J Med 341, 164-172 (1999); Sawyers C.L., N Engl J Med 340, 1330-1340 (1999)]。Bcr−AblはマウスにおいてCMLを引き起こすのに足り[Daley G.Q. et al., Science 247, 824-830 (1990)]、かつその形質変換能はチロシンキナーゼ活性に完全に依存している。Bcr−Ablならびに血小板由来成長因子受容体のATP結合部位、およびc−kitチロシンキナーゼ[Lugo T.G. et al., Science 247, 1079 (1990)]での競合的阻害剤である化合物N−[4−メチル−3−(4−ピリジン−3−イル−ピリミジン−2−イルアミノ)−フェニル]−4−(4−メチル−ピペラジン−1−イルメチル)−ベンズアミド(以下、「STI571」としても言及される;STI571はEP0 564 409に記載され、そしてメタンスルホン酸塩の形でWO99/03854に記載される)は、慢性期および急性転化のCML、ならびにフィラデルフィア染色体陽性(Ph+)急性リンパ芽球性白血病(Ph+ALL)の臨床的異常および血液学的異常を非常に急激に逆にする能力があると示されてきた[Druker B.J. et al., N Engl J Med 344, 1031-1037 (2001); Druker B.J. et al., N Engl J Med 344, 1038-1042 (2001)]。ほとんど全ての慢性期CML患者が永続的に応答する一方で、CML急性転化およびPh+ALLの寛解は一時的であり、そしてほとんどの患者がSTI571での継続治療にもかかわらず数ヶ月後に再発する[Druker B. J. et al., N Engl J Med 344, 1038-1042 (2001)]。STI571に対する抵抗性のメカニズムは熱心な研究の対象である。
本明細書の文章中、以下の表現、用語および略語は以下に定義される意味を有する。
表現「機能的キナーゼドメイン」において、用語「機能的」はそれぞれのキナーゼドメインがチロシンキナーゼ活性を有することを示す。好ましくは、かかる機能的キナーゼドメインのキナーゼ活性は天然のヒトAblキナーゼドメインの活性の範囲内である。
アミノ酸名は、1文字または3文字コードのいずれかを用いて記載されている。変異は、一般に認められる命名法、例えば、ともに、位置380のアラニンがスレオニンにより置換されることを示す「Ala380Thr」または「380Ala→Thr」により言及される。
配列番号:2は、天然のヒトAblタンパク質のアミノ酸配列を表す(ヒトc−Abl;SwissProt受託番号:P00519)。
「宿主細胞」は、任意の方法、例えば、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム沈殿法、マイクロインジェクション法、トランスフォーメーション法、ウイルス感染法等により細胞内に導入された異種性DNAを含有する原核細胞または真核細胞に言及する。
本発明の実施において、分子生物学、微生物学の多くの通常の技術、および組み換えDNAが用いられる。これらの技術はよく知られており、そして例えば、Current Protocols in Molecular Biology, Volumes I, II, and III, 1997 (F. M. Ausubel ed.); Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II, 1985 (D. N. Glover ed.); Oligonucleotide Synthesis, 1984 (M. L. Gait ed.); Nucleic Acid Hybridization, 1985, (Hames and Higgins); Transcription and Translation, 1984 (Hames and Higgins eds.); Animal Cell Culture, 1986 (R. I. Freshney ed.); Immobilized Cells and Enzymes, 1986 (IRL Press); Perbal, 1984, A Practical Guide to Molecular Cloning; the series, Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells, 1987 (J. H. Miller and M. P. Calos eds., Cold Spring Harbor Laboratory);およびMethods in Enzymology Vol. 154 and Vol. 155 (Wu and Grossman, and Wu, eds., respectively)に説明されている。
本発明のポリペプチドのチロシンキナーゼ活性を阻害する化合物のスクリーニングは、例えば、当該技術分野で公知の任意のインビトロチロシンキナーゼリン酸化アッセイでの本発明の単離ポリペプチドの使用、および該アッセイでの本発明のポリペプチドのチロシンキナーゼ活性を阻害する化合物の潜在性の測定によりなされ得る。
以下の実施例は、範囲を制限することなく本発明を説明するものである。
実施例1:
Ablキナーゼドメインの多数の変異をAblキナーゼドメインに結合するSTI571の3つのモデルに基づき生成し、そしてこの変異体キナーゼをSTI571に対する感受性について評価した。
STI571での治療前および薬物で治療中の再発時の6人の患者の臨床試料を、AblキナーゼドメインのATP結合ポケットおよび活性化ループ中の変異の存在について解析した。解析した患者のうち、
2人が進行期のCMLに罹患し(リンパ性急性転化、1人の患者;再発時の急性転化に進行する加速期CML、1人の患者)、3人の患者がPh+ALLに罹患し、そして1人の患者が混合型Ph+急性白血病に罹患していた(表4参照)。
Ph+:フィラデルフィア染色体陽性;ALL:急性リンパ芽球性白血病;CML:慢性骨髄性白血病;AP:加速期、骨髄の芽球のパーセンテージ>15%だが<30%に基づく;BC:急性転化、骨髄の芽球のパーセンテージ>30%に基づく;CHR:血液学的完全寛解、以下の全ての判定基準に基づく:骨髄中の芽球数<5%、末梢血を循環している芽球がない、絶対好中球数>1.5×109/L、血小板数>100×109/L、髄外所見なし;PCR:細胞遺伝学的部分寛解、5/100のPh染色体陽性分裂中期細胞の発見に基づく;RCP:慢性期への回帰、以下の全ての判定基準に基づく:血液または骨髄中の芽球のパーセンテージ<15%、末梢血または骨髄中の芽球+前骨髄球のパーセンテージ<30%、末梢血好塩基球<20%;Biph:骨髄およびリンパ球両方の表面マーカーの発現に起因する混合型疾患
*STI571での治療前
**Ph+ALLの再発のため一日当たり800mgのSTI571を継続投与
***CML急性転化への急激な再発のため一日当たり600mgのSTI571を投与
#末梢血中芽球様細胞の持続および骨髄中>30%芽球細胞を伴う汎血球減少症
##10週間末梢血を循環している芽球がなくかつ絶対好中球数>1.0×109/Lだが、骨髄中の芽球数>5%持続
+一日当たり600mgのSTI571
++再発(白血球数360×109/L、85%の芽球様細胞)のため一日当たり600mgのSTI571投与から800mgのSTI571に切り替え
§骨髄を検査していない
§§NLE:末梢血に白血病の所見なし、以下の発見に基づく:末梢血を循環している芽球がなく、完全好中球数>1.0×109/L、血小板数>20×109/L、骨髄を検査していない
*一日当たり600mgのSTI571を投与されている1度目の再発
**一日当たり800mgのSTI571を投与されている2度目の再発
♯ヌクレオチド/アミノ酸残基がヒトc−Ablの最初のヌクレオチド/アミノ酸(受託番号:GI:28236)から番号付けされている
+異なる時間ポイントの解析
PCRストラテジーを用いて、Bcr−AblcDNAのATP結合領域を増幅し、そして全領域を両方向に配列決定した。急性転化CML(骨髄性BC2人、リンパ球性BC2人)、加速期(1人)またはSTI571に対して血液学的抵抗性となった2度目の慢性期CML(1人)のためSTI571投与中の患者の4/6に、Bcr−Ablの変異を発見した。1人の患者は変異Thr315Ileを有していた。2人の患者は位置250での変異を有し、それはグルタミン酸をグリシンに置換したものであった。1人の患者はアミノ酸253での変異を有し、そしてヒスチジンをチロシンに置換したものであった。アミノ酸250は、アミノ酸315の様にはSTI571と水素結合せず、アミノ酸253の様には阻害剤とのファンデルワールス結合に関与しない。試料が利用可能な場合(3つの場合)、変異がSTI571治療前に存在せず、かつ正常Abl対立遺伝子に存在しないことを確認した。また、血液学的効果を示しそして維持しているが、STI571に対してはマイナーな細胞遺伝学的効果を示すだけか、または細胞遺伝学的効果を示さない移行期CML(5人)または慢性期CML(3人)の8人の患者のBcr−AblのATP結合領域を配列決定した。該患者の全てが、STI571治療の6〜9ヶ月後に変異の証拠を示さなかった。Bcr−Ablのいくつかの点変異が移行期CML患者で出現し、Bcr−AblへのSTI571結合を完全にまたは部分的に阻害するようであると推測する。
RT−PCRストラテジーを用いて、28患者のBcr−AblのAblキナーゼドメインを増幅し、そして配列決定した。5箇所のオーストラリアの施設での拡大アクセス研究に登録された253患者からSTI571−不応性およびSTI571−抵抗性患者を選択した。ねらいは、注意深く定義した臨床グループ内の後天的変異の生じる頻度およびタイミングの測定、Bcr−Ablキナーゼドメイン内の該分布の測定、および特定の変異と臨床的特徴との関連の決定であった。
STI571−抵抗性患者(n=18)を、少なくとも3ヶ月間続いた血液学的完全寛解を喪失した者、または急性期CMLまたはPh+ALL再発へと移行した者として定義した。STI571−不応性患者(n=10)は、少なくとも6ヶ月の治療後、主要細胞遺伝学的効果を達成できなかった者であった。
STI571−抵抗性患者:
18人のSTI571−抵抗性患者のうち12人がBcr−AblのATP結合領域に変異を有していた(表6)。試料が利用可能であった9人の場合で、変異がSTI571治療を開始する前に存在せず、それぞれの場合で抵抗性の発現前であった3〜9ヶ月で試験した4人の場合で存在しないことを確認した。Bcr−Abl変異のない6人の抵抗性患者のうち3人が、再発時にクローン発生の証拠を示し、2人の場合では追加のフィラデルフィア(Ph)染色体を含んでいた。1人の患者は、再発時に変異と別のPh染色体の両方を有していた。
10人の不応性患者のうちただ1人が変異を有していた(表6)。STI571治療前または処置開始後3ヶ月での変異の証拠はない。野生型Bcr−Ablと混ざって変異クローンが8ヶ月で出現し、そして変異クローンが11ヶ月で優性となるまで混在パターンで持続した。これまで、患者の抵抗性の臨床的証拠はない。
NMは、Bcr−Ablのキナーゼ領域の両方向の配列決定に従って検出された変異がないことを示す。
Cはクローン発生を示す。
Pは2本鎖フィラデルフィア染色体を示す。
*疾患状態/効果:1a)骨髄性急性転化 b)リンパ球性急性転化 c)Ph陽性ALL再発。2)加速期、3)慢性期、4)部分寛解(血液+骨髄の芽球<15%)、5)血液学的完全寛解(WBC<10.0、血小板<450、芽球なし、骨髄球+後骨髄球<5%、前骨髄球なし、異常関連症状かつ髄外異常なし)、6)メジャー細胞遺伝学的効果、7)細胞遺伝学的完全寛解
†処置開始以後の月数
‡患者を8ヶ月間研究対象としたが、STI571を経口ヒ素と月ごとに交代させた。そしてそれゆえ患者は、この期間中、STI571を4ヶ月間だけ投与された。
§Ph陽性ALL患者
40人のAP患者のうち14人がイマチニブ抵抗性となり、5人が急性期への変化を伴い、8人がAPの再発を伴い、そして1人がCCRの喪失を伴っていた。変異を、イマチニブ治療の中央値である8ヶ月(範囲4〜13)で14人中12人(86%)の抵抗性患者で検出した。
64人の後期CP患者のうち13人がイマチニブ抵抗性となり、5人が急性期への変化、6人がAPへの変化そして2人がMCRの喪失を伴っていた。変異を、イマチニブ治療の中央値である8ヶ月(範囲3〜18)で13人中11人(85%)の抵抗性患者で検出した。
40人の初期CP患者のうち6人が抵抗性となり、1人が急性転化へと変化し、2人がAPへと変化し、2人がCCRを喪失し、そして1人がMCRを喪失した。抵抗性患者で変異を検出しなかった。
6ヶ月以内にメジャー細胞遺伝学的効果(MCR)を達成した研究中の全患者を調べると、診断から4年より長く処置された者が、4年以内の処置であった者より9倍高い変異の発生率を有していた(22人中6人(27%)対72人中2人(3%))。6ヶ月以内にMCRを達成しなかった全患者を調べると、診断から4年より長く処置された者が、4年以内の処置であったものより2倍高い変異の発生率を有していた(22人中12人(54%)対28人中7人(25%))。変異の最高発生率は、診断から4年より長く処置されたAP患者で、かつ6ヶ月までにMCRを達成できなかったAP患者においてであった(12人中8人、67%)。この研究では、144人のうち27人の患者が変異を発生した。変異を有する27人の患者のイマチニブ治療の開始前のCMLの継続期間の中央値(5.3年、範囲1.1〜11)は、変異のない117人の患者のもの(1.3年、範囲0.02〜17.7)(p<0.0001)と統計的に異なった。
表7に、27人の患者で検出されたBCR−ABLキナーゼドメインの17の異なる変異を列挙する。全点変異が存在し、そしてそれはアミノ酸244から486に関与する728のヌクレオチド配列内に位置していた。7人の患者が2〜4の変異を有し、そして1人の患者が位置252でのグルタミンからヒスチジンへとアミノ酸を変化させる同一のヌクレオチドでの2つの異なる変異を有していた。N−末端でのL248VおよびキナーゼドメインのC−末端でのS417Y、E459KおよびF486Sの変異はこれまでに発表されていない。最初の3つの変異は、G250E変異も有する1人のイマチニブ抵抗性患者において全て検出された。
抵抗性の4つの分子メカニズムおよび染色体メカニズムを、慢性期(CP、n=136)、加速期(AP、n=80)、骨髄性急性転化(BC、n=73)、およびリンパ球性BC(n=1)の慢性骨髄性白血病(CML)のためSTI571で処置された計290人の患者の中からSTI571単独療法(一日あたり400〜800mg経口)に対して不応性または抵抗性の42人の患者(pts)(男性21人、女性21人;平均年齢60歳、範囲26〜70歳)において調べた。患者を6つの多施設試験での第II相研究へと追加した。STI571治療前、抵抗性患者は骨髄性BC(n=28)またはリンパ球性BC(n=1)、AP(n=9)、またはCP(n=4)であった。治療の継続期間の中央値は123日(範囲13〜741)であった。STI571前および抵抗性時に、Bcr−Abl転写物の発現を、末梢血リンパ球において、定量的RT−PCRにより、ゲノムBcr−Ablのコピー数を相間蛍光インサイツハイブリダイぜーション(IP−FISH)により、そしてクローン核型進化(clonal karyotypic evolution)を分裂中期細胞遺伝学により、測定した。Bcr−AblのチロシンキナーゼドメインのSTI571結合部位を、抵抗性芽球由来のcDNAから配列決定した。結果:(i)比Bcr−Abl/グリセロアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼで発現したBcr−Abl転写物の平均レベルは、STI571治療前は4.6%(0.1〜43%)であり、そして抵抗性(ns)時では5.3%(0.07〜100)であった。3/21の患者は、>10倍のBcr−Ablの過剰発現を示した;(ii)Bcr−Ablのゲノム増幅をIP−FISHにより調べた2/21患者で発見した;(iii)クローン進化を生じる追加染色体異常を7/23患者において観察し、そのうち5人が異数性に発生した;(iv)AblチロシンキナーゼドメインのATP結合部位の点変異を6/40患者において検出した。変異は、結合部位の立体構造を変化させるアミノ酸置換(Y253F、n=1;E255K、n=2;E255V、n=1;T315I、n=2)を導く。変異をDNA制限酵素切断分析により確認し、そして治療前の試料から除去した。Bcr−Ablの再活性化を、リン酸化Crklの平均的群である63%(範囲38〜77%)で、STI571に対する非感受性を示す点変異を有する5人の患者でのCrkl免疫ブロットにより確認した。Ablの自己リン酸化アッセイは、野生型Ablの0.025μMからY253Fの0.5μM、E255Kの0.4μM、E255Vの>0.5μM、およびT315Iの0.30μMのSTI571に対するIC50の増加を示した。
材料および方法
患者
インターフェロンα(INF−α)に抵抗性かまたは不寛容である71人のCML患者を、3つの多センターでの第2相治験においてSTI571で処置した。3ヶ月の治療後、彼らのうち34人がSTI571に対して血液学的および細胞遺伝学的効果(すなわち、正常血球数およびPh陽性分裂中期細胞が65%より多い)を示したが、一方で29人が細胞遺伝学的効果を示さなかった。彼らのうち慢性期の16人および加速期の8人を含む24人をAbl遺伝子変異について解析した。5人の残りの患者について利用可能な材料はなかった。
RNA抽出。全RNAを、製造元の指示によりTRizol試薬(Life Technologies、UK)で凍結した一定分量の107人の末梢血リンパ球から抽出した。RNAペレットを10μlのRNAseフリーの水に再溶解し、そして量を紫外線蛍光分析法により評価した。
ゲノムDNAを、製造元の指示によりQIAmp DNAミニキット(Qiagen、Germany)を用いて5×106の末梢血単核細胞(PBMC)から抽出した。量を紫外線蛍光分析法により測定した。
キナーゼおよびATP−ループAblドメインの全体(アミノ酸242から395)を、アニーリング60℃でフォワードプライマーF3:5’−CAT CAC CAT GAA GCA CAA GC−3’およびリバースプライマーR2を用いて、上記の反応混合液およびPCR条件でcDNA上で増幅した。
変異型または野生型配列を、以下の対立遺伝子特異的およびリバースプライマーを用いて、上記50μlの反応混合液およびPCR条件でDNA上で行った非競合的PCR反応で特異的に増幅した。Thr315Ile変異に対して、F315C:5’−GCC CCC GTT CTA TAT CAT CAC−3’またはF315T:5’−CCC GTT CTA TAT CAT CAT−3’およびR1:5’−GGA TGA AGT TTT TCT TCT CCA G−3’(64℃でアニーリング;158bpのPCR産物);Phe311Leu変異に対して、F311T:5’−CAC CCG GGA GCC CCC GT−3’またはF311C:5’−CAC CCG GGA GCC CCC GC−3’およびR4(64℃でアニーリング;174bpのPCRフラグメント)。
Thr315Ile変異を、24人のSTI571抵抗性患者のCからT塩基への変化により誘導されたDde I制限酵素部位の欠損の研究により調べた。解析を、診断時および抵抗性時の412bpのPCRフラグメントのcDNA増幅後に行った。
24人のSTI571抵抗性患者において、AblキナーゼドメインおよびATP−ループ領域を、抵抗性時およびSTI571治療前のPCR DNAおよびcDNA産物(それぞれ、207bpのF4R4−PCRフラグメントおよび462bpのF3R2−PCRフラグメント)から直接的に配列決定した。配列決定データにより、既にRT−PCR−RFLPが検出した3人中2人の患者のThr315Ile変異を確認したが、より低レベルの変異型転写物を有する残りの患者では失敗した。それぞれの患者のヘテロ接合体の割合を、RT−PCR−RFLPパターンにより、クロマトグラフィー1次配列データの特異的Cシグナル幅とTシグナル幅との比較により表す。
この直接的配列決定法により、Glu255アミノ酸に影響する変異を検出しなかった。
変異検出の感度を増加するために、ASO−PCRアッセイを開発した。ASO−PCRモニタリングは、Thr315Ile、Phe311LeuまたはMet351Thr変異を有する患者では、該変異がSTI571処置前に存在したことを示し、該点変異がSTI571処置前に存在したという証拠を提供した。変異型細胞のこの期間で増加した集団を、エチジウムブロマイド染色アガロースゲルのPCRシグナル輝度により、解析した変異の3つで示した。この最後の結果は、治療の間の変異型細胞の機能的STI571抵抗性によるクローン選択を強く示す。変異型Abl遺伝子の特異的PCR条件フラグメント産物を、10000倍希釈後でさえ検出し、非常に高感度のASO−PCR試験へと発展させた:10ngのDNAが約15000細胞を表すと仮定し、15000の野生型細胞で1.5のAbl変異型細胞を検出できた。予測されたとおり、それぞれの希釈ポイントについて、未変異型細胞のシグナル輝度が常に残っていた。アッセイの高特異性を、健常DNA対照由来の変異型検出Abl配列の欠損によりそれぞれの変異について示した。
この実施例では、イマチニブメシレート処置に対して細胞遺伝学的抵抗性または血液学的抵抗性のいずれかとなった43人のCML患者(該疾病の慢性期18人および移行期25人)を研究した。移行期の患者を期間の中央値である3ヶ月の間イマチニブメシレートで処置し、そして慢性期の患者を期間の中央値である13ヶ月の間処置した。BCR−ABL融合物(1300bp)を含む第1の増幅の後、ネスティッドPCRを行って、ATP結合ドメインを含む584bpのフラグメント、およびSH2およびSH3ドメインを含有する386bpのフラグメントを増幅した。PCR産物を、アミノ酸72〜180およびアミノ酸234〜396を含む異なるABLドメイン覆うことを可能として配列決定し、SH2/SH3およびATP結合ドメインをそれぞれ研究した。
Claims (13)
- 配列番号:2のアミノ酸229〜500を含み、チロシン253がヒスチジンにより置換されているか、またはグリシン250がグルタミン酸により置換されている機能的キナーゼドメインを含む単離ポリペプチドであって、該機能的キナーゼドメインがN−[4−メチル−3−(4−ピリジン−3−イル−ピリミジン−2−イルアミノ)−フェニル]−4−(4−メチル−ピペラジン−1−イルメチル)−ベンズアミドまたはその塩によるそのチロシンキナーゼ活性の阻害に対して抵抗性である単離ポリペプチド。
- チロシン253がヒスチジンにより置換されている、請求項1に記載の単離ポリペプチド。
- グリシン250がグルタミン酸により置換されている、請求項1に記載の単離ポリペプチド。
- Bcr−Ablチロシンキナーゼである、請求項1〜3のいずれか1つに記載の単離ポリペプチド。
- 該ポリペプチドのチロシンキナーゼ活性を阻害する化合物をスクリーンするための、請求項1〜4のいずれか1つに記載の単離ポリペプチドの使用。
- 請求項1〜4のいずれか1つに記載のポリペプチドをコード化するヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
- 該ポリペプチドのチロシンキナーゼ活性を阻害する化合物のスクリーニングで使用するためのポリペプチドの産生における請求項6に記載の単離核酸分子の使用。
- 請求項6に記載の核酸分子を含む組み換えベクター。
- 組み換え発現ベクターである請求項8に記載の組み換えベクター。
- 請求項8または9に記載の組み換えベクターを含む宿主細胞。
- N−[4−メチル−3−(4−ピリジン−3−イル−ピリミジン−2−イルアミノ)−フェニル]−4−(4−メチル−ピペラジン−1−イルメチル)−ベンズアミドまたはその塩の処置に不応性または抵抗性の患者におけるBcr−AblのY253HまたはG250E変異を同定する方法であって、Bcr−AblのATP結合領域のヌクレオチド配列を決定し、そしてY253Hの同定の場合にはチロシン253がヒスチジンにより置換されているか、あるいはG250Eの同定の場合にはグリシン250がグルタミン酸により置換されているかを決定することを含む方法。
- Y253H変異の同定のために、チロシン253がヒスチジンにより置換されているかを決定することを含む、請求項11に記載の方法。
- G250E変異の同定のために、グリシン250がグルタミン酸により置換されているかを決定することを含む、請求項11に記載の方法。
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