JP3971771B2 - 未定量の生体試料の定量分析方法 - Google Patents
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生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過する第1の成分を指示するための第1の指示物質と生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過しない第2の成分を指示するための第2の指示物質を用意し、
所定量の第1の指示物質と第2の指示物質とを含む緩衝水溶液を調整し、
一定量の該緩衝水溶液中の前記第1の指示物質の吸光度を測定し、
前記一定量の該緩衝水溶液中の前記第2の指示物質の吸光度を測定し、
前記生体試料を前記一定量の前記緩衝水溶液に加え、
前記生体試料の血漿と前記一定量の前記緩衝水溶液との混合試料溶液中の前記第1の指示物質にかかる吸光度を測定し、
前記生体試料の血漿と前記一定量の前記緩衝水溶液との混合試料溶液中の前記第2の指示物質にかかる吸光度を測定し、
前記生体試料の血漿の前記第1の指示物質にかかる吸光度に基づき、第1の成分の希釈倍率を算出し、
前記生体試料の血漿の前記第2の指示物質にかかる吸光度に基づき、第2の成分の希釈倍率を算出し、
それぞれの希釈倍率に基づいて、前記血漿中の第1の成分および第2の成分を定量することを特徴とする方法が提供される。
また別の特徴によれば、採取した未定料の血球を含む生体試料の成分を定量分析する方法であって、
生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過する第1の成分を指示するための第1の指示物質と、生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過しない第2の成分を指示するための第2の指示物質を用意し、
所定量の第1の指示物質と第2の指示物質とを含む緩衝水溶液を調整し、
一定量の該緩衝水溶液中の前記第1の指示物質の濃度を測定し、
前記一定量の該緩衝水溶液中の前記第2の指示物質の濃度を測定し、
前記生体試料を前記一定量の前記緩衝水溶液に加え、
前記生体試料の血漿と前記一定量の前記緩衝水溶液との混合試料溶液中の前記第1の指示物質にかかる濃度を測定し、
前記生体試料の血漿と前記一定量の前記緩衝水溶液との混合試料溶液中の前記第2の指示物質にかかる濃度を測定し、
前記生体試料の血漿の前記第1の指示物質にかかる濃度に基づき、第1の成分の希釈倍率を算出し、
前記生体試料の血漿の前記第2の指示物質にかかる濃度に基づき、第2の成分の希釈倍率を算出し、
それぞれの希釈倍率に基づいて、前記血漿中の第1の成分および第2の成分を定量することを特徴とする方法が提供される。
生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過する第1の成分を指示するための第1の指示物質と、生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過しない第2の成分を指示するための第2の指示物質とを含む緩衝水溶液であって、浸透圧が血液とほぼ等張圧である緩衝水溶液を調整し、
採取した未知量の生体試料を一定量の前記緩衝水溶液に加え、
前記緩衝水溶液が加えられた生体試料との混合溶液を遠心分離して、前記生体試料中の血球成分を除去し、
血球成分が除去された前記混合溶液を分析し、
前記第1の指示物質に基づく生体試料の第1の希釈倍率と、前記第2の指示物質に基づく生体試料の第2の希釈倍率とをそれぞれ算出し、
血球膜を通過する生体試料の成分に対しては、前記第1の希釈倍率に基づいて生体試料中の量を算出し、
血球膜を通過しない生体試料の成分に対しては、前記第2の希釈倍率に基づいて生体試料中の量を算出することを特徴とする方法が提供される。
HEPES:2-[4-(2−ヒドロキシエチル)-ピペラジニル]エタンスルフォニック酸
GPO:グリセロール3リン酸オキシダーゼ
EDTA2Na:エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム
ADPS:N-エチル-N-スルホプロピル-3-メトキシアニリン
GK:グリセロールキナーゼ
POD:パーオキシダーゼ
ATP・2Na:アデノシン5`-三りん酸二ナトリウム三水和物、である。
1.混合生体試料:5μl、R-1:80μl混合、37℃で5min放置する。
2.546/884nm波長で吸光度測定する。−− A1(吸光度)
3.R-2:40μl混合、37℃で5min放置する。
4.546/884nm波長で吸光度測定する。−− A2(吸光度)
吸光度は測定値の差として表すことができる。したがって、一般に吸光度はΔA=A2-A1として得られる。
5.したがって、赤血球膜を通過するグリセロールは、生体試料採取後、平衡状態に達した状態では、採取時には、血球内にあった一部のグリセロールが血球膜を透過して、血漿成分中に混入する。したがって、血漿成分だけを、定量分析すると、このような血球膜を通過する物質は、採取時の成分比率よりも多くなる。しかし、これをそのまま分析結果として採用することは、妥当性を欠くことになる。本発明では、このような状況であっても、正確に血球膜通過物質の定量を行うことができるようにした。
1.上記のグリセロールと同様に、表3にそれぞれ示す組成を有する。R-1とR-2とを用いる。
混合生体試料:4μl、R-1:80μl混合、37℃で5min放置する。
546/884nmの波長で吸光度測を定する。 (A1(吸光度)を求める。)
2.R-2:40μl混合、37℃で5min放置する。
546/884nmの波長で吸光度を測定する。(A2(吸光度)を求める。)
3.A1、A2を用いてΔAを求める。
ΔA=A2-A1
4.血漿成分特に、血球膜を通過しない物質に対する希釈倍率を求める。
混合前緩衝水溶液中のグリセロール3リン酸の吸光度ΔAo
混合後生体試料中のグリセロール3リン酸の吸光度ΔAs
希釈倍率=ΔAo/(ΔAo−ΔAs)
EDTA2Na:エチレンジアミン四酢酸2ナトリウム
G3P 2Na:グリセロール3リン酸2ナトリウムである。
Claims (9)
- 採取した未定料の血球を含む生体試料の成分を定量分析する方法であって、
生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過する第1の成分を指示するための第1の指示物質と生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過しない第2の成分を指示するための第2の指示物質を用意し、
所定量の第1の指示物質と第2の指示物質とを含む緩衝水溶液を調整し、
一定量の該緩衝水溶液中の前記第1の指示物質の吸光度を測定し、
前記一定量の該緩衝水溶液中の前記第2の指示物質の吸光度を測定し、
前記生体試料を前記一定量の前記緩衝水溶液に加え、
前記生体試料の血漿と前記一定量の前記緩衝水溶液との混合試料溶液中の前記第1の指示物質にかかる吸光度を測定し、
前記生体試料の血漿と前記一定量の前記緩衝水溶液との混合試料溶液中の前記第2の指示物質にかかる吸光度を測定し、
前記生体試料の血漿の前記第1の指示物質にかかる吸光度に基づき、第1の成分の希釈倍率を算出し、
前記生体試料の血漿の前記第2の指示物質にかかる吸光度に基づき、第2の成分の希釈倍率を算出し、
それぞれの希釈倍率に基づいて、前記血漿中の第1の成分および第2の成分を定量することを特徴とする方法。 - 採取した未定料の血球を含む生体試料の成分を定量分析する方法であって、
生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過する第1の成分を指示するための第1の指示物質と、生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過しない第2の成分を指示するための第2の指示物質を用意し、
所定量の第1の指示物質と第2の指示物質とを含む緩衝水溶液を調整し、
一定量の該緩衝水溶液中の前記第1の指示物質の濃度を測定し、
前記一定量の該緩衝水溶液中の前記第2の指示物質の濃度を測定し、
前記生体試料を前記一定量の前記緩衝水溶液に加え、
前記生体試料の血漿と前記一定量の前記緩衝水溶液との混合試料溶液中の前記第1の指示物質にかかる濃度を測定し、
前記生体試料の血漿と前記一定量の前記緩衝水溶液との混合試料溶液中の前記第2の指示物質にかかる濃度を測定し、
前記生体試料の血漿の前記第1の指示物質にかかる濃度に基づき、第1の成分の希釈倍率を算出し、
前記生体試料の血漿の前記第2の指示物質にかかる濃度に基づき、第2の成分の希釈倍率を算出し、
それぞれの希釈倍率に基づいて、前記血漿中の第1の成分および第2の成分を定量することを特徴とする方法。 - 前記緩衝水溶液の浸透圧がほぼ血液浸透圧となるように調製されている請求項1または2記載の方法。
- 前記第1の指示物質が血球膜を通過する物質である請求項1または2のいずれかに記載の方法。
- 前記第2の指示物質が血球膜を通過しない物質である請求項1に記載の方法。
- 血球膜を通過しない物質がイオン化合物である請求項4に記載の方法。
- 血球膜を通過する物質が小径で電荷を持たない極性の低分子である請求項3に記載の方法。
- 採取した未定料の血球を含む生体試料の成分を定量分析する方法であって、
生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過する第1の成分を指示するための第1の指示物質と、生体試料に含まれる成分であって、血球膜を通過しない第2の成分を指示するための第2の指示物質とを含む緩衝水溶液であって、浸透圧が血液とほぼ等張圧である緩衝水溶液を調整し、
採取した未知量の生体試料を一定量の前記緩衝水溶液に加え、
前記緩衝水溶液が加えられた生体試料との混合溶液を遠心分離して、前記生体試料中の血球成分を除去し、
血球成分が除去された前記混合溶液を分析し、
前記第1の指示物質に基づく生体試料の第1の希釈倍率と、前記第2の指示物質に基づく生体試料の第2の希釈倍率とをそれぞれ算出し、
血球膜を通過する生体試料の成分に対しては、前記第1の希釈倍率に基づいて生体試料中の量を算出し、
血球膜を通過しない生体試料の成分に対しては、前記第2の希釈倍率に基づいて生体試料中の量を算出することを特徴とする方法。 - 血球膜に対する浸透圧が200〜340mOsm/Lの範囲にある請求項1、2または6のいずれかに記載の緩衝水溶液。
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