JP3963301B2 - テトラヒドロイソキノリン系化合物を含有する薬学的組成物 - Google Patents
テトラヒドロイソキノリン系化合物を含有する薬学的組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3963301B2 JP3963301B2 JP2000576852A JP2000576852A JP3963301B2 JP 3963301 B2 JP3963301 B2 JP 3963301B2 JP 2000576852 A JP2000576852 A JP 2000576852A JP 2000576852 A JP2000576852 A JP 2000576852A JP 3963301 B2 JP3963301 B2 JP 3963301B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- formula
- lps
- chemical formula
- administered
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/472—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/02—Local antiseptics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、下記化学式１および化学式２で表示されるテトラヒドロイソキノリン（tetrahydroisoquinoline）系化合物の新しい用途に関するものである。
【０００２】
具体的には、これらの化合物は、強心作用、血圧降下作用の外にも血小板凝集抑制作用およびｉＮＯＳ（誘導ＮＯ合成酵素）抑制作用を示すため、化学式１の化合物である１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび化学式２の化合物である１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン中の一つ以上を有効成分に含有する薬学的組成物は、心不全症治療剤、抗血栓剤、ｉＮＯＳによる組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または播種性血管内凝固症（Disseminated intravascular coagulation； 以下“ＤＩＣ”と略称する）の治療剤に有用に使用できる。
【０００３】
【化２】
【０００４】
【発明の背景】
テトラヒドロイソキノリン（tetrahydroisoquinoline；以下“ＴＨＩ”と略称する）系化合物は、Ｎ−アルキルフェニルエチルアミンが閉環（ring closing）した状態の物質である。特に６，７−ジヒドロキシテトラヒドロイソキノリンは、化学構造にカテコールアミン（catecholamine）の基本骨格を持っている。つまり、エピネフリン（epinephrine）、ノルエピネフリン（norepinephrine）、ドーパミン（dopamine）等に代表されるカテコールアミンの基本骨格である３，４−ジヒドロキシフェニルエチルアミンを持った構造である。したがって、多くのＴＨＩ系列の化合物が各種アドレナリン受容体（adrenergic receptor）に親和力を見せ、置換基の種類および置換基の結合位置によってα−またはβ−受容体に作用して亢進効果（agonistic effect）または拮抗効果（antagonistic effect）を持つことにより、色々な薬理作用を持っているということが報告されている。
【０００５】
特に１位置の炭素にＯＨ、ＯＣＨ3、ハロゲン等に置換されたベンジル基を持ったＴＨＩ系列化合物は、気管支弛緩作用、血小板凝集抑制作用、カルシューム通路抑制作用等、強力な作用を持っているということが報告されている（King， V. F. et al.，J. Biol. Chem.，２６３，２２３８−２２４４，１９８８；Triggle，D. J. et al.，Med. Res. Rev.，９，１２３−１８０，１９８９；Lacorix，P. et al.，Eur. J. Pharmacol.，１９２，３１７−３２７，１９９１； Chang，K. C. et al.，Life. Sci.，５１，６４−７４，１９９２；Chang，K. C. et al.， Eur. J. Pharmacol.，２３８，５１−６０，１９９３）。
【０００６】
また、最近ビスベンジル−テトラヒドロイソキノリン系列化合物であるテトランドリン（tetrandrine）、イソテトランドリン（isotetrandrine）およびコンドキュリン（chondocurine）等の物質が、内毒素（endotoxin）であるリポポリサカライド（lipopolysaccharide；以下“ＬＰＳ”と略称する）によって、一酸化窒素（nitrogen monoxide；ＮＯ）が多量生成されることを強力に抑制するものが報告されたことがある（Kondo，Y. et al.，Biochem. Pharmacol.，４６，１８６１−１８６３，１９９３）。
【０００７】
一方、ハイゲナミン（Higenamine）は、１位の炭素に４−ヒドロキシベンジル基を、６及び７位置に２個のヒドロキシ基を持ったＴＨＩ系列の化合物であり、臨床で強心作用薬物に使用されているドブタミン（dobutamine）と構造的に良く似ている。この化合物は、摘出心臓で心筋収縮力及び心拍動数増加作用、血小板凝集抑制作用等の生体外（in vitro）作用、ラットまたはウサギを利用した実験で、心拍出量増加、血圧降下作用及び血小板凝集抑制作用等が報告されたことがある。ハイゲナミンは、またマウス腹腔大食細胞及びラット摘出血管でＬＰＳによる誘導ｉＮＯＳ及びＮＯが発現して、それによってＮＯが多量生成されることを低下させ、ＬＰＳによる血管反応性低下を抑制し、内毒素ショック（endotoxin shock）による死亡率を低くするということが報告されたことがある。また、関節炎モデルにおいて抗炎症作用及び鎮痛作用を持っているということが実際に観察された（Park，C. W. et al.，Arch. Int. Pharmacodyn.，２６７，２７９−２８８，１９８４；Chang，K. C. et al.，Can. J. Physiol. Pharmacol.，７２，３２７−３３４，１９９４；Yun−Choi，H. S. et al.，Yakhak Hoeju，３８，１９１−１９６，１９９４；Kang，Y. J. et al.， Kor. J. Physio.Phamacol. １，２９７−３０２，１９９７；Shin，K. H. et al.，Natural Products Sciences，２，２４−２８，１９９６）。しかし、ハイゲナミンの場合その作用持続時間が非常に短く、上記で言及した作用等を示す効果も不充分であるという短所がある。
【０００８】
本発明者達は、ハイゲナミンの構造を変化させ、優秀な薬理効果を示す物質を得ようと努力した結果、作用持続時間がとても長い新規の物質である化学式１及び化学式２の化合物を合成して、これらが強心作用及び血圧降下作用を持ったものであることを明らかにし、特許出願して特許権を獲得したことがある（大韓民国特許第１４８７５５号）。また、ハイゲナミンと同様に、ラット摘出心臓を利用した実験で化学式１及び化学式２の化合物が強力な心筋収縮力増強作用及び心拍動数増加作用を示し、フェニレフリン（phenylephrine）で収縮させた摘出血管に対して強力な弛緩作用を持ち、また、化学式１及び化学式２の化合物をウサギに投与した時に心拍動数が増加し、血圧が下降することを報告したことがある（Lee，Y. H. et al）。
【０００９】
現在、欝血性心不全症治療剤としては、デキタルリス強心配糖体とドーパミン類があるが、デキタルリス強心配糖体は、経口投与が可能な利点があるが安全域がとても狭く使用に危険性がともない、不整脈を惹起させる問題点がある。また、ドーパミンやドブタミンのような交感神経模倣薬物は、欝血性心不全症治療剤としての効果があるが、静脈注射しなければならない短所があり、交感神経系（β−adrenoceptor）のダウンレギュレーション（down regulation）等の問題点がある。
【００１０】
心不全症患者には、低下した心筋収縮力を増加させる強心作用薬物と一緒に、血管を弛緩させ心臓の過負荷を低めたり血栓生成を抑制して血管での血液の流れを円滑にすることによって、心臓の過負荷を押さえる薬物を同時に投与することによって良い治療効果を得ている。したがって、デキタルリス強心配糖体とドーパミン類薬物は、強心作用だけを持っているため、投与時に血管を弛緩させる血管弛緩剤（血圧降下剤）及び血小板凝集抑制剤を一緒に投与して治療効果を増大させられる。しかし、色々な薬物の複合的な投与によって、各薬物による薬物相互作用によって、各薬物の生体内吸収、薬物代謝等が影響を受け、副作用が発生する危険性が高まる等、使用に際して多くの制約を伴う問題点がある。
【００１１】
一方、最近ＮＯを含み、過度に多く生成された酸素遊離基（oxygen free radical）が、関節炎等の炎症性疾患や、心筋梗塞症、脳卒中または、虚血性疾患において再潅流時の組織損傷または、細菌感染による内毒素による複合的長期損傷等、各種急慢性組織／臓器損傷を起こす重要原因の一つであることが明らかにされている。したがって、ｉＮＯＳの発現を抑制したりＮＯの多量生成を抑制する物質等を確保して、ＮＯが多量生成されて発生する各種疾病の治療剤として利用することに多くの関心が集まっている。また、これらの物質を急性心筋梗塞症、虚血性心臓疾患等による心筋損傷を抑制することによって心不全症の進行を抑制したり、または治療する効果を持つものとして期待される。
【００１２】
それで、本発明者達は、上記の色々な問題点を解決するために努力して、化学式１及び化学式２の化合物が強心作用、血管弛緩作用（血圧降下作用）、血小板凝集抑制作用及びｉＮＯＳ抑制作用を複合的に同時に現すことによって、心不全症治療剤として非常に有用に使用できるだけでなく、血小板凝集抑制作用により抗血栓剤、ｉＮＯＳ発現抑制作用及びｉＮＯＳ発現によるＮＯの多量生成抑制作用による組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または破腫性血管内凝固症治療剤にも使用できることを明らかにすることによって本発明を完成した。
【００１３】
【発明の概要】
本発明の目的は、心不全症治療剤、抗血栓剤、ｉＮＯＳによる組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または、破腫性血管内凝固症治療剤に有用に使用できる化学式１の化合物及び化学式２の化合物の新しい用途を提供することである。
【００１４】
上記目的を達成するために、本発明では、強心作用、血圧降下作用、血小板凝集抑制作用およびｉＮＯＳ抑制作用を複合的に同時に示す、下記の化学式１の化合物である１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび化学式２の化合物である１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン中の一つ以上を有効成分に含有する薬学的組成物を提供する。
【００１５】
【化３】
【００１６】
【詳細な説明】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１７】
本発明では、心不全症治療剤、抗血栓剤、ｉＮＯＳによる組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または、破腫性血管内凝固症治療剤に有用に使用できるＴＨＩ系化合物である上記化学式１で表示される１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび、化学式２で表示される１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンの新しい用途を提供する。
【００１８】
上記の化学式１及び化学式２の化合物は、多くの異性質体を含んでいる。例えば化学式１及び化学式２の化合物は、トトモ異性質体（tautomers）を含む。化学式１及び化学式２の化合物は、それぞれ最小限一つの非対称炭素を含んでいるため、純粋な（Ｒ）−または（Ｓ）−異性質体、（Ｒ）−、（Ｓ）−異性質体の比率が同じでない混合物または、ラセミ体で存在するようになる。
【００１９】
このような全ての異性質体とそれらの混合体は、本発明の範囲内に含まれる。また、本発明では、化学式１及び化学式２の化合物の薬剤学的に許容可能な塩及びこららのプロドラッグ（prodrug）を含む。
【００２０】
ここで、化学式１または化学式２の塩は、薬剤学的に使用される通常の塩を意味し、塩の製造に使用される各種酸としては、塩酸、臭酸、硫酸、メタンスルホン酸、プロピオン酸、コハク酸、グルタール酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、グルタミン酸、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、アスコルビン酸、炭酸、ホスホン酸、硝酸、酢酸、L−アスパラギン酸、乳酸、バニリン酸及びヒドロヨウ素酸等がある。
【００２１】
前述したように、本発明では化学式１または化学式２の化合物のプロドラッグを含むが、一般的にこのようなプロドラッグというのは、化学式１または化学式２の化合物の作用性誘導体であり、生体に入って薬効を現すためにたやすく変化できなければならない。適当なプロドッグ誘導体の選択及び製法に対する通常的科程は、既存の文献に記述されている（Design of Prodrug，ed. H. Bundgaard，１９８５）。
【００２２】
化学式１の化合物である１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび化学式２の化合物である１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンは、強心作用、血圧降下作用、血小板凝集抑制作用及びｉＮＯＳ抑制作用を複合的に同時に現すため、これらの中の一つ以上を有効成分に含有する薬学的組成物は、心不全症予防または治療剤にとても有用に使用できる
現在、心不全症を治療するために臨床では、低下した心筋収縮力を向上させ、心臓に負担を減らすために強心配糖体のデキタルリス製剤、血管拡張剤、カルシューム拮抗剤、アンジオテンシン転換酵素（angiotensin converting enzyme；ACE）抑制剤等を単独または併用療法に使用している。これは、血管拡張で循環機能を向上させ強心作用を現す目的にこれらの薬物を併用投与し、いわゆる血力学的（hemodynamic）好転を期待するからである。一方、本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、強心作用と血管弛緩作用を同時に現せる強心−弛緩剤（inodilator）という点で、二つの要件を全て充足している。
【００２３】
また、心不全症は、動脈硬化症、高血圧等の循環器系疾患が長期間持続して心臓に負担を加重する時または、血栓による冠状動脈疾患や心筋梗塞症等の虚血性心臓疾患等によって症状がひどくなるが、このような心臓病危険因子が高い人達は、各種心臓、循環器系疾患の進行防止、再発防止または、予防を目的に血小板凝集抑制剤の持続的な投与が積極勧奨されている。したがって本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、血小板凝集を抑制することによって抗血栓作用を持ち、心不全症治療剤としてのもう一つの要件を充足する。また、慢性心不全症患者達は、免疫活性が増加しており、腸、血管等にｉＮＯＳの発現が増加すれば、その時、ＮＯが多量生成され心筋の収縮力を抑制して組織にも損傷を与えるようになるが、本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、ｉＮＯＳの発現を抑制してＮＯ生成を抑制する作用も持っており、酸素遊離基による組織損傷を抑制して、慢性心不全症患者の心筋収縮力低下の原因物質中の一つのＮＯの発生を減らせる長所もある。つまり、本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、上記多様な作用を同時に複合的に現すので画期的な心不全症治療剤として使用できる。
【００２４】
上記の心不全症治療剤は、急性心筋梗塞による心筋収縮機能低下、慢性炎症等の免疫活性増加による心筋収縮機能低下、虚血性心臓疾患による心筋収縮機能低下または持続的な高血圧、動脈硬化、冠状動脈疾患等による欝血性心不全による心筋収縮機能低下を原因とする心不全症の進行を抑制したり治療するものである。
【００２５】
また、本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、血小板凝集抑制作用による抗血栓作用及びｉＮＯＳ抑制作用を示し、これらの中の一つ以上を有効成分に含有する薬学的組成物は、抗血栓剤、組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または破腫性血管内凝固症等の治療剤として有用に使用できる。
【００２６】
上記の抗血栓剤は、血栓によって誘導される虚血性脳血管障害、冠状動脈疾患、虚血性心筋梗塞、慢性動脈閉塞症、手術後の血栓または塞栓における血栓の生成を予防したり、その進行を抑制したり治療するものである。
【００２７】
また、ｉＮＯＳによる組織損傷抑制剤は、組織または臓器損傷による関節炎等の炎症性疾患、動脈硬化症、心筋梗塞、脳卒中を含む虚血及び再潅流による組織損傷を予防したり、その進行を抑制したり治療するものである。
【００２８】
また、敗血症治療剤は、破腫性血管内凝固及び複合的臓器損傷による敗血症を治療するものである。
【００２９】
また、破腫性血管内凝固症治療剤は、急激な血液凝固過程の活性化による血小板数の急激な減少、出血、ショック、血栓、血管閉塞によって起る症状を治療するものである。
【００３０】
本発明の薬学的組成物は、経口、静脈、非経口または、直腸投与が可能で、注射剤、カプセル、錠剤、糖衣錠、座薬、顆粒、溶液、懸濁液、乳剤、座剤等の投与形態が可能である。
【００３１】
薬学的組成物は、本発明の化合物を有効成分にして有機や無機、固体、半固体または、液体賦形剤のような薬学的に許容される担体と混合して使用することもできる。必要なら、補助物質、安定剤、湿潤または乳化剤、緩衝液、その他通常的に使われる附加剤等がこれら薬学的組成物に含まれ得る。
【００３２】
本発明では、実験を通じて本発明の化合物は、経口投与した場合にも相当な時間、血中濃度が維持されることを明らかにし、これにより本発明の化合物の投与用量は、注射剤の場合は、０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ、経口投与剤の場合は、２〜２００ｍｇ／ｋｇである。
【００３３】
本発明の化合物をマウスに経口投与時及び腹腔内投与時の毒性実験を行なった結果、経口毒性試験による５０％致死量（ＬＤ50）は、少なくても１０００ｍｇ／ｋｇ以上であることが分かった。また、腹腔内毒性試験結果、化学式１の１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンの場合ＬＤ50値は、２９０．０ｍｇ／ｋｇ、９５％信頼限界は、２３５．１〜３５９．９ｍｇ／ｋｇであった。化学式２の１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンの場合ＬＤ50値は、４３８．６ｍｇ／ｋｇ、９５％信頼限界は、３５０．９〜５４８．２ｍｇ／ｋｇだった。
【００３４】
本発明では、化学式１の１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン及び化学式２の１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンが前述したように多様な作用を複合的に現すことを確認し、類似の作用をすると思われるハイゲナミンとその効果を比較するために多様な実験を行なった。その結果、上記の化学式１及び化学式２の化合物が血小板凝集抑制作用を持っており、特に、アデノシンジホスファート（adenosine diphosphate；以下“ＡＤＰ”と略称する）やコラーゲン（collagen）による血小板凝集抑制作用よりエピネフリンによる血小板凝集を強く抑制した。また、アドレナリンα−受容体に親和力を持っている。したがって、これらの物質はα−受容体抑制作用を通じて血管を弛緩させ血小板凝集を抑制するものであると考えられる。
【００３５】
また、化学式１及び化学式２の化合物は、内毒素によるｉＮＯＳの発現を抑制しＮＯの生成を抑制する。特に濃度依存的な抑制効果を現す。したがって、過量のＮＯ生成による臓器損傷を抑制することによって、関節炎を含む各種炎症性疾患、脳卒中、心筋梗塞症等を含む各種虚血性疾患及び再潅流による組織損傷等の予防、進行抑制及び治療剤としてまた、その他の急激な複合組織損傷の症状を持つ敗血症または破腫性血管内凝固症等の疾病の治療に、本発明の化合物を応用できる。
【００３６】
化学式１及び化学式２の化合物は、生体内（in vivo）実験においても急性血栓生成によるマウスの死亡率を顕著に低くし、動脈−静脈短絡（arterio−venous shunt；以下“Ａ−Ｖ短絡”と略称する）用チューブ（ＡＶＳチューブ）内に生成する血栓の生成を抑制する等の優秀な抗血栓作用を現した。
【００３７】
一方、ＬＰＳ等の内毒素に対しては、色々な破腫性血管内凝固症が誘発される。これら破腫性血管内凝固症（ＤＩＣ）に対する指標としては、血中血小板数の減少、フィブリノゲン（fibrinogen）の濃度減少及びフィブリン／フィブリノゲン分解産物（fibrin／fibrinogen degradation products；FDP）の濃度増加、プロトロンビン時間（prothrombin time；ＰＴ）及び活性化部分トロンボプラスチン時間（activated partial thromboplastin time；ａＰＴＴ）の延長等をあげられる。本発明の化合物は、ＬＰＳによって血中血小板数とフィブリノゲンの濃度が減少することを抑制し、フィブリン／フィブリノゲン分解産物の濃度が増加することを抑制し、プロトロンビン時間（prothrombin time；ＰＴ）及び活性化部分トロンボプラスチン時間が延長するのを抑制してその時間を短縮させる等、ＬＰＳによって誘導される破腫性血管内凝固症の各種指標を改善した。一方、内毒素によってＳ−ＧＯＴ（serum glutamic−oxaloacetic transaminase）、Ｓ−ＧＰＴ（serum glutamic−pyruvic transaminase）及びＢＵＮ（blood urea nitrogen）が増加することが知られているが、本発明の化合物は、ＬＰＳによってＳ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮが増加することを低下させる等、ＬＰＳによって誘導される多発性組織損傷（multiple organ failure； ＭＯＦ）症状の各種指標を改善した。さらに本発明の化合物は、ＬＰＳによる死亡率も顕著に低くめるので内毒素によるショックから保護する効果があることが分かった。
【００３８】
以下、本発明を実験例をもとに詳細に説明する。ただし、下記の実験例は、本発明を例示するだけのものであって、本発明がこれによって限定されるものではない。
【００３９】
＜実験例１＞血小板凝集を抑制する効果
ソウル大学病院血液銀行から購入した人の血小板濃縮液を血小板測定器（Platelet Analyzer，PLT−４，Texas Instruments）を使用して、血小板数を測定し、燐酸緩衝食塩水（phosphate buffered saline；以下“ＰＢＳ”と略称する）で稀釈して、血小板の数を３００〜４００×１０6／ｍｌに調整して、血小板豊富血漿（Platelet Rich Plasma；以下“ＰＲＰ”と略称する）を製造し、これを実験に使用した。ＰＲＰを３７℃で３分間培養後血小板凝集誘導物質としてアデノシンジホスファート（ＡＤＰ）、コラーゲンまたは、エピネフリンを加えた後、血小板凝集測定器（Platelet Aggregometer，Chrono−Log Corp.米国，５００VS）を使用して血小板凝集による混濁度（turbidity）の変化で凝集度を測定した。
【００４０】
試験物質による凝集抑制程度は、下記の数学式１１によって抑制率を算出した。
【００４１】
抑制％（％Inhibition）=（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
Ａ：凝集誘導物質による血小板凝集度
Ｂ：凝集誘導物質と試料を同時に加えた時の血小板凝集度
人の血小板を使用して測定した化学式１の化合物及び化学式２の化合物の凝集抑制効果を表１に示した。一方、化学式１の化合物及び化学式２の化合物と化学構造が類似し、抗血小板凝集及び抗血栓作用を持っているとして知られているハイゲナミンを比較物質に用いた。
【００４２】
【表１】
【００４３】
その結果、ハイゲナミンは、ＩＣ50が、＞１×１０-3Ｍで、ＡＤＰによる血小板凝集に対して抑制作用がない反面、化学式１の化合物及び化学式２の化合物は、ＩＣ50が７．３×１０-4〜８．６×１０-4Ｍであり、弱いけれども抑制作用がみられた。コラーゲンによる血小板凝集に対しては、化学式１の化合物は、ＩＣ50が９．２×１０-5Ｍで、ハイゲナミンと同じ程度の抑制作用を示したが、化学式２の化合物は、ハイゲナミンまたは化学式１の化合物に対して、約１０倍の血小板凝集抑制作用を示した。エピネフリンによる血小板凝集に対しては、化学式１の化合物及び化学式２の化合物のＩＣ50値が各各３．４×１０-6Ｍ及び６．０×１０-6Ｍであり、ハイゲナミン（ＩＣ50 １９×１０-6Ｍ）より強力にエピネフリンによる血小板凝集を抑制した。このように、化学式１の化合物及び化学式２の化合物は、ＡＤＰまたはエピネフリンにより誘導される血小板凝集に対してハイゲナミンより強力な抑制作用を示し、コラーゲンによる血小板凝集に対してもハイゲナミンと類似またはさらに強力な抑制作用を示した。
【００４４】
＜実験例２＞α−受容体結合抑制作用
試験物質等がアドレナリンα−受容体（α−adrenoceptor）に競争的に結合することによって上記のような血小板凝集抑制作用を持ったり、すでに報告されたように血管弛緩作用を持っているかどうか検討すために、α−受容体が豊富なラットの大脳皮質膜（cerebral cortical membrane）を準備してα−受容体結合抑制作用を調査した。
【００４５】
まず、ラット（Sprague−Dawley；２５０±２０g，特別な言及がない限り、以下全ての実験で同種類のラットを使用する）脳組織（cerebral cortex）を２０倍の緩衝溶液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，５ｍＭ ＭｇＳＯ4，１ｍＭ ＥＤＴＡ，１ｍＭ アスコルビン酸（ascorbic acid），ｐＨ７．７）と均一に混合後３５，０００×ｇで１５分間３回遠心分離して沈澱物を得て−７０℃で保管した。上記の沈澱物５ｍｇを上記の緩衝溶液１ｍｌに溶かして、[3Ｈ]プラゾシン（[3Ｈ]prazosin；２００ｐＭ）と試験試料を２５℃で３０分間培養後、１０ｍｌの緩衝溶液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．７）を加えて反応を中断させた。これをワットマン（Whatman）ＧＦ／Ｃガラス微細繊維（glass microfiber）濾過紙を使用して濾過した。濾過紙は、シンチレーション反応溶液（scintillation cocktail）に入れ、２時間揺らした後、シンチレーションカウンター（Scintillation Counter，Beckman，ＬＳ６５００）で放射能（radioactivity）を測定した。
【００４６】
【表２】
【００４７】
プラゾシンの結合反応を行ない１３３．５±８．９１ｐＭのＫｄ値と１５．１５±０．６４ｆｍｏｌ／ｍｇのＢｍａｘを得た。試験物質の解離常数（Ｋｉ）は、０．１５〜１．２６μＭを示し、α−受容体に対する親和力があることを確認できた。（表２参照）。また、これらの解離常数は、フェニルエプリンで収縮したラット血管で現れたＩＣ50値（１．０２〜２．８１μＭ）及びエピネプリンによる血小板凝集抑制値（ＩＣ50；３．４〜１９μＭ）と類似している。本発明の化合物がα−受容体を遮断して血管を弛緩させ、血小板凝集を抑制するということが分かった。
【００４８】
＜実験例３＞ラット摘出血管で、ＬＰＳに対するｉＮＯＳ ｍＲＮＡ発現を抑制する効果
ペントバルビタールナトリウム（Pentobarbital sodium）５０ｍｇ／ｋｇでラットを麻酔して大動脈を摘出し、内皮細胞を除去した。これを３７℃でＬＰＳ３００ｎｇ／ｍｌを含んだクレブス（Krebs） 溶液で８時間培養した後、全体ＲＮＡをトリゾール（TRIZOL）溶液（GibcoBRL；Life Technologies社）を利用して抽出した。全体RNAは、紫外線分光光度計（Shimadzu，ＵＶ−１２０１）で定量し、ホルムアミド−ホルムアルデヒドアガロースゲル（formamide−formaldehyde agarose gel）で電気泳動した後、ナイロン膜（nylon membrane）に移した。以後、ｉＮＯＳ（誘導ＮＯ合成酵素）のｃＤＮＡを探り針（probe）にしてハイブリダイゼーション（hybridization）することによってｉＮＯＳのｍＲＮＡが発現する量を観察した。この時、ｉＮＯＳのｃＤＮＡは、ランダムプライマー（random−primer）方法によって32Ｐ−ｄＣＴＰで標識（label）をつけ使用した。ナイロン膜をＸ線フィルムに感光させ感光の大きさをＧＡＰＤＨ（Glyceraldehyde−３−phosphate dehydrogenase）が発現したものと比較しｍＲＮＡが発現した量を定量化した。
【００４９】
血管を生体外（in vitro）でＬＰＳと一緒に培養するとｉＮＯＳ ｍＲＮＡ発現が多量に誘導される。化学式１の化合物を入れて一緒に培養した場合は、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現が抑制される。つまり、ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）投与群では、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡが強く発現したが、化学式１の化合物１０μＭまたは３０μＭと一緒に培養した時は、用量依存的にＬＰＳによるｉＮＯＳ ｍＲＮＡ発現が抑制された（図１参照）。
【００５０】
ノーザンブロットでレーン３、４及び５は、お互いに異なる濃度（１０μＭ、３０μＭ、及び１００μＭ）で、化学式１の化合物存在下でｉＮＯＳ ｍＲＮＡ発現を示した、レーン１及び２は、対象群のＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）が単独の場合を示している。図１によると、上記のｉＮＯＳ ｍＲＮＡは、ＬＰＳ処理されたグループ（レーン２）で強く発現したが、化学式１の化合物は、濃度依存的（レーン３、４及び５）に、ＬＰＳに誘導されたｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を抑制した。
【００５１】
＜実験例４＞大食細胞でＬＰＳとＩＦＮ−ΥによるｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を抑制する効果
熱処理した１０％牛胎児血清（fetal calf serum）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン（penicillin）及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン（streptomycin）を入れたＤＭＥＭ培地で、大食細胞（ＲＡＷ２６４．７ｃｅｌｌ）を充分に成長するように（confluent）ＣＯ2インキュベータで培養した。培養した細胞は、血清が無い（serum−free）ＤＭＥＭ培地に移し２４時間さらに培養後、ＬＰＳ１００ｎｇ／ｍｌ、インターフェロン−Υ（interferon−Υ；以下“ＩＦＮ−Υ”と略称する）１０Ｕ／ｍｌ及び化学式２の化合物（０μＭ，１μＭ，１０μＭ及び１００μＭ）存在下で１８時間培養して全体ＲＮＡをトリゾール溶液を利用して抽出した。全体ＲＮＡは、分光光度計で定量してホルムアミド−ホルムアルデヒドアガロースゲルで電気泳動した後、ナイロン膜に移した。以後、ｉＮＯＳのｃＤＮＡを探り針にしてハイブリダイゼーションすることによりＮＯ合成酵素のｍＲＮＡが発現する量を観察した。この時、ｉＮＯＳのｃＤＮＡは、ランダムプライマ方法によって32Ｐ−ｄＣＴＰで標識をつけて使用した。ナイロン膜をＸ線フィルムに感光させ、感光の大きさをＧＡＤＰＨが発現したものと比較してｍＲＮＡが発現した量を定量した。
【００５２】
図２のノーザンブロットで大食細胞をＬＰＳ及びＩＦＮ−γ及び／または化学式２の化合物と培養後、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を示した。ノーザンブロットでレーン１、２は対象群（細胞単独）及びＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）及びＩＦＮ−γ存在下でなされ、レーン３、４及び５は、お互いに異なる濃度（１０μＭ、３０μＭ、及び１００μＭ）で、化学式２の化合物存在下でｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現が抑制されていることを示している。図２によると、大食細胞が、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）及びＩＦＮ−Υ（１０Ｕ／ｍｌ）で１８時間培養した時、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡが発現した。したがって、化学式２の化合物は、濃度依存的（レーン３、４及び５）に、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を抑制した。
【００５３】
＜実験例５＞大食細胞でＬＰＳとＩＦＮ−γによるＮＯの生成を抑制する効果
熱処理した１０％牛胎児血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリン及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを入れたＤＭＥＭ培地に大食細胞（ＲＡＷ２６４．７ｃｅｌｌ）を入れてＣＯ2インキュベータで充分に成長するように培養した。培養した細胞は、血清が無いDMEM培地に移し２４時間さらに培養後、ＬＰＳ１００ｎｇ／ｍｌ、ＩＦＮ−Υ１０Ｕ／ｍｌ及び化学式１または化学式２の化合物（０μＭ，１μＭ，１０μＭ及び１００μＭ）存在下で１８時間継続培養した。この時、生成されたＮＯは、ＮＯ酸化物であるアジル酸塩（nitrite）の量で間接測定した。アジル酸塩は、グリース試薬（Griess reagent）[０．１％naphthylethylenediamine dihydrochloride，１％sulphanilamide，５％燐酸溶液で呈色させた後、５５０nmでの吸光度を分光光度計で測定して、その量を定量した。アジル酸塩の量は、ＮａＮＯ2を標準にして計算して、その結果を表３に示した．
【００５４】
【表３】
【００５５】
表３に示したように、大食細胞を内毒素と一緒に培養した時多量のアジル酸塩が検出されＮＯが大量生産されたことが分かった．つまり、内毒素及びＩＦＮ−γを加えていない対照群の場合、８μＭのアジル酸塩が検出されたがＬＰＳとＩＦＮ−γを加えた培養液では５７μＭのアジル酸塩が検出された。ＬＰＳ、ＩＦＮ−γと一緒に化学式１及び化学式２の化合物を各々１μＭずつ培養液に加えた場合、培養液のアジル酸塩の濃度は、各々３０μＭ、３４μＭであり、ＬＰＳとＩＦＮ−γだけを加えた場合よりアジル酸塩の濃度が減少した。また、化学式１及び化学式２の化合物の添加量が増加すればするほどアジル酸塩の濃度が低く検出され、本発明による化学式１及び化学式２の化合物が内毒素によるＮＯ生成を濃度依存的に強力に抑制することが分かった。
【００５６】
＜実験例６＞急性血栓生成によるマウス死亡を抑制する効果
マウス（ＩＣＲ；２０±２０g，以下全ての実験で同じ種類のマウスを使用する）の尾の静脈にコラーゲン（３００μｇ／ｋｇ）とエピネフリン（３０μｇ／ｋｇ）の混合溶液を注射して短い時間内に肺動脈に大量の血栓が形成されるように誘導することによって、混合溶液注射後１〜３分が経過すれば全身麻痺が起こり大多数が１５分以内に死亡する急性血栓モデルを誘導した。試料物質は、１日間または３日間経口投与し、最後に経口投与してから１時間経過後にコラーゲンとエピネフリンの混合溶液を注射した。以後、死亡率が減少する程度、麻痺した状態から回復する程度を観察した。その結果を表４及び表５に示した。
【００５７】
【表４】
【００５８】
１５分以内に血栓生成による麻痺状態から回復したマウス数の比較。各々の試料は、１回経口投与した。
【００５９】
【表５】
【００６０】
１５分以内に血栓生成による麻痺状態から回復したマウスは数の比較。各々の試料は、３日間経口投与した。
【００６１】
マウスにコラーゲンとエピネフリン混合溶液を静脈注射すれば、短時間に肺動脈内に多量の血栓が生成され閉塞することによって、注射後１分以内に大部分が全身麻痺し動けなくなり、瞳孔が開き呼吸困難と痙攣が後に続き、５分以内に約７０〜８０％のマウスが死亡し、残りも１５分以内に大部分死亡したり１５分以上麻痺が持続する。表４と表５から分かるように、試験物質を投与せずにコラーゲンとエピネフリン混合溶液だけを投与した対照群のマウスは、１５分以内に１７〜２０％だけが麻痺から回復して自由に動いた。陽性対照薬物に使用したアスピリンやハイゲナミンの場合５０ｍｇ／ｋｇを１回経口投与した時は、各々５２％、３７％の回復率を示したが、ハイゲナミンを１００ｍｇ／ｋｇ投与した時は、４８％の回復率を示した。本発明の化合物である化学式１の化合物及び化学式２の化合物を５０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇずつ１回投与した場合は、約５０％の回復率を示し、アスピリンの場合と類似している。また、化学式１の化合物は、５０ｍｇ／ｋｇずつ３日間連続投与しても回復率は、特別に上昇しなかったが、化学式２の化合物は、１０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇずつ３日間連続投与した時は、回復率が６４〜７０％に増加した。
【００６２】
＜実験例７＞ラット動脈−静脈短絡（arterio−venous shunt； A−V shunt）内の血栓形成を阻害する効果
Ａ−Ｖ短絡用チューブ（ＡＶＳチューブ）を次のように準備した。頭皮静脈短絡（Scalp vein set）の一方の端を切って１８ｃｍの長さになるようにした後、両方の端に１８G注射針を連結した。そして、チューブの中央には１００％綿糸５cmを固定した。ラットは、ケタミン（ketamine；２５０ｍｇ／ｋｇ）を注射（i.m.）して麻酔し、腹部を切開した後、上記で準備したＡＶＳチューブに生理食塩水を満たし、一方の針は腹部大動脈にもう一方は腎静脈に挿入して血液が流れるようにして綿糸に血栓が生成するようにした。１５分経過後チューブから糸を取り出しその重さを計って生成された血栓の量を重さの変化で測定した。試験物質の経口投与による血栓形成阻害効果を観察してその結果を表６及び表７に示した。
【００６３】
【表６】
【００６４】
【表７】
【００６５】
生成された血栓重さは、実験当日の気候（気圧、湿度等）によって相当な差がみられた。抗血栓作用薬物であるアスピリン５０ｍｇ／ｋｇ投与したアスピリン投与群と比較実験を行なった。試験物質を投与しなかった対照群の場合３３〜４２mgの血栓が生成された。陽性対照薬物であるアスピリンを５０ｍｇ／ｋｇ１回投与した時は、３６〜４０％の血栓形成抑制を示した。ハイゲナミンを２５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇ１回投与した時は、２５〜３１％の血栓抑制効果があった。一方、化学式１の化合物及び化学式２の化合物は、２５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇずつ１回投与した場合２４〜３９％の血栓抑制効果を示した。故に、本発明の化合物がハイゲナミンと類似かまたはさらに強い血栓形成阻害効果があることが分かった。
【００６６】
試験物質を３日間連続投与した場合において、アスピリンを５０ｍｇ／ｋｇずつ３回投与した実験群では、血栓抑制効果が１２％で、弱かった。実験当日の気候条件によって対照群Ａ−Ｖ短絡内に平均より多い量の血栓が生成された場合、試料薬物による血栓形成抑制効果は、相対的に低く、したがって同一実験期間での陽性対照群（本実験の場合アスピリン投与群）との相対的比較が必須的であった。
【００６７】
ハイゲナミンを１０ｍｇまたは５０ｍｇずつ３日間連続投与した時は、１３〜１８％の血栓抑制作用を示し、アスピリン投与群と類似であった。しかし、化学式１の化合物及び化学式２の化合物を１０ｍｇ／ｋｇずつ３日間投与した場合は、約２４％、５０ｍｇ／ｋｇずつ投与した場合は、約２８％の血栓形成抑制作用を示し、アスピリンまたはハイゲナミン投与群と比較してみると血栓形成抑制作用が向上されたことが分かった。
【００６８】
＜実験例８＞細菌性内毒素（Bacterial endotoxin； ＬＰＳ）によるＤＩＣ及びＭＯＦ誘発ラットにおける各種指標を改善する効果
ケタミン（Ketamin）（２５０ｍｇ／ｋｇ）を注射（i.m.）してラット（２５０±５０g）を麻酔して、３０分後からＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を尾の静脈に３時間にわたって注入（infusion）した。その後、大動脈から血液を採取し下記のような血小板数、プロトロンビン時間、ａＰＰＴ時間、フィブリノーゲン、フィブリン／フィブリノーゲン分解産物、Ｓ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮの濃度を測定した。試験物質は、２日間経口投与し、二回目の投与をしてから１時間経過後に実験を始めた。
【００６９】
まず、抗凝固剤としては、ナトリウムシトラート（sodium citrate）を使用した。血小板測定器を利用して血液の血小板数を測定した。一方、抗凝固血液を１，５００×ｇで１０分間遠心分離した後、血漿を得て下記の実験に使用した。
【００７０】
プロトロンビン時間は、上記で得た血漿１００ＵＬを３７℃で３分間培養した後、３７℃で前もって５分間培養したトロンボプラスチン試薬（Thromboplastin reagent，Sigma社，米国）５０ＵＬを加えて、フィブロメータ（Fibrometer，Becton Dickinson Co.，カナダ）を利用して血栓形成時間（clotting time）を測定して求めた。活性化した部分トロンボプラスチン時間は、上記の血漿１００ＵＬを３７℃で３分間培養後、３７℃で１分間前もって培養した活性化した部分トロンボプラスチン時間試薬（Activated Partial Thromboplastin Time Reagent，Sigma社，米国）１００ＵＬと３７℃で前もって加温した０．０２Ｍ ＣａＣｌ2 １００ＵＬを添加してフィブロメータを利用して血栓形成時間を測定して求めた。
【００７１】
フィブリノーゲンの濃度は、上記の血漿２０ＵＬに緩衝溶液（buffer）１８０ＵＬを加え２分間３７℃で培養後、トロンビン試薬（thrombin reagent， Sigma社，米国）１００ＵＬを添加して血栓形成時間を測定した。フィブリノーゲン基準試薬（fibrinogen reference）を使用して前もって描いておいた補正曲線（calibration curve）を利用して求めた。
【００７２】
また、フィブリン／フィブリノーゲン分解産物の濃度はトロンボ−ウェルコテストキット（Murex Biotech Limit，英国）を使用して下記のような方法によって求めた。まず、血液（non−citrated）を豆トリプシン抑制剤（soybean trypsin inhibitor）と蛇毒（Bothrops Atrox venom）とよく混ぜて凝固させた後１，５００×ｇで１０分間２回遠心分離して血清を得た。グリシン塩水緩衝溶液（Glycine saline buffer）で稀釈して実験した。このようにして得た稀釈血清５０ＵＬをスライドガラス（slide glass）にのせ、ラテックス懸濁液（latex suspension）を一滴添加してよく混ぜ一様にのばして、２分間シェーカー（shaker）で振った後、凝集の可否を観察した。FDPの濃度は、半定量的（semiquantitative）に決定した。つまり、１：０稀釈時には（−）０μｇ／ｍｌ、（＋）１μｇ／ｍｌ、（＋＋）２μｇ／ｍｌ；１：１稀釈時には、（＋）３μｇ／ｍｌ、（＋＋）４μｇ／ｍｌ；１：２稀釈時には、（＋）５μｇ／ｍｌ，（＋＋）６μｇ／ｍｌ等で判定した。
【００７３】
Ｓ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮの濃度は、医療法人緑十字医療財団（Green Cross Reference Lab.）に依頼して診断キット（diagnostic kits， Boehringer Mannheim社）等と自動生化学分析器（Automatic Biochemical Analyzer，Hitachi ７４７）を利用して測定した。Ｓ−ＧＯＴ測定には、ＡＳＴキット、Ｓ−ＧＰＴ測定には、ＡＬＴキット、ＢＵＮ測定には、尿素キットを各々使用した。
【００７４】
ＬＰＳを長期間にわたって注入し実験動物に敗血性ショック（septic shock）を惹起させた時、現れるＤＩＣ及びＭＯＦ症状の各種指標は、化学式１または化学式２の化合物の経口投与によって改善された。つまり、ＬＰＳだけを投与した対照群の場合血液内の血小板数とフィブリノーゲン濃度が急激に減少した。プロトロンビン時間と活性化した部分トロンボプラスチン時間が延長され、血液内のフィブリン／フィブリノゲン分解産物の濃度が急激に増加した。また、肝臓や腎臓機能が低下することによってＳ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ、ＢＵＮ等の数値が高くなった。このようなＤＩＣ及びＭＯＦ症状の各種指標が化学式１または化学式２の化合物を経口投与した時に改善されることを確認できた。
【００７５】
具体的にハイゲナミン、化学式１または化学式２の化合物を経口投与した後、ＬＰＳ２０ｍｇ／ｋｇをラットに３時間にわたって投与し、ＤＩＣ及びＭＯＦ状態を誘導した時、ＬＰＳだけを投与した対照群と比較してＤＩＣ及びＭＯＦ症状の指標が改善されるかどうか観察した。
【００７６】
ＬＰＳだけを投与した対照群では、血小板数が２９６×１０３／ＵＬで、正常群の７４７×１０３／ＵＬより半分以下に顕著に減少した（図３参照）。プロトロンビン時間及び活性化した部分トロンボプラスチン時間は、各々１９秒及び３３秒で、正常群の１４秒及び２０秒より約５０％増加した（図４及び図５参照）。一方、対照群でフィブリノゲンは、１０４ｍｇ／ｍｌ、フィブリン／フィブリノゲン分解産物は、１６８ｕｇ／ｍｌである反面、正常群では各々２０２ｍｇ／ｍｌと１ｕｇ／ｍｌだった。フィブリノゲンの場合、対照群では、正常群に比べて約半分に減少した反面、フィブリン／フィブリノゲン分解産物は、急激な増加を示し、ＤＩＣ症状が相当に進展したことを示唆した（図６及び図７参照）。また、Ｓ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮの濃度が各々２３１．０Ｕ／ｌ、６０．８Ｕ／ｌ及び２５．６ｍｇ／ｄｌで、正常群の１６７Ｕ／ｌ、４９．３Ｕ／ｌ及び１５．０ｍｇ／ｄｌに比べて増加した。ＭＯＦ症状もまた進展したことが分かった。
【００７７】
しかし、ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を各々１０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇを経口投与した後、ＬＰＳを注入した時、ＬＰＳだけを投与した対照群に比べて血小板数が増加した。プロトロンビン時間及び活性化した部分トロンボプラスチン時間が短くなり、フィブリノゲン濃度が増加し、フィブリン／フィブリノゲン分解産物の濃度が減少した（図３〜図７参照）。したがって、これらの物質がＤＩＣ症状を改善する効果があることを確認できた。また、ＬＰＳだけを投与した対照群に比べてＳ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮ濃度も減少した（図８〜図１０参照）。以上のことから、本発明の化合物がＬＰＳによる肝臓または腎臓の損傷等のＭＯＦ症状もまた、軽減させられるということを確認できた。
【００７８】
＜実験例９＞細菌性内毒素（Bacterial endotoxin；ＬＰＳ）による死亡を抑制する効果
多量のＬＰＳを動物に注射すれば播種性血管内凝固症の各種症状が表出し大部分短い時間内に敗血性ショックにより死亡する。本実験では、ＬＰＳ２０ｍｇ／ｋｇをマウス腹腔内に注射して４８時間生存したマウスの頭数を数えた。試験物質投与によって生存率が増加するかどうかを観察した。
【００７９】
マウスにＬＰＳ２０ｍｇ／ｋｇを腹腔内（i.p.）に注射してから４８時間の間、毎６時間ごとに生存するマウスの数を数えた。また、試験物質は、ＬＰＳを注射する３０分前に腹腔内に注射し、これら試験物質によるマウスの死亡抑制効果を観察した。
【００８０】
ＬＰＳだけを投与した場合、４８時間後の生存率は約２０％だった。ＬＰＳを投与する前、化学式１の化合物（図１１a参照）または、化学式２の化合物（図１１b参照）を各々２０ｍｇ／ｋｇずつ投与した場合、３０時間までは死亡するマウスがなかったが、４８時間が過ぎた後でも９０％以上のマウスが生存した。ハイゲナミンと化学式２の化合物は１０ｍｇ／ｋｇ投与した場合、４８時間後の生存率が８０％以上であった。化学式１の化合物は、１０ｍｇ／ｋｇ投与した場合、４８時間後の生存率が約６０％で、ハイゲナミンや化学式２の化合物よりは生存率が低いが、対照群よりは、生存率が高かった。したがって、化学式１の化合物または化学式２の化合物は、ＬＰＳによるショックを保護する効果があることが分かった。
【００８１】
【発明の効果】
以上、詳しく見てきたように、化学式１及び化学式２の化合物は、本発明者達によって、すでに明らかにされた強心作用及び血圧降下作用とともに血小板凝集抑制作用及びｉＮＯＳ抑制作用を同時に複合的に現し、心不全症治療剤として有用に使用できる。また、これらの化合物は、血小板凝集抑制作用（抗血栓作用）によって抗血栓剤に使用できる。ｉＮＯＳ発現抑制作用及びそれによるＮＯ生成抑制作用によって組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または播種性血管内凝固症治療剤として有用に使用できる。さらに、本発明の化合物を含む薬学的組成物は、安全領域が広く作用持続時間が長いという長所も持っている。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ラットの摘出血管でリポポリサカライド（ＬＰＳ）による、誘導ＮＯ合成酵素（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡの発現を化学式１の化合物が抑制することを示した、ノーザンブロット（Northern blotting）結果である。
レーン１：対照群
レーン２：ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）
レーン３：ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）＋化学式１の化合物（１０μＭ）
レーン４：ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）＋化学式１の化合物（３０μＭ）
レーン５：ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）＋化学式１の化合物（１００μＭ）
【図２】 大食細胞（ＲＡＷ２６４．７cell）でＬＰＳとインターフェロン−Υ（ＩＦＮ−Υ）によるｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を化学式２の化合物が抑制することを示した、ノーザンブロット結果である。
レーン１：対照群
レーン２：ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＦＮ−γ（１０Ｕ／ｍｌ）
レーン３：ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＦＮ−γ（１０Ｕ／ｍｌ）＋化学式２の化合物（１μＭ）
レーン４：ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＦＮ−γ（１０Ｕ／ｍｌ）＋化学式２の化合物（１０μＭ）
レーン５：ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＦＮ−γ（１０Ｕ／ｍｌ）＋化学式２の化合物（１００μＭ）
【図３】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇを３時間にわたってラットに投与した時、血中血小板数の変化を示したものである。
【図４】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、プロトロンビン時間（ＰＴ）の変化を示したものである。
【図５】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇを３時間にわたってラットに投与した時、活性化した部分トロンボプラスチン時間（ａＰＰＴ）の変化を示したものである。
【図６】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、血中フィブリノゲン濃度の変化を示したものである。
【図７】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、血中フィブリン／フィブリノゲン分解産物（ＦＤＰ）濃度の変化を示したものである。
【図８】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、Ｓ−ＧＯＴの変化を示したものである。
【図９】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、Ｓ−ＧＰＴの変化を示したものである。
【図１０】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、ＢＵＮ濃度の変化を示したものである。
【図１１ａ】 化学式１の化合物が、ＬＰＳによるマウスの死亡率を低下させる程度を示したものである。
−−〇−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）
−−△−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）＋化学式１の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）
−−□−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）＋化学式１の化合物（２０ｍｇ／ｋｇ）
【図１１ｂ】 化学式２の化合物が、ＬＰＳによるマウスの死亡率を低下させる程度を示したものである。
−−〇−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）
−−△−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）＋ 化学式２の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）
−−□−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）＋ 化学式２の化合物（２０ｍｇ／ｋｇ）
【発明の属する技術分野】
本発明は、下記化学式１および化学式２で表示されるテトラヒドロイソキノリン（tetrahydroisoquinoline）系化合物の新しい用途に関するものである。
【０００２】
具体的には、これらの化合物は、強心作用、血圧降下作用の外にも血小板凝集抑制作用およびｉＮＯＳ（誘導ＮＯ合成酵素）抑制作用を示すため、化学式１の化合物である１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび化学式２の化合物である１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン中の一つ以上を有効成分に含有する薬学的組成物は、心不全症治療剤、抗血栓剤、ｉＮＯＳによる組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または播種性血管内凝固症（Disseminated intravascular coagulation； 以下“ＤＩＣ”と略称する）の治療剤に有用に使用できる。
【０００３】
【化２】
【発明の背景】
テトラヒドロイソキノリン（tetrahydroisoquinoline；以下“ＴＨＩ”と略称する）系化合物は、Ｎ−アルキルフェニルエチルアミンが閉環（ring closing）した状態の物質である。特に６，７−ジヒドロキシテトラヒドロイソキノリンは、化学構造にカテコールアミン（catecholamine）の基本骨格を持っている。つまり、エピネフリン（epinephrine）、ノルエピネフリン（norepinephrine）、ドーパミン（dopamine）等に代表されるカテコールアミンの基本骨格である３，４−ジヒドロキシフェニルエチルアミンを持った構造である。したがって、多くのＴＨＩ系列の化合物が各種アドレナリン受容体（adrenergic receptor）に親和力を見せ、置換基の種類および置換基の結合位置によってα−またはβ−受容体に作用して亢進効果（agonistic effect）または拮抗効果（antagonistic effect）を持つことにより、色々な薬理作用を持っているということが報告されている。
【０００５】
特に１位置の炭素にＯＨ、ＯＣＨ3、ハロゲン等に置換されたベンジル基を持ったＴＨＩ系列化合物は、気管支弛緩作用、血小板凝集抑制作用、カルシューム通路抑制作用等、強力な作用を持っているということが報告されている（King， V. F. et al.，J. Biol. Chem.，２６３，２２３８−２２４４，１９８８；Triggle，D. J. et al.，Med. Res. Rev.，９，１２３−１８０，１９８９；Lacorix，P. et al.，Eur. J. Pharmacol.，１９２，３１７−３２７，１９９１； Chang，K. C. et al.，Life. Sci.，５１，６４−７４，１９９２；Chang，K. C. et al.， Eur. J. Pharmacol.，２３８，５１−６０，１９９３）。
【０００６】
また、最近ビスベンジル−テトラヒドロイソキノリン系列化合物であるテトランドリン（tetrandrine）、イソテトランドリン（isotetrandrine）およびコンドキュリン（chondocurine）等の物質が、内毒素（endotoxin）であるリポポリサカライド（lipopolysaccharide；以下“ＬＰＳ”と略称する）によって、一酸化窒素（nitrogen monoxide；ＮＯ）が多量生成されることを強力に抑制するものが報告されたことがある（Kondo，Y. et al.，Biochem. Pharmacol.，４６，１８６１−１８６３，１９９３）。
【０００７】
一方、ハイゲナミン（Higenamine）は、１位の炭素に４−ヒドロキシベンジル基を、６及び７位置に２個のヒドロキシ基を持ったＴＨＩ系列の化合物であり、臨床で強心作用薬物に使用されているドブタミン（dobutamine）と構造的に良く似ている。この化合物は、摘出心臓で心筋収縮力及び心拍動数増加作用、血小板凝集抑制作用等の生体外（in vitro）作用、ラットまたはウサギを利用した実験で、心拍出量増加、血圧降下作用及び血小板凝集抑制作用等が報告されたことがある。ハイゲナミンは、またマウス腹腔大食細胞及びラット摘出血管でＬＰＳによる誘導ｉＮＯＳ及びＮＯが発現して、それによってＮＯが多量生成されることを低下させ、ＬＰＳによる血管反応性低下を抑制し、内毒素ショック（endotoxin shock）による死亡率を低くするということが報告されたことがある。また、関節炎モデルにおいて抗炎症作用及び鎮痛作用を持っているということが実際に観察された（Park，C. W. et al.，Arch. Int. Pharmacodyn.，２６７，２７９−２８８，１９８４；Chang，K. C. et al.，Can. J. Physiol. Pharmacol.，７２，３２７−３３４，１９９４；Yun−Choi，H. S. et al.，Yakhak Hoeju，３８，１９１−１９６，１９９４；Kang，Y. J. et al.， Kor. J. Physio.Phamacol. １，２９７−３０２，１９９７；Shin，K. H. et al.，Natural Products Sciences，２，２４−２８，１９９６）。しかし、ハイゲナミンの場合その作用持続時間が非常に短く、上記で言及した作用等を示す効果も不充分であるという短所がある。
【０００８】
本発明者達は、ハイゲナミンの構造を変化させ、優秀な薬理効果を示す物質を得ようと努力した結果、作用持続時間がとても長い新規の物質である化学式１及び化学式２の化合物を合成して、これらが強心作用及び血圧降下作用を持ったものであることを明らかにし、特許出願して特許権を獲得したことがある（大韓民国特許第１４８７５５号）。また、ハイゲナミンと同様に、ラット摘出心臓を利用した実験で化学式１及び化学式２の化合物が強力な心筋収縮力増強作用及び心拍動数増加作用を示し、フェニレフリン（phenylephrine）で収縮させた摘出血管に対して強力な弛緩作用を持ち、また、化学式１及び化学式２の化合物をウサギに投与した時に心拍動数が増加し、血圧が下降することを報告したことがある（Lee，Y. H. et al）。
【０００９】
現在、欝血性心不全症治療剤としては、デキタルリス強心配糖体とドーパミン類があるが、デキタルリス強心配糖体は、経口投与が可能な利点があるが安全域がとても狭く使用に危険性がともない、不整脈を惹起させる問題点がある。また、ドーパミンやドブタミンのような交感神経模倣薬物は、欝血性心不全症治療剤としての効果があるが、静脈注射しなければならない短所があり、交感神経系（β−adrenoceptor）のダウンレギュレーション（down regulation）等の問題点がある。
【００１０】
心不全症患者には、低下した心筋収縮力を増加させる強心作用薬物と一緒に、血管を弛緩させ心臓の過負荷を低めたり血栓生成を抑制して血管での血液の流れを円滑にすることによって、心臓の過負荷を押さえる薬物を同時に投与することによって良い治療効果を得ている。したがって、デキタルリス強心配糖体とドーパミン類薬物は、強心作用だけを持っているため、投与時に血管を弛緩させる血管弛緩剤（血圧降下剤）及び血小板凝集抑制剤を一緒に投与して治療効果を増大させられる。しかし、色々な薬物の複合的な投与によって、各薬物による薬物相互作用によって、各薬物の生体内吸収、薬物代謝等が影響を受け、副作用が発生する危険性が高まる等、使用に際して多くの制約を伴う問題点がある。
【００１１】
一方、最近ＮＯを含み、過度に多く生成された酸素遊離基（oxygen free radical）が、関節炎等の炎症性疾患や、心筋梗塞症、脳卒中または、虚血性疾患において再潅流時の組織損傷または、細菌感染による内毒素による複合的長期損傷等、各種急慢性組織／臓器損傷を起こす重要原因の一つであることが明らかにされている。したがって、ｉＮＯＳの発現を抑制したりＮＯの多量生成を抑制する物質等を確保して、ＮＯが多量生成されて発生する各種疾病の治療剤として利用することに多くの関心が集まっている。また、これらの物質を急性心筋梗塞症、虚血性心臓疾患等による心筋損傷を抑制することによって心不全症の進行を抑制したり、または治療する効果を持つものとして期待される。
【００１２】
それで、本発明者達は、上記の色々な問題点を解決するために努力して、化学式１及び化学式２の化合物が強心作用、血管弛緩作用（血圧降下作用）、血小板凝集抑制作用及びｉＮＯＳ抑制作用を複合的に同時に現すことによって、心不全症治療剤として非常に有用に使用できるだけでなく、血小板凝集抑制作用により抗血栓剤、ｉＮＯＳ発現抑制作用及びｉＮＯＳ発現によるＮＯの多量生成抑制作用による組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または破腫性血管内凝固症治療剤にも使用できることを明らかにすることによって本発明を完成した。
【００１３】
【発明の概要】
本発明の目的は、心不全症治療剤、抗血栓剤、ｉＮＯＳによる組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または、破腫性血管内凝固症治療剤に有用に使用できる化学式１の化合物及び化学式２の化合物の新しい用途を提供することである。
【００１４】
上記目的を達成するために、本発明では、強心作用、血圧降下作用、血小板凝集抑制作用およびｉＮＯＳ抑制作用を複合的に同時に示す、下記の化学式１の化合物である１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび化学式２の化合物である１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン中の一つ以上を有効成分に含有する薬学的組成物を提供する。
【００１５】
【化３】
【詳細な説明】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１７】
本発明では、心不全症治療剤、抗血栓剤、ｉＮＯＳによる組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または、破腫性血管内凝固症治療剤に有用に使用できるＴＨＩ系化合物である上記化学式１で表示される１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび、化学式２で表示される１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンの新しい用途を提供する。
【００１８】
上記の化学式１及び化学式２の化合物は、多くの異性質体を含んでいる。例えば化学式１及び化学式２の化合物は、トトモ異性質体（tautomers）を含む。化学式１及び化学式２の化合物は、それぞれ最小限一つの非対称炭素を含んでいるため、純粋な（Ｒ）−または（Ｓ）−異性質体、（Ｒ）−、（Ｓ）−異性質体の比率が同じでない混合物または、ラセミ体で存在するようになる。
【００１９】
このような全ての異性質体とそれらの混合体は、本発明の範囲内に含まれる。また、本発明では、化学式１及び化学式２の化合物の薬剤学的に許容可能な塩及びこららのプロドラッグ（prodrug）を含む。
【００２０】
ここで、化学式１または化学式２の塩は、薬剤学的に使用される通常の塩を意味し、塩の製造に使用される各種酸としては、塩酸、臭酸、硫酸、メタンスルホン酸、プロピオン酸、コハク酸、グルタール酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、グルタミン酸、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、アスコルビン酸、炭酸、ホスホン酸、硝酸、酢酸、L−アスパラギン酸、乳酸、バニリン酸及びヒドロヨウ素酸等がある。
【００２１】
前述したように、本発明では化学式１または化学式２の化合物のプロドラッグを含むが、一般的にこのようなプロドラッグというのは、化学式１または化学式２の化合物の作用性誘導体であり、生体に入って薬効を現すためにたやすく変化できなければならない。適当なプロドッグ誘導体の選択及び製法に対する通常的科程は、既存の文献に記述されている（Design of Prodrug，ed. H. Bundgaard，１９８５）。
【００２２】
化学式１の化合物である１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび化学式２の化合物である１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンは、強心作用、血圧降下作用、血小板凝集抑制作用及びｉＮＯＳ抑制作用を複合的に同時に現すため、これらの中の一つ以上を有効成分に含有する薬学的組成物は、心不全症予防または治療剤にとても有用に使用できる
現在、心不全症を治療するために臨床では、低下した心筋収縮力を向上させ、心臓に負担を減らすために強心配糖体のデキタルリス製剤、血管拡張剤、カルシューム拮抗剤、アンジオテンシン転換酵素（angiotensin converting enzyme；ACE）抑制剤等を単独または併用療法に使用している。これは、血管拡張で循環機能を向上させ強心作用を現す目的にこれらの薬物を併用投与し、いわゆる血力学的（hemodynamic）好転を期待するからである。一方、本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、強心作用と血管弛緩作用を同時に現せる強心−弛緩剤（inodilator）という点で、二つの要件を全て充足している。
【００２３】
また、心不全症は、動脈硬化症、高血圧等の循環器系疾患が長期間持続して心臓に負担を加重する時または、血栓による冠状動脈疾患や心筋梗塞症等の虚血性心臓疾患等によって症状がひどくなるが、このような心臓病危険因子が高い人達は、各種心臓、循環器系疾患の進行防止、再発防止または、予防を目的に血小板凝集抑制剤の持続的な投与が積極勧奨されている。したがって本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、血小板凝集を抑制することによって抗血栓作用を持ち、心不全症治療剤としてのもう一つの要件を充足する。また、慢性心不全症患者達は、免疫活性が増加しており、腸、血管等にｉＮＯＳの発現が増加すれば、その時、ＮＯが多量生成され心筋の収縮力を抑制して組織にも損傷を与えるようになるが、本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、ｉＮＯＳの発現を抑制してＮＯ生成を抑制する作用も持っており、酸素遊離基による組織損傷を抑制して、慢性心不全症患者の心筋収縮力低下の原因物質中の一つのＮＯの発生を減らせる長所もある。つまり、本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、上記多様な作用を同時に複合的に現すので画期的な心不全症治療剤として使用できる。
【００２４】
上記の心不全症治療剤は、急性心筋梗塞による心筋収縮機能低下、慢性炎症等の免疫活性増加による心筋収縮機能低下、虚血性心臓疾患による心筋収縮機能低下または持続的な高血圧、動脈硬化、冠状動脈疾患等による欝血性心不全による心筋収縮機能低下を原因とする心不全症の進行を抑制したり治療するものである。
【００２５】
また、本発明の化学式１及び化学式２の化合物は、血小板凝集抑制作用による抗血栓作用及びｉＮＯＳ抑制作用を示し、これらの中の一つ以上を有効成分に含有する薬学的組成物は、抗血栓剤、組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または破腫性血管内凝固症等の治療剤として有用に使用できる。
【００２６】
上記の抗血栓剤は、血栓によって誘導される虚血性脳血管障害、冠状動脈疾患、虚血性心筋梗塞、慢性動脈閉塞症、手術後の血栓または塞栓における血栓の生成を予防したり、その進行を抑制したり治療するものである。
【００２７】
また、ｉＮＯＳによる組織損傷抑制剤は、組織または臓器損傷による関節炎等の炎症性疾患、動脈硬化症、心筋梗塞、脳卒中を含む虚血及び再潅流による組織損傷を予防したり、その進行を抑制したり治療するものである。
【００２８】
また、敗血症治療剤は、破腫性血管内凝固及び複合的臓器損傷による敗血症を治療するものである。
【００２９】
また、破腫性血管内凝固症治療剤は、急激な血液凝固過程の活性化による血小板数の急激な減少、出血、ショック、血栓、血管閉塞によって起る症状を治療するものである。
【００３０】
本発明の薬学的組成物は、経口、静脈、非経口または、直腸投与が可能で、注射剤、カプセル、錠剤、糖衣錠、座薬、顆粒、溶液、懸濁液、乳剤、座剤等の投与形態が可能である。
【００３１】
薬学的組成物は、本発明の化合物を有効成分にして有機や無機、固体、半固体または、液体賦形剤のような薬学的に許容される担体と混合して使用することもできる。必要なら、補助物質、安定剤、湿潤または乳化剤、緩衝液、その他通常的に使われる附加剤等がこれら薬学的組成物に含まれ得る。
【００３２】
本発明では、実験を通じて本発明の化合物は、経口投与した場合にも相当な時間、血中濃度が維持されることを明らかにし、これにより本発明の化合物の投与用量は、注射剤の場合は、０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ、経口投与剤の場合は、２〜２００ｍｇ／ｋｇである。
【００３３】
本発明の化合物をマウスに経口投与時及び腹腔内投与時の毒性実験を行なった結果、経口毒性試験による５０％致死量（ＬＤ50）は、少なくても１０００ｍｇ／ｋｇ以上であることが分かった。また、腹腔内毒性試験結果、化学式１の１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンの場合ＬＤ50値は、２９０．０ｍｇ／ｋｇ、９５％信頼限界は、２３５．１〜３５９．９ｍｇ／ｋｇであった。化学式２の１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンの場合ＬＤ50値は、４３８．６ｍｇ／ｋｇ、９５％信頼限界は、３５０．９〜５４８．２ｍｇ／ｋｇだった。
【００３４】
本発明では、化学式１の１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン及び化学式２の１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンが前述したように多様な作用を複合的に現すことを確認し、類似の作用をすると思われるハイゲナミンとその効果を比較するために多様な実験を行なった。その結果、上記の化学式１及び化学式２の化合物が血小板凝集抑制作用を持っており、特に、アデノシンジホスファート（adenosine diphosphate；以下“ＡＤＰ”と略称する）やコラーゲン（collagen）による血小板凝集抑制作用よりエピネフリンによる血小板凝集を強く抑制した。また、アドレナリンα−受容体に親和力を持っている。したがって、これらの物質はα−受容体抑制作用を通じて血管を弛緩させ血小板凝集を抑制するものであると考えられる。
【００３５】
また、化学式１及び化学式２の化合物は、内毒素によるｉＮＯＳの発現を抑制しＮＯの生成を抑制する。特に濃度依存的な抑制効果を現す。したがって、過量のＮＯ生成による臓器損傷を抑制することによって、関節炎を含む各種炎症性疾患、脳卒中、心筋梗塞症等を含む各種虚血性疾患及び再潅流による組織損傷等の予防、進行抑制及び治療剤としてまた、その他の急激な複合組織損傷の症状を持つ敗血症または破腫性血管内凝固症等の疾病の治療に、本発明の化合物を応用できる。
【００３６】
化学式１及び化学式２の化合物は、生体内（in vivo）実験においても急性血栓生成によるマウスの死亡率を顕著に低くし、動脈−静脈短絡（arterio−venous shunt；以下“Ａ−Ｖ短絡”と略称する）用チューブ（ＡＶＳチューブ）内に生成する血栓の生成を抑制する等の優秀な抗血栓作用を現した。
【００３７】
一方、ＬＰＳ等の内毒素に対しては、色々な破腫性血管内凝固症が誘発される。これら破腫性血管内凝固症（ＤＩＣ）に対する指標としては、血中血小板数の減少、フィブリノゲン（fibrinogen）の濃度減少及びフィブリン／フィブリノゲン分解産物（fibrin／fibrinogen degradation products；FDP）の濃度増加、プロトロンビン時間（prothrombin time；ＰＴ）及び活性化部分トロンボプラスチン時間（activated partial thromboplastin time；ａＰＴＴ）の延長等をあげられる。本発明の化合物は、ＬＰＳによって血中血小板数とフィブリノゲンの濃度が減少することを抑制し、フィブリン／フィブリノゲン分解産物の濃度が増加することを抑制し、プロトロンビン時間（prothrombin time；ＰＴ）及び活性化部分トロンボプラスチン時間が延長するのを抑制してその時間を短縮させる等、ＬＰＳによって誘導される破腫性血管内凝固症の各種指標を改善した。一方、内毒素によってＳ−ＧＯＴ（serum glutamic−oxaloacetic transaminase）、Ｓ−ＧＰＴ（serum glutamic−pyruvic transaminase）及びＢＵＮ（blood urea nitrogen）が増加することが知られているが、本発明の化合物は、ＬＰＳによってＳ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮが増加することを低下させる等、ＬＰＳによって誘導される多発性組織損傷（multiple organ failure； ＭＯＦ）症状の各種指標を改善した。さらに本発明の化合物は、ＬＰＳによる死亡率も顕著に低くめるので内毒素によるショックから保護する効果があることが分かった。
【００３８】
以下、本発明を実験例をもとに詳細に説明する。ただし、下記の実験例は、本発明を例示するだけのものであって、本発明がこれによって限定されるものではない。
【００３９】
＜実験例１＞血小板凝集を抑制する効果
ソウル大学病院血液銀行から購入した人の血小板濃縮液を血小板測定器（Platelet Analyzer，PLT−４，Texas Instruments）を使用して、血小板数を測定し、燐酸緩衝食塩水（phosphate buffered saline；以下“ＰＢＳ”と略称する）で稀釈して、血小板の数を３００〜４００×１０6／ｍｌに調整して、血小板豊富血漿（Platelet Rich Plasma；以下“ＰＲＰ”と略称する）を製造し、これを実験に使用した。ＰＲＰを３７℃で３分間培養後血小板凝集誘導物質としてアデノシンジホスファート（ＡＤＰ）、コラーゲンまたは、エピネフリンを加えた後、血小板凝集測定器（Platelet Aggregometer，Chrono−Log Corp.米国，５００VS）を使用して血小板凝集による混濁度（turbidity）の変化で凝集度を測定した。
【００４０】
試験物質による凝集抑制程度は、下記の数学式１１によって抑制率を算出した。
【００４１】
抑制％（％Inhibition）=（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
Ａ：凝集誘導物質による血小板凝集度
Ｂ：凝集誘導物質と試料を同時に加えた時の血小板凝集度
人の血小板を使用して測定した化学式１の化合物及び化学式２の化合物の凝集抑制効果を表１に示した。一方、化学式１の化合物及び化学式２の化合物と化学構造が類似し、抗血小板凝集及び抗血栓作用を持っているとして知られているハイゲナミンを比較物質に用いた。
【００４２】
【表１】
その結果、ハイゲナミンは、ＩＣ50が、＞１×１０-3Ｍで、ＡＤＰによる血小板凝集に対して抑制作用がない反面、化学式１の化合物及び化学式２の化合物は、ＩＣ50が７．３×１０-4〜８．６×１０-4Ｍであり、弱いけれども抑制作用がみられた。コラーゲンによる血小板凝集に対しては、化学式１の化合物は、ＩＣ50が９．２×１０-5Ｍで、ハイゲナミンと同じ程度の抑制作用を示したが、化学式２の化合物は、ハイゲナミンまたは化学式１の化合物に対して、約１０倍の血小板凝集抑制作用を示した。エピネフリンによる血小板凝集に対しては、化学式１の化合物及び化学式２の化合物のＩＣ50値が各各３．４×１０-6Ｍ及び６．０×１０-6Ｍであり、ハイゲナミン（ＩＣ50 １９×１０-6Ｍ）より強力にエピネフリンによる血小板凝集を抑制した。このように、化学式１の化合物及び化学式２の化合物は、ＡＤＰまたはエピネフリンにより誘導される血小板凝集に対してハイゲナミンより強力な抑制作用を示し、コラーゲンによる血小板凝集に対してもハイゲナミンと類似またはさらに強力な抑制作用を示した。
【００４４】
＜実験例２＞α−受容体結合抑制作用
試験物質等がアドレナリンα−受容体（α−adrenoceptor）に競争的に結合することによって上記のような血小板凝集抑制作用を持ったり、すでに報告されたように血管弛緩作用を持っているかどうか検討すために、α−受容体が豊富なラットの大脳皮質膜（cerebral cortical membrane）を準備してα−受容体結合抑制作用を調査した。
【００４５】
まず、ラット（Sprague−Dawley；２５０±２０g，特別な言及がない限り、以下全ての実験で同種類のラットを使用する）脳組織（cerebral cortex）を２０倍の緩衝溶液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，５ｍＭ ＭｇＳＯ4，１ｍＭ ＥＤＴＡ，１ｍＭ アスコルビン酸（ascorbic acid），ｐＨ７．７）と均一に混合後３５，０００×ｇで１５分間３回遠心分離して沈澱物を得て−７０℃で保管した。上記の沈澱物５ｍｇを上記の緩衝溶液１ｍｌに溶かして、[3Ｈ]プラゾシン（[3Ｈ]prazosin；２００ｐＭ）と試験試料を２５℃で３０分間培養後、１０ｍｌの緩衝溶液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．７）を加えて反応を中断させた。これをワットマン（Whatman）ＧＦ／Ｃガラス微細繊維（glass microfiber）濾過紙を使用して濾過した。濾過紙は、シンチレーション反応溶液（scintillation cocktail）に入れ、２時間揺らした後、シンチレーションカウンター（Scintillation Counter，Beckman，ＬＳ６５００）で放射能（radioactivity）を測定した。
【００４６】
【表２】
プラゾシンの結合反応を行ない１３３．５±８．９１ｐＭのＫｄ値と１５．１５±０．６４ｆｍｏｌ／ｍｇのＢｍａｘを得た。試験物質の解離常数（Ｋｉ）は、０．１５〜１．２６μＭを示し、α−受容体に対する親和力があることを確認できた。（表２参照）。また、これらの解離常数は、フェニルエプリンで収縮したラット血管で現れたＩＣ50値（１．０２〜２．８１μＭ）及びエピネプリンによる血小板凝集抑制値（ＩＣ50；３．４〜１９μＭ）と類似している。本発明の化合物がα−受容体を遮断して血管を弛緩させ、血小板凝集を抑制するということが分かった。
【００４８】
＜実験例３＞ラット摘出血管で、ＬＰＳに対するｉＮＯＳ ｍＲＮＡ発現を抑制する効果
ペントバルビタールナトリウム（Pentobarbital sodium）５０ｍｇ／ｋｇでラットを麻酔して大動脈を摘出し、内皮細胞を除去した。これを３７℃でＬＰＳ３００ｎｇ／ｍｌを含んだクレブス（Krebs） 溶液で８時間培養した後、全体ＲＮＡをトリゾール（TRIZOL）溶液（GibcoBRL；Life Technologies社）を利用して抽出した。全体RNAは、紫外線分光光度計（Shimadzu，ＵＶ−１２０１）で定量し、ホルムアミド−ホルムアルデヒドアガロースゲル（formamide−formaldehyde agarose gel）で電気泳動した後、ナイロン膜（nylon membrane）に移した。以後、ｉＮＯＳ（誘導ＮＯ合成酵素）のｃＤＮＡを探り針（probe）にしてハイブリダイゼーション（hybridization）することによってｉＮＯＳのｍＲＮＡが発現する量を観察した。この時、ｉＮＯＳのｃＤＮＡは、ランダムプライマー（random−primer）方法によって32Ｐ−ｄＣＴＰで標識（label）をつけ使用した。ナイロン膜をＸ線フィルムに感光させ感光の大きさをＧＡＰＤＨ（Glyceraldehyde−３−phosphate dehydrogenase）が発現したものと比較しｍＲＮＡが発現した量を定量化した。
【００４９】
血管を生体外（in vitro）でＬＰＳと一緒に培養するとｉＮＯＳ ｍＲＮＡ発現が多量に誘導される。化学式１の化合物を入れて一緒に培養した場合は、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現が抑制される。つまり、ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）投与群では、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡが強く発現したが、化学式１の化合物１０μＭまたは３０μＭと一緒に培養した時は、用量依存的にＬＰＳによるｉＮＯＳ ｍＲＮＡ発現が抑制された（図１参照）。
【００５０】
ノーザンブロットでレーン３、４及び５は、お互いに異なる濃度（１０μＭ、３０μＭ、及び１００μＭ）で、化学式１の化合物存在下でｉＮＯＳ ｍＲＮＡ発現を示した、レーン１及び２は、対象群のＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）が単独の場合を示している。図１によると、上記のｉＮＯＳ ｍＲＮＡは、ＬＰＳ処理されたグループ（レーン２）で強く発現したが、化学式１の化合物は、濃度依存的（レーン３、４及び５）に、ＬＰＳに誘導されたｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を抑制した。
【００５１】
＜実験例４＞大食細胞でＬＰＳとＩＦＮ−ΥによるｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を抑制する効果
熱処理した１０％牛胎児血清（fetal calf serum）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン（penicillin）及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン（streptomycin）を入れたＤＭＥＭ培地で、大食細胞（ＲＡＷ２６４．７ｃｅｌｌ）を充分に成長するように（confluent）ＣＯ2インキュベータで培養した。培養した細胞は、血清が無い（serum−free）ＤＭＥＭ培地に移し２４時間さらに培養後、ＬＰＳ１００ｎｇ／ｍｌ、インターフェロン−Υ（interferon−Υ；以下“ＩＦＮ−Υ”と略称する）１０Ｕ／ｍｌ及び化学式２の化合物（０μＭ，１μＭ，１０μＭ及び１００μＭ）存在下で１８時間培養して全体ＲＮＡをトリゾール溶液を利用して抽出した。全体ＲＮＡは、分光光度計で定量してホルムアミド−ホルムアルデヒドアガロースゲルで電気泳動した後、ナイロン膜に移した。以後、ｉＮＯＳのｃＤＮＡを探り針にしてハイブリダイゼーションすることによりＮＯ合成酵素のｍＲＮＡが発現する量を観察した。この時、ｉＮＯＳのｃＤＮＡは、ランダムプライマ方法によって32Ｐ−ｄＣＴＰで標識をつけて使用した。ナイロン膜をＸ線フィルムに感光させ、感光の大きさをＧＡＤＰＨが発現したものと比較してｍＲＮＡが発現した量を定量した。
【００５２】
図２のノーザンブロットで大食細胞をＬＰＳ及びＩＦＮ−γ及び／または化学式２の化合物と培養後、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を示した。ノーザンブロットでレーン１、２は対象群（細胞単独）及びＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）及びＩＦＮ−γ存在下でなされ、レーン３、４及び５は、お互いに異なる濃度（１０μＭ、３０μＭ、及び１００μＭ）で、化学式２の化合物存在下でｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現が抑制されていることを示している。図２によると、大食細胞が、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）及びＩＦＮ−Υ（１０Ｕ／ｍｌ）で１８時間培養した時、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡが発現した。したがって、化学式２の化合物は、濃度依存的（レーン３、４及び５）に、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を抑制した。
【００５３】
＜実験例５＞大食細胞でＬＰＳとＩＦＮ−γによるＮＯの生成を抑制する効果
熱処理した１０％牛胎児血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリン及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを入れたＤＭＥＭ培地に大食細胞（ＲＡＷ２６４．７ｃｅｌｌ）を入れてＣＯ2インキュベータで充分に成長するように培養した。培養した細胞は、血清が無いDMEM培地に移し２４時間さらに培養後、ＬＰＳ１００ｎｇ／ｍｌ、ＩＦＮ−Υ１０Ｕ／ｍｌ及び化学式１または化学式２の化合物（０μＭ，１μＭ，１０μＭ及び１００μＭ）存在下で１８時間継続培養した。この時、生成されたＮＯは、ＮＯ酸化物であるアジル酸塩（nitrite）の量で間接測定した。アジル酸塩は、グリース試薬（Griess reagent）[０．１％naphthylethylenediamine dihydrochloride，１％sulphanilamide，５％燐酸溶液で呈色させた後、５５０nmでの吸光度を分光光度計で測定して、その量を定量した。アジル酸塩の量は、ＮａＮＯ2を標準にして計算して、その結果を表３に示した．
【００５４】
【表３】
表３に示したように、大食細胞を内毒素と一緒に培養した時多量のアジル酸塩が検出されＮＯが大量生産されたことが分かった．つまり、内毒素及びＩＦＮ−γを加えていない対照群の場合、８μＭのアジル酸塩が検出されたがＬＰＳとＩＦＮ−γを加えた培養液では５７μＭのアジル酸塩が検出された。ＬＰＳ、ＩＦＮ−γと一緒に化学式１及び化学式２の化合物を各々１μＭずつ培養液に加えた場合、培養液のアジル酸塩の濃度は、各々３０μＭ、３４μＭであり、ＬＰＳとＩＦＮ−γだけを加えた場合よりアジル酸塩の濃度が減少した。また、化学式１及び化学式２の化合物の添加量が増加すればするほどアジル酸塩の濃度が低く検出され、本発明による化学式１及び化学式２の化合物が内毒素によるＮＯ生成を濃度依存的に強力に抑制することが分かった。
【００５６】
＜実験例６＞急性血栓生成によるマウス死亡を抑制する効果
マウス（ＩＣＲ；２０±２０g，以下全ての実験で同じ種類のマウスを使用する）の尾の静脈にコラーゲン（３００μｇ／ｋｇ）とエピネフリン（３０μｇ／ｋｇ）の混合溶液を注射して短い時間内に肺動脈に大量の血栓が形成されるように誘導することによって、混合溶液注射後１〜３分が経過すれば全身麻痺が起こり大多数が１５分以内に死亡する急性血栓モデルを誘導した。試料物質は、１日間または３日間経口投与し、最後に経口投与してから１時間経過後にコラーゲンとエピネフリンの混合溶液を注射した。以後、死亡率が減少する程度、麻痺した状態から回復する程度を観察した。その結果を表４及び表５に示した。
【００５７】
【表４】
１５分以内に血栓生成による麻痺状態から回復したマウス数の比較。各々の試料は、１回経口投与した。
【００５９】
【表５】
１５分以内に血栓生成による麻痺状態から回復したマウスは数の比較。各々の試料は、３日間経口投与した。
【００６１】
マウスにコラーゲンとエピネフリン混合溶液を静脈注射すれば、短時間に肺動脈内に多量の血栓が生成され閉塞することによって、注射後１分以内に大部分が全身麻痺し動けなくなり、瞳孔が開き呼吸困難と痙攣が後に続き、５分以内に約７０〜８０％のマウスが死亡し、残りも１５分以内に大部分死亡したり１５分以上麻痺が持続する。表４と表５から分かるように、試験物質を投与せずにコラーゲンとエピネフリン混合溶液だけを投与した対照群のマウスは、１５分以内に１７〜２０％だけが麻痺から回復して自由に動いた。陽性対照薬物に使用したアスピリンやハイゲナミンの場合５０ｍｇ／ｋｇを１回経口投与した時は、各々５２％、３７％の回復率を示したが、ハイゲナミンを１００ｍｇ／ｋｇ投与した時は、４８％の回復率を示した。本発明の化合物である化学式１の化合物及び化学式２の化合物を５０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇずつ１回投与した場合は、約５０％の回復率を示し、アスピリンの場合と類似している。また、化学式１の化合物は、５０ｍｇ／ｋｇずつ３日間連続投与しても回復率は、特別に上昇しなかったが、化学式２の化合物は、１０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇずつ３日間連続投与した時は、回復率が６４〜７０％に増加した。
【００６２】
＜実験例７＞ラット動脈−静脈短絡（arterio−venous shunt； A−V shunt）内の血栓形成を阻害する効果
Ａ−Ｖ短絡用チューブ（ＡＶＳチューブ）を次のように準備した。頭皮静脈短絡（Scalp vein set）の一方の端を切って１８ｃｍの長さになるようにした後、両方の端に１８G注射針を連結した。そして、チューブの中央には１００％綿糸５cmを固定した。ラットは、ケタミン（ketamine；２５０ｍｇ／ｋｇ）を注射（i.m.）して麻酔し、腹部を切開した後、上記で準備したＡＶＳチューブに生理食塩水を満たし、一方の針は腹部大動脈にもう一方は腎静脈に挿入して血液が流れるようにして綿糸に血栓が生成するようにした。１５分経過後チューブから糸を取り出しその重さを計って生成された血栓の量を重さの変化で測定した。試験物質の経口投与による血栓形成阻害効果を観察してその結果を表６及び表７に示した。
【００６３】
【表６】
【表７】
生成された血栓重さは、実験当日の気候（気圧、湿度等）によって相当な差がみられた。抗血栓作用薬物であるアスピリン５０ｍｇ／ｋｇ投与したアスピリン投与群と比較実験を行なった。試験物質を投与しなかった対照群の場合３３〜４２mgの血栓が生成された。陽性対照薬物であるアスピリンを５０ｍｇ／ｋｇ１回投与した時は、３６〜４０％の血栓形成抑制を示した。ハイゲナミンを２５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇ１回投与した時は、２５〜３１％の血栓抑制効果があった。一方、化学式１の化合物及び化学式２の化合物は、２５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇずつ１回投与した場合２４〜３９％の血栓抑制効果を示した。故に、本発明の化合物がハイゲナミンと類似かまたはさらに強い血栓形成阻害効果があることが分かった。
【００６６】
試験物質を３日間連続投与した場合において、アスピリンを５０ｍｇ／ｋｇずつ３回投与した実験群では、血栓抑制効果が１２％で、弱かった。実験当日の気候条件によって対照群Ａ−Ｖ短絡内に平均より多い量の血栓が生成された場合、試料薬物による血栓形成抑制効果は、相対的に低く、したがって同一実験期間での陽性対照群（本実験の場合アスピリン投与群）との相対的比較が必須的であった。
【００６７】
ハイゲナミンを１０ｍｇまたは５０ｍｇずつ３日間連続投与した時は、１３〜１８％の血栓抑制作用を示し、アスピリン投与群と類似であった。しかし、化学式１の化合物及び化学式２の化合物を１０ｍｇ／ｋｇずつ３日間投与した場合は、約２４％、５０ｍｇ／ｋｇずつ投与した場合は、約２８％の血栓形成抑制作用を示し、アスピリンまたはハイゲナミン投与群と比較してみると血栓形成抑制作用が向上されたことが分かった。
【００６８】
＜実験例８＞細菌性内毒素（Bacterial endotoxin； ＬＰＳ）によるＤＩＣ及びＭＯＦ誘発ラットにおける各種指標を改善する効果
ケタミン（Ketamin）（２５０ｍｇ／ｋｇ）を注射（i.m.）してラット（２５０±５０g）を麻酔して、３０分後からＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を尾の静脈に３時間にわたって注入（infusion）した。その後、大動脈から血液を採取し下記のような血小板数、プロトロンビン時間、ａＰＰＴ時間、フィブリノーゲン、フィブリン／フィブリノーゲン分解産物、Ｓ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮの濃度を測定した。試験物質は、２日間経口投与し、二回目の投与をしてから１時間経過後に実験を始めた。
【００６９】
まず、抗凝固剤としては、ナトリウムシトラート（sodium citrate）を使用した。血小板測定器を利用して血液の血小板数を測定した。一方、抗凝固血液を１，５００×ｇで１０分間遠心分離した後、血漿を得て下記の実験に使用した。
【００７０】
プロトロンビン時間は、上記で得た血漿１００ＵＬを３７℃で３分間培養した後、３７℃で前もって５分間培養したトロンボプラスチン試薬（Thromboplastin reagent，Sigma社，米国）５０ＵＬを加えて、フィブロメータ（Fibrometer，Becton Dickinson Co.，カナダ）を利用して血栓形成時間（clotting time）を測定して求めた。活性化した部分トロンボプラスチン時間は、上記の血漿１００ＵＬを３７℃で３分間培養後、３７℃で１分間前もって培養した活性化した部分トロンボプラスチン時間試薬（Activated Partial Thromboplastin Time Reagent，Sigma社，米国）１００ＵＬと３７℃で前もって加温した０．０２Ｍ ＣａＣｌ2 １００ＵＬを添加してフィブロメータを利用して血栓形成時間を測定して求めた。
【００７１】
フィブリノーゲンの濃度は、上記の血漿２０ＵＬに緩衝溶液（buffer）１８０ＵＬを加え２分間３７℃で培養後、トロンビン試薬（thrombin reagent， Sigma社，米国）１００ＵＬを添加して血栓形成時間を測定した。フィブリノーゲン基準試薬（fibrinogen reference）を使用して前もって描いておいた補正曲線（calibration curve）を利用して求めた。
【００７２】
また、フィブリン／フィブリノーゲン分解産物の濃度はトロンボ−ウェルコテストキット（Murex Biotech Limit，英国）を使用して下記のような方法によって求めた。まず、血液（non−citrated）を豆トリプシン抑制剤（soybean trypsin inhibitor）と蛇毒（Bothrops Atrox venom）とよく混ぜて凝固させた後１，５００×ｇで１０分間２回遠心分離して血清を得た。グリシン塩水緩衝溶液（Glycine saline buffer）で稀釈して実験した。このようにして得た稀釈血清５０ＵＬをスライドガラス（slide glass）にのせ、ラテックス懸濁液（latex suspension）を一滴添加してよく混ぜ一様にのばして、２分間シェーカー（shaker）で振った後、凝集の可否を観察した。FDPの濃度は、半定量的（semiquantitative）に決定した。つまり、１：０稀釈時には（−）０μｇ／ｍｌ、（＋）１μｇ／ｍｌ、（＋＋）２μｇ／ｍｌ；１：１稀釈時には、（＋）３μｇ／ｍｌ、（＋＋）４μｇ／ｍｌ；１：２稀釈時には、（＋）５μｇ／ｍｌ，（＋＋）６μｇ／ｍｌ等で判定した。
【００７３】
Ｓ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮの濃度は、医療法人緑十字医療財団（Green Cross Reference Lab.）に依頼して診断キット（diagnostic kits， Boehringer Mannheim社）等と自動生化学分析器（Automatic Biochemical Analyzer，Hitachi ７４７）を利用して測定した。Ｓ−ＧＯＴ測定には、ＡＳＴキット、Ｓ−ＧＰＴ測定には、ＡＬＴキット、ＢＵＮ測定には、尿素キットを各々使用した。
【００７４】
ＬＰＳを長期間にわたって注入し実験動物に敗血性ショック（septic shock）を惹起させた時、現れるＤＩＣ及びＭＯＦ症状の各種指標は、化学式１または化学式２の化合物の経口投与によって改善された。つまり、ＬＰＳだけを投与した対照群の場合血液内の血小板数とフィブリノーゲン濃度が急激に減少した。プロトロンビン時間と活性化した部分トロンボプラスチン時間が延長され、血液内のフィブリン／フィブリノゲン分解産物の濃度が急激に増加した。また、肝臓や腎臓機能が低下することによってＳ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ、ＢＵＮ等の数値が高くなった。このようなＤＩＣ及びＭＯＦ症状の各種指標が化学式１または化学式２の化合物を経口投与した時に改善されることを確認できた。
【００７５】
具体的にハイゲナミン、化学式１または化学式２の化合物を経口投与した後、ＬＰＳ２０ｍｇ／ｋｇをラットに３時間にわたって投与し、ＤＩＣ及びＭＯＦ状態を誘導した時、ＬＰＳだけを投与した対照群と比較してＤＩＣ及びＭＯＦ症状の指標が改善されるかどうか観察した。
【００７６】
ＬＰＳだけを投与した対照群では、血小板数が２９６×１０３／ＵＬで、正常群の７４７×１０３／ＵＬより半分以下に顕著に減少した（図３参照）。プロトロンビン時間及び活性化した部分トロンボプラスチン時間は、各々１９秒及び３３秒で、正常群の１４秒及び２０秒より約５０％増加した（図４及び図５参照）。一方、対照群でフィブリノゲンは、１０４ｍｇ／ｍｌ、フィブリン／フィブリノゲン分解産物は、１６８ｕｇ／ｍｌである反面、正常群では各々２０２ｍｇ／ｍｌと１ｕｇ／ｍｌだった。フィブリノゲンの場合、対照群では、正常群に比べて約半分に減少した反面、フィブリン／フィブリノゲン分解産物は、急激な増加を示し、ＤＩＣ症状が相当に進展したことを示唆した（図６及び図７参照）。また、Ｓ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮの濃度が各々２３１．０Ｕ／ｌ、６０．８Ｕ／ｌ及び２５．６ｍｇ／ｄｌで、正常群の１６７Ｕ／ｌ、４９．３Ｕ／ｌ及び１５．０ｍｇ／ｄｌに比べて増加した。ＭＯＦ症状もまた進展したことが分かった。
【００７７】
しかし、ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を各々１０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇを経口投与した後、ＬＰＳを注入した時、ＬＰＳだけを投与した対照群に比べて血小板数が増加した。プロトロンビン時間及び活性化した部分トロンボプラスチン時間が短くなり、フィブリノゲン濃度が増加し、フィブリン／フィブリノゲン分解産物の濃度が減少した（図３〜図７参照）。したがって、これらの物質がＤＩＣ症状を改善する効果があることを確認できた。また、ＬＰＳだけを投与した対照群に比べてＳ−ＧＯＴ、Ｓ−ＧＰＴ及びＢＵＮ濃度も減少した（図８〜図１０参照）。以上のことから、本発明の化合物がＬＰＳによる肝臓または腎臓の損傷等のＭＯＦ症状もまた、軽減させられるということを確認できた。
【００７８】
＜実験例９＞細菌性内毒素（Bacterial endotoxin；ＬＰＳ）による死亡を抑制する効果
多量のＬＰＳを動物に注射すれば播種性血管内凝固症の各種症状が表出し大部分短い時間内に敗血性ショックにより死亡する。本実験では、ＬＰＳ２０ｍｇ／ｋｇをマウス腹腔内に注射して４８時間生存したマウスの頭数を数えた。試験物質投与によって生存率が増加するかどうかを観察した。
【００７９】
マウスにＬＰＳ２０ｍｇ／ｋｇを腹腔内（i.p.）に注射してから４８時間の間、毎６時間ごとに生存するマウスの数を数えた。また、試験物質は、ＬＰＳを注射する３０分前に腹腔内に注射し、これら試験物質によるマウスの死亡抑制効果を観察した。
【００８０】
ＬＰＳだけを投与した場合、４８時間後の生存率は約２０％だった。ＬＰＳを投与する前、化学式１の化合物（図１１a参照）または、化学式２の化合物（図１１b参照）を各々２０ｍｇ／ｋｇずつ投与した場合、３０時間までは死亡するマウスがなかったが、４８時間が過ぎた後でも９０％以上のマウスが生存した。ハイゲナミンと化学式２の化合物は１０ｍｇ／ｋｇ投与した場合、４８時間後の生存率が８０％以上であった。化学式１の化合物は、１０ｍｇ／ｋｇ投与した場合、４８時間後の生存率が約６０％で、ハイゲナミンや化学式２の化合物よりは生存率が低いが、対照群よりは、生存率が高かった。したがって、化学式１の化合物または化学式２の化合物は、ＬＰＳによるショックを保護する効果があることが分かった。
【００８１】
【発明の効果】
以上、詳しく見てきたように、化学式１及び化学式２の化合物は、本発明者達によって、すでに明らかにされた強心作用及び血圧降下作用とともに血小板凝集抑制作用及びｉＮＯＳ抑制作用を同時に複合的に現し、心不全症治療剤として有用に使用できる。また、これらの化合物は、血小板凝集抑制作用（抗血栓作用）によって抗血栓剤に使用できる。ｉＮＯＳ発現抑制作用及びそれによるＮＯ生成抑制作用によって組織損傷抑制剤、敗血症治療剤または播種性血管内凝固症治療剤として有用に使用できる。さらに、本発明の化合物を含む薬学的組成物は、安全領域が広く作用持続時間が長いという長所も持っている。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ラットの摘出血管でリポポリサカライド（ＬＰＳ）による、誘導ＮＯ合成酵素（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡの発現を化学式１の化合物が抑制することを示した、ノーザンブロット（Northern blotting）結果である。
レーン１：対照群
レーン２：ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）
レーン３：ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）＋化学式１の化合物（１０μＭ）
レーン４：ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）＋化学式１の化合物（３０μＭ）
レーン５：ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）＋化学式１の化合物（１００μＭ）
【図２】 大食細胞（ＲＡＷ２６４．７cell）でＬＰＳとインターフェロン−Υ（ＩＦＮ−Υ）によるｉＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を化学式２の化合物が抑制することを示した、ノーザンブロット結果である。
レーン１：対照群
レーン２：ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＦＮ−γ（１０Ｕ／ｍｌ）
レーン３：ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＦＮ−γ（１０Ｕ／ｍｌ）＋化学式２の化合物（１μＭ）
レーン４：ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＦＮ−γ（１０Ｕ／ｍｌ）＋化学式２の化合物（１０μＭ）
レーン５：ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＦＮ−γ（１０Ｕ／ｍｌ）＋化学式２の化合物（１００μＭ）
【図３】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇを３時間にわたってラットに投与した時、血中血小板数の変化を示したものである。
【図４】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、プロトロンビン時間（ＰＴ）の変化を示したものである。
【図５】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇを３時間にわたってラットに投与した時、活性化した部分トロンボプラスチン時間（ａＰＰＴ）の変化を示したものである。
【図６】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、血中フィブリノゲン濃度の変化を示したものである。
【図７】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、血中フィブリン／フィブリノゲン分解産物（ＦＤＰ）濃度の変化を示したものである。
【図８】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、Ｓ−ＧＯＴの変化を示したものである。
【図９】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、Ｓ−ＧＰＴの変化を示したものである。
【図１０】 ハイゲナミン、化学式１の化合物または化学式２の化合物を経口投与後、ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）を３時間にわたってラットに投与した時、ＢＵＮ濃度の変化を示したものである。
【図１１ａ】 化学式１の化合物が、ＬＰＳによるマウスの死亡率を低下させる程度を示したものである。
−−〇−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）
−−△−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）＋化学式１の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）
−−□−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）＋化学式１の化合物（２０ｍｇ／ｋｇ）
【図１１ｂ】 化学式２の化合物が、ＬＰＳによるマウスの死亡率を低下させる程度を示したものである。
−−〇−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）
−−△−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）＋ 化学式２の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）
−−□−−：ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｋｇ）＋ 化学式２の化合物（２０ｍｇ／ｋｇ）
Claims (4)
- 血小板凝集抑制作用及びｉＮＯＳ抑制作用を現す下記の化学式１で表示される１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび化学式２で表示される１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン中の一つ以上を有効成分に含有する敗血症治療剤用薬学的組成物。
- 敗血症治療剤は、播種性血管内凝固及び複合的臓器損傷による敗血症を治療することを特徴とする請求項１記載の薬学的組成物。
- 血小板凝集抑制作用及びｉＮＯＳ抑制作用を現す請求項１の化学式１で表示される１−α−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンおよび化学式２で表示される１−β−ナフチルメチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン中の一つ以上を有効成分に含有する播種性血管内凝固症治療剤用薬学的組成物。
- 播種性血管内凝固症治療剤は、急激な血液凝固過程の活性化による血小板数の急激な減少、出血、ショック、血栓、血管閉塞により起る症状を治療することを特徴とする請求項３記載の薬学的組成物。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR98/44128 | 1998-10-21 | ||
| KR19980044128 | 1998-10-21 | ||
| KR1019990041208A KR100352425B1 (ko) | 1998-10-21 | 1999-09-22 | 테트라하이드로이소퀴놀린계 화합물을 함유하는 약학적 조성물 |
| KR99/41208 | 1999-09-22 | ||
| PCT/KR1999/000631 WO2000023078A1 (en) | 1998-10-21 | 1999-10-21 | Pharmaceutical compositions containing tetrahydroisoquinoline compounds |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002527479A JP2002527479A (ja) | 2002-08-27 |
| JP3963301B2 true JP3963301B2 (ja) | 2007-08-22 |
Family
ID=26634236
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000576852A Expired - Fee Related JP3963301B2 (ja) | 1998-10-21 | 1999-10-21 | テトラヒドロイソキノリン系化合物を含有する薬学的組成物 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6562837B1 (ja) |
| EP (1) | EP1124554B1 (ja) |
| JP (1) | JP3963301B2 (ja) |
| KR (1) | KR100352425B1 (ja) |
| CN (1) | CN100488508C (ja) |
| AU (1) | AU6370299A (ja) |
| DE (1) | DE69911633T2 (ja) |
| WO (1) | WO2000023078A1 (ja) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100583810B1 (ko) * | 2002-05-07 | 2006-05-26 | 윤혜숙 | 신규 테트라하이드로이소퀴놀린계 거울상 이성질체 화합물및 그의 약학적으로 허용되는 염, 그 제조방법 및 이를포함하는 약학적 조성물 |
| CN1328263C (zh) * | 2004-11-01 | 2007-07-25 | 上海汇伦生命科技有限公司 | 四氢异喹啉衍生物、其制备方法及药物组合物 |
| KR100863692B1 (ko) * | 2006-12-08 | 2008-10-15 | 울산대학교 산학협력단 | 퇴행성질환 및 염증질환에 대한 예방치료 효과를 갖는7-하이드록시-6-메톡시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린유도체 |
| CN101318994B (zh) * | 2007-06-04 | 2012-03-28 | 北京大学 | 取代-四氢异喹啉-3-羧酸化合物、其制备方法及应用 |
| CN102225965B (zh) * | 2007-06-04 | 2013-03-27 | 北京大学 | 取代-四氢异喹啉-3-羧酸化合物、其制备方法及应用 |
| CN101318995B (zh) * | 2007-06-04 | 2011-04-20 | 北京大学 | 取代四氢异喹啉化合物、其制备方法及用途 |
| CN102127145B (zh) * | 2007-06-04 | 2012-07-04 | 北京大学 | 取代四氢异喹啉化合物、其制备方法及用途 |
| CN101497651B (zh) * | 2008-01-30 | 2012-06-27 | 首都医科大学 | 具有溶血栓活性的化合物、其制备方法、其应用 |
| KR100870576B1 (ko) * | 2008-08-27 | 2008-11-27 | 울산대학교 산학협력단 | 퇴행성질환 및 염증질환에 대한 예방치료 효과를 갖는 7-하이드록시-6-메톡시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린 유도체 |
| RU2643957C2 (ru) | 2010-09-20 | 2018-02-06 | Кью-Сера Пти Лтд | Получение сыворотки |
| US9943838B2 (en) * | 2013-07-24 | 2018-04-17 | Basf Se | Regeneration of a titanium containing zeolite |
| KR101524650B1 (ko) * | 2013-07-30 | 2015-06-03 | 경상대학교산학협력단 | 테트라하이드로이소퀴놀린 알칼로이드계 화합물 ｙｓ－５１ｓ를 포함하는 대사성 질환의 예방 및 치료용 조성물 |
| US10576077B2 (en) | 2015-03-23 | 2020-03-03 | Southwest Research Institute | Pharmaceutical salt forms of Cepharanthine and Tetrandrine |
| US20170216225A1 (en) * | 2016-02-03 | 2017-08-03 | Soo-Ray Wang | Method for anticoagulation |
| WO2022185742A1 (ja) * | 2021-03-01 | 2022-09-09 | 学校法人埼玉医科大学 | 播種性血管内凝固症候群の予防又は治療用組成物 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US703112A (en) * | 1901-10-21 | 1902-06-24 | Jesse L Chedell | Sand-box. |
| GB1504424A (en) * | 1975-08-09 | 1978-03-22 | Beecham Group Ltd | Isoquinoline-derived aminoethers |
| JPS63174932A (ja) * | 1987-01-16 | 1988-07-19 | Kaken Shiyouyaku Kk | 抗血小板凝集剤 |
| FR2637591B1 (fr) * | 1988-10-11 | 1992-10-23 | Synthelabo | Derives de quinoleinone, leur preparation et leur application en therapeutique |
| JP3276762B2 (ja) * | 1993-12-28 | 2002-04-22 | 日本臓器製薬株式会社 | イソキノリン誘導体を含有する医薬組成物 |
| JPH0886536A (ja) * | 1994-09-14 | 1996-04-02 | Zexel Corp | 膨張弁取付部材 |
| KR0148755B1 (ko) * | 1994-12-01 | 1998-08-17 | 윤혜숙 | 신규 테트라하이드로이소퀴놀린계 화합물 및 그의 염 |
| US5723451A (en) * | 1996-08-09 | 1998-03-03 | Ontogen Corporation | Nitric oxide synthase (NOS) inhibitors |
-
1999
- 1999-01-21 US US09/806,389 patent/US6562837B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-22 KR KR1019990041208A patent/KR100352425B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-10-21 JP JP2000576852A patent/JP3963301B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-21 CN CNB998123803A patent/CN100488508C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-21 DE DE69911633T patent/DE69911633T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 WO PCT/KR1999/000631 patent/WO2000023078A1/en active IP Right Grant
- 1999-10-21 EP EP99951228A patent/EP1124554B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-21 AU AU63702/99A patent/AU6370299A/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100352425B1 (ko) | 2002-09-11 |
| EP1124554A1 (en) | 2001-08-22 |
| JP2002527479A (ja) | 2002-08-27 |
| AU6370299A (en) | 2000-05-08 |
| CN1331593A (zh) | 2002-01-16 |
| DE69911633T2 (de) | 2004-06-17 |
| EP1124554B1 (en) | 2003-09-24 |
| KR20000028711A (ko) | 2000-05-25 |
| CN100488508C (zh) | 2009-05-20 |
| DE69911633D1 (de) | 2003-10-30 |
| US6562837B1 (en) | 2003-05-13 |
| WO2000023078A1 (en) | 2000-04-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3963301B2 (ja) | テトラヒドロイソキノリン系化合物を含有する薬学的組成物 | |
| Del Balzo et al. | Cardiac dysfunction caused by purified human C3a anaphylatoxin. | |
| RU2184547C2 (ru) | Новые соединения действующих начал, содержащих клопидогрел, и антитромбическое средство | |
| Mehta et al. | Platelet function studies in heart disease. VI. Enhanced platelet aggregate formation activity in congestive heart failure: inhibition by sodium nitroprusside. | |
| EA020531B1 (ru) | КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ АНТИКОАГУЛИРУЮЩЕГО СРЕДСТВА С СОЕДИНЕНИЕМ, КОТОРОЕ ДЕЙСТВУЕТ КАК ИНГИБИТОР ФАКТОРА Ха | |
| CN103242310A (zh) | 吡唑并吡啶酮类化合物及其在制备抗凝血药物中的用途 | |
| WO2008125004A1 (en) | Use of 21 (s) argatroban for treating thrombosis and inhibiting platelet aggregation | |
| TW273509B (en) | Method for rapidly building image space relation using plane filtering limitation | |
| Hossman et al. | A randomized, placebo controlled trial of prostacyclin (PGI2) in peripheral arterial disease | |
| Brezinski et al. | Anti-ischemic actions of a new throm☐ ane receptor antagonist during acute myocardial ischemia in cats | |
| Matsuo et al. | Development of argatroban, a direct thrombin inhibitor, and its clinical application | |
| US20070037756A1 (en) | Compositions and methods for the prevention and treatment of circulatory conditions | |
| US20060058346A1 (en) | Novel enantiomers of etrahydroisoquinoline derivatives and theirpharmaceutically acceptable salts, their preparations and pharmaceutical compositions | |
| WO2016206576A1 (zh) | 一种氘代噻吩并哌啶衍生物、制备方法及其应用 | |
| CN110711191A (zh) | 华法林与维生素c的分子复合物,其制备,活性和应用 | |
| TW202227079A (zh) | ＦＸＩａ抑制劑化合物或其鹽的醫藥用途及含有其的藥物組合物 | |
| KR20020036817A (ko) | 테트라하이드로이소퀴놀린계 화합물을 함유하는 약학적조성물 | |
| WO2007107040A1 (fr) | Utilisation de ginsenoside rb2 monomère dans la fabriction de medicaments antithrombotiques | |
| KR101968190B1 (ko) | 징코라이드 B(Ginkgolide B)와 Ⅹa 인자 억제제를 포함한 약물 조성물 및 그 제조방법과 용도 | |
| JP7339698B2 (ja) | 野せり抽出物および抗血栓剤を含む抗血栓用組成物 | |
| CN109627218B (zh) | 一种抗凝小分子化合物及其应用和包含其的药物 | |
| Yin et al. | Potential anticoagulant of traditional Chinese medicine and novel targets for anticoagulant drugs | |
| CN108912142B (zh) | 吡咯并苯并恶嗪酮类化合物及其注射剂和在抗血栓中的用途 | |
| JPH0816056B2 (ja) | トロンボキサンａ▲下２▼受容体拮抗剤 | |
| JPS6379831A (ja) | １，４−ジビドロピリジン誘導体およびアシル化１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸を含有する医薬組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040601 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20041214 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050411 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20050411 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20050311 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20050411 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20050829 |
|
| A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20050922 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20070517 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100601 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110601 Year of fee payment: 4 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |